WO2011113173A1

WO2011113173A1 - 阿糖胞苷衍生物及其在抗癌抗肿瘤中的用途

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Publication number: WO2011113173A1
Application number: PCT/CN2010/000319
Authority: WO
Inventors: 高峰; 徐峻
Original assignee: Gao Feng; Xu Jun
Priority date: 2010-03-15
Filing date: 2010-03-15
Publication date: 2011-09-22

Description

说明书阿糖胞苷衍生物及其在抗癌抗肿瘤中的用途技术领域

本发明涉及医学技术领域，特别是涉及一种新型的阿糖胞苷衍生物及其合成路线，本发明还涉及阿糖胞苷衍生物制剂及其制备方法和阿糖胞苷衍生物及其制剂在抗癌抗肿瘤中的用途。背景技术

癌症是目前危害人类生命健康的最主要的疾病，治疗癌症的现有手段主要包括：手术切除、放射性疗法、化学疗法或这些方法的并用。化学疗法已经得到了广泛的应用而且已经用于多种不同类型的癌症的治疗。然而，大多数化学疗法所用的抗癌药物都仅限于延緩癌症的恶化从而延长病人的生命，很难达到治愈的目的。各类癌症的发病机理虽然各不相同，但是它们其实是具有共同特征的一大类症候群。癌细胞除了代谢旺盛、不断地分化之外，与正常细胞的生理差别不是很大。这对于开发选择性地清除癌细胞、且不杀伤正常细胞的药物是个巨大的挑战。抗癌药物开发的另一大挑战是癌细胞耐药性，即经过一段时间化疗之后引起的耐药抗药性，用过的化疗药物，即使增加剂量，对癌细胞也不再起作用。肿瘤细胞的转移也常使得无法用化学疗法进行治疗。到目前为止，没有一种抗癌药物能够医治所有的癌症。寻找高效、高选择性、低毒、无耐药性、而且急需的新型抗癌药物仍然极具挑战性。大多化疗抗癌药物都会产生严重的副作用，从而导致化学治疗不能继续进行。因此，现有药物在治疗不同种类的肿瘤时受到极大的限制。所以，寻找高效、低毒的新型抗癌药物对维护人类健康仍然迫切需要。

阿糖胞苷是胞嘧啶核苷的类似物， DNA 多聚酶的抑制剂。它能够阻止 DNA合成，也可掺入 DNA, 干扰 DNA的复制，此外还可阻断胞嘧啶核苷酸还原成脱氧胞嘧啶核苷酸 (Sylvester, R. K., Fisher, A. J., and Lobell, M.， Drug Intelligence & Clinical Pharmacy: Vol. 21 , No. 2, pp. 177-180(1987); Boyer et al., Novel Cytarabine Monopho spate Prodrugs, United States Patent Application Publication, Pub. No. ： US 2007/0037774 A 1 , (Feb. 15, 2007); Colon-Cesario, M., Wang, J., Ramos, X., Garcia, H. G.， Davila, J. J., Laguna, J., Rosado, C, and Pena de Ortiz, S. , J. Neurosci., 26(20): 5524 -5533(2006》。

目前，阿糖胞苷主要用于急性白血病的治疗。对急性粒细胞白血病疗效最好，对急性单核细胞白血病及急性淋巴细胞白血病也有效，对恶性淋巴瘤、肺癌、消化道癌、头颈部癌有一定疗效，对病毒性角膜炎及流行性结膜炎等也有一定疗效，然而，对多数实体肿瘤无效。阿糖胞苷的活性不是很高，为了提高疗效，阿糖胞苷一般均与其他药物，如：曱氧柔红霉素、全反式维曱酸联合三氧化二砷、吡柔比星、拓朴替康-足叶乙甙 -环磷酰胺、氟达拉滨等合并使用。阿糖胞苷具有骨髓抑制、消化道反应等副作用，少数病人可有肝功异常、发热、皮疹等副作用（Bolwell, B.J., Cassileth, P.A., Gale, . P. Leukemia. 2(5):253-60 (1988); Kimby, E., Nygren, P., Glimelius, B. Acta Oncol. 40(2-3):231-52 (2001); Stamatopoulos, K. Leukemia Research , Volume 22 , Issue 8 , pp 759 - 761 , (2003); Burnett, A.K., Milligan, D., Prentice, A.G., Goldstone, A.H., McMullin, M.F., Hills, R.K., Wheatley, K. Cancer. 109(6): 1007-10 (2007))。

阿糖胞苷为抗代谢药物，在细胞内先经脱氧胞苷酶催化磷酸化，转变为有活性的阿糖胞苷酸，再进一步转为相应的二磷酸及三磷酸阿糖胞苷而起作用。阿糖胞苷主要通过与 DNA合成过程中所需的三磷酸脱氧胞苷竟争，而抑制 DNA多聚酶，干扰核苷酸掺入 DNA , 并能抑制核苷酸还原酶，阻止核苷酸转变为脱氧核苷酸，但对 RNA和蛋白质的合成无显著作用，属于作用于 S期的细胞周期特异性药物，对处于 S增殖期细胞的作用最为敏感，并对 G1/S及 S/G2转换期也有作用。静脉注射后迅速从血中消失， 40 %可通过血脑屏障，药物在体内主要在肝中代谢为无活性的阿糖尿苷， 70 % ~ 90 %通过肾排泄。为了开发对实体肿瘤如肝癌有疗效的抗癌新药，必须寻找对肝脏靶向性的新药。显然，抗肝炎病毒的药物可以作为极好的借鉴。例如，米夫定及阿德福韦（adefovir, PMEA ) 己被批准作为乙型肝炎抗病毒治疗药物 (Starrett, et al" "Synthesis, oral bioavailability determination, and in vitro evaluation of prodrugs of the antiviral agent 9-[2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenine (PMEA)," J Med Chem., 37(12): 1857-64 (1994); Shaw, et al" "Pharmacokinextics and Metabolism of Selected Prodrugs of PMEA in Rats," Drug Metabolism Dis., 25(3):362-366 (1997); Wacher, V.J., et al., Advanced Drug Delivery Reviews 46:89-102 (2001); Wacher, et al" "Active Secretion and Enterocytic Drug Metabolism Barriers to Drug Absorption," Adv. Drug Del. Rev., 46:89-102 (2001); Murono, et al., "Prevention and inhibition of nasopharyngeal carcinoma growth by antiviral phosphonated nucleoside analogs," Cancer Res., 61(21):7875-7 (2001》。 2003 年, Metabasis Therapeutics, Inc公司的科学家 K. Raja Reddy, Mark D. Erion, Michael C. Matelich, Joseph J. Kopcho 提出用环璘酸核苷类作为抗肝癌治疗药物的前药（United States Patent 7,214,668;), 当化合物进入肝脏后，被肝脏的 CYP 3A4代谢酶催化解离成无环磷酸核苷类衍生物而具有抗癌的活性。 2007年， Metabasis Therapeutics, Inc公司又提出新的环磷酸阿糖胞苷衍生物作为抗癌前药的专利申请 (Novel Cytarabine Monopho spate Prodrugs, United States Patent Application Publication, Pub. No.： US 2007/0037774 A 1, Boyer et al" Feb. 15, 2007; Phosphonic acid based prodrugs of PMEA and its analogues, United States Patent 7,214,668, Reddy, et al. May 8, 2007)。这些专利申请的核心是将环磷酸接入阿糖胞苷的核糖环上的 -OCH2-核糖位置上，即 O5位置，而对阿糖胞苷胞嘧啶环上的氨基不加修饰。

阿糖胞苷（参见附图 1 ) 一般不能用于治疗肝癌，其原因在于当其胞核苷骨架结构进入肝脏之后，它的 N4氨基被代谢失效并引起毒性；另一方面是其糖甙结构上的 O5羟基必须被磷酸化而激活，而此激活过程在肝内过于緩慢。发明内容

本发明旨在克服上述已有技术的不足，提供一种高效、低毒,无耐药性，能够被迅速激活的阿糖胞苷衍生物，并提供了阿糖胞苷衍生物的合成路线以及阿糖胞苷衍生物制剂的制备方法，本发明还提供了阿糖胞苷衍生物及其制剂在抗癌抗肿瘤方面的用途的实验数据。

本发明的阿糖胞苷衍生物，其特征在于：所述阿糖胞苷衍生物是具有下述通式 I的化合物：

通式 I

其中， X=OH时， W表示 C=O 、 S(O)O和 C(O)O中的任意一种; Z 是烷基或下述代表性的基团中的任意一种：

其中， m = 0, l,2;n= 1,2, 3; 此 n指示的括号中所包含的及相联接的基团可取代到苯环、芳环、萘环、碳环、杂环等结构单元的邻- 、间-、对 ~-中的任意一个位置或 i^:、 i -、 3-中的任意一个位置或 α-和 β-f的任意一个位置或这些位置的组合；其中， R¹ R²是 (^_₁₈饱和的或不饱和的脂肪基团，所述不饱和的脂肪基团含有一个或多个不饱和键，所述不饱和键包括顺式或反式异构体；其中， R³是选自 H、 OH、 OCOR，、酯基 COOR，、 d-C₁₈的烷基、 C_{3- 18} 的环烷基、 C₂_₁₀的烯基、。的炔基、三氟甲基、苄基、苯基、芳香基、卤原子基、酰基 COR，、羰基 COR，、氰基、氨基、取代氨基、硝基、黄酸基、酰胺基 CONR，₂和 NHCOR'、黄酰胺基、氨基酸、碳环基、杂环基、烷氧基 OR，和烷硫基 SR，中的任意一种基团；其中 R，是如上述所定义的 R R²; 其中， X≠OH时， X 表示 O-PCOXOR¹^或磷酸基或

其中， A 表示 O、 S和 CH₂中的任意种， p = l-5 , 所述磷酸基包括单磷酸基、二磷酸基和三磷酸基， W-Z—起表示氢原子或 W、 Z分别表示上述定义的基团。

上述的 R¹ ， R²可以是 H、 C_1-18烷基、 C_3-18的环烷基、 C_2-18 的烯基、 C_{2- 18} 的炔基、。环烯基、苄基、苯基、芳环基、碳环基和杂环基中的任意一种。其中每一个基团可以进而被取代，而且其中可含有杂原子。

为了清晰起见但并非限制本发明，除另外说明之外，本发明所使用的所有科技术语和在本发明领域内科技专家常使用和理解的意义相同。本发明所引用的专利申请或已发表的申请及其他论文均属于原始引用并未加修改。

本专利所用"一个"或"一种"或"一类"意指最少一个 /种 /类或一个 /种 /类或一个 /种 /类以上。

本发明所用"烷基" 意指各种饱和的直链的、带侧链的或环状的碳氢基团，特包括含有十个或十个碳以下的小烷基。例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、异己基、庚基、辛基和壬基等仅为本定义中的一些典型例子。

本发明所用 "烯基" 与上述 "烷基 "定义相同，但其中必须最少有一个碳碳双键（C=C ) , 所以本发明所用的烯基包括含有两个到十个碳原子的直链的、带有分支链的或环状的并至少含有一个碳碳双键的烃基，如乙烯基、丙烯基、丁烯基和戊烯基等。

本发明所用的"炔基"为上述烷基或烯基并含有至少一个碳碳三键（ C≡ C ) , 所以，炔基包括含有两个到十个碳原子并含有至少一个碳碳三键的直链的、带有分支链的或环状的烃基或炔基，如乙炔基、丙炔基、丁炔基和戊炔基等。

本发明中的"饱和" 意指该基团中不含不饱和键，如碳碳双键或碳碳三键；而"不饱和" 则指该基团中含有一个或一个以上的碳碳双键或碳碳三键。

本发明所用 "环烷基"为环状的碳氢基团并优先选用含有三到八个碳的环烷基。因此环丙烷、环丁烷、环戊烷、环己烷、环庚烷和环辛烷均为本定义下的典型例子。环烷基中含有一个或两个碳碳双键即形成 "环烯基"。环烷基上还可带有烷基、烯基、炔基和其他基团。

本发明所使用的"芳香基 "为环状共轭芳香系统并可在环中含有一个或一个以上的非碳原子（除碳以外的其他杂原子如氮） , 如苯基、萘基和吡啶基等。

本发明中还常用到的 "杂环基"指任何多个原子通过共价键构成的环状基团和化合物，并且至少含有一个非碳原子。特指杂环基团包括含有氮、硫或氧等非碳原子的五元和六元环状系统如嘧唑、吡咯、吡啶或嘧啶等。

本发明中的 "烷氧基"指把氧原子与直链或带支链的烷基连接所形成的烷基氧化基。此类烷氧基团的例子包括甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基等。

同样地， "烷硫基"指把硫原子与直链或带支链的烷基连接所形成的烷基硫化基。此类烷硫基团的例子包括曱硫基、乙硫基、丙硫基或异丙硫基等。

本发明中的"卤原子基"为氟，氯，溴，碘。

本发明中的"氨基酸 "指取代的天然和非天然的氨基酸，純的 L- 或 D- 构型或外消旋混合物，以及其由氨基和羧基而衍生出来的基团。特别值得进一步说明的是，上述所定义的各种取代基还包括它们被进一步取代而构成的基团，其中这些新的取代基也可含有其他的基团。例如烷基或芳香基上的氢原子被氨基、素或其他基团取代即成为新的属于上述各定义中的基团。

本发明中所用的"磷酸" 或"磷酸酯" 是最高氧化态的五价磷原子上连有四个氧原子，一个氧原子以双键与磷原子相连，两个氧原子以单键与磷原子相连，而且，这两个氧原子上可以是氢原子、负电荷或如上所定义的各种烷基、芳香基等，如 -P(=O)(O-)₂, -P(O)(OR)₂。磷原子上的另外一个氧原子与本发明中的衍生物相连。

本发明中的"前药" 指本发明的阿糖胞苷衍生物被用到体内后，在体内断裂或增加某个结构单元所形成的起生物作用的化合物。

本发明的具有代表性的阿糖胞苷衍生物的结构式如下：

本发明中提及的有机溶^包括：六氣磷酸笨并三唑基氧基三吡咯坑基磷（ PyBOP ) 4-二甲氨基吡啶（ DMAP ) Ν,Ν-二甲基甲酰胺（ DMF ) 二曱基亚砜（DMSO) 、多聚乙二醇（PEG) 和四氢呋喃（ THF ) 本发明解决的另一个技术问题是提供了多个通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物的简单有效的合成路线，其技术放案分别如下：

1、阿糖胞苷衍生物的合成路线，其特征在于：阿糖胞苷和乙酸酐溶解于曱醇中，反应混合物加热回流 4小时，得到的反应液通过柱层析色谱柱提纯，得到通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物。（参考合成路线 1 )

2、阿糖胞苷衍生物的合成路线，其特征在于：阿糖胞苷、乙酰水杨酸或邻曱氧基苯甲酸、 PyBOP和 DMAP溶于 DMF, 室温搅拌 12小时，得到反应液，将该反应液通过柱层析色谱柱提纯或将该反应液用水混悬，用乙酸乙酯洗涤，水层静置后析出结晶，过滤、干燥得到通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物。（参考合成路线 2、 3 )

3、阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括如下步骤：

( 1 ) 邻苯曱酸酐或二酸酐化合物与脂肪醇混合，加热融熔，反应 4~5 小时，冷却得第一中间产物（A ) , 不经进一步纯化，直接用于下一步反应； ( 2 )将阿糖胞苷、第一中间产物（ A ) , PyBOP和 DMAP溶于 DMF中， 25-50 °C下搅拌 12 24小时，将得到的反应液用柱层析色潘柱提純或将反应液倒入水中，析出固体，得到的固体再通过柱层析色谱提纯或者将得到的反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水石酸钠干燥，过滤，滤、液减压蒸干，得到通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物。（参考合成路线 4~14 ) 所述脂肪醇是曱醇、正丁醇、月桂醇、正十四醇、正十六醇和正十八醇中的任意一种。

4、阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括如下步骤：

( 1 ) 脂肪醇溶于四氢呋喃或二氧六环，然后加入 1 , 4-环己二酸和对曱苯磺酸，加热回流 5小时，得到的第二中间产物（B ) , 不经进一步纯化，直接用于下一步反应；

( 2 )将阿糖胞苷、第二中间产物（ B ) 、 PyBOP和 DMAP溶于 DMF中，室温下搅拌 12小时，反应液倒入水中析出固体，固体再通过柱层析色谱提纯得到通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物。（参考合成路线 15~19 ) 所述脂肪醇是正十醇、月桂醇、正十四醇、正十六醇和正十八醇中的任意一种。

5、阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括如下步骤：

( 1 )将间苯二曱酸或邻苯二曱酸加入到 SOCl₂中，加 DMF，加热回流，反应 4小时，旋去 SOCl₂, 得到的第三中间产物（C ) , 不经进一步纯化，直接用于下一步反应；

( 2 )将脂肪醇溶于二氧六环再加入 Et₃N, 第三中间产物（C )用二氧六环溶解。在冰浴下将脂肪醇滴加到第三中间产物 C中，反应 4小时，将溶剂蒸去，得到第四中间产物（D ) ；

( 3 ) 将阿糖胞苷、第四中间产物（ D ) , PyBOP和 DMAP溶于 DMF, 室温下搅拌 12小时，反应液进行柱层析分离提纯后得到阿糖胞苷^"生物。 (参考合成路线 20~29 )

所述脂肪醇是正十醇、月桂醇、正十四醇、正十六醇和正十八醇中的任意一种。

6、阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括如下步骤：

( 1 ) P0C1₃溶于磷酸三乙酯在 0 °C下加入阿糖胞苷，反应 1 h, 反应液用乙醚洗涤后得到第五中间产物（E ) , 不经纯化直接用于下一步反应；

( 2 )第五中间产物（E )加入到脂肪醇中， 60 ~80°C下搅拌 4~5 h, 加稀盐酸调节 PH值到 7, 旋干脂肪醇，得到通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物。（参考合成路线 30〜33 )

所述脂肪醇是曱醇、无水乙醇、正丁醇和正辛醇中的任意一种。

本发明的阿糖胞苷衍生物制剂的制备方法，包括如下步骤：

( 1 )通式（I )的阿糖胞苷衍生物溶解到水、生理盐水、环糊精水溶液、水溶性的有机溶剂、非离子性的表面活性剂、水溶性的类脂、脂肪酸、脂肪酸酯和磷脂中的任意一种或多种的组合溶剂而制得制剂溶液； ( 2 )将所述制剂溶液再用生理盐水或葡萄糖注射液稀释而制成阿糖胞苷衍生物制剂。

所述有机溶剂是指乙醇、丙二醇、甘油、甘油酯、多聚乙二醇、 Ν,Ν- 二曱基曱酰胺和二甲基亚砜中的一种或多种的组合溶剂。

本发明的阿糖胞苷衍生物制剂，其特征在于：是由上述的阿糖胞苷衍生物制剂的制备方法制备得到的产品。

本发明的阿糖胞苷衍生物在抗癌抗肿瘤中的用途。通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物可用于治疗或緩解某一组织或器官的癌症。癌症包括但不只限于白血病、固体瘤、肺癌、结肠癌、肝癌、中枢神经系统肿瘤、卵巢癌和肾癌。

本发明提供了包括有效剂量的通式 I中的阿糖胞苷衍生物的阿糖胞苷衍生物制剂在抗肿瘤化疗中的用途以及该阿糖胞苷衍生物制剂与其他化疗药物联合，在抗肿瘤化疗中的用途。所述癌症包括白血病、固体瘤、肺癌、结肠癌、肝癌、中枢神经系统肿瘤、卵巢癌和肾癌。可以与本发明的阿糖胞苷衍生物的制剂联合使用的抗肿瘤药物包括但不限于烷化剂、植物生物碱类、抗菌抗肿瘤磺酰胺类药物、铂类药物、抗代谢类及其它已知的抗癌药物。本发明所指的联合用药治疗过程中，包括运用至少一种本发明所例举的阿糖胞苷衍生物。

以本发明的通式 I的阿糖胞苷衍生物为成份制备成药用制剂，可以用于口服的或非肠道途径给药。此处所指的非肠道途径给药是指皮下皮内、静脉内、动脉内、月几肉内、心房内、滑膜内、胸骨内注射或滴注。

本发明采用新的设计技术构思设计出阿糖胞苷衍生物。阿糖胞苷（参照附图 1 ) 不能用于治疗肝癌的原因一方面在于当其胞核苷骨架结构进入肝脏之后，它的 Ν4氨基被代谢失效并引起毒性，另一方面是其糖甙结构上的 05 羟基必须被磷酸化而激活，而此激活过程在肝内过于緩慢。

本发明的阿糖胞苷衍生物的设计是通过对 Ν4 , 05位置进行化学修饰，而设计出了新型的前药衍生物，避免 Ν4氨基被代谢失效并引起毒性；另夕卜，让 05羟基容易被磷酸化而激活，主要有益效杲是：增加生物利用度，减少多重抗药性 (多靶向设计技术），增加溶解度，增加酯溶性。本发明详细提供了阿糖胞苷衍生物的合成路线，阿糖胞苷衍生物制剂及其制备方法，并通过大量的实验数据证明了本发明的阿糖胞苷衍生物在抗癌抗肿瘤方面的用途。附图说明

图 1表示阿糖胞苷的结构和 N4 , 05修饰位置的示意图。

图 2表示本发明的对阿糖胞苷的 N4位置进行修饰的具有代表性的阿糖胞苷衍生物的结构示意图。

图 3表示本发明的对阿糖胞苷的 05位置进行修饰的具有代表性的阿糖胞苷衍生物的结构示意图。

图 4 表示本发明的阿糖胞苷衍生物抑制 BEL-7402肝癌细胞株的代表性药物浓度-抑制率曲线图。具体实施方式

本发明的一些代表性阿糖胞苷衍生物的合成路线列举如下。本发明的其他类似阿糖胞苷衍生物通过相同或类似的方法合成得到。合成路线 1 :

阿糖胞苷衍生物 1的合成（路线 1 ) ：阿糖胞苷（ 1.0 g, 4 mmol ) 和乙酸酐 ( 0.9 ml, 4.8 mmol ) 溶解于曱醇 MeOH ( 500 ml ) 中。反应混合物加热回流 4 小时。反应液通过柱层析色谱柱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 = 10/1 )，得到阿糖胞苷衍生物 1 ( 84.6 mg) , LC ( UV 254 nm )纯度 >95% LC-MS m/z 286 [M + H] (分子式 C_uH₁₅N₃O₆,分子量 285 ) 1H NM ( 600 MHz, DMSO- d₆ ) δ 10.84 ( s, 1H ) , 8.06 ( d, 1H) , 7.18 ( d, 1H ) , 6.05 ( d, 1H) 5.50 ( d 1H) 5.49(d, 1H)， 5.06 ( t 1H ) 4.06 (m 1H) 3.94 (m, 1H) , 3.83 ( m, 1H) , 3.61 ( t, 2H ) , 2.10 ( t, 3H ) 合成路线 2:

阿糖胞苷衍生物 2的合成（路线 2) ：阿糖胞苷（ 1.21 g, 5 mmol) 、乙酰 7 杨酸 ( 1.08 g, 6 mmol ) PyBOP ( 2.6 g, 5 mmol )和 DMAP ( 0.1 g, 0.5 mmol) 溶于 DMF (20 ml ) 。反应液在室温下搅拌 12小时。反应液通过柱层析色谱柱提純（硅胶，展开剂：二氯甲烷 /甲醇 =20/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 2 ( 16.7 mg ) , LC (UV 254 nm )纯度 >90% LC— MS m/z 364 [M + H] (分子式 C₁₇H₁₉N₃0₈,分子量 363 )„ ¾ NMR( 600 MHz, DMSO- ^)5 11.83 ( s, 1H) , 10.94 ( s, 1H) , 8.15 ( t, 1H ) 7.97 ( d, 1H ) , 7.48 ( s, 1H ) , 7.40 ( t 1H ) 7.06 ( m 1H) 7.00 ( s 1H ) 6.07 ( d, 1H ) 5.54 ( s, 1H) , 5.50 ( d, 1H) , 5.10 ( t, 1H) , 4.09 ( m, 1H) , 3.94 ( m, 1H) , 3.84 (m 1H) , 3.63 ( t, 2H ) 合成路线 3:

阿糖胞苷衍生物 3的合成（路线 3 )：阿糖胞苷（ 1.2 g， 5 mmol ) 、邻曱氧基苯曱酸（0.8 g, 5 mmol ) . PyBOP ( 2.6 g, 5 mmol ) 和 DMAP ( 0.1 g, 0.5 mmol )溶于 DMF ( 20 ml ) , 室温搅拌 12小时。反应液用水混悬，用乙酸乙酯洗涤，水层静置后析出结晶，过滤、干燥得阿糖胞苷衍生物 3( 69 mg ) , LC ( UV 254 nm )純度 98%。 LC-MS m/z 378 [M + H]⁺ (分子式 C₁₇H₁₉N₃O₈，分子量 377 ) 。合成路线 4:

第一中间产物 A4的合成（路线 4) ：二酸酐化合物（ 1.5 g , 10 mmol) 溶于 CH₃OH (20 ml) , 加热回流 4个小时。在减压下将 CH₃OH蒸去，得粗产品的第一中间产物 A4直接用于下一步反应。阿糖胞苷衍生物 4的合成（路线 4)：阿糖胞苷（2.5g， 10 mmol) , 第一中间产物 Α4 ( 2.0 g, 10 mmol ) ， PyBOP ( 5.2 g， 10 mmol )和 DMAP ( 0.2 g, 2 mmol) 溶于 DMF ( 10 ml) ，室温搅拌 12小时。反应液用柱层析色语柱提纯（硅胶，展开剂：二氯甲烷 /甲醇 =10/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 4 (一对异构体， 51.8 mg) , LC(UV 254 nm )纯度 96%。 LC—MS m/z 412 [M + H]+ (分子式 C₁₈H₂₅N₃O₈, 分子量 411 ) 。合成路线 5:

第一中间产物 A5的合成（路线 5) ：二酸酐化合物（ 1.5 g , 10 mmol) 溶于正丁醇（20ml) , 加热回流 4个小时。在减压下将正丁醇蒸去，得粗产品的第一中间产物 A5直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 5的合成（路线 5 )：阿糖胞苷（2.5g， 10 mmol) , 第一中间产物 Α5 (2.2 g, lOmmol) 、 PyBOP ( 5.2 g, 10 mmol ) 和 DMAP ( 0.2 g, 2 mmol) 溶于 DMF ( 10 ml) , 室温搅拌 12小时。反应液用柱层析色 i脊柱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =20/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 5 (— 对异构体， 49.4 mg) , LC(UV 254 nm )纯度 98%。 LC—MS m/z 476 [M + Na]十 (分子式 C₂₁H₃₁N₃O_s, 分子量 453 ) 。合成路线 6:

第一中间产物 A6的合成（路线 6) ：二酸肝化合物（3.08 g , 20 mmol )与月桂醇（4.46 g , 24 ml) 溶于四氢呋喃（ 20 ml ) 中，控制温度 50。C, 反应 4个小时。得到的第一中间产物 A6不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 6的合成（路线 6 )：阿糖胞苷（ 1 g， 4.1 mmol) , 第一中间产物 Α6 ( 1.53 g, 4.5 mmol ) , PyBOP ( 2.35 g, 4.5 mmol )和 DMAP ( 0.055 g, 0.41 mmol) 溶于 DMF ( 10ml) ，室温搅拌 12小时。反应液倒入水中，析出固体，过滤得固体再通过柱层析色 Ϊ普柱提纯（硅胶，展开剂：二氯甲烷 /曱醇 =15/1 )，得到阿糖胞苷衍生物 6( 42.4 mg ), LC( UV 254 nm )纯度 >95%。 LC-MS m/z 566 [M + H]⁺ (分子式 C₂₉H₄₇N₃O₈，分子量 565 ) 。合成路线 7:

第一中间产物 A7的合成（路线 7) ：将邻苯二甲酸酐（ 14.8 g, 100 mmol) 溶于 30毫升丁醇，然后 70 °C下反应 5小时，滤液蒸干，所得第一中间产物 A7不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 7的合成（路线 7) ：将阿糖胞苷（2.43 g, 10 mmol) 、第一中间产物 Α·7 ( 2.22 g, 10 mmol ) 、 PyBOP ( 5.7 g, 11 mmol) 和 DMAP ( 0.12 g, 1 mmol) 溶于 DMF ( 10 ml) , 室温搅拌 24小时。反应液通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =10/1 ) ，得到阿糖胞苷衍生物 7 ( 251.9 mg ) , LC ( UV 254匪 )纯度〉 95% ) 。 LC- MS m/z 448 [M + H]十 (分子式 C₂₁H₂₅N₃0₈, 分子量 447) 。合成路线 8:

第一中间产物 A8的合成（路线 8 ) ：二酸酐化合物（3.0 g , 19.5 mmol ) 与正十四醇（4.2 g， 19.6 mmol ) 混合，加热融熔，反应 4小时，冷却，得无色油状液体第一中间产物 A8, 不经进一步纯化，直接用于下一步反应。阿糖胞苷衍生物 8的合成（路线）：阿糖胞苷（ 1 g, 4.1 mmol ) , 第一中间产物 A8 ( 1.7 g， 4.5 mmol ) , PyBOP ( 2.35 g, 4.5 mmol ) , 和 DMAP ( 0.055 g, 0.45 mmol ) 溶于 DMF ( 10 ml ) 中， 50 °C下搅拌 12小时，反应液倒入水中，析出固体，固体再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯甲烷 / 曱醇 =15/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 8 ( 78.7 mg ) 。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 97%。 LC— MS m/z 594 [M + H]⁺ (分子式 C₃₁H₅₁N₃O₈，分子量 593 ) 。

第一中间产物 A9的合成（路线 9 ) ：二酸酐化合物（3.0 g , 19.5 mmol ) 与正十六醇（4.7 g, 19.4 mmol ) 混合，加热融熔，反应 4小时，冷却，得无色油状液体第一中间产物 A9, 不经进一步纯化，直接用于下一步反应。阿糖胞苷衍生物 9的合成（路线 9 ) 1 阿糖胞苷（ 1 g， 4.1 mmol ) , 第一中间产物 Α9 ( 1.8 g， 4.5 mmol )， PyBOP ( 2.35 g, 4.5 mmol ) , 和 DMAP ( 0.055 g, 0.45 mmol ) 溶于 DMF ( 10 ml ) 中， 50 °C下搅拌 12小时。反应液倒入水中，析出固体，固体再通过柱层析色侮提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 / 曱醇 =15/1 ) ，得到阿糖胞苷衍生物 9 ( 103.2 mg ) 。 LC ( UV 254 nm ) 純度 95%。 LC— MS m々 622 [M + H]⁺ (分子式 C₃₃H₅₅N₃O₈, 分子量 621 ) 。

第一中间产物 A10的合成（路线 10) ：二酸酐化合物（3.0 g, 19.5 mmol ) 与正十八醇（5.3 g, 19.6 mmol) 混合，加热融熔，反应 4小时，冷却，得白色固体第一中间产物 A10, 不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 10的合成（路线 10) ：阿糖胞苷（ 1 g, 4.1 mmol) , 第一中间产物 A10 ( 1.9 g, 4.5 mmol ) ， PyBOP ( 2.35 g， 4.5 mmol ) ，和 DMAP ( 0.055 g, 0.45 mmol ) 溶于 DMF ( 10 ml ) 中， 35 °C下搅拌 12小时。反应液倒入水中，析出固体，固体再通过柱层析色普提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 10 ( 79.3 mg ) 。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 96%。 LC-MS m/z 672 [M + Na]⁺ (分子式 C₃₅H₅₉N₃O₈，分子量 649)。

第一中间产物 All的合成（路线 11 ) ：邻苯二曱酸酐（5 g， 34 mmol) 与月桂醇（7.5 g, 40 mmol ) 混合，加热融熔，反应 4个小时，冷却，得白色固体的第一中间产物 All, 不经进一步纯化，直接用于下一步反应。阿糖胞苷衍生物 11的合成（路线 11 ) ：阿糖胞苷（ l g, 4.1 mmol) , 第一中间产物 All ( 2.2 g, 5 mmol) , PyBOP( 2.35 g, 4.5 mmol )和 DMAP( 0.055 g, 0.45 mmol )溶于 DMF ( 10 ml) 中，室温下搅拌 12小时。反应液倒入水中，析出固体，固体再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯甲烷 /甲醇 =15/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 11 ( 124.3 mg) 。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 98%。 LC—MS m々 582 [M + Na]⁺ (分子式 C₂₉H₄₁N₃O₈，分子量 559 ) 。

第一中间产物 A12的合成（路线 12) ：邻苯二甲酸酐（3.0 g, 20mmol) 与正十四醇（4.8g, 22 mmol) 混合， 80 °C下反应 5个小时，冷却，得白色固体第一中间产物 A12, 不经进一步纯化，直接用于下一步反应。阿糖胞苷衍生物 12的合成（路线 12)：阿糖胞苷（2,4g, 10 mmol) ，第一中间产物 A12 ( 3.6g， 10 mmol) , PyBOP ( 5.7 g, 11 mmol )和 DMAP ( 0.12 g, 1 mmol )溶于 DMF ( 10 ml ) 中， 35 °C下搅拌 24小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液減压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =25八），得到阿糖胞苷衍生物 12 ( 105.6 mg ) 。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 100%。 LC-MS m/z 610 [M + Na]⁺ (分子式 C₃₁H₄₅N₃O₈, 分子量 587 ) 。

第一中间产物 A13的合成（路线 13) ：邻苯二曱酸酐（3.0 g , 20mmol ) 与正十六醇（5.4g ， 22 mmol) 混合，加热于 80 °C反应 5个小时，冷却，得白色固体第一中间产物 A13, 不经进一步纯化，直接用于下一步反应。阿糖胞苷衍生物 13的合成（路线 13)：阿糖胞苷（2,4g， 10 mmol) , 第一中间产物 A13 ( 3.9g, 10 mmol) , PyBOP ( 5.7 g, 11 mmol )和 DMAP ( 0.12 g, 1 mmol )溶于 DMF ( 10 ml ) 中， 35 °C下搅拌 24小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水^ <酸钠千燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯甲烷 /甲醇 =25八），得到阿糖胞苷衍生物 13 ( 100.6 mg )。 LC ( UV 254 nm )純度 98%。 LC— MS m/z 638 [M + Na]⁺ (分子式 C₃₃H₄₉N₃O₈, 分子量 615 ) 。

第一中间产物 A14的合成（路线 14) ：邻苯二曱酸酐（3.0 g, 20mmol) 与正十八醇（ 5.3 g， 20 mmol) 混合，加热于 80 °C反应 5个小时，冷却，得白色固体第一中间产物 A14, 不经进一步纯化，直接用于下一步反应。阿糖胞苷衍生物 14的合成（路线 14)：阿糖胞苷（2,4g， 10 mmol) , 第一中间产物 A14 ( 4.2g, 10 mmol ) , PyBOP ( 5.7 g, 11 mmol) , 和 DMAP ( 0.12 g, 1 mmol ) 溶于 DMF ( 10 ml) 中， 35 °C下搅拌 24小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水石克酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谙提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /甲醇 =25/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 14 ( 117.8 mg ) 。 LC ( UV 254 nm )纯度 99%。 LC-MS m/z 666 [M + Na]⁺ (分子式 C₃₅H₅₃N₃O₈，分子量 643 ) 。

合

第二中间产物 B15的合成（路线 15) ：正十醇（3.79 g， 24 mmol ) 溶于 50 ml四氢呋喃中，然后加入 1, 4-环己二酸（3.44 g , 20 mmol) 和对甲苯磺酸（O.l g) , 加热回流 5小时。得到的第二中间产物 B15不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 15的合成（路线 15) ：阿糖胞苷（ 1 g， 4.1 mmol) ，第二中间产物 B15 ( 1.4 g, 4.5 mmol ) , PyBOP ( 2.35 g, 4.5 mmol) , 和 DMAP ( 0.055 g, 0.45 mmol) 溶于 DMF ( 10 ml) 中，室温下搅拌 12小时。反应液倒入水中，析出固体，固体再通过柱层析色普提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 15 ( 75.3 mg) 。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 97%。 LC— MS m/z 538 [M + H]+ (分子式 C₂₇H₄₃N₃O₈, 分子量 537 ) 。合成路线 16:

第

于 50 毫升二氧六环中，然后加入 1, 4-环己二酸（3.44 g , 20 mmol) 和对甲苯磺酸（0.1 g) ,加热回流 5小时。得到的第二中间产物 B16不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 16的合成（路线 16) ：阿糖胞苷（ 1 g， 4.1 mmol) , 第二中间产物 B16 ( 1.53 g, 4.5 mmol ) ， PyBOP (2.35 g, 4.5 mmol ) 和 DMAP ( 0.055 g, 0.45 mmol) 溶于 DMF ( 10 ml) 中，室温下搅拌 12小时。反应液倒入水中，析出固体，固体再通过柱层析色普提纯（硅胶，展开剂：二氯甲烷 /曱醇 =15/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 16 ( 27 mg) 。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 96%。 LC— MS m/z 566 [M + H]⁺ 566 (分子式 C₂₉H₄₇N₃0₈, 分子量 565 ) 。

合成路线 17:

第二中间产物 B17的合成（路线 17) ：正十四醇（5.1 g , 24 mmol) 溶于 50 毫升二氧六环，然后加入 1， 4-环己二酸（3.44 g ， 20 mmol ) 和对曱苯磺酸（0.1 g) , 回流反应 5小时。得到的第二中间产物 ΒΠ不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 17的合成（路线 17) ：阿糖胞苷（ l g， 4.1 mmol) ，第二中间产物 B17 ( 1.66 g, 4.5 mmol ) ， PyBOP (2.35 g, 4.5 mmol ) 和 DMAP ( 0.055 g， 0.45 mmol) 溶于 DMF ( 10 ml) 中，室温下搅拌 12小时。反应液倒入水中，析出固体，固体再通过柱层析色 i普提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =10/1 ) ，得到阿糖胞苷衍生物 17 ( 71.7mg) 。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 95%。 LC-MS m/z 594 [M + H]⁺ (分子式 C₃₁H₅₁N₃O₈, 分子量 593 ) 。合成路线 18:

第二中间产物 B18的合成（路线 18) ：正十六醇（5.8 g , 24 mmol) 溶于 50 毫升四氢呋喃中，然后加入 1， 4-环己二酸 ( 3.4 g ， 20 mmol) 和对曱苯磺酸（0.1 g) ，加热回流 5小时。得到的第二中间产物 B18不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 18的合成（路线 18) ：阿糖胞苷（ l g, 4.1 mmol) , 第二中间产物 B18 ( 1.78 g, 4.5 mmol ) ， PyBOP ( 2.35 g, 4.5 mmol ) 和 DMAP ( 0.055 g, 0.45 mmol) 溶于 DMF ( 10 ml) 中，室温下搅拌 12小时。反应液倒入水中，析出固体，固体再通过柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1 ) ，得到阿糖胞苷衍生物 18 ( 42.6 mg ) 。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 98%。 LC-MS m/z 622 [M + H]+ (分子式 C₃₃H₅₅N₃O₈，分子量 621 ) 。

第二中间产物 B19的合成（路线 19 )：正十八醇（ 6.48 g ， 24 mmol )溶于 50 毫升四氢呋喃中，然后加入 1, 4-环己二酸（3.4 g , 20 mmol) 和对甲苯磺酸（0.1 g) , 加热回流 5小时。得到的第二中间产物 B19不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 19的合成（路线 19) ：阿糖胞苷（ 1 g, 4.1 mmol) , 第二中间产物 B19 ( 1.91 g, 4.5 mmol ) , PyBOP ( 2.35 g, 4.5 mmol ) 和 DMAP ( 0.055 g, 0.45 mmol) 溶于 DMF ( 10 ml) 中，室温下搅拌 12小时。反应液倒入水中，析出固体，固体再通过柱层析色谙提纯（硅胶，展开剂：二氯甲烷 /甲醇 =15/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 19 ( 27.2 mg ) 。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 97%。 LC-MS w/z 650 [M + H]+ (分子式 C₃₅H₅₉N₃O₈, 分子量 649 ) 。合成路线 20:

HOOC

第三中间产物 C20的合成（路线 20) ：将间苯二曱酸（6.6 g, 40mmol)加入到 SOCl₂ ( 20 ml ) 中，加 DMF ( 2滴），回流反应 4小时。旋去 SOCl₂，得到的第三中间产物 C20不用进一步纯化，直接用于下一步反应。

第四中间产物 D20的合成（路线 20) ：将十醇（3.16 g, 20 mmol) 溶于二氧六环（20 ml) 再加入 Et₃N (3 ml), 第三中间产物 C20 ( 4.06 g， 20 mmol ) 用二氧六环溶解。在冰浴下将十醇滴加到第三中间产物 C20中，反应 4小时，将溶剂蒸去。得到的第四中间产物 D20 不用进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 20的合成（路线 20 )：阿糖胞苷（ 1.2 g， 5 mmol ) ，第四中间产物 D20 ( 1.5g, 5 mmol ) , PyBOP ( 2.8 g, 5.5 mmol )和 DMAP ( 0.06 g, 0.5 mmol ) 溶于 DMF ( 10 ml ) 中，室温下搅拌 12小时。反应液通过柱层析色谱提純（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1 ) ，得到阿糖胞苷衍生物 20 (31 mg)。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 98%。 LC— MS m/z 532 [M + Hf (分子式 C₂₇H₃₇N₃0₈, 分子量 531 ) 。合成路线 21:

第三中间产物 C21的合成（路线 21 ) ：将间苯二曱酸（6.6 g, 40 mmol)加入到 SOCl₂ (20 ml) 中，加 DMF (2滴），加热回流，反应 4小时。旋去 SOCl₂, 得到的第三中间产物 C21不用进一步纯化，直接用于下一步反应。第四中间产物 D21的合成（路线 21 ) ：将十二醇（3.72 g, 20 mmol ) 溶于二氧六环（30 ml) 再加入 Et₃N (3 ml), 第三中间产物 C21 ( 4.06 g， 20 mmol ) 用二氧六环（20 ml) 溶解。在冰浴下将十醇滴加到第三中间产物 C21 中，反应 4 小时，将溶剂蒸去。得到的第四中间产物 D21 不用进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 21的合成（路线 21 ) ：阿糖胞苷（ 1.2 g, 5 mmol ) ，第四中间产物 D21 ( 1.6 g, 5 mmol ) , PyBOP ( 2.8 g, 5.5 mmol )和 DMAP ( 0.06 g, 0.5 mmol ) 溶于 DMF ( 10 ml ) , 室温搅拌 12小时。反应液进行柱层析色谱提純（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1 ) ，得到阿糖胞苷衍生物 21 (40.5 mg)。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 98%。 LC-MS m々 560 [M + H]十（分子式 C₂₉H₄₁N₃O₈，分子量 559 ) 。合成路线 22: OC H

第三中间产物 C22的合成（路线 22 ) ：将间苯二曱酸（ 10 g， 60 mmol )加入到 SOCl₂ ( 30 ml ) 中，加 DMF ( 2滴），加热回流，反应 5小时。旋去 SOCl₂, 得到的第三中间产物 C22不用进一步纯化，直接用于下一步反应。第四中间产物 D的合成（路线 22 ) ：将十四醇（4.2 g， 20 mmol )溶于二氧六环（20 ml) 再加入 Et₃N (4 ml), 第三中间产物 C22 ( 4.04 g, 20 mmol )用二氧六环（20 ml) 溶解。在冰浴下将十四醇滴加到第三中间产物 C22中，反应 4h, 将溶剂蒸去。得到的第四中间产物 D22不用进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 22的合成（路线 22 )：阿糖胞苷（ 1.2 g, 5 mmol ) ，第四中间产物 D22 ( 1.9g, 5 mmol ) , PyBOP ( 2.86 g, 5.5 mmol )和 DMAP ( 0.061 g, 0.5 mmol ) 溶于 DMF ( 10 ml) ，室温搅拌 12小时。反应液进行柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯甲烷 /甲醇 =10/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 22 (34.4 mg)。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 98%。 LC— MS m/z 588 [M + H]⁺ (分子式 C₃₁H₄₅N₃O₈，分子量 587 ) 。合成路线 23:

第三中间产物 C23的合成（路线 23) ：将间苯二曱酸（ 10 g, 60mmol)加入到 SOCl₂ ( 30 ml) 中，加 DMF (2滴），加热回流，反应 5小时。旋去 SOCl₂, 得到的第三中间产物 C23不用进一步纯化，直接用于下一步反应。化合物 R⁴的合成（路线 23) ：将十六醇（4.84 g， 20 mmol ) 溶于二氧六环 (20 ml) 再加入 Et₃N (4 ml), 第三中间产物 C23 ( 4.04 g, 20 mmol ) 用二氧六环（20 ml) 溶解。在冰浴下将十六醇滴加到第三中间产物 C23中，反应 4 小时，将溶剂蒸去。得到的第四中间产物 D 不用进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 23的合成（路线 23 )：阿糖胞苷（ 1.2 g, 5 mmol ) ，第四中间产物 D23 ( 1.95 g, 5 mmol) , PyBOP ( 2.86 g, 5.5 mmol ) 和 DMAP ( 0.06 g, 0.5 mmol) 溶于 DMF ( 10 ml) ，室温下搅拌 12小时。反应液进行柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯甲烷 /曱醇 =10/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 23 (99 mg)。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 97%。 LC— MS m/z 616 [M + H]+ (分子式 C₃₃H₄₉N₃O₈，分子量 615 ) 。合成路线 24:

第三中间产物 C24的合成（路线 24) ：将间苯二曱酸（ 10 g, 60 mmol )加入到 SOCl₂ ( 30 ml) 中，加 DMF (2滴），加热回流，反应 5小时。旋去 SOCl₂，得到的第三中间产物 C24不用进一步纯化，直接用于下一步反应。第四中间产物 D24的合成（路线 24) ：将十八醇（5.4 g， 20 mmol )溶于二氧六环（20 ml) 再加入 Et₃N (4 ml), 第三中间产物 C24 ( 4.04 g, 20 mmol ) 用二氧六环（20 ml) 溶解。在冰浴下将十八醇滴加到第三中间产物 C24中，反应 4 小时，将溶剂蒸去。得到的第四中间产物 D24不用进一步純化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 24的合成（路线 24 )：阿糖胞苷（ 1.2 g, 5 mmol ) ，第四中间产物 D24 ( 2.02 g, 5 mmol) , PyBOP ( 2.86 g, 5.5 mmol ) 和 DMAP ( 0.06 g, 0.5 mmol) 溶于 DMF ( 10 ml) ，室温下搅拌 12小时。反应液进行柱层析色谱提純柱层析色普提纯（硅胶，展开剂：二氯甲烷 /甲醇 =10/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 24 (38.1 mg)。 LC ( UV 254 nm )纯度 96%。 LC— MS m/z 644 [M + H]+ (分子式 C₃₅H₅₃N₃O_s, 分子量 643 ) 。合成路线 25:

第三中间产物 C25的合成（路线 25 ) ：将对苯二曱酸（6.6 g， 40 mmol )加入到 SOCl₂ ( 20 ml ) 中，加 DMF ( 2滴），加热回流，反应 4小时。旋去 S0C1₂, 得到的第三中间产物 C25不用进一步纯化，直接用于下一步反应。第四中间产物 D的合成（路线 25 ) ：将十醇（3.16 g, 20 mmol ) 溶于二氧六环（20 ml)再加入 Et₃N (3 ml), 第三中间产物 C25 ( 4.04 g， 20 mmol )用二氧六环 (20 ml)溶解。在冰浴下将十醇滴加到第三中间产物 C25 中，反应 4 小时，将溶剂蒸去。得到的第四中间产物 D25 不用进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 25的合成（路线 25 ) ：阿糖胞苷（ 1.2 g, 5 mmol ) ，第四中间产物 D25 ( 1.5 g, 5 mmol ) , PyBOP ( 2.86 g, 5.5 mmol )和 DMAP ( 0.06 g, 0.5 mmol ) 溶于 DMF ( 10 ml ) , 室温下搅拌 12小时。反应液进行柱层析分离提純（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1,得到阿糖胞苷衍生物 25 ( 22.5 mg ) 。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 95%。 LC— MS m々 532 [M + H]十（分子式 C₂₇H₃₇N₃O₈, 分子量 531 ) 。合成路线 26:

第三中间产物 C26的合成（路线 26) ：将对苯二曱酸（6.6 g, 40 mmol )加入到 SOCl₂ (20 ml) 中，加 DMF (2滴），加热回流，反应 4小时。旋去 SOCl₂，得到的第三中间产物 C26不用进一步纯化，直接用于下一步反应。第四中间产物 D26的合成（路线 26) ：将十二醇（3.72 g, 20 mmol ) 溶于二氧六环 (20 ml)再加入 Et₃N (3 ml), 第三中间产物 C26 ( 4.04 g, 20 mmol ) 用二氧六环 (20 ml)溶解。在冰浴下将十二醇滴加到第三中间产物 C26中，反应 4 小时，将溶剂蒸去。得到的第四中间产物 D26不用进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 26的合成（路线 26 ) ：阿糖胞苷（ 1.2 g, 5 mmol ) ，第四中间产物 D26 ( 1.6 g, 5 mmol) , PyBOP ( 2.86 g, 5.5 mmol )和 DMAP ( 0.06 g, 0.5 mmol ) 溶于 DMF ( 10 ml ) ，室温下搅拌 12小时。反应液进行柱层析分离（硅胶， DCM: MeOH =15: 1)后得到阿糖胞苷衍生物 26 (29.7 mg)。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 93%。 LC-MS m/z 560 [M + H]⁺ (分子式 C₂₉H₄₁N₃O₈，分子量 559 ) 。合成路线 27:

第三中间产物 C27的合成（路线 27) ：将对苯二曱酸（6.6 g, 40 mmol )加入到 SOCl₂ (20 ml) 中，加 DMF (2滴），加热回流，反应 4小时。旋去 SOCl₂，得到的第三中间产物 C27不用进一步纯化，直接用于下一步反应。第四中间产物 D27的合成（路线 27) ：将十四醇（4.2 g, 20 mmol )溶于二氧六环（20 ml) 再加入 Et₃N (3 ml), 第三中间产物 C27 ( 4.04 g, 20 mmol ) 用二氧六环（20ml) 溶解。在冰浴下将十四醇滴加到第三中间产物 C27中，反应 4 小时，将溶剂蒸去，得到的第四中间产物 D27不用进一步純化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 27的合成（路线 27 )：阿糖胞苷（ 1.2 g, 5 mmol ) ，第四中间产物 D27 ( 1.8 g, 5 mmol ) ， PyBOP ( 2.86 g, 5.5 mmol )和 DMAP ( 0.06 g, 0.5 mmol ) 溶于 DMF ( 10 ml ) , 室温下搅拌 12小时。反应液进行柱层析分离提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1 )得到阿糖胞苷衍生物 27 (26 mg)。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 99%。 LC-MS m/z 588 [M + H]⁺ (分子式 C₃₁H₄₅N₃O₈, 分子量 587 ) 。合成路线 28:

第三中间产物 C28的合成（路线 28) ：将对苯二曱酸（6.6 g, 40 mmol )加入到 SOCl₂ (20 ml) 中，加 DMF (2滴），加热回流，反应 4小时。旋去 SOCl₂，得到的第三中间产物 C28不用进一步纯化，直接用于下一步反应。第四中间产物 D28的合成（路线 28) ：将十六醇（4.8 g, 20 mmol )溶于二氧六环（20 ml) 再加入 Et₃N(3 ml), 第三中间产物 C28 ( 4.04 g, 20 mmol ) 用二氧六环 (20 ml) 溶解。在水浴下将十六醇滴加到第三中间产物 C28中，反应 4 小时，将溶剂蒸去。得到的第四中间产物 D28 不用进一步純化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 28的合成（路线 28 )：阿糖胞苷（ 1.2 g, 5 mmol ) ，第四中间产物 D28 ( 2.0 g, 5 mmol ) ， PyBOP ( 2.86 g, 5.5 mmol )和 DMAP ( 0.06 g, 0.5 mmol ) 溶于 DMF ( 10 ml ) , 室温下搅拌 12小时。反应液进行柱层析分离提纯（硅胶，展开剂：二氯甲烷 /甲醇 =15/1 ) 后得到阿糖胞苷衍生物 28 (26.6 mg)。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 99%。 LC— MS m/z 616 [M + H]+ (分子式 C₃₃H₄₉N₃O₈, 分子量 615 ) 。合成路线 29:

第三中间产物 C29的合成（路线 29 ) ：将对苯二曱酸（6.6 g, 40 mmol )加入到 SOCl₂ ( 20 ml ) 中，加 DMF ( 2滴），加热回流，反应 4小时。旋去 SOCl₂, 得到的第三中间产物 C29不用进一步纯化，直接用于下一步反应。第四中间产物 D29的合成（路线 29 ) ：将十八醇（5.4 g, 20 mmol )溶于二氧六环（20 ml)再加入 Et₃N( 3 ml ), 第三中间产物 C29 ( 4.04 g, 20 mmol ) 用二氧六环（20 ml) 溶解。在冰浴下将十八醇滴加到第三中间产物 C29中，反应 4 小时，将溶剂蒸去。得到的第四中间产物 D29 不用进一步純化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 29的合成（路线 29 ) ：阿糖胞苷（ 1.2 g， 5 mmol ) ，第四中间产物 D29 ( 2.1 g, 5 mmol ) , PyBOP ( 2.86 g, 5.5 mmol )和 DMAP ( 0.06 g, 0.5 mmol ) 溶于 DMF ( 10 ml ) , 室温下搅拌 12小时。反应液进行柱层析分离提純（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1 ) 后得到阿糖胞苷衍生物 29 (37.9 mg)。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 97%。 LC— MS m/z 644 [M + H]十 (分子式 C₃₅H₅₃N₃0₈, 分子量 643 ) 。合成路线 30:

第五中间产物 E30的合成（路线 30) ： POCl₃ ( 3.0 g, 20 mmol ) 溶于磷酸三乙酯（25 ml) , 在 0 °C下加入阿糖胞苷（4.9 g， 20 mmol ) , 反应 1 h, 反应液用乙醚洗涤后得到第五中间产物 E30。

阿糖胞苷衍生物 30的合成（路线 30): 第五中间产物 E30( 0.5 g, 1.4 mmol) 加入到曱醇（20ml) 中， 60 °C下搅拌 4 h, 加稀盐酸调节 PH值到 7, 旋干曱醇， PTLC (展开剂：异丙醇 /氨水 =10/1),得到阿糖胞苷衍生物 30( 9.3 mg )。 LC(UV 254 nm )纯度 99%。 LC— MS m/z 352 [M + H]+ (分子式 C_uH₁₈N₃O₈P, 分子量 351 ) 。合成路线 31:

第五中间产物 E31的合成（路线 31 ) ： POCl₃ ( 1.25 g, 8.2 mmol) 溶于磷酸三乙酯（ 10ml) , 在 0 °C下加入阿糖胞苷（ 1 g, 4.1 mmol) , 反应 1 h, 反应液用乙醚洗涤后得到第五中间产物 E31。

阿糖胞苷衍生物 31的合成（路线 31 ): 第五中间产物 E31 ( 0.5 g, 1.4 mmol) 加入到无水乙醇（20ml) 中， 60 °C下搅拌 4h，加稀盐酸调节 PH值到 7，旋干乙醇， PTLC (展开剂：异丙醇 /氨水 =2/1), 得到阿糖胞苷衍生物 31 ( 87.1 mg) 。 LC (UV 254 nm ) 纯度 98%。 LC— MS m/z 380 [M + H]+ (分子式 C₁₃H₂₂N₃O₈P, 分子量 379 ) 。合成路线 32:

第五中间产物 E32的合成（路线 32) ： POCl₃ ( 1.25 g, 8.2 mmol)溶于磷酸三乙酯（10ml) , 在 0 °C下加入阿糖胞苷（ 1 g, 4.1 mmol) , 反应 1 h, 反应液用乙醚洗涤后得到第五中间产物 E32。

阿糖胞苷衍生物 32的合成（路线 32):第五中间产物 E32(0.5 g, 1.4 mmol) 加入到正丁醇（20ml) 中， 60 °C下搅拌 4 h, 加稀盐酸调节 PH值到 7, 旋干正丁醇， PTLC (展开剂：异丙醇 /氨水 =2/1),得到阿糖胞苷衍生物 32 (20.4 mg) 。 LC (UV 254 nm ) 纯度 95%。 LC— MS m/z 436 [M + H]十（分子式 C₁₇H₃₀N₃O₈P, 分子量 435 ) 。合成路线 33:

E33

第五中间产物 E33的合成（路线 33) ： POCl₃ ( 1.25 g, 8.2 mmol)溶于磷酸三乙酯（ 10ml) ，在 0 °C下加入阿糖胞苷（ 1 g， 4.1 mmol) ，反应 1 h，反应液用乙醚洗涤后得到第五中间产物 E33。

阿糖胞苷衍生物 33的合成（路线 33): 第五中间产物 E33( 0.9 g， 2.5 mmol ) 与正辛醇（0.65 g, 5 mmol ) 溶于磷酸三乙酯（5 ml) 中， 80 °C下搅拌 5 h, 加稀盐酸调节 PH值到 7, 反应液用乙醚洗涤，固体 PTLC (展开剂：异丙醇 /氨水 =1/1)，得到阿糖胞苷衍生物 33 ( 1.8 mg )。 LC ( UV 254 nm )纯度 95%。

LC-MS m/z 570 [M + Na]⁺ (分子式 C₂₅H₄₆N₃O₈P, 分子量 547 ) 。合成药物肿瘤细胞毒性试验操作规程

本发明的阿糖胞苷衍生物及其制剂对肿瘤细胞的抑制作用试验

1. 试验材料

1) 细胞株：

HL-60细胞株，悬浮生长，用含 10%胎牛血清（Hyclone公司々RPMI 1640 细胞培养基培养，常规培养保持初始细胞浓度在 3*10⁵/ml左右，三天一次 1: 3传代。实验前一天传代（5* 10⁵/ml) , 实验时细胞浓度在 7.5~10*10⁵/ml之间。

BEL-7402细胞林和 HT-29细胞株，贴壁生长，用 10%胎牛血清（ Hyclone 公司）的 D-MEM细胞培养基培养，常规培养初始细胞浓度在 3*10⁵/ml左右， 2~3天 1: 3传代一次。实验前一天 1: 2传代，实验时细胞浓度在 5〜10*10⁵/ml 之间。

2) 药物的溶解与稀释：根据提供的阿糖胞苷衍生物的重量和分子量，首先加入 DMSO 100~200 μΐ, 然后加入生理盐水（NS) , 使稀释后得到的药物浓度为 5 mM (注意 DMSO终浓度不超过 10% ) 。

3) D-MEM或 RPMI 1640细胞培养基， Gibco公司

4) 胎牛血清， Hyclone公司

5) 细胞消化液， 0.25◦/。 Trypsin + 0.02 % EDTA

6) PBS磷酸盐緩冲液 ) MTT液， MTT干粉 (Sigma), 用 PBS充分溶解配成 5 mg/ml, 0·22 μιη微孔滤膜过滤后分装， -20 °C保存。

) 10%酸化 SDS, 0.01NHC1

) 离心管、吸管等（BD公司）， 96孔板（Costar 公司）

骤：

) 细胞接种：传代后 24 小时的细胞，生长状态良好。常规收获细胞，用新鲜培养液调整细胞浓度为 2xl0⁵/ml (贴壁细胞）〜3xl0⁵/ml (悬浮细胞）。贴壁细胞接种 100 μΐ/孔， 37 °C、 5%CO₂孵箱中培养 24 h后弃去旧培养液，加入新鲜培养液 95 μΐ/孔。悬浮细胞直接接种 95 μΐ/ 孔。

) 药物处理：每一药物设 6个浓度梯度，每一浓度设 3个复孔，药物空白对照组设 5个复孔。每次试验同时故 Ara-C对照。 HT-29和 BEL-7402 细月包加入药物的浓度依次为 5、 2.5、 1.25、 0.625、 0.3125、 0.16 mM, 每孔 5 μ1, 终浓度依次为 0.25、 0.125、 0.0625、 0.03125、 0.016、 0.008 mM, 对照组加入 5 μΐ生理盐水； HL-60细胞加入药物的浓度依次为

5χ10^-3、 2.5χ10^-3、 1.25χ10^-3、 0·625χ10^-3、 0·3125χ10^-3、 Ο.ΙόχΙΟ"³ mM, 对应终浓度依次为 2.5χ1θΛ 1.25χ10^-4、 6.25χ10^-5、 3.125χ10^-5、 1.6χ10^-5、 8x10— ⁶ mM, 对照组加入 5 μΐ生理盐水。

) 细胞培养与检测：加入药物后， 37 。C、 5%CO₂孵箱中培养 72 h，然后每孔加入 MTT 10 μΐ,继续培养 4h,每孔加 100 μΐ 10%SDS (含 0.01N

HCl) 溶解， 24 h后用 Bio-rad 680型 ELISA读数仪测定各孔吸光度 (A) ，检测波长为 570 nm、参考波长为 630 nm。

) 计算：首先平均各复孔的吸光度（去除过于悬殊的数据），计算每种细胞每个药物浓度下的抑制率 (IR) , I (%)=( 1 - A Ao) X 100% , A_n为实验孔平均吸光度， A。为药物空白对照孔平均吸光度。用 EXCEL软件，绘制药物浓度效应曲线，选择合理的计算方法计算 50 %细胞存活的药物浓度（IC₅₀ ) 。

图 4是阿糖胞苷衍生物抑制 BEL-7402肝癌细胞株的代表性药物浓度- 抑制率曲线。其中， JF001、 JF017、 JF019、 JF029和 JF033分别为根据合成路线 1、 17、 19、 29、 33合成的阿糖胞苷衍生物。 Arac为阿糖胞苷的英文名称缩写。

表 1—4列举了具有代表性的阿糖胞苷衍生物抑制不同肿瘤细胞的生物活性。 JF004、 JF005、 JF006 、 JF007、 JF009、 JF013、 JF020和 JF033分别为根据合成路线 4、 5、 6、 7、 9、 13、 20和 33合成的阿糖胞苷衍生物。表 1

表 2

/010ZN3/X3d 表 4

上述试验结果表明，本发明的阿糖胞苷衍生物对肿瘤细胞具有抑制作

Claims

权利要求书

1、阿糖胞苷衍生物，其特征在于：所述阿糖胞苷衍生物是具有下述通式（I ) 的化合物：

( I )

其中， m = 0, 1, 2;n = 1, 2, 3; 此 n指示的括号中所包含的及相联接的基团可取代到苯环、芳环、萘环、碳环、杂环等结构单元的邻- 、间-、对 ~-中的任意一个位置或 1 i -、 3-中的任意一个位置或 α -和 β -f的任意一个位置或这些位置的组合；

其中， R¹ R²是 (^_₁₈饱和的或不饱和的脂肪基团，所述不饱和的脂肪基团含有至少一个不饱和键，所述不饱和键包括顺式或反式异构体；

其中， R³是选自 H、 OH、 OCOR，、酯基 COOR，、 d-C₁₈的烷基、 C_3-18 的环烷基、。的烯基、 C₂_₁₍₎的炔基、三氟曱基、苄基、芳香基、卤原子基、酰基 COR'、羰基 COR，、氰基、氨基、取代氨基、硝基、黄酸基、酰胺基 CONR，₂和 NHCOR'、黄酰胺基、氨基酸、碳环基、杂环基、烷氧基 OR，、烷硫基 SR，中的任意一种基团；其中 R，是如上述所定义的 R R²;

其中， X≠OH时， X表示 O-Pt XOR¹) 或磷酸基或

其中， A表示 O、 S和 CH₂中的任意种， p = l-5 , 所述磷酸基包括单磷酸基、二磷酸基和三磷酸基，

W-Z—起表示氢原子或 W, Z分別表示上述定义的基团。

2、根据权利要求 1所述的阿糖胞苷衍生物，其特征在于：所述 R¹ 、 R² A H, C_1-18烷基、 C_3-18的环烷基、 C_2-i8 的烯基、 c_2-18 的炔基、 c_3-1。环烯基、苄基、苯基、芳环基、碳环基和杂环基中的任意一种基团。

3、根据权利要求 1或 2所述的阿糖胞苷衍生物，其特征在于：所述阿糖胞苷衍生物是通式（ I ) 中的 X=OH时的阿糖胞苷衍生物。

4、根据权利要求 1或 2所述的阿糖胞苷衍生物，其特征在于：所述阿糖胞苷衍生物是在通式（ I ) 的 W-Z为 H时的阿糖胞苷衍生物。

5、根据权利要求 1或 2所述的阿糖胞苷衍生物，其特征在于：所述阿糖胞苷衍生物的结构式是以下结构式中的任意一种：

46

n = 2-8

、阿糖胞苷衍生物的合成路线，其特征在于：阿糖胞苷和乙酸酐溶解于曱醇中，反应混合物加热回流 4小时，得到的反应液通过柱层析色谱柱提纯，得到通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物。

7、阿糖胞苷衍生物的合成路线，其特征在于：阿糖胞苷、乙酰水杨酸或邻曱氧基苯甲酸、 PyBOP和 DMAP溶于 DMF , 室温搅拌 12小时，得到反应液，将该反应液通过柱层析色谱柱提純或将该反应液用水混悬，用乙酸乙酯洗涤，水层静置后析出结晶，过滤、干燥得到通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物。

8、阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括如下步骤：

( 1 ) 酸酐化合物与脂肪醇混合，加热融熔，反应 4~5个小时，冷却，得第一中间产物（A ) , 不经进一步纯化，直接用于下一步反应；

( 2 ) 将阿糖胞苷，第一中间产物（A ) , PyBOP和 DMAP溶于 DMF 中， 25〜50 °C下搅拌 12~24个小时，得到反应液，

将反应液用柱层析色谱柱提纯或将反应液倒入水中，析出固体，得到的固体再通过柱层析色谱提纯

或者将得到的反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，得到通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物。

9、根据权利要求 8所述的阿糖胞苷衍生物的合成路线，其特征在于：所述酸酐化合物是邻苯二曱酸或二酸酐化合物；所述脂肪醇是曱醇、正丁醇、月桂醇、正十四醇、正十六醇和正十八醇中的任意一种。

10、阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括如下步骤：

( 1 ) 脂肪醇溶于四氢呋喃或二氧六环，然后加入 1 , 4-环己二酸和对甲苯磺酸，加热回流 5小时，得到的第二中间产物（B ) ，不经进一步純化，直接用于下一步反应；

( 2 )将阿糖胞苷、第二中间产物（ B ) 、 PyBOP和 DMAP溶于 DMF中 , 室温下搅拌 12小时，反应液倒入水中，析出固体，固体再通过柱层析色谙提纯得到通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物。

11、根据权利要求 10所述的阿糖胞苷衍生物的合成路线，其特征在于：所述脂肪醇是正十醇、月桂醇、正十四醇、正十六醇和正十八醇中的任意一种。

12、阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括如下步骤：

( 1 )将间苯二曱酸或邻苯二曱酸加入到 SOCl₂中，加 1~4滴 DMF，加热回流，反应 4小时，旋去 SOCl₂, 得到的第三中间产物（C ) 不经进一步纯化，直接用于下一步反应；

( 2 ) 将脂肪醇溶于二氧六环再加入 Et₃N，第三中间产物（C ) 用二氧六环溶解，在冰浴下将脂肪醇滴加到第三中间产物（C ) 中，反应 4小时，将溶剂蒸去，得到第四中间产物（D ) ；

( 3 )将阿糖胞苷、第四中间产物（ D ) 、 PyBOP和 DMAP溶于 DMF , 室温下搅拌 12小时，反应液进行柱层析分离提純后得到通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物。

13、根据权利要求 12所述的阿糖胞苷衍生物的合成路线，其特征在于：所述脂肪醇是正十醇、月桂醇、正十四醇、正十六醇和正十八醇中的任意一种。

14、阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括如下步骤：

( 1 ) POCl₃溶于磷酸三乙酯，在 0 °C下加入阿糖胞苷，反应 1 h, 反应液用乙醚洗涤后得到第五中间产物（E ) ，不经进一步纯化，直接用于下一步反应；

( 2 ) 第五中间产物（E ) 加入到脂肪醇中， 60 〜80°C下搅拌 4〜5 h, 加稀盐酸调节 PH值到 7，旋干脂肪醇，得到通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物。

15、根据权利要求 14所述的阿糖胞苷衍生物的合成路线，其特征在于：所述脂肪醇是甲醇、无水乙醇、正丁醇和正辛醇中的任意一种。

16、阿糖胞苷衍生物制剂的制备方法，包括如下步骤：

( 1 )通式（I )的阿糖胞苷衍生物溶解到水、生理盐水、环糊精水溶液、水溶性的有机溶剂、非离子性的表面活性剂、水溶性的类脂、脂肪酸、脂肪酸酯和磷脂中的任意一种或多种的组合溶剂而制得制剂溶液；

( 2 ) 将所述制剂溶液再用生理盐水或葡萄糖注射液稀释而制成阿糖胞苷衍生物制剂。

17、根据权利要求 16的一种制备阿糖胞苷衍生物制剂的方法，其特征在于：所述有机溶剂是乙醇、丙二醇、甘油、甘油酯、多聚乙二醇、 N，N- 二曱基曱酰胺和二甲基亚砜中的任意一种或多种的组合溶剂。

18、一种阿糖胞苷衍生物制剂，其特征在于：是由权利要求 16的阿糖胞苷衍生物制剂的制备方法制备得到的产品。

19、权利要求 1的阿糖胞苷衍生物在抗癌抗肿瘤中的用途。

20、根据权利要求 19 的阿糖胞苷衍生物在抗癌抗肿瘤中的用途，其特征在于：癌症包括白血病、固体瘤、肺癌、结肠癌、肝癌、中枢神经系统肿瘤、卵巢癌和肾癌。

21、权利要求 18 的阿糖胞苷衍生物制剂在抗癌抗肿瘤中的用途。

22、根据权利要求 21 的阿糖胞苷衍生物制剂在抗癌抗肿瘤中的用途，其特征在于：癌症包括白血病、固体瘤、肺癌、结肠癌、肝癌、中枢神经系统肿瘤、卵巢癌和肾癌。

23、权利要求 21 的阿糖胞苷衍生物制剂在抗癌抗肿瘤中的用途，其特征在于：所述阿糖胞苷衍生物制剂与其他化疗药物联合用药，所述其他化疗药物包括烷化剂、植物生物碱类、抗菌抗肿瘤磺酰胺类药物、铂类药物、抗代谢类及其它已知的抗癌药物。

24、根据权利要求 23 的阿糖胞苷衍生物制剂在抗癌抗肿瘤中的用途，其特征在于：在联合用药过程中，包括运用至少一种具有权利要求 5的结构式的阿糖胞苷^"生物。