WO2010020165A1 - 神经酰胺产生促进剂 - Google Patents

Description

神经酰胺产生促进剂

技术领域

本发明涉及使神经酰胺增加的神经酰胺产生促进剂。 背景技术

神经鞘脂类之一的神经酰胺在生物体整体中是微量的脂质， 但近 年来报告了通过促进细胞内神经酰胺的产生而诱导细胞凋亡、 分化诱 导、 增殖抑制这样的现象， 作为控制细胞的增殖、 分化、 凋亡等的细 胞内信号分子而受到注目。 因此， 关于促进神经酰胺的产生的物质， 被认为可以期待诱导动物细胞的增殖抑制、 分化诱导、 细胞凋亡等效 果， 进而被认为能够期待对炎症性疾病、 恶性肿瘤等起因于细胞的增 殖或分化的异常的疾病的治疗效果 （非专利文献 1 )。

另外， 神经鞘脂类之一的神经酰胺在皮肤最外侧的层角质层中占 脂质的一半以上， 在皮肤的保湿机构、 屏障机构中发挥着重要作用。 该神经酰胺在表皮细胞中产生分泌后， 在角质层中的细胞之间构筑层 状 （lamella) 结构而发挥功能。

有很多报告称， 在干燥皮肤、 粗糙皮肤、 异位性皮炎 （atopic dermatitis), 老年性干皮症 （ senile xerosis )、 银屑病等皮肤疾病中， 神 经酰胺的健全代谢受到妨碍， 角质层中的神经酰胺量减少， 引起皮肤 的保湿功能和屏障功能的下降等。

对于这样的皮肤疾病， 也尝试从外部补充减少的神经酰胺， 但有 长期效果得不到认可、 稳定性低等的问题。

另外， 关于神经酰胺， 报告了具有骨吸收抑制作用、 骨强化作用、 牙槽骨减少抑制作用， 在骨疏松症、 骨折、 腰痛、 风湿病等骨关节疾 病的预防和改善方面有用 （专利文献 1 )， 在牙周病预防方面有效 （专 利文献 2)。 因此， 关于神经酰胺产生促进物质， 也可以期待对这样的 疾病的治疗效果。

而且， 关于神经酰胺， 还报告了具有赋予毛发张力、 浓密和改善 触感的作用 （专利文献 3 )， 关于神经酰胺产生促进物质也可以期待这 样的效果。

白芷、 地黄、 白术、 甘草、 大黄、 白及、 何首乌、 桔梗、 益母草 和山药都是作为传统中草药自古以来被使用的药用植物。 SP , 白芷在 中药中是以解热、 镇痛、 解毒、 排脓等为目的而使用的， 关于其醚提 取物， 报告有血压上升、 呼吸运动兴奋作用 （非专利文献 2)。 地黄作 为强身，解热药被应用在糖尿病、 前列腺肥大症、 老年性腰痛、 白内 障等， 在中药中以补血、 强身、 解热、 缓下等目的使用。 另外， 关于 地黄的水或乙醇提取物， 报告有血糖下降或高血糖抑制作用、 缓下、 利尿作用 （非专利文献 3 )。 白术是以健脾、 益气、 利尿、 止汗等为目 的而使用， 报告具有增加尿量作用和增加血糖作用。 甘草被已知作为 甘草酸的制造原料， 被作为镇咳 ·祛痰药、 消化性器官溃疡治疗药而 通用， 在中药中以镇痛、 解毒等为目的被使用。 另外， 关于甘草提取 物， 报告具有显著的胃酸分泌抑制作用、 消化道溃疡愈合作用、 镇痉、 镇咳作用等 （非专利文献 4)。 大黄被用作为泻药、 健胃药， 在中药中 以消炎、 泻下、 解毒作为目的使用。 白及在中药中以止血、 镇痛、 慢 性胃炎作为目的使用 （非专利文献 5 )。 何首乌在中药中有补肝肾、 益 精血作用， 针对由贫血引起的头暈和头痛、 失眠而使用。 桔梗作为镇 咳祛痰药使用， 已知具有唾液分泌和气管分泌促进作用。 益母草作为 活血、 调经、 益精药而用于妇女在产前产后的各种症状， 对于由肾炎 引起的浮肿有效（非专利文献 6)。 山药以健脾益气、 滋养强壮、 止泻、 止渴为目的使用， 报告具有血压下降作用、 男性激素增强作用 （非专 利文献 7)。

但是， 关于这些植物具有神经酰胺产生促进效果和 /或保湿效果， 至今完全未知。

专利文献 1 : 日本特开 2001— 158736号

专利文献 2: 日本特开 2001— 158735号

专利文献 3 : 日本特开平 10— 152421号

非专利文献 1 : Sphingolipid targets in cancer therapy, David E. Modrak等， Molecular Cancer Therapeutics 2006 5 (2): 200-8

非专利文献 2: 天然医药资源学（第 2版， 竹田忠纮等编辑， 广川 书店）， 215〜216页

非专利文献 3 : 天然医药资源学（第 2版， 竹田忠纮等编辑， 广川 书店）， 132〜133页 非专利文献 4:和汉药物学（第 1版，高木敬次郎等编辑，南山堂）， 72〜73页

非专利文献 5: 天然医药资源学（第 2版， 竹田忠纮等编辑， 广川 书店）， 263〜264页

非专利文献 6: 和汉药用植物 （第 20版， 刈米达夫等编辑， 广川 书店）， 72页

非专利文献 7: 天然医药资源学（第 2版， 竹田忠纮等编辑， 广川 书店）， 263〜264页 发明内容

本发明涉及提供用于促进细胞内神经酰胺产生的医药品、 化妆品 等。 本发明还涉及提供能够恢复或维持皮肤的屏障功能和保湿功能的 化妆品或医药品。

本发明人在探索安全性高的天然物原材料时发现， 关于白芷、 地 黄、 白术、 甘草、 大黄、 白及、 何首乌、 桔梗、 益母草、 山药的提取 物具有神经酰胺产生促进作用， 可以作为神经酰胺产生促进剂使用。

首先， 本发明涉及一种神经酰胺产生促进剂， 其特征在于， 以选 自白芷、 地黄、 白术、 甘草、 大黄、 白及、 何首乌、 桔梗、 益母草和 山药的植物或其提取物为有效成分。

其中， 白芷、 白术、 白及、 何首乌、 桔梗、 益母草和山药的提取 物可以是使用石油醚作为提取溶剂而得到的石油醚提取物。 地黄、 甘 草的提取物可以是依次使用石油醚和乙醇作为提取溶剂而得到的乙醇 提取物。 大黄的提取物可以是依次使用石油醚、 乙醇、 水作为提取溶 剂而得到的水提取物。

本发明还涉及选自白芷、 地黄、 白术、 甘草、 大黄、 白及、 何首 乌、 桔梗、 益母草和山药的植物或其提取物用于制造神经酰胺产生促 进剂的用途。

另外， 本发明还涉及一种保湿剂， 其特征在于， 以选自益母草和 山药的植物或其提取物为有效成分。

其中， 益母草和山药的提取物可以是使用石油醚作为提取溶剂而 得到的石油醚提取物。 本发明还涉及选自益母草和山药的植物或其提取物的用于制造保 湿剂的用途。

本发明的神经酰胺产生促进剂使细胞内的神经酰胺增加， 作为用 于预防或改善炎症性疾病、 骨关节疾病、 牙周病等的医药品等、 或用 于赋予毛发的张力、 浓密和触感改善的化妆品等是有用的。

另外， 本发明人在探索安全性高的天然物原材料时发现， 在特定 的植物或其提取物中具有神经酰胺产生促进作用， 它们作为能够恢复 或维持角质层的高屏障功能和保湿功能的医药品或化妆品是有用的。

本发明的神经酰胺产生促进剂使角质层中的神经酰胺增加， 作为 用于恢复或维持皮肤的屏障功能和保湿功能的化妆品、 医药品等是有 用的。 具体实施方式

在本发明中， 白芷 （ Radix Angelicae Dahuricae ) 以伞形科 ( Umbelliferae ) 的白 ϊΐ "ge/ c<3 dahurica (Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. f.或杭白 ϊΐ "ge/ c" dahurica (Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. f. var. formosana(Boiss.) Shan et Yuan 为来源植物， 地黄 ( Radix Rehmanniae ) 以玄参禾斗 ( Scrophulariaceae ) ½ Rehmannia glutinosa Libosch.为来源植物， 白术 ( Rhizoma Atractylodis macrocephalae ) 以菊 禾斗 ( Compositae )的白术 (Atracty des macrocephala Koidz.)为来源植物， 甘草 ( Radix Et Rhizoma Glycyrrhizae ) 以豆禾斗 ( Leguminosae ) 的甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisher或胀果甘草 (G _yqyrr »'z" inflata Bat.)或光果 甘草 (G/_yqyrr/»'za glabra L.)为来源植物， 大黄（ Radix Et Rhizoma Rhei ) 以蓼科 ( Polygonaceae ) 的掌叶大黄 (R zeM jw/ a 或唐古特大黄 (Rheum tanguticum Maxin. Cx Balf.)或药用大黄 (R zew officinale Baill.) 为来源植物， 白及 (Rhizoma Bletillae ) 以兰科 （ Orchidaceae ) 的白及 Bletilla striata nb.) Reichb. f.为来源植物， 何首乌 （Radix Polygoni Multiflori ) 以蓼禾斗 ( Polygonaceae ) 的何首乌 Polygonum multiflorum Thunb.为来源植物， 桔梗 （ Radix Platycodonis ) 以桔梗科 ( Campanulaceae )的桔梗 Platycodon grandiflorum (Jacq.) A. De.为来源 植物， 益母草 (Herba Leonuri) 以唇形科 ( Laminaceae )益母草属植物 {Leonurus ja ponicus Houtt.)为来源植物， 山药 ( Rhizoma Dioscoreae ) 以薯葡禾斗 ( Dioscoreaceae )的薯葡 ( os orea ο/?ρα« Thumb.)为来源植 上述植物可以将其植物的全草、 叶、 皮、 枝、 果实或根等原样使 用或粉碎后使用， 但对于白芷、 地黄优选使用根， 对于白术优选使用 根、 茎， 对于甘草、 大黄优选使用根、 根茎， 对于白及优选使用块茎， 对于何首乌优选使用根， 对于桔梗优选使用根， 对于益母草优选使用 地上部分， 对于山药优选使用根、 茎。

作为本发明的植物提取物， 包括将上述植物的使用部分直接或干 燥后切断为适当大小或粉碎加工物而得到的部分进行提取而得到的提 取物， 除此以外还包含进一歩分离精制而得到的活性更高的组分 （成 分）。

提取可以是在室温或加热状态下使之在溶剂中浸泡或使用索式提 取器（Soxhlet extractor)等提取器具进行溶剂提取， 除此以外， 还可以 使用利用水蒸汽蒸馏等蒸馏法进行提取的方法、 使二氧化碳气体成为 超临界状态而进行的超临界提取法或压搾而得到提取物的压搾法等。

作为在溶剂提取中使用的提取溶剂， 可以使用极性溶剂、 非极性 溶剂的任意一种， 也可以将它们混合使用。 例如， 可以列举： 水； 甲 醇、 乙醇、 丙醇、 丁醇等醇类； 乙二醇、 丙二醇、 丁二醇等多元醇类； 丙酮、 甲基乙基酮等酮类； 醋酸甲酯、 醋酸乙酯等酯类； 四氢呋喃、 二乙醚等链状和环状醚类； 聚乙二醇等聚醚类； 二氯甲垸、 氯仿、 四 氯化碳等卤化烃类； 己垸、 环己垸、 石油醚等烃类； 苯、 甲苯等芳香 族烃类； 吡啶类； 超临界二氧化碳； 油脂、 蜡、 其它油等， 这些可以 单独或组合 2种以上使用， 也可以改变溶剂而反复进行。 其中， 优选 使用水、 乙醇、 丙二醇、 丁二醇、 石油醚等， 特别优选使用水和乙醇 的混合液、 石油醚。

对于提取而言， 例如由水、 醇类、 烃类、 或水和醇的混合液进行 提取时， 优选相对 1质量份植物使用 1〜50质量份溶剂， 在 4〜100°C、 优选在 20〜80°C的温度下， 以 1 小时〜 30 日、 更优选以 1 小时〜 10 日进行提取。

另外， 作为提取物的分离精制手段， 例如， 可以列举将提取物进 行活性碳处理、 液液分配、 柱色谱、 液相色谱、 凝胶过滤、 精密蒸馏 等。 根据需要， 还可以以公知的方法进一歩实施脱臭、 脱色等处理。

本发明的植物提取物， 既可以直接使用这样得到的提取液和组分， 也可以使用以适当溶剂稀释后得到的稀释液， 或也可以为制成为在加 热下或减压下浓缩的提取物和干燥粉末或调制成为膏状的提取物。 另 夕卜， 也可以进行冷冻干燥， 在使用时以通常用于提取的溶剂， 例如以 水、 乙醇、 丙二醇、 丁二醇、 水和乙醇的混合液、 水和丙二醇的混合 液、 水和丁二醇的混合液等溶剂进行稀释后使用。 另外， 也可以在脂 质体 （liposome) 等类脂小球和微胶囊等中内包使用。

如在后述实施例中所示， 本发明的植物或其提取物在正常人角化 细胞中具有使神经酰胺量增加的作用。

另外，神经酰胺在皮肤的保湿功能、屏障功能中发挥重要作用（芋 川玄尔： 香妆会志， 1 (4)， 250— 253， 1991 )。 在这里， 所谓保湿功 能意思是通过含有适度水分而给皮肤带来柔软性并成为光滑美丽的皮 肤的功能， 所谓屏障功能意思是防止体内水分渗出并且在使身体皮肤 不干燥的同时防止来自外部的异物侵入体内的功能。

因此， 本发明的植物或其提取物可以作为神经酰胺产生促进剂或 保湿剂、 屏障增强剂使用， 另外， 可以用于制造神经酰胺产生促进剂 或保湿剂、 屏障增强剂。 该神经酰胺产生促进剂或保湿剂可以作为用 于使角质层中的神经酰胺增加并恢复或维持皮肤的屏障功能和保湿功 能的医药品、 日本的医药部外品、 化妆品等使用。 并且， 本发明的神 经酰胺产生促进剂可以期待诱导动物细胞的增殖抑制、 分化诱导、 细 胞凋亡等效果， 所以， 可以作为用于预防或治疗炎症性疾病、 恶性肿 瘤等起因于细胞增殖或分化异常的疾病的医药品、 日本的医药部外品 等使用 （上述非专利文献 1 )， 另外， 可以作为用于预防或改善骨疏松 症、 骨折、 腰痛、 风湿病等骨关节疾病、 预防或改善牙周病的医药品、 日本的医药部外品等使用 （上述专利文献 1和 2)。 另外， 还可以作为 用于给毛发赋予张力、 浓密的改善毛发触感的日本的医药部外品、 化 妆品使用 （上述专利文献 3 )。 另外， 该神经酰胺产生促进剂或保湿剂 也可以作为以神经酰胺产生促进或保湿为概念并根据需要表示其宗旨 的日本的医药部外品、 化妆品使用。 作为将本发明的神经酰胺产生促进剂和保湿剂用作医药品时的给 药方式， 例如， 可以为片剂、 胶囊剂、 颗粒剂、 散剂、 糖浆剂等经口 给药或注射剂、 外用剂、 坐剂、 经皮吸收剂等非经口给药的任一种。 在配制该医药制剂时， 可以单独地使用本发明的植物或其提取物， 或 适当组合其它在药学上被允许的赋形剂、 粘合剂、 增量剂、 粉碎剂、 表面活性剂、 润滑剂、 分散剂、 缓冲剂、 保存剂、 矫味剂、 香料、 覆 膜剂、 载体、 稀释剂等使用。 该制剂中的本发明植物的含量， 作为干 燥固体成分优选含有 0.01〜20质量％，特别优选含有 0.05〜10质量％， 作为植物提取物， 按照固体成分换算优选含有 0.0001〜10质量％， 特 别优选含有 0.001〜5质量％。 另外， 在将本发明的神经酰胺产生促进 剂作为医药品使用时， 成人每人每日的给药量， 作为本发明的植物或 其提取物 （换算为干燥固体成分）， 例如优选是 0.001〜1000mg， 特别 优选是 0.01〜100mg。

另外， 将本发明的神经酰胺产生促进剂和保湿剂作为日本的医药 部外品和化妆品使用时， 可以制成为皮肤外用剂、 洗净剂、 美容用化 妆品， 根据使用方法， 可以以洗液、 乳液、 凝胶、 乳脂、 软膏剂、 粉 剂、 颗粒剂等各种剂型进行提供。 这样的各种剂型的日本的医药部外 品和化妆品， 可以将本发明的植物或其提取物单独地进行调制， 或通 过适当组合被配合在日本的医药部外品、 皮肤化妆品和洗净品中的油 性成分、 保湿剂、 粉体、 色素、 乳化剂、 增溶剂、 洗净剂、 紫外线吸 收剂、 增粘剂、 药效成分、 香料、 树脂、 防菌防霉剂、 植物提取物、 醇类等而调制。 另外， 作为药效成分， 可以列举透明质酸钠等其它保 湿成分。

该日本的医药部外品、 化妆品中的本发明植物的含量， 作为干燥 固体成分， 优选为 0.01〜100质量％、 特别优选 0.05〜70质量％。 另 一方面， 提取物的含量一般按照固体成分换算优选为 0.00001〜100质 量％、 特别优选为 0.0001〜70质量％。

以上所述的 "日本的医药部外品" asi d g)是指由日本药事法 第 2条第 2項所规定的具有特殊功效的化妆品， 但相对于医药品而言 其功效比较缓和。

【实施例】 制造例 1 白芷提取物的制造

相对 100g白芷加入 5倍量的石油醚，在 50°C回流提取 1小时， 过 滤， 得到石油醚提取液， 再将该石油醚提取液蒸发后， 得到白芷的石 油醚提取物约 0.9克。

制造例 2 地黄提取物的制造

将制造例 1的 100g白芷取代为 100g地黄， 进行同样方法的提取， 得到石油醚提取液。 再在石油醚提取后的残渣中加入 5倍量的 95 %乙 醇， 在 78°C加热回流提取 1小时， 过滤， 得到乙醇提取液， 再将该乙 醇提取液蒸发后， 得到地黄的乙醇提取物约 5.0克。

制造例 3 白术提取物的制造

将制造例 1的 100g白芷取代为 100g白术， 进行同样方法的提取， 得到石油醚提取液， 再将该石油醚提取液蒸发后， 得到白术的石油醚 提取物约 0.8克。

制造例 4 甘草提取物的制造

将制造例 1的 100g白芷取代为 100g甘草， 进行同样方法的提取， 得到石油醚提取液。 再在石油醚提取后的残渣中加入 5倍量的 95 %乙 醇， 在 78°C加热回流， 提取 1小时， 过滤， 得到乙醇提取液， 再将该 乙醇提取液蒸发后， 得到甘草的乙醇提取物约 9.1克。

制造例 5 大黄提取物的制造

将制造例 1的 100g白芷取代为 100g大黄， 进行同样方法的提取， 得到石油醚提取液。 再在石油醚提取后的残渣中加入 5倍量的 95 %乙 醇， 在 78°C加热回流提取 1小时， 过滤， 得到乙醇提取液， 在乙醇提 取后的残渣中加入 5倍量的水， 在 60°C温水浴中超声提取 1小时， 过 滤， 得到水提取液再将该水提取液蒸发后， 得到大黄的水提取物约 6.9 克。

制造例 6 白及提取物的制造

将制造例 1的 100g白芷取代为 100g白及， 进行同样方法的提取， 得到石油醚提取液， 再将该石油醚提取液蒸发后， 得到白及的石油醚 提取液物 0.4克。

制造例 7 何首乌提取物的制造

将制造例 1的 100g白芷取代为 100g何首乌， 进行同样方法的提 取， 得到石油醚提取液， 再将该石油醚提取液蒸发后， 得到何首乌的 石油醚提取物约 0.2克。

制造例 8 桔梗提取物的制造

将制造例 1的 100g白芷取代为 100g桔梗， 进行同样方法的提取， 得到石油醚提取液， 再将该石油醚提取液蒸发后， 得到桔梗的石油醚 提取物约 0.5克。

制造例 9 益母草提取物的制造

将制造例 1的 100g白芷取代为 100g益母草， 进行同样方法的提 取， 得到石油醚提取液， 再将该石油醚提取液蒸发后， 得到益母草的 石油醚提取物约 0.5克。

制造例 10 山药提取物的制造

将制造例 1的 100g白芷取代为 100g山药， 进行同样方法的提取， 得到山药石油醚提取液， 再将该石油醚提取液蒸发后， 得到山药的石 油醚提取物约 0.3克。

实施例 1 神经酰胺产生促进试验

<试验用溶液和对照溶液〉

<培养条件〉

在 EpiLife-KG2 (KURAB0公司） 6孔板上播种正常人表皮角化细胞 ( NHEK ( F ) )， 培养到成为聚集 （confluent ) 状态。 此后， 变换为 EpiLife-KG2(无增殖添加因子），分别添加上述试验用溶液及对照溶液。 培养 3日后， 从每个孔回收细胞。

<脂质提取〉

由 Bligh and Dyer法从回收的细胞中提取脂质。将提取液进行氮气 干燥后， 将在氯仿和甲醇混合液中再溶解物制作为脂质样品。 另外， 蛋白质量由 BCA法进行定量。

<神经酰胺量解析〉

以薄层色谱（TLC)法在提取的脂质中进行解析。 以氯仿： 甲醇： 醋酸 = 190 : 9 : 1水平方向展开 2次， 吹干并喷硫酸铜显色溶液， 以加 热板烘烤并检测神经酰胺， 所得值以各自的蛋白量相除得神经酰胺量 (表 1 )， 表中数值表示以 （添加了上述对照溶液的） 对照品的神经酰 胺量为 1时的相对值。

【表 1】

如表 1 中所示， 对于本发明的植物提取物， 确认了人角化细胞的 神经酰胺产生促进效果。

Claims

权利要求书

1.一种神经酰胺产生促进剂， 其特征在于，

以选自白芷、 地黄、 白术、 甘草、 大黄、 白及、 何首乌、 桔梗、 益母草和山药的植物或其提取物为有效成分。

2.如权利要求 1所述的神经酰胺产生促进剂， 其特征在于， 所述白芷、 白术、 白及、 何首乌、 桔梗、 益母草和山药的提取物 是使用石油醚作为提取溶剂而得到的石油醚提取物。

3. 如权利要求 1所述的神经酰胺产生促进剂， 其特征在于， 所述地黄、 甘草的提取物是依次使用石油醚和乙醇作为提取溶剂 而得到的乙醇提取物。

4. 如权利要求 1所述的神经酰胺产生促进剂， 其特征在于， 所述大黄的提取物是依次使用石油醚、 乙醇、 水作为提取溶剂而 得到的水提取物。

5.选自白芷、 地黄、 白术、 甘草、 大黄、 白及、 何首乌、 桔梗、 益 母草和山药的植物或其提取物用于制造如权利要求 1-4 的任一项所述 的神经酰胺产生促进剂的用途。

6.—种保湿剂， 其特征在于，

以选自益母草和山药的植物或其提取物为有效成分。

7.如权利要求 6所述的保湿剂， 其特征在于，

所述益母草和山药的提取物是使用石油醚作为提取溶剂而得到的 石油醚提取物。

8.选自益母草和山药的植物或其提取物的用于制造如权利要求 6 或 7所述的保湿剂的用途。