WO2011009230A1

WO2011009230A1 - 一种用于特发性水肿的药物及其制备方法

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Publication number: WO2011009230A1
Application number: PCT/CN2009/000834
Authority: WO
Inventors: 吴以岭; 许红辉; 李晓燕
Original assignee: 河北以岭医药研究院有限公司
Priority date: 2009-07-24
Filing date: 2009-07-24
Publication date: 2011-01-27

Description

一种用于特发性水肿的药物及其制备方法技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，特别是涉及用于特发性水肿的药物及其制备方法。

背景技术

特发性水肿（Idiopathic Edema) 是指病因不明以体重增加及全身浮肿为特征的一组临床综合症。本病常见于生育年龄的妇女，好发年龄在 30— 40 岁，很少见于月经初潮前和绝经后的女性。临床主要表现腹胀伴有非炎性眼睑、面部、双手及下肢水肿，特征为体位性液体潴留。此外，本病常伴有紧张、易激惹、头痛等自主神经紊乱的症状，也可合并消化不良、月经紊乱、肥胖和糖尿病等。由于病因和发病机制不明，目前尚无针对性的药物应用于临床。

特发性水肿在传统医学中无相应的确切病名，依其症状表现与中医之"水肿"、 "肤胀"及 "溢饮"等相近。女子以肝为先天，肝藏血，主疏泄，性喜条达，如疏泄功能失常，肝郁气滞，血脉瘀阻，经血不畅，同时气机紊乱，三焦水道不通，水液不循常道而溢于肌肤就会发为水肿；《诸病源候论 ·十水候》曰： "青水者，先从面目肿遍一身，其根在肝"，说明肝失疏泄可致气滞水停。肝郁可导致脾运失常，久之致虚，经云： "诸湿肿满皆属于脾"，脾虚则不能运化水湿，水湿停聚体内而泛滥横溢故而水肿。《金匮要略》谓： "(妇人)经为血，血不利则为水" ，因而其主要病理机制为肝郁脾虚，气滞血瘀，三焦气化失常。

综上所述，本病多为肝郁脾虚，气滞血瘀而致，用于总以疏肝健脾，活血利水为主。目前尚无合适的中药组合为用于特发性水肿。

发明内容

本发明的目的在于提供一种疗效显著的用于特发性水肿的药物及其制备方法。

本发明提供一种用于特发性水肿的药物，其含有如下重量份的原料药：当归 159-240份柴胡 106-160份茯苓 212-322份

泽泻 126-192份白芍 126-192份。

所述药物以重量份计还含有如下原料药：白术 126-192份猪苓 126-192份益母草 318-482份泽兰 126-192份香附 105-159份桂枝 105-159份 _c

所述药物以重量份计优选为：

当归 186-200份柴胡 133-144份茯苓 248-267份泽泻 160-172份白术 149-160份猪苓 154-160份益母草 400-413份泽兰 145-160份白芍 160-180份香附 128-133份桂枝 133-145份。

所述的药物，更优选以重量份计为：

当归 200份柴胡 133份茯苓 267份

泽泻 160份白术 160份 160份

益母草 400份泽兰 160份

160份

香附 133份桂枝 133份。

所述药物剂型为胶囊剂、片剂、散剂、口服液、软胶囊、丸剂、酊剂、糖桨剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂。

本发明再提供一种用于特发性水肿药物的制备方法，包括如下步骤： a) 按重量份称取原料药茯苓 212-322份，经水提取 3次，第一次加重量份为原料药 10-15倍的水，浸泡 0.5-2小时，提取 1.5-3小时；第二次、第三次加重量份为原料药 10-13倍的水，分别提取 0.5-2.5小时；所得提取液滤过减压浓缩至在 60°C测定相对密度为 1.0-1.1，备用；

b) 按重量份称取原料药当归 159-240份、柴胡 106-160份、泽泻 126-192 份，经浓度为 60-80% (v/v) 的乙醇，提取 2次，第一次加重量份为原料药 6-9倍的乙醇，浸泡 0.5-2小时，提取 1-3小时；第二次加重量份为原料药 5-8 倍的乙醇，提取 1-3小时，所得提取液滤过减压去除乙醇，浓缩至在 60°C测定相对密度为 1.0-1.1，备用；

c) 将前述所得备用浓缩液合并，减压浓缩至在 60 °C测定相对密度

1.10〜1.20，得清膏，备用；

d) 按重量份称取原料药白芍 126-192份，粉碎成平均粒径为 150-180μηι 细粉；

e) 将步骤 c)所得清膏、步骤 d)所得白芍细粉和适量药物学可接受辅剂制得胶囊剂、片剂、散剂、口服液、软胶囊、丸剂、酊剂、糖桨剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂。本发明再提供一种用于特发性水肿药物的制备方法，包括如下步骤： a) 按重量份称取选净的益母草 318-482 份、茯苓 212-322 份、猪苓 126-192份加水提取 3次，第一次加重量份为原料药 10-15倍量的水，浸泡 0.5-2小时，提取 1.5-3小时；第二次、第三次加 10-13倍量，分别提取 0.5-2.5 小时；提取液滤过，合并减压浓缩至在 60°C测定相对密度为 1.0-1.1，备用； b) 按重量份称取选净的白术 126-192份、桂枝 105-159份、香附 105-159 份、泽兰 126-192份，加重量份为原料药 6-10倍量的水，浸泡 0.5-2小时，水蒸汽蒸馏法提取挥发油 4-7 小时，所得挥发油另器收集，出油率不少于 0.25%；所余提取液滤过后减压浓缩至在 60°C测定相对密度为 1.0-1.1，备用； c) 按重量份称取选净的当归 159-240份、柴胡 106-160份、泽泻 126-192 份加 60-80% (v/v) 乙醇提取 2次，第一次加重量份为原料药 6-9倍量的乙醇，浸泡 0.5-2小时，提取 1-3小时；第二次加 5-8倍量，提取 1-3小时；提取液滤过，合并减压回收乙醇至在 60°C测定相对密度为 1.0-1.1，备用； d) 将前述所得备用浓缩液合并，减压浓缩至在 60 °C测定相对密度 1.10〜1.15，得清膏，备用；

e) 按重量份称取选净的白芍 126-192份，粉碎成 150-180μηι的细粉； f) 将前述所得清膏，以白芍细粉和适量辅料为底料，喷雾制粒， 32目筛整粒，备用；

g) 将前述所得挥发油用适量无水乙醇溶解，喷入所得颗粒中，加入适量辅料，混合均匀，制剂。

优选制备方法为：

a) 按重量份称取选净的益母草 400-413 份、茯苓 248-267 份、猪苓 154-160份加水提取 3次，第一次加重量份为原料药 13倍量的水，浸泡 1小时，提取 2小时；第二次、第三次加 11倍量，分别提取 1.5小时、 1小时；提取液滤过，合并减压浓缩至在 60°C测定相对密度为 1.05，备用；

b) 按重量份称取选净的白术 149-160份、桂枝 133-145份、香附 128-133 份、泽兰 145-160份，加重量份为原料药 8倍量的水，浸泡 1小时，水蒸汽蒸馏法提取挥发油 5小时，所得挥发油另器收集，出油率不少于 0.25%; 所余提取液滤过后减压浓缩至在 60°C测定相对密度为 1.05，备用；

c) 按比例称取选净的当归 186-200份、柴胡 133-144份、泽泻 160-172 份加 70% (v/v) 乙醇，提取 2次，第一次加重量份为原料药 8倍量的乙醇，浸泡 1小时，提取 2小时；第二次加 6倍量，提取 1.5小时；提取液滤过，合并减压回收乙醇至在 60°C测定相对密度为 1.05，备用；

d) 将前述所得备用浓缩液合并，减压浓缩至在 60 °C测定相对密度 1.10〜1.15，得清膏，备用；

e) 按重量份称取选净的白芍 160-180份，粉碎成 150-180μηι的细粉； f) 将前述所得清膏，以白芍细粉和适量辅料为底料，喷雾制粒， 32目筛整粒，备用；

再优选的药物制备方法，其中：

a) 按重量份称取选净的益母草 400份、茯苓 267份、猪苓 160份加水提取 3次，第一次加重量份为原料药 13倍量的水，浸泡 1小时，提取 2小时；第二次、第三次加 11倍量，分别提取 1.5小时、 1小时；提取液滤过，合并减压浓缩至在 60°C测定相对密度为 1.05，备用；

b) 按重量份称取选净的白术 160份、桂枝 133份、香附 133份、泽兰

160份，加重量份为原料药 8倍量的水，浸泡 1小时，水蒸汽蒸馏法提取挥发油 5小时，所得挥发油另器收集，出油率不少于 0.25%; 所余提取液滤过后减压浓缩至在 60°C测定相对密度为 1.05，备用；

c) 按比例称取选净的当归 200份、柴胡 133份、泽泻 160份加 70% (v/v) 乙醇，提取 2次，第一次加重量份为原料药 8倍量的乙醇，浸泡 1小时，提取 2小时；第二次加 6倍量，提取 1.5小时；提取液滤过，合并减压回收乙醇至在 60°C测定相对密度为 1.05，备用；

e) 按重量份称取选净的白芍 160份，粉碎成 150-180μηι的细粉； f) 将前述所得清膏，以白芍细粉和适量辅料为底料，喷雾制粒， 32目筛整粒，备用；

本药物发明人在实践中发现特发性水肿多为肝郁脾虚，气滞血瘀而致，用于总以疏肝健脾，活血利水为主。特发性水肿依其临床表现属中医之 "水肿"、 "肤胀"及 "溢饮"等范畴。水肿在中医理论中多归咎于肺、脾、肾三脏，所谓 "其本在肾，其标在肺，其制在脾"，用于亦多责此三脏。然特发性水肿则不能只用肺、脾、肾三脏失司来解释，中医学认为，水得阳则化为气，气得阴则化为水，气行则水行，气滞则水聚，人体气的畅行离不开肝脏的疏泄功能。肝气疏泄得当，则气机流行水道畅利，水液随之升降上下；反之则气机郁结，水液因之滞留而发为水肿。

肝郁脾虚是特发性水肿的常见病机，该病多见于月经不调、情绪不畅的中年妇女，表现情绪不畅、胃纳不佳、腹胀等症状，与月经周期有关。女子以肝为先天，肝藏血，主疏泄，性喜条达，而肝郁气滞，气机紊乱，三焦水道不通，水液不循常道而溢于肌肤就会发为水肿；《诸病源候论 *十水候》曰:

"青水者，先从面目肿遍一身，其根在肝"，说明肝失疏泄可致气滞水停。素体虚弱或肝郁均可导致脾运失常，经云： "诸湿肿满皆属于脾"，脾虚则不能运化水湿，水湿停聚泛滥横溢故而水肿。因而特发性水肿病理基础为肝郁脾虚。

络脉瘀滞是发病的一个重要环节，络脉是气血津液输布环流的枢纽和通路，有通行气血、渗濡灌注、津血互渗等作用。经络之络运行经气，称为气络，气络气机郁滞，其温煦充养、防御卫护、信息传达、调节控制功能失常，脏腑机能失常，肝络气滞则情绪不畅、善太息，脾之络气困顿则腹胀纳呆；脉络之络运行血液，血中亦有气，脉络气机郁滞，调节功能失常，络脉瘀阻则其功能受损津血互渗失调，而表现为 "淤血化水"，出现颜面浮肿，双手发胀，午后下肢肿胀、按之凹陷等症。

本药物发明人吴以岭教授针对肝郁脾虚这一病理基础，治以疏肝健脾，脾运强健则肝脏疏泄功能才能正常，肝脏气机条达又是保持脾胃正常运化功能，调畅气机，通利三焦，疏通水道的重要条件；同时，以治络诸法，养血和血通络、流气畅络、化瘀通络、利水通络，恢复络脉正常功能，维持脏腑功能稳定，使水肿消，络脉通，肝脏气机条达，脾运强健，共达疏肝健脾，通络利水之功效。

本发明药物以当归为君药；当归，味甘微辛，性温，归肝、心、脾经，有养血和血通络之功。当归主血分之病，养血和血， "其味甘而重，故专能补血，其气轻而辛，故又能行血，补中有动，行中有补，诚血中之气药，亦血中之圣药也"（《本草正》），《注解伤寒论》中曰： "脉者血之府，诸血皆属心，凡通脉者心先补心益血"，故以当归为君药，统领全方，破恶血，养新血，养血和血通络，以通络而利水。

本发明药物以柴胡、茯苓、泽泻为臣药；柴胡，味苦、辛，性微寒，柴胡能条达肝气而疏肝解郁，调畅气机，用于肝经郁证，肝气条达则水归正道，

"络以辛为泄"，用柴胡流气畅络，络中之气机通畅，则络道无阻。茯苓，味甘淡，性平，归心、脾、肾经。茯苓性味俱淡，善理脾土，功用健脾利水渗湿，因其药性平和，利水而不伤正，《本草化义》： "茯苓最为利水除湿要药，书日健脾，即水去而脾自健之谓也"。泽泻，甘淡性寒，归肾、膀胱经，功善利水渗湿，而治膀胱气化不利，水湿停聚，小便不利，水肿胀满。 "泽泻，气味淡泊而体质又轻，故最善渗泄水道，专能通利小便……亦以轻能入络，淡能导湿耳。"（摘自张山雷《本草正义》）可渗利脏腑经络间痰饮、水湿，使邪有出路。与茯苓配伍，以增强利水渗湿作用。三药合用共为臣药，而达疏肝健脾，利水消肿之功效。

本发明药物佐以白术、猪苓、益母草、泽兰、白芍、香附；白术，味苦甘，性温，归脾、胃经。有补气健脾，燥湿利水之功效，《别录》曰其善 "消痰水，除皮间风水结肿"，对于脾虚不能运化而致水湿停留尤为适宜，配伍茯苓，促进脾运，利水消肿。猪苓，入肾、膀胱经，甘淡渗泄，利水渗湿而治水湿滞留，《本经》曰： "利水道"，二苓并用，增强利水蠲湿之功，使水湿从小便而解。益母草，辛开苦泄，功能活血祛瘀，利尿消肿，益母草性滑而利，消水行血，去瘀生新。泽兰，味苦辛性微温，有活血祛瘀，行水消肿之功。泽兰辛散温通，不寒不燥，行而不峻，能舒肝气而通经脉，且有行水消肿之功，益母草、泽兰配伍，祛除血络瘀滞，退浮肿、下水气，通利小便而达活血利水之效。白芍，味苦微酸，善柔肝养肝，养血敛阴。配伍柴胡以柔肝，肝体阴而用阳，柴胡、白芍相配，肝体健而肝气疏，其功自达。香附，香窜行气，善于疏肝解郁，调理气机，流气畅络。《本草纲目》称其 "利三焦，解六郁"，助柴胡疏肝理气之功效，共达 "气行则水行"之意。

桂枝，味辛甘，性温。辛助血行，通达四肢，温通经络，助阳化气。本发明药物以桂枝为佐使，使其行血分，走经络，温通经络而引诸药入络脉，达四肢；辛温通络，配伍当归、益母草、泽兰以活血通络；其宣通之力，又能通阳化气，而化阴寒水湿，助泽泻，导引三焦下通膀胱以利小便。

诸药合用，使肝气条达，脾气健运，络脉畅通，水湿不生，则水肿自消。共奏疏肝健脾，通络利水之效。

本发明所述中药可以被有相同或相似功效果的中药代替，并且这些药材均可以按照《全国中药炮制规范》或《中药大辞典》炮制。

本发明药物剂型为胶囊剂、片剂、散剂、口服液、软胶囊、丸剂、酊剂、糖桨剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂中的一种，为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂等，填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等，崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯垸酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等，润滑剂包括：硬脂酸镁、十二垸基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等，助悬剂包括：聚乙烯吡咯垸酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等，粘合剂包括，淀粉桨、聚乙烯吡咯垸酮、羟丙基甲基纤维素等，甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等，矫味剂包括：甜味剂及各种香精，防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等。具体实施方式

下述实施例用于举例说明本发明药物的制备，但其不能对本发明的范围构成任何限制。

制备实施例：

实施例 1

处方：

当归 200克、柴胡 133克、茯苓 267克、泽泻 160克、白芍 160克制备方法：

先向茯苓中加其重量 10倍量的水，浸泡 1小时，提取 2小时；再向茯苓中加 11倍量水，分别提取 1.5小时、第三次向茯苓中加入 11倍量水 1小时；将各次所得提取液滤过，合并减压浓缩至在 60°C测定相对密度约为 1.05，备用；

向当归、柴胡、泽泻中加浓度为 70% (v/v) 的乙醇，提取 2次，第一次加 8倍量乙醇，浸泡 1小时，提取 2小时；第二次加 6倍量乙醇，提取 1.5 小时；提取液滤过，合并减压回收乙醇至在 60°C测定相对密度约为 1.05，备用；

将所述备用浓缩液合并，减压浓缩至在 60°C测定相对密度约为 1.20，得清膏，备用；

将白芍粉碎成平均粒径约为 150μηι的细粉；

将所得清膏、白芍细粉和适量辅料为底料，喷雾制粒， 32目筛整粒，制剂得颗粒剂。

实施例 2

本发明药物片剂的制备：

处方：

当归 186克柴胡 144克茯苓 248克泽泻 172克白术 149克猪苓 154克益母草 413克泽兰 145克白芍 161克香附 128克桂枝 145克

制备方法：

向选净的益母草、茯苓和猪苓中加水提取 3次，第一次加 15倍量水，浸泡 0.5小时，提取 1.5小时；第二次、第三次加 10倍量，分别提取 0.5小时；提取液滤过，合并减压浓缩至在 60°C测定相对密度约为 1.0，备用；称取选净的当归、柴胡、泽泻加 80% (v/v) 乙醇，提取 2次，第一次加 9倍量，浸泡 0.5小时，提取 1小时；第二次加 5倍量，提取 2小时；提取液滤过，合并减压回收乙醇至在 60°C测定相对密度约为 1.0，备用；

称取选净的白术、桂枝、香附、泽兰，加 6-10倍量水，浸泡 0.5小时，水蒸汽蒸馏法提取挥发油 4小时，挥发油另器收集，出油率不少于 0.25%; 提取液滤过，减压浓缩至在 60°C测定相对密度为 1.0，备用；

将上述所得备用的浓缩液合并，减压浓缩至在 60 °C测定相对密度约为 1.10，得清膏，备用；

称取选净的白芍粉碎成平均粒径为 180μηι的细粉；

将所得清膏、白芍细粉和适量辅料为底料，喷雾制粒， 32目筛整粒，备用；

将所得挥发油用适量无水乙醇溶解，喷入所得颗粒中，加入适量药物学可接受辅剂混合，混合均匀，密闭半小时，装胶囊，即得。

实施例 3

本发明药物胶囊剂的制备处方：

当归 200克柴胡 133克茯苓 267克泽泻 160克白术 160克猪苓 160克益母草 400克泽兰 160克白芍 160克香附 133克桂枝 133克

制备方法：

称取选净的白术、桂枝、香附、泽兰，向其中加 8倍量水，浸泡 1小时，水蒸汽蒸馏法提取挥发油 5 小时，所得挥发油另器收集，出油率不少于 0.25%；所余水性溶液滤过后减压浓缩至在 60°C测定相对密度约为 1.1，备用；

称取选净的益母草、茯苓、猪苓加水提取 3次，第一次加 13倍量水，浸泡 2小时，提取 3小时；第二次加 13倍量、第三次加 10倍量，分别提取 0.5小时、 1小时；提取液滤过，合并减压浓缩至在 60°C测定相对密度约为 1.05，备用；

称取选净的当归、柴胡、泽泻加 60% (v/v) 乙醇，提取 2次，第一次加 8倍量，浸泡 2小时，提取 3小时；第二次加 8倍量，提取 3小时；提取液滤过，合并减压回收乙醇至在 60°C测定相对密度约为 1.05，备用；

将前述所述备用的浓缩液合并，减压浓缩至在 60 °C测定相对密度约为 1.14，得清膏，备用；

称取选净的白芍，粉碎成 150-180μηι的细粉；

将所得清膏，以白芍细粉和适量辅料为底料，喷雾制粒， 32目筛整粒，备用；

将所得挥发油用适量无水乙醇溶解，喷入颗粒中，加入适量辅料，混合均匀，密闭半小时，装胶囊，即得。

实施例 4

本发明药物散剂的制备：

处方：

当归 240克柴胡 160克茯苓 212克泽泻 192克白术 126克猪苓 126克益母草 482克泽兰 192克白芍 126克香附 159克桂枝 105克

依前述方法制成散剂，其中提取所加入水或乙醇的量，以及浸泡时间和买施例 5

本发明药口服液的制备:

处方：

当归 159克 106克茯苓 322克 126克白术 192克

192克益母草 318克 126克白芍 180克香附 105克桂枝 159克

依前述方法制成口服液。

实施例 6

本发明药胶囊的制备：

处方：

当归 240克 160克茯苓 322克 192克白术 192克

160克益母草 400克 192克白芍 192克香附 159克桂枝 159克

依前述方法制成软胶囊。

实施例 7

本发明药物丸剂的制备：

处方：

当归 240克柴胡 160克茯苓 322克 192克白术 160克猪苓 192克益母草 482克

160克白芍 192克香附 159克桂枝 133克

依前述方法制成丸剂。

实施例 8

本发明药物酊剂的制备：

处方：

当归 159克柴胡 106克茯苓 212克 126克

、

白术 126克猪苓 126克母草 318克

126克白芍 126克香附 105克桂枝 105克

依前述方法制成酊剂。

实施例 9

本发明药物糖桨剂的制备：

处方：当归 159克柴胡 106克茯苓 322克 126克

、

白术 192克猪苓 192克母草 318克 126克白芍 192克香附 105克桂枝 159克

依前述方法制成糖桨剂。

实施例 10

本发明药物栓剂的制备：

处方：

当归 159克柴胡 106克茯苓 322克 126克

、

白术 192克猪苓 192克母草 318克

126克白芍 192克香附 133克桂枝 159克

依前述方法制成栓剂。

实施例 11

本发明药物凝胶剂的制备：

处方：

当归 159克柴胡 106克茯苓 322克 126克

、

白术 192克猪苓 192克母草 318克

126克白芍 192克香附 128克桂枝 159克

依前述方法制成凝胶剂。

实施例 12

本发明药物喷雾剂的制备：

处方：

当归 240克柴胡 160克茯苓 212克 192克白术 126克猪苓 126克益母草 482克

192克白芍 126克香附 159克桂枝 105克

依前述方法制成喷雾剂。

实施例 13

本发明药物注射剂的制备：

处方：

当归 240克柴胡 160克茯苓 322克 192克白术 192克猪苓 192克益母草 482克

192克白芍 192克香附 159克桂枝 159克依前述方法制成注射剂。

本发明中药组合物的用量，按活性组分原料药总重量计，为 14-20 克 / 日，可每日服用一次或分 2-4次服用，优选为 16.5克 /日，分 3次服用。

为证实本发明药物用于特发性水肿的活性，用按实施例 3方法制得的胶囊内容物干粉（以下称本发明药物）进行了下列药理试验。

一、本发明药物的利尿作用

1. 实验材料

1.1 实验动物

健康 SD大鼠，清洁级，雌性， 80只，体重 180〜220g。由河北省实验动物中心提供，许可证号： SCXK (冀） 2003— 1一 003，合格证编号： DK0506 一 117。动物饲养在河北以岭医药研究院药理室，光照 12小时 /天，温度 20〜 23°C，相对湿度 40〜60%。大鼠笼养， 5只 /笼。饲料为全价颗粒饲料，由河北省实验动物中心提供，保持充足的饮水。实验前适应性饲养三天。

1.2 实验药物

本发明药物， 4.6g生药 /g干粉，由河北以岭医药研究院有限公司提供，用 0.5 %CMC— Na制成混悬液， 4°C保存。

呋塞米，作用于肾小管髓袢升支粗段，口服后利尿作用于 20〜30分钟内开始， 1〜2小时达高峰，持续 6〜8小时，利尿作用强大。

1.3 主要仪器

MI-921D型电解质分析仪，深圳市越华科技发展有限公司制造。

2. 实验方法

2.1 剂量设置原则

本发明药物临床拟用量 16.5g生药 /天，即 0.275g生药 /kg, 设定大鼠高、中、低剂量组的剂量分别为人剂量的 16、 8、 4倍， gP 4.4、 2.2、 l.lg生药 /kg, 另设空白对照组、呋塞米组。根据以上剂量设置情况，将大鼠分为下列 5组，见表 1 :

表 1 本发明药物对大鼠利尿作用实验分组和给药剂量

组别动物剂量（g生药 /kg) 相当于临床的倍数关系空白对 10 — ―

呋塞米 10 25mg/kg

高剂量 10 4.4 16 中剂 2.2 8

低剂 1.1 4

2.2 给药方法

灌胃给药，与临床推荐的口服途径相一致。每天上午 8〜9点进行，连续 15天，每周根据体重调整一次给药体积。呋塞米组仅实验当天 1次给药。高剂量为 0.44g生药 / ml, 按 1.0ml / 100克动物体重配制。中、低剂量组用等容量不等浓度给药。连续给药 15天。

2.3 实验步骤

将大鼠预先置代谢笼中 1天适应环境，观察自由饮水条件尿量是否稳定。筛选前 18h禁食不禁水，灌去离子水 2.2ml/100g，收集 2h尿液，筛选尿量超过 40%水负荷的大鼠用于实验。按筛选时的尿量均衡随机分组，每组 10 只。给药 15天后，轻压大鼠下腹排尽余尿，各组大鼠灌以生理盐水 5ml/100g，这种浓度的盐水可以使动物细胞外液增加，模拟水钠潴留状态。呋塞米组灌胃含有药物的等量盐水。每只代谢笼放大鼠 1只，收集 0-lh、 l-3h、 3-6h尿液，检测尿量，尿液 K⁺、 Na⁺、 Cl—、 PH值。

2.5 统计方法

用 SPSS11.5进行非参数检验和单因素方差分析。

3. 实验结果

3.1 本发明药物对水负荷大鼠尿量的影响

与空白对照组比较，呋塞米组大鼠在给予水负荷后 0-lh 内尿量增加 (Ρ<0·01 )， l-3h及 3-6h内的尿量有增加的趋势，总尿量增加 (P<0.01 ) o 与空白组比较，本发明药物 l.lg生药 /kg组大鼠仅 3-6h尿量增加（PO.05 ) , 本发明药物 2.2、 4.4 g生药 /kg组大鼠除 3-6h尿量增加（PO.01 ) 外总尿量也增加（P<0.05 )。结果见表 1。

表 1 本发明药物对水负荷大鼠尿量的影响 (；±s， n= 10)

Ο-lh尿量 l-3h尿量 3-6h尿量总尿量组别体重 (g)

(ml/lOOg) (ml/100g) (ml/lOOg) (ml/lOOg) 空白组 215.7±10.2 1.035±0.412 1.961±0.439 0.864±0.234 3.859±0.611 呋塞米组 25mg/kg 221.5±11.2 1.961±0.441** 2.270±0.519 1.129±0.430 5.359±0.345**

4.4 222.4±13.6 1.150±0.443 2.074±0.407 1.396±0.538** 4.620±0.768* 本发明

2.2 222.7±13.1 1.183±0.385 1.933±0.483 1.418±0.540** 4.534±0.470* 药物组

1.1 225.3±12.1 0.995±0.713 2.005±0.465 1.225±0.416* 4.226±0.610 注：与空白对照组比较， *P<0.05， **P<0.01

3.2本发明药物对水负荷大鼠尿液钾、钠、氯离子浓度的影响

与空白对照组比较，呋塞米组大鼠 0-lh尿液 Cl_浓度增加（PO.01 )， 3-6h 尿液 PH降低（P<0.05 )。与空白对照组比较，本发明药物 4.4g生药 /kg组大鼠 0-lh及 l-3h尿液 C1—浓度增加（P<0.05 )， 3-6h尿液 C1—浓度有增加的趋势。与空白对照组比较，本发明药物 2.2g生药 /kg组大鼠 l-3h尿液 Na⁺浓度增加 (P <0.05 与空白对照组比较，本发明药物 l.lg生药 /kg组大鼠 l-3h尿液 Na⁺、 Cl_浓度增加（P O.05或 P <0.01 )。结果见表 2。

表 2 本发明药物对水负荷大鼠尿液离子浓度及 PH值的影响 ±s,n= 10)

呋塞米组高剂量组中剂量组低剂

0-lhK+(mmol/L) 33.84±14.12 35.17±6.76 35.05±19.50 27.17±14.29 28.74±17.86

0-lhNa+(mmol/L) 129.9±26.0 142.6±11.6 150.6±16.0 137.0±35.7 126.9±36.7

0-lhCl-(mmol/L) 75.15±24.17 104.2±11.8* 96.70±18.02 85.30±32.17 76.80±35.38

0-1 hPH 7.477±0.062 7.445±0.053 7.476±0.033 7.417±0.110 7.480±0.087 l-3hK+(mmol/L) 34.18±10.14 38.94±6.81 38.36±6.32 28.77±6.2 34.30±10.21 l-3hNa+(mmol/L) 166.4±13.9 174.7±11.2 179.7±11.7 181.5±11.1* 188.0±13.4* l-3hCl-(mmol/L) 121.1±147.1 135.1±8.7 139.5±12.4* 129.9±9.7 139.9±18.2* l-3hPH 7.407±0.091 7.407±0.061 7.398±0.048 7.418±0.072 7.411±0.094

3-6hK+(mmol/L) 32.62±10.56 38.99±10.21 39.31±20.79 32.25±11.64 26.66±5.23

3-6hNa+(mmol/L) 200.0±43.8 200.7±20.4 196.2±31.8 206.3±24.5 209.4±14.7

3-6hCl-(mmol/L) 144.6±33.9 147.4±22.0 151.0±26.9 153.5±24.6 150.1±21.2

3-6hPH 7.318±0.121 7.239±0.112 7.220±0.107 7.255±0.080 7.304±0.113 注：与空白组比较， *P<0.05， **P<0.01

本实验证实本发明药物可增加 3-6h 的尿量，本发明药物对尿液电解质浓度的影响无明显规律。提示本发明药物具有利尿作用。

二、本发明药物对毛细血管通透性的影响

(一）本发明药物对小鼠肠系膜毛细血管通透性的影响

1实验材料

1.1实验动物

健康 Balb/C小鼠，清洁级，雌性， 60只，体重 18〜22g，购于河北省实验动物中心，许可证号： SCXK(冀）2003 - 1 -003 ,合格证编号： DK050814。动物识别采用 5 %苦味酸标记法。饲养在以岭研究院药理室，光照 12小时 / 天，温度 20〜23°C，相对湿度 40〜60%。小鼠笼养， 6只 /笼。小鼠饲料为全价颗粒饲料，由河北省实验动物中心提供，保持充足的饮水。适应性饲养三天。 1.2实验药物

本发明药物， 4.6g生药 /g药粉，由河北以岭医药研究院有限公司提供。阿司匹林肠溶片，石家庄制药集团欧意药业有限公司，国药准字 H13023635 , 产品批号： 060510，规格： 25mgx l00片。

1.3主要仪器

UV2550分光光度计，日本岛津。

2实验方法

2.1给药剂量与分组

本品临床拟用量 16.5g生药 /天，设定小鼠高、中、低剂量组的剂量分别为人剂量的 20、 10、 5倍，即 5.6、 2.8、 1.4g生药 /kg。另设模型对照组和阿司匹林组，共 5组。见表 3 :

表 3本发明药物对醋酸致小鼠肠系膜毛细血管通透性增高的影响

实验分组和给药剂量

动物数相当于临床的倍数关系模型对照组 ― 12

阿司匹林组 200mg/kg 12

5.6 g生药 /kg 12

本发明药物组 2.8 g生药 /kg 12

1.4 g生药 /kg 12

2.2给药方法

本发明药物高剂量的给药浓度为 0.06g药粉 /ml, 中、低剂量组的药液由高剂量药液稀释而成，阿司匹林组给药浓度为 10 mg/ml，以上均用 0.5 %CMC— Na制成混悬液， 4°C保存。灌胃给药（与临床口服给药途径一致），每天上午 8~9点进行，连续 10天。给药体积为 0.2ml/10g体重。

2.3实验步骤

最后 1 次给药后 lh，小鼠尾静脉注射 0.5 %依文思兰生理盐水溶液 0.1ml/10g体重，随即腹腔注射 0.6 %醋酸 0.1ml/10g， 20min后小鼠脱颈椎处死。在腹部剪一小口，用 6ml生理盐水分数次洗涤腹腔，吸管吸出洗涤液，合并后加入生理盐水至 10ml, 3000rpm离心 15min，取上清液于 590nm比色测定吸光度。

2.4统计方法

采用 SPSS11.5统计软件进行单因素方差分析。 3结果

与模型对照组比较，阿司匹林组 OD值降低（P<0.05 )，小鼠肠系膜毛细血管通透性增加。与模型对照组比较，本发明药物各剂量组 OD值均降低

(PO.05或 P<0.01 )。说明本发明药物可降低小鼠肠系膜毛细血管通透性。结果见表 4。

表 4本发明药物对醋酸致小鼠肠系膜毛细血管通透性增高实验

吸光度的影响 ±s)

*

5.6g生药 /kg 12 0·244 ±0·063**

2.8g生药 /kg 12 0.241 ±0.053**

1.4g生药 /kg 12 0.265 ±0.051*

注：与模型对照组比较， *P<0.05， **P<0.01

本试验结果表明，与模型对照组比较，阿司匹林组 OD值降低（P<0.05 )，小鼠肠系膜毛细血管通透性增加。与模型对照组比较，本发明药物各剂量组 OD值均降低（PO.05或 P<0.01 )。提示本发明药物有降低肠系膜毛细血管通透性的作用。

(二）本发明药物对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响

1实验材料

1.1实验动物

健康昆明种小鼠，清洁级，雌性， 60只，体重 18〜22g。购于河北省实验动物中心，许可证号： SCXK (冀） 2003— 1一 003，合格证编号： DK0509025。动物识别采用 5 %苦味酸标记法。饲养在以岭研究院药理室，光照 12小时 / 天，温度 20〜23 °C，相对湿度 40〜60%。小鼠笼养， 6只 /笼。小鼠饲料为全价颗粒饲料，由河北省实验动物中心提供，保持充足的饮水。适应性饲养三天。

1.2实验药物

1.3主要仪器 UV2550分光光度计，日本岛津.

2实验方法

2.1给药剂量与分组

将小鼠分为下列 5组，见表 5:

表 5本发明药物对二甲苯所：肤毛细血管通透性增高的影响实验相当于临床的倍数关系

5.6 g生药 /kg 12

2.8 g生药 /kg 12

1.4 g生药 /kg 12

2.2给药方法

采用灌胃给药， 0.2ml/10g体重，每天上午 9〜10点进行，连续 10天。 2.3实验步骤

小鼠腹部正中去毛。最后 1次给药后 lh小鼠尾静脉注射 0.5 %依文思兰生理盐水溶液 O.lml/lOg体重，随即于小鼠腹部正中部位去毛皮肤上滴二甲苯 0.03ml/只， 20min后小鼠脱颈椎处死。剥下腹部皮肤，用直径 0.9cm打孔器取下等面积蓝染皮肤，用手术剪剪碎投入有塞玻璃试管内，倒入丙酮-生理盐水（7: 3 ) 混合液 10ml, 浸泡后次日离心，取上清液于 610nm处比色测定吸光度。

2.4统计方法

各组结果与模型对照组相比，用 SPSS11.5进行统计。

2.3结果

与模型组比较，阿司匹林组小鼠 0D值降低（P<0.01 )，说明阿司匹林降低皮肤毛细血管通透性。与模型组比较，本发明药物组 5.6g生药 /kg组降低 0D值 (Ρ<0·01 )，本发明药物组 2.8 g生药 /kg组降低 0D值 (Ρ<0·05 )。提示本发明药物可以降低小鼠皮肤毛细血管通透性。结果见表 6。

实验结果 is)

0D值模型对照组 12 0.061士 0.026 阿司匹林组 200mg/kg 12 0.031士 0.013**

5.6g生药 /kg 12 0.027士 0.017**

本发明药物组 2.8g生药 /kg 12 0.039士 0.018*

1.4g生药 /kg 12 0.051士 0.025

注：与模型对照组比较， *P<0.05， **P<0.01

本试验证实本发明药物可以降低小鼠皮肤毛细血管通透性。

三、本发明药物对微循环障碍的影响

(一）本发明药物对大鼠肠系膜微循环的影响

通过本发明药物对大鼠肠系膜微循环障碍的影响实验，评价受试物对内脏微循环的影响。将 96只雌性 SD大鼠随机分为 6组，空白对照组、模型对照组、复方丹参滴丸组、本发明药物 4.4、 2.2、 l. l g生药 /kg组，每组 12只。连续灌胃给药 10 天。最后 1 次给药后半小时左右大鼠 20 %乌拉坦 (0.7ml/100g) 腹腔注射麻醉。剪开腹腔，拉出部分小肠，将回肠系膜有明显毛细血管分布的部分平铺在 37°C水浴的透明载物台上。在 10倍物镜下测量固定血管的管径、血液流速、计算每秒血流量，观测固定视野的血管计数、血管交叉数。给药后 1小时尾静脉快速注射 10 %高分子右旋糖酐（6ml/kg) 造微循环障碍模型。造模后 5min、 15min、 30min、 45min、 60min分别观测上述指标。计算各时刻指标的变化率。与模型组比较，本发明药物 l. lg生药 /kg 组大鼠的微循环在 5min、 15 min 时血管数目变化率降低（PO.01 或 P<0.05 ) , 在 30 min、 45 min和 60min时管径变化率降低（P<0.05 )。本发明药物 2.2g生药 /kg组大鼠的微循环 5min时流量、血管数目和血管交叉数的变化率降低（P<0.05 )， 15 min时只有血管交叉数变化率降低（P<0.05 )， 30 min 时管径、血管数目变化率降低（P<0.05 )， 45min和 60min时只有血管数变化率的降低（P<0.01 )。本发明药物 4.4g生药 /kg组大鼠的微循环 5min时流速、流量、血管数目、血管交叉数的变化率均有降低（PO.01或 P<0.05 )， 15min、 30min时所有指标的变化率都降低（PO.01或 P<0.05 )， 45min和 60min时管径、流速、流量变化率降低（PO.01或 P<0.05 )。提示本发明药物可缓解肠系膜微循环障碍。

(二）本发明药物对小鼠耳廓微循环障碍的影响

1 实验材料

1.1实验动物健康 KM小鼠，清洁级，雌性， 120只，体重 18〜22g，购于河北省实验动物中心，许可证号： SCXK (冀） 2003— 1一 003，合格证编号： 603200。动物识别采用 5 %苦味酸标记法。饲养在河北医科大学医药研究院药理室，光照 12小时 /天，温度 20〜23°C，相对湿度 40〜60%。小鼠笼养， 10只 /笼。小鼠饲料为全价颗粒饲料，由河北省实验动物中心提供，自由饮水。适应性饲养三天。

1.2实验药物

本发明药物， 4.6g生药 /g药粉，由河北以岭医药研究院有限公司提供。复方丹参滴丸，天津天士力制药股份有限公司生产，批准文号：国药准字 Z10950111。

1.3 试剂

高分子右旋糖酐，分子量 50万，深圳汉邦多糖生物科技有限公司。 1.4 实验仪器

BI— 2000医学图像分析系统，成都泰盟科技有限公司。

2 实验方法

2.1 给药剂量与分组

将小鼠按体重均衡随机分为下列 6组，见表 7:

表 7 本发明药物对小鼠耳廓微循环障碍的影响实验分组和给药剂量

相当于临床的倍数关系空白对照组 20

模型对照组 20

丹参滴丸组 270mg/kg 20 20

高剂量 5.6生药 /kg 20 20

中剂量 2.8生药 /kg 20 10

低剂量 1.4生药 /kg 20

2.2 给药方法

各组用 0.5 %羧甲基纤维素钠（CMC-Na)作溶剂配药。灌胃给药，每天上午 8~9点进行，每只鼠连续给药 10天，空白对照组和模型对照组给予 0.5 % CMC-Na 给药体积为 0.2ml/10g体重。

2.3 实验步骤

每只鼠在最后 1次给药后 lh作微循环检查。给药后半小时左右小鼠 10 %水合氯醛腹腔注射麻醉。麻醉后，将小鼠仰卧在小鼠观测台上，使耳廓平展在观测台上，在观测台和耳廓表面滴加少许液体石蜡。观察小鼠耳廓微循环。记模丹低高空中录造模前及造模后 5、 15、 30、 45、 60min耳廓微血流流态：

参剂剂剂型白

1 ) 线懂懂懂流对对滴：血流快、呈光滑条索状，无颗粒感；

2 ) 线粒流：血流较快，呈条索状，稍有颗粒感；

3 ) 粒线流：血 977668流较慢，虽连续成线，但有明显颗粒感；

4) 粒流：血流慢 11，轴流缘流混杂，如泥沙样；

246688级

5 ) 粒缓流：血流呈泥沙样，连续缓慢流动；

6) 粒摆流：血流呈泥沙状 9 8888级，虽向前流，但前后摆动；

7) 停滞：血流停滞不动。

2.4 统计方法 22 11111111级

各组与模型组比较，用 SPSS11.5软件做秩和检验。

3 结果级造模前各组小鼠耳廓微循环微血流流态基本为 1、 2、 3级，各组与空白级

组比较无差异。造模后，与空白组比较，模型组小鼠耳廓微循环微血流流态级别增加（PO.05或 P<0.01 )，且随时间延长微循环障级碍程度加重。与模型组比较，丹参滴丸组微血流流态在 15min级别降低（P<0.05 )， 45min和 60min 级别降低（P<0.01 )。与模型组比较，本发明药物高、中剂量级组 15、 30、 45 和 60min级别均降低（PO.05或 P<0.01 )。与模型组比较，本发明药物低剂量组 15和 60min时级别降低（PO.05或 PO.01 )。结果见表 7-12。

表 7 本发明药物对小鼠耳廓微循环障碍的影响实验造模前流态

0 0 0 0

0 0 0 0 0.128

0 0 0 0 0.239

1 0 0 0 0.984

0 0 0 0 0.697

1级 2级 3级 4级 5级 6级 7级

空白对 19 7 11 1 0 0 0 0

2 10 3 1 0 0 0 0.039 17 2 8 1 3 2 0 0 0.352 模丹低高空中模丹低高空中 17 3 10 2 2 0 0 0 0.837 丹低高中

模丹低高参剂剂剂空型中白参剂剂剂型白参齐齐齐 18 1 13 3 1 0 0 0 0.868 遣遣懂懂参剂剂剂型对对滴白对对滴滴量量量 16 0 13 3 0 0 0 0 0.867 懂懂对对滴

注： ^Δ表示与空白对照组比较，表 9 本发明药物对小鼠耳廓微循环障碍的影响实验造模后 15min流态幺日口" 15min

n 1级 2级 3级 4级 5级 6级 7级

9 6 0 1 0 0

6 0 9 4 0 0 0 0.000^ΛΛ 7 0 11 1 2 0 0 0.146 7 2 7 7 1 0 0 0 0.022* 8 0 L0 6 2 0 0 0 0.036* 6 0 9 6 0 0 0 0.023* 注： ^ΔΔ表示与空白对照组比较， *表示与模型对照组比较， Ρ<0.05 表 10 本发明药物对小鼠耳廓微循环障碍的影响实验造模后 30min流态 n 30min _p

1级 2级 3级 4级 5级 6级 7级

4 0

11 0 0.001^ΛΛ

0 0.092

0 0.000**

7 0 0.043*

11 0 0.280 注： ^ΔΔ表示与空白对照组比较， *表示与模型对照组比较， Ρ<0.05; **表示与模型对照组比较，

表 11 本发明药物对小鼠耳廓微循环障碍的影响实验造模后 45min流态别 _n 45min

^J 1级 2级 3级 4级 5级 6级 7级

9 1 1 0 0

6 0 6 8 1 0 0 0.000" 7 4 7 6 0 0 0 0 0.000** 7 10 1 0 0 0 0.000** 8 4 9 3 1 0 0 0.034* 6 0 4 6 6 0 0 0 0.144 注： ^ΔΔ表示与空白对照组比较， *表示与模型对照组比较， Ρ<0.05模丹低高空中; **表示与模型对照组比较，

参剂剂剂型白

表 12 本懂懂懂发对对滴明药物对小鼠耳廓微循环障碍的影响实验造模后 60min流态

60mm

n P

1级 2级 3级 4级 5级 6级 7级

19 4 12 0 2 1 0 0

16 0 0 6 6 2 1 0 0.000^ΛΛ

17 8 7 2 0 0 0 0 0.000**

17 3 13 1 0 0 0 0 0.000**

18 1 6 11 0 0 0 0 0.000**

16 2 4 7 3 0 0 0 0.002** 注： ^ΔΔ表示与空白对照组比较， **表示与模型对照组比较， Ρ<0.01

3. 结论

本发明药物有缓解高分子右旋糖酐引起的小鼠耳廓微循环障碍的作用。四、本发明药物对免疫功能的影响

(一）碳粒廓清实验

1实验材料

1.1 实验动物

健康 Balb/C小鼠，清洁级，雌性， 72只，体重 18〜22g。购于河北省实验动物中心，许可证号： SCXK (冀） 2003— 1一 003，合格证编号： DK0506 一 0059。动物饲养在河北医科大学医药研究院药理室，小鼠笼养， 6只 /笼，光照 12小时 /天，温度 20〜23 °C，相对湿度 40〜60%。饲料为全价颗粒饲料，由河北省实验动物中心提供。自由饮水。适应性饲养 3天。

1.2实验药物

本发明药物， 4.6g生药 /g药粉，由河北以岭医药研究院有限公司提供。环磷酰胺，上海华联制药有限公司，沪卫药准字（1995 )第 012034号，生产批号： 050309。左旋咪唑，湖南洞庭药业股份有限公司，批号： 060417。

1.3主要仪器

UV2550分光光度计，日本岛津。

1.4主要试剂

印度墨汁，北京笃信精细制剂厂，规格： 100ml /瓶，批号： 40823。 2实验方法 2.1给药剂量与分组

本发明药物临床拟用量 16.5g生药 /天，即 0.28g生药 /kg, 设定剂量为 5.6 g生药 /kg、 2.8 g生药 /kg、 1.4g生药 /kg/d，分别相当于拟临床人用剂量的 20、 10、 5倍。另设空白组和模型组，见表 13。

表 13本发明药物对免疫功能低下小鼠非特异性免疫功能

的影响实验分组和给药剂量

组别剂量动物相当于临床的倍数关系空白对照组一 12 一

环磷酰胺组 40 mg/kg 12 一

左旋咪唑组 45 mg/kg 12 一

5.6 g生药 /kg 12 20

本发明药物 2.8 g生药 /kg 12 10

1.4 g生药 /kg 12 5

2.2给药方法

本发明药物给药浓度分别为 0.06g药粉 /ml、 0.03 g药粉 /ml、 0.015 g药粉 /ml。采用灌胃给药（与临床推荐途径相同）， 0.2ml/10g，连续给药 14天。环磷酰胺在第 12和 13天连续腹腔注射给药 2次， 40 mg/kg。左旋咪唑给药浓度为 2.25 mg/kg，灌胃连续给药 14天， 0.2 ml/10g。

2.3检测指标和检测方法

最后一次给药 24h后，每鼠尾静脉注射 20%印度墨汁 O.lml/lOg体重，于 1 和 10(t_1Q)分钟后，分别从眼眶静脉取血 20μ1，力口到 2ml0.1% Na₂CO₃ 溶液中摇匀，用酶标仪在 680nm下比色，测光密度（以下分别用和 OD₁₍₎ 来表示 1分钟和 10分钟所取血样的光密度），按下式计算廓清指数 κ值。

廓清指数 K= TO -logODIO = _logODl/ODl0

丄 lO—tl 丄 10—ti

K值经体重及肝脾重换算后，得吞噬指数 α值：吞噬指数 α= ^ ^ ^ x K

肝月牢里

2.4 统计方法

用 SPSS11.5软件进行单因素方差分析。

3 结果

与空白对照组比较，模型对照组的廓清指数 Κ和吞噬指数 α均降低 (Ρ<0.01 )。与模型对照组比较，左旋咪唑组的廓清指数 Κ和吞噬指数 α升高（Ρ<0.01 )。与模型对照组比较，本发明药物 5.6 g生药 /kg组的廓清指数 Κ 和吞噬指数 α升高（P<0.01 )。 2.8g生药 /kg组的廓清指数 Κ升高（Ρ<0.05 )，吞噬指数 α有升高的趋势。

表 14 本发明药物对免疫功能低下小鼠单核巨噬细胞功能

的影响结果 (； ±s， n= 12)

廓清指数 K 吞噬指数

空白对照组一 0.012±0.002 0.282±0.059 模型对照组 40 mg/kg 0.008±0.002^ΔΔ 0.178±0.055^ΔΔ 左旋咪唑组 45 mg/kg 0.012±0.003** 0.261±0扁

5.6 g生药 /kg 0.012±0.004** 0.245±0.077*

本发明药物组 2.8 g生药 /kg 0.011±0.002* 0.235±0.050

1.4 g生药 /kg 0.007±0.002 0.157±0.053

注：与空白对照组比较， ^ΔΔΡ<0.01 ;与模型对照组比较， *Ρ<0.05， **Ρ<0.01 通过小鼠碳粒廓清实验，提示本发明药物能增强免疫功能低下小鼠的单核巨噬细胞功能。

(二）血清溶血素实验

1 实验材料

1.1实验动物

健康 Balb/C小鼠，清洁级，雌性， 72只，体重 18〜22g，购于河北省实验动物中心，许可证号： SCXK (冀） 2003— 1一 003，合格证编号： DK0507 一 0032。饲养在河北医科大学医药研究院药理室，光照 12小时 /天，温度 20〜 23 °C，相对湿度 40〜60%。小鼠笼养， 6只 /笼。小鼠饲料为全价颗粒饲料，由河北省实验动物中心提供。自由饮水。适应性饲养三天。

1.2实验药物

本发明药物， 4.6g生药 /g药粉，由河北以岭医药研究院有限公司提供。环磷酰胺，上海华联制药有限公司，沪卫药准字（1995 )第 012034号，生产批号： 050309。

盐酸左旋咪唑（阳性药），由湖南洞庭药业股份有限公司提供，国药准字 H43020589 , 产品批号： 050330。

1.3 主要仪器

UV2550分光光度计，日本岛津。

1.4实验试剂

SRBC保存液（Alsever液）：葡萄糖 2.05g，氯化钠 0.42g，柠檬酸钠 0.8g，蒸馏水 100ml, 8磅 10分钟灭菌后备用。都氏试剂（测血红蛋白用，结合血红蛋白，产生颜色反应）：碳酸氢钠 l.Og, 高铁氰化钾 0.2g，氰化钾 0.05g，双蒸水 1000ml。

补体：新鲜豚鼠（至少 3只）混合血清经压积 SRBC ( 10： 1 ) 于 4°C吸收 30分钟后离心，取上清，置一 20°C以下备用。每只豚鼠约有 10ml血，约取到 3ml血清。

SRBC: 在无菌条件下，自健康成年绵羊外颈静脉取血，置血液于有玻璃珠的三角烧瓶中（事先加入 2倍量的 SRBC保存液）轻摇 10分钟以除去纤维蛋白，置 4°C冰箱备用，可保存 3周。临用时用生理盐水洗涤 3次，经 2000rpm离心 10分钟得压积红细胞，再按所需浓度稀释。

2 实验方法

2.1给药剂量与分组

将小鼠按体重均衡随机分为下列 6组，见表 15 :

表 15 本发明药物小鼠血清溶血素实验分组和给药剂量

相当于临床的倍数关系空白对照组 12

模型对照组 12

左旋咪唑组 12 45mg/kg

12 5.6 g生药 /kg

12 2.8 g生药 /kg

12 1.4 g生药 /kg

2.2给药方法

本发明药物高剂量的给药浓度为 0.06g药粉 /ml, 中、低剂量组的药液由高剂量药液稀释而成，左旋咪唑组的给药浓度为 2.25mg/ml，以上均用 0.5 %CMC— Na制成混悬液， 4°C保存。灌胃给药（与临床口服给药途径一致），每天上午 8~9点进行，连续 10天。给药体积为 0.2ml/10g体重。

2.3实验步骤

第 11天小鼠腹腔注射 0.2ml 50%SRBCo第 12、 13天腹腔注射环磷酰胺 30mg/kg，每天一次。第 15天最后 1次给药后 lh，眶下静脉取血，分离血清，将血清稀释（一般 500倍以上）后供测定。溶血反应：反应管内依次加入经稀释的血清 lml， 5%SRBC 0.5ml, 10%补体 lml，置 37 °C恒温水浴中保温 30分钟，然后移至冰浴中终止反应， 1500rpm离心 5分钟，取上清液 50μ1 加都氏试剂 150μ1于酶标板上，摇匀放置 10分钟，用酶标仪于 540nm波长测量吸光度。 SRBC半数溶血值：取 5%SRBC 0.25ml加都氏液至 4ml，比色读取吸光度值，即为实验中所用 SRBC半数溶血时的吸光度值。计算：样品管半数溶血值（HC₅。）按下式计算。

样品的吸光度值

每只鼠的血清 HC50= 〈稀释倍数

SRBC半数溶血时的吸光度值

2.4统计方法

采用 SPSS 11.5统计软件做非参数检验。

3 结果

与空白对照组比较，模型对照组的 HC₅。降低（P<0.01 )。与模型对照组，左旋咪唑组小鼠的 HC₅。升高（P<0.01 )。与模型对照组比较，与模型组比较，本发明药物 5.6g生药 /kg组的 HC_5Q增加（P<0.05 )。结果见表表 16 本发明药物组小鼠血清溶血素实验结果 ±s， n=12)

空白对照组 467·9±120·9

模型对照组 51.48±10.36^ΛΛ 左旋咪唑组 45mg/kg 71.85±12.83**

5.6g生药 /kg 68.49±18.66*

2.8g生药 /kg 55.08±10.24

1.4g生药 /kg 45·98±11·23

注：与空白组比较， Ρ<0.01 ; 与模型组比较， * Ρ<0.05 , ** Ρ<0.01 通过小鼠血清溶血素实验，提示本发明药物能增强免疫功能低下小鼠的体液免疫功能。

(三）脾脏淋巴细胞增殖实验

通过脾脏淋巴细胞增殖实验研究本发明药物对体液免疫和细胞免疫功能的影响。将 96只健康雌性 Balb/C小鼠随机分为 8组，分别为空白对照组，模型对照组，左旋咪唑组，本发明药物 6.30、 4.20、 2.80、 1.87禾卩 1.24 g生药 /kg, 每组 12只。连续灌胃给药 12天。给药第 9、 10天腹腔注射环磷酰胺 30mg/kg，每天一次。第 12天处死小鼠，制备脾细胞悬液，用溶破液洗涤脾细胞。用 3%的冰醋酸进行细胞计数，活细胞数需在 95%以上。将细胞用¾ -立养液稀释成 1 X 106个 /ml浓度备用。在超净台上，将脾细胞加入无菌培养板孔中，每孔 200 μ 1，每一样品重复 3-4孔。加入 Con-A或 LPS。放入 5%C02 培养箱中，培养 72小时。终止培养前 6小时，每孔加入 3H-TdRl μ 1，使其终浓度为 l〜5 ci/ml。用微量多头细胞收集仪将细胞抽吸在 49型玻璃纤维滤纸上。置 80°C烘箱内干燥 30分钟。将烘干的滤纸片放入盛有闪烁液的小瓶中，用液闪仪测定样品的放射强度（cpm)。各组剩余动物取胸腺，脾脏称重，计算脏器指数。与模型组比较，本发明药物 6.3 g生药 /kg组的 Con-A放射强度和 LPS放射强度升高（P<0.01 )。 1.24g生药 /kg组的 Con-A放射强度升高（P<0.01 )， LPS放射强度有升高的趋势。本发明药物的量效关系呈" U" 型。与空白对照组比较，模型组小鼠胸腺指数降低（P<0.05 )。提示本发明药物对增强免疫功能低下小鼠脾脏淋巴细胞增殖能力。量效关系呈 "U"形。

急性毒性实验结果表明，本发明药物 331.2 g生药 /kg—日内连续 3次最大浓度，最大体积给药，小鼠未见明显毒性反应。该剂量相当于人拟临床剂量的 1204倍。

大鼠长期毒性实验结果表明，本发明药物 4.2g、 8.4g、 16.8g生药 /kg剂量下大鼠长期给药无明显毒性反应。

综上所述，本发明药物具有利尿、降低毛细血管通透性、缓解微循环障碍以及增强免疫功能的作用，针对特发性水肿既有对症用于也有对因用于，具有整体多环节和标本兼治的中医药优势和特色。

Claims

权利要求书

1、一种用于特发性水肿的药物，其特征在于含有如下重量份的原料药：当归 159-240份柴胡 106-160份茯苓 212-322份

泽泻 126-192份白芍 126-192份。

2、如权利要求 1 所述的药物，其特征在于以重量份数计还含有如下原料白术 126-192份猪苓 126-192份益母草 318-482份

泽兰 126-192份香附 105-159份桂枝 105-159份。

柴泽桂白

3、如权利要求 2所述的药术兰枝胡物，其特征在于所述原料药以重量份计为: 当归 186-200份柴胡 133-144份茯苓 248-267份泽泻 160-172份白术 149-160份猪苓 154-160份益母草 400-413份泽兰 145-160份白芍 160-180份香附 128-133份桂枝 133-145份。

4、如权利要求 3所述的药物，其特征在于所述原料药以重量份计为:

200份 133份茯苓 267份 160份 160份 160份母草 400份 160份

160份

香附 133份 133份。

5、如权利要求 1-4中任一所述的药^

片剂、散剂、口服液、软胶囊、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂。

6、一种用于特发性水肿药物的制备方法，包括如下步骤：

a) 按重量份称取原料药茯苓 212-322份，经水提取 3次，第一次加重量份为原料药 10-15倍的水，浸泡 0.5-2小时，提取 1.5-3小时；第二次、第三次加重量份为原料药 10-13倍的水，分别提取 0.5-2.5小时；所得提取液滤过减压浓缩至在 60°C测定相对密度约为 1.0-1.1，备用；

b) 按重量份称取原料药当归 159-240份、柴胡 106-160份、泽泻 126-192 份，经浓度为 60-80% (v/v) 的乙醇提取 2次，第一次加重量份为原料药 6-9 倍的乙醇，浸泡 0.5-2小时，提取 1-3小时；第二次加重量份为原料药 5-8倍的乙醇，提取 1-3小时，所得提取液滤过减压去除乙醇，浓缩至在 60°C测定相对密度约为 1.0-1.1，备用；

c)将前述所得备用浓缩液合并，减压浓缩至在 60°C测定相对密度 1.10〜 1.20，得清膏，备用；

d) 按重量份称取原料药白芍 126-192份，粉碎成平均粒径为 150-180μιη细粉；

e)将步骤 c) 所得清膏、步骤 d) 所得白芍细粉和适量药物学可接受辅剂制得胶囊剂、片剂、散剂、口服液、软胶囊、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂。

7、一种用于特发性水肿药物的制备方法，包括如下步骤：

a) 按重量份称取选净的益母草 318-482份、茯苓 212-322份、猪苓 126-192 份加水提取 3次，第一次加重量份为原料药 10-15倍量的水，浸泡 0.5-2小时，提取 1.5-3小时；第二次、第三次加 10-13倍量，分别提取 0.5-2.5小时；提取液滤过，合并减压浓缩至在 60 °C测定相对密度为 1.0-1.1，备用；

b) 按重量份称取选净的白术 126-192份、桂枝 105-159份、香附 105-159 份、泽兰 126-192份，加重量份为原料药 6-10倍量的水，浸泡 0.5-2小时，水蒸汽蒸馏法提取挥发油 4-7小时，所得挥发油另器收集，出油率不少于 0.25%; 所余提取液滤过后减压浓缩至在 60 °C测定相对密度为 1.0-1.1，备用；

c) 按重量份称取选净的当归 159-240份、柴胡 106-160份、泽泻 126-192 份加 60-80% (v/v ) 乙醇提取 2次，第一次加重量份为原料药 6-9倍量的乙醇，浸泡 0.5-2小时，提取 1-3小时；第二次加 5-8倍量，提取 1-3小时；提取液滤过，合并减压回收乙醇至在 60°C测定相对密度为 1.0-1.1，备用；

d) 将前述所得备用浓缩液合并，减压浓缩至在 60°C测定相对密度 1.10〜 1.15，得清膏，备用；

e) 按重量份称取选净的白芍 126-192份，粉碎成 150-180μιη的细粉； f) 将前述所得清膏，以白芍细粉和适量辅料为底料，喷雾制粒， 32 目筛整粒，备用；

8、如权利要求 7所述的药物制备方法，其中：

a) 按重量份称取选净的益母草 400-413份、茯苓 248-267份、猪苓 154-160 份加水提取 3次，第一次加重量份为原料药 13倍量的水，浸泡 1小时，提取 2 小时；第二次、第三次加 11倍量，分别提取 1.5小时、 1小时；提取液滤过，合并减压浓缩至在 60°C测定相对密度为 1.05，备用；

c) 按重量份称取选净的当归 186-200份、柴胡 133-144份、泽泻 160-172 份加 70% (v/v) 乙醇，提取 2次，第一次加重量份为原料药 8倍量的乙醇，浸泡 1小时，提取 2小时；第二次加 6倍量，提取 1.5小时；提取液滤过，合并减压回收乙醇至在 60°C测定相对密度为 1.05，备用；

e) 按重量份称取选净的白芍 160-180份，粉碎成 150-180μιη的细粉； f) 将前述所得清膏，以白芍细粉和适量辅料为底料，喷雾制粒， 32目筛整粒，备用；

9、如权利要求 7所述的药物制备方法，其中：

b) 按重量份称取选净的白术 160份、桂枝 133份、香附 133份、泽兰 160 份，加重量份为原料药 8倍量的水，浸泡 1小时，水蒸汽蒸馏法提取挥发油 5 小时，所得挥发油另器收集，出油率不少于 0.25%; 所余提取液滤过后减压浓缩至在 60°C测定相对密度为 1.05，备用；

c) 按重量份称取选净的当归 200份、柴胡 133份、泽泻 160份加 70% (Wv) 乙醇，提取 2次，第一次加重量份为原料药 8倍量的乙醇，浸泡 1小时，提取 2小时；第二次加 6倍量，提取 1.5小时；提取液滤过，合并减压回收乙醇至在 60°C测定相对密度为 1.05，备用；

e) 按重量份称取选净的白芍 160份，粉碎成 150-180μιη的细粉； f) 将前述所得清膏，以白芍细粉和适量辅料为底料，喷雾制粒， 32 目筛整粒，备用；