CN101884637A - 一种治疗心血管疾病的药物组合物及其应用 - Google Patents

一种治疗心血管疾病的药物组合物及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN101884637A
CN101884637A CN2010101829771A CN201010182977A CN101884637A CN 101884637 A CN101884637 A CN 101884637A CN 2010101829771 A CN2010101829771 A CN 2010101829771A CN 201010182977 A CN201010182977 A CN 201010182977A CN 101884637 A CN101884637 A CN 101884637A
Authority
CN
China
Prior art keywords
acid
group
echinocystic
oleanolic acid
medicine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2010101829771A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101884637B (zh
Inventor
郭礼新
叶剑明
万丽鹤
任治军
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
KANGHONG PHARMACEUTICAL CO Ltd CHENGDU
Original Assignee
KANGHONG PHARMACEUTICAL CO Ltd CHENGDU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by KANGHONG PHARMACEUTICAL CO Ltd CHENGDU filed Critical KANGHONG PHARMACEUTICAL CO Ltd CHENGDU
Priority to CN2010101829771A priority Critical patent/CN101884637B/zh
Publication of CN101884637A publication Critical patent/CN101884637A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101884637B publication Critical patent/CN101884637B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A61K36/483—Gleditsia (locust)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/06—Antiarrhythmics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation, decoction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供了一种治疗心血管疾病的药物组合物，它是由含有下述重量配比的成分制备而成的制剂：刺囊酸3～1份、齐墩果酸1份。本发明还提供了一种皂角提取物，它含有刺囊酸和齐墩果酸的总量为90.0％～99.9％，且刺囊酸与齐墩果酸的重量比为3∶1～1∶1。本发明还提供了该提取物的制备方法和用途。本发明药物组合物通过控制药物组合物中刺囊酸和齐墩果酸的比例，降低了肝毒性，使其在心血管疾病治疗中更安全有效。通过控制皂角提取物中刺囊酸和齐墩果酸的重量比得到优化后的皂角提取物，不但可以降低肝毒性，而且大大降低了生产成本。

Description

一种治疗心血管疾病的药物组合物及其应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种治疗心血管疾病的药物组合物及其应用。
背景技术
皂角(又名皂荚)在我国分布很广，其不但具有优良的林学价值，而且在中成药的临床开发中具有十分广阔的应用前景。皂角在不同发育条件下可形成两种果实，成熟肥大者为大皂角(Fructus Gleditsiae Sinensis)，发育不完全瘦小者为猪牙皂(Fructus Gleditsiae Abnormalis)。
范科华等[范科华等，华西药学杂志，2006，21(4)：339-342]提出了皂角提取物对心肌缺血犬心肌梗死具有保护作用；丁云录等[丁云录等，天然产物的研究与开发，2006，18：275-278]对麻醉犬冠脉结扎形成急性心肌缺血的保护作用进行了研究，发现皂角皂苷能改善心肌缺血，缩小心肌梗死面积；丁云录等[丁云录等，中国新药与临床杂志，2006，26(2)：110-113]对皂荚皂苷对大鼠心肌缺血的影响也做了研究，发现皂荚皂苷在改善大鼠心肌缺血、缩小心肌梗死面积方面有很好的疗效。
关于皂角皂苷的提取方法，目前报道的文献有：专利申请号：200910020233.7，发明名称：一种皂荚皂苷提取物及其制备方法与应用，该本发明公开了一种皂荚皂苷提取物及其制备方法以及在治疗肺癌、肝癌、胃癌、大肠癌和白血病中的应用，该皂荚皂苷提取物是以猪牙皂或大皂角为原料，经水或乙醇提取和大孔树脂分离纯化而制得，其总皂苷含量在60％以上，皂苷提取物主要由多种五环三萜皂苷化合物组成。专利申请号：02109825.5，发明名称：从皂角中提取三萜酸的方法及三萜酸的医药用途和中药制剂，本发明公开一种从皂角中提取三萜酸的方法及三萜酸的医药用途和中药制剂，将中药皂角用50～70％的乙醇提取、脱色、过滤、回收乙醇，再用去离子水稀释，经大孔吸附树脂柱纯化、洗脱、浓缩、干燥，得三萜总皂苷；该发明的提取物可用于制备治疗和预防高血脂症、脂肪肝和动脉粥样化等疾病的药物。
赫玉芳[赫玉芳，皂角皂苷元制备及其抗心肌缺血药效学研究，长春中医药大学硕士学位论文，2006]发现皂角皂苷毒性较大，限制了皂角皂苷在临床中的应用；此外，皂角皂苷元中的含有活性成分刺囊酸，专利申请号：03100676.0，发明名称：刺囊酸的制备方法、药物制剂及医药新用途，公开了皂角皂苷酸水解后制得的刺囊酸在治疗冠心病、心绞痛、心肌缺血疾病中表现出了很好的药效。目前，针对皂角皂苷元文献的报道较少，除了刺囊酸外，陈晓岚等，皂角皂苷元化学成分研究，中草药，2001年32卷3期，报道了皂角皂苷元的化学结构，通过提取、完全水解、层析等方法，从皂角中获得2种皂苷元，分别为3-羟基-12-齐墩果烯-28-酸和3，16-二羟基-12-齐墩果烯-28-酸。但是目前对皂角皂苷元的研究仅停留在单一活性成分研究基础之上，由于药材提取物本身就是由大量已知和未知成分组成，皂角皂苷元中的化合物也较多，如何充分地发挥皂角皂苷元的活性，是目前急需解决的问题。
发明内容
本发明的技术方案是提供了一种治疗心血管疾病的药物组合物，本发明的另一技术方案是提供了一种含有刺囊酸和齐墩果酸的皂角提取物及其制备方法和用途。
本发明提供了一种治疗心血管疾病的药物组合物，其活性成分是由下述重量配比的成分组成：
刺囊酸3～1份、齐墩果酸1份。
进一步优选地，其活性成分是由下述重量配比的成分组成：
刺囊酸3～2份、齐墩果酸1份。
更进一步优选地，其活性成分是由下述重量配比的成分组成：
刺囊酸3份、齐墩果酸1份。
其中，所述的刺囊酸、齐墩果酸来源于植物提取物或化学合成物。
本发明还提供了所述的药物组合物在制备预防或治疗心血管疾病的药物中的用途。
其中，所述的药物是预防或治疗冠心病心绞痛、心肌缺血、心肌梗死、心律失常、高脂血症及动脉粥样硬化的药物。
本发明提供了一种皂角提取物，它含有刺囊酸和齐墩果酸的总重量百分比为90.0％～99.9％，且刺囊酸与齐墩果酸的重量比为3∶1～1∶1。
进一步优选地，所述的刺囊酸和齐墩果酸的总重量百分比为90.0％～99.9％，且刺囊酸与齐墩果酸的重量比为3∶1～2∶1，更优选为3∶1。
本发明还提供了一种制备皂角提取物的方法，它包括如下步骤：
a、取大皂角药材，加水煎煮，过滤，浓缩；
b、浓缩液加入酸、水或含水乙醇，其中酸的浓度为2mol/L、乙醇浓度1-45％，搅拌、沸腾水解，过滤，滤饼用纯化水洗至流出液pH＞6，80℃干燥得皂角皂苷元粗品；
c、皂角皂苷元粗品用15～40倍的95％乙醇加热溶解，加1～4％药用活性炭，搅拌、沸腾30min，趁热过滤，滤液调pH值2～6，回收乙醇，冷却，析晶，80℃干燥得皂角提取物。
本发明还提供了所述的皂角提取物在制备预防或治疗心血管疾病的药物中的用途。
其中，所述的药物是预防或治疗冠心病心绞痛、心肌缺血、心肌梗死、心律失常、高脂血症及动脉粥样硬化的药物。
申请人在实验中发现，刺囊酸使用过程中具有较强的毒副作用，而且在研究中也发现不但刺囊酸存在一定的毒性，皂角皂苷元(刺囊酸和齐墩果酸总含量在70％左右)也具有一定的毒副作用，具体是共纳入6例(男女各半)受试者，给药剂量及用法为：一次500mg，一日三次，其中4例(男女各半)受试者在累计给药5～11次时，出现ALT和AST升高。为了更好的发挥刺囊酸的药效学性能，降低毒副作用，申请人经过大量的实验研究发现在活性组分为刺囊酸与齐墩果酸，二者重量比为3∶1-1∶1之间，能够降低其在治疗心血管疾病中的毒副作用，使刺囊酸的安全范围更大，更加安全有效；同时从皂角中制备的皂角提取物，含有刺囊酸与齐墩果酸总含量为90.0％-99.9％，二者重量比为3∶1-1∶1之间，通过控制刺囊酸和齐墩果酸的总含量和二者的重量比，使优化后的皂角提取物不但能够显著治疗心血管疾病，而且能显著降低肝毒性，同时也能大大降低了生产成本。
综上所述，本发明与现有技术相比具有以下积极效果：
1、通过控制药物组合物中刺囊酸和齐墩果酸的比例，显著降低了肝毒性，使其在心血管疾病治疗中更安全有效。
2、通过控制皂角提取物中刺囊酸和齐墩果酸的重量比，从而得到优化后的皂角提取物，不但可以降低肝毒性，而且能大大降低了生产成本。
附图说明
图1药物的HPLC谱图：A刺囊酸，B齐墩果酸，C：实施例1制备的皂角提取物(刺囊酸∶齐墩果酸＝1∶1)，D：实施例2制备的皂角提取物(刺囊酸∶齐墩果酸＝2.1∶1)，E：实施例3制备的皂角提取物(刺囊酸∶齐墩果酸＝2.4∶1)，F：实施例4制备的皂角提取物(刺囊酸∶齐墩果酸＝3∶1)
图2Z01组主动脉HE染色病理图片(×100)
图3Z02组主动脉HE染色病理图片(×100)
图4立普妥组主动脉HE染色病理图片(×100)
图5力平之组主动脉HE染色病理图片(×100)
图6模型组主动脉HE染色病理图片(×100)
图7空白组主动脉HE染色病理图片(×100)
具体实施方式
实施例1本发明皂角提取物的制备
取大皂角药材600g，切成约1cm的短段，加10倍量水煎煮两次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并两次滤液，减压浓缩至相对密度为1.05(室温)。浓缩液加入适量盐酸、水和乙醇，使溶液的总体积为浓缩液体积的4倍、盐酸的浓度为2mol/L、乙醇的含量为45％，加热、搅拌、沸腾水解3小时，过滤，滤饼用纯化水洗至流出液pH＞6，80℃干燥得皂角提取物粗品15.5g。皂角提取物粗品加入230mL乙醇，加热溶解，加入2.3g药用活性炭，搅拌、沸腾30min，趁热过滤，滤液调pH值2～3，室温静置24小时，过滤，滤饼用纯化水洗至流出液pH＞6，80℃干燥得皂角提取物6.3g。用高效液相色谱测定所得皂角提取物中刺囊酸和齐墩果酸的总含量为97.78％，其中刺囊酸∶齐墩果酸＝1∶1。
实施例2本发明皂角提取物的制备
取大皂角药材800g，切成约1cm的短段，加8倍量水煎煮两次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并两次滤液，减压浓缩至相对密度为1.10(室温)。浓缩液加入适量盐酸、水，使溶液的总体积为浓缩液体积的4倍、盐酸的浓度为2mol/L，加热、搅拌、沸腾水解3小时。过滤，滤饼用纯化水洗至流出液pH＞6，80℃干燥得皂角提取物粗品61.2g。皂角提取物粗品加入2450mL乙醇，加热溶解，加入49.0g药用活性炭，搅拌、沸腾30min，趁热过滤，滤液调pH值3～4，减压浓缩至稠膏状，冷却后过滤，滤饼用纯化水洗至流出液pH＞6，80℃干燥得皂角提取物8.5g。用高效液相色谱测定所得皂角提取物中刺囊酸和齐墩果酸的总含量为94.11％，其中刺囊酸∶齐墩果酸＝2.1∶1。
实施例3本发明皂角提取物的制备
大皂角药材2400g，切成约1cm的短段，加6倍量水煎煮两次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并两次滤液，减压浓缩至相对密度为1.20(室温)。浓缩液加入适量盐酸、水，使溶液的总体积为浓缩液体积的4倍、盐酸的浓度为2mol/L，加热、搅拌、沸腾水解3小时，过滤，滤饼用纯化水洗至流出液pH＞6，80℃干燥得皂角提取物粗品153.0g。皂角提取物粗品加入6120mL乙醇，加热溶解，加入122.4g药用活性炭，搅拌、沸腾30min，趁热过滤，滤液调pH值4～5，减压浓缩至850mL，冷却后过滤，滤饼用纯化水洗至流出液pH＞6，80℃干燥得皂角提取物24.1g。用高效液相色谱测定所得皂角提取物中刺囊酸和齐墩果酸的总含量为100.28％，其中刺囊酸∶齐墩果酸＝2.4∶1。
实施例4本发明皂角提取物的制备
大皂角药材800g，切成约1cm的短段，加8倍量水煎煮两次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并两次滤液，减压浓缩至相对密度为1.10(室温)。浓缩液加入适量盐酸、水，使溶液的总体积为浓缩液体积的4倍、盐酸的浓度为2mol/L，加热、搅拌、沸腾水解3小时，过滤，滤饼用纯化水洗至流出液pH＞6，80℃干燥得皂角提取物粗品51.0g。皂角提取物粗品加入2040mL乙醇，加热溶解，加入81.6g药用活性炭，搅拌、沸腾30min，趁热过滤，滤液调pH值5～6，减压浓缩至稠膏状，冷却后过滤，滤饼用纯化水洗至流出液pH＞6，80℃干燥得皂角提取物6.2g。用高效液相色谱测定所得皂角提取物中刺囊酸和齐墩果酸的总含量为96.33％，其中刺囊酸∶齐墩果酸＝3∶1。
检测方法
色谱条件 高效液相Dionex U-3000，色谱柱Agilent TC-C18250×4.6mm(5um)；以乙腈为流动相A，以水(用磷酸调节pH值至3.7)为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/min；柱温30℃；检测波长为215nm。
Figure GSA00000116549900051
具体谱图见图1，数据如下：
HPLC图谱数据
对照品的制备：
将制得的皂角提取物用色谱甲醇溶解至最大浓度，上GE AKTA basic制备型高效液相，色谱柱Kromasil C18250×20mm(5um)；流动相比例为甲醇∶水(磷酸调pH至3.7)＝85∶15；流速10.0ml/min；柱温30℃；检测波长为215nm；分取刺囊酸峰或齐墩果酸峰收集，析晶得刺囊酸(98.5％)或齐墩果酸(99.0％)。
刺囊酸：白色针状结晶，熔点305～307.5℃。
IRmaxcm-1：3572，3388，3209，2641(醇羟基-OH的伸缩振动引起)；2947，2925，2866(甲基)；1692，1679(羧基中的C＝O呼吸振动引起)；1465，1449，1368，1363，1307(羧基)1286，1333，1235(六碳环)；1140，1204，1187，1029，998，979，965，950，816(烯键)；788，744EI-MSm/z(％)：471(M-H+：100)，453(M-H+：55.0)，441(M-H+：80.0)，425(M-H+：92.0)，407(M-H+：100)
1HNMR(DMSO-d6，δ)：0.67～1.95(41H：-CH2-，-CH＜，-CH3)；2.21(1H：-CH2-)；2.88～3.00(2H：-CH＜)；4.32～4.71(2H：-OH)；5.20(1H：-CH＜)；12.01(1H：-COOH)13CNMR(DMSO-d6，δ)：38.17(C-1)，27.02(C-2)，76.89(C-3)，38.42(C-4)，54.97(C-5)，18.00(C-6)，32.70(C-7)，38.96(C-8)，46.23(C-9)，36.63(C-10)，22.90(C-11)，121.25(C-12)，143.98(C-13)，41.04(C-14)，35.21(C-15)，72.98(C-16)，47.30(C-17)，40.10(C-18)，46.38(C-19)，30.26(C-20)，34.69(C-21)，31.50(C-22)，28.28(C-23)，16.08(C-24)，15.25(C-25)16.85(C-26)，26.50(C-27)，178.24(C-28)，32.92(C-29)，24.20(C-30)。
齐墩果酸：
白色针晶，mp 307℃～308℃，(α)20D+73°。
1HNMR(DMSO-d6，δ)：δppm：5.16(m)，3.36(t)，1.09(s，Me)，0.91(s，Me)，0.84(s，Me)，0.81(s，Me)，0.80(s，Me)，0.71(s，Me)，0.67(s，Me)。
13CNMR(DMSO-d6，δ)：38.5(C-1)，27.19(C-2)，76.8(C-3)，38.22(C-4)，54.7(C-5)，18(C-6)，32.85(C-7)，39.66(C-8)，47(C-9)，37(C-10)，23.36(C-11)，121.53(C-12)，143.82(C-13)，41.31(C-14)，25.99(C-15)，22.86(C-16)，45.66(C-17)，41.3(C-18)，45.68(C-19)，30.19(C-20)，33.31(C-21)，32.41(C-22)，28.21(C-23)，15.15(C-24)，16.1(C-25)，16.8(C-26)，26.99(C-27)，178.6(C-28)，32.1(C-29)，22.6(C-30)。
实施例5本发明药物胶囊剂的制备
皂角提取物500g、乳糖1600g、淀粉340g、羧甲基淀粉纳50g，混合均匀，以适量70％乙醇制粒、干燥，加硬脂酸镁10g总混，装1号胶囊，每粒250mg。
实施例6本发明药物片剂的制备
皂角提取物400g、微晶纤维素800g、乳糖500g、聚乙烯吡咯烷酮K30125g、交联羧甲基纤维素钠125g、微粉硅胶40g，混合均匀，以适量50％乙醇制粒、干燥，加硬脂酸镁10g总混，压片，每片200mg。
根据上面方法，用刺囊酸(自制，纯度98.5％)300.4g、齐墩果酸(自制，纯度99.0％)99.6g或刺囊酸(自制，纯度98.5％)200.5g、齐墩果酸(自制，纯度99.0％)199.5g替代皂角提取物制备相应的片剂。
实施例7本发明药物组合物的制备方法
刺囊酸(自制，纯度98.5％)300.4g、齐墩果酸(自制，纯度99.0％)99.6g、微晶纤维素1815g、十二烷基硫酸钠50g、交联聚乙烯吡咯烷酮100g、羟丙甲纤维素125g，混合均匀，以适量纯化水制粒、干燥，加硬脂酸镁10g总混，装1号胶囊，每粒250mg。
利用上面的方法制备刺囊酸(自制，纯度98.5％)200.5g、齐墩果酸(自制，纯度99.0％)199.5g的胶囊。
实施例7本发明皂角提取物与论文：赫玉芳，皂角皂苷元制备及其抗心肌缺血药效学研究，长春中医药大学硕士学位论文，2006，所述的皂角皂苷元的提取工艺(对比工艺)：取干燥大皂角药材，切成长约1cm的短段，用75％乙醇回流提取三次，三次提取乙醇用量分别为生药重量的6倍量(v/w)、5倍量和5倍量，时间分别为3小时、2小时和1.5小时。合并三次提取液并减压浓缩至相对密度为1.20～1.30(50℃测)，减压干燥(80℃)得皂角皂苷；用2mol/L盐酸的乙醇液(乙醇浓度为45％)12倍量100℃水解3小时。滤过，弃去水解液，滤饼用去离子水洗至中性，干燥得皂角皂苷元粗品；再用95％乙醇40倍量加热至沸，加1％的药用活性炭(以溶液体积计)，趁热滤过，滤液减压浓缩回收乙醇、干燥(80℃)，得皂角皂苷元。共做了三批，其结果如表1。
表1对比工艺三批次的含量测定
  批号   皂苷元收率(％)   刺囊酸含量(％)   齐墩果酸含量(％)   总含量(％)
  1   2.17   52.40   21.46   73.86
  2   2.12   56.56   20.40   76.96
  3   2.46   57.64   18.83   76.47
平均皂苷元收率2.25％，其中刺囊酸含量：55.53％、齐墩果酸含量：20.23％，刺囊酸与齐墩果酸的总量为75.76％。
该工艺存在如下问题：
a、提取、水解工序需大量用到乙醇，导致生产成本过高。
b、减压干燥工序采用的是混合母液一起蒸干，缺乏安全性，不适合工业化大生产。
c、制得的皂苷元含20％以上的其它成分及杂质。
d、制得的皂苷元为灰白色粉末，制剂过程中遇水、醇等溶剂后呈深褐色，不利于开发增强患者服药顺应性的新剂型如口腔崩解片、缓控释制剂等。
与对比工艺相比，本发明皂角提取物的制备工艺，通过控制提取工艺中的水解pH，药用活性炭的用量等条件，可以控制刺囊酸与齐墩果酸的总量及二者的重量比。本发明皂角提取物的提取工艺具有如下优点：
a.提取工序中提取工艺从醇提改为水提、水解工序改为无醇水解，大大降低了生产成本。
b.减压干燥工序改用直接水解技术，减少了能耗、提高了生产效率，并且采用不含醇酸水解，降低了生产成本。
以上两点使皂角提取物工业化生产得以实现，在提高生产效率的同时降低了生产成本，并增强了生产的安全性，使皂角提取物能进一步开发成药品，造福于广大患者。
c.制得的皂角提取物系白色或类白色结晶体，刺囊酸和齐墩果酸总含量达90％以上，明显提高了质量，高纯度的皂角提取物更利于制定提取物标准；同时也更利于根据市场竞争的需要，开发各种新剂型。
d.改进后的工艺在明显提高皂角提取物的质量的同时，还进一步提高了其质量的稳定性及可控性，更利于进一步开发成药品。
以下通过毒理试验及药效学试验证明本发明的有益效果。
试验例1本发明药物组合物和刺囊酸毒理试验比较
材料和方法
动物：普通级成年健康Beagle犬，雌雄各半，年龄6～8月龄，体重9～11kg。
药品：Z01(刺囊酸∶齐墩果酸＝3∶1，由实施例4的方法制备，其中刺囊酸和齐墩果酸的总量为99％)，自制类白色片剂，批号：090205；Z02(刺囊酸∶齐墩果酸＝1∶1，由实施例1的方法制备，其中刺囊酸和齐墩果酸的量占提取物量的为94.2％)，自制类白色片剂，批号：090206；自制刺囊酸EA(含量测定含刺囊酸98.5％)，纯白色粉末，批号：090107；生理盐水，成都青山利康药业有限公司提供，无色澄明液体，批号：A0803025；谷丙转氨酶(ALT)试剂盒，批号：1007071；四川省迈克科技有限责任公司产品。
主要仪器：全自动血液生化分析仪(瑞士Roche Integra 400Plus)、全自动血液细胞分析仪(美国雅培CELL-DYN 3700SL)、全自动血凝分析仪(日本SYSMEX CA-500)、四道生理记录仪(成都仪器厂RM6240)、电子天平等。
方法：采用正常Beagle犬，经过2周的检疫期，剔除指标异常犬，随机分为10组，即空白对照组、Z01低剂量组(刺囊酸含量为50mg/kg)、Z01中剂量组(刺囊酸含量为150mg/kg)、Z01高剂量组(刺囊酸含量为250mg/kg)、Z02低剂量组(刺囊酸含量为50mg/kg)、Z02中剂量组(刺囊酸含量为150mg/kg)、Z02高剂量组(刺囊酸含量为250mg/kg)、EA低剂量组(50mg/kg)、EA中剂量组(150mg/kg)、EA高剂量组(250mg/kg)，每组8只，雌雄各半。各组均以10mL/kg容量灌胃，每天一次，连续21天。于给药前和给药后21天，分别采集清晨自然排泄的尿液，前肢静脉采血，进行尿常规、血常规、凝血时间的检测，描记II导联心电图；于给药前和首次给药后4天、7天、14天、21天，分别于犬前肢静脉采血测定肝功能相关生化指标。末次给药后24小时解剖每组动物，进行系统尸解，肉眼观察，称量实质性脏器，计算脏器系数，并进行病理组织学检查。实验数据用SPSS 11.5统计软件包进行处理，计量资料以均数±标准差
Figure GSA00000116549900091
表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验。病理结果采用描述性分析。
具体结果见表1。
结果：
1、受试动物生化ALT的检测及结果
表1结果显示：单一刺囊酸成分组：剂量为50、150、250mg/kg三组血液中谷丙转氨酶均在给药后7天升高，并持续到给药后21天，且谷丙转氨酶升高的程度与刺囊酸成剂量依赖关系，150、250mg/kg两个组给药后血液中谷丙转氨酶升高值均高过犬的谷丙转氨酶生化值正常范围；Z01(刺囊酸与齐墩果酸重量比为3∶1)刺囊酸含量为50、150mg/kg的两个剂量组给药后均未发现对谷丙转氨酶(ALT)有明显影响，刺囊酸含量为250mg/kg的剂量组在给药后7天即产生谷丙转氨酶升高趋势，于给药后14天血液中谷丙转氨酶含量最高(高过犬的谷丙转氨酶生化值正常范围)，但在给药后21天血液中谷丙转氨酶含量有所降低；Z02(刺囊酸与齐墩果酸含量比为1∶1)刺囊酸含量为50、150、250mg/kg三个组在给药后均未对谷丙转氨酶有影响。
2其他检测及结果：
给药期间，仅有个别动物出现呕吐、腹泻等症状，每只动物未见其它异常体征，动物体重与给药前比较没有明显变化。尿常规、血常规、凝血时间II导联心电图及除ALT外其余的生化指标在各个监测点检测结果与给药前和空白对照组比较均无明显改变，无统计学意义。
3、结论：由于该实验三个样品的剂量设定是以刺囊酸含量为统一标准，即低、中、高剂量组刺囊酸含量分别为50、150、250mg/kg。在该设定方案进行实验的结果表明刺囊酸能够使血液中ALT含量升高，并成量效关系，即刺囊酸能引起一定肝脏毒性。而我们通过将药物组合物中刺囊酸和齐墩果酸比例控制在3∶1～1∶1范围内，可以大大降低刺囊酸对肝脏的毒性反应。
表1长期毒性试验对犬血生化ALT的影响
Figure GSA00000116549900101
Figure GSA00000116549900102
注：*与给药前相比，均数的差异有统计学意义(P＜0.05)；
**与给药前相比，均数的差异有统计学意义(P＜0.01)
试验例2本发明药物组合物对麻醉犬冠状动脉结扎后心肌梗死的影响
材料与方法
动物：健康成年杂种犬，雌、雄兼用，体重12～16kg。
药品：Z01(刺囊酸∶齐墩果酸＝3∶1，其中刺囊酸和齐墩果酸的总量为99.0％)，自制类白色片剂，批号：090205；Z02(刺囊酸∶齐墩果酸＝1∶1，其中刺囊酸和齐墩果酸总量为94.2％)，自制类白色片剂，批号：090206；复方丹参片，四川蜀中药业有限公司生产，褐色片剂，批号：080202；戊巴比妥钠，美国sigma公司生产，白色或类白色粉末，批号：P3761；肝素钠，齐鲁制药有限公司生产，本品为无色或淡黄色的澄清液体，批号P20080227152652765；氯化硝基四氧唑蓝，上海晶纯试剂有限公司，黄色粉末，批号1124927。
仪器：HX-300动物呼吸机(成都泰盟科技有限公司)、全自动血液生化分析仪(瑞士Roche Integra 400 Plus)。
方法：实验犬经过适应性喂养后，将其随机分为模型组、阴性对照组(假手术组)、阳性对照组(复方丹参片25mg/kg)、Z01高剂量(44.4mg/kg)、Z01低剂量(22.2mg/kg)、Z02高剂量(70mg/kg)、Z02低剂量(35mg/kg)共7组，每组6只。实验动物用3％戊巴比妥钠(30mg/kg)静脉注射麻醉。颈部手术，气管插管，连接人工呼吸机，分离一侧颈动脉，做压力换能器插管，开胸，纵向剪开心包膜，做荷包固定托起心脏，分离冠状动脉左旋支及主动脉根部，取血3ml送检以测定结扎前磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和谷草转氨酶(AST)活性，此后，结扎冠状动脉(假手术组不结扎)，15min时测定各项指标，同时按上述分组经十二指肠给药，模型组、假手术组按同样途径给予同体积生理盐水。分别于给药后30min、60min、90min、120min、180min分别测定各项指标，最后取血3ml左右送检以测定结扎后或给药后CK、LDH和AST，然后处死动物，取下心脏，经水冲洗干净残血，再用滤纸吸去水分，称重；此后将心室切成约1.0cm厚薄的片，放入2％红四氮唑(TTC)溶液中于37℃温孵条件下染色15min，取出后将不染色的心肌剪下称重，计算出梗塞范围占心室重的百分率。试验数据用SPSS 11.5软件进行统计处理，组间和组内均数比较均采用单因素方差分析，结果用
Figure GSA00000116549900111
表示。
结果：
1.对犬心肌梗死区的影响
表2中犬心肌梗死面积测定结果显示，与模型组比，治疗组和复方丹参组显著降低心肌梗死犬的心梗面积(P＜0.01)；给药组与复方丹参组相比，各用药组之间无明显差异。
表2本发明药物组合物对结扎冠脉致犬心肌梗死模型心肌梗死区的影响
(
Figure GSA00000116549900112
n＝6)
Figure GSA00000116549900113
注：与模型组比较，*：P＜0.05；**：P＜0.01
2.对犬心肌酶学的影响
表3中心肌酶学的测试结果显示，心肌缺血犬的磷酸肌酸激酶(CK)活性：与模型组比较，各用药组均显著降低(P＜0.01)；与复方丹参组比，各用药组没有显著作用差异。心肌缺血犬的乳酸脱氢酶(LDH)活性：Z01高、Z02高与模型组比较，均明显降低(P＜0.05)；与复方丹参组比，各用药组没有显著作用差异。
表3本发明药物组合物对犬心肌梗死CK，LDH的影响(
Figure GSA00000116549900121
n＝6)
Figure GSA00000116549900122
注：与模型组比较，*：P＜0.05；**：P＜0.01
上述结果说明，本发明的两种类型药物组合物对犬心肌梗死有明显的改善作用。
试验例3本发明药物组合物对麻醉犬心肌缺血后血流动力学的影响
材料与方法
动物：健康成年杂种犬，雌、雄兼用，体重12～16kg。
药品：Z01(刺囊酸∶齐墩果酸＝3∶1，其中刺囊酸和齐墩果酸的总量为99.0％)，自制类白色片剂，批号：090205；Z02(刺囊酸∶齐墩果酸＝1∶1，其中刺囊酸和齐墩果酸总量为94.2％)，自制类白色片剂，批号：090206；复方丹参片，四川蜀中药业有限公司生产，褐色片剂，批号：080202；戊巴比妥钠，美国sigma公司生产，白色或类白色粉末，批号：P3761。
仪器：RM-6000型四道生理记录仪，日本光电产品；电磁流量计，5.0mm、1.0mm；日本光电产品。血气自动分析仪：AVLCOMPACT-3，瑞典产品。
方法：实验犬经过适应性喂养后，将其随机分为模型组、阴性对照组(假手术组)、阳性对照组(复方丹参片25mg/kg)、Z01高剂量(44.4mg/kg)、Z01低剂量(22.2mg/kg)、Z02高剂量(70mg/kg)、Z02低剂量(35mg/kg)共7组，每组6只。实验动物用3％戊巴比妥钠(30mg/kg)静脉注射麻醉。颈部手术，气管插管，连接人工呼吸机，于冠状动脉前降支第二个主要分支以下小心游离一段动脉，穿线备用，另分离升主动脉根部，固定电磁流量计记录心输出量，于左室心尖部插入心导管，通过压力传感器记录心室内压和微分(±dp/dtmax)，于动物四肢固定心电图电极以监测、记录心电图活动情况；记录正常血压、心电图、心输出量、左室压和±dp/dtmax后，于心脏左冠状动脉前降支游离处结扎造成心肌缺血改变；同时按上述分组经十二指肠给药，模型组按同样途径给予同体积生理盐水。并分别取颈动脉和冠状窦血液，应用血气自动分析仪测定血氧含量。试验数据用SPSS11.5软件进行统计处理，组间和组内均数比较均采用单因素方差分析，结果用
Figure GSA00000116549900123
表示。
结果：
1.对心肌缺血犬心肌耗氧量的影响
表4中各组心肌耗氧量(VO2)计算结果显示，与模型组比，各用药组均于1h～4h显著降低心肌耗氧量(P＜0.05，P＜0.01)；与复方丹参组比，各用药组没有显著差异。
表4本发明药物组合物对心肌缺血犬心肌耗氧量的影响(
Figure GSA00000116549900131
n＝6)
Figure GSA00000116549900132
注：与模型组比较，*：P＜0.05；**：P＜0.01
2.对心肌缺血犬心输出量的影响
表5中的心输出量(AF)测定结果显示，以模型组比，对心输出量测定结果显示，与模型组比，各给药组均于给药后30min～4h均有明显差异(P＜0.05，P＜0.01)；与复方丹参组之间无显著差异。
表5本发明药物组合物对心肌缺血犬心输出量的影响(
Figure GSA00000116549900133
n＝6)
注：与模型组比较，*：P＜0.05；**：P＜0.01
3.对心肌缺血犬心脏做功的影响
表6心脏做功(MW)指标测算结果显示，给药组和复方丹参组于给药30min即能显著降低心脏做功，与模型组比，各组于给药30min～4h作用显著(P＜0.05)，其中Z01高和Z02高分别在给药后1、2小时点作用非常显著(P＜0.01)；各用药组与复方丹参组之间无显著差异。
表6本发明药物组合物对心肌缺血犬心脏做功的影响(
Figure GSA00000116549900141
n＝6)
Figure GSA00000116549900142
注：与模型组比较，*：P＜0.05；**：P＜0.01
综上所述，两种类型的药物组合物具有抗心肌梗死作用，机制主要是通过改善心肌力学进而降低心肌耗氧量，另外对缺血心肌细胞膜具有一定的稳定和保护作用。可以进一步开发成为治疗心肌梗死、心绞痛及相关疾病的新药。
试验例4本发明药物组合物对垂体后叶素(PIT)致大鼠心肌缺血的影响
材料与方法
动物：SD大鼠，清洁级，5～6周龄，体重200～250g，雌、雄兼用。
药品：X01(刺囊酸∶齐墩果酸＝3∶1，由实施例4的方法制备，其中刺囊酸和齐墩果酸的总量为92.8％)，自制类白色片剂，批号：090309；X02(刺囊酸∶齐墩果酸＝1∶1，由实施例1的方法制备，其中刺囊酸和齐墩果酸的总量为98.8％)，自制类白色片剂，批号：090310；垂体后叶素(PIT)：批号：080315，蚌埠市宏业生化药厂产品；戊巴比妥钠：批号：F20020915；国药集团上海化学试剂有限公司进口分装；通心络胶囊，批号：080749；石家庄以岭药业股份有限公司产品。
仪器：ASB240U生物信号采集系统：成都遨生电子有限公司；KQ5200B型超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；Milli-Q Gradient A10纯水仪：美国Millipore公司；AB 104-N电子天秤：METTLER TOLEDO公司。
方法：筛选出对垂体后叶素(PIT)敏感且ECG正常的SD大鼠112只，5～6周龄，体重200～250g，随机分为7组，即模型组、空白对照组、阳性对照组(通心络胶囊360mg/kg)、X01高剂量(69.5mg/kg)、X01低剂量(34.7mg/kg)、X02高剂量(97.7mg/kg)、X02低剂量(48.8mg/kg)，每组15只，雌雄各半。各组以相应药物剂量连续灌胃给药7天，给药容量为10ml/kg。于末次给药100min腹腔注射1％戊巴比妥钠(30mg/kg)，待麻醉后将动物固定于蛙板，采用II导联记录2min内正常心电图，然后经大鼠尾静脉注射PIT(1.5IU/kg)，于20s内缓慢推注完毕。记录注射PIT后15min的心电变化，采集10s、30s、1min、2min、4min、6min、8min、10min、13min、15min各时间点ST段数据，比较造模后各时间点的心电图ST段偏移变化。
结果：
表7中ST段总体偏移值分析知，两个样品的高、低剂量均有一定的拮抗ST段的偏移作用，其中以X01高剂量组、X02高、低剂量组最为显著(P＜0.05或P＜0.01)。以心肌缺血模型的各时间点ST偏移值分析，X02在注射PIT后10sec、10min、13min、15min均表现出明显的抗心肌缺血作用，以上结果表明药物组合物X01、X02两批样品均有明显的抗心肌缺血作用，可作用于冠心病发病的早期及恢复期。
表7本发明药物组合物对PIT致急性心肌缺血大鼠心电ST段的影响(
Figure GSA00000116549900151
n＝15)
Figure GSA00000116549900152
注：与模型组比较，*：P＜0.05；**：P＜0.01
试验例5药物对垂体后叶素(PIT)致大鼠心肌缺血的影响
材料与方法
动物：SD大鼠，清洁级，5～6周龄，体重200～250g，雌、雄兼用。
药品：Y01(刺囊酸∶齐墩果酸＝3∶1，由实施例4的方法制备，总含量97.4％)，自制类白色粉末；刺囊酸EA(含刺囊酸98.4％)，自制纯白色粉末；齐墩果酸OA(含齐墩果酸97.8％)，自制纯白色粉末；垂体后叶素，批号：080315，蚌埠市宏业生化药厂产品；戊巴比妥钠，成都苌钲化玻有限公司生产；通心络胶囊，石家庄以岭药业股份有限公司产品。
仪器：ASB240U生物信号采集系统：成都遨生电子有限公司；KQ5200B型超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；Milli-Q Gradient A10纯水仪：美国Millipore公司；AB 104-N电子天秤：METTLER TOLEDO公司。
方法：筛选出对垂体后叶素(PIT)敏感且ECG正常的SD大鼠90只，5～6周龄，体重200～240g，随机分为6组，即模型组、空白对照组、阳性对照组(通心络胶囊360mg/kg)、Y01组(68.4mg/kg，其中刺囊酸含量为50mg/kg、齐墩果酸含量为16.7mg/kg)、EA组(50.8mg/kg，刺囊酸含量为50mg/kg)、OA组(17.0mg/kg，齐墩果酸含量为16.7mg/kg)，每组15只，雌雄各半。各组以相应药物剂量连续灌胃给药7天，给药容量为10ml/kg。于末次给药100min腹腔注射1％戊巴比妥钠(30mg/kg)，待麻醉后将动物固定于蛙板，采用II导联记录2min内正常心电图，然后经大鼠尾静脉注射PIT(1.5IU/kg)，于20s内缓慢推注完毕。记录注射PIT后15min的心电变化，采集10s、30s、1min、2min、4min、6min、8min、10min、13min、15min各时间点ST段数据，比较造模后各时间点的心电图ST段偏移变化。实验数据用SPSS 13.0统计软件包进行处理，计量资料以均数±标准差
Figure GSA00000116549900161
表示，多组间比较采用随机区组设计资料的方差分析，组与组之间的两两比较采用SNK-q检验。
结果：
表8中ST段总体偏移值分析知，Y01与EA均有一定的拮抗ST段的偏移作用，其中以Y01最为显著，总偏移度与模型组比较(P＜0.01)；OA拮抗ST段的偏移作用不明显，总偏移度与模型组比较(P＞0.05)，且与Y01组比较(P＜0.05)。以心肌缺血模型的各时间点ST偏移值分析，Y01、EA在注射PIT后几乎各点均表现出明显的抗心肌缺血作用，而OA在注射PIT后各点作用均不明显。
表8对PIT致急性心肌缺血大鼠心电ST段的影响(
Figure GSA00000116549900162
n＝15)
Figure GSA00000116549900163
注：与模型组比较，*：P＜0.05；**：P＜0.01。
与Y01组比较，△：P＜0.05。
表8表明皂角提取物Y01及刺囊酸样品均有明显的抗心肌缺血作用，可作用于冠心病发病的早期及恢复期，而齐墩果酸能够改善心肌缺血，但作用不明显。从作用强度上分析，皂角提取物Y01比刺囊酸、齐墩果酸有明显优势。
试验例6本发明药物组合物对氯化钡诱发大鼠心律失常的影响
材料与方法
动物：SD大鼠，清洁级，5～6周龄，体重200～250g，雌、雄兼用。
药品：X01(刺囊酸∶齐墩果酸＝3∶1，其中刺囊酸和齐墩果酸的总量为92.8％)，自制类白色片剂，批号：090309；X02(刺囊酸∶齐墩果酸＝1∶1，其中刺囊酸和齐墩果酸总量为98.8％)，自制类白色片剂，批号：090310；氯化钡，规格：分析纯，批号：0807002，开原化学试剂厂；复方丹参片，四川蜀中药业有限公司生产，褐色片剂，批号：080202。
仪器：ASB240U生物信号采集系统：成都遨生电子有限公司；KQ5200B型超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；Milli-Q Gradient A10纯水仪：美国Millipore公司；AB 104-N电子天秤：METTLER TOLEDO公司。
方法：筛选出对氯化钡敏感且心率正常的SD大鼠112只，5～6周龄，体重200～250g，随机分为6组，即模型组、阳性对照组(复方丹参片75mg/kg)、X01高剂量(69.5mg/kg)、X01低剂量(34.7mg/kg)、X02高剂量(97.7mg/kg)、X02低剂量(48.8mg/kg)，每组15只，雌雄各半。预防性灌胃给药每天1次，连续5日。于最后1次给药后，将大鼠ip 10％水合氯醛(400mg/kg)麻醉，仰位固定，稳定30分钟后，描记一段正常标II心电图，在给药45分钟后由舌静脉注射0.4％氯化钡4mg/kg诱发心律失常。观察记录II导联心电图变化。以室性双向性心律失常出现的时间(早晚)及其维持时间为指标。双相室性心律失常持续30min以上者，其持续时间按30min计算。
结果：
从表9中可以看出，受试药能明显延缓静脉注射氯化钡所引起的大鼠双相室性心律失常发生时间和缩短这种心律失常的持续时间。并且预防性治疗作用呈梯度排列，表现出较好的量-效关系；于阳性对照药复方丹参片组比较给药各组无显著差异，但是从表中的数据可以看到药物组合物X01、X02高剂量组在延缓心律失常发生时间和缩短持续时间要略优于复方丹参片。说明本发明中的药物组合物对心律失常疾病治疗作用具有优越性。
表9本发明药物组合物对BaCl2诱发大鼠心律失常的预防作用(
Figure GSA00000116549900181
n＝15)
Figure GSA00000116549900182
注：与模型组比较，*：P＜0.05；**：P＜0.01
试验例7本发明药物组合物和刺囊酸对家兔脂代谢紊乱的影响
材料和方法
动物：纯种日本大耳白兔，1级，雄性。3月龄，1.5～2.0kg/只。
药品：Z01(刺囊酸∶齐墩果酸＝3：1，其中刺囊酸和齐墩果酸的总量为99.0％)，自制类白色片剂，批号：090205；Z02(刺囊酸∶齐墩果酸＝1∶1，其中刺囊酸和齐墩果酸总量为94.2％)，自制类白色片剂，批号：090206；阿托伐他汀钙片(立普妥)，由辉瑞公司生产，批号：95837012；非诺贝特胶囊(力平之)，由法国利博福尼制药公司生产，批号：12094；生理盐水，成都青山利康药业有限公司提供，无色澄明液体，批号：A0703025。
仪器：全自动血液生化分析仪(瑞士Roche Integra 400Plus)；TGL-16G离心机；AB 104-N电子天平；BP211D电子天平。
方法：动物适应性喂养10日后，取60只动物给予高脂饲料(由1％胆固醇+5％炼制猪油+10％蛋黄粉+84％基本饲料组成)喂养，另取6只动物给予基本饲料喂养。饲料喂养15日后，空腹经耳中动脉采血，离出血清，分别测定其各项血脂指标。在60只给予高脂饲料的动物中，根据TC含量，选取42只动物进行区组随机分组，共分7组，每组6只；给予基本饲料的6只动物作为空白对照组。分组后，各组给予基本饲料喂养，按组别情况表开始灌胃给药，组别情况为Z01低剂量组(8.4mg/kg)、Z01高剂量组(16.8mg/kg)、Z02低剂量组(13.3mg/kg)、Z02高剂量组(26.5mg/kg)、立普妥组(2.5mg/kg)、力平之组(20mg/kg)、模型组、空白对照组。给药周期为4周。实验数据用SPSS 13.0统计软件包进行处理，计量资料以均数±标准差表示，多组间比较采用随机区组设计资料的方差分析，组与组之间的两两比较采用SNK-q检验。
结果：
实验各组动物分别于给药前、末次给药后24h空腹采血测定其总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量并进行统计，见表10。
表10各组药物对血清TC、TG的影响(
Figure GSA00000116549900191
n＝6)
Figure GSA00000116549900192
注：*与模型组相比，均数的差异有统计学意义(P＜0.05)；
**与模型组相比，均数的差异有统计学意义(P＜0.01)；
△与立普妥组相比，均数的差异有统计学意义(P＜0.05)；
▲与力平之组相比，均数的差异有统计学意义(P＜0.05)；
表10中实验各组药物对血清TC影响的结果显示，药物组合物Z01高、低剂量组、Z02高剂量组均有不同程度调节脂代谢紊乱家兔血清TC的疗效，与立普妥组、力平之组比较无明显差异(P＞0.05)；从降低血清TC的药效作用趋势分析得出，药物组合物Z01高剂量组＞Z02高剂量组＞Z01低剂量组＞Z02低剂量组。综上所述，前三种实验样品均具有调节改善家兔脂代谢紊乱的疗效。
实验各组药物对血清TG影响的结果显示，药物组合物Z01高、低剂量组、Z02高剂量组均有不同程度调节脂代谢紊乱家兔血清TG的疗效，与立普妥组、力平之组比较无明显差异(P＞0.05)；从降低血清TG的药效作用趋势分析得出，药物组合物高剂量组＞Z01低剂量组＞Z02高剂量组。
试验例8对家兔脂代谢紊乱的影响的比较
材料和方法
动物：纯种日本大耳白兔，1级，雄性。3月龄，1.5～2.0kg/只。
药品：Y01(刺囊酸∶齐墩果酸＝3∶1，总含量97.4％)，自制类白色粉末；刺囊酸EA(含刺囊酸98.4％)，自制纯白色粉末；齐墩果酸OA(含齐墩果酸97.8％)，自制纯白色粉末；阿托伐他汀钙片(立普妥)，由辉瑞公司生产；生理盐水，四川美大康佳乐药业有限公司生产。
仪器：全自动血液生化分析仪(瑞士Roche Integra 400Plus)；TGL-16G离心机；AB 104-N电子天平；BP211D电子天平。
方法：动物适应性喂养10日后，取40只动物给予高脂饲料(由1％胆固醇+5％炼制猪油+10％蛋黄粉+84％基本饲料组成)喂养，另取6只动物给予基本饲料喂养。饲料喂养15日后，空腹经耳中动脉采血，离出血清，分别测定其各项血脂指标。在40只给予高脂饲料的动物中，根据TC含量，选取30只动物进行区组随机分组，共分5组，每组6只；给予基本饲料的6只动物作为空白对照组。分组后，各组给予基本饲料喂养，按组别情况表开始灌胃给药，组别情况为Y01组(16.4mg/kg，其中刺囊酸含量为12mg/kg、齐墩果酸含量为4mg/kg)、EA组(12.2mg/kg，刺囊酸含量为12mg/kg)、OA组(4.0mg/kg，齐墩果酸含量为4mg/kg)、立普妥组(2.5mg/kg)、模型组、空白对照组。给药周期为4周。实验数据用SPSS 13.0统计软件包进行处理，计量资料以均数±标准差表示，多组间比较采用随机区组设计资料的方差分析，组与组之间的两两比较采用SNK-q检验。
结果：
实验各组动物分别于给药前、末次给药后24h空腹采血测定其总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量并进行统计，见表11。
表11各组药物对血清TC、TG的影响(n＝6)
Figure GSA00000116549900203
注：与模型组比较，*：P＜0.05；**：P＜0.01。
与Y01组比较，△：P＜0.05。
表11中实验各组药物对血清TC影响的结果显示，Y01组、EA组均有不同程度调节脂代谢紊乱家兔血清TC的疗效，给药后与模型组比较有明显差异(P＜0.01或P＜0.05)；OA组调节脂代谢紊乱家兔血清TC作用不明显，给药后与模型组比较无明显差异(P＞0.05)，且与Y01组比较(P＜0.05)。
实验各组药物对血清TG影响的结果显示，Y01组、EA组均有不同程度调节脂代谢紊乱家兔血清TG的疗效，与模型组比较有明显差异(P＜0.01或P＜0.05)；OA组调节脂代谢紊乱家兔血清TG作用不明显，与模型组比较无明显差异(P＞0.05)，且与Y01组比较(P＜0.05)。
综上所述，Y01组、刺囊酸具有明显调节改善家兔脂代谢紊乱的疗效。而齐墩果酸改善家兔脂代谢紊乱的疗效不明显。从作用强度上分析，Y01组比刺囊酸、齐墩果酸有明显优势。
试验例9本发明药物组合物对家兔动脉粥样硬化预防作用
材料和方法
动物：纯种日本大耳白兔，1级，雄性。3月龄，1.5～2.0kg/只。
药品：Z01(刺囊酸∶齐墩果酸＝3∶1，其中刺囊酸和齐墩果酸的总量为99.0％)，自制类白色片剂，批号：090205；Z02(刺囊酸∶齐墩果酸＝1∶1，其中刺囊酸和齐墩果酸总量为94.2％)，自制类白色片剂，批号：090206；阿托伐他汀钙片(立普妥)，由辉瑞公司生产，批号：95837012；非诺贝特胶囊(力平之)，由法国利博福尼制药公司生产，批号：12094；生理盐水，成都青山利康药业有限公司提供，无色澄明液体，批号：A0703025。牛血清白蛋白(BSA)由美国sigma公司生产。
仪器：全自动血液生化分析仪(瑞士Roche Integra 400Plus)；TGL-16G离心机；AB 104-N电子天平；BP211D电子天平；电动玻璃匀浆机DY89-II。
方法：动物适应性喂养10日后，将50只动物进行完全随机分组。组别情况为Z01组(16.8mg/kg)、Z02组(26.5mg/kg)、立普妥组(2.5mg/kg)、力平之组(20mg/kg)、模型组，每组9只；空白对照组6只。分组后，各给药组和模型组每日给予高脂饲料(由1％胆固醇+5％炼制猪油+10％蛋黄粉+84％基本饲料组成)喂养，空白组给予基本饲料喂养，同时按分组情况开始灌胃给药，周期为12周。期间给药第4周末，经兔耳缘静脉一次性注射10％BSA 200mg/kg，促进动物AS模型形成。实验数据用SPSS 13.0统计软件包进行处理，计量资料以均数±标准差
Figure GSA00000116549900211
表示，多组间比较采用完全随机设计资料的单因素方差分析，组与组之间的两两比较采用SNK-q检验；非参数资料数据统计采用Kruskal-wallis H检验，组与组之间的两两比较采用Nemenyi法检验。
结果：
1.对组织匀浆中脂质的影响
(1)实验各组动物于末次给药后24h处死，取主动脉做组织匀浆测定其脂质含量并进行统计，见表12。
表12各给药组对主动脉组织匀浆中脂质的影响(
Figure GSA00000116549900221
n＝6)
Figure GSA00000116549900222
注：*与模型组相比，均数的差异有统计学意义(P＜0.05)；
表12中实验各组药物对主动脉组织匀浆中TC影响的结果显示，药物组合物Z01、Z02组均有不同程度降低脂代谢紊乱家兔主动脉中TC含量的作用，与立普妥组、力平之组比较无明显差异(P＞0.05)。从降低主动脉中TC的药效作用趋势分析得出，药物组合物Z01组＞药物组合物Z02组。
实验各组药物对主动脉组织匀浆中TG影响的结果显示，药物组合物Z01、Z02组均有不同程度降低脂代谢紊乱家兔主动脉中TG含量的作用，与立普妥组、力平之组比较无明显差异(P＞0.05)；从药效作用趋势分析得出，药物组合物Z01组＞Z02组。
从实验各组药物对主动脉组织匀浆中脂质含量的影响可以看出，本发明药物组合物Z01，Z02均具有降低主动脉中脂质含量的作用，表现为改善主动脉因高脂饮食导致的粥样硬化。
(2)实验各组动物于末次给药后24h处死，取肝脏做组织匀浆测定其脂质含量并进行统计，见表13。
表13各给药组对肝脏组织匀浆中脂质的影响(
Figure GSA00000116549900223
n＝6)
Figure GSA00000116549900224
注：*与模型组相比，均数的差异有统计学意义(P＜0.05)；
表13中实验各组药物对肝脏组织匀浆中TC影响的结果显示，药物组合物Z01、Z02组均有不同程度降低脂代谢紊乱家兔肝脏组织中TC含量的作用，与立普妥组、力平之组比较无明显差异(P＞0.05)。从降低肝脏组织中TC的药效作用趋势分析得出，药物组合物Z01组＞Z02组。
实验各组药物对肝脏组织匀浆中LDL-C影响的结果显示，药物组合物Z01、Z02组均有不同程度降低脂代谢紊乱家兔肝脏组织中LDL-C含量的作用，与立普妥组、力平之组比较无明显差异(P＞0.05)；从药效作用趋势分析得出，药物组合物Z01组＞Z02组。
从实验各组药物对肝脏组织匀浆中脂质含量的影响可以看出，本发明药物组合物具有降低肝脏组织中胆固醇含量的作用，表现为抑制肝脏组织中胆固醇的合成。
2.对主动脉粥样硬化斑块面积的影响
实验各组动物于末次给药后24h处死，取主动脉做大体染色并计算斑块面积的百分比率进行统计，见表14。
表14各给药组对主动脉粥样硬化斑块面积的影响(
Figure GSA00000116549900231
n＝6)
Figure GSA00000116549900232
注：*与模型组相比，均数的差异有统计学意义(P＜0.05)；
表14中实验各组药物对主动脉粥样硬化斑块面积影响的结果显示，药物组合物Z01、Z02组均有不同程度改善主动脉粥样硬化斑块的作用，与立普妥组、力平之组比较无明显差异(P＞0.05)。从改善主动脉粥样硬化斑块的药效作用趋势分析得出，药物组合物Z01组＞药物组合物Z02组。
综上所述，本发明药物组合物具有预防和改善家兔动脉粥样硬化的疗效。
试验例10本发明药物组合物对家兔动脉粥样硬化治疗作用
材料和方法
动物：纯种日本大耳白兔，1级，雄性。3月龄，1.5～2.0kg/只。
药品：Z01(刺囊酸∶齐墩果酸＝3∶1，其中刺囊酸和齐墩果酸的总量为99.0％)，自制类白色片剂，批号：090205；Z02(刺囊酸∶齐墩果酸＝1∶1，其中刺囊酸和齐墩果酸总量为94.2％)，自制类白色片剂，批号：090206；阿托伐他汀钙片(立普妥)，由辉瑞公司生产，批号：95837012；非诺贝特胶囊(力平之)，由法国利博福尼制药公司生产，批号：12094；生理盐水，成都青山利康药业有限公司提供，无色澄明液体，批号：A0703025。牛血清白蛋白(BSA)由美国sigma公司生产。
仪器：全自动血液生化分析仪(瑞士Roche Integra 400Plus)；TGL-16G离心机；AB 104-N电子天平；BP211D电子天平；OLYMPUS光学显微镜；倒置显微镜(带彩图系统)Zeiss公司生产。
方法：动物适应性喂养10日后，将50只动物进行完全随机分组。组别情况为Z01组(16.8mg/kg)、Z02组(26.5mg/kg)、立普妥组(2.5mg/kg)、力平之组(20mg/kg)、模型组，每组9只；空白对照组6只。分组后，各给药组和模型组每日给予高脂饲料(由1％胆固醇+5％炼制猪油+10％蛋黄粉+84％基本饲料组成)喂养，空白组给予基本饲料喂养，期间第4周末，经兔耳缘静脉一次性注射10％BSA 200mg/kg，促进动物AS模型形成。8周的造模完成后，停止高脂饲料，各组均给予基本饲料喂养，并按分组情况开始灌胃给药，周期为12周。实验数据用SPSS 13.0统计软件包进行处理，计量资料以均数±标准差表示，非参数资料数据统计采用Kruskal-wallis H检验，组与组之间的两两比较采用Nemenyi法检验。
结果：
1.对血管内膜中膜厚度的影响
末次给药后处死动物，胸主动脉大体染色后，分别横切取近心脏端处、近心脏端以下2cm处、近心脏端以下4cm处小段血管作石蜡包埋、切片及HE染色后，计算血管内膜与中膜厚度的比值进行统计分析，见表15。
表15各给药组对血管内膜中膜厚度的影响(n＝6)
Figure GSA00000116549900243
注：*与模型组相比，均数的差异有统计学意义(P＜0.05)；
从表15的实验结果可以得出与模型组比较两种实验样品组均具有降低内膜与中膜厚度的比值作用，与阳对组(立普妥、力平之组)无明显差异。该结果可以体现在治疗动脉粥样硬化的疗效作用。
2.对主动脉病理组织学的影响
末次给药后处死动物，胸主动脉大体染色后，分别横切取近心脏端处、近心脏端以下2cm处、近心脏端以下4cm处小段血管作石蜡包埋、切片及HE染色进行组织病理观察。主动脉横切面进行HE染色结果，见附图2～7。
从模型组的HE染色可以看到明显的主动脉内皮增生，荷胆固醇的巨噬细胞源性泡沫细胞在包埋、染片的过程中流失脂质，剩下蓬松状的空泡，但细胞核仍清晰可见，表现为蓬松状的泡沫细胞；实验样品组主动脉内皮增生较薄，具有改善动脉粥样硬化作用，与立普妥、力平之组无明显差异。实验样品从改善内皮增生的趋势分析得出，药物组合物Z01组＞药物组合物Z02组。
综上所述，本发明药物组合物具有治疗家兔动脉粥样硬化的疗效。

Claims (10)

1.一种治疗心血管疾病的药物组合物，其特征在于：其活性成分是由下述重量配比的成分组成：
刺囊酸3～1份、齐墩果酸1份。
2.根据权利要求1所述的治疗心血管疾病的药物组合物，其特征在于：其活性成分是由下述重量配比的成分组成：
刺囊酸3～2份、齐墩果酸1份。
3.根据权利要求1所述的治疗心血管疾病的药物组合物，其特征在于：其活性成分是由下述重量配比的成分组成：
刺囊酸3份、齐墩果酸1份。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的治疗心血管疾病的药物组合物，其特征在于：所述的刺囊酸、齐墩果酸来源于植物提取物或化学合成物。
5.权利要求1-4任意一项所述的药物组合物在制备预防或治疗心血管疾病的药物中的用途。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述的药物是预防或治疗冠心病、心绞痛、心肌缺血、心肌梗死、心律失常、高脂血症或动脉粥样硬化的药物。
7.一种皂角提取物，其物征在于：它含有刺囊酸和齐墩果酸的总量为90.0％～99.9％，且刺囊酸与齐墩果酸的重量比为3∶1～1∶1，优选为3∶1～2∶1，更优选为3∶1。
8.一种制备权利要求7所述的皂角提取物的方法，它包括如下步骤：
a、取大皂角药材，加水煎煮，过滤，浓缩；
b、浓缩液加入酸、水或含水乙醇，其中酸的浓度为2mol/L、乙醇浓度1-45％，搅拌、沸腾水解，过滤，滤饼用纯化水洗至流出液pH＞6，80℃干燥得皂角皂苷元粗品；
c、皂角皂苷元粗品用15～40倍的95％乙醇加热溶解，加1～4％药用活性炭，搅拌、沸腾30min，趁热过滤，滤液调pH值2～6，回收乙醇，冷却，析晶，80℃干燥得皂角提取物。
9.权利要求7所述的皂角提取物在制备预防或治疗心血管疾病的药物中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述的药物是预防或治疗冠心病、心绞痛、心肌缺血、心肌梗死、心律失常、高脂血症或动脉粥样硬化的药物。
CN2010101829771A 2009-05-15 2010-05-11 一种治疗心血管疾病的药物组合物及其应用 Active CN101884637B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2010101829771A CN101884637B (zh) 2009-05-15 2010-05-11 一种治疗心血管疾病的药物组合物及其应用

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200910059307.8 2009-05-15
CN200910059307 2009-05-15
CN2010101829771A CN101884637B (zh) 2009-05-15 2010-05-11 一种治疗心血管疾病的药物组合物及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101884637A true CN101884637A (zh) 2010-11-17
CN101884637B CN101884637B (zh) 2011-09-14

Family

ID=43070838

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2010101829771A Active CN101884637B (zh) 2009-05-15 2010-05-11 一种治疗心血管疾病的药物组合物及其应用

Country Status (5)

Country Link
EP (1) EP2431041A4 (zh)
JP (1) JP5671524B2 (zh)
KR (1) KR101337422B1 (zh)
CN (1) CN101884637B (zh)
WO (1) WO2010130152A1 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102464698A (zh) * 2010-11-19 2012-05-23 苏州宝泽堂医药科技有限公司 一种高含量刺囊酸的制备方法
CN109549942A (zh) * 2019-01-16 2019-04-02 于海龙 刺囊酸在治疗脑梗死药物制备中的应用
CN110563792A (zh) * 2019-09-09 2019-12-13 南开大学 G蛋白偶联胆汁酸受体激动剂及其应用

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103145790B (zh) * 2013-03-18 2015-02-11 山东省中医药研究院 从猪牙皂中同时制备齐墩果酸和刺囊酸的方法
CN115227737B (zh) * 2022-08-03 2023-06-16 邹城市郭山岭生物科技开发有限公司 一种猪牙皂提取物的制备方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1216896C (zh) * 2003-01-21 2005-08-31 吉林天药科技股份有限公司 刺囊酸的制备方法、药物制剂及医药新用途
CN1267126C (zh) * 2003-10-24 2006-08-02 上海万和堂药业有限公司 一种治疗冠心病心绞痛的中药及其制备方法
US20070266228A1 (en) * 2006-05-10 2007-11-15 Smith Rodney W Block-based branch target address cache

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102464698A (zh) * 2010-11-19 2012-05-23 苏州宝泽堂医药科技有限公司 一种高含量刺囊酸的制备方法
CN109549942A (zh) * 2019-01-16 2019-04-02 于海龙 刺囊酸在治疗脑梗死药物制备中的应用
CN110563792A (zh) * 2019-09-09 2019-12-13 南开大学 G蛋白偶联胆汁酸受体激动剂及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
KR101337422B1 (ko) 2013-12-06
WO2010130152A1 (zh) 2010-11-18
KR20120010273A (ko) 2012-02-02
EP2431041A4 (en) 2012-12-26
EP2431041A1 (en) 2012-03-21
JP5671524B2 (ja) 2015-02-18
JP2012526730A (ja) 2012-11-01
CN101884637B (zh) 2011-09-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107441078B (zh) 一种治疗糖尿病的药物组合物及其制备方法和用途
CN101884637B (zh) 一种治疗心血管疾病的药物组合物及其应用
CN101033245B (zh) 具栖冬青苷的制备方法及应用
CN107648430A (zh) 一种含延龄草甾体皂苷类有效成分胶囊制剂的制备方法及其在制备各类药物中的应用
CN104435034B (zh) 一种三七总皂苷及其制备方法
CN101164566B (zh) 一种牡丹叶总苷提取物及其制备方法和用途
CN102114170B (zh) 防治心肌缺血再灌注损伤的中药组合物及其制备方法
CN103349671A (zh) 一种白藜芦醇螺旋藻组合物及其制剂和制法
CN104352624B (zh) 蒙药芯芭正丁醇提取物在制备防治糖尿病药物中的应用
CN101623437B (zh) 注射用生脉制剂及其制备方法
CN101574359B (zh) 一种治疗心脑血管疾病的药物组合物
CN1931233B (zh) 一种用于治疗心脑血管疾病的丹参和淫羊藿的药用组合物
CN100467025C (zh) 积雪草总苷、积雪草苷或羟基积雪草苷在制备防治心、脑血管疾病药物中的用途
CN105640971A (zh) 未成熟罗汉果提取物中的总皂苷在制备辅助降血糖药物方面的应用
CN102961415B (zh) 忍冬木层孔菌或其提取物的用途
CN1188406C (zh) 蒲黄提取物及其制备方法和用途
CN104740054B (zh) 一种防治心肌缺血的药物组合物及其制备方法和用途
CN102240293A (zh) 刺囊酸在制备预防和治疗心血管疾病的药物中的应用
CN111387502A (zh) 一种具有辅助降血糖作用的蜂胶苦瓜组合物及其制备方法
CN101036637B (zh) 丹参酮ⅰ磺酸钠在制备药物中的应用
CN110123827A (zh) 一种治疗由代谢异常所致疾病的药物组合物及其制备方法和应用
CN101392013A (zh) 含有杂质人参皂苷Rh1的人参皂苷Rb1
CN113264975B (zh) 一种刺梨根茎中提取的具有抗炎活性的提取物及其应用
CN109010444A (zh) 一种含有绞股蓝提取物的中药组合物及制备方法
CN101584699A (zh) 核黄素酯类衍生物用于制备治疗糖尿病及其并发症药物的用途

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant