JP4854271B2 - 血清コレステロール低下に関与するcyp7a1酵素活性化剤 - Google Patents
血清コレステロール低下に関与するcyp7a1酵素活性化剤 Download PDFInfo
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Description
(1)下記のアミノ酸配列で示されるコレステロール低減化ペプチド。
Gly-Leu-Trp-Glu-lys
(2)(1)に記載のコレステロール低減化ペプチドを含有する血清コレステロール低下材。
(3)(2)に記載の血清コレステロール低下材を含む食品組成物。
(4)(3)において、「血清コレステロールが低下する」旨が表示に付された、血清コレステロール低下作用を有する食品組成物。
自動合成機を用いてコレステロール低減化ペプチドとは、Gly-Leu-Trp-Glu-lysを合成し、凍結乾燥を行った。得られたペプチドの純度は、逆相HPLCで97%であることが確認できた。
鶏卵から採取した生卵白をトリプシン等のプロテアーゼで酵素分解処理した後、ODSカラムを用いたHPLCで分画採取し、凍結乾燥を行った。得られたペプチドの純度は97%であることが確認できた。
1. 試験方法
1.1.細胞の培養
HepG2細胞と10%FBS含有MEM培地を混合し、細胞を6well plateに播種した後、CO2インキュベーター(37℃、5%CO2)にて24時間培養した。その後、培地を吸引除去し、10%FBS添加培地に交換した後、さらに24時間培養した。それぞれのwellを血清フリー培地で洗浄し、下記のサンプル溶液を加え、24時間培養後、Total RNAを回収した。
1.2.サンプルの調製
A.対照(無添加)
FBSフリーMEM培地をそのまま使用した。
B.カゼイントリプシン加水分解物(CTH)
CTHを1mg/mLとなるようにFBSフリーMEM培地に溶解させ、滅菌ろ過して使用した。
C.ペプチド(実施例1で得られたペプチド)
Gly-Leu-Trp-Glu-LysペプチドをFBSフリーMEM培地に1mg/mLとなるよう溶解させ、滅菌ろ過して使用した。
1.3.コレステロール代謝関連遺伝子の解析
回収したHepG2細胞のTotal RNAを用いてRT反応を行った後、RT産物(cDNA)を希釈し、Cholesterol7α-hydroxylase(CYP7A1)などの各遺伝子について、Real-time定量PCR法(ABI PRISM 7000)で測定した。なお、使用したForwardprimer、Reverse primer、TaqManprobeはAppliedBiosystemsで合成した。18S rRNAで補正を行い各サンプルの目的mRNAを定量した。
2.結果
Real-time定量PCRによるCYP7A1遺伝子mRNAの定量結果を表1に示した。CYP7A1遺伝子のQuantityを18s rRNAのQuantityで割算し、対照群のmRNA発現を100とした相対比を算出し、グラフ化したものが表1である。CYP7A1 mRNAレベルは対照群やCTH群と比較して該ペプチド群(実施例1)では有意に増加した。
ペプチド(実施例1) 20%
結晶セルロース(可溶タイプ) 30%
デキストリン(DE25) 50%
合 計 100%
上記配合により、粉体混合することにより、粉末状の血清コレステロール低下材を得た。
応用例1のペプチドを実施例2に変え、粉末状の血清コレステロール低下材12gを調製した。これを豚ゼラチン製のハードカプセルに各100mgとなるよう充填し、カプセル剤状のサプリメント100錠を得た。カプセル5錠当り100mgのコレステロール低減化ペプチドを含有する。
スイートコーンパウダー 25%
コーンスターチ 25%
砂糖 12%
乳糖 10%
全粉乳 10%
チキンブイヨン 8%
食塩 4%
グルタミン酸ナトリウム 3%
コーンスープ香料 0.5%
応用例1で得られた
血清コレルテロール低下材 2.5%
合 計 100%
応用例1で得られた粉末状の血清コレステロール低下材を用い、上記配合の通り粉末コーンスープ200gを調製した。各20gをアルミ蒸着のパウチ袋10袋に分包し、飲用時に180mLの熱湯に溶解し摂取した。1食当り血清コレステロール低下材500mg、コレステロール低減化ペプチドとして100mgを含有する。
ブドウ糖・果糖液糖 12%
酸味料 0.2%
甘味料 0.1%
アスコルビン酸 0.1%
グレープフルーツ香料 0.1%
応用例1で得られた
血清コレルテロール低下材 0.5%
清水 87%
合 計 100%
応用例1で得られた粉末状の血清コレステロール低下材を用い、上記配合の通り清涼飲料1200gを調製した。これを98℃に加熱し10分間保持した後、100mL容褐色瓶に充填し、スクリューキャップを施し密封後常温に冷却した。ペプチドを主成分とする血清コレステロール低下材を一瓶当たり500mg、コレステロール低減化ペプチドとして100mgを含有する清涼飲料10本を得た。
全卵 40g
砂糖 100g
馬鈴薯澱粉 100g
応用例1で得られた
血清コレルテロール低下材 4g
合 計 244g
全卵40gを軽くほぐし、砂糖100gを加え混合し、さらに馬鈴薯澱粉100gと応用例1で得られた血清コレルテロール低下材4gを加え練り合わせボーロの生地を得た。これを延展しサイの目状に切断し、丸めることにより球状の生地を得た。これをオーブンにて180℃で焼成し、得られたボーロ50個を樹脂製の袋に充填した。一袋50粒当り約500mgの血清コレステロール低下材、コレステロール低減化ペプチドとして100mgを含有するボーロ8袋を得た。
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- アミノ酸配列Gly-Leu-Trp-Glu-lysで示されるペプチドを有効成分として含有する、血清コレステロール低下に関与するCYP7A1酵素活性化剤。
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