CN105288246A - 一种美白抗皱中药组合物及其混合提取物和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种美白抗皱中药组合物及其混合提取物和应用，通过选取天麻、白芨、丹皮、红花、三七、丹参、甘草、枸杞等天然中药组合物，通过现代加工工艺获得混合提取物，对酪氨酸激酶具有较高抑制能力，同时具备维生素E相当的抗氧化性，能显著促进胶原蛋白生长，可用于加入到化妆品中提供全方位、多靶点美容功效，安全无毒。

Description

一种美白抗皱中药组合物及其混合提取物和应用

技术领域

本发明涉及中草药组合物领域，具体地说涉及一种以多靶点美白为机理的天然美白抗皱中药组合物及其混合提取物和应用。

背景技术

人类对于美的追求，是随着时代的变迁而变化。其中一些最基本的，也是最难的则是人们对于面部的美的追求。对于亚洲人群来讲，主要包括几个方面：美白、保湿、抗皱，同时要求产品不能对面部皮肤有刺激。

近年来，人们对化妆品的认知度逐步提高，对一种化妆品拥有多种美容功效的需求也越来越大，而且对化妆品原料的来源和使用安全性也越来越重视。目前已有多种中草药被人们发现具有一定的美白效果，但大多停留在对其美白组分的探索，没有结合传统中药学理论和现代工艺获得多功效的产品。尤其在化妆品领域，目前还没有保证优秀美白效果同时，附加营养吸收、抗皱润肤的效果。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种兼顾美白、抗皱、抗氧化的天然中药组合物，本发明还有一个目的是提供前述组合物的混合提取物及在制备外用化妆品上的应用。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明的一种美白抗皱中药组合物，包括天麻、白芨、丹皮、人参、红花、三七、丹参、甘草、枸杞；其中白芨、丹参、甘草的重量占总重的30～55％。

以下对本发明所采用的中草药进行说明：

天麻常用于治病高热或脑血管疾患引起的小儿惊风、抽搐、头痛、眩晕、眼黑、肢体痉挛、麻木、语言不畅、半身不遂等症，本发明选用天麻是促进皮层血管的扩张，营养皮层神经，对美白主药协同增效。

白芨，传统中药学上主要用于收敛止血，消肿生肌。本发明将其除除去残茎及须根，洗净，置沸水煮至无白心，除去外皮，晒干，切片生用；与丹皮、甘草共同作为美白功效的主药。

丹皮，又名牡丹皮，中药名。为毛茛科植物牡丹干燥的根皮。中药学认为丹皮可以清热凉血，活血散瘀。现代研究表明，丹皮中所含的丹皮酚及其以外的糖苷类成分均有抗炎作用。本发明所用丹皮为牡丹根皮，洗净后阴干、粉碎待用，在本发明中不仅其美白的作用，还促进皮肤细胞代谢，起协同增效的作用。

人参，性温味甘微苦，具有大补元气、健脾胃、生津液、止渴、安神宁心、抗老延寿等作用。含多种皂甙和多糖类成分，不仅可以改善人的肌肤，用于护肤美容，还是名贵的滋补药。本发明采用人参的根部，洗净、阴干后粉碎待用，在本发明中用于促进皮肤血管微循环，营养皮肤细胞。

红花，菊科红花属植物，活血通经，散瘀止痛，有助于治经闭、痛经、恶露不行、胸痹心痛、瘀滞腹痛、胸胁刺痛、跌打损伤、疮疡肿痛疗效。在本发明中阴干后粉碎，在皮肤上配伍使用可促进皮肤细胞活力，保持细胞正常水分代谢。

三七，选用其根茎，洗净、阴干后粉碎。三七主要用于散瘀止血，消肿定痛。可促进表皮血管微循环，改善皮肤细胞的活力与功能。

丹参，具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈之功效。现代药学以丹参为主药，使病人冠脉血流量明显增加，冠脉阻力明显下降，改善了心肌功能，在治疗冠心病、缓解心绞痛方面取得了明显的效果。本发明所用丹参选用其根，洗净、阴干后粉碎待用。丹参在本发明中具有多种功效，不仅是温和的抗菌消炎成分，还可促进皮肤细胞微循环和营养皮肤细胞。

甘草，选用其根茎，晾干后粉碎。气微，味甜而特殊。功能主治清热解毒、祛痰止咳、脘腹等。甘草含有多种化学成分，甘草甜素和黄酮类物质是甘草中最重要的生理活性物质，主要存在于甘草根表皮以内的部分。甘草不仅能起到一定的美白功效，同时能条和配方中各个组分。

枸杞选用其果实，晒干后粉碎使用。枸杞子味甘性平，“入足少阴兼厥阴经血分，补肝经之阴，益肾水之阳。”其具有滋补肝肾，益精养血，明目消翳，润肺止咳的作用。主治肾虚骨痿，阳痿遗精，久不生育，早老早衰，须发早白，血虚萎黄，产后乳少，目暗不明，内外障眼，内热消渴，劳热骨蒸，虚痨咳嗽，干咳少痰等病证。药理学研究证实，枸杞子可调节机体免疫功能、能有效抑制肿瘤生长和细胞突变、具有延缓衰老、抗脂肪肝、调节血脂和血糖等方面的作用。本发明中枸杞主要用于皮肤细胞的滋润与营养，并改善皮肤细胞的微循环。

黄芩，是唇形科黄芩属多年生草本植物，选用其根茎，晾干、粉碎。中医认为黄芩味苦性寒，入肺、心、胆、大肠经，有清热燥湿、泻火解毒、安胎的功能，对暑温胸闷呕吐、肺热咳嗽、血热妄行、高热烦渴、湿热下痢等有良好功效。现代研究证明，黄芩的成分具有较广的抗菌谱，在本发明中作为较强的抗菌消炎活性成分，黄芩的成分对空气中漂浮或附着的微生物具有消炎作用。而上述组合物通过特定的提取工艺获得了具有高还原性的物质，具有非常好的体外抗氧化能力。

本发明中药组合物的各组分中，白芨、丹皮和甘草是其美白作用的主要成分，可有效抑制酪氨酸激酶活性。人参、三七和丹参促进皮肤微循环，长期使用可改善皮肤细胞。试验证明，不含有人参、三七和丹参时，组合物抑制酪氨酸激酶的活性与熊果苷较为接近，加入上述三个组分后，IC₅₀的值下降了20％左右，表明其组分对美白具有促进效果。另一方面，试验证明，丹参和丹皮的加入显著提高了组合物中抗氧化活性。为了保证各个组分有机地组合并发挥各自功效，枸杞不少于总重的15％，红花占总重的8～20％，天麻不超过总重的8％。

作为本发明的优选方案，该中药组合物按质量百分比包括如下组分：

其中白芨、丹皮和甘草为美白的主药，丹参、人参和三七提供较丰富的营养因子并促进微循环，起到营养作用，并对美白有增效。红花具有一定的湿润、保水效果，促进皮肤细胞活力，枸杞作为果实用药具有较好的营养功效，促进微循环。黄芩和丹参作为组合物中其抗菌消炎活性的组分，温性的丹参为主，黄芩为辅。而天麻增强了组合物在皮肤上使用的温和性，协同营养皮层。

作为本发明的一种优选方式，其中药组合物按质量百分比由天麻5.1％，白芨10.2％，丹皮6.5％，人参2.6％，红花12.8％，三七6.4％，丹参12.8％，甘草19.2％，枸杞19.3％，黄芩5.1％组成。

作为本发明的另一种优选方式，其中药组合物按质量百分比由天麻5.3％，白芨6.6％，丹皮6.6％，人参0.65％，红花13.2％，三七6.6％，丹参13.2％，甘草17.1％，枸杞26.3％，黄芩5.3％组成。

作为本发明的另一种优选方式，其中药组合物按质量百分比由天麻5.1％，白芨10.2％，丹皮6.4％，人参2.6％，红花12.8％，三七6.4％，丹参12.8，甘草19.2％，枸杞19.2％，黄芩5.1％组成。

将上述中药组合物按照一定比例后，通过特定方法制得提取物，用于加入化妆品中。一种美白抗皱中药组合物的混合提取物，通过如下方法获得：将权利要求1所述的中药组合物按比例混合，粉碎后醇提，回流萃取获得初浸膏；将初浸膏湿法上柱，通过硅藻土柱层析分离获得。

所述中药组合物粉碎后醇提是利用醇∶水为10∶90的比例在69～90℃下提取6～8小时，提取液经过回流萃取后静置、浓缩、干燥至溶剂完全挥发。通过硅藻土层析时，采用乙醇-乙酸乙酯体系，乙醇和乙酸乙酯使用的体积比为2∶1～1∶15。本发明利用硅藻体系进行层析，相对于其他材料而言，是一种无毒不致敏的体系，不会引入有毒的小分子尘埃、杂质；且纯化效率高。

该混合提取物中甙类、糖苷类物质占总重不少于18％。

上述提取物与DPPH反应1小时后与空白对照测定计算的抗氧化率不小于94％；0.1％g/mL时酪氨酸激酶抑制能力达到70％以上。本发明所述的抗氧化率和酪氨酸激酶抑制能力的计算方法在具体实施方式的试验例中会进行进一步说明。

本发明的中药组合物可用于制备化妆品，通过上述工艺获得高浓度的活性成分提取物，一般添加量为1～10％。

利用前述中药组合物获得的混合提取物具有如下优势：

(1)美白效果好，例如在0.1％g/mL时，其抑制络氨酸激酶的能力达到70％以上；

(2)抗氧化能力强，同样浓度时，和维生素E相当；

(3)能够显著促进胶原蛋白的生长；

(4)其有效成分几乎表现出没有毒性，例如对B16细胞的毒性作用，其CC₅₀值基本大于1000ug/mL。

本发明将传统的天然中药配方进行创新组合，通过相关制备工艺获的混合提取物同时具备美白、抗氧化、保湿且促进胶原蛋白生长的效果，安全无毒，使用亲和度高，不刺激。

附图说明

图1是本发明试验例7皱纹改善试验中SEr的结果；

图2是本发明试验例7皱纹改善试验中SEsm的结果；

图3是本发明试验例7皱纹改善试验中SEw的结果。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式进行进一步说明。

实施例1

一种美白抗皱中药组合物，包括天麻、白芨、丹皮、人参、红花、三七、丹参、甘草、枸杞；其中白芨、丹参、甘草的重量占总重的30～55％，枸杞不少于总重的15％，红花占总重的8～20％，天麻不超过总重的8％。

实施例2

一种美白抗皱中药组合物，按质量百分比由天麻3～6％，白芨5～15％，丹皮5～15％，人参1～5％，红花10～15％，三七2～8％，丹参8～18％，甘草15～35％，枸杞15～40％，黄芩2～8％组成。

利用前述中药组合物制备其混合提取物，将上述各组分按比例混合，粉碎后醇提，回流萃取获得初浸膏；将初浸膏湿法上柱，通过硅胶柱层析分离获得。

天麻选用其根，洗净、阴干、粉碎。白芨出去残茎和须根，洗净，煮沸水至无白心，除去外皮，晒干、切片生用。丹皮为牡丹根皮，洗净，阴干，粉碎。人参选用其根，洗净、阴干、粉碎。红花选用菊科红花属，洗净、阴干、粉碎。三七选用根茎部，洗净、阴干、粉碎。甘草选用其根茎，晾干后粉碎。枸杞选用果实，晒干后粉碎。黄芩选用根茎部，晾干后粉碎。

实施例3

一种美白抗皱中药组合物，其按质量百分比由天麻5.1％，白芨10.2％，丹皮6.5％，人参2.6％，红花12.8％，三七6.4％，丹参12.8％，甘草19.2％，枸杞19.3％，黄芩5.1％组成。

实施例4

一种美白抗皱中药组合物，其按质量百分比由天麻5.3％，白芨6.6％，丹皮6.6％，人参0.65％，红花13.2％，三七6.6％，丹参13.2％，甘草17.1％，枸杞26.3％，黄芩5.3％组成。

实施例5

一种美白抗皱中药组合物，其按质量百分比由天麻5.1％，白芨10.2％，丹皮6.4％，人参2.6％，红花12.8％，三七6.4％，丹参12.8，甘草19.2％，枸杞19.2％，黄芩5.1％组成。

实施例6

针对实施例3～5获得的中药组合物，采用如下方法获得混合提取物：

将上述中药组合物按照一定比例后，通过特定方法制得提取物，用于加入化妆品中。一种美白抗皱中药组合物的混合提取物，通过如下方法获得：将权利要求1所述的中药组合物按比例混合，粉碎后醇提，回流萃取获得初浸膏；将初浸膏湿法上柱，通过硅藻土柱层析分离获得。

所述中药组合物粉碎后醇提是利用醇∶水10∶90的比例在69～90℃下提取6～8小时，提取液经过回流萃取后静置、浓缩、干燥至溶剂完全挥发。通过硅藻土层析时，采用乙醇-乙酸乙酯体系，乙醇和乙酸乙酯使用的体积比为2∶1～1∶15。

该混合提取物中甙类、糖苷类物质占总重不少于18％。与DPPH反应1小时后与空白对照测定计算的抗氧化率不小于94％；0.1％g/mL时酪氨酸激酶抑制能力达到70％以上。

试验例1样品对B16细胞的毒性作用

分别将实施例3、4、5的中药组合物通过实施例6的方法制备对应混合提取物，作为实验组用于该试验及其后续试验，对提取物的活性进行综合评估。

96孔细胞培养板上，将B16细胞与不同浓度的中药混合提取物溶液混合，设定3个重复孔，同时设置不含药物的空白对照，37℃，5％CO₂培养24h，采用MTS比色法检测细胞毒性，酶标仪测定OD值，测定波长490nm。计算得到CC₅₀值如表1所示：

细胞存活率(％)＝实验孔OD_490nm/空白孔OD_490nm×100％

表1细胞毒性试验结果

结果表明，三种混合提取物的CC₅₀均大于1000g/ml，因此表现很小的毒性，对皮肤没有伤害。

试验例2样品体外抗氧化作用

将实验组与DPPH(终浓度为100M)混合反应，设定3个重复孔，同时设置不含提取液的空白对照和Trolox阳性对照，30℃反应1小时，酶标仪测定OD值，检测波长为515nm，计算得到抗氧化率。

抗氧化率(％)＝(1-实验孔OD_515nm/空白孔OD_515nm)×100％

表2样品体外抗氧化试验结果

实验组	浓度(μg/mL)	抗氧化率(％)
			Trolox	100	93.48
实施例3	100	94.59

实施例4	100	95.22
			实施例5	100	95.26

试验结果显示，三种均具有很好的体外抗氧化能力，与维生素E的抗氧化率相当，能够有效地清除体内自由基，起到防止皮肤衰老的作用。

试验例3样品体外抗氧化对比试验

提取物A：与实施例3基本相同的组分，但不含有丹参、丹皮，通过实施例6获得提取物。提取物B：将与实施例3相同质量的丹参和丹皮通过实施例6获得提取物。

将实验组、提取物A和提取物B分别与DPPH(终浓度为100M)混合反应，设定3个重复孔，同时设置不含提取液的空白对照和Trolox阳性对照，30℃反应1小时，酶标仪测定OD值，检测波长为515nm，计算抗氧化率方法与试验例2相同。

表3样品体外抗氧化对比试验结果

实验组	浓度(μg/mL)	抗氧化率(％)
			Trolox	100	93.48
实施例3	100	94.59
			提取物A	100	83.56
提取物B	100	86.82

试验结果显示：如缺少丹参和丹皮，抗氧化活性是不及VC的，而添加了丹参和丹皮后，抗氧化率高出VC。可见丹参和丹皮在抗氧化性上起到了关键作用。

试验例4酪氨酸酶抑制实验

将待测药物与L-Dopa(终浓度1.25mM)混合，加入酪氨酸酶(终浓度25U/mL)开始反应，设定3个重复孔，同时设置不含药物的空白对照和KojicAcid阳性对照，室温，5min，酶标仪测定OD值，检测波长为490nm。计算得到酪氨酸酶活性抑制率。

酪氨酸酶活性抑制率(％)＝〔1-(样品OD_490nm-样品本底对照OD_490nm)/实验对照孔OD_490nm〕×100％

表4酪氨酸酶抑制试验结果

样品	浓度(μg/mL)	酪氨酸酶抑制率(％)
			KojicAcid(曲酸)	100	81.50
实施例3	100	73.33
			实施例4	100	74.48
实施例5	100	79.33

由表可知，实例3、4、5得到的提取物均具有很好的酪氨酸酶抑制功能，其中实例5得到的提取物酪氨酸酶抑制率最高达到79.33％。三者的活性与曲酸接近。

试验例5酪氨酸酶抑制对比实验

提取物C：与实施例3基本相同的组分，但不含有人参、三七和丹参，通过实施例6获得提取物；提取物D：将与实施例3配方相同质量的人参、三七和丹参通过实施例6获得提取物。

将试验例3获得的提取物与前述提取物C和提取物D作为实验组分别与L-Dopa(终浓度1.25mM)混合，加入酪氨酸酶(终浓度25U/mL)开始反应，设定3个重复孔，同时设置不含药物的空白对照和熊果苷阳性对照，室温，5min，酶标仪测定OD值，检测波长为490nm。按照试验例3相同的方法计算得到酪氨酸酶活性抑制率。

表5酪氨酸酶抑制对比试验结果

样品	浓度(μg/mL)	酪氨酸酶抑制率(％)
			熊果苷	100	68.23
实施例3	100	73.33
			提取物C	100	63.62
提取物D	100	7.93

试验结果表明：人参、三七和丹参本身对酪氨酸酶没有多少抑制功效。而不添加人参、三七、丹参的组合物其酪氨酸酶抑制率是不及熊果苷的。但将两组结合在一起，酪氨酸酶抑制率高出熊果苷，可见人参、三七和丹参、以及各个组分配比对酪氨酸酶抑制能力起到了至关重要的作用，其提取物对酪氨酸激酶的抑制效果要优于现在市场上较为火热的熊果苷类产品。

试验例6促胶原蛋白分泌实验

12孔细胞培养板上，将HDFa细胞与不同浓度的待测药物溶液混合，设置不含药物的空白照和TGF-β阳性对照。37℃，5％CO₂培养3天，收取细胞培养上清，存于-80℃；加入MTS，采用MTS比色法检测490nm的OD值；按胶原蛋白ELISA试剂盒中提供的方法检测胶原蛋白的分泌，酶标仪测定OD值，检测波长为450nm。计算得到胶原蛋白分泌增加率。

胶原蛋白分泌增加率(％)＝(实验孔OD_450nm/细胞存活率/空白孔OD_450nm-1)×100％

表6促胶原蛋白分泌试验结果

由表格得知：实例3、4、5得到的提取物均能有效促进胶原蛋白的分泌，其中实施例4的效果更为明显。

试验例7抗皱改善试验

加入5％前述中药组合物的混合提取物(实施例5)用于配制常规眼霜，利用该乳霜涂覆眼角进行抗皱改善试验，用于评价效果。

受试者：年龄大于35岁，女性，20人，眼角有明显细纹的人群；

测试部位：眼角；

使用周期：8周；

使用方法：每日两次，早晚各一次；

测试参数：1.皮肤纹理扫描仪VisioscanVC98用于检测皮肤粗糙度SEr，平滑度SEsm和皱纹SEw；前述测定的值越小，说明皮肤粗糙度越小、皮肤越光滑、皮肤皱纹越小；2.使用问卷调查进行受试者自我评估，评分标准是：5分为“非常满意”，4分为“满意”，3分为“一般”，2分为“较不满意”，1份为“不满意”。

测试步骤：

1)清洗面部，选取左、右眼角各一个区域作为测试部位；

2)在温度21±1℃，相对试图50±5％的实验室中休息15min；

3)用VC98采集左眼角的图像并分析皮肤粗糙度SEr、皮肤光滑度SEsm和皮肤皱纹SEw；

4)问卷填写、拍照，受试者使用产品后4周和使用产品后8周还需要对测试部位皮肤进行自我评估。

测试结果如图1至图3所示，可以看出，使用了加入本发明混合提取物的化妆品后，眼角的皮肤粗糙度、平滑度和皱纹都有明显的改善。通过答卷，90％的受试者认为皮肤状态总体有改善。

Claims (9)

1.一种美白抗皱中药组合物，其特征在于：包括天麻、白芨、丹皮、红花、三七、丹参、甘草、枸杞；

其中白芨、丹参、甘草的重量占总重的30～55％。

2.根据权利要求1所述的一种美白抗皱中药组合物，其特征在于：枸杞不少于总重的15％，红花占总重的8～20％，天麻不超过总重的8％。

3.根据权利要求2所述的一种美白抗皱中药组合物，其特征在于，按质量百分比包括如下组分：

天麻3～6％，

白芨5～15％，

丹皮5～15％，

人参1～5％，

红花10～15％，

三七2～8％，

丹参8～18％，

甘草15～35％，

枸杞15～40％，

黄芩2～8％。

4.一种美白抗皱中药组合物的混合提取物，其特征在于通过如下方法获得：将权利要求1所述的中药组合物按比例混合，粉碎后醇提，回流萃取获得初浸膏；将初浸膏湿法上柱，通过硅藻土层析分离获得。

5.根据权利要求4所述的混合提取物，其特征在于：所述中药组合物粉碎后醇提是利用醇∶水为10∶90的比例在69～90℃下提取6～8小时，提取液经过回流萃取后静置、浓缩、干燥至溶剂完全挥发。

6.根据权利要求5所述的混合提取物，其特征在于：通过硅藻土层析时，采用乙醇-乙酸乙酯体系，乙醇和乙酸乙酯使用的体积比为2∶1～1∶15。

7.根据权利要求4～6中任意一项所述的混合提取物，其特征在于：该混合提取物中甙类、糖苷类物质占总重不少于18％。

8.一种美白抗皱中药组合物的混合提取物，其特征在于：与DPPH反应1小时后与空白对照测定计算的抗氧化率不小于94％；0.1％g/mL时酪氨酸激酶抑制能力达到70％以上。

9.如权利要求1所述中药组合物在制备外用化妆品产品上的应用。