JPH06186202A - キャピラリーの内表面の不活性化方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 本発明は、キャピラリーゾーン電気泳動およ
びキャピラリーゲル電気泳動用のキャピラリーの内表面
を不活性化する方法に関する。不活性化は、初めには水
溶性である極性ポリマーを内表面に被覆し、次いで、水
不溶性ポリマーの形成によってポリマーを熱的に固定化
することからなる。本発明は、こうして調製されたキャ
ピラリーおよびオリゴヌレオチド、ペプチドおよびタン
パク質の分離におけるキャピラリーの使用にも関する。 【効果】 本発明によれば、再現性のある移動挙動を有
する状態で、連続分離を行うのに適した安定なキャピラ
リーが得られる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、キャピラリーゾーン電
気泳動およびキャピラリーゲル電気泳動用のキャピラリ
ーの内表面を不活性化する方法、ならびに該方法により
得られたキャピラリー、特に、オリゴヌクレオチド、ペ
プチドおよびタンパク質の分離用のキャピラリーに関す
る。

【０００２】

【従来の技術】現在のキャピラリー電気泳動（ＣＥ）の
ＣＺＥ（キャピラリーゾーン電気泳動、capillary zon
e electrophoresis）型式において、および例えば、キ
ャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ、capillary gel el
ectrophoresis）において、溶融シリカ（ＦＳ）からで
きているキャピラリーが実質的に排他的に使用されてい
る。内表面の前処理が有るにしろ無いにしろ、これらキ
ャピラリーには、緩衝液が満たされる。緩衝容器におい
て、電極とともに、浸漬されたキャピラリーの末端に、
強い電場（＜６０ｋＶ／ｍ）がかけられる。キャピラリ
ー充填物中で形成された電場の影響の下で電気泳動分離
が生じる。該分離は、仕込まれた分析対象分子の電気移
動度の差によって生じる。溶融シリカ材料からできてい
るキャピラリーは、初めに、ＣＥにおいて実質的に排他
的に使用されていた。これらキャピラリーが、機械的に
可撓性であり、必要な小さい直径（＜１００μｍ）を有
するものが市販されているからである。小さい肉厚およ
び材料（石英）の故に、そのイオン的強度に応じて、緩
衝液における電流によって緩衝液中に生じる熱が良好に
除去できる。

【０００３】そのようなキャピラリーの酸性表面性質
は、その上に存在するシラノール基から生じる。表面を
適切に改質していない場合に、これらはキャピラリー電
気泳動分離に影響して、実際の分析において良好でかつ
再現性のある分離が行えない。緩衝液のｐＨ値が、（エ
ッチングなどの）前処理および製造方法に依存して、種
々の濃度で存在し得るシラノール基の解離に影響する。

【０００４】表面は、緩衝液との接触時に、前処理に応
じて負に帯電し、一般的に許容された理論的考慮に従っ
て、ゼータ電位が形成され、電場の作用下で電解液にお
ける電気浸透流動（ＥＯＦ）に至る。ＥＯＦは、電気移
動と同じ方向に生じることもあるし、反対方向にも生じ
ることもある。分離すべき分析対象分子のキャピラリー
を通過する輸送は、表面性質を変更することによって促
進されるか、または抑制される。

【０００５】しかし、キャピラリーの表面によって、そ
の電荷の故に、および一般にその吸着性質の故に、分析
対象分子と壁との間に分子間相互作用が生じる。この相
互作用は、分離に悪影響し、特に、バンドの広域化およ
び歪みの故に、移動時間が変化し、結果的に、分離効
率、および従って分解能が非常に強くかつ不都合に悪化
する。

【０００６】ＣＥにおいて、そのような相互作用は、液
体クロマトグラフィー（ＬＣ）では通常であるのとは異
なって、良好な、即ち、非常に効率的な分析分離を達成
するのに全く好ましくない。

【０００７】従って、電気泳動用のキャピラリーの分離
性質は、内表面の条件によって大いに悪影響を受ける。
ＥＯＦの大きさを変更することが分析的に重要であるの
で、小さいまたは大きい（オリゴマーおよびポリマー）
分子の吸着または化学的結合によって表面を改質する方
法が非常に重要である。しかし、良好な、即ち効率的な
高分解能の分離が可能になるように、分離すべき分析対
象分子の表面の吸着性における増加に、表面の改質がつ
ながらないことが、絶対に必要である。このことは、そ
の構造およびコンフォメーションに応じて、表面に対し
て疎水的なまたは親水的な相互作用を行うオリゴヌクレ
オチド、ペプチドおよびタンパク質の分離に特にあては
まる。

【０００８】キャピラリーゾーン電気泳動およびキャピ
ラリーゲル電気泳動における表面を改質する種々の方法
が知られているが、以下のような欠点がある：ｐＨ値、
および緩衝液のイオン強度が変化し、従って、シラノー
ル基のイオン化度が変化する。

【０００９】これにより、酸性および塩基性分析対象物
の電荷、ならびにその電気移動度が変化する。タンパク
質の分離の観点から、充分な表面不活性化が、極度なｐ
Ｈ値を使用することのみによって為されるが、しかし、
これらｐＨ値では、多くのタンパク質はもはや安定では
ない。緩衝液における高いイオン強度の使用は、増加し
た電流流れに原因して、強い熱の発生によって限定され
る。

【００１０】緩衝液への低濃度での改質剤の添加 これらは、表面に吸着され、ＥＯＦおよび分析対象物吸
着に関してそれの性質を変化させる。そのような添加剤
の吸着は、キャピラリーの歴史および／または前処理に
より、および異なった手順によりほとんど未知の製造手
順により影響されるキャピラリー表面の性質に非常に依
存している。

【００１１】シラン化による表面の不活性化 この種の反応は２つの影響を与える。酸性シラノール基
の一部分が表面から除去され、シラン化剤の適切な置換
によって、キャピラリーの内表面に少ないかまたは多い
かまたは等しいポリマー分子を固定化する可能性があ
る。分析対象物分子とのそれの相互作用は非常に低いか
または全く存在しない。疎水性または親水性または等イ
オン性の性質を有する被覆を調製できる。ＣＥのために
典型的である緩衝液でキャピラリーが満たされている場
合に、安定であるポリマーを含んでなる表面被覆が、吸
着によっても固定化できる。特に、ポリマーが一方で強
度に極性であり、他方で異なったｐＨ値を有する水性緩
衝液に非常に溶解性であるかまたは不溶解性である場合
に、このことは可能である。キャピラリーガスクロマト
グラフィーにおいて使用されるこれらのような極性また
は非極性ポリマーによる被覆は、一連の再現性のある測
定に、および高いｐＨ値でのタンパク質分離に好適でな
いことがわかった。

【００１２】親水性である、要すればヒドロキシルを有
する、大きな分子が、その極性のために、水性緩衝液に
非常に良好に溶解性であるので、該分子が表面に固定化
される場合に、特に難しさがある。このため、二官能性
試薬を用いた前シラン化の後に化学結合によって表面に
親水性分子または分子基を付着させるということが種々
のアプローチで試みられている［例えば、エス・ヒェル
テン（Ｓ．Ｈjerten），ジェイ・クロマトグラ（Ｊ．Ｃ
hromatogr.）３４７（１９８５）１９１；ジー・エム・
ブルーイン（Ｇ．Ｍ．Ｂruin），ジェイ・ピー・チャン
（Ｊ．Ｐ．Ｃhang），アール・エイチ・クールマン
（Ｒ．Ｈ．Ｋuhlmann），ケー・ゼジャーズ（Ｋ．Ｚege
rs），ジェイ・シー・クラーク（Ｊ．Ｃ．Ｋraak）およ
びエイチ・ポッペ（Ｈ．Ｐoppe），ジェイ・クロマトグ
ラ（Ｊ．Ｃhromatogr．）４７１（１９８９）４２９；
ならびにケー・エー・コブ（Ｋ．Ａ．Ｃobb），ブイ・
ドルニク（Ｖ．Ｄolnik）およびエム・ノボトニー
（Ｍ．Ｎovotny），アナル・ケム（Ａnal．Ｃhem．）６
２（１９９０）２４７８］。

【００１３】シラノール誘導の既知の方法は、面倒であ
り、時間がかかる。その再現性に関する限り、それぞれ
の製造方法および／またはキャピラリーの選択された前
処理、例えば、エッチングに依存する。ＣＥキャピラリ
ーにおけるそのような表面改質は、ＥＯＦへの影響およ
び分析対象物吸着の抑制に関して大きなｐＨ範囲にわた
って安定ではない。改質分子のＳｉ−Ｏ−Ｓｉ結合を介
した共有結合が、特に高いｐＨ値で、攻撃されるからで
ある。

【００１４】アルキル置換シランでシリル化されている
表面は、タンパク質分離のためにはあまりに疎水性であ
り、これらタンパク質の吸着およびその変性が生じる。
極性置換基を有する試薬を使用もする他の簡単なシリル
化は、充分な失活を与えることができない。しかし、特
に、ヒドロキシル的に改質された表面、例えば、ジェイ
・ケー・タウンズ（Ｊ．Ｋ．Ｔowns）およびエフ・イー
・レグニア（Ｆ．Ｅ．Ｒegnier）のアナル・ケム（Ａna
l．Ｃhem），６３（１９９１）１１２６により、疎水性
表面、例えば、Ｃ₁₈−シラン化表面への洗浄剤の吸着に
よる高価な多段プロセスにより調製されたものが、タン
パク質分離のために使用できる。このようにして調製さ
れたキャピラリーは、高いｐＨ値（７まで）においても
充分なタンパク質分離を行うのに好適である。他のキャ
ピラリー（例えば、前記のポッペの文献に従ったもの）
は、＞４のｐＨ値でタンパク質の良好な分離を行うこと
ができないが、これは吸着のためと考えられる。

【００１５】一般に、次のことが適用できる。種々の酸
性および塩基性タンパク質の分離のための良好なキャピ
ラリーの重要な基準の１つは、タンパク質が溶離でき、
かつ改質が安定であるｐＨ範囲である。

【００１６】Ｓｉ−Ｏ−Ｓｉ結合を介した被覆の共有結
合に関して、これらが全ｐＨにわたって安定ではない、
特にｐＨ＞７で安定ではないということを考慮に入れな
ければならない。それにもかかわらず、表面が良好にカ
バーまたはシールドされていないならば、より高いｐＨ
値で、シリカ主鎖が攻撃をも受ける。

【００１７】極性系の吸着による表面改質 エム・ギルジス（Ｍ．Ｇilges），エイチ・ヒュースマ
ン（Ｈ．Ｈusman），エム・エイチ・クリーミス（Ｍ．
−Ｈ．Ｋleemiss），セイント・アール・モチェ（Ｓt．
Ｒ．Ｍotsch）およびジー・ションバーグ（Ｇ．Ｓchomb
urg），ＨＲＣ１５（１９９２）４５２において記載さ
れている、ＣＺＥにおいて緩衝液添加剤としてのポリビ
ニルアルコール（ＰＶＡ）による動的表面改質という方
法は、タンパク質および／またはキラルな塩基性の、よ
り小さい分子の分離のために使用できる。タンパク質分
離は、＜４のｐＨ値でのみ、そのような系において行う
ことができる。しかし、緩衝液添加剤としてＰＶＡを使
用したシリーズにおいて、１つのみの分析または幾つか
の分析の後において、純水でフラッシュする中間工程の
後に新鮮な緩衝液に、キャピラリーの充填を交換するこ
とが必要である。

【００１８】ポリビニルアルコールの水に対する溶解性
は、半結晶性の高度に会合した構造の形成のために、１
８０℃までの温度での熱処理により強く減少する［エン
サイクロペディア・オブ・ポリマー・サイエンス・アン
ド・エンジニアリング（Ｅncyclopedia of Ｐolymer
Ｓcience and Ｅngineering），第１７巻、ジョン
・ワイリー・アンド・サンズ・インク（Ｊohn Ｗeiley
＆ Ｓons，Ｉnc．）ニューヨーク，１９８９；なら
びにジェイ・エフ・ケニー（Ｊ．Ｆ．Ｋenney）および
ジー・ダブリュー・ウィルコックソン（Ｇ．Ｗ．Ｗillc
ockson），ジェイ・ポリマー・サイ（Ｊ．Ｐolymer Ｓ
ci．）Ａ−１，４（１９６６）６７９］。

【００１９】ＪＰ−９２−０５３１９１において、タン
パク質の電気泳動用の担体が記載されている。該担体
は、低い臨界溶解温度を有する温度感応性ハイポリマー
化合物を含んでなる。該化合物は、ポリ−Ｎ−置換アク
リルアミド誘導体、ポリ−Ｎ−置換メタクリルアミド誘
導体、またはこれらのコポリマー、ポリビニルメチルエ
ーテルおよび部分的に酸化されたポリビニルアルコール
から選択される。

【００２０】しかし、従来使用されている方法のほとん
どにおいてシラン化によって製造されるキャピラリーの
不安定性の故に、再現性のある移動挙動を有する状態で
連続して分離を行うことが不可能である。動的表面改質
に固有の欠点は、１つまたは幾つかの分離の後に被覆を
再び新たなものにしなければならないということであ
る。

【００２１】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、特に、再現性のある移動挙動を有する状態で、連続
分離を行うのに適した安定なキャピラリーを提供するこ
とにある。

【００２２】

【課題を解決するための手段】本発明の１つの態様によ
れば、この目的は、キャピラリーゾーン電気泳動および
キャピラリーゲル電気泳動用のキャピラリーの表面を不
活性化する方法であって、初めには水溶性である極性ポ
リマーを内表面に塗布し、次いで水不溶性ポリマーの形
成によってポリマーを熱的に固定化することを特徴とす
る方法によって、達成される。

【００２３】本発明によれば、キャピラリー表面が、熱
的に固定化されたポリマーで被覆されること、ならびに
そのようなキャピラリーが従来技術の前記欠点を解消で
きることが示された。

【００２４】本発明によれば、ポリマーがその初期の水
への溶解性を失うように、表面上にポリマーの半結晶性
の高度に会合した構造を形成することが可能である。こ
れは、一連の分離において、表面の刷新が必要ではない
理由である。

【００２５】本発明の好ましい態様において、シリカゲ
ルまたは加水分解四塩化ケイ素から得られる非晶質溶融
二酸化ケイ素からできているキャピラリーを使用する。
これらは通常、「溶融シリカ」とも呼ばれる。

【００２６】本発明における特に好ましい水溶性ポリマ
ーは、種々の分子量を有し、種々の加水分解度で市販さ
れているポリビニルアルコール（ＰＶＡ）である。０.
１〜２０重量％、特に０.５〜１０重量％の量で含有す
る水溶液の形態でポリビニルアルコールを使用すること
が好ましい。ポリビニルアルコールの全量が、キャピラ
リーの表面をできる限り濃密に、均一な被覆を確実にす
るのに充分である限り、使用量は限定されない。できれ
ば同様の分離効率を有するキャピラリーカラムを調製す
るために、それぞれの場合に同量のポリビニルアルコー
ルを選択することが当然に必要である。

【００２７】本発明の範囲において、ポリマーの水溶液
をまず初めに、キャピラリー中に導入する。本発明の範
囲において、高圧を適用することによってキャピラリー
をドレインすることが好ましい。ポリマーの熱的固定化
を行うのは、その後である。

【００２８】半結晶性の高度に会合した構造を得るため
に、キャピラリーを高温に加熱することが必要である。
温度範囲は、選択された圧力条件下において水の沸点よ
りも高いことが好ましい。これにより、要すれば窒素な
どの不活性ガスの雰囲気で、固定化を行える。

【００２９】水溶性ポリマーの熱的固定化は、１００〜
２５０℃、特に１３０〜１８０℃の温度で、０．５〜２
４時間、特に１〜１２時間にわたって、大気圧下でまた
は僅かな減圧下でキャピラリーを加熱することによって
行うことが好ましい。選択した固定化温度があまりに高
い場合に、ポリマー（ポリビニルアルコール）の熱分解
の可能性を気遣わねばならない。一方、選択した温度が
あまりに低い場合に、溶媒の水が充分な量で蒸発でき
ず、半結晶性の高度に会合した構造が形成されない。同
様に、熱的固定化の持続時間が重要である。固定化の
間、本発明の範囲において、ポリマーの酸化的分解を防
止するように、キャピラリー中に不活性ガス、例えば、
窒素またはアルゴンを通すことがことが好ましい。

【００３０】本発明の別の態様において、前記方法によ
って得られるキャピラリーゾーン電気泳動およびキャピ
ラリーゲル電気泳動用のキャピラリーが提供される。

【００３１】このようにして得られるキャピラリーは、
種々の分析用途に使用できる。キャピラリーをオリゴヌ
クレオチド、ペプチドおよびタンパク質の分離に使用す
ることが特に好ましい。従って、この領域において、難
しい分離の問題が、本発明のキャピラリーによって容易
に解決される。本発明のキャピラリーは、繰り返される
分離に使用できる。なぜなら、非常に高い再現性が達成
されるからであり、数百回の種々のタンパク質の分離
が、移動時間およびピーク幅または対象性の変動なく、
１０のｐＨで行える。

【００３２】従来技術において知られているように大部
分の従来のキャピラリーは、極度なｐＨ範囲、即ち強い
酸性のｐＨ範囲においてのみ使用可能であるが、本発明
によって、高い再現性を有する状態で、５．５〜７のｐ
Ｈ範囲で、数百回で繰り返されるタンパク質の分離を行
うことができる。

【００３３】本発明に従って得られるキャピラリーは、
水不溶性ＰＶＡで永久的に被覆されており、特定の条件
付け処理の必要なく、分析的分離のために使用できる。
一連のタンパク質分離は、５〜７の平均ｐＨ値で、例え
ば、５７ｃｍの有効長さを有するキャピラリーを用いて
行え、高い効率（１ｍ当たり１,２００,０００までの理
論段数）、ならびに使用する試験タンパク質の移動時間
の良好な再現性が得られる。緩衝液にはＰＶＡは添加さ
れない。

【００３４】これらキャピラリーは、ＦＳ表面の改質の
以前に既知の方法に従って調製したものに固有である欠
点を示さない。 ・繰り返される分離において使用できる。 ・幾分高いｐＨ値においてさえ非常に良好な効率および
優れたピーク対称性を有する状態で、タンパク質分離が
行える。 ・移動挙動の良好な安定性および再現性を示す。 ・熱的に固定化されたＰＶＡ被覆は、ＣＥの条件下にお
いて安定であることがわかった。

【００３５】表面へのＰＶＡの強い吸着、水素ブリッジ
を介したポリマー鎖間の強い相互作用、およびポリビニ
ルアルコール分子の高い化学的安定性は、キャピラリー
の安定性の理由であると考えられる。ＰＶＡ被覆で永久
的に不活性化されたそのようなキャピラリーの効率は、
キラル化合物の分離の例によっても示される。

【００３６】

【発明の好ましい態様】以下に実施例を示し、本発明を
具体的に説明する。

【００３７】実施例１ 市販のキャピラリーを被覆するため、長さ約２.５ｍの
一本の、内径５０〜７５μｍの未処理溶融シリカキャピ
ラリー（製造元：マイクロクォーツ(MicroQuartz)、ミ
ュンヘン(Muenchen))を、窒素を約１ＭＰａ圧で供給し
ながら、約５重量％ＰＶＡ水溶液（ＰＶＡ、ＭＷ：５０
０００、加水分解度：９９＋％、アルドリッチ(Aldric
h)、シュタインハイム(Steinheim)、ドイツ国）でフラ
ッシュ(flush)した。次に、該ＰＶＡ溶液を充填してあ
るキャピラリーの水分を、０.０５ＭＰａの低圧で徐々
に除去した。その後、キャピラリー中に窒素を低圧
（０.１ＭＰａ）で流しながら、該キャピラリーを油浴
中、１３０〜１８０℃の温度で５時間熱処理した。

【００３８】上記の手順に従って調製された、有効長さ
５７ｃｍ、全長７０ｃｍ、内径５０μｍのキャピラリー
内で、チトクロムＣ、リゾチーム、トリプシン、トリプ
シノーゲンおよびα−キモトリプシノーゲンを含んでな
る混合物（各成分は、Ｎａホスフェート５０ｍＭを含む
ｐＨ値３.０および３.５の緩衝液中に０.２ｍｇ／ｍｌ
の濃度である。）の分離を４２９Ｖ／ｃｍの電場強度で
行った。分離はｐＨ３.０（図１）および３.５（図２）
の緩衝液により行った。半減期幅から計算した効率は、
ｐＨ３.０のリゾチームにおける１２０００００ｍ^-1か
らα−キモトリプシノーゲンにおける７１００００ｍ^-1
までであった。

【００３９】 試料： １：チトクロムＣ、２：リゾチーム、３：ト
リプシン、４：トリプシノーゲン、５：α−キモトリプ
シノーゲンＡ；各０.２ｍｇ／ｍｌ。 分離条件：３０ｋＶ（４２９Ｖ／ｃｍ）(Ａ)２８μＡ、
(Ｂ)２９μＡ；２０℃。 緩衝液： ５０ｍＭのＮａホスフェート；(Ａ)ｐＨ３.
０、(Ｂ)ｐＨ３.５。 供給： (Ａ)１０ｋＶ、４秒、(Ｂ)１０ｋＶ、５秒。 検出： ＵＶ２１４ｎｍ。

【００４０】実施例２ 実施例１と同じ方法で、リゾチーム、チトクロムＣ、ト
リプシン、リボヌクレアーゼＡ、トリプシノーゲンおよ
びα−キモトリプシノーゲンの分離を同じキャピラリー
を使用して行った。図３に、リゾチーム、チトクロム
Ｃ、トリプシン、リボヌクレアーゼＡ、トリプシノーゲ
ンおよびα−キモトリプシノーゲン（ｐＨ値３.５にお
ける上述の緩衝液中に０.１５〜０.１８ｍｇ／ｍｌの濃
度）の分離を、熱処理したＰＶＡ被覆キャピラリーを使
用してｐＨ５.５０で行った（Ｎａホスフェート５０ｍ
Ｍ、４２９Ｖ／ｍ）結果を示す。タンパク質の移動度が
このｐＨ値において低下することおよび電気浸透流が低
いことにより、移動時間は約２倍の値に増大している。
この分離における効率は、リゾチームについての１１０
００００ｍ^-1からα−キモトリプシノーゲンについての
６０００００ｍ^-1までの範囲である。ＰＶＡ未処理のキ
ャピラリー表面の電荷密度がｐＨ５.５において増大す
ることにより、タンパク質の強い吸着を生じる。ピーク
の対称性から、本発明の方法によって調製したキャピラ
リー表面の吸着性が大きく低下していることがわかる。

【００４１】実施例３ 実施例１に記載したキャピラリーを使用して、実施例１
と同じ方法で酸性タンパク質の分離を行った。図４か
ら、上述の緩衝液に溶解させた、通常、強く吸着される
タンパク質である酸性タンパク質β−ラクトグロブリン
ＡおよびＢおよびα−ラクトアルブミンが、ｐＨ３にお
いて良好に分離することが明らかである。

【００４２】 試料： １：β−ラクトグロブリンＢ、２：β−ラ
クトグロブリンＡ、３：α−ラクトアルブミン；各０.
３ｍｇ／ｍｌ。 分離条件： ３０ｋＶ（４２９Ｖ／ｃｍ）、２３μＡ；
２０℃。 緩衝液： Ｎａホスフェート５０ｍＭ；ｐＨ３.０。 供給： １０ｋＶ、５秒。 検出： ＵＶ２１４ｎｍ。

【００４３】実施例４ 実施例１と同じ方法で、トカイニド(tocainido)誘導体
を試料として使用し、各キャピラリーの効率を示すこと
ができる。図５から、ＰＶＡ被覆キャピラリーにおける
小分析対象物も、未処理キャピラリーと比較して表面吸
着性の明らかな低下を示すことがわかる。強い塩基性活
性物質であるトカイニド誘導体のピークの効率は、ＰＶ
Ａ被覆によって、１ｍあたりの理論段数で８６,０００
から１８０,０００に向上する。電気浸透流の減少によ
っても、処理済みキャピラリー中における化合物の移動
時間が増加する。

【００４４】 試料： 水中０.０２ｍｇ／ｍｌ。 キャピラリー：有効長さ４３.２ｃｍ、全長５６.７ｃ
ｍ。 Ａ：５０μｍ(内径)；Ｂ：５０μｍ(内径)。 被覆： Ａ：なし；Ｂ：熱的に固定化したポリビ
ニルアルコール、 ＭＷ：５００００、９９％加水分解（アルドリッチ）。 電圧： ３５ｋＶ（６１７Ｖ／ｃｍ）；電流２７
μＡ。 緩衝液： Ｎａホスフェート４０ｍＭ；ｐＨ３.
０。 供給： 水力学的； ΔＰ：−８５ミリバール(mb
ar)、２秒。 温度： ２０℃。 検出： ＵＶ２１０ｎｍ。

【００４５】実施例５ γ−シクロデキストリンを緩衝液に添加して、実施例４
と同じ方法で、トカイニド誘導体の分離を行った。図６
に、緩衝液中にキラル選択剤としてγ−シクロデキスト
リンを添加したことにより、対掌体に分離できたキラル
トカイニドの分離を示す。ここに示す化合物について
は、改質キャピラリーによってのみ充分な分離を行うこ
とができる。ＰＶＡ被覆によれば、キャピラリー表面に
おける吸着相互作用が低下することにより、分離能が向
上する。更に、浸透流が減少することにより対掌体対の
移動時間が長くなる。両効果の共同作用により、分離は
ベースラインでの分離まで向上する。

【００４６】 試料： 水中０.０２ｍｇ／ｍｌ。 キャピラリー：有効長さ４３.２ｃｍ、全長５６.７ｃ
ｍ。 Ａ：５０μｍ(内径)；Ｂ：５０μｍ(内径)。 被覆： Ａ：なし； Ｂ：熱的に固定化したポリ
ビニルアルコール、 ＭＷ：５００００、９９％加水分解（アルドリッチ）。 電圧： Ａ：３５ｋＶ；電流４９μＡ； Ｂ：３５ｋＶ；電流２７μＡ。 緩衝液： Ｎａホスフェート４０ｍＭ；ｐＨ３.
０；５０ｍＭ γ−ＣＤ。 供給： 水力学的； ΔＰ：−８５ミリバール、
２秒。 温度： ２０℃。 検出： ＵＶ２１０ｎｍ。

【００４７】実施例６ 実施例４と同じ方法により、４対のトカイニド対掌体の
分離を行った。図７に、対掌体対のキラル分離を示す。
同じ条件において、ＰＶＡによる処理を行っていないキ
ャピラリー中では、４つの誘導体を良好に分離すること
が不可能であった。

【００４８】 試料： 水中０.０２ｍｇ／ｍｌ。 キャピラリー：有効長さ４３.２ｃｍ、全長５６.７ｃ
ｍ。内径５０μｍ。 被覆： 熱的に固定化したポリビニルアルコー
ル、重量平均分子量５００００、９９％加水分解（アル
ドリッチ）。 電圧： ３５ｋＶ（６１７Ｖ／ｃｍ）；電流２７
μＡ。 緩衝液： Ｎａホスフェート４０ｍＭ；ｐＨ３.
０；５０ｍＭ γ−ＣＤ。 供給： 水力学的； ΔＰ：−８５ミリバール、
２秒。 温度： ２０℃。 検出： ＵＶ２１０ｎｍ。

【図面の簡単な説明】

【図１】 実施例１において分離をｐＨ３.０で行った
結果を示すグラフである。

【図２】 実施例１において分離をｐＨ３.５で行った
結果を示すグラフである。

【図３】 実施例２における分離を行った結果を示すグ
ラフである。

【図４】 実施例３における分離を行った結果を示すグ
ラフである。

【図５】 実施例４における分離を行った結果を示すグ
ラフである。

【図６】 実施例５における分離を行った結果を示すグ
ラフである。

【図７】 実施例６における分離を行った結果を示すグ
ラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ゲルハルト・ショーンブルク ドイツ連邦共和国デー−45470ミュールハ イム／ルール、カイザー−ビルヘルム−プ ラッツ１番 シュトゥディエンゲゼルシャ フト・コーレ・ミット・ベシュレンクテ ル・ハフツング内 (72)発明者 マルティン・ギルゲス ドイツ連邦共和国デー−45470ミュールハ イム／ルール、カイザー−ビルヘルム−プ ラッツ１番 シュトゥディエンゲゼルシャ フト・コーレ・ミット・ベシュレンクテ ル・ハフツング内

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 キャピラリーゾーン電気泳動およびキャ
   ピラリーゲル電気泳動用のキャピラリーの表面を不活性
   化する方法であって、 初めには水溶性である極性ポリマーを内表面に塗布し、
   次いで水不溶性ポリマーの形成によってポリマーを熱的
   に固定化することを特徴とする方法。
2. 【請求項２】 加水分解四塩化ケイ素またはシリカゲル
   からの溶融二酸化ケイ素（溶融シリカ）からできている
   キャピラリーを使用する請求項１記載の方法。
3. 【請求項３】 水溶性ポリマーとしてポリビニルアルコ
   ールを使用する請求項１または２に記載の方法。
4. 【請求項４】 ０.１〜２０重量％、特に０.５〜１０重
   量％の量でポリビニルアルコールを含有する水溶液を使
   用する請求項３記載の方法。
5. 【請求項５】 ポリマーの熱的固定化の前に高圧を使用
   することによってキャピラリーをドレインする請求項１
   〜４のいずれかに記載の方法。
6. 【請求項６】 要すれば不活性ガスを使用して、選択さ
   れた圧力条件下において、水の沸点よりも高い温度でキ
   ャピラリーを加熱することによって熱的固定化を行う請
   求項１〜５のいずれかに記載の方法。
7. 【請求項７】 １００〜２５０℃、特に１３０〜１８０
   ℃の温度で、０〜２４時間、特に１〜１２時間にわたっ
   て、常圧またはわずかに減圧でキャピラリーを加熱する
   請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
8. 【請求項８】 請求項１〜７のいずれかに記載の方法に
   よって得られるキャピラリーゾーン電気泳動またはキャ
   ピラリーゲル電気泳動用のキャピラリー。
9. 【請求項９】 請求項８記載のオリゴヌクレオチド、ペ
   プチドおよびタンパク質の分離用のキャピラリー。
10. 【請求項１０】 一連の分離のために使用する請求項９
    記載のキャピラリー。
11. 【請求項１１】 ３〜７のｐＨ範囲で一連のタンパク質
    分離を行う請求項９または１０に記載のキャピラリー。