JPH02112756A - 電気泳動用キャピラリ管 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の技術分野〕 本発明はタンパク質の溶質に露出する固体表面に関し、
特に溶液のｐＨを選択することによって電気浸透フＣ１
−（ｅｌｅｃｔｒｏｏｓｍｏｔｉｃ　ｆｌｏｗ）を制御
することができるキャピラリ・ゾーン電気泳動（ｃａｐ
ｉｌｌａｒｙ　ｚｏｎｅ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓ
ｉｓ）による電気泳動分離に用いられるキャピラリ管に
関するものである。

〔従来技術とその問題点〕

微細なキャピラリ（７５μかそれ以下）のキャビ（Ｌｕ
ｋａｃｓ）によってであり、微小の溶質を効率的に分離
する方法として有効であることがわかっている（Ｊ、Ｃ
ｈｒｏｍａｔｏｇ８．２１８（１９８１）、第２０９頁
、及び＾ｎａ１．Ｃｈｅｍ、　、　５３（１９８１）、
第１２９８頁参照）。この分離方法は、−船釣にわずか
に電界が与えられた状態で固体表面と接触する液体のフ
ローと呼ばれる電気浸透効果に基づいている。キャピラ
リ・ゾーン電気泳動による電気泳動分離の良い点は、サ
ンプルの大きさが小さくて良いこと、サンプルの前処理
が不要かわずかですむこと、そして生体的に活性なサン
プルの定量及び再生利用の可能性があることである。

例えば、米国特許第４．６７５．３００号（１９８７年
６月２３日発行）にはレーザ励起による蛍光検出器を導
入した界面動電分離法の理論及び装置が記載されている
。このシステムには内径が７５μのフユーズド・シリカ
・キャピラリ（ｆｕｓｅｄ　５ｉｌｉｃａ　ｃａｐｉｌ
ｌａｒｙ）が備えられている。

残念なことに、従来のキャピラリ・ゾーン電気泳動には
タンパク質等の高分子を分離しようとする場合には大き
な欠点がある。キャピラリ・ゾーン電気泳動による高分
子の分離では、シリカ・キャピラリの壁と生体高分子が
不都合な相互作用を起こすのである。

燐酸緩衝液でＩ）Ｈ７に調整される未処理のフユーズド
・シリｈ・キャピラリ中で、チトクローム、リゾチーム
、リボヌクレアーゼＡ等のモデル・タンパク質を分離す
ると強力なテーリングが起こり、これは正に荷電したタ
ンパク質と負に荷電したキャピラリ壁とのクーロン作用
によるものであると考察されている。（Ｓｃ　１ｅｎｃ
ｅ、　２２２　（１９８３）　、第２６６頁参照） Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、５８（１
９８６）　ｓ第１６６頁では、タンパク質及びシリカ・
キャピラリの間のクーロン反発力はタンパク質のキャピ
ラリ壁への吸着傾向を上回る可能性がある。ここでは、
タンパク質の等電点（ｐＩ）に対して溶液のｐＨを変化
させ、タンパク質の実効電荷を変えることによって（分
子量１３．０００ないし７７、０００の）モデル・タン
パク質の分離を実証した。しかしこの方法ではｐＨが７
以上になるとシリカが溶解し、カラムの寿命を短縮させ
、また、性能を低下させ、分析可能なのはｐｉが緩衝液
のｐＨより小さいタンパク質だけとなる。

よって、有効分析の範囲が著しく減少し、さらに複雑な
タンパク質の組成及び構成によって、実効負電荷を有す
るタンパク質でもなおり−ロン力によらない相互作用が
生じてしまう。

生体高分子、すなわちタンパク質の相互作用を解決する
ための別の方法は、イオン強度を上げることである。こ
れは原則的には有効であるが、イオン強度が上昇するに
つれて加熱も生じてしまい、分離効率が減少する傾向が
ある。

キャピラリ壁とタンパク質の相互作用を解決するための
方法としてはさらに非架橋ポリマーの単分子層で電気泳
動管をコーティングする方法がある。米国特許第４．６
８０．２０１号（１９８７年７月１４日発行）は、一方
はガラス壁と特定的に反応し、他方は重合工程に関与す
る単量体と反応する二官能価の化合物（ｂｉｆｕｎｃｔ
ｉｏｎａｌ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）を用いることによっ
て、薄壁で、孔の小さな電気泳動分離用キャピラリ管を
製造する方法が記載されている。この方法によって、ポ
リアクリルアミド・コーティングのようなポリマー・コ
ーティングが行われ、ポリビニルアルコール及びポリビ
ニルピロリドンの等の他のポリマーをコーティングする
際にも用いることが提案されている。しかし、この方法
及びキャピラリ管処理では、電気浸透フローを破壊する
傾向があり、効率はさらに低下してしまう。

これらの効率の低さは、タンパク質／壁の相互作用がな
お起こっていることを示している。

〔発明の目的〕

本発明の目的は高分子を含む溶質を、溶質と孔の間の相
互作用をかなり減少させて効率の高い電気永劫分離を行
うのに有効なキャピラリ管を提供することにある。

本発明の別の目的はフローの大きさ及び／またはフロ一
方向を制御する電気浸透フロー制御の可能なキャピラリ
管を提供することにある。

〔発明の概要］ 本発明は特にタンパク質等の電気泳動法による分離に用
いられるキャピラリ管に関するもので、キャピラリ管の
内壁とタンパク質溶質問の相互作用を低減せんとするも
のである０本発明の一実施例では、アミノ基等の酸素平
衡あるいはカルボキシル基等の塩基性平衡を備えるイオ
ン化種から成る境界層を含む０本発明の他の実施例では
、タンパク質、ペプチドあるいは両性電解質を、酸素求
核あるいは窒素求核と反応させ（共有結合もしくはカッ
プリング）、水和可能な両性境界層を含むものである。

これらはｐＨの選択によって電気泳動フローを容易に制
御することができる。

〔発明の実施例〕

本発明ではタンパク質の溶質との相互作用を減少させる
固体表面が与えられる。キャピラリ・ゾーン電気泳動に
用いられる口径の小さなキャピラリ管が特に望ましい。

このような管の内径ぼ、船釣に５００μより小さく、２
０μ乃至２００μが典型的である。また表面がタンパク
質溶質に露出する心肺装置及び挿入管等の医療用途にも
適用される。

以下、本発明に従って口径を変形させた小口径の（約５
００ミクロン以下）キャピラリ管について説明する。

本発明の一実施例では、孔に沿って、または内壁に相互
作用の減少した相が共有結合し、キャピラリ管の内壁と
用いられるタンパク質溶質の間の境界面の層が設けられ
る。このようなコーティングの相互作用が減少された相
は、タンパク質溶質と孔の間の相互作用を減少させるの
に効果的であり、適度に高い電気浸透フローを可能とし
、優れた効率性が与えられる。この境界層の厚さは、約
４〜６分子層である場合、キャピラリ・ゾーン電気泳動
で用いる際の電気浸透フローは適度に高い。

しかし、より小さな（最低１分子）あるいは大きな分子
層も可能であり、ある特定の応用には望ましいものであ
る。表面に巨大分子層をコーティングする場合、電気浸
透フローが実質的に減少する傾向にあり、これは２つの
電極に移動する型の単一の検出器を備えたシステムでは
通常望ましくない。

ここで、本発明の好適な実施例を２つ説明する。

第１の実施例では、相互作用の減少した相に酸平衡ある
いは塩基平衡のイオン化種が含まれている。

塩基平衡のイオン化種として望ましいものは、アミノ基
である。酸平衡のイオン化種として望ましいものは、カ
ルボキシル基である。イオン化種がアミノ基であると、
電気浸透フローの大きさ及び方向の制御はキャピラリ管
を通る溶液のｐＨを選択することによって行われる。イ
オン化種がカルボキシル基であると、電気浸透フローの
大きさは溶液のｐＨによって制御することができる。

両方の型のイオン化種の調整は以下のようにして行われ
る。本実施例のキャピラリ管の孔、または内壁及び表面
の主成分がシリカである場合、まず水和させ次に２つの
端部官能基を有するオルガノあるいはクロロシラン化合
物と反応させる。水溶液内のシリル化試薬の濃度は、約
０．１ｗｔ１％からｌ　ｗｔ、％であり、約４〜６分子
層が表面に結合する。このように反応せずに残っている
シラノール基を作らないためには４〜６分子層が望まし
く、なお実質的に電気浸透フローが起こる。シリル化試
薬の未処理の官能基は窒素求核あるいは酸素求核である
。窒素求核によって塩基平衡のイオン化種のアミノ基が
与えられる。あるいは以下に説明するように、窒素求核
はカルボキシル基に変換させることもできる。酸素求核
（例えば、水酸基）は、以下にさらに説明するように酸
平衡のイオン化種としてカルボキシル基に変換させるこ
とができる。

シリル化試薬の例としては、３−アミノプロピルトリメ
トキシシラン及び３−アミノプロピルトリエトキシシラ
ンがある。窒素求核を含むことが望ましい表面の適切な
シリル化試薬としては他に、４−アミノブチルジメチル
メトキシシラン、４−アミノブチルトリエトキシシラン
、（アミノエチチルジメトキシシラン、ｎ−（２−アミ
ノエチル−３−アミノプロピル）トリメトキシシラン、
ｎψ −２−アミノエチル３−アミノプロピルトリス（２−エ
チルへキクソキシ）シラン、６−（アミノへキシルアミ
ノプロピル）トリメトキシシラン、アミツメチルトリッ
チルシラン、ｐ−アミノフェニルトリメトキシシラン、
アミノフェニルトリメトキシシラン、３−（１−アミノ
プロポキシ）−３，３−ジメチル−１−プロペニルトリ
メトキシシラン、３−アミノプロピルトリス（メトキシ
エトキシエトキシ）シラン、３−アミノプロピルジメチ
ルエトキシシラン、３−アミノプロピルメチルジェトキ
シシラン、３−アミノプロピルトリス（トリメチルシロ
キシ）シラン、及び３−アミノアンデシルトリメトキシ
シランがある。

酸素求核を与えるシリル化試薬としては、３−グリシド
キシブロピルトリメチルエトキシシラン、（３−グリシ
ドキシプロビル）メチルジェトキシシラン、３−グリシ
ドキシプロビルメチル−ジ−イソプロペンオキシシラン
、及び（３−グリシドキシプロビル）トリメトキシシラ
ンがある。

窒素求核を有することが望ましい表面の列挙されたシリ
ル化試薬かられかるように、試薬の非結合端部にはアミ
ノ基がある。これらアミノ基は、塩基平衡のイオン化種
である。従って、例えば３−アミノ−プロピルトリメト
キシシランが結合した表面には、塩基平衡が約ｐにａ９
のイオン化種として一級アミノ基がある。反対に酸素求
核を与えるシリル化試薬は、無水酢酸と約ｐＫａ４の酸
平衡の３＝グリシドキシプロビルトリメチルエトキシシ
ランを反応させることによって調整する。

アミン基をイオン化種として用いることによって、電気
浸透フローの大きさ及び方向を制御することができる。

イオン化種としてカルボキシル基を用いる場合は電気泳
動フローの大きさを制御することができる。アミノ基自
体はカルボキシル基がイオン化種として望ましい場合に
、無水コハク酸等の試薬と反応させてカルボキシルを形
成することができる。溶液内のタンパク質の電気泳動分
離を行う際、溶液のｐＨを選択することによって６、い
ずれかの型のイオン化種でフロー制御することができる
。

本発明は、第１の実施例で実行することができるが、第
２の実施例のキャピラリ管ではより精密な電気浸透フロ
ー制御を行うことができる。以下に詳細に説明する第２
の実施例は第１の実施例より誘導されることが好ましい
。

第２の実施例では、タンパク質、ペプチド、あるいは両
性電解質を上述の酸素あるいは窒素求核と反応させる（
すなわち共有結合かカップリングさせる）ことによって
調整される水和可能な両性相（ｈｙｄｒａｔａｂｌｅ　
ａｍｐｈｏｔｅｒｉｃ　ｐｈａｓｅ）を含む境界層が設
けられる。アミノ基（窒素求核の）及びカルボキシル基
あるいは水酸基（酸素求核の）をカップリングさせる。

例えば、アミノ基はグルタルアルデヒドあるいはカルボ
ニルジイミダゾールと活性化（ａｃｔｉｖａｔｅｄ）さ
せ、カルボキシル基あるいは水酸基はカルボニルジイミ
ダゾールと活性化させる。または、タンパク質、ペプチ
ド及び両性電解質自体をカップリングさせるために活性
化させる・例えばジペプチドは、グルタルアルデヒドと
活性化させ、より大きな鎖のペプチド及び両性色素をカ
ルボジイミドと活性化させることができる。タンパク質
、ペプチドあるいは両性色素のカップリングの活性化は
、当業者にとって周知のものである。

共有結合境界層に含有される適切なタンパク質、ペプチ
ド及び両性色素の分子量は、約２００ダルトン〜約５８
ダルトン（ｄａｌｔｏｎｓ）である。すなわち、ジペプ
チドから高分子の大きさの分子を用いることができる。

このような合成分子は特にｐＩ範囲が狭い場合にも有効
であるために、特に両性電解質が望ましい。周知のよう
に、両性電解質はアミン及びアミノ酸とエピクロロヒド
リン（ｅｐ　ｉｃｈ　１ｏｒｏ−ｈｙｄｒｉｎ）の共重
合（ｃｏｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）によって合成
される。アミン及びアミノ酸を適切に選択することによ
って、緩衝容量（ｂｕｔｔｅｒ　ｃａｐａｃｉｔｙ）の
大部分は狭いｐＨ間隔（２−３ｐＨ単位）に集中させる
ことができる。両性電解質は、ファルマシア・ファイン
・ケミカルズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅ
ｍｉｃａｌｓ）　（商標名“ファルマリト（Ｐｈａｒａ
ｍａｌｙｔｅ）”）及びバイオ・ラッド・ラボラトリー
ズ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）　（
商標名“パイオーライト（Ｂｉｏ−Ｌｙｔｅ）”等から
市販されている。

タンパク質、ペプチドあるいは両性電解質であれ、両性
層にはイオン化可能なカチオン種及びイオン化可能なア
ニオン種が含まれている。カチオン種には、アミノ、グ
アニジニウム、イミジアゾリウム及びそれらの混合物が
ある。カチオン種のアミノは、リジン側鎖から、グアニ
ジミニウムはアルギニン側鎖、そしてイミジアゾリウム
はヒスチジンから得ることができる。両性相のアニオン
種には、アルバラゲン酸及びグルタミン酸側鎮からのカ
ルボキシル基がある。合成両性電解質には、アミノ基か
らのイオン化可能なカチオン種があり、このアミノ基は
大体が３価であるが、中には２価あるいは１価のものも
ある。アニオン種は、α−アミノカルボキシル基及び重
合グリシルグリシンからのカルボキシル基の２種類のカ
ルボキシル基によって与えられる。

両性相を形成するのに適切なタンパク質、ペプチド及び
両性電解質はすべて使用の際高度に水和される。これは
コーティングされた表面とタンパク質溶質の間の相互作
用（減少してはいるが）の逆転性（ｒｅｖｅｒｓａｂｉ
ｌｉｔｙ）にとっては重要である。

この水和可能な両性相によって、電気浸透フローの大き
さとフローの方向の両方を制御することができる。電気
浸透フローの大きさを制御すると、その効率をある特定
の分離に合わせて最適化することができる。フローの方
向を制御すると溶離順序を変え、逆転させることができ
る。電気浸透フローを逆転させることは、通常は溶解が
非常に遅いタンパク質の溶離を促進することができる。

本発明のコーティングによるタンパク質の分離効率は、
理論上は３００．０００ないし約１．０００．０００の
理論段数の範囲である。このような効率の高い分離はタ
ンパク質と壁の相互作用（ｋ′）が通常０．０２以下の
非常に低い場合に行われる。このようにに′が非常に低
く高効率の電気浸透フロー速度が最大効率にほぼ最適で
あると考えられる。

実験 以下本発明の説明のために例、方法、材料及び結果を示
す。しかし本発明に関する当業者には、本発明の技術的
範囲での他の側面、利点及び変形例が明かであろう。

例１には第１の実施例のキャピラリ管の製造が示されて
いる。例１１には第２の実施例が示されている。

例■ 内径５０μのシリカ・キャピラリ管（ポリマイクロ・テ
クノロジー（Ｐｏｌｙｍｉｃｒｏ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｉｅｓ）社製）を１００ｃｍの長さに切断した。次に以
下のように、アミノとイオン化可能な種で終端する相互
作用の減少した、４〜６分子相を共有結合させることに
よって個別キャピラリ管を製造した。

まず、０．ＩＮのＮａＯＨを約１−２μｌ／分の速度で
キャピラリ管に注入することによってシリカ°キャピラ
リ管を水和した。洗浄は８−１０時間行った。

次にキャピラリ管を脱イオン水で２−３時間洗浄した。

次に壁を３−アミノプロピルトリメトキシシラン（３−
ＡＰＴＳ）と反応させた。３−ＡＰＴＳの１％溶液を調
整し、酢酸でｐＨ４，５に調整した。この溶液を１−２
μｍ／分の速度で１時間キャピラリ管の一方向に注入し
、端部を逆転させてさらに１時間試薬を反対方向に注入
した。次にキャピラリ管をヘリウム・タンクに連結した
多岐管に取り付け、−晩ヘリウム流を流入させた。

第１図に示されるように、カラムによるｐＨ５における
リゾチーム、リボフレアーゼ及びトリプシノーゲンの混
合物の分離を示している（検出器へ９８ｃｍ、　２００
ｍＭ０Ａｃ、　２００Ｖ／　Ｃｍ）　ａ　しかし同じタ
ンハク質の混合物をｐＨ７で分離するとく第２図参照：
検出器へ９８ｃｍ、　２００ｍＭＰｉ　、　５０ｖ／ａ
ｍ）　、リゾチームとトリプシンのピークの溶離類は逆
転する。従って第１図及び第２図を比較すると、本発明
のキャピラリ管を用いると溶液のｐＨを選択することに
よって電気浸透フローを制御することができることがわ
かる。

例ＩＩ 例１と同様に内径５０μ　のシリカ・キャピラリ管を１
００ｃｍの長さに切断し３−ＡＰＴＳを添加した。５％
グルタルアルデヒド溶液を含む０．ＩＮの燐酸緩衝液（
ｐＨ７，０）をキャピラリ管の各々の端部に１時間それ
ぞれの方向に通すことによって、アミノ基を活性化させ
た。両端部を密閉しキャピラリ管を１時間室温に放置し
た。次に、０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７，０）を、１時
間、１−２μＬ／分のフロー速度でカラムに通すことに
よって、過剰なグルタルアルデヒドを洗浄−した。

次に、望ましい水和可能な両性化合物の溶液を０．１Ｍ
燐酸緩衝液（ｐＨ７，０）に０．２ｍＭ濃度に調整した
。カラムの両端部を密閉し、最低２時間４℃にて静置し
、タンパク質、ペプチドあるいは両性電解質と活性化酸
素あるいは窒素求核と反応させた。

そして過剰な未反応の両性化合物を適切な開始緩衝液で
約２−３時間、１−２ｍＬ／分のフロー速度で洗浄した
。

タンパク質 上記のように水和可能な両性相としてラクトアルブミン
を付着させ、９Ｎを変化させて電気浸透フロー（ＥＯＦ
）レートを試験した。表１では３００ｖ／　ｃｍに右け
るｐＨ７，０の２０ｍＭピロ燐酸及び１０ｍＭのＫＣＬ
緩衝液によるＥＯＦデータが示されている。

表１ ｐＨＥＯＦｍｍ／秒　　　　　Ｎ ４．０　（陽極）−ｏ、６８　　　２．２ｘｌＯ’５．
５０ ７ｏ　Ｏ（陰極）　　　１，０６　　　２．６ｘ１０５
８．６（陰極）　　　１．４０　　　２．６ｘｌＯ’表
Ｉのデータかられかるように、本発明のキャピラリ管（
第２の実施例）を用い、溶液のｐＨを選択することによ
って、電気浸透フロー及び大きさの両方を制御すること
ができた。

ジペプチド ジペプチドグリシル−フェニルアラニンアミドを同様に
キャピラリ管に付着させ、例１に記載されているように
タンパク質の混合物を分離するのに用いた。第３図（２
００ｍＭＰｉ、　ｐＨ６，８、検出基へ９６Ｃｍ、　２
００Ｖ／　Ｃｍ）にはこのように−船釣に分離が困難な
タンパク質の良好な分離が示されている。

例ＩＩＩ 例Ｉで調整したキャピラリ管を乾燥ジオキサンで完全に
洗浄した（１−２μＬ／分で５００　ｍｌ）。

カルボニルジイミダゾールの０．２Ｍ溶液を１−２μｌ
／分の速度で１時間半キャピラリ管に注入した。

両端部を密閉し、キャピラリ管を１−２時間静置した。

そしてキャピラリ管を前記のフロー速度で乾燥ジオキサ
ン（５００μｌ）で洗浄し過剰な未反応カルボニルジイ
ミダゾールを除去した。ファルマライトの４０％溶液を
１−２μｌ／分で３０分キャピラリ管に注入した。この
キャピラリ管を１−２時間静置し脱イオン水で一晩洗浄
した。

下の表ＩＩではこのキャピラリ管と例Ｉで述べたキャピ
ラリ管の比較が示されている。

表ＩＩ 例ＩＩＩ　　　　Ｏ，３５０，４４ 例Ｉ　　　　　　Ｏ，５３０，９２ ＄　　１５０Ｖ／ＣｍにおいてｐＨ６，８の２００ｍＭ
燐酸緩衝液で行った。

＊＊　　２００Ｖ／ａｍにおいてｐＨ４，０の２００ｍ
Ｍ酢酸緩衝液で行った。

例ＩＩ及び例１１１では、第１の実施例のキャピラリ管
を（ここではアミノ基で）活性化し、タンパク質、ジペ
プチド及び両性電解質とそれぞれカップリングすること
によって第２の実施例のキャピラリ管を作ることが示さ
れている。例Ｉｖでは逆が示される。

例ＩＶ ファルマライト４−６．５の反応カルボニルの数はソン
ダーバーグ等によるファルマライトの説明に基づいて、
１．５Ｎと決めた（１９７９年、パーマゴン・プレス、
オフスフオードのエイチ・ベーター編のソンターバーグ
（Ｓｏｄｅｒｂｅｒｇ）ら著の「生体流体のプロタイド
（Ｐｒｏｔｉｅｄｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｂｉｏｌｏｇｉ
ｃａｌＦｌｕｉｄｓ）　Ｊの第６８７頁参照）。２ｍＬ
のファルマライト４−６．５に、０．６ｍｇのエチル（
Ｎ。

Ｎ１ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＡ
Ｃ）をゆっくりと添加し、溶液のｐＨをｐＨ６以下に維
持した。最後のＥＤＡＣを添加し、ｐＨが安定した後、
アミノ相キャピラリ管（例１で調整されたもの）に活性
ファルマライト溶液を　５００μｍで１−２分間注入し
た。キャピラリ管の両端部にキャップをし、４℃で一装
置いた。このキャピラリ管を水で完全に洗浄し、流れる
緩衝液に平衡させて使用できるように準備した。

概略的に言うと、本発明のキャピラリ管では溶液のｐＨ
を選択することによって電気浸透フローの大きさ及び／
あるいはフロ一方向を制御することができる。これらの
管は様々なタンパク質の混合物を高い効率で分離するの
に用いることができる。

本発明は特定の例を参照して説明したが、本発明の要旨
から逸脱せずに様々な変形を容易に実施することができ
、これは当業者によって理解されるべきである。従って
上記の説明は理解のためにのみ用い、限定するために用
いられてはならない。

〔発明の効果〕

本発明では、境界層はキャピラリ管の内壁と共有結合し
ている。この境界層は内壁とタンパク質溶質の間の相互
作用を減少させるのに有効であり、水和可能な両性相（
ｈｙｄｒａｔａｂｌｅ　ａｍｐｈａｔｅｒｉｃ　ｐｈａ
ｓｅ）を有している。この両性相の等電点は定量可能で
あり、溶液のｐＮを選択することによって電気浸透フロ
ーを制御することができる。

本発明ではまた境界層、すなわち相互作用の減少した相
には酸平衡（あるいは塩基平衡）のイオン化可能な種が
含まれる。このイオン化可能な種によるｐＨ選択によっ
て電気浸透フローを制御することができる。

本発明で記載されたキャピラリ管はすでに製造され、様
々な種類のタンパク質の混合物を効率良く分離すること
に用いられてふり、繰返し使用するにおいても再現性及
び−貫した性能を保持することが可能である。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第２図は、異なるｐＨ条件下で、本発明の一
実施例である電気泳動用キャピラリ管によって得られた
タンパク質混合物の電気泳動クロマトグラムである。第
３図は、他の実施例によって得た、第１図及　び第２図
と同様の電気泳動クロマトグラムである。 携暢

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）キャピラリ管の内壁とタンパク質溶質間の相互作
   用を減少させ、前記内壁と共有結合した水和可能な両性
   相からなる境界層を含むことを特徴とする電気泳動用キ
   ャピラリ管。
2. （２）請求項第１項記載の電気泳動用キャピラリ管にお
   いて、前記境界層は、決定可能な等電点を有し、電気浸
   透フローの制御を選択的に実施することを特徴とする。
3. （３）請求項第１項記載の電気泳動用キャピラリ管にお
   いて、前記境界層はイオン化可能なカチオン種及びイオ
   ン化可能なアニオン種を含み、前にカチオン種はアミノ
   、グァンイジニウム、イミダゾリウム及びそれら混合物
   より成り、前記アニオン種はヤルボキシル基を含有する
   ことを特徴とする。
4. （４）請求項第１項記載の電気泳動用キャピラリにおい
   て、前記境界層は、タンパク質またはペプチドまたは両
   性電解質と酸素求核または窒素求核との反応生成物であ
   ることを特徴とする。
5. （５）タンパク質溶質の電気泳動法による分離に用いら
   れる小口径のキャピラリ管において、前記口径と前記タ
   ンパク質溶質間の相互作 用を減少させる、前記口径と共有結合する相互作用低減
   境界層を含み、前記相互作用低減層は、酸性平衡及び塩
   基性平衡を有するイオン化種より成り、前にイオン化種
   はｐＨの選択によって電気泳動フローの制御を行うこと
   を特徴とする電気泳動用キャピラリ管。