WO2011079501A1

WO2011079501A1 - 基于阿糖胞苷结构的前药及其合成方法及应用

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Publication number: WO2011079501A1
Application number: PCT/CN2010/001663
Authority: WO
Inventors: 李文保; 薛晓霞; 李刚; 王荣周; 孙昌俊
Original assignee: 济南圣鲁金药物技术开发有限公司
Priority date: 2009-12-30
Filing date: 2010-10-22
Publication date: 2011-07-07
Also published as: CN102115485A

Description

基于阿糖胞苷结构的前药及其合成方法及应用

技术领域

本发明属于核苷类药物领域，涉及基于阿糖胞苷结构的前药、其合成方法，以及基于阿糖胞苷结构的前药用于治疗各种癌症及相关疾病的药物的应用。

背景技术

据 WHO的统计数字显示， 2007'年全球新确诊的肿瘤病人多达 1200万人，而过去几年来全球每年死于癌症的病人高达 700万人以上。这一数字已与死于急性心血管病的人数非常接近。癌症即将成为世界死亡人数最多的疾病。

核苷类药物，如阿糖胞苷、吉西他滨、地西他滨、氮杂胞苷、克拉屈滨、氟达拉滨、安妥明、奈拉滨、 6-氮尿苷及噻唑呋林等已被广泛用于治疗各种癌症。同时核苷类药物中有很多种处于临床研究阶段，如 4，-thio-fluoro-ara-C， 2' -deoxy-2 ' -fluoromethylcytidine, 4'-thio-ara-C, 和 3，-ethynylcytidine (ECYD)。

阿糖胞苷（Ι-β-D-阿拉伯呋喃糖基 -4-氨基 -2(1H 嘧啶酮盐酸盐）属于嘧啶类抗肿瘤药物，主要用于治疗急性非淋巴细胞白血病（多与蒽环类药物如柔红霉素联合应用)、慢性粒细胞白血病急变期、难治性急性淋巴细胞白血病及非霍奇金淋巴瘤。内注射用于治疗脑膜白血病和脑膜转移瘤。对疱疹病毒、腺病毒、痘病毒等 DNA病毒有显著抑制作用。

阿糖胞苷 (Ara-C)在体内须经过三个步骤转化为阿糖胞苷三磷酸（Ara-CTp)，才能发挥抗癌作用。首先由胞浆内脱氧胞苷激酶催化形成阿糖胞苷一磷酸（Ara-CMp)，然后分别通过一磷酸和二磷酸嘧啶核苷激酶作用转化为阿糖胞苷二磷酸（Ara-CDp)和活性型阿糖胞苷三磷酸（Ara-CTp), 后者抑制 DNA多聚酶，影响 DNA合成。也可参入 DNA中，干扰 DNA的复制，使细胞死亡。但对 RNA和蛋白质合成无显著作用，主要作用 S期，对 G1/S及 S/G2转换期也有作用，属于细胞周期特异性药物。

本品口服吸收较少而不规则，仅 20%的药物进入血循环，故多用静脉给药。静注后能广泛分布于体液、组^及细胞内。静脉注射后迅速从血中消失， T1/2为 3-15 min，消除相的 T1/2 为 2-3 h，药物在体内主要在肝中由脱氨酶催化脱氨，转变为无活性的阿糖尿苷。 24小时后从尿中排出 70-90%，主要为代谢物。静脉滴注药物可通过血脑屏障，脑脊液浓度为血浆中的 40%，因脑脊液中脱氨酶含量低，其 T1/2长达 2-11 h。

鉴于其在肝中会很快失活，阿糖胞苷还不能用以治疗肝癌。

肝癌是当前人类的主要健康问题之一，是全球第五大常见癌症，也是全球癌症相关死亡的第三大主要原因，每年死于肝癌的人数超过 50万人。最新的调查数据显示，全球每年肝癌新增病例达 62. 6万，其中约 55%为中国患者，在美国的肝癌发病率以每年 4.3%递增。 HCC的主要病因包括慢性 HBV感染 (亚洲主要病因）、 HCV感染（欧洲主要病因）、酒精性肝硬化等。在世界范围内， HBV被认为引起了 60%-80%的肝细胞癌，其死亡率在 HBV流行的亚洲特别高。肝癌通常病情隐匿，很多患者被确诊时已进展至疾病晚期，失去了最佳的手术时机。然而一直以来对晚期肝癌患者都没有有效的系统治疗方法。阿霉素据拫道是使用最广泛的药物，但是只有 1项包括 60名患者的随机对照试验支持它的用处。阿霉素可以引起致死并发症的几率高达 25 %。米托葸醌是经批准的肝细胞癌治疗用药，但却不认为是治疗肝细胞癌的特效药物。

核苷类前药是减少抗癌药物副作用的最有前景的新方法。抗癌药物的前药到达作用器官后，在酶的作用下转化成有活性的化合物发挥疗效。人们已研究出卡培他滨和依诺他滨等前药来克服核苷类药物的不足。现在很多制药公司仍在积极的调査研究其它前药治疗癌症的方法 (G. Xu, H. L. McLeod, Clin. Cancer Res., 2001, 7, 3314-3324; M. Rooseboom, J. N. M. Commandeur, N. P. E. Vermeulen, Pharmacol. Rev., 2004, 56, 53-102)。

为克服阿糖胞苷本身的低生物利用度，各种阿糖胞苷前药已被大量的合成；其中最常用的是用羧酸酯基保护阿糖胞苷糖环 5' - 0H。新近， S m等报道了用氨基酸酯基保护阿糖胞苷糖环 5' -OH (Y. Sun et al.， Mol Pharmaceutics 2009, 6， 315-325)；通过借助大肠寡肽转用子 _1 (Intestinal Ol igopeptide Transport 1) , 合成的一系列前药化合物能有效的穿过肠膜，增加吸收并增加代谢物的稳定性，因而能大幅提高其生物利用度。用氨基酸胺基保护阿糖胞苷糖环 4' -NH2 (B. Liu et al. , Eur. J. Med. Chem. 2009, 44， 3596-3600)，合成的一系列前药化合物也能大幅提高其生物利用度。

专利 US2009/0274686新近报道了用磷酸胺基保护阿糖胞苷糖环 5' _0H,合成的一系列前药化合物用于治疗各种病毒性疾病，尤其是治疗 HIV， HCV或 HBV; 磷酸酯基保护阿糖胞苷糖环 5' - 0H的前药化合物已被特异地应用于治疗肝炎或肝癌（US2005/0101775 , Mark Erion et al., J. Am. Chem. Soc. 2004, 126, 5154-5163)。

鉴于肝功能的特异性，核苷类药物在肝脏中会很快代谢成非活性成分而失活；到目前为止，还没有一种核苷类药物能用以治疗肝癌。美国 Metabasis公司已研究出一种直接在肝中酶解的 "肝靶向"前药技术 (HepDirect), 即通过在肝中酶解环磷酸的前体药的方法，成功的用于非环状及一些环状抗病毒或抗肿瘤核苷类化合物的临床研究。其中阿糖胞苷前药

MB07133正在进行临床抗肝癌评估（US2005/0101775 , Mark Erion et al., J. Am. Chem. Soc.

2004, 126, 5154-5163)。然而， Metabasis公司的工作仅限于胞嘧啶 0⁵位上的环磷酸化。

MB07133的临床抗肝癌评估也仅限于静注，尚未发现用于.口服的报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种基于阿糖胞苷结构的前药。本研究涵盖基于阿糖胞苷结构，及其它带有胞嘧啶或其替代物或 5-氮杂胞嘧啶等核苷类抗肿瘤药物的前药。本项器官特异性前药研究在阿糖胞苷 N⁴位修饰增加其溶解度，生物利用度以及器官特异性，所生成的前药化合物可以克服其代谢快的问题，并能克服其口服吸收较少而不规则，仅 20%的药物进入血循环，只能静脉给药的限制，使之在临床上能用于口服；更好地改善抗肿瘤、抗癌、抗感染和防扩散能力，加强疗效和改进安全性，并能够特异性地作用于肝脏或结肠上，并可以克服其在非淋巴细胞白血病中存在的抗药性问题，寻找新的抗癌药物。

本发明通过在 N⁴位上取代不同的基团，以增加其溶解度和生物利用度以及器官的特异性； N⁴位的取代基团包括含有不同杂环的羧酸脂肪酯。同时本发明通过在 0⁵位上取代不同的基团，以增加其溶解度和生物利用度以及器官的特异性; 0⁵位的取代基团包括含不同链长的磷酸酯。

本发明的另一目的是提供基于阿糖胞苷结构的前药的制备方法，包括他们的合成制备方法和筛选方法，尤其是治疗各种癌症及相关疾病有关的成分和方法的研究。

本项研究涵盖直接作用于特异性器官，比如肺，肝脏或结肠等，即具有器官特异性及相关的核苷类前药的设计合成、药学成分及使用方法。

进而，将本方法延伸到其他核苷类抗癌药物。因而，本研究不仅适用于阿糖胞苷，同时包括并不限于其他核苷类抗癌药物，比如氮杂胞苷、吉西他滨、地西他滨、氮杂胞嘧啶、噻唑呋林、奈拉滨、 6-氮尿苷等，也适用于临床研究阶段的核苷类抗癌药物，比如 2 ' -deoxy-2 ' -fluoro -methylcytidin, 4 ' -tliio-aracitidine , 4' -thiofluoro-aracitidine , 3 ' -ethynylcytidine 等。通过合理的设计合成出具有专一功能的核苷类前药，来克服核苷类药物在肝中代谢过快而失去活性等问题，并能克服其口服吸收较少而不规则，只能静脉给药的限制，使之在临床上能用于口服，加强疗效和改进安全性，有可能开辟出治疗晚期肝癌和结肠癌的另一治疗方案。

术语说明

除非另有说明，本文所有的技术及科学术语，都与本研究所涉及领域所用术语意思相同。本文参考的所用专利、文献、出版物内容均来自原文。如果文中出现的定义与参考专利、文献、出版物中的定义相反或不符，本文的定义将服从于参考原文的定义。当以下术语用于本说明书时，它们按如下定义使用。

烷基：是指直链、支链或环状结构的饱和烃基。

烯烃：是指至少有一个碳-碳双键、有 2-26个碳原子的直链、支链或环状结构的烃基。炔基：是指至少有一个碳-碳三键、有 2-26个碳原子的直链、支链或环状结构的烃基。线状：是指没有分支的直链。

支链：是指直链上的分支。

芳基：是指芳环结构，具有一个单环（例如苯基）或两个稠环（例如萘基）的不饱和芳族碳环基团，它可以任选地被羟基、烃基、卤素、氰基、氨基、取代氨基、羰基、羧基和 /或羧酸酯基等取代。

杂环：是指多个原子以共价键形成环，环上至少有一个原子不是碳原子，如氮、氧、硫、磷等原子的饱和或不饱和的结构。如咪唑、吡咯、三唑、双氢奎尼丁、吲哚、吡啶、喹啉、噻唑、呋喃、四氢呋喃、二氧六环、哌啶等。杂环中的每个可以利用的位置，可以任选独立地被某些基团取代，如羟基、氧代基、氨基、亚氨基、烃基、氰基、卤素原子等。在该类取代基中包括嘌吟和嘧啶。

卤素：是指氟、氯、溴、碘。

a- ,m- ,ρ-·· 是指环上的邻、间、对位的相对位置。 2-， 3-或类似术语是指取代基的相对位置。 B或 Base: 是指核苷类衍生物上天然的或化学合成的、或经过修饰的杂环（碱基)。

"核苷 "和"核苷类似物化合物"：二者可互换使用，是指包含连接于杂环、芳族杂环的特定. 位置或者连接于嘌呤（9位）或嘧啶（1位）的天然位置或者连接于类似物的等同位置的任何戊糖或修饰戊糖部分的化合物。

"核苷酸"是指在核苷的 5，位上取代的磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯等。

"D -"、 "L-": 是指与碱基部分相连的戊糖基部分的化学构型。

α-， β-: 是指所示化学结构中不对称碳原子上取代基的特定立体化学构型。

异构体：是指具有相同分子式的不同化合物。立体异构体是仅在所述原子在空间排列的方式上不同的异构体。

对映体：是指相互之间为非重叠镜像的一对立体异构体，以 1 : 1 比例组成的一对对映体的混合物为外消混合物。

保护基：是指加入至氧原子或氮原子等，防止所述氧原子或氮原子在所述氧或氮所在的分子中的其它部分衍生化过程中进一步反应的化学基团。种类繁多的氧和氮的保护基是有机合成领域的技术人员已知的。

药学上可接受的盐：可以是无机和有机酸或碱衍生的任何盐。

发明详述：

本发一种基结构的前药，其结构通式如式（I)所示-

Α为杂环化合物基团或取代的杂环化合物基团。

所述的杂环化合物选自 1一 4个杂原子的 5— 6元环杂芳基；所述杂原子选自 0、 N或 S。优选的，所述的杂环化合物选自吡啶、吡嗪、哒嗪、嘧啶，噻吩或吡唑；环上可以没有取代基，也可以有一个或多个取代基，取代基可以在环上化学上允许的任何位置。

a: 为 0-6的整数；

b: 为 0-6的整数；

B: 为 C₆-C₁₈的烃氧基，

所述烃氧基选自： ΰ₁₀Η₂₁Ο， C₁₂H₂₅0， C₁₈H₃₇0或 C₂¾OC₁₂¾₅0 。 R²: 为 H或具有如下式（Π) 结构的基团：

Ο II

— P— ow ow² 式中： W¹ : 为 H或 C₃-C₁₈的烃基； W²: 为 H或 C₃-C₁₈的烃基。优选的， A选自下列结构中的一

更优选的， Α选自：

优选的， a=0、 1或 2， b=0或 1。

优选的， B选烃氧基、多元醇或多元醇酯。所述烃氧基选自： C₁₀H₂₁O, C₁₂H₂₅0, C₁₈H₃₇0, 或 C₂H₅OC₁₂H₂₅0。

具有代表性的阿糖胞苷前药衍生物的合成

上式中

， A、 B的定义同上 _:

R²为

O II

P— ow

ow 2

式中: W¹: 为 H或 ₁₈的烃基；

W²: 为 H或 ¾-。₁₈的烃基。

本发明还提供所述的基于阿糖胞苷结构的前药的合成方法，包括下列步骤-

1)将酸酐或酰氯与醇按照酸酐或酰氯：醇 =1: 1〜1： 1.5摩尔比的比例直接混合或溶于有机溶剂中，在室温至反应物熔融温度反应 2〜8小时，得到相应的取代的酸（即上式中的 R OOH);

2) 阿糖胞苷盐酸盐、步骤 1)得到的取代的酸、六氟磷酸苯并三唑 -1-氧基三吡咯烷基磷（PyBOP) 和 4-二甲氨基吡啶（DMAP) 按照 1: (1〜2)： (0.9〜1.5) ： (1〜3)摩尔比的比例溶于有机溶剂中，室温搅拌 12〜24小时；

3 )将步骤 2) 的反应液倒入水中，萃取，分离出的有机相干燥、纯化后得到目的产物。优选的，所述的基于阿糖胞苷结构的前药的合成方法，还包括下列步骤-

4)将三氯氧磷与二异丙基乙胺按照三氯氧磷：二异丙基乙胺 -1 : 1.1-1： 1.5摩尔比的比例溶于无水有机溶剂中，冰浴下加入 1摩尔比的步骤 3)所得到的目标化合物， 0Ό反应直至 TLC检测步骤 3)所得到的目标化合物消失，然后按照二异丙基乙胺：三氯氧磷 =8〜 15： 1摩尔比的比例加入二异丙基乙胺，按照醇：三氯氧磷 =8〜15： 1摩尔比的比例加入醇，室温搅拌 12〜24小时；

5 )将步骤 4) 的反应液倒入水中，调节 pH=7,萃取，分离出的有机相干燥、纯化后得到目的产物。

优选的，步骤 1 )所述的酸酐选自：高酞酸酐、吡嗪二酸酐、吡啶二酸酐、噻吩二酸酐、呋喃二酸酐、吡咯二酸酐。

优选的，步骤 1 )所述的醇选自：甲醇、正辛醇、正壬醇、正癸醇、正十一醇、月桂醇、正十四醇，正十六醇或正十八醇。

优选的，步骤 1 )、步骤 2)和步骤 4)所述的有机溶剂选自： Ν,Ν-二甲基甲酰胺（DMF)、 Ν,Ν-二甲基乙酰胺、四氢呋喃、二氧六环、二甲亚砜、环丁砜或吡啶。

优选的，步骤 1 )所述的酰氯是由二酸与 SOCl₂、 PC1₅、 PC1₃或 P0C1₃反应得到；所述的二酸选自：吡嗪 -2， 3-二羧酸、哒嗪 -3， 6-二羧酸、 4， 6-嘧啶二甲酸、 2,5-吡啶二甲酸、 2,3- 吡啶二甲酸、 2，2'-联苯二甲酸、 2,6-吡啶二甲酸、 2,5-噻吩二甲酸、 3,4-吡啶二甲酸、 3,5-吡啶二甲酸、 2,4-吡啶二甲酸、 3,5-吡唑二甲酸、 2,3-噻吩二甲酸、 3,4-噻吩二甲酸、 2,4-噻吩二甲酸、 3,4-吡唑二甲酸、 2,3-吡咯二甲酸、 2,4-吡咯二甲酸、 2,5-吡咯二甲酸、 2,3-呋喃二甲酸、 2,4-呋喃二甲酸或 2,5-呋喃二甲酸。

优选的，步骤 1 ) 的反应时间为 3〜4小时；

优选的，步骤中，阿糖胞苷盐酸盐、步骤 1 )得到的取代的酸、六氟磷酸苯并三唑 -1-氧基三吡咯焼基磷和 4-二甲氨基吡啶按照 1 : ( 1.1-1.3)： ( 1.1-1.3 ) ： ( 1.1-1.3 ) 的摩尔比反应。

本发明还提供所述的基于阿糖胞苷结构的前药的应用，其特征是用于制备治疗各种非淋巴细胞白血病，肺癌、胰腺癌、结肠癌及矸癌的药物。

本发明所述的基于阿糖胞苷结构的前药的应用，不仅适用于阿糖胞苷，同时包括并不限于其他核苷类抗癌药物，比如氮杂胞苷、吉西他滨、地西他滨、氮杂胞嘧啶、噻唑呋林、奈拉滨、 6-氮尿苷等，也适用于临床研究阶段的核苷类抗癌药物，比如 2'-deoxy-2'-fl_UOr0 -methylcytidine , 4 ' -thio-aracitidine , 4' -thiofluoro-aracitidine , 3，-ethynylcytidiiie等。

细胞分析方法：

前药化合物通过 MTT分析方法进行对不同肿瘤细胞的测试。

材料 1) 细胞株： HL-60， NCI-H460, A549, LOVO， HT-29, MDA-MB-231 , SGC7901 , HepG2或 BEL-7402细胞株，用 10%胎牛血清（Hyclone公司）的 D-MEM细胞培养基培养，常规培养初始细胞浓度在 3*10⁵/ml左右， 2~3天 1 : 3传代一次。实验前一天 1 : 2传代， ' 实验时细胞农度在 5~10*10⁵/ml之间。

2) 化合物的溶解与稀释：根据提供的药物重量和分子量，首先加入 DMSO100~200 μί，然后加入 NS，使稀释后药物浓度为 5 mM (注意 DMSO终浓度不超过 10%)。

3) D-MEM或 RPMI 1640细胞培养基， Gibco公司

4) 胎牛血清， Hyclone公司

5) 细胞消化液， 0.25 %Trypsin+ 0.02 %EDTA

6) MTT液， MTT干粉 (Sigma), 用 PBS充分溶解配成 5 mg/ml, 0.22 μπι微孔滤膜过滤后分装， -20Ό保存。

7) PBS缓冲液

8) 10%酸化 SDS， 0.01N HC1

9) 离心管、吸管等（BD公司）， 96孔板（Costar公司）

步骤：

1) 细胞接种：专代后 24小时的细胞，生长状态良好。常规收获细胞，用新鲜培养液调整细胞浓度为 2xl0⁵/ml (贴壁细胞） ~3xl0⁵/ml (悬浮细胞）。细胞接种 100 μΙ7孔， 37^QC、 5%C0₂孵箱中培养 24h后弃去旧培养液，加入新鲜培养液 95 μΙ7孔。悬浮细胞直接接种 95 μΙ7孔。

2) 药物处理：每一药物设 9个浓度梯度，每一浓度设 3个复孔，药物空白对照组设 5 个复孔。每次试验同时做对照。加入药物的终浓度依次为 0.25、 0.125、 0.0625、0.03125、 0.016、 0.008, 0.004, 0.002 mM, 对照组加入 5 生理盐水。

3) 细胞培养与检测：加入药物后， 37^QC、 5%C0₂孵箱中培养 72h，然后每孔加入 MTT 10 继续培养 4h，每孔加 100 10%SDS (含 0.0 IN HC1)溶解， 24h后用 Bio-rad 680型 ELISA读数仪测定各孔吸光度（A)，检测波长为 570 nm、参考波长为 630 nm。计算：首先平均各复孔的吸光度（去除过于悬殊的数据），计算每种细胞每个药物浓度下的抑制率 (IR), IR(%)=(1-A_n/Ao)xl00%, 八„为实验孔平均吸光度， AQ为药物空白对照孔平均吸光度。用 EXCEL软件，绘制药物浓度效应曲线，选择合理的计算方法计算 50%细胞存活的药物浓度（IC₅₀)。

本发明的有益效果是：

本项器官特异性前药研究在阿糖胞苷 0⁵位磷酸化前药研究基础上，一方面研发可以克服其在非淋巴细胞白血病中存在的抗药性问题，另一方面进一步通过 N4位修饰增加其溶解度，生物利用度以及器官特异性，所生成的前药化合物可以克服其代谢快的问题，并能克服其口服吸收较少而不规则，只能静脉给药的限制，使之在临床上能用于口服；更好地改善抗肿瘤、抗癌、抗感染和防扩散能力，加强疗效和改进安全性，并能够特异性地作用于肝脏或结肠。同时本发明通过在 05位上取代不同的基团，以增加其溶解度和生物利用度以及器官的特异性。 ·

本发明的基于阿糖胞苷结构的前药，通过 N4位修饰增加其溶解度。

本发明的合成方法，步骤简单、原料易得，产率高、成本低，适宜工业化生产。

本发明的基于阿糖胞苷结构的前药及其合成方法及应用，也可适用于及其它带有胞嘧啶或其替代物或 5-氮杂胞嘧啶等核苷类抗肿瘤药物的前药、合成方法及其应用。

具体实施方式

以下利用实施例更具体地说明本发明，但本发明并不仅限于以下实施例。

阿糖胞苷，购自苏州市苏瑞医药化工有限公司；

六氟磷酸苯并三唑 -1-氧基三吡咯垸基磷，购自吉尔生化（上海）有限公司；

4-二甲氨基吡啶，购自吉尔生化（上海）有限公司。

实施例 1 :

N⁴-(5-正十二垸氧基甲酰基噻吩 -2-甲酰基) -阿糖胞苷（化合物 N0.1 )

将 1.0 g 2,5-噻吩二甲酸（5.8 mmol)加入到 15 mL S0C1₂中，力 Π 2滴 DMF, 加热回流 4 小时。旋去 S0C1₂，几乎定量得到 1.21 g噻吩 -2,5-二酰氯。

将 1.21 g噻吩 -2,5-二酰氯（5.8 mmol)溶于 30 mL二氧六环中，冰浴下滴加 1.01 g月桂醇与 2 mL Et₃N的 5 mL二氧六环液，反应 4 h后，浓缩干固，剩余物溶于水中，调节 pH为 2-3 , 用乙酸乙酯萃取三次，分离出的有机相用无水硫酸钠干燥。在减压下蒸发除去溶剂后，几乎定量获得 5-正十二烷氧基甲酰基噻吩 -2-甲酸。

将 406 mg阿糖胞苷（1.67 mmol), 683 mg 5-正十二烷氧基甲酰基噻吩 -2-甲酸（2.01 mmol), 955 mg六氟磷酸苯并三唑 -1-氧基三吡咯烷基磷（1.84 mmol)和 244 mg 4-二甲氨基吡啶（2.0 mmol)溶于 Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10 mL) 中，室温下搅拌过夜。将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，分离出的有机相用无水硫酸钠干燥。在减压下蒸发除去溶剂后，其残余物在一个硅胶柱上纯化（展开剂：二氯甲浣 /甲醇 =10/1)，得到 150 mg N⁴-(5-正十二烷氧基甲酰基噻吩 -2-甲酰基) -阿糖胞苷（化合物 N0.1)。 LC (UV254 )纯度 97%。 LC-MS m/z 566 [M + H]⁺ (分子式 C₂₇H₃₉N₃0₈S，分子量 565)。化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 2:

N⁴-(5-正十二焼氧基甲酰基吡唑 -3-甲酰基) -阿糖胞苷 (化合物 N0.2 )

用 3,5-吡唑二甲酸代替实施例 1中 2,5-噻吩二甲酸，二甲亚砜代替实施例 1中的二氧六环，其它和实施例 1相同，得到标题化合物。 LC (UV254 )纯度 97%。 LC-MS m/z 550 [M + H]⁺ (分子式(¾₆¾₉>^0₈，分子量 549)。化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 3 :

N⁴-(6-正十二烷氧基甲酰基吡啶 -2-甲酰基) -阿糖胞苷 (化合物 N0.3 )

用 2,6-吡啶二甲酸代替实施例 1中 2,5-噻吩二甲酸，反应 3小时，其它和实施例 1相同，得到标题化合物。 L (UV254 )纯度 90%。 LC-MS m/z 561 [M + H]⁺ (分子式 C_2SH_4QN₄0₈, 分子量 560)。化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 4:

N⁴-(5-正十二烷氧基甲酰基吡啶 -3-甲酰基) -阿糖胞苷（化合物 N0.4)

用 3,5-吡啶二甲酸代替实施例 1中 2,5-噻吩二甲酸，吡啶代替二氧六环，其它和实施例 1相同，得到标题化合物。 LC (UV254)纯度 98%。 LC-MS m/z 561 [M + H]+ (分子式 C₂₈H₄。N₄0₈，分子量 560)。化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 5：

N⁴-(2-正十二烷氧基甲酰基吡啶 -5-甲酰基) -阿糖胞苷（化合物 N0.5 )

用 2,5-吡啶二甲酸代替实施例 1中 2,5-噻吩二甲酸，其它和实施例 1相同，得到标题化合物。 LC (UV254) 纯度 90%。 LC-MS 561 [Μ + Η]⁺ (分子式 C₂₈H₄。N₄0₈，分子量 560)。化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 6:

N⁴-(5-正十二烷氧基甲酰基吡啶 -2-甲酰基) -阿糖胞苷（化合物 N0.6)

用 2,5-吡啶二甲酸代替实施例 1中 2,5-噻吩二甲酸，其它和实施例 1相同，得到标题化合物。 LC (UV254) 纯度 97%。 LC-MS /z 561 [M + H]+ (分子式 C₂₈H₄。N₄0₈, 分子量 560)。化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 7:

N⁴-(2-正十二烷氧基甲酰基吡啶 -3-甲酰基) -阿糖胞苷（化合物 N0.7)

用 2,3-吡啶二甲酸代替实施例 1中 2,5-噻吩二甲酸，其它和实施例 1相同，得到标题化合物。 LC (UV254) 纯度 90%。 LC-MS /z 561 [M + H]+ (分子式 C₂₈H₄。N₄0₈，分子量 560)。化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 8:

N⁴-(3-正十二烷氧基甲酰基吡啶 -2-甲酰基) -阿糖胞苷（化合物 N0.8 )

用 2,3-吡啶二甲酸代替实施例 1中 2,5-噻吩二甲酸，其它和实施例 1相同，得到标题化合物。 LC (UV254) 纯度 91%。 LC-MS /z 561 [M + H]⁺ (分子式 C₂₈H_4QN₄0₈，分子量 560)。化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 9:

N⁴-(2-正十二烷氧基甲酰基吡啶 -4-甲酰基) -阿糖胞苷（化合物 N0.9)

用 2,4-吡啶二甲酸代替实施例 1中 2,5-噻吩二甲酸，其它和实施例 1相同，得到标题化合物。 LC (UV254) 纯度 97%。 LC-MS m/z 561 [M + H]⁺ (分子式 C₂₈H₄。N₄0₈, 分子量 560)。化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 10:

N⁴-(4-正十二烷氧基甲酰基吡啶 -2-甲酰基) -阿糖胞苷（化合物 NO.10)

用 2,4-吡啶二甲酸代替实施例 1中 2,5-噻吩二甲酸，其它和实施例 1相同，得到标题化合物。 LC (UV254) 纯度 92%。 LC-MS /z 561 [M + H]⁺ (分子式 C₂₈H₄。N₄0₈，分子量 560)。化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 11:

N⁴-(3-正十二烷氧基甲酰基吡啶 -4-甲酰基) -阿糖胞苷（化合物 NO.ll )

用 3,4-吡啶二甲酸代替实施例 1中 2,5-噻吩二甲酸，其它和实施例 1相同，得到标题化合物。 LC (UV254) 纯度 96%。 LC-MS /z 561 [M + H]⁺ (分子式 C₂₈H₄。N₄0₈, 分子量 560)。化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 12:

N⁴-(4-正十二烷氧基甲酰基吡啶 -3-甲酰基) -阿糖胞苷（化合物 N0.12)

用 3,4-吡啶二甲酸代替实施例 1中 2,5-噻吩二甲酸，其它和实施例 1相同，得到标题化合物。 LC (UV254) 纯度 95%。 LC-MS /z 561 [M + H]+ (分子式 C₂₈H₄。N₄0₈，分子量 560)。化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 13:

N⁴-(3-正十二烷氧基甲酰基吡嗪 -2-甲酰基) -阿糖胞苷（化合物 N0.13 )

用吡嗪 -2,3-二羧酸代替实施例 1中 2,5-噻吩二甲酸，其它和实施例 1相同，得到标题化合物。 LC (UV254)纯度 99%。 LC-MS /z 562 [M + H]⁺ (分子式 C₂₇H₃₉N₅0₈，分子量 561)。化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 14：

N⁴-(3-正癸垸氧基甲酰基吡嗪 -2-甲酰基) -阿糖胞苷（化合物 N0.14)

用吡嗪 -2,3-二羧酸代替实施例 1中 2,5-噻吩二甲酸，用正癸醇代替实施例 1中的月桂醇，四氢呋喃代替实施例 1 中的二氧六环，其它和实施例 1 相同，得到标题化合物。 LC (UV254)纯度 100%。 LC-MS "7 534 [M + H]⁺ (分子式 C₂₅H₃₅N₅0₈, 分子量 533)。化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 15:

Ν⁴-((2' -正十二烷氧基甲酰基)联苯 -2-甲酰基) -阿糖胞苷（化合物 N0.15 )

用 2,2'-联苯二甲酸代替实施例 1中 2,5-噻吩二甲酸，其它和实施例 1相同，得到标题化合物。 LC (UV254) 纯度 92%。 LC-MS [Μ + Η]⁺ (分子式 C_{35 5}N₃O_s，分子量 635)。实施例 16:

N⁴-(2-正十二烷氧基羰甲基苯甲酰基) -阿糖胞苷（化合物 N0.16)

将 1.0 g高酖酸酑 (6.2 mmol), 1.3 g月桂醇 (6.8 mmol)和 150 mg 4-二甲氨基吡啶 (0.2 mmol)溶于 THF (20 mL), 回流反应 6个小时，冷却到室温，得到 2-正十二烷氧基羰甲基苯甲酸和 2-正十二垸氧基甲酰基苯乙酸的混合物。在一个硅胶柱上纯化（展开剂：正己烷 / 乙酸乙酯 =10/1)，得到 600 mg 2-正十二烷氧基羰甲基苯甲酸和 400 mg 2-正十二烷氧基甲酰基苯乙酸。

将 419 mg阿糖胞苷（1.72 mmol), 600 mg 2-正十二烷氧基羰甲基苯甲酸（1.72 mmol), 1.07 g六氟磷酸苯并三唑 -1-氧基三吡咯烷基磷（2.06 mmol)和 42 mg 4-二甲氨基吡啶（0.34 mmol)溶于 Ν,Ν-二甲基甲酰胺 ( 10 mL) 中，室温下搅拌过夜。将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，分离出的有机相用无水硫酸钠干燥。在减压下蒸发除去溶剂后，其残余物在一个硅胶柱上纯化（展开剂：二氯甲烧 /甲醇 =10/1)，得到 120 mg N⁴-(2-正十二院氧基羰甲基苯甲酰基) -阿糖胞苷。 LC (UV254)纯度 93%。 LC-MS m/z 574 [M + H]⁺ (分子式 C₃。H₄₃N₃0₈, 分子量 573)。化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 17:

N⁴-(2-正十二烷氧基甲酰基苯乙酰基) -阿糖胞苷（化合物 N0.17)

将 279 mg阿糖胞苷（1.15 mmol)， 400 mg 2-正十二垸氧基羰甲基苯乙酸（1.15 mmol), 718 g六氟磷酸苯并三唑 -1-氧基三吡咯焼基磷（1.38 mmol)和 24.4 mg 4-二甲氨基吡啶（0.2 mmol) 溶于 Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10 mL) 中，室温下搅拌过夜。将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，分离出的有机相用无水硫酸钠干燥。在减压下蒸发除去溶剂后，其残余物在一个硅胶柱上纯化（展开剂：二氯甲烧 /甲醇 =10/1)，得到 60 mg N⁴-(2-正十二烷氧基羰甲基苯乙酰基) -阿糖胞苷。 LC (UV254)纯度 93%。 LC-MS m/z 574 [M + H]⁺ (分子式 C₃。H₄₃N₃O_s，分子量 573)。化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 18：

N⁴-(3-正十二烷氧基甲酰基吡嗪 -2-甲酰基) -0⁵'- (双十二烷氧基磷酸酯基) -阿糖胞苷（化合物 N0.18 )

将 0.72 g的 P0C1₃ (4.75 mmol), 0.84 g的二异丙基乙胺（6.48 mmol)溶于无水四氢呋喃（5 mL), 冰浴下滴加 1.21 g (4.75 mmol)化合物 13 (N⁴-(3-正十二烷氧基甲酰基吡嗪 -2- 甲酰基) -阿糖胞苷的无水四氢呋喃（5 mL)溶液，反应保持在 0°C直至 TLC检测原料化合物 13 消失，反应液加入二异丙基乙胺（lO mL), 10.0 g正十二醇（53.8 mmol)，室温反应过夜。在减压下蒸发除去溶剂后，其残余物溶于水，调节 pH=7，用乙酸乙酯萃取三次，分离出的有机相用无水硫酸干燥。在减压下蒸发除去溶剂后，其残余物在一个硅胶柱上纯化（展开剂：二氯甲垸 /甲醇 =20/1), 得到 51 mg N⁴-(3-正十二烷氧基甲酰基吡嗪 -2-甲酰基 )-0⁵'- (双十二烷氧基磷酸酯基) -阿糖胞苷。 LC (UV254)纯度 96%。 LC-MS m/z 1000.6 [M + Na]⁺ (分子式 C₅₁H₈₈N₅O_uP，分子量 978)。化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 19:

N⁴-(3-正十二烷氧基甲酰基吡嗪 -2-甲酰基) -0⁵'- (双十垸氧基磷酸酯基) -阿糖胞苷（化合物 N0.19 )

用正癸醇代替实施例 18 中正十二醇，其它和实施例 18 相同，得到标题化合物。 LC (UV254) 纯度 96%。 LC-MS m/z 922.6 [M + H]+ (分子式 CnHsoNsOnP, 分子量 922)。

实施例 20：

N⁴-(6-正十二烷氧基甲酰基吡啶 -2-甲酰基) - 0⁵'- (双十二垸氧基磷酸酯基) -阿糖胞苷（化合物 NO.20)

用化合物 3 (N⁴-(6-正十二垸氧基甲酰基吡啶 -2-甲酰基) -阿糖胞苷，代替实施例 18中的化合物 13，其它和实施例 18相同，得到标题化合物。 LC (UV254 )纯度 93%。LC-MS m/z 978[ M + H]⁺ (分子式 C₅₂H₈₉N₄0„P，分子量 977)。

实施例 21 :

Ν⁴-((2 ' -甲氧基甲酰基)联苯 -2-甲酰基） -0⁵'- (双正辛垸氧基磷酸酯基) -阿糠胞苷（化合物 N0.21 )

用 Ν⁴-((2' -甲氧基甲酰基)联苯 -2-甲酰基) -阿糖胞苷代替实施例 18中的化合物 13，用正辛醇代替实施例 18中的月桂醇，其它和实施例 18相同，得到标题化合物。 LC (UV254 ) 纯度 92%。 LC-MS m/z 787 [Μ + Η]+ (分子式 QH NSOHP, 分子量 786)。

实施例 22:

N⁴-(6-正癸烷氧基甲酰基哒嗪 -3-甲酰基) -阿糖胞苷（化合物 N0.22 )

用哒嗪 -3， 6-二羧酸代替实施例 1中 2,5-噻吩二甲酸，用正癸醇代替实施例 1中的月桂醇，四氢呋喃代替实施例 1 中的二氧六环，其它和实施例 1 相同，得到标题化合物。 LC

(UV254 ) 纯度 96%。 LC-MS /z 534 [M + H]⁺ (分子式 C₂₅H₃₅N₅0₈，分子量 533)。

实施例 23:

N⁴-(6-正癸烷氧基甲酰基嘧啶 -4-甲酰基) -阿糖胞苷（化合物 N0.23 )

用 4， 6-嘧啶二甲酸代替实施例 1中 2,5-噻吩二甲酸，用正癸醇代替实施例 1中的月桂醇，四氢呋喃代替实施例 1 中的二氧六环，其它和实施例 1 相同，得到标题化合物。 LC

(UV254 ) 纯度 95%。 LC-MS w/z 534 [M + H]+ (分子式 C₂₅H₃₅N₅0₈, 分子量 533)。

实施例 24:

24 化合物 24A的合成：

2,5-吡啶二甲酸 (20 g, 120腿 ol) ， DMF (lml)催化， S0C1₂做反应溶剂，回流五小时。将 S0C1₂减压蒸出得到浓稠油状物，溶于 1， 4-二氧六环，冰浴条件下将正癸醇（19.0g， 120 ' mmol) , NEt₃ (39.5 ml, 360 ramol)滴加到反应液中，常温反应过夜。反应液倒入水中，产物析出，抽滤，烘干得化合物 24A (24.0 g)，产量为： 65.2%。

化合物 24的合成：

将阿糖胞苷 (15 g, 62.0 mmol) , 化合物 24Α (21.0 g, 68.0 mmol) , PyBOP (35.4 g, 68.1 mmol), DMAP (1.5 g, 12.3 mmol) 溶于 DMF(50 mL)中，室温搅拌过夜。反应液倒入水中， EA萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化（硅胶，展开剂：二氯甲烷 /甲醇 =10/1) 得化合物 24，总共累计得到 1.45 g。

检测结果如下：

TLC检测：二氯甲垸 /甲醇 =10/1， Rf=0.43。

LC-MS检测： 6.48 min检出峰: [M+H]⁺=533.2, [M+Na]⁺=555.1, 纯度为: 99.6%。

化合物的结构式和表征数据见表 1。

实施例 25:

4-(5-正癸烷氧基甲酰基吡啶 -2-甲酰基) -阿糖胞苷 (化合物 N0.25)

NO.25

化合物 25A的合成：

吡啶- 2， 5-二羧酸 (20.0 g， 120 mmol), 正癸醇 (18.9 g, 120 mmol), DCC (29.6 g， 144 ramol), DMAP (2.9 g， 23.9 mmol)溶于 DMF (80 mL)中，室温搅拌过夜。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，有机相合并，干燥，过滤，减压浓缩的粗产物。粗产品用石油醚重结晶得化合物 25A (30.0 g)，产率为： 81.5%。

化合物 25的合成：

将阿糖胞苷 (15.0 g， 62.0 mmol), 化合物 25A (21.0 g， 68.0腿 ol)， PyBOP (35.4 g， 68.1 mmol), DMAP (1.5 g， 12.3 腿 ol)溶于 DMF (50 mL)中，室温搅拌过夜。反应液倒入水中， EA萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化（硅胶，展开剂：二氯甲垸 /甲醇 =10/1)得最终化合物 25 7.5 g，产率： 44.5%。

检测结果如下：

TLC检测：二氯甲垸 /甲醇 =10/1, Rf=0.36。

LC-MS检测： 6.23 min检出峰: [M+H] =533.2, [M+Na] =555.1, 纯度为： 92.4%.

化合物的结构式和表征数据见表 1。表 1 化合物的结构式和表征数据

15

替换页（细则第 26条)

16

替换页（细则第 26条)

17

替换页（细则第 26条)

18

替换页（细则第 26条)

LC (UV254 ).纯度 92%。 LC-MS m/z787 [Μ + Η]⁺

Ν⁴-((2' -甲氧基

甲酰基)联苯

-2-甲酰基）

O⁵'- (双正辛烷基) -阿糖胞苷

LC ( UV254 ) 纯度 95%。

Ν⁴-·(6-正癸垸 LC-MS m/z 534 [M + H]+ (分于式氧基甲酰基哒 C₂₅H₃₅N₅<¾，. .分子量 533)

嗪 -3-甲酰基) - 阿糖胞苷

LC ' ( UV254 ) 纯度 95%。：

Ν⁴-(6-正癸垸 LC-MS »?/2.534 [M + H]+ (分子式氧基甲酰基嘧 C₂₅H₃₅N₅G)₈， '分子； ¾ 533)

啶 -4-甲酰基) - 阿糖胞苷

TLC检测：二氯甲烷 /甲醇 =10/1， Rf ).43。: :

. LC-MS检测: 6.48min检出： [M+H]⁺=533.2, [M+Na]⁺=555.1 , 纯度为： 99.6%。

'HNMR (DMSO, 600 MHZ) δ-0.83 (t, 3H), 1.24-1.42 (m, 14H),

Ν⁴-(2-正癸烷 1:73 (m, 2H) 3 63 (m,2H), 3.86(m, ΝΟ.24 I氧基甲酰基吡 1 H), 3.95 (m， 1 H), 4.26 (m, 1 H), 啶 4.35 (t, 2H), 6.10 (s, 1 H), 7.39 (d, -5-甲酰基) - IH), 8.24 (d, lH), 8.32 (d， IH), 阿糖胞苷 8.58 (dd, I H), 9.21 (s, 1H)。其中，

5.08 (t, I H), 5.51 (d, IH), 5.56 (d, IH), 10,48 (s， 1H)，

¹³CN (DMSO,600MHz) δ=13.9, 22.Ό, 25.3, 27.9, 28.5, 28.6, 28.9, 31.2, 60.8, 65.6, 74.4, 75.9, 85.8, 87. 2, . 93. 9, 122. 7, 129. 0,

20

替换页（细则第 26条)

21

替换页（细则第 26条)

a: 未测

Cyt为阿糖胞苷，作为对照

HL-60为一种人体白血病细胞株

22

替换页（细则第 26条) NCI-H460为一种人体肺癌细胞株 A549为一种人体肺癌细胞株

HT29为一种人体结肠癌细胞株

L0V0为一种人体结肠癌细胞株

HepG2为一种人体肝癌细胞株

Bel7402为一种人体肝癌细胞株

SGC7901为一种人体胃癌细胞株

MDA-MB-231为一种人体乳腺癌细胞株。

Claims

权利要求

1. 一种基于阿糖胞苷结构的前药，其结构通式如式（I).所示:

式中

:

A为杂环化合物基团或取代的杂环化合物基团; 所述的杂环化合物选自 1一 4个杂原子的 5— 6元环杂芳基；所述杂原子选自 0、 N或 S;

a: 为 0-6的整数；

b: 为 0-6的整数；

B: 为 C₆-C₁₈的烃氧基，

R²: 为 H或具有如下式（II) 结构的基团：

0

II

P— OW

OW 2 (II)

式中： W¹ : 为 H或 C₃-C₁₈的烃基；

W²: 为 H或 C₃-C₁₈的烃基。

2. 如权利要求 1所述的基于阿糖胞苷结构的前药，其特征是：

所述的杂环化合物选自吡啶、吡嗪、哒嗪、嘧啶，噻吩或吡唑；所述烃氧基选自： C₁₍₎H₂₁0， C₁₂H₂₅0, C_1SH₃₇0或 C₂H₅OC₁₂H₂₅0。

3. 如权利要求 1所述的基于阿糖胞苷结构的前药，其特征是： A选自下列结构中的一种-

4. 如权利要求 1〜3任一项所述的基于阿糖胞苷结构的前药，其特征是

A选自：

a=0、 1或 2， b=0或 1 ;

B为烃氧基，所述烃氧基选自： C₁₍₎H₂₁0， C₁₂H₂₅0， C₁₈H₃₇0或 C₂H₅OC₁₂H₂₅0。

5. 如权利要求 1所述的基于阿糖胞苷结构的前药的合成方法，包括下列步骤：

1.)将酸酐或酰氯与醇按照酸酐或酰氯：醇 = 1 : 1〜1： 1.5摩尔比的比例直接混合或溶于有机溶剂中，在室温至反应物熔融温度反应 2〜8小时，得到相应的取代的酸（即式 I中的 COOH);

2)阿糖胞苷、步骤 1 )得到的取代的酸、六氟磷酸苯并三唑 -1-氧基三吡咯烷基磷 (PyBOP) 和 4- 二甲氨基吡啶 (DMAP) 按照 1： ( 1〜2)： (0.9-1.5)： ( 1〜3 )摩尔比的比例溶于有机溶剂中，室温搅拌 12〜24小时；

3)将步骤 2) 的反应液倒入水中，萃取，分离出的有机相干燥、纯化后得到目的产物。

6. 如权利要求 5所述的基于阿糖胞苷结构的前药的合成方法，其特征在于：还包括下列步骤：

4)将三氯氧磷与二异丙基乙胺按照三氯氧磷：二异丙基乙胺 =1: 1.1〜1： 1.5摩尔比的比例溶于无水有机溶剂中，冰浴下加入 1摩尔比的步骤 3 )所得到的目标化合物，（TC反应直至 TLC 检测步骤 3)所得到的目标化合物消失，然后按照二异丙基乙胺：三氯氧磷 =8〜15： 1摩尔比的比例加入二异丙基乙胺，按照醇：三氯氧磷 =8〜15： 1摩尔比的比例加入醇，室温搅拌 12〜24小时；

5)将步骤 4)的反应液倒入水中，调节 pH=7,萃取，分离出的有机相千燥、纯化后得到目的产物。

7. 如权利要求 5或 6所述的基于阿糖胞苷结构的前药的合成方法，其特征在于：步骤 1 ) 所述的酸酐选自：高酞酸酐、吡嗪二酸酐、吡啶二酸酐、噻吩二酸酐、呋喃二酸酐、吡咯二酸酐；

步骤 1 )所述的醇选自：甲醇、正辛醇、正壬醇、正癸醇、正十一醇、月桂醇、正十四醇，正十六醇或正十八醇；

' 步骤 1 )、步骤 2)和步骤 4)所述的有机溶剂选自： Ν,Ν-二甲基甲酰胺、 Ν,Ν-二甲基乙酰胺、四氢呋喃、二氧六环、二甲亚砜、环丁砜或吡啶。

8. 如权利要求 5或 6所述的基于阿糖胞苷结构的前药的合成方法，其特征在于：步骤 1 ) 所述的酰氯是由二酸与 SOCl₂、 PC1₅、 PC1₃或 POCl₃反应得到；所述的二酸选自：吡嗪 -2， 3-二羧酸、哒嗪 -3， 6-二羧酸、 4， 6-嘧啶二甲酸、 2,5-吡啶二甲酸、 2,3-吡啶二甲酸、 2，2'-联苯二甲酸、 2,6-吡啶二甲酸、 2,5-噻吩二甲酸、 3,4-吡啶二甲酸、 3,5-吡啶二甲酸、 2,4-吡啶二甲酸、 3,5-吡唑二甲酸、 2,3-噻吩二甲酸、 3,4-噻吩二甲酸、 2,4-噻吩二甲酸、 3,4-吡唑二甲酸、 2,3-吡咯二甲酸、 2,4-吡咯二甲酸、 2,5-吡咯二甲酸、 2,3-呋喃二甲酸、 2,4-呋喃二甲酸或 2,5- 呋喃二甲酸；

步骤 1 ) 的反应时间为 3〜4小时；

步骤 2) 中，阿糖胞苷盐酸盐、步骤 1 )得到的取代的酸、六氟磷酸苯并三唑 -1-氧基三吡咯垸基磷和 4-二甲氨基吡啶按照 1 : ( 1.1-1.3)： ( 1.1-1.3 )： ( 1.1-1.3 )的摩尔比反应。

9. 如权利要求 1所述的基于阿糖胞苷结构的前药的应用，其特征是：用于制备治疗各种非淋巴细胞白血病，肺癌、胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、胃癌及肝癌的药物，并能克服其静脉给药的限制，使之在临床上能用于口服。