WO2008104681A2 - Milieu de détection et/ou d'identification de bactéries - Google Patents

Milieu de détection et/ou d'identification de bactéries Download PDF

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WO2008104681A2
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Sylvain Orenga
Michel Peyret
Céline ROGER-DALBERT
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bioMérieux
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    • G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/24—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
    • G01N2333/245—Escherichia (G)

Definitions

  • the field of the invention is that of microbiological biochemical analysis, and in particular the detection and identification of bacteria.
  • Pathogenic bacteria including Gram-negative bacilli, such as enterobacteria, are responsible for many diseases, epidemics, etc.
  • the species E. coli ⁇ Escherichia coli) is the most represented aerobic species in the digestive tract. . However, their presence in water is a witness of faecal contamination, and some strains are pathogenic and responsible for peritoneal, biliary, appendicular or genital suppuration.
  • E. coli Early and specific detection of E. coli makes it possible to propose a suitable solution, in terms of treatment, of decontamination ...
  • This detection can be based notably on the use of detection media comprising particular substrates, specific for a metabolic activity, called target metabolic activity, such as that an enzymatic activity of the bacterium that one wishes to detect: by the choice of substrates, depending on whether there is reaction or not, it is possible to characterize the nature of a microorganism.
  • the CPS ID 3 medium bioMerieux
  • the invention proposes to solve the problems of the state of the art by presenting a new medium particularly suitable for identifying E. coli bacteria in a fast, inexpensive and easy to implement manner.
  • the inventors have shown that a particular combination of enzyme substrates, at appropriate concentrations, allows rapid and easy detection of E. coli. coli, in particular from a urinary sample.
  • the following definitions are given to facilitate the understanding of the invention.
  • detection medium is meant a medium comprising all the elements necessary for the survival and / or growth of microorganisms.
  • This detection medium can either serve only as a detection medium, or a culture and detection medium.
  • the culture of the microorganisms is carried out before seeding, and in the second case, the detection medium also constitutes the culture medium.
  • the culture medium according to the invention may contain any other additives, for example: peptones or tissue extracts, one or more growth factors, carbohydrates, one or more selective agents, buffers, one or more gelling agents ...
  • This culture medium can be in the form of a liquid, a ready-to-use gel, that is to say ready for seeding in a tube, a bottle, or on a petri dish.
  • the detection may be carried out in a liquid medium, strip or other solid support
  • substrate any molecule capable of generating directly or indirectly a detectable signal due to an enzymatic or metabolic activity of the microorganism.
  • the substrate may in particular be a metabolic substrate, such as a source of carbon or nitrogen, coupled to an indicator producing a coloration in the presence of one of the products of the metabolism.
  • a metabolic substrate such as a source of carbon or nitrogen
  • the substrate can also be an enzymatic substrate, that is to say a substrate that can be hydrolyzed by an enzyme into a product allowing the direct or indirect detection of a microorganism.
  • This substrate may in particular comprise a first specific part of the enzymatic activity to be revealed and a second part serving as a marker, hereinafter referred to as a marker part.
  • This marker part can be chromogenic, fluorogenic, luminescent, etc.
  • chromogenic substrate well suited to solid supports (filter, agar, electrophoresis gel), mention may be made in particular of substrates based on indoxyl and its derivatives, and substrates based on hydroxyquinoline or esculetin and their derivatives, which allow the detection of osidase and esterase activities. Mention may also be made of nitrophenol and nitroaniline substrates and derivatives, making it possible to detect osidase and esterase activities in the case of substrates based on nitrophenol, and peptidase activities in the case of substrates based on nitroaniline.
  • substrates based on naphthol and naphthylamine and their derivatives which make it possible to detect the osidase and esterase activities via naphthol, and the peptidase activities via naphthylamine.
  • This substrate may in particular, but in a nonlimiting manner, allow the detection of an enzymatic activity such as the activity of an osidase, peptidase, esterase, etc.
  • the enzyme substrate may also be a natural substrate, the product of which hydrolysis is detected directly or indirectly.
  • Tryptophan for detecting tryptophanase or desaminase activity
  • a cyclic amino acid for detecting a desaminase activity
  • Phosphatidyl Inositol for detecting phospholipase activity
  • the substrate is preferably chosen from substrates based on Indoxyl (3-Indoxyl, 5-Bromo-3-indoxyl, 5-Iodo-3-indoxyl, 4-Chloro-3-indoxyl, 5-Bromo- 4-chloro-3-indoxyl, 5-bromo-6-chloro-3-indoxyl, 6-bromo-3-indoxyl, 6-chloro-3-indoxyl, 6-fluoro-3-indoxyl, 5-bromo-4- chloro-N-methyl-3-indoxyl, N-methyl-3-indoxyl, ...); umbelliferone (4-Methylumbelliferone, Cyclohexenoesculetin, ...); Alizarin; p-Naphtolbenzine; Nitrophenol (ortho-Nitrophenol, para-Nitrophenol, ...); hydroxyquinoline; Cathecol (Cathecol, Dihydroxyflavone, Hydroxyflavone,
  • the substrates used for the detection of a beta-glucuronidase activity may especially be 4-methylumbelliferyl-beta-glucuronide, 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-glucuronide, 5-Bromo 6-chloro-3-indolyl-beta-glucuronide, 6-chloro-3-indolyl-beta-glucuronide, Alizarin-beta-glucuronide,
  • the substrates used for the detection of a beta-galactosidase activity may especially be 4-methylumbelliferyl-beta-galactoside, 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-galactoside or 5-Bromo-6-chloro.
  • the substrates used for the detection of a beta-glucosidase activity may especially be 4-methylumbelliferyl-beta-Glucoside, 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-glucoside, 5-Bromo-6-chloro 3-indolyl-beta-glucoside, 6-chloro-3-indolyl-beta-glucoside, Alizarin-beta-glucoside, Cyclohexenosculetin-beta-Glucoside,
  • inducer is meant a compound inducing an increase in the expression of the targeted metabolic activity, any experimental condition being equal, the metabolic activity is greater when the inducer is at an appropriate concentration than when it is absent or at an inappropriate concentration.
  • a concentration of between 100 ng / l and 10 g / l, preferably between 10 mg / l and 3 g / l is particularly suitable for the present invention.
  • a glucuronide preferably chosen from Glucuronate, methyl-beta-glucuronide.
  • a galactoside preferentially chosen from Lactose, Isopropyl-beta-thio-galactoside
  • beta-glucosidase a carbohydrate consisting of a carbohydrate bound in the ⁇ position to glucose or carbohydrate with a ⁇ -glucoside subunit, in particular cellobiose, cellulose, starch, cellotriosis, trehalose. Mention may also be made of Methyl- ⁇ -glucoside, Isopropyl- ⁇ -thio-glucoside, Indoxyl- ⁇ -glucoside or Methyl- ⁇ -thio-glucoside.
  • inhibitor is meant a compound inducing a decrease in the expression of the targeted metabolic activity, any experimental condition being equal, the metabolic activity is lower when the inducer is at an appropriate concentration than when it is absent or at an inappropriate concentration.
  • a concentration of between 100 ng / l and 30 g / l, preferably between 1 mg / l and 3 g / l is particularly suitable for the present invention.
  • biological sample is meant a clinical sample, taken from a sample of biological fluid, or a food sample, derived from any type of food or an environmental sample such as a sample of surface, water, air, ....
  • This sample can be liquid or solid and can be cited in a non-limiting manner, a clinical sample blood, plasma, urine, faeces, nose samples, throats, skin, wounds, cerebrospinal fluid, a food sample of water, beverages such as milk, fruits; yogurt, meat, eggs, vegetables, mayonnaise, cheese; fish ..., a food sample from a feed intended for animals, such as in particular a sample from animal meal.
  • the invention relates to a method for detecting and / or identifying E. coli in a biological sample, preferably urinary according to which a) the sample is seeded, preferentially urinary likely to contain E. coli on a detection medium comprising
  • a first substrate selected from a substrate of beta-glucuronidase, beta-galactosidase, alpha-galactosidase, a Lactose acidifying enzyme, beta-ribosidase, phosphatase, L-Alanine aminopeptidase, L-Leucine aminopeptidase,
  • a second substrate different from said first substrate, chosen from a substrate of beta-glucuronidase, beta-galactosidase, alpha-galactosidase, a Lactose acidification enzyme, beta-ribosidase, phosphatase, L-Alanine aminopeptidase, L Leucine aminopeptidase for obtaining colonies of bacteria b) colonies reacting with the first substrate and / or the second substrate are identified as E. coli colonies.
  • said first and second substrates are at a suitable concentration.
  • the seeding of the microorganisms can be carried out by all the seeding techniques known to those skilled in the art.
  • An incubation step can be carried out at a temperature for which the enzymatic activity that one wishes to detect is optimal, that the person skilled in the art can easily choose according to the enzymatic activity to be detected.
  • the detection / identification can be carried out by visual examination, colorimetry or fluorimetry.
  • said first substrate is at a concentration of between 20 and 1000 mg / l and said second substrate is at a concentration of between 20 mg / and 30 g / l.
  • said first substrate is a beta-glucuronidase substrate and the second substrate is a beta-galactosidase substrate.
  • the substrate of a beta-glucuronidase activity is chosen from 4-methylumbelliferyl-beta-glucuronide, 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-glucuronide, 5-Bromo-6-chloro-3 -indolyl-beta-glucuronide, 6-chloro-3-indolyl-beta-glucuronide, Alizarin-beta-glucuronide, Cyclohexenoesculetin-beta-glucuronide or their salts, at concentrations preferably comprised between 20 and 1000 mg / l .
  • the beta-galactosidase substrate is at a low concentration.
  • the substrate of a beta-galactosidase activity is chosen from 4-methylumbelliferyl-beta-galactoside, 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-galactoside, and 5-Bromo-6-chloro-3 -indolyl-beta-galactoside, 6-chloro-3-indolyl-beta-galactoside, Alizarin-beta-galactoside, Cyclohexenoesculetin-beta-galactoside or their salts, at a concentration preferably between 10 and 1000 mg / l, preferably between 20 and 500 mg / l.
  • the detection medium further comprises a third substrate, preferably chosen from a beta-glucosidase, beta-lactosidase, N-acetyl-hexosaminidase, esterase, sulfatase and betaxylosidase substrate.
  • a third substrate preferably chosen from a beta-glucosidase, beta-lactosidase, N-acetyl-hexosaminidase, esterase, sulfatase and betaxylosidase substrate.
  • phospholipase alpha-mannosidase, beta-mannosidase, beta-cellobiosidase, alpha-glucosidase, tryptophanase, deaminase, oxidase, pigment synthesis, peptidases (beta-Alanine-aminopeptidase, elastase, ).
  • said third substrate is a beta glucosidase substrate.
  • the substrate of a beta- glucosidase activity is chosen from 4-methylumbelliferyl-beta-glucoside, 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-glucoside and 5-bromo-6-chloro-3.
  • the detection medium further comprises an inductor.
  • the inducer is at a concentration of between 100 ng / l and 10 g / l.
  • the inductor is preferably:
  • a glucuronide preferably chosen from Glucuronate, methyl-beta-glucuronide.
  • a galactoside preferentially chosen from Lactose, Isopropyl-beta-thio-galactoside
  • beta-glucosidase a carbohydrate consisting of a carbohydrate bound in the ⁇ position to glucose or carbohydrate with a ⁇ -glucoside subunit, in particular cellobiose, cellulose, starch, cellotriosis, trehalose. Mention may also be made of Methyl- ⁇ -glucoside, Isopropyl- ⁇ -thio-glucoside, Indoxyl- ⁇ -glucoside or Methyl- ⁇ -thio-glucoside.
  • the inducer is cellobiose, at a concentration preferably between 100ng / l and 10g / l.
  • the detection medium further comprises an inhibitor.
  • the inhibitor is at a concentration of between 100 ng and 30 g / l.
  • the inhibitor is preferentially:
  • beta-galactosidase 2-Deoxy-galactose, Cellobiose, D-Galactose, D-Glucose
  • CPS ID 3 bioMerieux
  • 3-indolyl- ⁇ -glucuronide 0-0.1-0.15 and 0.20 g / l
  • 5-Bromo-6-chloro-3-indolyl- ⁇ -galactoside 0-0.0.025-0.05 and 0, lg / l
  • These media also comprise 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl- ⁇ -glucoside at 50 mg / l. They are distributed at a rate of 20ml per petri dish.
  • CoIi ID medium (bioMérieux) which associates a substrate of ⁇ -glucuronidase (6-chloro-3-indolyl- ⁇ -glucuronide) and a substrate of ⁇ -galactosidase (5-Bromo-3-indolyl- ⁇ -galactoside), intended the detection and enumeration of E. coli and coliforms in food samples is tested in parallel.
  • Microorganisms frequently isolated from urinary samples and from the plaintiff's collection are inoculated on these media by semi-quantitative isolation of 10 ⁇ l of a 0.5 McFarland suspension diluted to 20 e .
  • the dishes are incubated at 37 ° C. for 20 hours, and the colonies formed are examined visually. The coloration of these colonies is noted.
  • Table 1 The results are shown in Table 1 below:
  • the test below can be implemented to define the concentration of said first and second substrates according to the invention, which is variable depending on the substrates employed and more generally on the formulation of the reaction medium. To aid its understanding, this test is carried out below in the case of a combination ⁇ -glucuronidase, and ⁇ -galactosidase, from a kit of strains of microorganisms, including E. coli strains. coli, including strains that do not express or weakly or late positive activity and possibly other microorganisms. This test can be implemented for other types of substrates.
  • Two reaction media comprising either a suitable substrate concentration of ⁇ -glucuronidase or no ⁇ -glucuronidase substrate are used to prepare a range of ⁇ -galactosidase substrate including a zero concentration, at least one concentration to obtain a positive reaction with the strains of E. coli expressing ⁇ -galactosidase, as well as intermediate concentrations.
  • Each of the media is aliquoted so that each strain of microorganism can be seeded in pure culture on each of the media.
  • the media are examined so as to select the medium comprising a combination of ⁇ -galactosidase substrates and ⁇ -glucuronidase to reveal the largest number of E. coli strains coli while differentiating them from the larger number of strains of other microorganisms. It may be necessary to repeat the experiment by adjusting the concentrations in each of the substrates as well as the strain kit. It may be advantageous that the reaction media further comprise inducers and / or inhibitors of ⁇ -galactosidase and / or ⁇ -glucuronidase.

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Abstract

L'invention concerne un procédé de détection et/ou d'identification d'E. coli dans un échantillon urinaire selon lequel a) on ensemence l'échantillon urinaire susceptible de contenir E. coli sur un milieu de détection comprenant un premier substrat choisi parmi un substrat de beta-glucuronidase, beta-galactosidase, alpha-galactosidase, d'une enzyme d'acidification du Lactose, beta-ribosidase, phosphatase, L-Alanine-aminopeptidase, L-Leucine-aminopeptidase, un deuxième substrat, différent dudit premier substrat, choisi parmi un substrat de beta-glucuronidase, beta-galactosidase, alpha-galactosidase, d'une enzyme d'acidification du Lactose, beta-ribosidase, phosphatase, L-Alanine-aminopeptidase, L-Leucine-aminopeptidase pour obtenir des colonies de bactéries; b) on identifie les colonies réagissant avec le premier substrat et/ou le deuxième substrat comme étant des colonies d'E. coli.

Description

Milieu de détection et/ou d'identification de bactéries
Le domaine de l'invention est celui de l'analyse microbiologique par voie biochimique, et en particulier de la détection et de l'identification de bactéries.
Les bactéries pathogènes, et notamment les bacilles à Gram négatif, tels que les entérobactéries sont responsables chaque année de nombreuses maladies, épidémies... L'espèce E. coli {Escherichia colï) est l'espèce aérobie la plus représentée dans le tube digestif. Toutefois, leur présence dans l'eau est un témoin de contamination fécale, et certaines souches sont pathogènes et responsables de suppurations péritonéales, biliaires, appendiculaires ou génitales.
Une détection précoce et spécifique d'E. coli permet de proposer une solution adaptée, en terme de traitement, de décontamination... Cette détection peut être basée notamment sur l'utilisation de milieux de détection comprenant des substrats particuliers, spécifiques d'une activité métabolique, dite activité métabolique cible, telle qu'une activité enzymatique, de la bactérie que l'on souhaite détecter : par le choix des substrats, selon qu'il y a réaction ou non, il est possible de caractériser la nature d'un microorganisme. Le milieu CPS ID 3 (bioMerieux) utilise un substrat de β-glucuronidase associé à un substrat de β-glucosidase et éventuellement à la détection de la tryptophanase pour la détection des souches de l'espèce Escherichia coli. Toutefois, si ce milieu présente une excellente spécificité, l'utilisation d'un substrat de β-glucuronidase pour la détection des E. coli présentent une sensibilité imparfaite du fait de l'existence d'une faible proportion de souches d'E. coli (5-10%) n'exprimant pas cette activité. De plus, certaines souches de Citrobacter peuvent également produire des colonies β-glucuronidase positives, de la même couleur que celles d'E. coli.
L'invention se propose de résoudre les problèmes de l'état de la technique en présentant un nouveau milieu particulièrement adapté pour identifier les bactéries E. coli d'une manière rapide, peu coûteuse et aisée à mettre en œuvre. D'une manière surprenante, les inventeurs ont montré qu'une combinaison particulière de substrats enzymatiques, à des concentrations adaptées permettait une détection rapide et aisée d'E. coli, en particulier à partir d'un échantillon urinaire. Avant d'aller plus avant dans l'exposé de l'invention, les définitions suivantes sont données afin de faciliter la compréhension de l'invention.
Par milieu de détection, on entend un milieu comprenant tous les éléments nécessaires à la survie et/ou à la croissance de microorganismes. Ce milieu de détection peut soit servir uniquement de milieu de détection, soit de milieu de culture et de détection. Dans le premier cas, la culture des microorganismes est effectuée avant ensemencement et, dans le deuxième cas, le milieu de détection constitue également le milieu de culture. Le milieu de culture selon l'invention peut contenir d'éventuels autres additifs comme par exemple : des peptones ou extraits de tissus, un ou plusieurs facteurs de croissance, des hydrates de carbone, un ou plusieurs agents sélectifs, des tampons, un ou plusieurs gélifiants... Ce milieu de culture peut se présenter sous forme de liquide, de gel prêt à l'emploi, c'est à dire prêt à l'ensemencement en tube, flacon, ou sur boite de Pétri.
Au sens de la présente invention, la détection peut être réalisée en milieu liquide, bandelette ou autre support solide
Par substrat, on entend toute molécule susceptible d'engendrer directement ou indirectement un signal détectable dû à une activité enzymatique ou métabolique du microorganisme.
Le substrat peut être notamment un substrat métabolique, telle qu'une source de carbone ou d'azote, couplée à un indicateur produisant une coloration en présence de l'un des produits du métabolisme.
Le substrat peut être également un substrat enzymatique, c'est à dire un substrat pouvant être hydrolyse par une enzyme en un produit permettant la détection, directe ou indirecte d'un microorganisme. Ce substrat peut notamment comprendre une première partie spécifique de l'activité enzymatique à révéler et une seconde partie faisant office de marqueur, ci-après appelée partie marqueur. Cette partie marqueur peut être chromogène, fluorogène, luminescente... Comme substrat chromogène, bien adapté aux supports solides (filtre, gélose, gel d'électrophorèse), on peut citer notamment les substrats à base d'indoxyl et ses dérivés, et les substrats à base d'hydroxyquinoline ou d'esculétine et leurs dérivés, qui permettent la détection d'activités osidase et estérase. On peut citer également les substrats à base de nitrophénol et nitroaniline et dérivés, permettant de détecter les activités osidases et estérases dans le cas de substrats à base de nitrophénol, et des activités peptidases dans le cas de substrats à base de la nitroaniline. On peut citer enfin les substrats à base de naphtol et naphtylamine et leurs dérivés, qui permettent de détecter les activités osidases et estérases par l'intermédiaire du naphtol, et les activités peptidases par l'intermédiaire de la naphtylamine. Ce substrat peut permettre notamment, mais d'une façon non limitative, la détection d'une activité enzymatique telle que l'activité d'une osidase, peptidase, estérase... Le substrat enzymatique peut également être un substrat naturel dont le produit d'hydrolyse est détecté directement ou indirectement. Comme substrat naturel, on peut notamment citer le Tryptophane pour détecter une activité tryptophanase ou desaminase, un acide aminé cyclique (Tryptophane, Phénylalanine, Histidine, Tyrosine) pour détecter une activité desaminase, le Phosphatidyl Inositol pour détecter une activité phospholipase, ... Selon la présente invention, le substrat est préférentiellement choisi parmi les substrats à base d'Indoxyl (3-Indoxyl, 5-Bromo-3-indoxyl, 5-Iodo-3-indoxyl, 4-Chloro-3-indoxyl, 5- Bromo-4-chloro-3-indoxyl, 5-Bromo-6-chloro-3-indoxyl, 6-Bromo-3-indoxyl, 6-Chloro- 3-indoxyl, 6-Fluoro-3-indoxyl, 5-Bromo-4-chloro-N-méthyl-3-indoxyl, N-Méthyl-3- indoxyl, ...); d'umbelliférone (4-Méthylumbelliférone, Cyclohexenoesculétine, ...); d'Alizarine; de p-Naphtolbenzéine; de Nitrophénol (ortho-Nitrophénol, para-Nitrophénol, ...); d'Hydroxyquinoline; de Cathécol (Cathécol, Dihydroxyflavone, Hydroxyflavone, ...); de Résorufine; de Chlorophénol Red; de Fluorescéine; d'Aminophénol (para- Aminophénol, Dichloro-aminophénol, ...); de Naphtol (alpha-Naphtol, 2-Naphtol, Naphtol- ASBI, ...) ; d'Aminocoumarine (7-Amino-4-méthyl-coumarine, ...); de Naphtylamide; d'Acridine (Amino-phényl-acridine...); d'Amino-phénoxazine (Amino- benzophénoxazinone, Amino-pentyl-resorufine, ...).
A titre indicatif, les substrats utilisés pour la détection d'une activité beta-glucuronidase peuvent notamment être le 4-Méthylumbelliféryl-beta-glucuronide, le 5-Bromo-4-chloro- 3-indolyl-beta-glucuronide, le 5-Bromo-6-chloro-3-indolyl-beta-glucuronide, le 6-Chloro-3-indolyl-beta-glucuronide, l'Alizarine-beta-glucuronide, le
Cyclohexenoesculetine-beta-glucuronide ou leurs sels.
Les substrats utilisés pour la détection d'une activité beta-galactosidase peuvent notamment être le 4-Méthylumbelliféryl-beta-galactoside, le 5-Bromo-4-chloro- 3-indolyl-beta-galactoside, le 5-Bromo-6-chloro-3-indolyl-beta-galactoside, le 6-Chloro- 3-indolyl-beta-galactoside, l'Alizarine-beta-galactoside, le Cyclohexenoesculetine-beta- galactoside ou leurs sels.
Les substrats utilisés pour la détection d'une activité beta-glucosidase peuvent notamment être le 4-Méthylumbelliféryl-beta-Glucoside, le 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl- beta-Glucoside, le 5-Bromo-6-chloro-3-indolyl-beta-Glucoside, le 6-Chloro-3-indolyl- beta-Glucoside, l'Alizarine-beta-Glucoside, le Cyclohexenoesculetine-beta-Glucoside, le
Nitrophényl-beta-glucoside, le Dichloroaminophényl-glucoside ou leurs sels.
Par inducteur, on entend un composé induisant une augmentation de l'expression de l'activité métabolique ciblée, toute condition expérimentale étant égale par ailleurs, l'activité métabolique est plus forte lorsque l'inducteur est à une concentration appropriée que lorsqu'il est absent ou à une concentration inadaptée.
Sans être limitatif, une concentration comprise entre 100ng/l et 10g/l, préférentiellement comprise entre 10mg/l et 3g/l est particulièrement adaptée a la présente invention.
On peut citer notamment :
• pour la beta-glucuronidase, un glucuronide, préférentiellement choisi parmi le Glucuronate, le Méthyl-beta- glucuronide.
• pour la beta-galactosidase, un galactoside, préférentiellement choisi parmi le Lactose, l'Isopropyl-beta-thio-galactoside
• pour la beta-glucosidase, un hydrate de carbone constitué d'un hydrate de carbone lié en position β au glucose ou hydrate de carbone avec une sous-unité β-glucoside, en particulier le cellobiose, la cellulose, l'amidon, le cellotriose, le trehalose. On peut citer également le Méthyl-β-glucoside, l'Isopropyl-β-thio- glucoside, l'Indoxyl-β-glucoside ou le Méthyl-β-thio-glucoside
Par inhibiteur, on entend un composé induisant une diminution de l'expression de l'activité métabolique ciblée, toute condition expérimentale étant égale par ailleurs, l'activité métabolique est plus faible lorsque l'inducteur est à une concentration appropriée que lorsqu'il est absent ou à une concentration inadaptée.
Sans être limitatif, une concentration comprise entre 100ng/l et 30g/l, préférentiellement comprise entre lmg/1 et 3g/l est particulièrement adaptée à la présente invention.
On peut citer notamment
• pour la beta-glucuronidase : D-Glucose, D-Glucaric acid 1,4-lactone • pour beta-galactosidase : 2-Deoxy-galactose, Cellobiose, D-Galactose, D-Glucose Par échantillon biologique, on entend un échantillon clinique, issu d'un prélèvement de liquide biologique, ou un échantillon alimentaire, issu de tout type d'aliment ou un échantillon d'environnement tel qu'un prélèvement de surface, d'eau, d'air, .... Cet échantillon peut être ainsi liquide ou solide et on peut citer d'une manière non limitative, un échantillon clinique de sang, de plasma, d'urines, de fécès, de prélèvements de nez, de gorges, de peaux, de plaies, de liquide céphalo-rachidien, un échantillon alimentaire d'eau, de boissons tels que le lait, un jus de fruits; de yaourt, de viande, d'œufs, de légumes, de mayonnaise, de fromage ; de poisson..., un échantillon alimentaire issu d'une alimentation destinée aux animaux, tel que notamment un échantillon issu de farines animales.
A ce titre, l'invention concerne un procédé de détection et/ou d'identification d'E. coli dans un échantillon biologique, préférentiellement urinaire selon lequel a) on ensemence l'échantillon, préférentiellement urinaire susceptible de contenir E. coli sur un milieu de détection comprenant
• un premier substrat choisi parmi un substrat de beta-glucuronidase, beta- galactosidase, alpha-galactosidase, d'une enzyme d'acidification du Lactose, beta-ribosidase, phosphatase, L-Alanine-aminopeptidase, L- Leucine- aminopeptidase ,
• un deuxième substrat, différent dudit premier substrat, choisi parmi un substrat de beta-glucuronidase, beta-galactosidase, alpha-galactosidase, d'une enzyme d'acidification du Lactose, beta-ribosidase, phosphatase, L- Alanine-aminopeptidase, L-Leucine- aminopeptidase pour obtenir des colonies de bactéries b) on identifie les colonies réagissant avec le premier substrat et/ou le deuxième substrat comme étant des colonies d'E. coli
Préférentiellement, lesdits premier et deuxième substrat sont à une concentration adaptée. L'ensemencement des microorganismes peut être réalisé par toutes les techniques d'ensemencement connues de l'homme du métier. Une étape d'incubation peut être réalisée à une température pour laquelle l'activité enzymatique que l'on souhaite détecter est optimale, que l'homme du métier peut choisir aisément selon l'activité enzymatique à détecter. La détection/identification peut s'effectuer par un examen visuel, par colorimétrie ou fluorimétrie.
Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, ledit premier substrat est à une concentration comprise entre 20 et 1000mg/l et ledit deuxième substrat est à une concentration comprise entre 20mg/ et 30g/l.
Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, ledit premier substrat est un substrat de beta-glucuronidase et le deuxième substrat est un substrat de beta-galactosidase. Préférentiellement, le substrat d'une activité beta-glucuronidase est choisi parmi le 4-Méthylumbelliféryl-beta-glucuronide, le 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-glucuronide, le 5-Bromo-6-chloro-3-indolyl-beta-glucuronide, le 6-Chloro-3-indolyl-beta-glucuronide, l'Alizarine-beta-glucuronide, le Cyclohexenoesculetine-beta-glucuronide ou leurs sels, à des concentrations comprises préférentiellement entre 20 et 1000 mg/1. Préférentiellement, le substrat de beta-galactosidase est à une faible concentration. Préférentiellement, le substrat d'une activité beta-galactosidase est choisi parmi le 4-Méthylumbelliféryl-beta-galactoside, le 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-galactoside, le 5-Bromo-6-chloro-3-indolyl-beta-galactoside, le 6-Chloro-3-indolyl-beta-galactoside, l'Alizarine-beta-galactoside, le Cyclohexenoesculetine-beta-galactoside ou leurs sels, à une concentration comprise préférentiellement entre 10 et 1000mg/l, préférentiellement entre 20 et 500mg/l.
Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, le milieu de détection comprend en outre un troisième substrat, préférentiellement choisi parmi un substrat de beta- glucosidase, beta-lactosidase, N-acetyl-hexosaminidase, estérase, sulfatase, beta- xylosidase, phospholipase, alpha-mannosidase, beta-mannosidase, beta-cellobiosidase, alpha-glucosidase, tryptophanase, désaminase, oxydase, synthèse de pigment, de peptidases (beta-Alanine-aminopeptidase, élastase, ... ).
Préférentiellement, ledit troisième substrat est un substrat de beta glucosidase. Préférentiellement, le substrat d'une activité beta- glucosidase est choisi parmi le 4- Méthylumbelliféryl-beta-Glucoside, le 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-Glucoside, le 5- Bromo-6-chloro-3-indolyl-beta-Glucoside, le 6-Chloro-3-indolyl-beta-Glucoside, l'Alizarine-beta-Glucoside, le Cyclohexenoesculetine-beta-Glucoside, le Nitrophényl- beta-glucoside, le Dichloroaminophényl-glucoside ou leurs sels, à une concentration comprise préférentiellement entre 10 et 1000mg/l, préférentiellement entre 20 et 500mg/l. Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, le milieu de détection comprend en outre un inducteur.
Préférentiellement, l'inducteur est à une concentration comprise entre 100 ng/1 et à 10g/l. Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, l'inducteur est préférentiellement:
• pour la beta-glucuronidase, un glucuronide, préférentiellement choisi parmi le Glucuronate, le Méthyl-beta- glucuronide.
• pour la beta-galactosidase, un galactoside, préférentiellement choisi parmi le Lactose, l'Isopropyl-beta-thio-galactoside
• pour la beta-glucosidase, un hydrate de carbone constitué d'un hydrate de carbone lié en position β au glucose ou hydrate de carbone avec une sous-unité β-glucoside, en particulier le cellobiose, la cellulose, l'amidon, le cellotriose, le trehalose. On peut citer également le Méthyl-β-glucoside, l'Isopropyl-β-thio- glucoside, l'Indoxyl-β-glucoside ou le Méthyl-β-thio-glucoside
Préférentiellement, l'inducteur est le cellobiose, à une concentration comprise préférentiellement comprise entre 100ng/l et à 10g/l.
Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, le milieu de détection comprend en outre un inhibiteur. Préférentiellement, l'inhibiteur est à une concentration comprise entre lOOng et 30g/l.
Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, l'inhibiteur est préférentiellement:
• pour la beta-glucuronidase : D-Glucose, D-Glucaric acid 1,4-lactone
• pour beta-galactosidase : 2-Deoxy-galactose, Cellobiose, D-Galactose, D-Glucose
Les exemples ci dessous sont donnés à titre explicatif et n'ont aucun caractère limitatif. Ils permettront de mieux comprendre l'invention.
Exemple 1 : Evaluation de la combinaison du 6-Chloro-3-indolyl-β-glucuronide et
5-Bromo-6-chloro-3-indolyl-β-galactoside
Au milieu CPS ID 3 (bioMérieux) auquel a été ôté le substrat enzymatique synthétique de β-glucuronidase, sont ajoutés et combinés différentes concentrations de 6-Chloro- 3-indolyl-β-glucuronide (0-0,1-0,15 et 0,20g/l) et de 5-Bromo-6-chloro-3-indolyl- β-galactoside (0-0,025-0,05 et 0,lg/l). Ces milieux comprennent en outre du 5-Bromo- 4-chloro-3-indolyl-β-glucoside à 50mg/l. Ils sont répartis à raison de 20ml par boîte de Pétri. Le milieu CoIi ID (bioMérieux) qui associe un substrat de β-glucuronidase (6-Chloro-3-indolyl-β-glucuronide) et un substrat de β-galactosidase (5-Bromo-3-indolyl- β-galactoside), destiné à la détection et la numération des E. coli et des coliformes dans les prélèvements alimentaires, est testé en parallèle. Des micro-organismes fréquemment isolés de prélèvements urinaires et issus de la collection de la demanderesse sont ensemencés sur ces milieux par isolement semi-quantitatif de lOμl d'une suspension à 0,5 McFarland diluée au 20e. Les boîtes sont incubées à 370C pendant 20 heures, puis les colonies formées sont examinées visuellement. La coloration de ces colonies est notée. Les résultats sont présentés dans le tableau 1 ci-après :
Figure imgf000009_0001
Tableau 1 : Impact de combinaison de 6-Chloro-3-indolyl-β-glucuronide et de 5-Bromo-6-chloro-
3-indolyl-β- galactoside dans le milieu CPS ID 3 sur la coloration des colonies
NA = non applicable, - = incolore, Inh = inhibée, R = rosé, Rp = rosé pâle, GR = gris-rose, GV = gris- vert, GB = £ ris-bleu, BV = bleu-vert, Vi = violet, O = orange-brun, T = Turquoise
Dans le tableau 1, il ressort que seuls les milieux 2c, 3b, 3c, 4b et 4c associant le 6-Chloro-3-indolyl-β-glucuronide au 5-Bromo-6-chloro-3-indolyl-β-galactoside permettent de détecter l'ensemble des souches d'E. coli. Ce n'est pas le cas du milieu Coli ID qui pourtant associe un substrat de β-glucuronidase et un substrat de β-galactosidase. Cependant, sur les milieux 2c, 3c et 4c, la souche d'E. cloacae se distingue moins facilement des souches d'E. coli. De même, la souche de C. freundii produit des colonies de même couleur que les souches d'E. coli sur tous les milieux ayant au moins 0,05g/l de 5-Bromo-6-chloro-3-indolyl-β-galactoside.
Ainsi, il est possible de déterminer les milieux les plus intéressants pour améliorer la sensibilité de détection des souches d'E. coli sans trop dégrader la spécificité.
Exemple 2 : Impact du Cellobiose sur un milieu associant 6-Chloro-3-indolyl- β-glucuronide, 5-Bromo-6-chloro-3-indolyl-β-galactoside et 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl- β-glucoside
Au milieu Trypcase Soja Agar (bioMérieux) sont ajoutés du 6-Chloro-3-indolyl- β-glucuronide à 0,15g/l du 5-Bromo-6-chloro-3-indolyl-β-galactoside à 0,08g/l et du 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-glucoside à 0,08g/l. Ce milieu est additionné ou non de Cellobiose à 0,5g/l. Ces deux milieux sont répartis à raison de 20ml par boîte de Pétri. Des micro-organismes fréquemment isolés de prélèvements urinaires et issus de la collection de la demanderesse sont ensemencés sur ces milieux par isolement semi- quantitatif de lOμl d'une suspension à 0,5 McFarland diluée au 20e. Les boîtes sont incubées à 370C pendant 24 heures, puis les colonies formées sont examinées visuellement. La coloration de ces colonies est notée. Les résultats sont présentés dans le tableau 2 ci-après :
Figure imgf000010_0001
Tableau 2 : Impact du Cellobiose sur un milieu associant 6-Chloro-3-indolyl-β-glucuronide, 5-Bromo-6-chloro-3-indolyl-β-galactoside et 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-glucoside sur la coloration des colonies
Dans le tableau 2 ci-dessus, il ressort que dans un milieu combinant 6-Chloro- 3-indolyl-β-glucuronide et 5-Bromo-6-chloro-3-indolyl-β-galactoside, le Cellobiose permet de mieux différencier la souche de Citrobacter 009 des souches d'E. coli. Ceci permet de bénéficier du gain de sensibilité pour la détection d'E. coli sans être pénalisé par une dégradation de la spécificité. Exemple 3 - Test pour définir la concentration desdits premier et deuxième substrats selon l'invention
Le test ci dessous peut être mis en oeuvre pour définir la concentration desdits premier et deuxième substrats selon l'invention, qui est variable en fonction des substrats employés et plus généralement de la formulation du milieu réactionnel. Pour aider à sa compréhension, ce test est mis en oeuvre ci-dessous dans le cas d'une combinaison β- glucuronidase, et β-galactosidase, à partir d'un kit de souches de microorganismes, comprenant notamment des souches d'E. coli, incluant des souches n'exprimant pas ou faiblement ou tardivement une activité positive et éventuellement d'autres microorganismes. Ce test peut être mis en oeuvre pour d'autres types de substrats. Deux milieux réactionnels comprenant soit une concentration adaptée en substrat de β- glucuronidase soit pas de substrat de β-glucuronidase sont utilisés pour préparer une gamme en substrat de β-galactosidase incluant une concentration nulle, au moins une concentration permettant d'obtenir une réaction positive avec les souches d'E. coli exprimant une β-galactosidase, ainsi que des concentrations intermédiaires. Chacun des milieux est aliquoté de façon à ce que chaque souche de microorganisme puisse être ensemencée en culture pure sur chacun des milieux. Après un temps d'incubation adapté, généralement entre 30 minutes et 72 heures, à une température appropriée comprise préférentiellement entre 20 et 5O0C, les milieux sont examinés de façon à sélectionner le milieu comprenant une association de substrats de β-galactosidase et de β-glucuronidase permettant de révéler le plus grand nombre de souches d'E. coli tout en les différenciant du plus grand nombre de souches des autres microorganismes. Il peut être nécessaire de répéter l'expérimentation en adaptant les concentrations en chacun des substrats ainsi que le kit de souches. Il peut être avantageux que les milieux réactionnels comprennent en outre des inducteurs et/ou des inhibiteurs de β-galactosidase et/ou de β-glucuronidase.

Claims

REVENDICATIONS
1) Procédé de détection et/ou d'identification d'E. coli dans un échantillon urinaire selon lequel a) on ensemence l'échantillon urinaire susceptible de contenir E. coli sur un milieu de détection comprenant
• un premier substrat choisi parmi un substrat de beta-glucuronidase, beta- galactosidase, alpha-galactosidase, d'une enzyme d'acidification du Lactose, beta-ribosidase, phosphatase, L-Alanine-aminopeptidase, L- Leucine- aminopeptidase ,
• un deuxième substrat, différent dudit premier substrat, choisi parmi un substrat de beta-glucuronidase, beta-galactosidase, alpha-galactosidase, d'une enzyme d'acidification du Lactose, beta-ribosidase, phosphatase, L- Alanine-aminopeptidase, L-Leucine- aminopeptidase pour obtenir des colonies de bactéries b) on identifie les colonies réagissant avec le premier substrat et/ou le deuxième substrat comme étant des colonies d'E. coli
X) Procédé selon la revendication 1 selon lequel le premier substrat est un substrat de beta- glucuronidase et le deuxième substrat est un substrat de beta-galactosidase.
3) Procédé selon la revendication 2 selon lequel ledit premier substrat est à une concentration comprise entre 20 et 1000mg/l et ledit deuxième substrat est à une concentration comprise entre lOmg/ et 30g/l
4) Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 selon lequel le milieu de détection comprend en outre un troisième substrat choisi parmi un substrat de beta- glucosidase, beta-lactosidase, N-acetyl-hexosaminidase, estérase, sulfatase, beta- xylosidase, phospholipase, alpha-mannosidase, beta-mannosidase, beta-cellobiosidase, alpha-glucosidase, tryptophanase, désaminase, oxydase, synthèse de pigment, de peptidases (beta-Alanine-aminopeptidase, élastase, ... )• 5) Procédé selon la revendication 4 selon lequel ledit troisième substrat est un substrat de beta glucosidase
6) Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 selon lequel le milieu de détection comprend en outre un inducteur, préférentiellement le cellobiose
7) Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 selon lequel le milieu de détection comprend en outre un inhibiteur.
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2011083237A (ja) * 2009-10-16 2011-04-28 Eiken Chemical Co Ltd 卵黄液による発色反応および／または蛍光発色反応増強作用
JP2012000076A (ja) * 2010-06-21 2012-01-05 Nissui Pharm Co Ltd β−グルクロニダーゼ含有飲食品中の大腸菌検出用培地
JP2015126756A (ja) * 2015-04-10 2015-07-09 栄研化学株式会社 卵黄液による発色反応および／または蛍光発色反応増強作用

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9788539B2 (en) * 2011-05-17 2017-10-17 Velico Medical, Inc. Platelet protection solution having beta-galactosidase and sialidase inhibitors
FR2976952A1 (fr) * 2011-06-27 2012-12-28 Commissariat Energie Atomique Procede pour caracteriser la presence ou l'absence d'un microorganisme dans un milieu biologique
EP2903430A1 (fr) 2012-10-05 2015-08-12 Velico Medical, Inc. Solution additive plaquettaire comprenant un inhibiteur de bêta-galactosidase
CN103820373B (zh) * 2014-03-19 2017-06-20 中国检验检疫科学研究院 用于分离和检测阴沟肠杆菌的显色培养基
FR3018690B1 (fr) * 2014-03-21 2016-04-15 Biomerieux Sa Nouveaux composes antimicrobiens, milieux reactionnels les comprenant, et leurs utilisations
ES2900493T3 (es) 2017-04-03 2022-03-17 3M Innovative Properties Co Detección rápida de E. coli en un dispositivo de cultivo de película fina
CN109580947A (zh) * 2018-11-27 2019-04-05 迪瑞医疗科技股份有限公司 一种n-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸及其制备方法
CN110042142A (zh) * 2018-11-30 2019-07-23 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） 一种用于检测大肠杆菌o157与非o157大肠杆菌的显色培养基
CN112557381A (zh) * 2021-01-25 2021-03-26 河南省科学院生物研究所有限责任公司 一种用于α-半乳糖苷酶的检测测试条及其检测方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4324392A1 (de) * 1993-07-21 1995-01-26 Merck Patent Gmbh Kulturmedium für den gleichzeitigen Nachweis von coliformen Bakterien und Escherichia coli
US5510243A (en) * 1994-06-21 1996-04-23 Gelman Sciences, Inc. Multiple chromogen enzyme targeting (MCET) for use in bacterial contamination monitoring
WO1996040980A1 (fr) * 1995-06-07 1996-12-19 Idexx Laboratories, Inc. Procede et composition de detection de contamination bacterienne dans des produits alimentaires
US6699685B1 (en) * 1990-04-20 2004-03-02 Rcr Scientific, Inc. Method, test media and chromogenic compounds for identifying and differentiating general coliforms and escherichia coli bacteria
FR2881754A1 (fr) * 2005-02-10 2006-08-11 Biomerieux Sa Milieux pour la detection specifique de micro-organismes resistants
FR2882370A1 (fr) * 2005-02-22 2006-08-25 Alain Rambach Detection d'une souche de microorganismes dans un echantillon liquide

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4070247A (en) * 1977-03-30 1978-01-24 Indiana University Foundation Diagnostic media
US6146840A (en) * 1994-04-29 2000-11-14 The Regents Of The University Of California Simultaneous enumeration of E. coli and total coliforms
US5610029A (en) * 1994-11-04 1997-03-11 Idexx Laboratories, Inc. Medium for detecting target microbes in a sample
FR2747394B1 (fr) * 1996-04-15 1998-07-03 Rambach Alain Milieu de culture pour la mise en evidence des bacteries e. coli enterohemorragiques, et procede pour sa mise en evidence
IL119644A (en) * 1996-11-19 2001-01-11 Combact Diagnostic Systems Ltd Rapid microbiological assay
FR2766825B1 (fr) * 1997-08-04 2001-04-13 Pasteur Institut Oligonucleotide specifique de l'espece escherichia coli et procede de detection et de visualisation des bacteries de cette espece
JP2001190278A (ja) * 2000-01-12 2001-07-17 Nissui Pharm Co Ltd 尿路感染症関連遺伝子
JP2002255714A (ja) * 2001-02-27 2002-09-11 Koowa:Kk ホタテ貝殻粉焼成物からなる細菌抑制剤
JP4740486B2 (ja) * 2001-08-02 2011-08-03 三菱化学メディエンス株式会社 新規の細菌分析方法
FR2881755B1 (fr) * 2005-02-10 2012-11-30 Biomerieux Sa Milieux pour la detection specifique de micro-organismes resistants

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6699685B1 (en) * 1990-04-20 2004-03-02 Rcr Scientific, Inc. Method, test media and chromogenic compounds for identifying and differentiating general coliforms and escherichia coli bacteria
DE4324392A1 (de) * 1993-07-21 1995-01-26 Merck Patent Gmbh Kulturmedium für den gleichzeitigen Nachweis von coliformen Bakterien und Escherichia coli
US5510243A (en) * 1994-06-21 1996-04-23 Gelman Sciences, Inc. Multiple chromogen enzyme targeting (MCET) for use in bacterial contamination monitoring
WO1996040980A1 (fr) * 1995-06-07 1996-12-19 Idexx Laboratories, Inc. Procede et composition de detection de contamination bacterienne dans des produits alimentaires
FR2881754A1 (fr) * 2005-02-10 2006-08-11 Biomerieux Sa Milieux pour la detection specifique de micro-organismes resistants
FR2882370A1 (fr) * 2005-02-22 2006-08-25 Alain Rambach Detection d'une souche de microorganismes dans un echantillon liquide

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MARTIN C. ET AL.: "Intérêt des milieux contenant des substrats chromogènes pour l'identification et la numération des bactéries urinaires." PATHOLOGIE ET BIOLOGIE, L'EXPANSION SCIENTIFIQUE FRANCAISE, PARIS, FR, vol. 43, no. 9, novembre 1995 (1995-11), pages 749-753, XP002047436 ISSN: 0369-8114 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2011083237A (ja) * 2009-10-16 2011-04-28 Eiken Chemical Co Ltd 卵黄液による発色反応および／または蛍光発色反応増強作用
JP2012000076A (ja) * 2010-06-21 2012-01-05 Nissui Pharm Co Ltd β−グルクロニダーゼ含有飲食品中の大腸菌検出用培地
JP2015126756A (ja) * 2015-04-10 2015-07-09 栄研化学株式会社 卵黄液による発色反応および／または蛍光発色反応増強作用

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