WO2011126054A1 - 生理活性ペプチド - Google Patents

生理活性ペプチド Download PDF

Info

Publication number
WO2011126054A1
WO2011126054A1 PCT/JP2011/058728 JP2011058728W WO2011126054A1 WO 2011126054 A1 WO2011126054 A1 WO 2011126054A1 JP 2011058728 W JP2011058728 W JP 2011058728W WO 2011126054 A1 WO2011126054 A1 WO 2011126054A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
peptide
anxiety
group
present
acid
Prior art date
Application number
PCT/JP2011/058728
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
耕作 大日向
亜矢子 小田
Original Assignee
国立大学法人京都大学
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 国立大学法人京都大学 filed Critical 国立大学法人京都大学
Priority to JP2012509689A priority Critical patent/JPWO2011126054A1/ja
Priority to EP11765954.0A priority patent/EP2557088B1/en
Priority to US13/640,002 priority patent/US8946164B2/en
Priority to KR1020127027477A priority patent/KR20130059335A/ko
Publication of WO2011126054A1 publication Critical patent/WO2011126054A1/ja

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/06—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/20—Hypnotics; Sedatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/465—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from birds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76—Albumins
    • C07K14/77—Ovalbumin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/31—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on comfort perception and well-being
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00—Food ingredients
    • A23V2250/54—Proteins
    • A23V2250/55—Peptide, protein hydrolysate

Definitions

  • the present invention relates to a peptide having a neuromodulating action and a medicine or food containing the peptide.
  • anxiolytic compound can be produced inexpensively and is preferably effective by oral administration.
  • Ovalbumin is a major egg white protein and has a rich dietary experience.
  • Patent Document 1 discloses that soymorphin derived from ⁇ -conglycinin, which is a main protein of soybean, has an anxiolytic action.
  • the present invention provides the following peptide, pharmaceutical, anti-anxiety or sleep-improving food, anxiety-reducing or sleep-improving method.
  • Item 1. At least one peptide selected from the group consisting of Val-Tyr-Leu-Pro-Arg, Tyr-Leu-Pro-Arg, and Leu-Pro-Arg, or an analog thereof.
  • Item 2 A pharmaceutical or pharmaceutical composition comprising the peptide of Item 1 or an analog thereof.
  • Item 3 The pharmaceutical or pharmaceutical composition according to Item 1 or 2, which is an anxiolytic agent, sleep-inducing agent, sleep-improving agent, schizophrenia therapeutic agent or antidepressant.
  • Item 4 A food for improving anxiety or sleep, comprising adding the peptide of Item 1 or an analog thereof.
  • Item 5 A method for reducing anxiety or improving sleep, comprising administering an effective amount of the peptide of Item 1 to a subject in need thereof.
  • Anti-anxiety drugs therapeutic drugs for sleep disorders, therapeutic drugs for schizophrenia, antidepressant drugs, or preventive drugs for these diseases, which have the peptide of the present invention or its analog as an active ingredient, are suitable for long-term use with low side effects. It is.
  • natural short-chain peptides can be taken as food and do not lead to diseases, but individuals who have anxiety or sleep problems can expect to prevent disease by taking them as food. .
  • the anti-anxiety action can be evaluated by an elevated plus maze test developed and widely used as an anxiety-related behavior evaluation method for screening an anxiolytic drug (FIG. 1). Specifically, an anxiolytic candidate substance is administered orally or intraperitoneally, and after 30 minutes, the mouse is placed in the elevated plus maze, and the change in the number of intrusions into the open arm and the staying time on the open arm is indicated. As described above, the strength of the anti-anxiety action can be evaluated.
  • soymorphin a ⁇ opioid peptide derived from ⁇ -conglycinin, which is a major protein of soybean, exhibits an anxiolytic action via a ⁇ opioid receptor (Patent Document 1). Since the anxiolytic action of the peptide of the present invention was not inhibited by naloxone which is a ⁇ opioid receptor antagonist, the anxiolytic action of the peptide of the present invention is not via the ⁇ opioid receptor unlike the peptide of Patent Document 1. Became clear.
  • ⁇ opioid rubiscolin derived from the main protein Rubisco of green leaves acts directly on the ⁇ opioid receptor and then activates the ⁇ 1 receptor to show an anxiolytic action.
  • the anxiolytic action of the peptide of the present invention was not inhibited by naltrindole, which is a ⁇ opioid receptor antagonist. Therefore, it was revealed that the anxiolytic action of the peptide of the present invention was not mediated by the ⁇ opioid receptor. .
  • the amino acids constituting the peptide are L-form amino acids, D-form amino acids, or DL-form amino acids (the racemate and any amino acid in which either enantiomer is excessive if the D-form and L-form amino acids are mixed). Included).
  • Preferable is a peptide consisting only of L-form amino acids or only D-form amino acids, particularly a peptide consisting only of L-form amino acids.
  • Peptide salts include acid addition salts and base salts.
  • Acid addition salts include inorganic salts such as hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, perchloric acid, citric acid, succinic acid, maleic acid, fumaric acid, malic acid, tartaric acid, p-toluenesulfonic acid And salts of organic acids such as benzenesulfonic acid, methanesulfonic acid and trifluoroacetic acid.
  • the base salt include alkali metal salts such as sodium, potassium and lithium, and alkaline earth metal salts such as calcium and magnesium.
  • the N-terminal amino group or the side chain amino group may be mono- or di-substituted with an aralkyl group such as benzyl group or phenethyl group, formyl group, acetyl group, propionyl group And may be modified with a linear or branched alkanoyl group having 1 to 6 carbon atoms, such as a butyryl group or an isobutyryl group, or an acyl group such as a benzoyl group.
  • an aralkyl group such as benzyl group or phenethyl group, formyl group, acetyl group, propionyl group
  • a linear or branched alkanoyl group having 1 to 6 carbon atoms such as a butyryl group or an isobutyryl group
  • an acyl group such as a benzoyl group.
  • the carboxyl group at the C-terminal of the peptide is an ester with a C 1-6 alkyl group such as methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, t-butyl, pentyl, hexyl, benzyl , Esters with aralkyl groups such as phenethyl, amino groups, methylamine, dimethylamine, ethylamine, diethylamine, propylamine, dipropylamine, n-butylamine, di-n-butylamine, etc.
  • a mono- or di-substituted amine with 4 alkyl groups or an amide with ammonia may be formed.
  • R 1 represents a linear or branched alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, an aralkyl group or a hydrogen atom.
  • R a represents a hydrogen atom, an alkali metal, an alkaline earth metal, methoxymethyl, 2- It is an acidic cleavable protecting group such as tetrahydrofuranyl, 2-tetrahydropyranyl, methyl, trifluoromethyl, etc.
  • the peptide of the present invention can be obtained by hydrolysis of a natural protein or polypeptide, or can be obtained by chemical synthesis.
  • Examples of the protein or polypeptide to be hydrolyzed include ovalbumin. It was confirmed in the Examples that tryptic digests of ovalbumin showed anti-anxiety effects both intraperitoneally and orally (FIG. 11).
  • protein hydrolysis examples include the use of hydrolytic enzymes derived from animals, plants or microorganisms such as trypsin, chymotrypsin, papain, pepsin, carboxypeptidase, thermolysin, and subtilisin.
  • hydrolytic enzymes derived from animals, plants or microorganisms such as trypsin, chymotrypsin, papain, pepsin, carboxypeptidase, thermolysin, and subtilisin.
  • the peptide of the active ingredient of the present invention can be obtained by adjusting to an appropriate value and reacting at a temperature of about 30 to 40 ° C. for about 30 minutes to 48 hours.
  • the peptide of the present invention may be purified from the obtained reaction solution, and when the food material is enzymatically decomposed, it can be used as it is or added to another food material to form a food or a food composition.
  • Hydrolysis can be performed using strong acids (for example, hydrochloric acid, nitric acid, sulfuric acid, etc.) or strong bases (alkali metal hydroxides such as sodium hydroxide, potassium hydroxide, lithium hydroxide, alkali metal carbonates such as sodium carbonate, potassium carbonate, carbonates).
  • strong acids for example, hydrochloric acid, nitric acid, sulfuric acid, etc.
  • strong bases alkali metal hydroxides such as sodium hydroxide, potassium hydroxide, lithium hydroxide, alkali metal carbonates such as sodium carbonate, potassium carbonate, carbonates.
  • the peptide of the active ingredient of the present invention can be obtained by reacting in water at a temperature of 1 to 100 ° C. for 30 minutes to 48 hours in the presence of an alkali metal hydrogen carbonate such as sodium hydrogen or potassium hydrogen carbonate). It can.
  • the reaction product of the hydrolysis may be used as it is after the pH is adjusted, or the peptide of the active ingredient may be separated and used by purification.
  • the peptide of the present invention can also be obtained by peptide synthesis. That is, in a liquid phase method or a solid phase method, which is a commonly used method for peptide synthesis, a method using an active ester such as HBTU, a raw material having a reactive carboxyl group and a raw material having a reactive amino group, or carbodiimide In a peptide synthesis such as a method using a coupling agent such as When the resulting condensate has a protecting group, it can also be produced by removing the protecting group.
  • ⁇ Functional groups that should not participate in the reaction in this reaction step are protected by protecting groups.
  • amino-protecting groups include benzyloxycarbonyl (CBZ), t-butyloxycarbonyl (Boc), 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc) and the like.
  • carboxyl group-protecting agent include groups capable of forming alkyl esters, benzyl esters, and the like.
  • the C-terminal carboxyl group is a chlorotrityl resin, chloromethyl resin, oxymethyl resin, p- It is bound to a carrier such as an alkoxybenzyl alcohol resin.
  • the condensation reaction is carried out in the presence of a condensing agent such as carbodiimide or using an N-protected amino acid active ester or peptide active ester.
  • the protecting group is removed, but in the case of the solid phase method, the bond between the C-terminus of the peptide and the resin is further cleaved.
  • the peptides of the present invention are purified according to conventional methods. Examples thereof include ion exchange chromatography, reverse phase liquid chromatography, affinity chromatography and the like. Synthesis of the synthesized peptide is analyzed by a protein sequencer that reads the amino acid sequence from the C-terminal by the Edman degradation method, GC-MS, or the like.
  • the peptide of the present invention can also be synthesized by an enzymatic method (see WO2003 / 010307, which is incorporated herein by reference).
  • the administration route of the peptide of the present invention is not particularly limited, and any of oral administration, parenteral administration, and rectal administration can be adopted, and it can be administered orally or parenterally.
  • the dosage of this peptide varies depending on the type of compound, the administration method, the condition and age of the administered person, etc., but is usually 0.01 to 500 mg / kg, preferably 0.05 to 100 mg / kg per day for an adult. More preferably, it is 0.1 to 30 mg / kg.
  • the peptide (active ingredient) of the present invention is usually administered in the form of a pharmaceutical composition prepared by mixing with a pharmaceutical carrier.
  • a pharmaceutical carrier a substance that is commonly used in the pharmaceutical field and does not react with the peptide of the present invention is used.
  • the peptide of the present invention can be used as a food or a medicine per se, or alone or together with a suitable non-toxic carrier for ingestion, diluent or excipient (tablet, uncoated tablet, dragee, effervescent tablet, Film-coated tablets, chewable tablets, etc.), capsules, troches, powders, fine granules, granules, solutions, suspensions, emulsions, pastes, creams, injections (amino acid infusions, electrolyte infusions, etc.) Or a preparation for food or medicine such as sustained release preparations such as enteric tablets, capsules and granules.
  • the content of the peptide in the food can be appropriately selected, but is generally in the range of 0.01 to 100% by weight.
  • These preparations may contain the peptide of the present invention in a proportion of 0.01% to 100% by weight, preferably 1 to 90% by weight. These formulations may also contain other therapeutically valuable ingredients.
  • granules or tablets should be coated with an enteric solvent base such as hydroxypropylmethylcellulose phthalate, methacrylic acid-methyl methacrylate polymer, etc., and coated with an enteric solvent preparation, or with ethylcellulose, carnauba wax, hardened oil, etc. You can also.
  • an enteric solvent base such as hydroxypropylmethylcellulose phthalate, methacrylic acid-methyl methacrylate polymer, etc.
  • enteric solvent preparation or with ethylcellulose, carnauba wax, hardened oil, etc.
  • an active ingredient and a sweetener such as sucrose, sorbitol, and glycerin are dissolved in water to add a transparent syrup, further essential oil, ethanol, etc. to make an elixir, Gum arabic, tragacanth, polysorbate 80, sodium carboxymethyl cellulose and the like may be added to form an emulsion or suspension.
  • a transparent syrup such as sucrose, sorbitol, and glycerin
  • the active ingredient is moistened with a suppository base such as cacao butter, fatty acid tri, di and monoglycerides, polyethylene glycol, etc., poured into a mold and cooled,
  • a suppository base such as cacao butter, fatty acid tri, di and monoglycerides, polyethylene glycol, etc.
  • the active ingredient may be dissolved in polyethylene glycol, soybean oil, etc. and then covered with a gelatin film.
  • the active ingredient is added to white petrolatum, beeswax, liquid paraffin, polyethylene glycol, etc., and if necessary, moistened and kneaded to make an ointment, or rosin, alkyl acrylate polymer After being kneaded with an adhesive such as polyalkyl, it is spread on a non-woven fabric such as polyalkyl to obtain a tape.
  • beverages coffee, cocoa, juice, soft drinks, mineral drinks, tea drinks, green tea, tea, oolong tea, and milk drinks.
  • Lactic acid bacteria beverage yogurt beverage, carbonated beverage
  • gum gummi
  • jelly candy
  • cookies crackers
  • biscuits ice confectionery (ice cream, ice candy, sorbet, shaved ice, etc.)
  • retort food jelly-like food (je
  • Foods that can be prepared by adding and blending the peptides of the present invention include so-called health foods, functional foods, dietary supplements, supplements, foods for specified health use, combined foods for the sick and the sick (Ministry of Health, Labor and Welfare) , Special-purpose foods) or elderly foods (Ministry of Health, Labor and Welfare, special-purpose foods), uncoated tablets, film-coated tablets, dragees, granules, powders, tablets, capsules (both hard capsules and soft capsules) Including chewable type, syrup type, and drink type.
  • the preparation of food containing the peptide according to the present invention can be carried out by a method known per se.
  • the elevated plus-maze consists of two open arms (25cm x 5cm) and two closed arms (25cm x 5cm x 15cm), which are 50cm from the floor. Combined with the raised central platform (see FIG. 1). Despite being in a high position, the mouse can safely walk because of the enclosure around the closed arm. On the other hand, since the periphery of the open arm is open and there is no enclosure, the mouse walking on the open arm feels uneasy that the mouse falls from a high position. Therefore, the longer the mouse stays in the open arm, or the greater the number of times of entry, the less anxiety the mouse is, which is an index of anti-anxiety activity.
  • the test was started by placing the mouse on the central platform facing one of the open arms. Cumulative time spent in open arms (time in open arms), number of visits to open arms (visit to open arms), total number of visits to any arm (total visits) was recorded. The percentage of time spent in the open arm and the percentage of visits to the open arm were calculated as an indicator of anxiety.
  • Example 4 A trypsin digest of ovalbumin was used as an active ingredient, and intraperitoneal administration and oral administration were conducted, and an anxiolytic action test using an open arm was conducted in the same manner as in Examples 1 to 3. The results are shown in FIG.
  • the anti-anxiety peptide of the present invention may have a different mechanism of action from conventional anxiolytic drugs, and can provide new types of drugs and foods.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Anesthesiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本発明は、Val-Tyr-Leu-Pro-Arg、Tyr-Leu-Pro-ArgおよびLeu-Pro-Argからなる群から選ばれる少なくとも1種のペプチド又はその類縁体を有効成分とする医薬または食品を提供するものである。

Description

生理活性ペプチド
　本発明は、神経調節作用を有するペプチド、当該ペプチドを含む医薬ないし食品に関する。
　現代のストレス社会を反映し、不安障害、統合失調症、うつ病などの精神疾患の増加が問題となっている。不安感は、生体において危険を回避するための警告として本来必要なものであるが、過剰な不安感は上記精神疾患の発症や症状の進行に関与するとともに、生活習慣病の発症リスクを上昇させることが知られており、精神的ストレスを緩和する食品や医薬品の開発が期待されている。このような抗不安作用を有する化合物は、安価に製造が可能で、経口投与で有効なものが望ましい。
　オボアルブミンは、主要な卵白タンパク質であり、食経験が豊富である。
　特許文献１は、ダイズの主要タンパク質であるβ-コングリシニンに由来するsoymorphinが抗不安作用を有することを明らかにしている。
特開平１１－２８５３６２号公報
　本発明者は、副作用がほとんど或いは全くない抗不安、鎮静、睡眠改善などの作用を有する薬剤及び食品を提供することを目的とする。
　そこで上記課題を解決するべく、各種のペプチドの抗不安作用を調べていたところ、Val-Tyr-Leu-Pro-Arg、Tyr-Leu-Pro-ArgおよびLeu-Pro-Argなどの「Leu-Pro-Arg」を共通の配列として含む短鎖ペプチドが強力な抗不安、鎮静などの作用、プロスタグランジン類の活性化およびＧＡＢＡＡ受容体を活性化する作用を有することを見出し、本発明を完成した。
　本発明は、以下のペプチド、医薬、抗不安または睡眠改善用食品、不安軽減または睡眠改善方法を提供するものである。
項１．　Val-Tyr-Leu-Pro-Arg、Tyr-Leu-Pro-ArgおよびLeu-Pro-Argからなる群から選ばれる少なくとも1種のペプチド又はその類縁体。
項２：　項1のペプチド又はその類縁体を含む医薬ないし医薬組成物。
項３：　抗不安剤、睡眠導入剤、睡眠改善剤、統合失調症治療薬または抗うつ薬である、項１または２に記載の医薬ないし医薬組成物。
項４：　項１のペプチド又はその類縁体を添加することを特徴とする、抗不安または睡眠改善用食品。
項５：　項１のペプチドの有効量を、それを必要とする対象に投与することを特徴とする、不安軽減または睡眠改善方法。
　本発明のペプチドまたはその類縁体を有効成分とする抗不安薬、睡眠障害治療薬、統合失調症治療薬、抗うつ薬、或いはこれら疾患の予防薬は、副作用が低く長期の服用に適したものである。
　また、本発明の薬剤は経口投与で有効である。
　さらに、天然の短鎖ペプチドは食品として摂取することも可能であり、疾患には至らないが、不安傾向や睡眠に問題を有する個体が食品として摂取することで、疾患を予防することが期待できる。
　本発明のペプチドまたはその類縁体はプロスタグランジン類およびＧＡＢＡＡ受容体を活性化する作用を有し、これらの活性化作用に基づく各種疾患の予防ないし治療作用を有することが期待される。
　さらに、オピオイド受容体作動薬の活性化に基づく副作用は問題にならない。
高架式十字迷路 ＶＹＬＰＲの腹腔内投与による抗不安作用（実施例１）。mean±SEM (n=5-10), ***p<0.001 vs control。 ＶＹＬＰＲの経口投与による抗不安作用（実施例１）。mean±SEM(n=11-20), *p<0.05, **p<0.01 vs control。 ＹＬＰＲの腹腔内投与による抗不安作用（実施例２）。mean±SEM (n=5-11), *p<0.05, **p<0.01 vs control。 ＬＰＲの腹腔内投与による抗不安作用（実施例３）。mean±SEM (n=4-13), *p<0.05, **p<0.01 vs control。 VYLPRの抗不安作用の構造-活性相関。mean±SEM (n=4-13), *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 ＶＹＬＰＲの抗不安作用に及ぼすＣＯＸ阻害剤の影響。mean±SEM(n=12-15), **p<0.01, ***p<0.001 ＶＹＬＰＲの抗不安作用に及ぼすＧＡＢＡＡ受容体アンタゴニストの影響。mean±SEM (n=9-12), *p<0.05, **p<0.01。 想定されるＶＹＬＰＲの抗不安機構。 VYLPRの抗不安作用に及ぼすプロスタグランジンDP1受容体アンタゴニスト（A）とアデノシンA2A受容体アンタゴニスト（B）の影響(A, n = 7-9; B, n = 9-23）。VYLPRの抗不安作用はDP1受容体とA2A受容体に対するアンタゴニストで阻害されたことからPGD2とアデノシン遊離を促進し抗不安作用を示すことが明らかとなった。 オボアルブミン（OVA）のトリプシン消化物による抗不安作用。（A）トリプシン消化物の腹腔内投与により抗不安作用を示した。（B）経口投与でも抗不安作用を示した。なお、オボアルブミンの未消化物は抗不安作用を示さなかった(A, n = 8-10; B, n = 6-7)。
薬理作用
　本発明において、抗不安作用は、抗不安薬をスクリーニングするための不安関連行動評価法として開発され，広く用いられている高架式十字迷路試験により評価することができる（図１）。具体的には抗不安薬の候補物質を経口投与または腹腔内投与し、３０分後に高架式十字迷路にマウスを置いて、オープンアームに侵入した回数とオープンアーム上での滞在時間の変化を指標として、抗不安作用の強さを評価することができる。
　本発明ペプチドの抗不安作用は、シクロオキシゲナーゼの阻害剤indomethacinで阻害されたことから、プロスタグランジン類の放出を介しているものと考えられる(図7)。
　本発明ペプチドの抗不安作用は、DP1受容体（DP1-R）アンタゴニストであるBWA868CとアデノシンA2A受容体アンタゴニストであるSCH58261により阻害されたことからPGD2とアデノシン遊離を促進し抗不安作用を示すものと考えられる(図10)。
　本発明ペプチドの抗不安作用は、ＧＡＢＡＡ受容体アンタゴニストbicucullineで阻害されたことから、ＧＡＢＡＡ受容体を介する作用（ＧＡＢＡＡ受容体のアゴニストまたは部分アゴニストと同様の作用を有する）であることが明らかになった(図8)。おそらく内因性ＧＡＢＡの遊離が促進されているものと考えられる。ＧＡＢＡＡ受容体は、睡眠誘発作用を有することが知られているので、本発明のペプチドまたはその類縁体は、抗不安作用だけでなく睡眠誘発作用を有すると考えられ、睡眠導入剤としても有用である。
　これまでダイズの主要タンパク質であるβ-コングリシニン由来のμオピオイドペプチドのsoymorphinがμオピオイド受容体を介して抗不安作用を示すことを本発明者らは見出しているが（特許文献１）、本発明のペプチドの抗不安作用は、μオピオイド受容体アンタゴニストであるnaloxoneによって阻害されなかったことから、本発明のペプチドの抗不安作用は、特許文献１のペプチドと異なりμオピオイド受容体を介していないことが明らかになった。
　緑葉の主要タンパク質Rubisco由来のδオピオイドrubiscolinは、δオピオイド受容体に直接作用した後、σ１受容体を活性化して抗不安作用を示すことが公知である。本発明のペプチドの抗不安作用は、δオピオイド受容体アンタゴニストであるnaltrindoleによって阻害されなかったことから、本発明のペプチドの抗不安作用は、δオピオイド受容体を介していないことが明らかになった。
　本発明の好ましい有効成分は経口投与で有効であるのが確認されている。
有効成分
　本発明の抗不安剤の有効成分は、Val-Tyr-Leu-Pro-Arg、Tyr-Leu-Pro-ArgおよびLeu-Pro-Argからなる群から選ばれる少なくとも１種のペプチドである。加熱処理したオボアルブミン溶液にトリプシンを添加し、37℃で５時間インキュベートしたところ、Val-Tyr-Leu-Pro-Argがモル換算で約44%生成することを見出している。本発明の抗不安剤の有効成分は、オボアルブミンなどのVal-Tyr-Leu-Pro-Argを含むタンパク質をトリプシンなどの蛋白分解酵素で加水分解した加水分解物を包含する。
　ペプチドを構成するアミノ酸は、Ｌ体のアミノ酸、Ｄ体のアミノ酸或いはＤＬ体のアミノ酸（Ｄ体とＬ体が混合されたアミノ酸であればラセミ体といずれか一方のエナンチオマーが過剰なアミノ酸のいずれも含まれる）のいずれであってもよい。好ましくはＬ体のアミノ酸のみ、或いはＤ体のアミノ酸のみからなるペプチド、特にＬ体のアミノ酸のみからなるペプチドがよい。
　ペプチドの塩としては、酸付加塩と塩基塩が挙げられる。酸付加塩としては、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、臭化水素酸、過塩素酸などの無機塩、クエン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、メタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸などの有機酸の塩が挙げられる。塩基塩としては、ナトリウム、カリウム、リチウムなどのアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属塩などが挙げられる。
　溶媒和物としては、水(水和物の場合)、メタノール、エタノール、イソプロパノール、酢酸、テトラヒドロフラン、アセトン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド、アセトアミド、エチレングリコール、プロピレングリコール、ジメトキシエタンなどの溶媒和物が挙げられる。
有効成分がペプチド類縁体の場合
　ペプチド類縁体には、有効成分の上記ペプチドの(1)Ｎ末端の修飾、(2)Ｃ末端の修飾、(3)チロシン残基の類縁体が含まれる。
　(1)ペプチドのＮ末端のアミノ基は、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ、プロピルアミノ、ジプロピルアミノ、ｎ－ブチルアミノ、ジｎ－ブチルアミノ、などの直鎖または分岐を有する炭素数１～４のアルキル基でモノ置換またはジ置換されたアミノ基でもよい。或いは、Ｎ末端のアミノ基または側鎖のアミノ基（Ｌｙｓを含む場合）は、ベンジル基、フェネチル基などのアラルキル基でモノ置換またはジ置換されていてもよく、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基などの炭素数１～６の直鎖または分岐を有するアルカノイル基、ベンゾイル基などのアシル基で修飾されていてもよい。
　(2)ペプチドのＣ末端のカルボキシル基は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシルなどの炭素数１～６のアルキル基とのエステル、ベンジル、フェネチルなどのアラルキル基とのエステル、アミノ基、メチルアミン、ジメチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、プロピルアミン、ジプロピルアミン、ｎ－ブチルアミン、ジｎ－ブチルアミンなどの直鎖または分岐を有する炭素数１～４のアルキル基でモノ置換またはジ置換されたアミン、またはアンモニアとのアミドを形成してもよい。
 (3)チロシン残基の類縁体（I）としては、以下の式で示される残基が挙げられる：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
(式中、Ｒ１は炭素数１～６の直鎖または分岐を有するアルキル基、アラルキル基または水素原子を示す。Ｒａは、水素原子、アルカリ金属、アルカリ土類金属、メトキシメチル、２－テトラヒドロフラニル、２－テトラヒドロピラニルなどの酸性で切断可能な保護基、メチル、トリフルオロメチルのいずれかである。Ｒは同一または異なって、炭素数１～６の直鎖または分岐を有するアルキル基（例えばメチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシル）、アラルキル基（例えばベンジル又はヘキシル）、炭素数１～６の直鎖または分岐を有するアルコキシ基（例えばメトキシ、エトキシ、ｎ－プロピルオキシ、イソプロピルオキシ、ｎ－ブトキシ、イソブトキシ、ｔ－ブトキシ、ペントキシ、ヘキシルオキシ）、ＳＨ，炭素数１～６の直鎖または分岐を有するアルキルチオ基（例えばメチルチオ、エチルチオ、ｎ－プロピルチオ、イソプロピルチオ、ｎ－ブチルチオ、イソブチルチオ、ｔ－ブチルチオ、ペンチルチオ、ヘキシルチオ）、ＣＮ，ＮＯ２，ハロゲン原子（Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ）、アミノ（ＮＨ２）、モノまたはジ（Ｃ１～Ｃ６低級アルキル）アミノ（例えばメチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、ブチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、ジブチルアミノ）、アセトアミド、アセチル、トリフルオロメチル、水酸基、或いは、隣接する２つのＲもしくは隣接するＲとＯＲａが一緒になって、メチレンジオキシまたはエチレンジオキシを示す。
　本発明のペプチドは、天然のタンパク質ないしポリペプチドの加水分解により得ることもでき、化学合成により得ることもできる。加水分解されるタンパク質ないしポリペプチドとしては、オボアルブミンが挙げられる。オボアルブミンのトリプシン消化物が腹腔内投与、経口投与でいずれも抗不安作用を示すことを実施例で確認した(図11)
　タンパク質の加水分解には、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、ぺプシン、カルボキシペプチダーゼ、サーモリシン、サチライシンなどの動物、植物ないし微生物由来の加水分解酵素の使用が例示され、これらの酵素を用い、ｐＨを酵素に応じて適切な値に調整し、３０～４０℃程度の温度下に３０分から４８時間程度反応させることにより、本発明の有効成分のペプチドを得ることができる。得られた反応液から本発明のペプチドを精製して用いてもよく、食品素材を酵素分解した場合には、そのまま或いは他の食品素材に添加して食品ないし食品組成物とすることもできる。加水分解は、強酸(例えば塩酸、硝酸、硫酸など)または強塩基(水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムなどのアルカリ金属水酸化物、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどのアルカリ金属炭酸塩、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムなどのアルカリ金属炭酸水素塩)などの存在下に水中で、１～１００℃の温度で、３０分から４８時間反応させることにより、本発明の有効成分のペプチドを得ることができる。加水分解の反応生成物は、ｐＨを調製した後、そのまま使用してもよく、精製により有効成分のペプチドを分離して使用してもよい。
　また本発明のペプチドは、ペプチド合成法で取得することもできる。即ち、ペプチド合成に通常用いられる方法である液相法または固相法で、反応性カルボキシル基を有する原料と、反応性アミノ基を有する原料とをＨＢＴＵ等の活性エステルを用いた方法や、カルボジイミドなどのカップリング剤を用いた方法等のペプチド合成において通常の方法により縮合させることができる。生成する縮合物が保護基を有する場合、その保護基を除去することによっても製造し得る。
  この反応工程において反応に関与すべきでない官能基は、保護基により保護される。アミノ基の保護基としては、例えばベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、ｔ－ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ），９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）等が挙げられる。カルボキシル基の保護剤としては例えばアルキルエステル、ベンジルエステル等を形成し得る基が挙げられるが、固相法の場合は、Ｃ末端のカルボキシル基はクロロトリチル樹脂、クロルメチル樹脂、オキシメチル樹脂、ｐ－アルコキシベンジルアルコール樹脂等の担体に結合している。縮合反応は、カルボジイミド等の縮合剤の存在下にあるいはＮ－保護アミノ酸活性エステルまたはペプチド活性エステルを用いて実施する。
　縮合反応終了後、保護基は除去されるが、固相法の場合はさらにペプチドのＣ末端と樹脂との結合を切断する。更に、本発明のペプチドは通常の方法に従い精製される。例えばイオン交換クロマトグラフィー、逆相液体クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等が挙げられる。合成したペプチドの合成はエドマン分解法でＣ－末端からアミノ酸配列を読み取るプロテインシークエンサー、ＧＣ－ＭＳ等で分析される。
　本発明のペプチドは、酵素法によっても合成することが可能である（WO2003/010307参照。この文献は本明細書に参考として援用される。）。
　本発明のペプチドの投与経路は特に限定されるものではなく、経口投与、非経口投与、直腸内投与のいずれを採用することも可能であり、経口的あるいは非経口的に投与することができる。本ペプチドの投与量は化合物の種類、投与方法、投与される者の状態や年齢等により異なるが、成人１日あたり通常は０．０１～５００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０５～１００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．１～３０ｍｇ／ｋｇである。本発明のペプチド(有効成分)は通常、製剤用担体と混合して調製した医薬組成物の形で投与される。製剤用担体としては、製剤分野において常用され、かつ本発明のペプチドと反応しない物質が用いられる。
　本発明のペプチドはそれ自体食品または医薬として利用することができ、或いは単独で、もしくは適当な無毒性の経口摂取用担体、希釈剤または賦形剤とともに、タブレット（素錠、糖衣錠、発泡錠、フィルムコート錠、チュアブル錠など）、カプセル、トローチ、粉末、細粒剤、顆粒剤、液剤、懸濁液、乳濁液、ペースト、クリーム、注射剤（アミノ酸輸液、電解質輸液等の輸液に配合する場合を含む）、或いは腸溶性の錠剤、カプセル剤、顆粒剤などの徐放性製剤などの食品用もしくは医薬用の製剤にすることが可能である。食品中のペプチドの含有量は適宜選択が可能であるが一般に、０．０１～１００重量％の範囲である。
　具体的には、医薬または食品に加えることができる製剤用担体ないし経口摂取用担体、希釈剤または賦形剤のような物質の例として乳糖、ブドウ糖、マンニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプン、蔗糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガント、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボン、非イオン性界面活性剤、プロピレングルコール、水等が挙げられる。
　剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。これらの製剤は常法に従って調製される。尚、液体製剤にあっては、用時、水又は他の適当な溶媒に溶解または懸濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発明のペプチドを水に溶解させて調製されるが、必要に応じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよく、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。
　これらの製剤は、本発明のペプチドを０．０１％～１００重量％、好ましくは１～９０重量％の割合で含有することができる。これらの製剤はまた、治療上価値のある他の成分を含有していてもよい。
　経口投与用の固形製剤を製造するには、有効成分と賦形剤成分例えば乳糖、澱粉、結晶セルロース、乳酸カルシウム、無水ケイ酸などと混合して散剤とするか、さらに必要に応じて白糖、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドンなどの結合剤、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウムなどの崩壊剤などを加えて湿式又は乾式造粒して顆粒剤とする。錠剤を製造するには、これらの散剤及び顆粒剤をそのまま或いはステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤を加えて打錠すればよい。これらの顆粒又は錠剤はヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メタクリル酸－メタクリル酸メチルポリマーなどの腸溶剤基剤で被覆して腸溶剤製剤、あるいはエチルセルロース、カルナウバロウ、硬化油などで被覆して持続性製剤とすることもできる。また、カプセル剤を製造するには、散剤又は顆粒剤を硬カプセルに充填するか、有効成分をそのまま或いはグリセリン、ポリエチレングリコール、ゴマ油、オリーブ油などに溶解した後ゼラチン膜で被覆し軟カプセルとすることができる。
　経口投与用の液状製剤を製造するには、有効成分と白糖、ソルビトール、グリセリンなどの甘味剤とを水に溶解して透明なシロップ剤、更に精油、エタノールなどを加えてエリキシル剤とするか、アラビアゴム、トラガント、ポリソルベート８０、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどを加えて乳剤又は懸濁剤としてもよい。これらの液状製剤には所望により矯味剤、着色剤、保存剤などを加えてもよい。
　注射剤を製造するには、有効成分を必要に応じて塩酸、水酸化ナトリウム、乳糖、乳酸、ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウムなどのｐＨ調整剤、塩化ナトリウム、ぶどう糖などの等張化剤と共に注射用蒸留水に溶解し、無菌濾過してアンプルに充填するか、更にマンニトール、デキストリン、シクロデキストリン、ゼラチンなどを加えて真空凍結乾燥し、用事溶解型の注射剤としてもよい。また、有効成分にレチシン、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などを加えて水中で乳化せしめ注射剤用乳剤とすることもできる。
　直腸投与剤または膣投与剤を製造するには、有効成分をカカオ脂、脂肪酸のトリ、ジ及びモノグリセリド、ポリエチレングリコールなどの座剤用基材と共に加湿して溶解し型に流し込んで冷却するか、有効成分をポリエチレングリコール、大豆油などに溶解した後、ゼラチン膜で被覆すればよい。
　皮膚用外用剤を製造するには、有効成分を白色ワセリン、ミツロウ、流動パラフィン、ポリエチレングリコールなどに加えて必要ならば加湿して練合し軟膏剤とするか、ロジン、アクリル酸アルキルエステル重合体などの粘着剤と練合した後ポリアルキルなどの不織布に展延してテープ剤とする。
　本発明に係るペプチドを添加・配合して調製しうる食品の具体的形態としては、例えば、飲料類（コーヒー、ココア、ジュース、清涼飲料、ミネラル飲料、茶飲料、緑茶、紅茶、烏龍茶、乳飲料、乳酸菌飲料、ヨーグルト飲料、炭酸飲料）、ガム、グミ、ゼリー、キャンデー、クッキー、クラッカー、ビスケット、氷菓（アイスクリーム、アイスキャンディ、シャーベット、かき氷等）、レトルト食品、ゼリー状食品（ゼリー、寒天、ゼリー状飲料等）、等を挙げることができる。本発明のペプチドを添加・配合して調製しうる食品としては、いわゆる健康食品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント、特定保健用食品、病者用食品・病者用組合わせ食品（厚生労働省、特別用途食品の一種）又は高齢者用食品（厚生労働省、特別用途食品の一種）としてもよく、素錠、フィルムコート錠、糖衣錠、顆粒、粉末、タブレット、カプセル（ハードカプセルとソフトカプセルとのいずれも含む。）、チュアブルタイプ、シロップタイプ、ドリンクタイプ等とすることもできる。本発明に係るペプチドを添加・配合した食品の調製は、それ自体公知の方法で行うことができる。
　次に実施例により本発明を更に具体的に説明する。しかし下記の実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
　（高架式十字迷路実験）
　高架式十字迷路（Eleveted plus-maze）は、２つのオープンアーム（open arm; 25cm×5cm）と２つのクローズドアーム（closed arm; 25cm×5cm×15 cm）からなり、それらのアームは床から50cm高くなった中央プラットフォームと結合している（図１参照）。高い位置にあるにも関わらず、クローズドアームの周りには囲いがあるために、マウスは安全に歩行する事ができる。一方、オープンアームの周囲は開放されていて囲いがないために、オープンアームを歩行するマウスは高い位置から転落するという不安感を感じる。そのために、マウスがオープンアームにいる時間が長いほど、あるいは進入回数が多いほど、マウスの不安感は緩和されていると考えられ、抗不安活性の指標となる。
　オープンアームの一つに面している中央プラットフォーム上にマウスを置いて試験を開始した。５分の試験時間の間、オープンアーム内で過ごした累積時間（time in open arms）、オープンアームを訪れた回数（visit to open arms）、いずれかのアームを訪れた回数の総数（total visits）を記録した。オープンアーム内で過ごした時間のパーセンテージ、オープンアームを訪れた回数のパーセンテージを不安の指標として計算した。
　（統計解析）
　高架式十字迷路試験で得たデータを、平均とSEMで表した。データを１方向ANOVAにより解析し、引き続いて多重比較のためのFisher試験を行った。
実施例１～３（抗不安作用）
　（実験及び結果）
　生理食塩水溶水に溶解したＶＹＬＰＲ（実施例１）、ＹＬＰＲ（実施例２）、ＬＰＲ（実施例３）を各々図面に示される用量で、マウスに腹腔内投与（i.p.）あるいは経口投与（p.o.）し（n = 3～14）、高架式十字迷路上の中心部分に置いた。そして各ペプチド投与群および非投与群（0 mg/kg）のオープンアーム内で過ごした時間のパーセンテージとオープンアームを訪れた回数、両アームを訪れた総数（total visits）を比較した。その結果を図２～図５、図７、８および表１に示す。図２～図５、図７、８および表１に示されるように、本発明のペプチドは、有意または有意傾向をもってアームを訪れる回数とアームで過ごす時間の割合を延長した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
実施例４
　有効成分として、オボアルブミンのトリプシン消化物を使用し、腹腔内投与、経口投与を行い、実施例１～３と同様にして、オープンアームを使用した抗不安作用の試験を行った。結果を図11に示す。
　オボアルブミン水溶液（20 mg/ml）を加熱処理し（10分ボイル）、ウシトリプシン（E:S=1:100）を添加し、37℃で5時間反応させた。その結果、44 mol%の高効率でVYLPRが生成することが判明した。なお、事前に加熱処理しなかった場合にはトリプシン処理してもVYLPRは検出限界以下であり、ほとんど生成しなかった。ウシトリプシンとして、Trypsin, TPCK treated, from bovine pancreas (SIGMA)を用いた。
　消化管内にはトリプシンが存在するため未消化物を投与しても抗不安作用を示す可能性が考えられたので、対照として未消化物（加熱および非加熱処理）投与群を設定した。
　試験例１
　本発明の抗不安ペプチドと各種受容体の以下の阻害剤、アンタゴニストを併用投与し、実施例１と同様に試験して、アンタゴニストによる本発明ペプチドの抗不安作用への影響、即ち、本発明のペプチドが作用する受容体を特定するための試験を行った。
COX阻害剤：インドメタシン　10 mg/kg
DP1-Rアンタゴニスト：BWA868C　60 μg/kg
A2A-Rアンタゴニスト：SCH58261　0.1 mg/kg
　結果を図７～図８、図10に示す。
　以上の結果より、図９に示すような作用経路が考えられる。
　本発明の抗不安ペプチドは、従来の抗不安薬とは異なる作用メカニズムを持っている可能性があり、新しいタイプの薬剤、食品を提供できる。

Claims (5)

  1. Val-Tyr-Leu-Pro-Arg、Tyr-Leu-Pro-ArgおよびLeu-Pro-Argからなる群から選ばれる少なくとも1種のペプチド又はその類縁体。
  2. 請求項1のペプチド又はその類縁体を含む医薬ないし医薬組成物。
  3. 抗不安剤、睡眠導入剤、睡眠改善剤、統合失調症治療薬または抗うつ薬である、請求項１または２に記載の医薬ないし医薬組成物。
  4. 請求項１のペプチド又はその類縁体を添加することを特徴とする、抗不安または睡眠改善用食品。
  5. 請求項１のペプチド又はその類縁体の有効量を、それを必要とする対象に投与することを特徴とする、不安軽減または睡眠改善方法。
PCT/JP2011/058728 2010-04-07 2011-04-06 生理活性ペプチド WO2011126054A1 (ja)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2012509689A JPWO2011126054A1 (ja) 2010-04-07 2011-04-06 生理活性ペプチド
EP11765954.0A EP2557088B1 (en) 2010-04-07 2011-04-06 Bioactive peptides
US13/640,002 US8946164B2 (en) 2010-04-07 2011-04-06 Bioactive peptide
KR1020127027477A KR20130059335A (ko) 2010-04-07 2011-04-06 생리 활성 펩티드

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2010088531 2010-04-07
JP2010-088531 2010-04-07

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2011126054A1 true WO2011126054A1 (ja) 2011-10-13

Family

ID=44762989

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2011/058728 WO2011126054A1 (ja) 2010-04-07 2011-04-06 生理活性ペプチド

Country Status (5)

Country Link
US (1) US8946164B2 (ja)
EP (1) EP2557088B1 (ja)
JP (1) JPWO2011126054A1 (ja)
KR (1) KR20130059335A (ja)
WO (1) WO2011126054A1 (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021090894A1 (ja) * 2019-11-05 2021-05-14 国立大学法人京都大学 ペプチド、組成物、及び、気分障害を治療、予防、又は改善する方法
WO2023100758A1 (ja) * 2021-11-30 2023-06-08 国立大学法人京都大学 ペプチド含有組成物

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104664371A (zh) * 2015-01-28 2015-06-03 刘高胜 一种提高睡眠质量的咀嚼片
US10280202B2 (en) 2015-03-02 2019-05-07 Kyoto University Peptide
WO2018047852A1 (en) * 2016-09-07 2018-03-15 Kyoto University Peptides and peptide conjugates for treating mental disorders
US20200283502A1 (en) * 2017-09-25 2020-09-10 Pepticom Ltd. Positive allosteric modulators of gaba a receptor
WO2020065642A1 (en) 2018-09-25 2020-04-02 Pepticom Ltd. Positive allosteric modulators of gabaa receptor

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11285362A (ja) 1998-02-06 1999-10-19 Toyama Chem Co Ltd ペプチド化した酢卵およびそれを含む組成物
WO2003010307A1 (en) 2001-07-26 2003-02-06 Ajinomoto Co., Inc. Peptide synthase gene, peptide synthase and process for producing dipeptide
JP2005121380A (ja) * 2003-10-14 2005-05-12 Sumitomo Pharmaceut Co Ltd 蛋白質分析方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH03280835A (ja) * 1990-03-29 1991-12-11 Yamasa Shoyu Co Ltd 卵白分解物およびそれを含有する食品
US6451578B1 (en) * 1994-02-14 2002-09-17 Abbott Laboratories Non-A, non-B, non-C, non-D, non-E hepatitis reagents and methods for their use
ES2253036B1 (es) * 2003-07-31 2007-07-16 Consejo Sup. Investig. Cientificas Peptidos bioactivos derivados de proteinas de la clara de huevo mediante hidrolisis enzimatica.
JP5159311B2 (ja) * 2004-10-18 2013-03-06 ビーエーエスエフ、ビューティー、ケア、ソルーションズ、フランス、エスエーエス オリゴペプチドおよびそれらの使用
JP4854271B2 (ja) * 2005-11-01 2012-01-18 キユーピー株式会社 血清コレステロール低下に関与するｃｙｐ７ａ１酵素活性化剤
JP2008072968A (ja) * 2006-09-22 2008-04-03 Pharma Foods International Co Ltd 熱中症予防飲料
US20100087466A1 (en) * 2008-09-03 2010-04-08 Michael Alan Sturgess Novel small molecule dnak inhibitors

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11285362A (ja) 1998-02-06 1999-10-19 Toyama Chem Co Ltd ペプチド化した酢卵およびそれを含む組成物
WO2003010307A1 (en) 2001-07-26 2003-02-06 Ajinomoto Co., Inc. Peptide synthase gene, peptide synthase and process for producing dipeptide
JP2005121380A (ja) * 2003-10-14 2005-05-12 Sumitomo Pharmaceut Co Ltd 蛋白質分析方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KOSAKU OHINATA: "Keiran Tanpaku Yurai no Kinosei Peptide -Tokuni, Seishinteki Stress Kanwa Sayo ni Tsuite", THE 57TH PROCEEDINGS OF JAPANESE SOCIETY OF FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY, 1 September 2010 (2010-09-01), pages 174, XP008161692 *
See also references of EP2557088A4 *
SUZUKI, C. ET AL.: "[Trp5]-oryzatensin(5-9), an agonist peptide for complement C3a receptor, exhibits anxiolytic-like effect mediated by prostaglandin E2", PEPTIDE SCIENCE 2009, 1 April 2010 (2010-04-01), pages 269 - 272, XP008161693 *
TOKARSKI, C. ET AL.: "Identification of proteins in renaissance paintings by proteomics", ANAL. CHEM., vol. 78, no. 5, 1 March 2006 (2006-03-01), pages 1494 - 1502, XP008161724 *
WU, J.-T. ET AL.: "Protein digest analysis by pressurized capillary electrochromatography using an ion trap storage/reflectron time-of- flight mass detector", ANAL. CHEM., vol. 69, no. 15, 1 August 1997 (1997-08-01), pages 2908 - 2913, XP008161723 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021090894A1 (ja) * 2019-11-05 2021-05-14 国立大学法人京都大学 ペプチド、組成物、及び、気分障害を治療、予防、又は改善する方法
JPWO2021090894A1 (ja) * 2019-11-05 2021-05-14
CN114641484A (zh) * 2019-11-05 2022-06-17 国立大学法人京都大学 肽、组合物及治疗、预防或改善心境障碍的方法
JP7398716B2 (ja) 2019-11-05 2023-12-15 国立大学法人京都大学 ペプチド、組成物、及び、気分障害を治療、予防、又は改善する方法
WO2023100758A1 (ja) * 2021-11-30 2023-06-08 国立大学法人京都大学 ペプチド含有組成物

Also Published As

Publication number Publication date
JPWO2011126054A1 (ja) 2013-07-11
US20130203677A1 (en) 2013-08-08
US8946164B2 (en) 2015-02-03
EP2557088A1 (en) 2013-02-13
EP2557088A4 (en) 2014-02-12
EP2557088B1 (en) 2016-05-11
KR20130059335A (ko) 2013-06-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2011126054A1 (ja) 生理活性ペプチド
JP7141642B2 (ja) ペプチド
JP5533648B2 (ja) 免疫賦活剤
JPWO2005012334A1 (ja) 生体内非分解性ペプチド、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、医薬及び機能性食品
JP5622593B2 (ja) ペプチドを含む医薬または食品
WO2013129220A1 (ja) ペプチドを含む医薬または食品
JP2023126910A (ja) 治療用ペプチド
WO2017150536A1 (ja) ペプチド
WO2017150548A1 (ja) ペプチド
WO2011148972A1 (ja) 生理活性ペプチドを含む医薬組成物
WO2012070554A1 (ja) ペプチド
JP7197869B2 (ja) ペプチド、組成物及び気分障害を治療、予防、又は改善する方法
CN107619428A (zh) 鸟氨酸与门冬氨酸二肽化合物的酰化衍生物及其应用
WO2021015222A1 (ja) ペプチド
JP2018184367A (ja) ペプチド
TW202132325A (zh) 胜肽、組成物以及治療、預防或改善情緒障礙之方法
JP2009502904A (ja) 補体Ｃ３ａ由来のペプチド及びその使用
JP2015209400A (ja) 新規トリペプチド及びペプチド含有組成物、並びにそれらの使用、それらを有効成分として含有する摂食抑制剤、抗肥満剤、動脈弛緩剤、血圧降下剤、メタボリックシンドローム予防改善剤、又は食欲調節用の食品組成物
US20160326098A1 (en) Pharmaceutically Active Compound for Use as Anti-inflammatory Agent

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 11765954

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

DPE1 Request for preliminary examination filed after expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101)
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2012509689

Country of ref document: JP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20127027477

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2011765954

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 13640002

Country of ref document: US