WO2009142298A1 - 吸着防止方法、吸着防止材、内壁コートキャピラリ、その製造方法、及び、リン酸化合物とアニオンの同時分析方法 - Google Patents
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Definitions
- the present invention relates to an adsorption preventing method, an adsorption preventing material, an inner wall coated capillary, a method for producing the same, and a method for simultaneous analysis of a phosphate compound and an anion, and in particular, an inner wall of a fused silica capillary used in capillary electrophoresis or the like.
- Adsorption method, adsorption prevention material, inner wall coated capillary subjected to adsorption prevention treatment, production method thereof, and phosphoric acid compound using the inner wall coated capillary The present invention relates to a method for simultaneous analysis of anions.
- Capillary electrophoresis is a general term for electrophoresis performed in capillaries with an inner diameter of 100 ⁇ m or less, and has characteristics such as ultra-high resolution, high speed, and microscale, so it can be used for DNA sequencing, food and drug analysis. And many other fields.
- Patent Document 1 Japanese Patent No. 3038184 (hereinafter referred to as Patent Document 1), further applied research such as the use of CE-ME directly connected to a mass spectrometer (MS) in a metabolome analysis system has been conducted. It is.
- MS mass spectrometer
- fused silica glass is usually used, but depending on the sample, adsorption derived from silanol groups on the wall surface is observed, not only causing distortion of the peak shape and lowering the separation efficiency, but also quantification. It is known that it will be impossible to analyze it.
- Patent Document 2 An inner wall-coated capillary (hereinafter referred to as SMILE-coated capillary) described in Japanese Patent Laid-Open No. 10-221305 (hereinafter referred to as Patent Document 2), one of which is a joint inventor, covers a polymer having a positive charge. Therefore, it is an indispensable tool for metabolome analysis (anion analysis) using CE-MS.
- SMILE-coated capillary Japanese Patent Laid-Open No. 10-221305
- an inner wall coated capillary (hereinafter referred to as KEIO coated capillary) described in Japanese Patent Application Laid-Open No. 2008-32397 (hereinafter referred to as Patent Document 3) in which the present inventors are the inventor is also CE-MS. It was developed for the purpose of metabolomic analysis (anion analysis) using.
- Patent Document 4 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2007-22886
- Patent Document 2 Jiang. et. al. , Journal of Chromatography A, 1127 (2006) 82-91
- Non-Patent Document 2 Xu. et. al. , Lab Chip, 2007, 7, 119-206
- the SMILE coated capillary proposed in Patent Document 2 avoids coating by chemical reaction with poor reproducibility, and alternately adsorbs polymers having positive and negative charges, thereby realizing the highest stability and durability at that time.
- the properties of the polymer supplied by the reagent manufacturer have changed significantly, so the durability of current commercial capillaries has been reduced and only a few dozen analyzes can be performed.
- the KEIO-coated capillary proposed in Patent Document 3 was developed by a new method in which the polymer to be coated is not fixed, but is fixed while being wound around a silica film produced in the capillary.
- the performance was superior to the described SMILE coated capillaries, the analysis of the compound having a phosphate group showed an interaction with the wall surface, and it was difficult to apply quantitative analysis.
- the phospholipid type polymer silica gel and the method for immobilizing the inner wall of the microchip described in Patent Document 4 and Non-Patent Documents 1 and 2 all have functional groups for silylation reaction in advance in the polymer. Introduced and immobilized via a covalent bond, the process is complicated. Further, the application is a separation carrier for hydrophilic interaction chromatography for the purpose of preventing protein adsorption and peptide separation, and its application to phosphate compounds has not been reported.
- the present invention has been made to solve the above-mentioned conventional problems, and an object thereof is to easily prevent adsorption with high durability against a phosphoric acid compound.
- the present invention solves the above-mentioned problems by preventing adsorption of a phosphate compound using a zwitterionic polymer having fat solubility.
- the polymer can be a phospholipid polymer.
- phospholipid polymer As the phospholipid polymer, a combination of 2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine (MPC) and stearyl methacrylate (SMA) or a combination of MPC and n-butyl methacrylate (BMA) can be used.
- MPC 2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine
- SMA stearyl methacrylate
- BMA n-butyl methacrylate
- the present invention also provides an adsorption preventing material characterized by containing the above-mentioned polymer.
- the present invention also provides an inner wall coated capillary characterized in that the polymer is immobilized on a wall surface by ionic interaction.
- the wall surface may contain silanol.
- the present invention also provides a method for producing the inner wall-coated capillary, wherein a polymer solution containing the polymer is passed through the capillary.
- the present invention also provides a method for simultaneous analysis of a phosphate compound and an anion, characterized in that the inner wall-coated capillary is used.
- the phosphate compound to be analyzed is preferably a compound having a molecular weight smaller than that of the oligonucleotide and larger than that of the inorganic compound.
- the newly developed inner wall-coated capillary is a zwitterion type polymer immobilized, and the immobilization method is as simple as passing a polymer solution through the capillary. Very expensive.
- Sectional drawing which shows the structure of embodiment of the inner wall coat
- the perspective view which expands and shows a part of inner wall surface similarly Flow chart showing the manufacturing procedure of the inner wall coated capillary according to the present invention Diagram showing the types of phospholipid polymers
- the figure which also shows the result of analyzing the nucleotide mixture The figure which similarly shows the result of having analyzed the nucleotide mixture with the polymer C coat capillary Diagram showing comparison of inner wall coated capillaries Figure showing comparison of durability against organic solvents
- a phospholipid polymer made of, for example, MPC and BMA or MPC and SMA is allowed to flow inside a capillary 10 made of fused silica glass similar to the conventional one, and FIG. 1 (schematic diagram) and FIG.
- a zwitterionic polymer containing a phosphoric acid group consisting of a phosphorylcholine group 12 is immobilized by ionic interaction.
- 14 is a polymethacryloyl group
- 16 is an alkyl group such as butyl (in the case of BMA) or stearyl (in the case of SMA).
- step 100 the capillary 10 is preliminarily treated with 1N NaOH for 15 minutes and further with distilled water for 15 minutes. And then purge with nitrogen for 15 minutes.
- step 120 the polymer solution is filled using, for example, a 1 mL syringe. At that time, for example, it is confirmed that several tens of droplets are ejected from the tip.
- Step 120 is performed once again in Step 140.
- step 150 store for 1 hour at room temperature.
- step 160 air is purged to remove excess polymer solution from the capillary 10.
- step 170 the coating process is completed by storing overnight at room temperature.
- the immobilization is completed only by passing the liquid, and analysis with a practical sample can be realized with high reproducibility almost 100 times. This is because the interaction between the silanol and the phosphate group present in the polymer is not only due to the electrostatic interaction between the negatively charged silanol and the cholinergic ammonium group present in the polymer. It can be inferred that both interactions are effective.
- FIG. 4 shows the phospholipid polymer types A to G and the experimental results.
- MA is methacrylic acid
- GrMA is glycerol methacrylate.
- the monomer combined with MPC as a basic skeleton may be (1) the molecular weight may be small if it has a certain degree of hydrophobicity, but the molecular weight may not be large if there is no hydrophobic group (Polmers B, D, E), (2) If the hydrophobicity is about BMA, the molecular weight is important (Polymers C and E). (3) If the hydrophobicity is about BMA, the composition ratio is also important. It can be seen (Polymers A and C).
- FIG. 5 shows the result of analyzing the anion mixture with a capillary coated with polymer B
- FIG. 6 shows the result of analyzing the mixture of nucleotides.
- the analysis conditions in FIG. 5 are capillary length 50 cm, separation solution 50 mM ammonium acetate, pH 7.4, applied voltage ⁇ 30 kV, injection at 50 mbar for 3 seconds, sample 100 ⁇ M, detection 214 nm, and analysis conditions in FIG. Is the same as FIG. 5 except that is 50 ⁇ M.
- FIG. 7 shows the result of analyzing the mixture of nucleotides with a capillary coated with polymer B.
- the analysis conditions in FIG. 7 are the same as those in FIG.
- the analysis conditions for the polybrene silicate coated capillary and the SMILE coated capillary were as follows: capillary length 38.5 cm, effective length 30 cm, separation solution: 50 mM ammonium acetate, pH 8.5, applied voltage -15 kV, detection 200 nm, EOF marker: formamide
- EOF marker trimesic acid, washing with separation solution for each analysis for 3 minutes (930 mbar).
- ⁇ marker IL / Vt (1)
- I Effective length
- L Full length
- V Applied voltage
- t Movement time
- Degradation rate (
- the capillary according to the present invention has a very low deterioration rate and is excellent in stability.
- the analysis conditions are: capillary length 58.5 cm, effective length 50 cm, inner diameter 50 ⁇ m, separation solution: 50 mM ammonium acetate, pH 7.4, applied voltage ⁇ 30 kV, EOF marker: trimesic acid.
- FIG. 10 shows the result of analyzing a mixture of anions and nucleotides with a capillary coated with polymer B.
- the analysis conditions were capillary length 100 cm, separation solution: 50 mM ammonium acetate, pH 7.4, applied voltage -30 kV, injection of sample at 50 mbar for 30 seconds, and detection peaks were 1: isocitrate, 2: citrate, 3: Glucose 1-phosphate, 4: Fructose 6-phosphate, 5: Glucose 6-phosphate.
- the phosphate compound analysis could not be performed under the conditions of the anion analysis due to the adsorption to the capillary, so it was necessary to set another method.
- the simultaneous measurement of the phosphate compound analysis which is a nucleotide and the anion analysis becomes possible.
- Soga. et. al. Anal Chem, 2002, 74, 2233-2239
- CoA, acetyl CoA, and malonyl CoA which could not be measured due to adsorption, were also measured with polymer B coated capillaries. I confirmed that I can do it. Furthermore, since the interaction between the wall surface and the solute was minimized, the separation efficiency itself was also improved.
- an analysis method that had to be performed in two types in the metabolome analysis using the CE-MS method can be analyzed under one condition.
- the present invention is applied to the inner wall coated capillary.
- the application target of the present invention is not limited to this, and can be used for preventing adsorption of a beaker, an experimental apparatus, or the like.
- the phospholipid polymer is not limited to a combination of MPC and BMA or MPC and SMA as long as it is a zwitterionic polymer having fat solubility.
- Adsorption prevention method adsorption prevention material, inner wall coated capillary with adsorption prevention treatment capable of easily and easily preventing the adsorption of phosphate compounds to the inner wall of a fused silica capillary used in capillary electrophoresis etc., and method for producing the same And a method for simultaneous analysis of a phosphate compound and an anion using the inner wall-coated capillary.
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Abstract
例えばシラノールを壁面に含むキャピラリ内に、例えばMPCとSMA又はMPCとBMAを組合せたリン脂質ポリマーを含む高分子溶液を流すことによって、例えばホスホリルコリン基でなるリン酸基を含む双性イオン型高分子が、イオン的相互作用で、例えばシラノールを含む壁面に固定化された内壁コートキャピラリを得る。これにより、リン酸化合物に対して、高い耐久性で簡単に吸着防止を図る。
Description
本発明は、吸着防止方法、吸着防止材、内壁コートキャピラリ、その製造方法、及び、リン酸化合物とアニオンの同時分析方法に係り、特に、キャピラリ電気泳動法等で用いられる溶融石英製毛細管の内壁に対するリン酸化合物の吸着を高い耐久性で簡単に防止できる吸着防止方法、吸着防止材、吸着防止処理を施した内壁コートキャピラリ、その製造方法、及び、前記内壁コートキャピラリを用いたリン酸化合物とアニオンの同時分析方法に関する。
キャピラリ電気泳動(CE)は、内径100μm以下の毛細管の中で行なう電気泳動の総称であり、超高分離能、高速性、微小規模等の特徴を有することから、DNAシークエンシング、食品・薬品分析をはじめ、多くの分野で使われている。
最近では、特許第3038184公報(以下、特許文献1)に記載されているように、質量分析計(MS)と直結させたCE-MEがメタボローム分析システムに使われる等の更なる応用研究も行なわれている。
分離に用いられる毛細管は、通常溶融石英ガラスが用いられているが、試料によっては壁面上のシラノール基に由来する吸着が認められ、ピーク形状の歪み、分離効率の低下を招くだけでなく、定量的な解析が不可能になることが知られている。
これまでに、親水性ポリマーを共有結合させたものや、物理的に吸着させたもの等、種々の内壁コートキャピラリが開発され、市販されている。
発明者の1人が共同発明者である特開平10-221305号公報(以下、特許文献2)に記載された内壁コートキャピラリ(以下、SMILEコートキャピラリと称する)は、正電荷を有するポリマーを被覆した唯一の市販キャピラリであることから、CE-MSを用いたメタボローム分析(アニオン分析)に必須のツールとなっている。
更に、今回の発明者2人が発明者となっている特開2008-32397号公報(以下、特許文献3)に記載された内壁コートキャピラリ(以下、KEIOコートキャピラリと称する)も、CE-MSを用いたメタボローム分析(アニオン分析)を目的の一つに開発されたものである。
一方、リン脂質型高分子のシリカゲルやマイクロチップ内壁の固定化については、特開2007-22886号公報(以下、特許文献4)やJiang.et.al.,Journal of Chromatography A,1127(2006)82-91(以下、非特許文献1)、Xu.et.al.,Lab Chip,2007,7,119-206(以下、非特許文献2)に記載されている。
しかしながら、従来の内壁コートキャピラリは、いずれも安定性に乏しく、又、ロット差がある等、多くの問題をかかえており、価格の面からも実分析に耐えられるものではなかった。
特許文献2で提案したSMILEコートキャピラリは、再現性の乏しい化学反応による被覆を避け、正負電荷を有するポリマーを交互に吸着させることにより、その当時で最高の安定性と耐久性を実現したが、残念ながら試薬メーカーから供給されるポリマーの性質が大きく変わってしまったため、現在の市販キャピラリの耐久性は低下しており、数十回の分析しか行なうことができない。
又、特許文献3で提案したKEIOコートキャピラリは、被覆すべきポリマー自身を固定化するのではなく、キャピラリ内で作製するシリカ膜に巻き込みながら固定化するという新しい方法で開発され、特許文献2に記載のSMILEコートキャピラリを上回る性能を示したが、リン酸基を有する化合物の分析については、壁面と相互作用が認められ、定量分析の適用が困難であった。
一方、特許文献4や非特許文献1、2に記載されたリン脂質型高分子のシリカゲルやマイクロチップ内壁の固定化方法は、いずれも、高分子中にシリル化反応のための官能基を予め導入して、共有結合を介して固定化しており、処理が複雑である。又、その適用は、タンパク質の吸着防止やペプチド分離を目的とした親水性相互作用クロマトグラフィ用分離担体であり、リン酸化合物への応用は報告されていない。
キャピラリへの種々の化合物の固定化は、数多く試されており、リン脂質をキャピラリやシリカゲル上にコーティングしたものは有ったが、コーティング強度は弱く、せいぜいセミパーネントコーティングであって、これ迄、リン酸基を含む双性イオン高分子をイオン的相互作用のみで固定化しようとする試みは無かった。
本発明は、前記従来の問題点を解消するべくなされたもので、リン酸化合物に対して高い耐久性で簡単に吸着防止を図ることを課題とする。
本発明は、脂溶性を有する両性イオンのポリマーを用いて、リン酸化合物の吸着を防止することにより、前記課題を解決したものである。
ここで、前記ポリマーを、リン脂質ポリマーとすることができる。
前記リン脂質ポリマーとして、2-メタクリロイルオキシエチル・ホスホリルコリン(MPC)とステアリル・メタクリレート(SMA)を組合せたものや、MPCとn-ブチル・メタクリレート(BMA)を組合せたものを用いることができる。
本発明は、又、前記のポリマーを含むことを特徴とする吸着防止材を提供するものである。
又、前記のポリマーが、イオン的相互作用で壁面に固定化されていることを特徴とする内壁コートキャピラリを提供するものである。
ここで、前記壁面はシラノールを含むことができる。
本発明は、又、キャピラリ内に前記のポリマーを含む高分子溶液を流すことを特徴とする前記の内壁コートキャピラリの製造方法を提供するものである。
又、前記内壁コートキャピラリを用いることを特徴とするリン酸化合物とアニオンの同時分析方法を提供するものである。
本発明によれば、リン酸化合物に対して、高い耐久性で簡単に吸着防止を図ることができる。ここで分析対象となるリン酸化合物としては、分子量がオリゴヌクレオチドよりも小さく、無機化合物より大きい物が望ましい。
今回開発した内壁コートキャピラリは、双性イオンタイプの高分子を固定化したもので、その固定化法は、キャピラリに高分子溶液を通液するだけという単純なものであり、分析の再現性が非常に高い。
又、今までのカチオン性ポリマー固定化キャピラリでは不可能であった、リン酸化合物の定量分析も可能であり、更に、陰イオン性メタボローム試料との同時分析も可能になる。
以下図面を参照して、本発明の実施形態を詳細に説明する。
本実施形態は、従来と同様の溶融石英ガラス製のキャピラリ10の内側に、例えばMPCとBMA又はMPCとSMAでなるリン脂質ポリマーを流すことによって、図1(模式図)及び図2(部分拡大斜視図)に示す如く、例えばホスホリルコリン基12でなるリン酸基を含む双性イオン高分子をイオン的相互作用で固定化するようにしたものである。図において、14はポリメタクリロイル基、16は、例えばブチル(BMAの場合)やステアリル(SMAの場合)のようなアルキル基である。
コーティングに際しては、例えば長さ120cm、内径50μmの溶融石英キャピラリ10にポリマーをコートする場合、図3に示す如く、まず、ステップ100で、キャピラリ10を前もって1N NaOHで15分、蒸留水で更に15分洗浄し、そして、ステップ110で、窒素を15分パージしておく。
次いで、ステップ120で、例えば1mLのシリンジを用いて、ポリマー溶液を充填する。その時、例えば先端から数十滴の液滴が出ることを確認する。
そして、ステップ130で、10分放置した後、ステップ140で、もう一度ステップ120を行なう。
次いで、ステップ150で、1時間室温で保存する。
次いで、ステップ160で、空気をパージして、キャピラリ10内から余分なポリマー溶液を除く。
次いで、ステップ170で、室温で終夜保存して、コーティング処理を終了する。
本実施形態は、通液のみで固定化が完了し、100回近く、実用試料での分析が高い再現性で実現できる。これは、壁面との相互作用が、負電荷を有するシラノールと高分子中に存在するコリン性アンモニウム基間の静電的相互作用だけでなく、シラノールと高分子中に存在するリン酸基との相互作用の両方が効いているためと推測できる。
リン脂質ポリマーの種類A~Gと実験結果を図4に示す。図において、MAは、メタクリル酸、GrMAは、グリセロール・メタクリレートである。
図4から、基本骨格となるMPCと組合せるモノマーは、(1)ある程度以上の疎水性が有れば分子量は小さくても良いが、疎水基が無いと分子量が大きくても駄目であること(ポリマーB、D、E)、(2)BMA程度の疎水性であれば、分子量が重要であること(ポリマーCとE)、(3)BMA程度の疎水性であれば、組成比も重要であること(ポリマーAとC)がわかる。
ポリマーBでコートしたキャピラリで、アニオン混合物を分析した結果を図5に、ヌクレオチドの混合物を分析した結果を図6に示す。図5の分析条件は、キャピラリ長50cm、分離溶液50mM酢酸アンモニウム、pH7.4、印加電圧-30kV、50mbarで3秒注入、試料は100μM、検出は214nmであり、図6の分析条件は、試料が50μMである点を除き、図5と同じである。
又、ポリマーBでコートしたキャピラリでヌクレオチドの混合物を分析した結果を図7に示す。図7の分析条件は図6と同じである。
又、各種キャピラリの安定性を比較した結果を図8に示す。ここで、ケイ酸ポリブレンコートキャピラリとSMILEコートキャピラリの分析条件は、キャピラリ全長38.5cm、有効長30cm、分離溶液:50mM酢酸アンモニウム、pH8.5、印加電圧-15kV、検出200nm、EOFマーカー:ホルムアミド、分析毎に分離溶液で3分間(930mbar)洗浄であり、ポリマーBコートキャピラリとポリマーCコートキャピラリの分析条件は、キャピラリ全長58.5cm、有効長50cm、分離溶液:50mM酢酸アンモニウム、pH7.4、印加電圧-30kV、検出214nm、EOFマーカー:トリメシン酸、分析毎に分離溶液で3分間(930mbar)洗浄である。
又、マーカー移動度μmarkerと劣化率は、次式で算出した。
μmarker=IL/Vt …(1)
ここで、I:有効長、L:全長、V:印加電圧、t:移動時間
劣化率=(|(μmarkerinitial-μmarkerrunX)|/μmarkerinitial)×100% …(2)
μmarker=IL/Vt …(1)
ここで、I:有効長、L:全長、V:印加電圧、t:移動時間
劣化率=(|(μmarkerinitial-μmarkerrunX)|/μmarkerinitial)×100% …(2)
本発明に係るキャピラリの劣化率が非常に少なく、安定性に優れていることがわかる。
又、有機溶媒に対する耐久性を図9に示す。分析条件は、キャピラリ全長58.5cm、有効長50cm、内径50μm、分離溶液:50mM酢酸アンモニウム、pH7.4、印加電圧-30kV、EOFマーカー:トリメシン酸である。
更に、ポリマーBでコートしたキャピラリでアニオンとヌクレオチドの混合物を分析した結果を図10に示す。分析条件は、キャピラリ長100cm、分離溶液:50mM酢酸アンモニウム、pH7.4、印加電圧-30kV、試料を50mbarで30秒注入であり、検出ピークは、1:イソクエン酸塩、2:クエン酸塩、3:グルコース1-リン酸、4:フルクトース6-リン酸、5:グルコース6-リン酸である。
従来、CE-MS法を用いたメタボローム解析においては、キャピラリへの吸着のため、リン酸化合物分析が、アニオン分析の条件ではできなかったため、別法を設定する必要があったが、本発明により、図10に示す如く、ヌクレオチドであるリン酸化合物分析及びアニオン分析の同時測定が可能となる。又、Soga.et.al.,Anal Chem,2002,74,2233-2239で報告されているように、SMILEコートキャピラリでは、吸着のため測定が不可能であったCoA、アセチルCoA、マロニルCoAについても、ポリマーBコートキャピラリで測定できることを確認した。更に、壁面と溶質間の相互作用が最小化されたことにより、分離効率自体の向上もみられた。
このように、CE-MS法を用いるメタボローム解析において、2種類行なわなければならなかった分析法を、本発明により、1条件での分析が可能となった。
なお、前記実施形態においては、本発明が内壁コートキャピラリに適用されていたが、本発明の適用対象はこれに限定されず、ビーカーや実験装置等の吸着防止に用いることも可能である。
又、リン脂質ポリマーも、脂溶性を有する両性イオンのポリマーであれば、MPCとBMA又はMPCとSMAとの組合せに限定されない。
キャピラリ電気泳動法等で用いられる溶融石英製毛細管の内壁に対するリン酸化合物の吸着を高い耐久性で簡単に防止できる吸着防止方法、吸着防止材、吸着防止処理を施した内壁コートキャピラリ、その製造方法、及び、前記内壁コートキャピラリを用いたリン酸化合物とアニオンの同時分析方法を提供できる。
Claims (18)
- 脂溶性を有する両性イオンのポリマーを用いて、リン酸化合物の吸着を防止することを特徴とする吸着防止方法。
- 前記ポリマーが、リン脂質ポリマーであることを特徴とする請求項1に記載の吸着防止方法。
- 前記リン脂質ポリマーが、MPCとSMA又はBMAを組合せた物であることを特徴とする請求項2に記載の吸着防止方法。
- 脂溶性を有する両性イオンのポリマーを含むことを特徴とする吸着防止材。
- 前記ポリマーが、リン脂質ポリマーであることを特徴とする請求項4に記載の吸着防止材。
- 前記リン脂質ポリマーが、MPCとSMA又はBMAを組合せた物であることを特徴とする請求項5に記載の吸着防止材。
- 脂溶性を有する両性イオンのポリマーが、イオン的相互作用で壁面に固定化されていることを特徴とする内壁コートキャピラリ。
- 前記ポリマーが、リン脂質ポリマーであることを特徴とする請求項7に記載の内壁コートキャピラリ。
- 前記リン脂質ポリマーが、MPCとSMA又はBMAを組合せた物であることを特徴とする請求項8に記載の内壁コートキャピラリ。
- 前記壁面にシラノールが含まれることを特徴とする請求項7乃至9のいずれかに記載の内壁コートキャピラリ。
- キャピラリ内に脂溶性を有する両性イオンのポリマーを含む高分子溶液を流し、前記ポリマーをイオン的相互作用で壁面に固定化することを特徴とする内壁コートキャピラリの製造方法。
- 前記ポリマーが、リン脂質ポリマーであることを特徴とする請求項11に記載の内壁コートキャピラリの製造方法。
- 前記リン脂質ポリマーが、MPCとSMA又はBMAを組合せた物であることを特徴とする請求項12に記載の内壁コートキャピラリの製造方法。
- 前記壁面にシラノールが含まれることを特徴とする請求項11乃至13のいずれかに記載の内壁コートキャピラリの製造方法。
- 脂溶性を有する両性イオンのポリマーが、イオン的相互作用で壁面に固定化された内壁コートキャピラリを用いることを特徴とするリン酸化合物とアニオンの同時分析方法。
- 前記ポリマーが、リン脂質ポリマーであることを特徴とする請求項15に記載のリン酸化合物とアニオンの同時分析方法。
- 前記リン脂質ポリマーが、MPCとSMA又はBMAを組合せた物であることを特徴とする請求項16に記載のリン酸化合物とアニオンの同時分析方法。
- 前記壁面にシラノールが含まれることを特徴とする請求項15乃至17のいずれかに記載のリン酸化合物とアニオンの同時分析方法。
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