CN102961415B - 忍冬木层孔菌或其提取物的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了忍冬木层孔菌或其提取物在制备调节雌激素、治疗围绝经期综合征的药物或保健品中的用途。本发明还提供了化合物hispolon的新用途。忍冬木层孔菌、其提取物或化合物hispolon，能与雌激素受体结合，对雌激素发挥双重调节作用，当内源性雌激素缺乏时，仍具有促进内源性雌激素分泌作用；采用忍冬木层孔菌、其提取物或化合物hispolon治疗后，不仅能有效缓解各种症状和体征，而且有减慢骨质疏松、心血管疾病等远期症状发生和进展的作用，可提高围绝经期综合征妇女的生存质量，为治疗围绝经期综合征开辟了新的途径。

Description

忍冬木层孔菌或其提取物的用途

技术领域

本发明涉及一种忍冬木层孔菌或其提取物的新用途。

背景技术

雌激素，是一种女性激素，主要由卵巢和胎盘产生，肾上腺皮质和雄性动物睾丸也产生少数雌激素。女性进入青春期后，卵巢开始分泌雌激素，以促进发育。雌激素还能促使皮下脂肪富集，体态丰满，产生女性第二性征；促使体内钠和水的潴留，骨中钙的沉积等。女性若缺乏雌激素，会出现围绝经期综合征、子宫阴道萎缩、盆腔内脏器下垂、皮肤失去光泽变皱、血脂异常、冠心病发病率提高、骨质疏松、老年痴呆等多种疾病或症状。其中，围绝经期综合征，是因雌激素水平波动或下降所致的以植物性神经系统功能絮乱合并神经心理症状为主的综合症，多发生于45-55岁的女性。约1/3的女性可以平稳过渡，没有明显不适，约2/3的女性出现程度不同的低雌激素血症引发的一系列症状，如，泌尿生殖系统变化、尿频、尿急、血管舒缩综合征、精神焦虑、抑郁、骨质疏松、脂代谢异常、心脑血管疾病等。

目前对缺乏雌激素的女性，若出现上述疾病或症状，可使用雌激素替代治疗，能够改善症状、提高生活质量。然而，雌激素替代疗法因副作用较大而被限制使用。后期研究发现，植物雌激素较为安全，可服用含有植物雌激素的膳食补充剂来对雌激素缺乏者进行相应调理。

忍冬木层孔菌，是土家族常用药材，主产于湖北省神农架林区、宜昌、恩施等地，常生长于忍冬属树木上。主要用于治疗慢性肝病和各种肿瘤。近年来，对忍冬木层孔菌的报道主要集中在其化学成分上，如，王晓梅对忍冬木层孔菌的化学成分进行了分离鉴定，得到了6个化合物,分别鉴定为:麦角甾醇过氧化物(1)、麦角甾醇(2)、香草醛(3)、3,4-二羟基苄叉丙酮(4)、β-谷甾醇(5)和正二十二烷酸(6)，其中,化合物4为新天然产物（王晓梅，等，忍冬木层孔菌化学成分研究，中药材，2011年34卷6期）。邓改改等，对忍冬木层孔菌的质量标准进行了研究，发现忍冬木层孔菌药材中醇溶性浸出物平均含量为11.1%；忍冬木层孔菌子实体中麦角甾醇过氧化物的平均含量为0.3%，3，4-二羟基苄叉丙酮的平均含量为0.08%（邓改改，等，忍冬木层孔菌质量标准研究，中药材，2011年34卷8期）。

化合物hispolon，是从层孔菌中发现的一类多酚类化合物，其结构式如下：

研究发现，该化合物hispolon具有一定的抗肿瘤、抗炎、抗细胞凋亡的活性。

目前还未见将忍冬木层孔菌、化合物hispolon用于调节雌激素和治疗围绝经期综合症等疾病的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种忍冬木层孔菌或其提取物的新用途。本发明的另一目的在于提供化合物hispolon的新用途。

本发明提供了忍冬木层孔菌或其提取物在制备调节雌激素的药物或保健品中的用途。

进一步地，所述药物或保健品是双向调节雌激素的药物或保健品。

进一步地，所述药物或保健品是治疗围绝经期综合症的药物或保健品中的用途。

进一步地，所述药物或保健品是治疗绝经所致的潮热出汗、失眠、泌尿道感染、性交困难、头晕、疲倦乏力、心悸、阴道炎、腰痛或/和烦躁的药物或保健品。

进一步地，所述药物或保健品是调节血脂异常的药物或保健品。

进一步地，所述药物或保健品是治疗绝经后骨质疏松症的药物或保健品中的用途。

进一步地，所述忍冬木层孔菌提取物是忍冬木层孔菌的水或乙醇提取物。

更进一步地，所述乙醇提取物为80-95%v/v乙醇提取物。

进一步地，所述水提取物中含有式1化合物在0.1%w/w以上；所述乙醇提取物中含有式1化合物在0.2%w/w以上；

式1化合物的结构式如下：

式1。

更进一步地，所述水提取物中含有式1化合物0.11%w/w；所述乙醇提取物中含有式1化合物0.28%w/w。

其中，所述忍冬木层孔菌是木层孔菌属真菌忍冬木层孔菌Phellinuslonicerinus(Bond.)Bond.et sing。

本发明还提供了式1化合物在制备调节雌激素、治疗围绝经期综合症或/和治疗绝经后骨质疏松症的药物或保健品中的用途，其结构式如下：

式1。

进一步地，所述药物或保健品是双向调节雌激素的药物或保健品。

进一步地，所述药物或保健品是治疗绝经所致的潮热出汗、失眠、泌尿道感染、性交困难、头晕、疲倦乏力、心悸、阴道炎、腰痛或/和烦躁的药物或保健品。

进一步地，所述药物或保健品是调节血脂异常的药物或保健品。

忍冬木层孔菌、其提取物或化合物hispolon，能与雌激素受体结合，对雌激素发挥双重调节作用，当内源性雌激素缺乏时，仍具有促进内源性雌激素分泌作用；采用忍冬木层孔菌、其提取物或化合物hispolon治疗后，不仅能有效缓解各种症状和体征，而且有减慢骨质疏松、心血管疾病等远期症状发生和进展的作用，可提高围绝经期综合征妇女的生存质量，为治疗围绝经期综合征开辟了新的途径。

附图说明

图1式1化合物Hispolone对照品的HPLC图谱；

图2式1化合物Hispolone的氢谱图；

图3式1化合物Hispolone的碳谱图。

具体实施方式

实施例1忍冬木层孔菌乙醇提取物的制备方法

取忍冬木层孔菌采于湖北宜昌，经中国科学院微生物研究所卯晓兰教授鉴定为木层孔菌属真菌忍冬木层孔菌(Phellinus lonicerinus(Bond.)Bond.etsing)，用粉碎机粉碎后过80目筛，得忍冬木层孔菌粉；取忍冬木层孔菌粉，用8倍95%的乙醇超声提取三次，每次提取1小时，减压浓缩，干燥得忍冬木层孔菌醇提物，出膏率为10.7%w/w。

实施例2忍冬木层孔菌水提取物的制备方法

取忍冬木层孔菌采于湖北宜昌，经中国科学院微生物研究所卯晓兰教授鉴定为木层孔菌属真菌忍冬木层孔菌(Phellinus lonicerinus(Bond.)Bond.etsing)，用粉碎机粉碎后过80目筛，得忍冬木层孔菌粉；取忍冬木层孔菌粉，用6倍的水回流提取3次，每次提取1小时，提取液减压浓缩，干燥得忍冬木层孔菌水提物，出膏率为12.1%w/w。

实施例3化合物hispolon分离鉴定

取实施例1制备的醇提物，用甲醇溶解，0.45微米膜过滤作为待制备样品，采用高效液相色谱制备。

制备条件为：制备柱：COSMOSIL5C18-MS-II10mmID*250mm；进样量：100微升；柱温：25℃；检测波长：380nm；流动相:A：乙腈,B：超纯水26%A和74%的B恒梯度洗脱。收集峰的保留时间为22min的洗脱液。该洗脱液减压浓缩，进一步纯化得到Hispolone，黄色粉末状固体，熔点137～138°C。波谱数据如下（见图1-3）：

HRMS:220.0732.HPLC-MS(RP-18-Phase,APCI+):m/z)220.97(100%,[M+H]⁺),219.28(37%).¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ=7.48(1H,d,J=15.6Hz,H-1),7.06(1H,d,J=2.0Hz,H-2′),6.97(1H,dd,J=8.0Hz,J=2.0Hz,H-6′),6.80(1H,d,J=8.0Hz,H-5′),6.40(1H,d,J=15.6Hz,H-2),5.76(1H,s,H-4),2.14(3H,s,H-6)ppm.¹³C NMR(100MHz,CD₃OD):δ=199.4(C,C-5),180.2(C,C-3),150.1(C,C-3′or4′),147.6(C,C-4′or3′),142.6(CH,C-1),129.4(C,C-1′),123.5(CH,C-6′or C-2),121.2(CH,C-2or C-6′),117.3(CH,C-2′orC-5′),115.9(CH,C-5′or C-2′),102.1(CH,C-4),27.6(CH3,C-6)ppm.

式1化合物（英文名hispolon）

实施例4忍冬木层孔菌及其提取物中式1化合物hispolon的含量测定

采用HPLC法对部分活性成分进行了含量测定：

忍冬木层孔菌粉的供试品制备：取忍冬木层孔菌粉1g，用8倍95%的乙醇浸泡2小时，超声提取，定量至10ml，提物液用0.45微米膜过滤作为待测样品；

忍冬木层孔菌醇提物和水提物的供试品制备：分别用甲醇配成1mg/ml，0.45微米膜过滤作为待测样品。

分析条件为：分析柱：Diamonsil C18(2)5μm250*4.6mm；进样量：10μl；柱温：25℃；检测波长：380nm；流动相:A：乙腈,B：0.2%磷酸水36%A和54%的B恒梯度洗脱。

用式1化合物hispolon标准品分别以相同条件进样0.1ug、0.2ug、0.3ug、0.4ug和0.5ug，制作标准曲线。计算出忍冬木层孔菌粉中含式1化合物为0.03%w/w，醇提物中式1化合物的含量约为0.28%w/w，水提物的约为0.11%w/w。

以下通过具体试验例来说明本发明的有益效果。下述试验例中，忍冬木层孔菌菌粉的用量以菌粉重量计，忍冬木层孔菌醇提物和水提物的用量均以提取物重量计，hispolon用量以化合物重量或摩尔用量计。

试验例1忍冬木层孔菌及其提取物对雌激素的双向调节作用

一、忍冬木层孔菌及其提取物的雌激素样作用

1、实验材料

药物：苯甲酸雌二醇注射液，上海通用药业股份有限公司；忍冬木层孔菌醇提物（实施例1），忍冬木层孔菌水提物（实施例2），式1化合物：（实施例3）。人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231，武汉中国典藏物培养中心；RPMl-1640干粉培养基，美国HyClone公司；青霉素、链霉素，华北制药股份有限公司；新生牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司；四甲基偶氮哇盐(MTT)，美国Sigma公司；二甲基亚枫(DMSO)，重庆东方试剂厂；

实验仪器：超净工作台，苏州净化设备厂；XDS-1B倒置显微镜，重庆光学仪器厂；LD4-2A离心机，北京医用离心机厂；酶联免疫检测仪，Genios Tecan；CO2培养箱，日本三洋公司。

2.1对MCF-7细胞增殖的影响

取对数生长期的MCF-7细胞(人乳腺癌细胞，对雌激素敏感)，调整细胞浓度至1×10⁴个/ml,接种于96孔板,用含10%小牛血清的DMEM培养液培养24小时让其贴壁。将培养基换成无酚红的培养基,然后加入不同浓度药物，阳性对照药用E2(17β–雌二醇)，每个药设4个浓度。在培养箱中37℃、5%CO₂培养4天,用MTT法测定细胞增殖：吸出培养基，每孔加入0.2%MTT30μl，继续培养4h，吸出MTT，每孔加入DMSO100μl，于540nm测定OD。结果见表1，所有的数据都用平均值±标准差表示，用方差分析进行统计学处理。

表1.药物对MCF-7细胞增殖的影响（n=6）

星号表式与对照组比较差异有显著性p﹤0.05(*),p﹤0.01(**)

2.2、对231细胞增殖的影响

取对数生长期的MDA-MB-231细胞(人乳腺癌细胞，缺乏雌激素受体)，调整细胞浓度至1×10⁴个/ml,接种于96孔板,用含10%小牛血清的L-15培养液培养24小时让其贴壁。将培养基换成无酚红的培养基,然后加入不同浓度药物，阳性对照药用E2(17β–雌二醇)，每个药设4个浓度。在培养箱中37℃、5%CO₂培养4天,用MTT法测定细胞增殖：吸出培养基，每孔加入0.2%MTT30μl，继续培养4h，吸出MTT，每孔加入DMSO100μl，于540nm测定OD。结果见表2，所有的数据都用平均值±标准差表示，用方差分析进行统计学处理。

表2.药物对231细胞增殖的影响（n=6）

星号表式与对照组比较差异有显著性p﹤0.05(*),p﹤0.01(**)

结果显示：忍冬木层孔菌醇提物、水提物及化合物hispolon具有促雌激素作用，当雌激素缺乏时，对雌激素敏感细胞株具有促进细胞增殖作用。对缺乏雌激素受体的乳腺癌细胞没有促进细胞生长作用，表明其雌激素作用主要是通过雌激素受体发挥作用。

二、忍冬木层孔菌及其提取物的抗雌激素作用

1、实验材料同试验例1。

2、实验方法与结果

取对数生长期的MCF-7细胞(人乳腺癌细胞，对雌激素敏感)，调整细胞浓度至1×10⁴个/ml,接种于96孔板,培养24小时让其贴壁。将培养基换成无酚红的培养基,然后加入不同浓度药物同时加入10^-7M的17β–雌二醇，每个药设4个浓度。以它莫西芬作用对照。在培养箱中37℃、5%CO₂培养4天,用MTT法测定细胞增殖：吸出培养基，每孔加入0.2%MTT30μl，继续培养4h，吸出MTT，每孔加入DMSO100μl，于540nm测定OD。结果见表3，所有的数据都用平均值±标准差表示，用方差分析进行统计学处理。

表3.药物对MCF-7细胞增殖的影响（n=3）

星号表式与对照组比较差异有显著性p﹤0.05(*),p﹤0.01(**)

表4它莫昔芬对MCF-7细胞增殖的影响（n=3）

星号表式与对照组比较差异有显著性p﹤0.05(*),p﹤0.01(**)

它莫昔芬能抑制MCF-7细胞增殖，表明该细胞对选择性雌激素受体调节剂敏感。当雌激素过多时，忍冬木层孔菌醇提物、水提物及成分hispolon具有抗雌激素作用，抑制细胞增殖。

小结：

忍冬木层孔菌醇提物、水提物及成分hispolon具有雌激素双向调节功能。当内源性雌激素缺乏时，显示雌激素活性;当雌激素过多时，又具有抗雌激素作用。

三、忍冬木层孔菌及其提取物与雌激素受体的结合作用

1、分子对接法计算

基于几何互补、电性互补的原则，采用分子对接法计算不同化合物与雌激素受体的结合能力，预测雌激素调节作用以及不同化合物与雌激素受体间的相互作用模式。雌激素α、β受体三维结构坐标从Protein Data Bank下载(PDB Code:3ERT、1NDE)。化合物分子结构构建后采用量子化学半经验算法PM3进行能量最小化。分子对接采用薛定谔软件中半柔性对接模块Glide，设置结合位点盒子大小为以打分值Gscore判断化合物与雌激素受体间相互作用强弱，Gscore值越负，表示化合物活性越好。

计算结果表明，hispolon对雌激素受体具有较强结合力。

表5hispolon对雌激素受体分子对接结果

2、与雌激素受体结合力测定（酵母双杂交实验）

采用重组人雌激素受体基因片段(hER)及共激活因子GRIP1的双杂交酵母(Y191)（日本富山大学馈赠）实测醇提物、化合物与雌激素受体的结合能力。

转雌激素受体酵母细胞加10ml的选择性培养基（缺少色氨酸和亮氨酸）于摇床30℃过夜（200r/min培养16~24h）。取每50μl培养液加入200μl新培养基加入药物2.5μl继续培养4h。取150μl放入96孔板，于600nm测OD值作为酵母细胞密度。余下部分用于测定β-半乳糖苷酶的活性。

β-半乳糖苷酶的活性测定：

1、离心：12000rpm，离心5min。小心吸去上清液，收集酵母细胞。

2、破壁：酵母细胞加入200μl Z缓冲液中（0.1M磷酸钠[Ph7.0]，10mMKCl,1mMMgSO4)，用前加入zymolyaseg致终浓度1mg/ml，振匀，37℃温育15min。

3、酶反应：加入40μl4mg/ml浓度的2-硝基苯β-D-半乳糖苷开始酶促反应。30min。

4、酶活性测定：加入100μl1MNa₂CO₃停止反应。取150μl加入96孔板中测定OD值，按下列公式计算酶活性。

U=1000×(OD₄₂₀-1.75×OD₅₅₀)/(t×v×OD₆₀₀)

注：T反应时间(min)，v用于测定的培养液体积(ml)，OD₆₀₀细胞测定时的密度，OD₄₂₀2-硝基苯反应完后的吸光度，OD₅₅₀反应完后的吸光度。结果见表6。

表6.药物对双杂交酵母系统中β-半乳糖苷酶的活性的影响（n=3）

星号表式与空白组比较差异有显著性p﹤0.01(**)

结果表明：忍冬木层孔菌醇提物、水提物及成分hispolon与α、β受体均有很强的结合能力，并呈现剂量依赖性。木层孔菌醇提物、水提物与β受体的结合能力高于α受体，且木层孔菌醇提物的活性略高于水提物。通过与雌激素受体结合而产生雌激素和抗雌激素双向调节作用，是一种作用较强的天然雌激素受体调节剂。

试验例2忍冬木层孔菌及其提取物对子宫的影响

子宫增重试验，是最早建立的检测雌激素活性的经典方法，目前仍被广泛应用。子宫含有丰富的ERs，当外来化合物与ERs结合后，可使子宫的雌激素诱导蛋白(IPs)含量增加，刺激子宫生长。因此，测定动物子宫重量或计算其脏器系数，可评价受试物的雌激素活性及其强度。

1实脸材料

1.1实脸药物

忍冬木层孔菌粉（以下可简称菌粉）的制备：取忍冬木层孔菌，用粉碎机粉碎后过80目筛，即得；

其余材料如试验例1。

1.2实脸动物

昆明雌性小鼠，9~12g，华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，生产许可证：XR(鄂)2009-0007。

2实验方法与结果

将小鼠按体重随机分组。给药持续7天，对照组每日蒸溜水按0.1ml/10g体重灌胃;阳性对照组雌二醇悬浊液按0.1mg/kg体重灌胃。最后一次给药后24h，脱颈处死小鼠，立即切取子宫称重，计算子宫系数(子宫湿重/体重×100)

表7.药物对幼鼠子宫系数的的影响（n=10）

星号表式与空白组比较差异有显著性p﹤0.01(**)，p﹤0.05(*)

结果表明：忍冬木层孔菌及醇提物、水提物、化合物hispolon在体内具有雌激素样作用，能促进小鼠子宫增殖。但作用较雌二醇弱。

试验例3药物对去势大鼠血清激素水平的影响

1、实验材料

1.1实验药物

同试验例2。

雌二醇放射免疫分析药盒，碘[¹²⁵I]孕酮放射免疫分析药盒，北京北方生物技术研究所。

1.2实脸动物

清洁级SD雌性大鼠，体重为210±10g，华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，生产许可证：XR(鄂)2009-0007。

2实验方法与结果

取雌性大鼠，适应性喂养3天，禁食，做卵巢摘除手术，其中8只做假手术。注射青霉素，每天1次，连续3d，防止术后感染。分组给药，去大豆饲料喂养。每天记录大鼠状态。持续8周，禁食24小时候后，处死前动物禁食不禁水，处死前股动脉采血，取血，分离血清。按酶免试剂盒说明书测定血清雌二醇（E2）、孕酮（P）含量，计算子宫系数。

表8.药物对去势大鼠血清激素水平的影响（n=6）

星号表式与模型组比较差异有显著性p﹤0.01(**)，p﹤0.05(*)

结果表明：忍冬木层孔菌及醇提物、水提物、化合物hispolon在体内具有雌激素样作用，当内源性雌激素缺乏时，具有促进内源性雌激素分泌作用，同时具有雌激素样作用，能促进大鼠子宫增殖，作用较雌二醇强，这就说明，忍冬木层孔菌及其提取物对雌激素缺乏更有效。

试验例4忍冬木层孔菌及其提取物对去卵巢大鼠骨质疏松实验

1实验原理

绝经后骨质疏松症骨代谢的特点是骨转化率增加，骨吸收大于骨形成。去除卵巢骨质疏松造模法是通过摘除动物双侧卵巢模拟人类绝经后雌激素缺乏的体内环境而造成的骨质疏松。本实验通过检测忍冬木层孔菌及其提取物对骨质疏松模型大鼠的作用，从而评价其在动物水平上对骨质疏松的影响。2仪器与材料

2.1药物

同试验例2。

2.2试剂

碱性磷酸酶(AKP)检测试剂盒，抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)试剂盒，无机钙(Ca)、磷(P)试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供；脱氧吡啶啉ELISA试剂盒购自北京惠丰生物科技有限公司；血清骨钙素(s-BGP)委托北京福瑞生物工程公司检测。

2.3仪器

酶联免疫检测仪Stat Fax-2100，(AWARENESS TECHNOLOGY INC)。

3方法与结果

3.1实验方法

1)绝经期大鼠模型的建立

取体重210±10g的清洁级雌性SD大鼠，禁食12h(不禁水)，于腹部剪毛，酒精消毒，苯巴比妥腹腔注射麻醉。其后沿腹中线向下做纵行切口，长约2-3cm，切开皮肤后，即可见位于两侧肾脏外下方呈粉红色的卵巢及紧密相连的子宫角，结扎并切断子宫角，将卵巢摘除。另取10只SD大鼠，仅从两侧卵巢旁边切除少许脂肪组织，不做卵巢摘除，作为假手术组。缝合前手术处用注射器淋浇庆大霉素，缝合腰肌及皮肤。术后1.6万U/100g肌肉注射青霉素，每天1次，连续3d，防止术后感染，给予去大豆特殊饲料饲养3个月，使用RX-36双能X射线骨密度测定仪检测大鼠的右侧胫骨骨密度，淘汰造模失败的大鼠。

2)分组及给药方法

将上述模型大鼠随机分为6组，每组10只。另设假手术组10只。

给药方法：阳性药组己烯雌酚片(0.053mg/kg)，忍冬木层孔菌粉组(20mg/kg)，忍冬木层孔菌醇提物组(5mg/kg)，忍冬木层孔菌水提物组(5mg/kg)，hispolon组(0.05mg/kg)，模型组及假手术组灌胃给予等量消毒饮用水，连续给药三个月。

3)检测指标

样品采集方法

处死前动物禁食不禁水，放于代谢笼中收集12h尿液，收集到的尿液过滤后稀释5倍后检测。最后一次灌胃给药后0.5h，麻醉，骨动脉采血，室温下静置1h后离心，1000r/m，5min，-20℃下保存。测定时，每组随机选5只测定。

用放射免疫分析法测定：血清骨钙素(BGP)、钙(Ca)、磷(P)含量。ELISA法检测尿液中脱氧吡啶啉(Dpd)的含量。

4)统计学方法

采用SPSS10.0统计软件对数据处理。先进行数据的正态分布检验，方差齐性检验，组间比较采用方差分析。计量数据用均数±标准差表示，组间差异用单因素方差分析，多个样本均数间每两个均数的比较采用Q检验。P<0.05说明有差异，P<0.01为有显著性差异。

3.2实验结果

1)忍冬木层孔菌及其提取物对去势大鼠血清骨钙素(BGP)的影响

结果见表9，忍冬木层孔菌及其提取物降低了大鼠血清中的BGP的含量，与模型组相比差异有显著性(P<0.05)。

表9忍冬木层孔菌及其提取物对去势大鼠血清中BGP含量的影响(n=5)

与模型组比较*P<0.05

2)忍冬木层孔菌及其提取物对大鼠尿液中Dpd含量的影响

结果如表10所示，忍冬木层孔菌及其提取物均可以降低大鼠尿液中Dpd含量，从而降低骨吸收活性，与模型组相比差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。

表10忍冬木层孔菌及其提取物对去势大鼠尿液中Dpd含量的影响(n=5)

与模型组比较*P<0.05,**P<0.01

3)忍冬木层孔菌及其提取物对去势大鼠血清Ca、P的测定

测定结果见表11，从表中可以看出，与模型组相比，忍冬木层孔菌及其提取物可以提高血清中的Ca含量，与模型组相比差异有显著性(P<0.01)。与正常对照组相比，模型组的P含量显著降低，但忍冬木层孔菌及其提取物不能提高大鼠血清中的P的含量。

表11忍冬木层孔菌及其提取物对去势大鼠血清中Ca、P含量的影响(n=5)

与模型组比较*P<0.05,**P<0.01.

小结

在本实验中，与模型组相比，忍冬木层孔菌及其提取物能降低血清中BGP含量，表明骨转换的程度下降。忍冬木层孔菌及其提取物能降低大鼠尿液中Dpd含量，降低骨吸收活性。忍冬木层孔菌及其提取物在提高大鼠血清Ca含量的情况下，还能降低尿液中Ca的流失，有利于骨Ca的沉积。

以上结果表明，忍冬木层孔菌及其提取物可以降低骨转换程度，抑制骨吸收活性，从而治疗骨质疏松症。

试验例5忍冬木层孔菌及提取物对围绝经期综合症的临床治疗

围绝经期综合症是妇女绝经前后由于性激素减少所引起的一系列躯体及精神心理症状，严重者将影响工作、学习和生活，在围绝经期的妇女中约有85%的妇女出现围绝经期综合症。近年来随着女性对健康及生活质量要求的不断提高，围绝经期综合症的防治已成为医学界关注的热点课题。长期以来，国内外主要采用激素替代疗法（Hormonereplacement therapy,HRT）治疗围绝经期综合症，虽疗效肯定，但是HRT的禁忌证和潜在的致癌危险限制了其在临床的应用，因此寻求一种更为安全有效的治疗方法就显得十分必要和迫切。近年来，应用忍冬木层孔菌粉治疗围绝经期综合症，效果肯定。

1资料与方法

1.1病例选择

选择2009年1月至2011年6月就诊的围绝经期妇女160例，年龄38~58岁，平均46岁，有围绝经期内分泌失调的一系列症状，查体、B超、性激素测定排除其他病理因素。近3个月未接受任何内分泌药物治疗，无明显肝肾疾病及肿瘤病史。

1.2临床表现

56例中，潮热出汗69例（86.25%），失眠67例（83.75%），烦躁63例（78.75%），性交困难57例（71.25%），心悸53例（66.25%），眩晕50例（62.50%），腰痛50例（62.50%），疲倦乏力30例（37.50%），泌尿系感染21例（26.25%），阴道炎10例（12.50%）。

1.3用药方法

组一：每日口服忍冬木层孔菌粉80目（以下可简称菌粉），每次1g，每天3次；组二：每日口服忍冬木层孔菌水提物（实施例1），每次0.2g，每天3次。60天为1个疗程，共治疗3个疗程。

2观察指标

2.1评分标准

用Kuppermen评分法分别对治疗前和用药每1周期后症状进行评分，指标：潮热出汗4分，失眠1分，泌尿道感染1分，性交困难2分，头晕2分，疲倦乏力1分，心悸1分，反复阴道炎1分，腰痛1分，烦躁1分。程度：无-0分，轻-1分，重-3分。每项最后得分=指标×程度。治疗效果判断方法：完全缓解为总评分下降≥80%；显效为总评分下降≥50%；有效为总评分≥20%，无效为总评分＜20%。

2.2用药前后血脂及血清雌二醇（E₂）、促卵泡激素（FSH）、促黄体激素（LH）水平的测定

测定前3天素食，空腹12小时后，上午8~9时取静脉血5ml，2小时内分离血清，血脂用酶法测定，药盒由北京中生公司提供，性激素测定采用放射免疫RIA法。药盒由北京北方生物技术研究所提供。

2.3用药前后妇科检查阴道粘膜的变化

治疗前后及每月观察血常规、尿、大便常规、心电图及副反应。

3结果

3.1治疗效果

患者在用药1个疗程后评分明显下降，随用药时间延长，评分继续下降。用药1疗程后症状完全缓解62例（38.75%），显效44例（27.5%），有效34例（21.25%），总有效率87.50%。Kuppermen评分结果见表1。

表12治疗前后的临床症状评分（n=80）

与治疗前比较，^#P＜0.05，^##P＜0.01。

3.2血液激素水平变化情况分析

用忍冬木层孔菌粉治疗前后血液性激素比较见表10，用忍冬木层孔菌粉治疗后血清E₂水平升高，FSH和LH水平下降，与治疗前比较差异有统计学意义（P<0.05和P<0.01）。

表10治疗前后血液激素水平的变化（n=80）

与治疗前比较，^#P＜0.05，^##P＜0.01。

3.3血脂的变化比较

用忍冬木层孔菌粉治疗前后血脂比较见表11，用忍冬木层孔菌粉治疗后TC、TG及LDL-C均明显降低，HDL-C显著升高，与治疗前比较差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。

表11治疗前后血脂的变化（n=80）

与治疗前比较，^#P＜0.05，^##P＜0.01。

3.4阴道粘膜的变化

160例中有106例（66.25%）阴道粘膜干燥，菲薄，用药3疗程后51例阴道粘膜潮红，湿润，弹性增加。

3.5用药安全性监测

用忍冬木层孔菌粉和水提物治疗后三大常规、肾功能、心电图均正常，无毒副作用。

3.6结论

结果显示，忍冬木层孔菌对治疗围绝经期综合症显示出较好的疗效，能够改善围绝经期综合症患者的系列症状，升高血清E₂水平，降低FSH和LH水平；降低血脂中TC、TG及LDL-C含量，升高HDL-C水平；可使阴道粘膜潮红，湿润，弹性增加，其治疗围绝经期综合症总有效率达87.50%，且无毒副作用。

综上所述，忍冬木层孔菌、其提取物或化合物hispolon，能与雌激素受体结合，对雌激素发挥双重调节作用，当内源性雌激素缺乏时，仍具有促进内源性雌激素分泌作用；采用忍冬木层孔菌、其提取物或化合物hispolon治疗后，不仅能有效缓解各种症状和体征，而且有减慢骨质疏松、心血管疾病等远期症状发生和进展的作用，可提高围绝经期综合征妇女的生存质量，为治疗围绝经期综合征开辟了新的途径。

Claims (12)

1.忍冬木层孔菌或其提取物在制备调节雌激素的药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物是双向调节雌激素的药物。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述药物是治疗围绝经期综合症的药物。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述药物是治疗绝经所致的潮热出汗、失眠、泌尿道感染、性交困难、头晕、疲倦乏力、心悸、阴道炎、腰痛或/和烦躁的药物。

5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述药物是调节血脂异常的药物。

6.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述药物是治疗绝经后骨质疏松症的药物中的用途。

7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述忍冬木层孔菌提取物是忍冬木层孔菌的水或乙醇提取物。

8.根据利要求7所述的用途，其特征在于：所述乙醇提取物为80-95％v/v乙醇提取物。

9.根据利要求7所述的用途，其特征在于：所述水提取物中含有式1化合物在0.1％w/w以上；所述乙醇提取物中含有式1化合物在0.2％w/w以上；

式1化合物的结构式如下：

10.根据利要求9所述的用途，其特征在于：所述水提取物中含有式1化合物0.11％w/w；所述乙醇提取物中含有式1化合物0.28％w/w。

11.根据权利要求1-10任意一项所述的用途，其特征在于：所述忍冬木层孔菌是木层孔菌属真菌忍冬木层孔菌Phellinus lonicerinus(Bond.)Bond.et sing。

12.式1化合物在制备调节雌激素、治疗围绝经期综合症或/和治疗绝经后骨质疏松症的药物中的用途，其结构式如下：