一种治疗心血管疾病的药物組合物及其应用 技术领域
本发明涉及医药技术领域, 具体涉及一种治疗心血管疾病的药物组合物 及其应用。
皂角 (又名皂荚)在我国分布很广, 其不但具有
背景技术
优良的林学价值, 而且在中成药的临床开发中具有十分广阔的应用前景。 皂角在不同发育条件下可形成两种果实, 成熟肥大者为大皂角(Fructus Gleditsiae Sinensis), 发育不完全瘦小者为猪牙皂 (Fructus Gleditsiae
Abnormalis)o
范科华等 [范科华等, 华西药学杂志, 2006,21(4):339-342]提出了皂角提取 物对心肌缺血犬心肌梗死具有保护作用; 丁云录等 [丁云录等, 天然产物的研 究与开发, 2006,18: 275- 278]对麻醉犬冠脉结扎形成急性心肌缺血的保护作用 进行了研究,发现皂角皂苷能改善心肌缺血, 缩小心肌梗死面积; 丁云录等 [丁 云录等, 中国新药与临床杂志, 2006, 26(2): 110-113]对皂荚皂苷对大鼠心肌缺 血的影响也做了研究,发现皂荚皂苷在改善大鼠心肌缺血、 缩小心肌梗死面积 方面有艮好的疗效。
关于皂角皂苷的提取方法, 目前报道的文献有: 专利申请号:
200910020233.7, 发明名称: 一种皂荚皂苷提取物及其制备方法与应用, 该本 发明公开了一种皂荚皂苷提取物及其制备方法以及在治疗肺癌、 肝癌、 胃癌、 大肠癌和白血病中的应用, 该皂荚皂苷提取物是以猪牙皂或大皂角为原料, 经 水或乙醇提取和大孔树脂分离纯化而制得, 其总皂苷含量在 60 %以上, 皂苷提 取物主要由多种五环三萜皂苷化合物组成。 专利申请号: 02109825.5, 发明名 称: 从皂角中提取三萜酸的方法及三萜酸的医药用途和中药制剂, 本发明公开 一种从皂角中提取三萜酸的方法及三萜酸的医药用途和中药制剂,将中药皂角 用 50 ~ 70 %的乙醇提取、 脱色、 过滤、 回收乙醇, 再用去离子水稀释, 经大孔 吸附树脂柱纯化、 洗脱、 浓缩、 干燥, 得三萜总皂苷; 该发明的提取物可用于 制备治疗和预防高血脂症、 脂肪肝和动脉粥样化等疾病的药物。
赫玉芳 [赫玉芳, 皂角皂苷元制备及其抗心肌缺血药效学研究, 长春中医 药大学硕士学位论文, 2006]发现皂角皂苷毒性较大, 限制了皂角皂苷在临床 中的应用; 此外, 皂角皂苷元中的含有活性成分刺嚢酸, 专利申请号:
03100676.0, 发明名称: 刺嚢酸的制备方法、 药物制剂及医药新用途, 公开了 皂角皂苷酸水解后制得的刺嚢酸在治疗冠心病、心绞痛、心肌缺血疾病中表现
出了很好的药效。 目前, 针对皂角皂苷元文献的报道较少, 除了刺嚢酸外, 陈 晓岚等, 皂角皂苷元化学成分研究, 中草药, 2001年 32卷 3期, 报道了皂角皂 苷元的化学结构, 通过提取、 完全水解、 层析等方法, 从皂角中获得 2种皂苷 元, 分别为 3 -羟基 - 12 -齐墩果烯 _ 28 -酸和 3, 16 -二羟基 - 12 -齐墩果浠 - 28 -酸。 但是目前对皂角皂苷元的研究仅停留在单一活性成分研究^ 5出之 上, 由于药材提取物本身就是由大量已知和未知成分组成, 皂角皂苷元中的化 合物也较多, 如何充分地发挥皂角皂苷元的活性, 是目前急需解决的问题。 发明内容
本发明的技术方案是提供了一种治疗心血管疾病的药物组合物,本发明的 另一技术方案是提供了一种含有刺嚢酸和齐墩果酸的皂角提取物及其制备方 法和用途。
本发明提供了一种治疗心血管疾病的药物组合物, 其活性成分是由下述 重量配比的成分组成:
刺嚢酸 3~1份、 齐墩果酸 1份。
进一步优选地, 其活性成分是由下述重量配比的成分组成:
刺嚢酸 3〜2份、 齐墩果酸 1份。
更进一步优选地, 其活性成分是由下述重量配比的成分组成:
刺嚢酸 3份、 齐墩果酸 1份。
其中, 所述的刺囊酸、 齐墩果酸来源于植物提取物或化学合成物。
本发明还提供了所述的药物组合物在制备预防或治疗心血管疾病的药物 中的用途。
其中, 所述的药物是预防或治疗冠心病心绞痛、 心肌缺血、 心肌梗死: 心律失常、 高脂血症及动脉粥样硬化的药物。
本发明提供了一种皂角提取物, 它含有刺嚢酸和齐墩果酸的总重量百分 比为 90.0%~99.9%, 且刺囊酸与齐 iit果酸的重量比为 3:1~1 :1。
进一步优选地, 刺嚢酸与齐墩杲酸的重量比为 3: 1~2:1 , 更优选为 3:1。 本发明还提供了一种制备皂角提取物的方法, 它包括如下步骤:
a、 取大皂角药材, 加水煎煮, 过滤, 浓缩;
b、 浓缩液加入酸、 水或含水乙醇, 其中酸的浓度为 2mol/L、 乙醇浓度 1-45%, 搅拌、 沸腾水解, 过滤, 滤饼用纯化水洗至流出液 pH>6, 80°C干燥 得皂角皂苷元粗品;
c、 皂角皂苷元粗品用 15〜40倍的 95%乙醇加热溶解, 加 1~4%药用活性
炭, 搅拌、 沸腾 30min, 趁热过滤, 滤液调 pH值 2〜6, 回收乙醇, 冷却, 析 晶, 80°C干燥得皂角提取物。
本发明还提供了所述的皂角提取物在制备预防或治疗心血管疾病的药物 中的用途。
其中, 所述的药物是预防或治疗冠心病心绞痛、 心肌缺血、 心肌梗死、 心律失常、 高脂血症及动脉粥样硬化的药物。
申请人在实验中发现, 刺嚢酸使用过程中具有较强的毒副作用, 而且在 研究中也发现不但刺嚢酸存在一定的毒性, 皂角皂苷元(刺嚢酸和齐墩果酸 总含量在 70%左右)也具有一定的毒副作用, 具体是共纳入 6例(男女各半) 受试者, 给药剂量及用法为: 一次 500mg, —日三次, 其中 4例(男女各半) 受试者在累计给药 5 ~ 11次时, 出现 ALT和 AST升高。 为了更好的发挥刺 囊酸的药效学性能, 降低毒副作用, 申请人经过大量的实验研究发现在活性 组分为刺嚢酸与齐墩果酸, 二者重量比为 3: 1-1 : 1之间, 能够降低其在治疗心 血管疾病中的毒副作用, 使刺嚢酸的安全范围更大, 更加安全有效; 同时从 皂角中制备的皂角提取物, 含有刺嚢酸与齐墩果酸总含量为 90.0%-99.9%, 二者重量比为 3:1-1 :1之间,通过控制刺囊酸和齐墩果酸的总含量和二者的重 量比, 使优化后的皂角提取物不但能够显著治疗心血管疾病, 而且能显著降 低肝毒性, 同时也能大大降低了生产成本。
综上所述, 本发明与现有技术相比具有以下积极效果:
1、通过控制药物组合物中刺嚢酸和齐墩果酸的比例,显著降低了肝毒性, 使其在心血管疾病治疗中更安全有效。
2、通过控制皂角提取物中刺囊酸和齐墩果酸的重量比,从而得到优化后 的皂角提取物, 不但可以降低肝毒性, 而且能大大降低了生产成本。 附图说明
图 1 药物的 HPLC语图: A刺嚢酸, B齐墩果酸, C: 实施例 1制备的皂 角提取物(刺嚢酸:齐墩果酸 =1:1 ), D: 实施例 2制备的皂角提取物(刺嚢酸: 齐墩果酸 =2.1 : 1 ), E: 实施例 3制备的皂角提取物(刺嚢酸:齐墩果酸 =2.4:1 ), F: 实施例 4制备的皂角提取物 (刺嚢酸:齐墩果酸 =3: 1 )。
图 2 Z01组主动脉 HE染色病理图片 (χ ΙΟΟ )
图 3 Z02组主动脉 HE染色病理图片 (xlOO )
图 4 立普妥组主动脉 HE染色病理图片 (xlOO )
图 5力平之组主动脉 HE染色病理图片 (x lOO )
图 6模型组主动脉 HE染色病理图片 (x lOO )
图 7空白组主动脉 HE染色病理图片 (xlOO ) 发明的具体实施方式
实施例 1 本发明皂角提取物的制备
取大皂角药材 600g, 切成约 1cm的短段, 加 10倍量水煎煮两次, 第一次 1.5 小时, 第二次 1小时, 合并两次滤液, 减压浓缩至相对密度为 1.05 (室温)。 浓缩液加入适量盐酸、 水和乙醇, 使溶液的总体积为浓缩液体积的 4倍、 盐 酸的浓度为 2mol/L、 乙醇的含量为 45%, 加热、 搅拌、 沸腾水解 3小时, 过 滤, 滤饼用纯化水洗至流出液 pH>6, 80°C干燥得皂角提取物粗品 15.5g。 皂 角提取物粗品加入 230mL 乙醇, 加热溶解, 加入 2.3g药用活性炭, 搅拌、 沸腾 30min, 趁热过滤, 滤液调 pH值 2~3, 室温静置 24小时, 过滤, 滤饼 用纯化水洗至流出液 pH>6, 8(TC干燥得皂角提取物 6.3g。 用高效液相色语 测定所得皂角提取物中刺嚢酸和齐墩果酸的总含量为 97.78%, 其中刺嚢酸: 齐墩果酸 =1:1。
实施例 2 本发明皂角提取物的制备
取大皂角药材 800g, 切成约 1cm的短段, 加 8倍量水煎煮两次, 第一次 1.5 小时, 第二次 1小时, 合并两次滤液, 减压浓缩至相对密度为 1.10 (室温)。 浓缩液加入适量盐酸、 水, 使溶液的总体积为浓缩液体积的 4倍、 盐酸的浓 度为 2mol/L, 加热、 搅拌、 沸腾水解 3小时。 过滤, 滤饼用纯化水洗至流出 液 pH>6, 80°C干燥得皂角提取物粗品 61.2g。 皂角提取物粗品加入 2450mL 乙醇, 加热溶解, 加入 49.0g药用活性炭, 搅拌、 沸腾 30min, 趁热过滤, 滤液调 pH值 3~4, 减压浓缩至裯膏状, 冷却后过滤, 滤饼用纯化水洗至流 出液 pH>6, 80°C干燥得皂角提取物 8.5g。 用高效液相色谱测定所得皂角提 取物中刺嚢酸和齐墩果酸的总含量为 94.11%, 其中刺嚢酸: 齐墩果酸 =2.1 :1。 实施例 3 本发明皂角提取物的制备
大皂角药材 2400g, 切成约 lcm的短段, 加 6倍量水煎煮两次, 第一次 1.5 小时, 第二次 1小时, 合并两次滤液, 减压浓缩至相对密度为 1.20 (室温)。 浓缩液加入适量盐酸、 水, 使溶液的总体积为浓缩液体积的 4倍、 盐酸的浓 度为 2mol/L, 加热、 搅拌、 沸腾水解 3小时, 过滤, 滤饼用纯化水洗至流出 液 pH>6, 80°C干燥得皂角提取物粗品 153.0g。 皂角提取物粗品加入 6120mL 醇, 加热溶解, 加入 122.4g药用活性炭, 搅拌、 沸腾 30min, 趁热过滤, 滤液调 pH值 4~5, 减压浓缩至 850mL, 冷却后过滤, 滤饼用纯化水洗至流 出液 pH>6, 80°C干燥得皂角提取物 24.1g。 用高效液相色谱测定所得皂角提 取物中刺嚢酸和齐墩果酸的总含量为 100.28%,其中刺嚢酸:齐墩果酸 =2.4:1。
实施例 4本发明皂角提取物的制备
大皂角药材 800g, 切成约 1cm的短段, 加 8倍量水煎煮两次, 第一次 1.5小 时, 第二次 1小时, 合并两次滤液, 减压浓缩至相对密度为 1.10 (室温)。 浓 缩液加入适量盐酸、 水, 使溶液的总体积为浓缩液体积的 4倍、 盐酸的浓度 为 2mol/L, 加热、 搅拌、 沸腾水解 3小时, 过滤, 滤饼用纯化水洗至流出液 pH>6, 80°C干燥得皂角提取物粗品 51.0g。 皂角提取物粗品加入 2040mL 乙 醇, 加热溶解, 加入 81.6g药用活性炭, 搅拌、 沸腾 30min, 趁热过滤, 滤 液调 pH值 5〜6, 减压浓缩至稠膏状, 冷却后过滤, 滤饼用纯化水洗至流出 液 pH>6, 80°C干燥得皂角提取物 6.2g。 用高效液相色谱测定所得皂角提取 物中刺嚢酸和齐墩果酸的总含量为 96.33%, 其中刺嚢酸:齐墩果酸 =3: 1。 检测方法
色谱条件 高效液相 Dionex U-3000 , 色谙柱 Agilent TC-C18 250x4.6mm(5um); 以乙腈为流动相 A, 以水(用礫酸调节 pH值至 3.7 ) 为 流动相 B, 按下表中的规定进行梯度洗脱; 流速 l.Oml/min; 柱温 30°C ; 检 测波长为 215亂
时间 (分钟) 流动相 A ( % ) 流动相 B ( % )
0-3 80-^64 20^36
3-10 64 36
10-15 64^ 100 36^0
15-22 100 0
22-23 100^80 0->20
23-35 80 20
具体谱图见图 1 , 数据如下:
HPLC图谱数据
.,。 M-称样量 刺囊酸含量 齐墩果酸含量 含量和值 刺囊酸: 齐 样品 A-刺囊酸 A-齐墩果酸
mg % % % 墩果酸
C 19.79 559.19 49.02 523.37 48.76 97.78 1.0
D 21.11 780.90 64.17 342.75 29.94 94.11 2.1
E 20.63 843.94 70.97 327.96 29.31 100.28 2.4
F 20.61 856.65 72.11 270.77 24.22 96.33 3.0
C-刺对照 C-齐对照 σ α
A-刺囊酸 口 σ A-齐墩果酸 刺囊酸对照品 (A) 齐墩果酸对照品 (B)
ug/ml ug/ml
632.92 109.8 456.67 84.2
对照品制备:
将制得的皂角提取物用色谱曱醇溶解至最大浓度, 上 GE AKTA basic制备型 高效液相, 色谱柱 Kromasil C18 250x20mm(5um);流动相比例为曱醇:水(磷 酸调 pH至 3.7 ) = 85:15; 流速 10.0ml/min; 柱温 30°C ; 检测波长为 215nm; 分取刺囊酸峰或齐墩果酸峰收集, 析晶得刺嚢酸(98.5% ) 或齐墩果酸 ( 99.0% )。
刺囊酸: 白色针状结晶, 熔点 305 ~ 307.5°C。
IRmaxcm-l :3572 , 3388 , 3209 , 2641(醇羟基 -OH 的伸缩振动引起); 2947,2925,2866(曱基); 1692, 1679( 中的 C=0呼吸振动引起); 1465, 1449, 1368 , 1363 , 1307( 羧 基 )1286,1333,1235( 六 碳 环 ) ; 1140,1204,1187,1029,998,979,965,950,816(烯键); 788,744
EI-MSm/z(%):471(M-H+: 100), 453(M-H+:55.0), 441 (M-H+:80.0) , 425(Μ-Η+:92.0), 407(Μ-Η+:100)
lHNMR(DMSO-d6, δ): 0.67 ~ 1.95(41H:-CH2-,-CH<,-CH3); 2.21(1H:-CH2-); 2.88 ~ 3.00(2H:-CH<);4.32 ~ 4.71 (2Η:-ΟΗ);5.20( 1 H:-CH<); 12.01 (1H:-C00H)
13CNMR(DMSO-d6, δ): 38.17(C-1), 27.02(C-2), 76.89(C-3) , 38.42(C-4) , 54.97(C-5), 18.00(C-6), 32.70(C-7), 38.96(C-8), 46.23(C-9), . 36.63(C-10), 22.90(C-11) , 121.25(C-12) , 143.98(C-13) , 41.04(C-14) , 35.21(C-15) , 72.98(C-16) , 47.30(C-17) , 40.10(C-18) , 46.38(C-19) , 30.26(C-20) , 34.69(C-21) , 31.50(C-22), 28.28(C-23) , 16.08(C-24), 15.25(C-25) 16.85(C-26), 26.50(C-27), 178.24(C-28), 32.92(C-29), 24.20(C-30)。
齐墩果酸:
白色针晶, mp 307 °C ~ 308°C , ( α ) 20D + 73° 。
lHNMR(DMSO-d6, δ): δ ppm: 5.16(m), 3.36(t),1.09(s,Me), 0.91(s,Me), 0.84(s,Me), 0.81(s,Me),0.80(s,Me),0.71(s,Me), 0.67(s,Me)。
13CNMR(DMSO-d6, δ): 38.5(C-l),27.19(C-2), 76.8(C-3), 38.22(C-4), 54.7(C-5), 18(C-6),32.85(C-7),39.66(C-8),47(C-9),37(C-10),23.36(C-11),121.53(C-12),143. 82(C-13),41.31(C-14),25.99(C-15),22.86(C-16),45.66(C-17),41.3(C-18),45.68(C- 19),30.19(C-20),33.31 (C-21 ),32.41 (C-22), 28.21 (C-23), 15.15(C-24), 16.1 (C-25), 1 6.8(C-26),26.99(C-27), 178.6(C-28),32.1 (C-29),22.6(C-30)。
实施例 5本发明药物胶嚢剂的制备
皂角提取物 500g、 乳糖 1600g、 淀粉 340g、 羧甲基淀粉纳 50g, 混合均匀, 以适量 70%乙醇制粒、干燥,加硬脂酸镁 10g总混,装 1号胶囊,每粒 250mg。
实施例 6本发明药物片剂的制备
皂角提取物 400g、微晶纤维素 800g、 乳糖 500g、 聚乙烯吡咯烷酮 K30 125g、 交联羧甲基纤维素鈉 125g、微粉硅胶 40g, 混合均匀, 以适量 50%乙醇制粒、 干燥, 加硬脂酸镁 10g总混, 压片, 每片 200mg。
根据上面方法, 用刺嚢酸(自制, 纯度 98.5% ) 300.4g、 齐墩果酸(自制, 纯度 99.0% ) 99.6g或刺嚢酸 (自制, 纯度 98.5% ) 200.5g、 齐墩果酸(自制, 纯度 99.0% ) 199.5g替代皂角提取物制备相应的片剂。
实施例 7 本发明药物组合物的制备方法
刺嚢酸(自制, 纯度 98.5% ) 300.4g、 齐墩果酸 (自制, 纯度 99.0% ) 99.6g、 微晶纤维素 1815g、 十二烷基硫酸钠 50g、 交联聚乙烯吡咯烷酮 100g、 羟丙 曱纤维素 125g, 混合均匀, 以适量纯化水制粒、干燥,加硬脂酸镁 10g总混, 装 1号胶嚢, 每粒 250mg。
利用上面的方法制备刺嚢酸(自制, 纯度 98.5% ) 200.5g、 齐墩果酸(自制, 纯度 99.0% ) 199.5g的胶嚢。
实施例 7 本发明皂角提取物与论文: 赫玉芳, 皂角皂苷元制备及其抗心肌 缺血药效学研究, 长春中医药大学硕士学位论文, 2006, 所述的皂角皂苷元 的提取工艺(对比工艺): 取干燥大皂角药材, 切成长约 1cm的短段, 用 75% 乙醇回流提取三次, 三次提取乙醇用量分别为生药重量的 6 倍量 (v/w )、 5 倍量和 5倍量, 时间分别为 3小时、 2小时和 1.5小时。合并三次提取液并减 压浓缩至相对密度为 1.20~1.30 ( 50°C测), 减压干燥(80°C )得皂角皂苷; 用 2mol/L盐酸的乙醇液(乙醇浓度为 45% ) 12倍量 100°C水解 3小时。 滤 过, 弃去水解液, 滤饼用去离子水洗至中性, 干燥得皂角皂苷元粗品; 再用 95%乙醇 40倍量加热至沸,加 1%的药用活性炭(以溶液体积计),趁热滤过, 滤液减压浓缩回收乙醇、 干燥(80°C ), 得皂角皂苷元。 共做了三批, 其结果 如表 1。
表 1 对比工艺三批次的含量测定
平均皂苷元收率 2.25%, 其中刺囊酸含量: 55.53%、 齐墩果酸含量: 20.23%, 刺嚢酸与齐墩果酸的总量为 75.76%。
该工艺存在如下问题:
a、 提取、 水解工序需大量用到乙醇, 导致生产成本过高。
b、 减压干燥工序采用的是混合母液一起蒸干, 缺乏安全性, 不适合工业化大 生产。
c、 制得的皂苷元含 20%以上的其它成分及杂质。
d、 制得的皂苷元为灰白色粉末, 制剂过程中遇水、 醇等溶剂后呈深褐色, 不 利于开发增强患者服药顺应性的新剂型如口腔崩解片、 缓控释制剂等。 与对比工艺相比, 本发明皂角提取物的制备工艺, 通过控制提取工艺中的水 解 pH, 药用活性炭的用量等条件,可以控制刺嚢酸与齐墩果酸的总量及二者 的重量比。 本发明皂角提取物的提取工艺具有如下优点:
a.提取工序中提取工艺从醇提改为水提、 水解工序改为无醇水解, 大大降低 了生产成本。
b.减压干燥工序改用直接水解技术, 减少了能耗、 提高了生产效率, 并且采 用不含醇酸水解, 降低了生产成本。
以上两点使皂角提取物工业化生产得以实现, 在提高生产效率的同时降低了 生产成本, 并增强了生产的安全性, 使皂角提取物能进一步开发成药品, 造 福于广大患者。
c.制得的皂角提取物系白色或类白色结晶体, 刺囊酸和齐墩果酸总含量达 90%以上, 明显提高了质量, 高纯度的皂角提取物更利于制定提取物标准; 同时也更利于根据市场竟争的需要, 开发各种新剂型。
d.改进后的工艺在明显提高皂角提取物的质量的同时, 还进一步提高了其质 量的稳定性及可控性, 更利于进一步开发成药品。
以下通过毒理试验及药效学试验证明本发明的有益效果。
试验例 1 本发明药物组合物和刺嚢酸毒理试验比较
材料和方法
动物: 普通级成年健康 Beagle犬,雌雄各半 , 年龄 6~8月龄, 体重 9〜11 kg。 药品: Z01 (刺嚢酸: 齐墩果酸 =3:1 , 由实施例 4的方法制备, 其中刺囊酸 和齐墩果酸的总量为 99% ), 自制类白色片剂, 批号: 090205; Z02 (刺囊酸: 齐墩果酸 =1:1, 由实施例 1的方法制备, 其中刺嚢酸和齐墩果酸的量占提取 物量的为 94.2% ), 自制类白色片剂, 批号: 090206; 自制刺嚢酸 EA (含量 测定含刺嚢酸 98.5% ), 纯白色粉末, 批号: 090107; 生理盐水, 成都青山利 康药业有限公司提供, 无色澄明液体, 批号: A0803025; 谷丙转氨酶(ALT )
试剂盒, 批号: 1007071; 四川省迈克科技有限责任公司产品。
主要仪器: 全自动血液生化分析仪 (瑞士 Roche Integra 400 Plus )、 全自动 血液细胞分析仪 (美国雅培 CELL-DYN 3700SL )、 全自动血凝分析仪 (日本 SYSMEX CA-500 )、 四道生理记录仪(成都仪器厂 RM6240 )、 电子天平等。 方法: 采用正常 Beagle犬, 经过 2周的检疫期, 剔除指标异常犬, 随机分为 10组, 即空白对照组、 Z01低剂量组(刺囊酸含量为 50 mg/kg )、 Z01 中剂 量组(刺嚢酸含量为 150 mg/kg )、 Z01高剂量组(刺囊酸含量为 250 mg/kg )、 Z02低剂量组(刺嚢酸含量为 50 mg/kg )、 Z02中剂量组(刺囊酸含量为 150 mg/kg )、 Z02高剂量组(刺嚢酸含量为 250 mg/kg )、 EA低剂量组( 50mg/kg )、 EA中剂量组( 150mg/kg )、 EA高剂量组( 250mg/kg ), 每组 8只 , 雌雄各半。 各组均以 lOmL/kg容量灌胃, 每天一次, 连续 21天。 于给药前和给药后 21 天, 分别采集清晨自然排泄的尿液, 前肢静脉采血, 进行尿常规、 血常规、 凝血时间的检测, 描记 II导联心电图; 于给药前和首次给药后 4天、 7天、 14天、 21天, 分别于犬前肢静脉采血测定肝功能相关生化指标。 末次给药后 24小时解剖每组动物, 进行系统尸解, 肉眼观察, 称量实质性脏器, 计算脏 器系数, 并进行病理组织学检查。 实验数据用 SPSS 11.5统计软件包进行处 理, 计量资料以均数 ±标准差 ( ^ ± ^0. )表示, 多组间比较采用单因素方差 分析, 两组间比较采用 t检验。 病理结果采用描述性分析。 具体结果见表 1。 结果:
1、 受试动物生化 ALT的检测及结果
表 1结果显示: 单一刺嚢酸成分组: 剂量为 50、 150、 250mg/kg三组血液中 谷丙转氨酶均在给药后 7天升高,并持续到给药后 21天,且谷丙转氨酶升高 的程度与刺囊酸成剂量依赖关系, 150、 250mg/kg两个组给药后血液中谷丙 转氨酶升高值均高过犬的谷丙转氨酶生化值正常范围; Z01 (刺嚢酸与齐墩 果酸重量比为 3:1 )刺嚢酸含量为 50、 150mg/kg的两个剂量组给药后均未发 现对谷丙转氨醉 ( ALT )有明显影响, 刺囊酸含量为 250mg/kg的剂量组在给 药后 7天即产生谷丙转氨酶升高趋势,于给药后 14天血液中谷丙转氨 ϋ含量 最高 (高过犬的谷丙转氨酶生化值正常范围), 但在给药后 21天血液中谷丙 转氨酶含量有所降低; Ζ02 (刺嚢酸与齐墩果酸含量比为 1: 1 )刺嚢酸含量为 50、 150、 250mg/kg三个组在给药后均未对谷丙转氨酶有影响。
2 其他检测及结果:
给药期间, 仅有个别动物出现呕吐、 腹泻等症状, 每只动物未见其它异常体 征, 动物体重与给药前比较没有明显变化。 尿常规、 血常规、 凝血时间 II导 联心电图及除 ALT 外其余的生化指标在各个监测点检测结果与给药前和空
白对照组比较均无明显改变, 无统计学意义。
3、结论: 由于该实验三个样品的剂量设定是以刺囊酸含量为统一标准,即低、 中、 高剂量组刺嚢酸含量分别为 50、 150、 250mg/kg。 在该设定方案进行实 验的结果表明刺嚢酸能够使血液中 ALT含量升高, 并成量效关系, 即刺囊酸 能引起一定肝脏毒性。 而我们通过将药物组合物中刺嚢酸和齐墩果酸比例控 制在 3: 1~1:1范围内, 可以大大降低刺囊酸对肝脏的毒性反应。
表 1 长期毒性试验对犬血生化 ALT的影响 ( ± S.D. )
刺囊酸含 给药后不同时期 ALT U/L)
组别 量 给药前
4天 7天 14天 21天
(mg kg)
Z01低 50 39.6±8.2 40.7±7.6 41.2±7.2 38.7±5.2 41.2±4.2
Z01中 150 38.0±6.2 41.9±8.1 39.2±5.5 41.3±8.4 43.2±5.9
Z01高 250 41.8±4.6 41.5±9.8 53.8±12.1 * 88.3士 20.1 * 56.7±12.8*
Z02低 50 38.2±4.7 33.9±3.6 39.4±3.76 37.5±8.9 44.9±4.9
Z02中 150 39.7±4.3 42.8±5.7 38.9±3.8 40.3±6.9 38.4±3.1
Z02高 250 38.5±4.9 39.5±4.6 42.6±14.2 45.3±12·2 43.5±9.5
EA低 50 38.8±5.8 41.4±9.3 60.3±11.6* 58.3±9.1 * 69.7±6.2*
EA中 150 40.3±6.2 42.6±8.9 70.6±22.3** 121.3±19.3** 124.5±35.3**
EA高 250 37.3±5.2 45.4±9.9 146.5±49.0** 167.5±43.3** 151.3±86.6** 空白 38.7±4.3 41.5±7.7 38.6±7.2 40.5±5.1 36.3±2.7 注: *与给药前相比, 均数的差异有统计学意义(Ρ < 0.05 );
**与给药前相比, 均数的差异有统计学意义 (Ρ < 0.01 )
试验例 2 本发明药物组合物对麻醉犬冠状动脉结扎后心肌梗死的影响 材料与方法
动物: 健康成年杂种犬, 雌、 雄兼用, 体重 12~16kg。
药品: Z01 (刺囊酸:齐墩果酸 =3: 1,其中刺嚢酸和齐墩果酸的总量为 99.0% ), 自制类白色片剂, 批号: 090205; Z02 (刺嚢酸: 齐墩果酸 =1:1 , 其中刺囊酸 和齐墩果酸总量为 94.2% ), 自制类白色片剂, 批号: 090206; 复方丹参片, 四川萄中药业有限公司生产, 褐色片剂, 批号: 080202; 戊巴比妥钠, 美国 sigma公司生产, 白色或类白色粉末, 批号: P3761 ; 肝素钠, 齐鲁制药有限 公司生产, 本品为无色或淡黄色的澄清液体, 批号 P20080227152652765; 氯 化硝基四氧唑蓝, 上海晶纯试剂有限公司, 黄色粉末, 批号 1124927。
仪器: HX-300动物呼吸机(成都泰盟科技有限公司)、 全自动血液生化分析 仪(瑞士 Roche Integra 400 Plus )。
方法: 实验犬经过适应性喂养后, 将其随机分为模型组、 阴性对照组(假手 术组)、 阳性对照组(复方丹参片 25mg/kg )、 Z01高剂量(44.4mg/kg )、 ZOl 低剂量 (22.2mg/kg )、 Z02高剂量(70mg/kg )、 Z02低剂量 ( 35mg/kg )共 7 组, 每组 6只。 实验动物用 3 %戊巴比妥钠(30mg/kg )静脉注射麻醉。 颈部 手术, 气管插管, 连接人工呼吸机, 分离一侧颈动脉, 做压力换能器插管, 开胸, 纵向剪开心包膜, 做荷包固定托起心脏, 分离冠状动脉左旋支及主动 脉根部,取血 3ml送检以测定结扎前磷酸肌酸激酶( CK )、乳酸脱氢酶( LDH ) 和谷草转氨酶( AST )活性, 此后, 结扎冠状动脉(假手术組不结扎), 15min 时测定各项指标, 同时按上述分组经十二指肠给药, 模型组、 假手术组按同 样途径给予同体积生理盐水。 分别于给药后 30min 60min 90min 120min 180min分别测定各项指标, 最后取血 3ml 左右送检以测定结扎后或给药后 CK LDH和 AST, 然后处死动物, 取下心脏, 经水沖洗干净残血, 再用滤 纸吸去水分, 称重; 此后将心室切成约 1.0cm厚薄的片, 放入 2%红四氮唑 ( TTC )溶液中于 37°C 温孵条件下染色 15min,取出后将不染色的心肌剪下 称重, 计算出梗塞范围占心室重的百分率。 试验数据用 SPSS 11.5软件进行 统计处理, 组间和组内均数比较均采用单因素方差分析, 结果用 i±s表示。 结果:
1.对犬心肌梗死区的影响
表 2中犬心肌梗死面积测定结果显示, 与模型组比, 治疗组和复方丹参组显 著降低心肌梗死犬的心梗面积(P<0.01 ); 给药组与复方丹参组相比, 各用药 组之间无明显差异。
表 2 本发明药物组合物对结扎冠脉致犬心肌梗死模型心肌梗死区的影响 ( ^士 s n=6)
剂 量 全心重量 梗死心肌重量 心梗 /全心 心^/心室 分组 心室重量 (g)
(ml/kg) (g) (%) (%) (%)
Z01高 44.4 97.8±5.7 68.4±8.9 8.5±1.3** 12.】±1.8"
Z01低 22.2 99.5±7.3 76.6 7.1 10.8 3.2* 10.9±3.6* 14.1 2.7**
Z02高 70 98.6Ϊ6.1 76.3 5.8 9.7±3.2* 9.8±2.5** 12.7 2.4**
Z02低 35 97.7±5.9 75.2±6.6 9.7±0.9** 9. ±0.7** 12.9±1.2** 阳对 25 102.4 6.8 77.4±9.4 9.6±4.2* 9.4 3.6** 12.4 5.5** 模型 - 100.3±15.2 73.5±8.0 20.1 ±3.9 20.0±1.9 27.0±2.3 假手术 - 98.6±7.4 75.4±6.6 0.7±0.5** 0.7±3.0** 0.9±4.4** 注: 与模型组比较, *: P < 0.05; **: P < 0.01
2. 对犬心肌酶学的影响
表 3中心肌酶学的测试结果显示, 心肌缺血犬的磷酸肌酸激酶(CK )活性:
与模型组比较, 各用药组均显著降低(P<0.01 ); 与复方丹参组比, 各用药组 没有显著作用差异。 心肌缺血犬的乳酸脱氢酶(LDH ) 活性: Z01 高、 Z02 高与模型组比较, 均明显降低(PO.05 ); 与复方丹参组比, 各用药组没有显 著作用差异。
表 3 本发明药物组合物对犬心肌梗死 CK, LDH的影响 ( ;士 s n-6)
剂 S. CK ( U/L ) LDH ( U/L )
分组
( ml/kg ) 结扎前 结扎后 3小时 结扎前 结扎后 3小时
Z01高 44.4 214.3±24.4 318.7±18.6** 104.4±10.6 160.5±14.2*
Z01低 22.2 225.6±21.3 335.7±17.6** 106.7±13.6 174.5±12.6
Z02高 70 208.7±23.1 315.6±17.1 ** 105.6±14.7 158.4±8.0*
Z02低 35 209.2±18.2 346.2±19.7** 109.1±9.7 178.8±12.4
阳对 25 220.3±20.4 322.0±14.1** 105.6±11.3 185.6±10.1
模型 - 206.4±23.0 927.2±36.8 103.4±10.1 212.6±16.2
假手术 - 212.4±17.0 209.2±19.8** 107.7±13.3 105.4±12.3** 注: 与模型组比较, *. P < 0.05; **: P < 0.01
上述结果说明, 本发明的两种类型药物组合物对犬心肌梗死有明显的改善作 用。
试验例 3 本发明药物组合物对麻醉犬心月几缺血后血流动力学的影响 材料与方法
动物: 健康成年杂种犬, 雌、 雄兼用, 体重 12~16kg。
药品: Z01 (刺嚢酸:齐墩果酸 =3: 1,其中刺嚢酸和齐墩果酸的总量为 99.0% ), 自制类白色片剂, 批号: 090205; Z02 (刺嚢酸: 齐墩果酸 =1 : 1 , 其中刺囊酸 和齐墩果酸总量为 94.2% ), 自制类白色片剂, 批号: 090206; 复方丹参片, 四川蜀中药业有限公司生产, 褐色片剂, 批号: 080202; 戊巴比妥钠, 美国 sigma公司生产, 白色或类白色粉末, 4比号: P3761。
仪器: RM - 6000型四道生理记录仪, 日本光电产品; 电磁流量计, 5.0mm、 1.0mm; 日本光电产品。 血气自动分析仪: AVLCOMPACT— 3, 瑞典产品。 方法: 实验犬经过适应性喂养后, 将其随机分为模型组、 阴性对照组 (假手 术组)、 阳性对照组(复方丹参片 25mg/kg )、 Z01高剂量(44.4mg/kg )、 ZOl 低剂量(22.2mg/kg )、 Z02高剂量( 70mg/kg )、 Z02低剂量(35mg/kg )共 7 组, 每组 6只。 实验动物用 3 %戊巴比妥钠(30mg/kg )静脉注射麻醉。 颈部 手术, 气管插管, 连接人工呼吸机, 于冠状动脉前降支第二个主要分支以下 小心游离一段动脉, 穿线备用, 另分离升主动脉根部, 固定电磁流量计记录 心输出量, 于左室心尖部插入心导管, 通过压力传感器记录心室内压和敫分
( ±dp/dtmax ), 于动物四肢固定心电图电极以监测、 记录心电图活动情况; 记录正常血压、 心电图、 心输出量、 左室压和士 dp/dtmax后, 于心脏左冠状 动脉前降支游离处结扎造成心肌缺血改变;同时按上述分组经十二指肠给药, 模型组按同样途径给予同体积生理盐水。 并分别取颈动脉和冠状窦血液, 应 用血气自动分析仪测定血氧含量。 试验数据用 SPSS 11.5软件进行统计处理, 组间和组内均数比较均采用单因素方差分析, 结果用;土 s表示。
结果:
1. 对心肌缺血犬心肌耗氧量的影响
表 4中各组心肌耗氧量(V02 )计算结果显示, 与模型组比, 各用药组均于 lh〜4h显著降低心肌耗氧量(P<0.05, P<0.01 ); 与复方丹参组比, 各用药组 没有显著差异。 表 4 本发明药物组合物对心肌缺血犬心肌耗氧量的影响 剂 量 结扎后某时间点该指标的值(ml/min ) /百分率 (% )
分组
( ml/kg ) 结扎前 15 min 30 min 1 h 2h 4h
Z01高 44.4 50.4±5.4 53.8±4.2 50.6±2.4 47.7±1.2* 45.6±1.1 ** 45.7±1.0**
Z01低 22.2 51.5±2.3 53.4±2.1 49.9±1.8 48.7±1.5* 46.8士 1.2** 47.1 ±1.4*
Z02高 70 50.6±4.4 51.9±3.9 49.7±2.0 47.8±1.5* 46.6±0.9** 45.0±1.6**
Z02低 35 50.5±2.3 52.6±2.5 49.5±1.1 48.5±1.6* 46.7±1.9** 46.9±1.4* 阳对 25 51.8±1.7 53.1±1.8 50.3±1.6 49.0±1.2* 47.0±0.9* 46.7±1.0* 模型 - 50.8±3.1 53.0±3.6 55.9±0.9 56.5±2.5 56.2±0.9 55.9±1.8 假手术 51.7±2.0 50.2±3.1 51.8±4.4 50.6±2.3 50.2±3.6 50.1±4.0 注: 与模型组比较, *: P < 0.05; **: P < 0.01
2. 对心肌缺血犬心输出量的影响
表 5中的心输出量(AF )测定结果显示, 以模型组比, 对心输出量测定结果 显示, 与模型组比, 各给药组均于给药后 30min〜4h 均有明显差异 ( P<0.05,P<0.01 ); 与复方丹参组之间无显著差异。
表 5 本发明药物组合物对心肌缺血犬心输出量的影响( , n - 6) 结扎后某时间点该指标值 (L7beat/m2 ) ό 变化率 (% )
分组 剂量(ml/kg )
结扎前 15 min 30 min 1 h 2h 4h
Z01高 44.4 1 18.3±74.8 167.6 133.3 178.9±183.0* 247.6 274.6* 201.7±258.4* 189.5 190.5** Z01低 22.2 101.9i24 164.9±20.5 190.3±32.4* 188. ]±43.8* 182,8±37.4* 181.3±42.2** Z02高 70 103.1 9.2 171.3±28.9 184.1 ±30.2* 183.3 34.9* 192.6±40.1 * 198.2±42.4** Z02低 35 98.7±11.5 167.8±9.1 184.5±13.9* 188.7±26.2* 186.2±51.0* 184.3±38.2** 阳对 25 1 15.8±36.4 14Ι .6±3ϊ.Ο 170.3±60.4* 189. 42.0* 188.5 44. i * 185. ±38.2** 模型 121.9±51.7 132.3 57.7 138.8±79.5 129.3 98.3 144.5 72.8 1 15.5 43.4 假手术 135.7±109.9 137.9±94.7 148.0±149.7 119.2 69.7 136.7 44.9 146.4±38.3 注: 与模型组比较, *: P < 0.05; **: P < 0.01
3. 对心肌缺血犬心脏做功的影响
表 6心脏做功(MW )指标测算结果显示, 给药组和复方丹参组于给药 30min 即能显著降低心脏做功, 与模型组比, 各组于给药 30min〜4h 作用显著
( P<0.05 ), 其中 Z01 高和 Z02 高分别在给药后 1 2小时点作用非常显著
( P<0.01 ); 各用药组与复方丹参组之间无显著差异。 表 6 本发明药物组合物对心肌缺血犬心脏做功的影响 土 n = 6) 剂 量 结扎后某时间点该指标值(L7beat/m2 ) 的变化率 (% )
分组
( ml/kg ) 结扎前 15 min 30 min I h 2h 4h
Z01高 44.4 2.82 0.47 2.16±0.14 2,08 0.16* 2.13±0.20** 2.06 0.24** 2.01 ±0.22*
Z01低 22.2 2.85±0.35 2.14±0.29 2.00±0.11 * 2.04 0.24** 2,01 0.13* 1.96±0.34*
Z02高 70 2.84±0.41 2.17±0.29 2.14±0.12* 2.18 0.29** 2.06±0.12** 2.04 0.25*
Z02低 35 2.77 0.39 2.08±0.16 2.04±0.18* 1.99±0.22* 1.96±0.14* 1.92±0.20* 阳对 25 2.74 0.29 2.09±0.22 2.06±0.23* 2.11 ±0.32* 2.01 0.31 * 1.98±0.29* 模型 - 2.81 0.44 1.84±0.27 1.59±0.34 1.54 0.21 1.56±0.29 1.59±0.17 假手术 - 2.95±0.35 2.84±0.39* 2.87 0.47** 2.86 0.50** 2.85±0.33** 2.86±0.36** 注: 与模型组比较, *: P < 0.05; **: P < 0.01
综上所迷, 两种类型的药物组合物具有抗心肌梗死作用, 机制主要是通过改
善心肌力学进而降低心肌耗氧量, 另外对缺血心肌细胞膜具有一定的稳定和 保护作用。 可以进一步开发成为治疗心 ϋ几梗死、 心绞痛及相关疾病的新药。 试验例 4 本发明药物组合物对垂体后叶素 (PIT )致大鼠心肌缺血的影响 材料与方法
动物: SD大鼠, 清洁级, 5~6周龄, 体重 200~250g, 雌、 雄兼用。
药品: X01 (刺嚢酸: 齐墩果酸 =3:1, 由实施例 4 的方法制备, 其中刺嚢酸 和齐墩果酸的总量为 92.8% ), 自制类白色片剂, 批号: 090309; X02 (刺嚢 酸: 齐墩果酸 =1:1, 由实施例 1 的方法制备, 其中刺囊酸和齐墩果酸的总量 为 98.8% ), 自制类白色片剂,批号: 090310;垂体后叶素(PIT ):批号: 080315, 蚌埠市宏业生化药厂产品; 戊巴比妥钠: 批号: F20020915; 国药集团上海 化学试剂有限公司进口分装; 通心络胶嚢, 批号: 080749; 石家庄以岭药业 股份有限公司产品。
仪器: ASB240U生物信号采集系统: 成都遨生电子有限公司; KQ5200B型 超声波清洗器: 昆山市超声仪器有限公司; Milli-Q Gradient A10纯水仪: 美 国 Millipore公司; AB 104-N电子天秤: METTLER TOLEDO公司。
方法: 筛选出对垂体后叶素( PIT )敏感且 ECG正常的 SD大鼠 112只 , 5~6 周龄, 体重 200~250g, 随机分为 7组, 即模型组、 空白对照组、 阳性对照组 (通心络胶嚢 360mg/kg )、 X01高剂量( 69.5mg/kg )、 X01低剂量( 34.7mg/kg )、 X02高剂量(97.7mg/kg )、 X02低剂量( 48.8mg/kg ), 每组 15只, 雌雄各半。 各组以相应药物剂量连续灌胃给药 7天, 给药容量为 10ml/kg。 于末次给药 lOOmin腹腔注射 1%戊巴比妥钠( 30mg/kg ),待麻醉后将动物固定于蛙板, 采 用 II导联记录 2min内正常心电图 , 然后经大鼠尾静脉注射 PIT ( 1.5IU/kg ) , 于 20s内緩 'f曼推注完毕。 记录注射 PIT后 15min的心电变化, 采集 10s、 30s lmin、 2min、 4min、 6min、 8min、 10min、 13min、 15min各时间点 ST段数 据 , 比较造模后各时间点的心电图 ST段偏移变化。
结果:
表 7中 ST段总体偏移值分析知, 两个样品的高、 低剂量均有一定的拮抗 ST 段的偏移作用, 其中以 X01高剂量组、 Χ02高、 低剂量组最为显著 (ΡΟ.05 或 PO.01 )。 以心肌缺血模型的各时间点 ST偏移值分析, Χ02在注射 PIT后 10sec、 10min、 13min、 15min均表现出明显的抗心肌缺血作用, 以上结果表 明药物组合物 X01、 X02两批样品均有明显的抗心肌缺血作用, 可作用于冠 心病发病的早期及恢复期。
表 7 本发明药物组合物对 PIT致急性心肌缺血大鼠心电 ST段的影响( ± s n=15 )
剂量 AST (mV>
组别
(mg/kg l Osec 30sec lmin 2min 4min 6min 8min lOmin 13min 15min ∑
)
0.054± 0.057 0.059 0.056 0.060± 0.081 0.054 0.039± 0.038 0.040± 0.569
X01高 69.5
0.050** 0.057 0.074 0.048 0.055* 0.065 0.058 0.043 0.031 * 0.028* 0.325* 0.121 0.080± 0.079± 0.092 0.107 0.074 0.057 0.046 0.043 0.043 0.743
XOl低 34.7
0.070 0.043* 0.078 0.087 0.093 0.065 0.045 0.030 0.019 0.023 0.399 0.074 0.049 0.045 0.078± 0.0S5 0.079± 0.041 0.022± 0.019± 0.018 0-523
X02高 97.7
0.068* 0.045 0.032 0.051 0.049 0.073 0.030 0.017** 0.014** 0.012** 0.244** 0.101 0.061 0.078 0.084 0.099± 0.099± 0.076 0.051± 0.037 0.035 0.608
X02低 48.8
0.076 0.041 0.049 0.063 0.060 0.085 0.091 0.051 0.034* 0.025* 0.245* 0.074 0.065 0.059± 0.073± 0.070± 0.089± 0.053 0.042± 0.044 0.021 0.588 阳对 360
0.086 0.052 0.065 0.039 0.075 0.077 0.057 0.043 0.052 0.043 0.356* 0.169 0.044 0.083 0.094 0.126± 0.085 0.068± 0.084 0.073 0.070± 0.896± 模型
0.122 0.047 0.065 0.066 0.078 0.070 0.066 0.071 0.051 0.044 0.413 0.01 1 0.010 0.01 1 0.012 0.016± 0.018 0.013 0.018 0.016 0.016 0.141 空白
0.007** 0.006* 0.008** 0.008** 0.007 ** 0.007** 0.008** 0.011 ** 0.009** 0.009** 0.038** 注: 与模型组比较, *: P < 0.05; **: P < 0.01 试验例 5 药物对垂体后叶素 (PIT )致大鼠心肌缺血的影响
材料与方法
动物: SD大鼠, 清洁级, 5〜 6周龄, 体重 200 ~ 250g, 雌、 雄兼用。
药品: Y01 (刺囊酸: 齐墩杲酸 =3: 1, 由实施例 4的方法制备,总含量 97.4% ), 自制类白色粉末; 刺囊酸 EA (含刺嚢酸 98.4% ), 自制纯白色粉末; 齐墩果 酸 OA (含齐墩果酸 97.8% ), 自制纯白色粉末; 垂体后叶素, 批号: 080315, 蚌埠市宏业生化药厂产品; 戊巴比妥钠, 成都苌钲化玻有限公司生产; 通心 络胶嚢, 石家庄以岭药业股份有限公司产品。
仪器: ASB240U生物信号采集系统: 成都遨生电子有限公司; KQ5200B型 超声波清洗器: 昆山市超声仪器有限公司; Milli-Q Gradient A10纯氷仪: 美
国 Millipore公司; AB 104-N电子天秤: METTLER TOLEDO公司。
方法: 筛选出对垂体后叶素 (PIT)敏感且 ECG正常的 SD大鼠 90只, 5 ~ 6周 龄, 体重 200 ~ 240g, 随机分为 6组, 即模型组、 空白对照组、 阳性对照组
(通心络胶嚢 360mg / kg )、 Y01 组 (68.4mg / kg , 其中刺嚢酸含量为 50mg/kg、 齐墩果酸含量为 16.7 mg/kg)、 EA组 (50.8mg / kg, 刺嚢酸含量为 50 mg/kg), 0入组(17.011¾ / § 齐墩果酸含量为 16.7 mg/kg), 每组 15只, 雌雄各半。 各组以相应药物剂量连续灌胃给药 7天, 给药容量为 10ml/kg 于末次给药 lOOmin腹腔注射 1%戊巴比妥钠 (30mg/kg), 待麻醉后将动物固定 于蛙板, 采用 II导联记录 2min 内正常心电图, 然后经大鼠尾静脉注射 PIT
( 1.5IU/kg ) ,于 20s内緩慢推注完毕。 记录注射 PIT后 15min的心电变化, 采集 10s 30s lmin 2min 4min 6min 8min 10min 13min 15min各 时间点 ST段数据, 比较造模后各时间点的心电图 ST段偏移变化。 实验数据 用 SPSS 13.0统计软件包进行处理, 计量资料以均数士标准差 表 示, 多组间比较采用随机区组设计资料的方差分析, 组与组之间的两两比较 采用 SNK-q检验。
结果:
表 8中 ST段总体偏移值分析知, Y01与 EA均有一定的拮抗 ST段的偏移作 用, 其中以 Y01最为显著, 总偏移度与模型组比较(P < 0.01 ); OA拮抗 ST 段的偏移作用不明显, 总偏移度与模型组比较(P > 0.05 ), 且与 Y01组比较 ( P < 0.05 )。 以心肌缺血模型的各时间点 ST偏移值分析, Y01 EA在注射 PIT后几乎各点均表现出明显的抗心^ L缺血作用, 而 OA在注射 PIT后各点 作用均不明显。
表 8 对 PIT致急性心肌缺血大鼠心电 ST段的影响( t s , n=15 )
组別 剂量 ^ST (mV) -
(mg/kg) i Qsec 30sec lmin 2min 4min 6min 8min lOmin 13min 15min ∑
0.057 0,049 0.047 0.051 0.049± 0.053 0.049 0.035± 0.031 0,036 0.447
68.4
0.039** 0.030 0.034* 0.044* 0.045* 0.051 * 0.036* 0.031 * 0.036* 0.029* 0.272**
0.089± 0.060± 0.064 0.075 0.060± 0.063 0.070± 0.061 0.055 0.056± 0.653
50.8
0.089* 0.053 0.032* 0.063 0.039* 0.045* 0.048 0.042* 0.039* 0.048 0.367*
0.132 0.068 0.07 ± 0.061± 0.082 0.080i 0.073 0.051± 0.060± 0.053 0.739±
17.0
0.113 0.044 0.052 0.034* 0.055 0.067 0.037 0.032* 0.037 0.042 0.408 Δ
0.070± 0,061 0.062± 0.060± 0.056 0.051 0.053 0.056± 0.045 0.035 0.549±
360
0.064* 0.043 0.042* 0.031 * 0.037* 0.046* 0.035* 0.064 0.038* 0.033* 0.323*
0.155 0.064± 0.088± 0.090± 0.092± 0.091± 0.085 0.092± 0.082± 0,077 0.916
0.102 0.057 0.056 0.053 0.058 0.063 0.042 0.058 0.061 0.036 0.485
0.010± 0.008± 0.012 0.012 0.010± 0.010± 0.015 0.013 0.010± 0.009± 0.109±
0.006** 0.005* 0.007** 0.008** 0.006** 0.008** 0.009** 0.012** 0.004** 0.006** 0,036*
注: 与模型组比较, *: P < 0.05; **: P < 0.0L
与 Y01组比较, Δ : P < 0.05。
表 8 表明皂角提取物 Y01及刺嚢酸样品均有明显的抗心肌缺血作用,可作用 于冠心病发病的早期及恢复期, 而齐墩果酸能够改善心肌缺血, 但作用不明 显。 从作用强度上分析, 皂角提取物 Y01比刺嚢酸、 齐墩果酸有明显优势。 试验例 6 本发明药物组合物对氯化钡诱发大鼠心律失常的影响
材料与方法
动物: SD大鼠, 清洁级, 5〜6周龄, 体重 200~250g, 雌、 雄兼用。
药品: X01 (刺囊酸:齐墩果酸 =3: 1,其中剌囊酸和齐墩果酸的总量为 92.8% ), 自制类白色片剂, 批号: 090309; X02 (刺嚢酸: 齐墩果酸 =1:1, 其中刺嚢 酸和齐墩果酸总量为 98.8% ), 自制类白色片剂, 批号: 090310; 氯化钡, 规 格: 分析纯, 批号: 0807002, 开原化学试剂厂; 复方丹参片, 四川蜀中药业 有限公司生产, 褐色片剂, 批号: 080202。
仪器: ASB240U生物信号采集系统: 成都遨生电子有限公司; KQ5200B型 超声波清洗器: 昆山市超声仪器有限公司; Milli-Q Gradient A10纯水仪: 美 国 Millipore公司; AB 104-N电子天秤: METTLER TOLEDO公司。
方法: 筛选出对氯化钡敏感且心率正常的 SD大鼠 112只, 5〜6周龄, 体重 200〜250g, 随机分为 6组, 即模型组、 阳性对照组(复方丹参片 75mg/kg )、 X01高剂量( 69.5mg/kg )、 X01低剂量( 34.7mg/kg )、 X02高剂量( 97.7mg/kg )、 X02低剂量(48.8mg/kg ),每组 15只,雌雄各半。预防性灌胃给药每天 1次, 连续 5 日。 于最后 1次给药后, 将大鼠 ip 10%水合氯醛(400mg/kg )麻醉, 仰位固定, 稳定 30分钟后, 描记一段正常标 II心电图, 在给药 45分钟后由 舌静脉注射 0.4%氯化钡 4mg/kg诱发心律失常。观察记录 II导联心电图变化。 以室性双向性心律失常出现的时间 (早晚)及其维持时间为指标。 双相室性 心律失常持续 30min以上者, 其持续时间按 30min计算。
结果:
从表 9中可以看出, 受试药能明显延緩静脉注射氯化钡所引起的大鼠 相室 性心律失常发生时间和缩短这种心律失常的持续时间。 并且预防性治疗作用 呈梯度排列, 表现出较好的量-效关系; 于阳性对照药复方丹参片组比较给药 各组无显著差异, 但是从表中的数据可以看到药物组合物 X01、 X02高剂量 组在延緩心律失常发生时间和缩短持续时间要略优于复方丹参片。 说明本发 明中的药物组合物对心律失常疾病治疗作用具有优越性。
表 9 本发明药物组合物对 BaC12 诱发大鼠心律失常的预防作用( ± n=15 )
剂量 双向性心率失常
组别
(mg/kg) 出现时间 (sec) 持续时间 (sec)
X01高 69.5 78.8±31.5** 282.1±447.2**
X01低 34.7 60.6±25.3* 502.2±332.4**
X02高 97.7 80.9±29.8** 312.8±396.5**
X02低 48.8 64.7±22.6* 481±388.4**
阳对 42 77.4±24.3** 334.2土 470.2**
模型 ― 39.1士 15.4 1282±545.7
注: 与模型组比较, *: P < 0.05; **: P < 0.01
试验例 7 本发明药物组合物和刺囊酸对家兔脂代谢紊乱的影响
材料和方法
动物: 纯种日本大耳白兔, 1 级, 雄性。 3月龄, 1.5 ~ 2.0 kg/只。
药品: Z01 (刺囊酸: 齐墩果酸 =3:1 ,其中刺囊酸和齐墩果酸的总量为 99.0% ), 自制类白色片剂, 批号: 090205; Z02 (刺嚢酸: 齐墩果酸 =1:1 , 其中刺囊酸 和齐墩果酸总量为 94.2% ), 自制类白色片剂, 批号: 090206; 阿托伐他汀钙 片 (立普妥), 由辉瑞公司生产, 批号: 95837012; 非诺贝特胶嚢(力平之), 由法国利博福尼制药公司生产, 批号: 12094; 生理盐水, 成都青山利康药业 有限公司提供, 无色澄明液体, 批号: A0703025。
仪器: 全自动血液生化分析仪(瑞士 Roche Integra 400 Plus ); TGL-16G离心 机; AB 104-N电子天平; BP211D电子天平。
方法: 动物适应性喂养 10 日后, 取 60只动物给予高脂饲料(由 1 %胆固醇 +5 %炼制猪油 +10 %蛋黄粉 +84%基本饲料组成)喂养, 另取 6只动物给予基 本饲料喂养。 饲料喂养 15 日后, 空腹经耳中动脉采血, 离出血清, 分别测定 其各项血脂指标。 在 60只给予高脂饲料的动物中, 根据 TC含量, 选取 42 只动物进行区组随机分组, 共分 7组, 每组 6只; 给予基本祠料的 6只动物 作为空白对照组。 分组后, 各组给予基本饲料喂养, 按组别情况表开始灌胃 给药, 组别情况为 Z01低剂量组 (8.4mg/kg)、 Z01高剂量组 (16.8mg/kg)、 Z02 低剂量组 ( 13.3mg/kg)、 Z02高剂量组 (26.5mg/kg)、 立普妥组 (2.5mg/kg)、 力平 之组 (20mg/kg)、模型组、空白对照组。给药周期为 4周。实验数据用 SPSS 13.0 统计软件包进行处理, 计量资料以均数±标准差 ( ±^D. )表示, 多组间比 较采用随机区组设计资料的方差分析,组与组之间的两两比较采用 SNK-q检 验。
结果:
实验各组动物分别于给药前、末次给药后 24h空腹采血测定其总胆固醇 (TC)、 甘油三酯 (TG)含量并进行统计, 见表 10。
表 10各组药物对血清 TC、 TG的影响(f ± s. . n=6 )
给 药 量 血清 TC (mmol/l) 血清 TG (mmol/1)
组别 , η 、
(mg kg) 给药前 给药后 给药前 给药后
Z01高 16.8 13.79±4.08 4.02±2.12** 2.22±1.04 1.20±0.69**
Z01低 8.4 13.64±4.67 6.32±3.20* 1.78±0.68 1.13±0.54**
Z02高 26.5 13.88±4.76 5.84±3.78* 1.94±1.32 1.32±0.58*
Z02低 13.3 14.07±3.92 8.83±4.31 Δ A 2.07±0.44 1.66±1.24
立普妥 2.5 14.13士 5.34 3.86±2.07** 1.58±0.54 1.12±0.44* 力平之 20 13.76士 4.78 3.45±1.63** 2.18±1.22 1.08±0.53* 模型 - 13.94±4.90 12.33±4.09 2.09±1.14 2.14±1.06
空白 1.94±0.87 2.06±0.74 0.75±0.34 0.88±0.37
注: *与模型组相比, 均数的差异有统计学意义(P < 0.05 );
**与模型组相比, 均数的差异有统计学意义(P < 0.01 );
Δ与立普妥组相比, 均数的差异有统计学意义(P < 0.05 );
▲与力平之组相比, 均数的差异有统计学意义(P < 0.05 );
表 10中实验各组药物对血清 TC影响的结果显示, 药物组合物 Z01高、低剂 量组、 Z02高剂量组均有不同程度调节脂代谢紊乱家兔血清 TC的疗效, 与 立普妥组、 力平之组比较无明显差异(P〉0.05 ); 从降低血清 TC的药效作 用趋势分析得出, 药物组合物 Z01高剂量组〉 Z02高剂量组〉 Z01低剂量组 〉Z02低剂量组。 综上所述, 前三种实验样品均具有调节改善家兔脂代谢紊 乱的疗效。
实验各组药物对血清 TG影响的结果显示, 药物组合物 Z01高、 低剂量组、 Z02高剂量组均有不同程度调节脂代谢紊乱家兔血清 TG的疗效, 与立普妥 组、 力平之组比较无明显差异(P > 0.05 ); 从降低血清 TG的药效作用趋势 分析得出, 药物组合物高剂量组 > Z01低剂量组〉 Z02高剂量组。 试验例 8对家兔脂代谢紊乱的影响的比较
材料和方法
动物: 纯种日本大耳白兔, 1级, 雄性。 3月龄, 1.5 ~ 2.0 kg/只。
药品: Y01 (刺嚢酸: 齐墩果酸 =3:1, 总含量 97.4% ), 自制类白色粉末; 刺 嚢酸 EA (含刺嚢酸 98.4% ), 自制纯白色粉末; 齐墩果酸 OA (含齐墩果酸 97.8% ), 自制纯白色粉末; 阿托伐他汀钙片 (立普妥), 由辉瑞公司生产; 生理盐水, 四川美大康佳乐药业有限公司生产。
仪器: 全自动血液生化分析仪 (瑞士 Roche Integra 400 Plus ); TGL-16G离心 机; AB 104-N电子天平; BP211D电子天平。
方法: 动物适应性喂养 10 日后, 取 40只动物给予高脂饲料(由 1 %胆固醇 +5 %炼制猪油 +10 %蛋黄粉 +84%基本饲料组成)喂养, 另取 6只动物给予基 本飼料喂养。 饲料喂养 15 日后, 空腹经耳中动脉采血, 离出血清, 分别测定 其各项血脂指标。 在 40只给予高脂饲料的动物中, 根据 TC含量, 选取 30 只动物进行区组随机分组, 共分 5组, 每组 6只; 给予基本饲料的 6只动物 作为空白对照组。 分组后, 各组给予基本饲料喂养, 按组别情况表开始灌胃 给药, 组别情况为 Y01组 (16.4mg / kg, 其中刺嚢酸含量为 12mg/kg、 齐墩 果酸含量为 4 mg/kg)、 EA组( 12.2mg / kg , 刺囊酸含量为 12 mg/kg)、 OA组 (4.0mg / kg, 齐墩果酸含量为 4mg/kg)、 立普妥组 (2.5 mg/kg)、 模型组、 空白 对照组。 给药周期为 4周。 实验数据用 SPSS 13.0统计软件包进行处理, 计 量资料以均数士标准差 ( 土5.£». )表示, 多组间比较釆用随机区组设计资料 的方差分析, 组与组之间的两两比较采用 SNK-q检验。
结果:
实验各组动物分别于给药前、末次给药后 24h空腹采血测定其总胆固醇 (TC)、 甘油三酯 (TG)含量并进行统计 , 见表 11。
表 11各组药物对血清 TC、 TG的影响 ( ±
)
给 药 量 血清 TC (mmol/1) 血清 TG (mmol/1)
组别
(mg/kg) 给药前 给药后 给药前 给药后
Y01 16.4 14.98±4.98 5.30±2.76** 2.32±1.28 1.10±0.64**
EA 12.2 15.07±5.48 9.77±6.30* 2.17±1.04 1.64±0.89*
OA 4.0 14.97±5.22 12.05±6.48厶 2遍 0.44 1·83±1.02
阳对 2.5 15.06±6.26 5.06±1.89** 2.44±1.37 1.54±0.79*
模型 - 14.94±5.79 13.24±5.66 2.38±0.85 1.92±1.42
空白 1.88±0.74 1.64±0.57 0.90±0.45 0.86±0.50
注: 与模型组比较, *: Ρ < 0.05; **: Ρ < 0.01。
与 Y01组比较, △: Ρ < 0.05。
表 11中实验各组药物对血清 TC影响的结果显示, Y01组、 ΕΑ组均有不同 程度调节脂代谢紊乱家兔血清 TC的疗效, 给药后与模型组比较有明显差异
( P < 0.01或 P < 0.05 ); OA组调节脂代谢紊乱家兔血清 TC作用不明显, 给 药后与模型组比较无明显差异 (P > 0.05 ), 且与 Y01组比较(P < 0.05 )。 实验各组药物对血清 TG影响的结果显示, Y01组、 EA组均有不同程度调节 脂代谢紊乱家兔血清 TG的疗效, 与模型组比较有明显差异(P < 0.0l P < 0.05 ); OA组调节脂代谢紊乱家兔血清 TG作用不明显, 与模型组比较无明 显差异 ( P > 0.05 ), 且与 Y01组比较( P < 0.05 )。
综上所述, Y01组、 刺囊酸具有明显调节改善家兔脂代谢紊乱的疗效。 而齐 墩果酸改善家兔脂代谢紊乱的疗效不明显。 从作用强度上分析, Y01组比刺 嚢酸、 齐墩果酸有明显优势。 试验例 9 本发明药物组合物对家兔动脉粥样硬化预防作用
材料和方法
动物: 纯种日本大耳白兔, 1级, 雄性。 3月龄, 1.5 ~ 2.0 kg/只。
药品: Z01 (刺囊酸:齐墩果酸 =3: 1 ,其中刺囊酸和齐墩果酸的总量为 99.0% ), 自制类白色片剂, 批号: 090205; Z02 (刺嚢酸: 齐墩果酸 =1 : 1 , 其中刺嚢酸 和齐墩果酸总量为 94.2% ), 自制类白色片剂, 批号: 090206; 阿托伐他汀钙 片 (立普妥), 由辉瑞公司生产, 批号: 95837012; 非诺贝特胶嚢(力平之), 由法国利博福尼制药公司生产, 批号: 12094; 生理盐水, 成都青山利康药业 有限公司提供, 无色澄明液体, 批号: A0703025。 牛血清白蛋白(BSA) 由美 国 sigma公司生产。
仪器: 全自动血液生化分析仪 (瑞士 Roche Integra 400 Plus ); TGL-16G离心 机; AB 104-N电子天平; BP211D电子天平; 电动玻璃匀浆机 DY89-IL 方法: 动物适应性喂养 10日后, 将 50只动物进行完全随机分组。 组别情况 为 Z01 组(16.8mg/kg)、 Z02组 (26.5mg/kg)、 立普妥组 (2.5mg/kg)、 力平之组 (20mg/kg)、 模型组, 每组 9只; 空白对照组 6只。 分组后, 各给药组和模型 组每日给予高脂饲料(由 1 %胆固醇 +5 %炼制猪油 +10 %蛋黄粉 +84%基本飼 料组成)喂养, 空白组给予基本饲料喂养, 同时按分组情况开始灌胃给药, 周期为 12周。期间给药第 4周末,经兔耳缘静脉一次性注射 10 % BSA 200 mg / kg, 促进动物 AS模型形成。 实验数据用 SPSS 13.0统计软件包进行处理, 计量资料以均数士标准差 ( ±S .)表示, 多组间比较采用完全随机设计资 料的单因素方差分析, 组与组之间的两两比较采用 SNK-q检验; 非参数资料 数据统计采用 Kruskal-wallis H检验, 组与组之间的两两比较采用 Nemenyi 法检验。
结果:
1.对组织勾浆中脂质的影响
( 1 )实验各组动物于末次给药后 24h处死,取主动脉文组织匀浆测定其脂质 含量并进行统计, 见表 12。
表 12 各给药组对主动脉组织匀浆中脂质的影响 ( ± s . n=6 )
给药量 主动脉组织匀浆脂质 (mmol/lOOg组织)
组别
(mg/kg) TC TG
Z01组 16.8mg/kg 1.38±0.93* 1.04±0.42*
Z02组. 26.5mg/kg 1.76±0.36* 1.36±0.39*
立普妥组 2.5mg/kg 1.47±0.36* 0.94±0.53*
力平之组 20mg kg 1.34±0.64* 0.91±0.33*
模型组 - 4.99±2.62 2.27±0.91
空白组 0.35±0.06 0.70±0.11
注: *与模型组相比, 均数的差异有统计学意义(P < 0.05 );
表 12中实验各组药物对主动脉组织勾浆中 TC影响的结果显示, 药物组合物 Z01 、 Z02组均有不同程度降低脂代谢紊乱家兔主动脉中 TC含量的作用, 与立普妥组、 力平之组比较无明显差异 (P〉0.05 )。 从降低主动脉中 TC 的 药效作用趋势分析得出, 药物组合物 Z01组 >药物组合物 Z02组。
实验各组药物对主动脉组织匀浆中 TG影响的结果显示, 药物组合物 Z01 、 Z02组均有不同程度降低脂代谢紊乱家兔主动脉中 TG含量的作用, 与立普 妥组、 力平之组比较无明显差异 (P > 0.05 ); 从药效作用趋势分析得出, 药 物组合物 Z01组〉 Z02组。
从实验各组药物对主动脉组织匀浆中脂质含量的影响可以看出, 本发明药物 组合物 Z01, Z02均具有降低主动脉中脂质含量的作用, 表现为改善主动脉 因高脂饮食导致的粥样硬化。
( 2 )实验各组动物于末次给药后 24h处死,取肝脏做组织匀浆测定其脂质含 量并进行统计, 见表 13。
表 13 各给药组对肝脏组织匀浆中脂质的影响 ( f ± s.
给药量 肝脏组织匀浆脂质 (mmol/lOOg组织)
组别
(mg/kg) TC LDL-C
Z01组 16.8mg/kg 1.39±0.70* 0.61±0.42*
Z02组 26.5mg/kg 1.59±1.08* 0.80±0.58*
立普妥组 2.5mg/kg 1.24土 0.53* 0.51±0.38*
力平之组 20mg/kg 2.46±0.13* 1.27±0.14*
模型组 - 5廉 2.94 3.95±2.61
空白组 一 0.33±0.08 0.05±0.02
注: *与模型组相比, 均数的差异有统计学意义(P < 0.05 );
表 13 中实验各组药物对肝脏组织匀浆中 TC影响的结果显示, 药物组合物 Z01 、 Z02组均有不同程度降低脂代谢紊乱家兔肝脏组织中 TC含量的作用, 与立普妥组、 力平之组比较无明显差异 (P > 0.05 )。 从降低肝脏组织中 TC 的药效作用趋势分析得出, 药物组合物 Z01组〉 Z02组。
实验各组药物对肝脏组织匀浆中 LDL-C影响的结果显示,药物组合物 Z01 、 Z02组均有不同程度降低脂代谢紊乱家兔肝脏组织中 LDL-C含量的作用,与 立普妥组、 力平之组比较无明显差异(P > 0.05 ); 从药效作用趋势分析得出, 药物组合物 Z01组〉 Z02组。
从实验各组药物对肝脏组织匀浆中脂质含量的影响可以看出, 本发明药物组 合物具有降低肝脏组织中胆固醇含量的作用, 表现为抑制肝脏组织中胆固醇 的合成。
2. 对主动脉粥样硬化斑块面积的影响
实验各组动物于末次给药后 24h处死, 取主动脉做大体染色并计算斑块面积 的百分比率进行统计, 见表 14。
表 14各给药组对主动脉粥样硬化斑块面积的影响 ( f ± s.z). n=6 )
给药量
组别 斑块百分比
(mg/kg)
Z01组 16.8mg/kg 14.9%±5.0%*
Z02组 26.5mg/kg 21.0%±5.9%*
立普妥组 2.5mg/kg 14.1%±2.7%*
力平之组 20mg/kg 15.2%±4.4%*
模型组 - 51.8%±17.5%
空白组 - 0
*与模型组相比, 均数的差异有统计学意义 (P < 0.05 );
表 14中实验各组药物对主动脉粥样硬化斑块面积影响的结果显示,药物组合 物 Z01 、 Z02组均有不同程度改善主动脉粥样硬化斑块的作用,与立普妥组、 力平之组比较无明显差异 (P > 0.05 )。 从改善主动脉粥样硬化斑块的药效作 用趋势分析得出, 药物组合物 Z01组〉药物组合物 Z02组。
综上所述, 本发明药物组合物具有预防和改善家兔动脉粥样硬化的疗效。 试验例 10 本发明药物组合物对家兔动月永粥样硬化治疗作用
材料和方法
动物: 纯种日本大耳白兔, 1级, 雄性。 3月龄, 1.5 - 2.0 kg/只。
药品: Z01 (刺嚢酸:齐墩果酸 =3:1 ,其中刺囊酸和齐墩果酸的总量为 99.0% ), 自制类白色片剂, 批号: 090205; Z02 (刺嚢酸: 齐墩果酸 =1 : 1, 其中刺嚢酸 和齐墩果酸总量为 94.2% ), 自制类白色片剂, 批号: 090206; 阿托伐他汀钙 片 (立普妥), 由辉瑞公司生产, 批号: 95837012; 非诺贝特胶嚢(力平之), 由法国利博福尼制药公司生产, 批号: 12094; 生理盐水, 成都青山利康药业 有限公司提供, 无色澄明液体, 批号: A0703025。 牛血清白蛋白 (BSA) 由美 国 sigma公司生产。
仪器: 全自动血液生化分析仪 (瑞士 Roche Integra 400 Plus ); TGL-16G离心 机; AB 104-N电子天平; BP211D电子天平; OLYMPUS光学显微镜; 倒置 显微镜 (带彩图系统) Zeiss公司生产。
方法: 动物适应性喂养 10日后, 将 50只动物进行完全随机分组。 组别情况 为 Z01 组 (16.8mg/kg)、 Z02组 (26.5mg/kg)、 立普妥组 (2.5mg/kg)、 力平之组 (20mg/kg)、 模型组, 每组 9只; 空白对照组 6只。 分组后, 各给药组和模型 组每日给予高脂饲料(由 1 %胆固醇 +5 %炼制猪油 +10 %蛋黄粉 +84%基本詞 料组成)喂养, 空白组给予基本饲料喂养, 期间第 4周末, 经兔耳缘静脉一 次性注射 10 % BSA 200 mg / kg,促进动物 AS模型形成。 8周的造模完成后, 停止高脂飼料, 各组均给予基本饲料喂养, 并按分组情况开始灌胃给药, 周 期为 12周。 实验数据用 SPSS 13.0统计软件包进行处理, 计量资料以均数士 标准差 ( ^HD. )表示, 非参数资料数据统计采用 ruskal-wallis H检验, 组与组之间的两两比较采用 Nemenyi法检验。
结果:
1. 对血管内膜中膜厚度的影响
末次给药后处死动物, 胸主动脉大体染色后, 分别横切取近心脏端处、 近心 脏端以下 2cm处、 近心脏端以下 4cm处小段血管作石蜡包埋、 切片及 HE染 色后, 计算血管内膜与中膜厚度的比值进行统计分析, 见表 15。
表 15 各给药组对血管内膜中膜厚度的影响 ( f ± s. ).
给药量
组别 内膜 /中膜比值
(mg/kg)
Z01组 16.8mg/kg 0.4±0.3*
Z02组 26.5mg/kg 0.6±0.4*
立普妥组 2.5mg/kg 0.4±0.2*
力平之组 20mg/kg 0.4±0.1 *
模型组 - 1.6±1.2
空白组 - 0.03±0.01
注: *与模型组相比, 均数的差异有统计学意义(P < 0.05 );
从表 15 的实验结果可以得出与模型组比较两种实验样品组均具有降低内膜 与中膜厚度的比值作用, 与阳对组 (立普妥、 力平之组) 无明显差异。 该结 果可以体现在治疗动脉粥样硬化的疗效作用。
2. 对主动脉病理组织学的影响
末次给药后处死动物, 胸主动脉大体染色后, 分别横切取近心脏端处、 近心 脏端以下 2cm处、 近心脏端以下 4cm处小段血管作石蜡包埋、 切片及 HE染 色进行组织病理观察。 主动脉横切面进行 HE染色结果, 见附图 2 - 7。
从模型组的 HE染色可以看到明显的主动脉内皮增生, 荷胆固醇的巨噬细胞 源性泡沫细胞在包埋、 染片的过程中流失脂质, 剩下蓬松状的空泡, 但细胞 核仍清晰可见,表现为蓬松状的泡沫细胞; 实验样品组主动脉内皮增生较薄, 具有改善动脉粥样硬化作用, 与立普妥、 力平之组无明显差异。 实验样品从 改善内皮增生的趋势分析得出 , 药物组合物 Z01组〉药物组合物 Z02组。 综上所述, 本发明药物组合物具有治疗家兔动脉粥样硬化的疗效。 工业应用性
本发明通过控制药物组合物中刺嚢酸和齐墩果酸的比例, 显著降低了肝 毒性, 使其在心血管疾病治疗中更安全有效。 通过控制皂角提取物中刺嚢酸 和齐墩果酸的重量比,从而得到优化后的皂角提取物, 不但可以降低肝毒性, 而且能大大降低了生产成本, 因此具有积极的意义和良好的前景, 适于工业 应用。