CN115227737B - 一种猪牙皂提取物的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于中药提取物领域，具体涉及一种猪牙皂提取物的制备方法。该方法通过以下步骤实现：将猪牙皂粉碎得粗粉采用超临界二氧化碳萃取，得超临界提取物；将超临界提取后的猪牙皂渣加正丁醇‑水的混合溶液，然后加入纤维素酶，进行酶解，酶解结束后，灭酶；将灭酶后的猪牙皂渣中进行正己烷提取，得正己烷提取物；将正己烷提取物同超临界提取物混合均匀得猪牙皂提取物。本发明通过超临界萃取、正己烷提取进行组合式提取，能够将猪牙皂中的有效成分进行最大程度的萃取，得到的提取物活性优异，能够有效的抑制肝癌细胞生长与增殖。

Description

一种猪牙皂提取物的制备方法
技术领域
本发明属于中药提取物领域，具体涉及一种猪牙皂提取物的制备方法。
背景技术
猪牙皂系豆科苏木亚科皂荚属 (Gleditsia Linn.)植物皂荚 (GleditsiasinensisLain.)的不育果实，性辛、咸、温、归肺、大肠经，具有祛痰开窍、消肿散结之功效。该药被中国药典 (2005 年版)收录为常用药品之一，同时被广泛应用于北京同仁堂、杭州胡庆余堂、广州陈李济等多家中华老字号药厂的二十余种药品中。香港理工大学经过约4年的研究发现，猪牙皂的浓缩液具有抗癌特性，可有效抑制血癌及数种人类固体肿瘤，包括肝癌、前列腺癌、乳癌等癌细胞的生长。
临床上多种包含猪牙皂的药物对于肝癌的治疗具有很好的疗效，例如皂苷胶囊对肝癌等晚期恶性肿瘤具有确切治疗效果, 服用安全；软肝消肿止痛膏用于临床治疗晚期肝癌, 具有安全、有效、方便等优点。大量研究也表明,猪牙皂皂苷提取物具有显著的抗肝癌活性,Chow 等发现猪牙皂皂苷提取物具有明显的细胞毒作用，能够抑制肝癌细胞Hep-G2的增殖并诱导其凋亡；汪红卫等研究表明，猪牙皂正丁醇提取物（总皂苷）能够显著地抑制人肝癌SMMC-7721 细胞的生长；鸡胚尿囊膜试验表明，猪牙皂总皂苷能够减少纤维原细胞生长因子 (VEGF)的合成；猪牙皂通过抑制肿瘤细胞周围血管的再生，促进肝癌细胞的迅速凋亡，可作为治疗肿瘤的天然化疗药物。
目前，对于猪牙皂的提取多针对皂苷、多糖类的有效成分，并对其加以研究，对于猪牙皂中的其他成分的利用率较低。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种猪牙皂提取物的制备方法。
本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：
本发明提供了一种猪牙皂提取物的制备方法，包括以下步骤：
（1）将猪牙皂粉碎得粗粉，然后加入到萃取罐中，加入夹带剂溶液，浸润处理，然后采用超临界二氧化碳萃取，得超临界提取物；
（2）将超临界提取后的猪牙皂渣加正丁醇-水的混合溶液，然后加入纤维素酶，进行酶解，酶解结束后，灭酶；
（3）将灭酶后的猪牙皂渣中进行正己烷提取，得正己烷提取物；
（4）将正己烷提取物同超临界提取物混合均匀得猪牙皂提取物。
进一步的，步骤（1）中，所述夹带剂溶液为含有二辛酯琥珀酸磺酸钠的95%乙醇溶液，所述二辛酯琥珀酸磺酸钠在乙醇溶液中的浓度为1.5-3%；所述猪牙皂粗粉和夹带剂溶液的质量比为1：0.1-0.15；所述浸润处理的时间为30min。
进一步的，步骤（1）中，所述超临界萃取的条件为：压力为20-25MPa，首先在30-35℃下萃取15-20min，然后升温至40-45℃下萃取100-120min。
进一步的，步骤（2）中，所述正丁醇-水的比例为10：1；所述正丁醇-水的混合溶液的加入量为猪牙皂渣质量的2倍；所述纤维素酶的加入量占猪牙皂渣质量的2%。
进一步的，步骤（2）中，所述酶解为在30-35℃下酶解1.5h。
进一步的，步骤（3）中，所述猪牙皂渣和正己烷的料液比为1g：10-15mL。
进一步的，步骤（3）中，所述提取的时间为60-90min。
本发明的有益效果为：
（1）本发明通过超临界萃取、正己烷提取进行组合式提取，能够将猪牙皂中的有效成分进行最大程度的萃取，得到的提取物活性优异，能够有效的抑制肝癌细胞生长与增殖。
（2）本发明提供的超临界萃取过程中，通过预先采用夹带剂溶液进行浸润，能够提高萃取效率。
具体实施方式
下面通过具体的实施例对本发明的技术方案作进一步的解释和说明。
实施例1
（1）将猪牙皂粉碎得粗粉，然后加入到萃取罐中，加入占猪牙皂粗粉质量10%的含有二辛酯琥珀酸磺酸钠的95%乙醇溶液（二辛酯琥珀酸磺酸钠的质量浓度为1.5%），浸润处理30min，然后在压力25MPa，首先在35℃下萃取15min，然后升温至45℃下萃取120min，进行超临界二氧化碳萃取，得超临界提取物；
（2）将超临界提取后的猪牙皂渣加入2倍质量的正丁醇-水的混合溶液（体积比10：1），然后加入2%的纤维素酶，在30-35℃下酶解1.5h，酶解结束后，灭酶；
（3）将灭酶后的猪牙皂渣按照料液比为1g：12mL加入正己烷提取90min，得正己烷提取物；
（4）将正己烷提取物同超临界提取物混合均匀，除溶剂后得猪牙皂提取物。
实施例2
（1）将猪牙皂粉碎得粗粉，然后加入到萃取罐中，加入占猪牙皂粗粉质量15%的含有二辛酯琥珀酸磺酸钠的95%乙醇溶液（二辛酯琥珀酸磺酸钠的质量浓度为1.5%），浸润处理30min，然后在压力25MPa，首先在30℃下萃取20min，然后升温至45℃下萃取100，进行超临界二氧化碳萃取，得超临界提取物；
（2）将超临界提取后的猪牙皂渣加入2倍质量的正丁醇-水的混合溶液，然后加入2%的纤维素酶，在35℃下酶解1.5h，酶解结束后，灭酶；
（3）将灭酶后的猪牙皂渣按照料液比为1g： 15mL加入正己烷提取90min，得正己烷提取物；
（4）将正己烷提取物同超临界提取物混合均匀，除溶剂后得猪牙皂提取物。
对比例1
（1）将猪牙皂粉碎得粗粉，然后加入到萃取罐中，在压力25MPa，首先在35℃下萃取15min，然后升温至45℃下萃取120min，进行超临界二氧化碳萃取，得超临界提取物；
（2）将超临界提取后的猪牙皂渣加入2倍质量的正丁醇-水的混合溶液（体积比10：1），然后加入2%的纤维素酶，在30-35℃下酶解1.5h，酶解结束后，灭酶；
（3）将灭酶后的猪牙皂渣按照料液比为1g：12mL加入正己烷提取90min，得正己烷提取物；
（4）将正己烷提取物同超临界提取物混合均匀，除溶剂后得猪牙皂提取物。
对比例2
（1）将猪牙皂粉碎得粗粉，然后加入到萃取罐中，加入占猪牙皂粗粉质量10%的含有二辛酯琥珀酸磺酸钠的95%乙醇溶液（二辛酯琥珀酸磺酸钠的质量浓度为1.5%），浸润处理30min，然后在压力25MPa，首先在35℃下萃取15min，然后升温至45℃下萃取120min，进行超临界二氧化碳萃取，得超临界提取物；
（2）将超临界萃取后的猪牙皂渣按照料液比为1g：12mL加入正己烷提取90min，得正己烷提取物；
（3）将正己烷提取物同超临界提取物混合均匀，除溶剂后得猪牙皂提取物。
效果实施例
（一）将实施例1-2及对比例1-2进行体外抑菌试验：将猪牙皂提取物进行稀释1g/mL的药液，取保存的供试菌株(大肠杆菌)，经牛肉蛋白胨培养基培养后，转接肉汤培养基培养，将菌液稀释至106个cfu/mL；将灭菌后的牛肉膏蛋白胨凝固，作为底层培养基，用无菌吸管吸取大肠杆菌培养液0.1mL，滴在牛肉膏蛋白胨凝固的底层培养基上，将菌液涂匀，用无菌镊子在每个盛有底层培养基的培养皿中等距离放置3个牛津杯，用滴灌分别将药液加到牛津杯中， 以滴满为度，加盖。然后将滴加药液的培养皿水平置恒温箱内，37℃培养 18h，测量抑菌圈直径。抑菌试验结果见表1。
表1
Figure DEST_PATH_IMAGE001
（二）试验分为实施例1、对比例1-2，将制备得到的猪牙皂提取物稀释成浓度为65μg/mL，采用MTT法检测药物对细胞增殖抑制的影响：将已贴壁的人肝癌细胞朱Hep G2细胞，首先进行胰酶消化，然后采用台盼蓝染色后计算活细胞数，采用1640培养基稀释成10×104/mL浓度的细胞悬液，接种到培养板上，每孔添加细胞悬液200μL,然后加入不同组别的猪牙皂提取物10μL,37℃、100%相对湿度下培养24h、48h后去除，加入MTT继续孵育4h，然后去上清，加入二甲基亚砜至结晶物完全溶解，检测OD值，每组试验重复三次；同时设置空白对照组。通过OD值最终计算抑制率，参照公式为：
抑制率（%）={对照组OD值-实验组OD值}/对照组OD值×100%；
具体结果见表2。
表2
Figure 439938DEST_PATH_IMAGE002

Claims (3)

1.一种猪牙皂提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将猪牙皂粉碎得粗粉，然后加入到萃取罐中，加入夹带剂溶液，浸润处理，然后采用超临界二氧化碳萃取，得超临界提取物；
（2）将超临界提取后的猪牙皂渣加正丁醇-水的混合溶液，然后加入纤维素酶，进行酶解，酶解结束后，灭酶；
（3）将灭酶后的猪牙皂渣中进行正己烷提取，得正己烷提取物；
（4）将正己烷提取物同超临界提取物混合均匀得猪牙皂提取物；
步骤（2）中，所述正丁醇-水的比例为10：1；所述正丁醇-水的混合溶液的加入量为猪牙皂渣质量的2倍；所述纤维素酶的加入量占猪牙皂渣质量的2%；
步骤（2）中，所述酶解为在30-35℃下酶解1.5h；
步骤（1）中，所述夹带剂溶液为含有二辛酯琥珀酸磺酸钠的95%乙醇溶液，所述二辛酯琥珀酸磺酸钠在乙醇溶液中的浓度为1.5-3%；所述猪牙皂粗粉和夹带剂溶液的质量比为1：0.1-0.15；所述浸润处理的时间为30min；
步骤（1）中，所述超临界萃取的条件为：压力为20-25MPa，首先在30-35℃下萃取15-20min，然后升温至40-45℃下萃取100-120min。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述猪牙皂渣和正己烷的料液比为1g：10-15mL。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述提取的时间为60-90min。
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