CN109580947A - 一种n-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸及其制备方法 - Google Patents
一种n-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109580947A CN109580947A CN201811424614.7A CN201811424614A CN109580947A CN 109580947 A CN109580947 A CN 109580947A CN 201811424614 A CN201811424614 A CN 201811424614A CN 109580947 A CN109580947 A CN 109580947A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- test paper
- immersion liquid
- acetyl
- acetyl hexosaminidase
- liquid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
- G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种N‑乙酰氨基己糖苷酶检测试纸及其制备方法，属于体外诊断试剂技术领域，用于检测阴道分泌物中的N‑乙酰氨基己糖苷酶，作为阴道炎症辅助评判指标。N‑乙酰氨基己糖苷酶检测试纸包括分散在试纸中固化的底物和显色剂，所述底物为5‑溴‑4‑氯‑3‑吲哚‑N‑乙酰‑β‑D‑氨基葡萄糖苷以及其衍生物，或者为4‑硝基苯‑β‑D‑葡萄糖苷以及其衍生物；所述显色剂为重氮盐类试剂。本发明N‑乙酰氨基己糖苷酶检测试纸的制备方法，工艺简单，容易操作，制备的试纸使用方便，检测速度快，灵敏度高，检测结果更准确，与类似产品相比操作简单，适宜普及。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断试剂技术领域，尤其涉及一种N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸及其制备方法。
背景技术
阴道分泌物检查是检测女性泌尿生殖道健康水平的一个重要项目，目前主要采用常规镜检法，但该法存在明显的影响因素，如检测人员经验、阴道分泌物涂片质量等，都会影响检验结果的准确性。近年来，基于干化学酶法的研究成果，N-乙酰氨基己糖苷酶试纸并结合pH试纸，可间接反映阴道分泌物中乳酸杆菌、白假丝念珠菌和滴虫等状况。
真菌性阴道炎由真菌(主要为白色念珠菌属)感染引起，其发病率已高于滴虫性阴道炎。真菌有许多种，在人体最主要的为白色念珠菌属。常规镜检法检测念珠菌，镜下不易观察到念珠菌孢子及菌丝，极易漏检及误检。N-乙酰氨基己糖苷酶和脯氨酸氨基肽酶均为白色念珠菌的特异性酶。故干化学酶法的检测试纸，通过检测酶的活性来判定念珠菌感染，可以降低念珠菌漏检率。
滴虫是寄生在人体阴道及泌尿道的鞭毛虫，主要引起滴虫性阴道炎，是以性传播为主的一种传染病，呈全球性分布，人群感染较普遍。发病是由于感染的阴道毛滴虫消耗了阴道内的糖原，破坏了阴道的自净防御机能，继发细菌感染所致。临床上，滴虫培养一直是国内及国际公认的诊断滴虫性阴道炎的金标准，但临床上检测滴虫基本上是常规镜检。显微镜镜检对镜检人员经验性要求高，且气温低可影响滴虫的活动性而导致漏检。经过临床研究表明，滴虫具有N-乙酰氨基己糖苷酶特异性酶，故可以通过检测N-乙酰氨基己糖苷酶来判定滴虫感染。通过pH值与N-乙酰氨基己糖苷酶活性的联合检测，排除了白带标本温度和离体时间影响，弥补悬滴法在温度低和离体时间长时滴虫检出率下降的缺陷，为临床诊断滴虫性阴道炎提供了更可靠的数据。
真菌性阴道炎是以念珠菌特别是白色念珠菌为主要病原体产生的一种阴道疾病，会引起阴道炎症；滴虫性阴道炎是以阴道毛滴虫为病原体产生的一种阴道疾病，会引起阴道炎症。N-乙酰氨基己糖苷酶为白色念珠菌、滴虫、热带念珠菌的特异性酶，研究表明白色念珠菌和滴虫具有N-乙酰氨基己糖苷酶特异性酶，N-乙酰氨基己糖苷酶显阳性，同时pH≥4.8，则为滴虫性阴道炎，若同时pH≤4.6，则为真菌性阴道炎，若N-乙酰氨基己糖苷酶为阴性，同时脯氨酸氨基肽酶为阳性，则可能BV感染。
发明内容
本发明的目的是提供一种N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸及其制备方法，该方法制备得到的试纸可用于检测阴道分泌物中的N-乙酰氨基己糖苷酶，具有检测速度快，灵敏度高，操作简单，成本低等优点。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸，包括分散在试纸中固化的底物和显色剂，所述底物为5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷以及其衍生物，或者为4-硝基苯-β-D-葡萄糖苷以及其衍生物；所述显色剂为重氮盐类试剂。根据所用的底物不同，方法存在一定差异：
4-硝基苯-β-D-葡萄糖苷为底物，采用两步法，其反应原理为：念珠菌和滴虫有强的N-乙酰氨基己糖苷酶活性，N-乙酰氨基己糖苷酶可水解底物硝基苯-N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷，释放出硝基苯，在碱性条件下呈黄色，呈色深度与N-乙酰氨基己糖苷活性呈正比，不显色(标记为“-”)表示阴性；显色(标记为“+”)表示阳性。
5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷为底物，采用一步法，其反应原理为：N-乙酰氨基己糖苷酶可水解底物5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷，释放出5-溴-4-氯-3-吲哚，(1)在氧存在的条件下自身发生缩合呈蓝色，呈色深度与N-乙酰氨基己糖苷酶活性成正比。
(2)与2-乙氧基-4-吗啉基重氮苯重氮盐存在条件下，发生重氮化反应，呈色深度与N-乙酰氨基己糖苷酶活性成正比。
本发明还提供了上述的N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸的制备方法，具体为；将底物溶解于含有辅助试剂pH值为5-7、浓度为50-300mM的缓冲液中，形成底物浓度为5-10mg/mL的浸液A，将浸液A浸润滤纸，50℃-70℃进行干燥；再将显色剂溶解于含有表面活性剂的醇溶剂中，形成显色剂浓度为0.5-1.0mg/L的浸液B，将浸液B再次浸润滤纸，50℃-70℃进行再次干燥，烘干后经过裁切即成为N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸，室温密封保存，所述辅助试剂包括多羟基糖类物质和分散剂。
优选地，所述缓冲液为柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液、Tris-HCl缓冲液或乙酸-乙酸钠缓冲液。
优选地，所述多羟基糖类物质为海藻糖，其浓度为1.0-3.0mg/mL。
优选地，所述分散剂为磷酸三吗啉酯，其浓度为30.0-50.0mg/mL。
优选地，所述醇溶剂为无水乙醇溶液。
优选地，所述表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮，其浓度为3.0-8.0mg/mL。
配方优势分析：浸液B中无水乙醇廉价易得，易于挥发可明显缩短减少干燥时间；浸液A中磷酸三吗啉酯对重氮盐类2-乙氧基-4-吗啉基重氮苯有较好的保护作用；表面活性剂聚乙烯吡咯烷酮可以增加试纸的分散能力，有助于颜色的均匀分布；海藻糖可以保护分泌物中酶类物质，有助于提高反应灵敏度；柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液为重氮化反应提供一个良好的酸性环境。
优选地，所述浸液A干燥的温度范围为55℃-65℃，所述浸液B干燥的温度范围为55℃-65℃。
优选地，所述显色剂为2-乙氧基-4-吗啉基重氮苯。
上述干燥方法可采用烘箱干燥方法或浸渍干燥机自动化干燥方法。其中：
(I)烘箱干燥方法为：
取滤纸，先用浸液A浸湿均匀，在50℃-70℃高温干燥烘箱中干燥20-25min，优选温度55℃-65℃，烘干后将滤纸在用浸液B浸湿均匀，在50℃-70℃高温干燥烘箱中干燥10-15min，优选温度55℃-65℃，烘干后室温密封保存。
(II)浸渍干燥机自动化干燥方法：
例如，浸渍干燥机温度设定：
浸液A：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
浸液B：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
浸渍干燥机走速设定：
浸液A：7.4-11.4Hz 浸液B：7.0-11.3Hz
走速的设定是根据试纸在验证过程中逐步确认，走速的快慢会影响试纸的干燥程度，对试纸的外观及准确度有一定影响。
具体干燥流程为：
1、按开机流程将浸渍干燥机打开，根据实施案例所述设置烘干温度、走纸速度，待温度达到设定温度，各干燥室温度达到规定温度才能进行浸液；
2、将浸液使用的滤纸进行悬挂，浸液槽安装好；
3、将配制好的药液倒入浸渍槽中，药液量应在浸渍槽的1/2处，然后将剩余的药液倒入盛药瓶中，调节药液注入的速度，将盛药罐密封；
4、开启走纸开关，用压纸轮将滤纸浸入药液中，记录药液位置高度；
5、浸液烘干过程注意观察药液剂量，干燥室温度符合实施案例要求；
6、浸液的滤纸全部从干燥室走出，关闭走纸开关，将滤纸做好标识，放入装有干燥剂的自封袋中并放入干燥器中待用。
浸渍干燥方式具有便捷、省时、可自动化的优势，有效控制试纸制备过程中人工误差带来的影响，浸渍干燥机主副加热，对温度全面进行监控，温度设定在规定的范围内，可以大大减少试纸批次之间的误差，保证试纸制备的准确性、稳定性及均一性。
所述滤纸为7218型滤纸、31ET型滤纸、3MM型滤纸或526型滤纸。
本发明还提供了上述的N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸的检测方法，具体为：取稀释的样本，滴加一滴在试纸上，于37℃温浴8-10min，观察N-乙酰氨基己糖苷酶试纸块的的颜色变化，试纸由无色或浅黄色变成紫色、深紫色，即判定为N-乙酰氨基己糖苷酶阳性。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明依据5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷为底物，阴道微生态环境中存在N-乙酰氨基己糖苷酶，在此酶的水解作用下，释放出5-溴-4-氯-1H-吲哚-3-酚生成有色物质，与苯磺酸基重氮盐反应显色为原理，检测分泌物样本中酯酶浓度，呈色深度与活性成正比，研制出N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸，可作为真菌性阴道炎及滴虫性阴道炎的症辅助评判指标，并结合pH值联合对阴道病类别进行准确划分。N-乙酰氨基己糖苷酶显阳性，同时pH≥4.8，则为滴虫性阴道炎，若同时pH≤4.6，则为真菌性阴道炎。联合评判阴道炎症更具有优势，经大量临床实验证实，有形成分与干化学N-乙酰氨基己糖试纸之间并无完全对应关系，显微镜下无有形成分含有滴虫、孢子、菌丝等，而干化学结果为阳性，原因在于医生在采集样本的过程中操作方法，采样位置均会影响有形结果，在干化学试纸法主要检测患者阴道中微生物分泌的酶类物质，检测结果更准确，并可以实现预防的诊断意义，而目前滴虫培养一直是国内及国际公认的诊断滴虫性阴道炎的金标准，临床上检测滴虫及真菌多为常规镜检方法。所以有形成分与N-乙酰氨基己糖苷酶干化学法结果之间相互佐证，相辅相成，联合评判，对临床诊断具有重大意义。
本发明提供的N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸的制备方法，试剂配制简便，使用方便，容易操作，检测时不需要显微镜等特殊设备，结合迪瑞GMD-S600全自动妇科分泌物分析系统，在8-10min内即可出结果，具有检测速度快，灵敏度高、特异性好的优势，与类似产品相比操作简单，适宜普及。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面将结合和实施例对本发明作进一步的详细介绍。实施例中干燥方法均采用浸渍干燥机自动化干燥。
实施例1 N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸的制备
浸液A：
100.0mM柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液
1.0mg/mL海藻糖；
30.0mg/mL磷酸三吗啉酯；
浸液B：
5.0mg/mL 5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷；
溶剂为无水乙醇；
0.5mg/mL 2-乙氧基-4-吗啉基重氮苯；
3.0mg/mL聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)。
滤纸类型：31ET型滤纸
浸渍干燥机温度设定：
A液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
B液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
浸渍干燥机走速设定：
A液：7.4-11.4Hz B液：7.0-11.3Hz
干燥后得到无色的N-乙酰氨基己糖苷酶试纸。
实施例2 N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸的制备
浸液A：
150.0mM柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液
2.0mg/mL海藻糖；
40.0mg/mL磷酸三吗啉酯；
浸液B：
7.5mg/mL 5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷；
溶剂为无水乙醇；
0.75mg/mL 2-乙氧基-4-吗啉基重氮苯；
5.0mg/mL聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)。
滤纸类型：31ET型滤纸
浸渍干燥机温度设定：
A液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
B液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
浸渍干燥机走速设定：
A液：7.4-11.4Hz B液：7.0-11.3Hz
干燥后得到无色的N-乙酰氨基己糖苷酶试纸。
实施例3 N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸的制备
浸液A：
200.0mM柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液
3.0mg/mL海藻糖；
50.0mg/mL磷酸三吗啉酯；
浸液B：
10.0mg/mL 5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷；
溶剂为无水乙醇；
1.0mg/mL 2-乙氧基-4-吗啉基重氮苯；
8.0mg/mL聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)。
滤纸类型：31ET型滤纸
浸渍干燥机温度设定：
A液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
B液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
浸渍干燥机走速设定：
A液：7.4-11.4Hz B液：7.0-11.3Hz
干燥后得到无色的N-乙酰氨基己糖苷酶试纸。
实施例4 N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸的制备
浸液A：
50.0mM Tris-HCl缓冲液
2.0mg/mL海藻糖；
40.0mg/mL磷酸三吗啉酯；
浸液B：
5.0mg/mL 5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷；
溶剂为无水乙醇；
0.75mg/mL 2-乙氧基-4-吗啉基重氮苯；
5.0mg/mL聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)。
滤纸类型：7218型滤纸
浸渍干燥机温度设定：
A液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
B液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
浸渍干燥机走速设定：
A液：7.4-11.4Hz B液：7.0-11.3Hz
干燥后得到无色的N-乙酰氨基己糖苷酶试纸。
实施例5 N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸的制备
浸液A：
150.0mM Tris-HCl缓冲液
2.0mg/mL海藻糖；
40.0mg/mL磷酸三吗啉酯；
浸液B：
7.5mg/mL 5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷；
溶剂为无水乙醇；
0.75mg/mL 2-乙氧基-4-吗啉基重氮苯；
5.0mg/mL聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)。
滤纸类型：7218型滤纸
浸渍干燥机温度设定：
A液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
B液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
浸渍干燥机走速设定：
A液：7.4-11.4Hz B液：7.0-11.3Hz
干燥后得到无色的N-乙酰氨基己糖苷酶试纸。
实施例6 N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸的制备
浸液A：
300.0mM Tris-HCl缓冲液
2.0mg/mL海藻糖；
40.0mg/mL磷酸三吗啉酯；
浸液B：
10.0mg/mL 5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷；
溶剂为无水乙醇；
0.75mg/mL 2-乙氧基-4-吗啉基重氮苯；
5.0mg/mL聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)。
滤纸类型：7218型滤纸
浸渍干燥机温度设定：
A液：开机后将设备温度主加热设定55℃，副加热设定50℃，待主机加热温度达到55℃，各干燥室温度≥50℃左右时开始浸液；
B液：开机后将设备温度主加热设定55℃，副加热设定50℃，待主机加热温度达到55℃，各干燥室温度≥50℃左右时开始浸液；
浸渍干燥机走速设定：
A液：7.4-11.4Hz B液：7.0-11.3Hz
干燥后得到无色的N-乙酰氨基己糖苷酶试纸。
实施例7 N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸的制备
浸液A：
100.0mM乙酸-乙酸钠缓冲液
2.0mg/mL海藻糖；
40.0mg/mL磷酸三吗啉酯；
浸液B：
5.0mg/mL 5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷；
溶剂为无水乙醇；
0.75mg/mL 2-乙氧基-4-吗啉基重氮苯；
5.0mg/mL聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)。
滤纸类型：526型滤纸
浸渍干燥机温度设定：
A液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
B液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
浸渍干燥机走速设定：
A液：7.4-11.4Hz B液：7.0-11.3Hz
干燥后得到无色的N-乙酰氨基己糖苷酶试纸。
实施例8 N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸的制备
浸液A：
200.0mM乙酸-乙酸钠缓冲液
2.0mg/mL海藻糖；
40.0mg/mL磷酸三吗啉酯；
浸液B：
7.5mg/mL 5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷；
溶剂为无水乙醇；
0.75mg/mL 2-乙氧基-4-吗啉基重氮苯；
5.0mg/mL聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)。
滤纸类型：526型滤纸
浸渍干燥机温度设定：
A液：开机后将设备温度主加热设定70℃，副加热设定65℃，待主机加热温度达到70℃，各干燥室温度≥65℃左右时开始浸液；
B液：开机后将设备温度主加热设定70℃，副加热设定65℃，待主机加热温度达到70℃，各干燥室温度≥65℃左右时开始浸液；
浸渍干燥机走速设定：
A液：7.4-11.4Hz B液：7.0-11.3Hz
干燥后得到无色的N-乙酰氨基己糖苷酶试纸。
实施例9 N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸的制备
浸液A：
200.0mM乙酸-乙酸钠缓冲液
2.0mg/mL海藻糖；
40.0mg/mL磷酸三吗啉酯；
浸液B：
10.0mg/mL 5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷；
溶剂为无水乙醇；
0.75mg/mL 2-乙氧基-4-吗啉基重氮苯；
5.0mg/mL聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)。
滤纸类型：526型滤纸
浸渍干燥机温度设定：
A液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
B液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
浸渍干燥机走速设定：
A液：7.4-11.4Hz B液：7.0-11.3Hz
干燥后得到无色的N-乙酰氨基己糖苷酶试纸。
实施例10 N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸的制备
浸液A：
100.0mM柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液
2.0mg/mL海藻糖；
40.0mg/mL磷酸三吗啉酯；
浸液B：
5.0mg/mL 5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷；
溶剂为无水乙醇；
0.75mg/mL 2-乙氧基-4-吗啉基重氮苯；
5.0mg/mL聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)。
滤纸类型：3MM型滤纸
浸渍干燥机温度设定：
A液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
B液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
浸渍干燥机走速设定：
A液：7.4-11.4Hz B液：7.0-11.3Hz
干燥后得到无色的N-乙酰氨基己糖苷酶试纸。
实施例11 N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸的制备
浸液A：
100.0mM柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液
2.0mg/mL海藻糖；
40.0mg/mL磷酸三吗啉酯；
浸液B：
5.0mg/mL 5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷；
溶剂为无水乙醇；
0.75mg/mL 2-乙氧基-4-吗啉基重氮苯；
5.0mg/mL聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)。
滤纸类型：3MM型滤纸
浸渍干燥机温度设定：
A液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
B液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
浸渍干燥机走速设定：
A液：7.4-11.4Hz B液：7.0-11.3Hz
干燥后得到无色的N-乙酰氨基己糖苷酶试纸。
实施例12 N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸的制备
浸液A：
200.0mM柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液
2.0mg/mL海藻糖；
40.0mg/mL磷酸三吗啉酯；
浸液B：
10.0mg/mL 5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷；
溶剂为无水乙醇；
0.75mg/mL 2-乙氧基-4-吗啉基重氮苯；
5.0mg/mL聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)。
滤纸类型：3MM型滤纸
浸渍干燥机温度设定：
A液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
B液：开机后将设备温度主加热设定65℃，副加热设定60℃，待主机加热温度达到65℃，各干燥室温度≥60℃左右时开始浸液；
浸渍干燥机走速设定：
A液：7.4-11.4Hz B液：7.0-11.3Hz
干燥后得到无色的N-乙酰氨基己糖苷酶试纸。
试验例：
取实施例1-12制备的N-乙酰氨基己糖苷酶试纸各3份，取稀释的阳性样本和阴性样本，分别滴加一滴在试纸上，每个实施例的试纸2份滴加阳性样本，1份滴加阴性样本作为对照，于37℃温浴8-10min，观察N-乙酰氨基己糖苷酶试纸的颜色变化，实施例1-12制备的试纸中，滴加阳性样本的试纸块由无色变成紫色、紫红色或深紫色，判定为N-乙酰氨基己糖苷酶阳性，滴加阳性样本的试纸块无颜色变化，操作简单，检测速度快，灵敏度高。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，但这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸，包括分散在试纸中固化的底物和显色剂，其特征在于，所述底物为5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷以及其衍生物，或者为4-硝基苯-β-D-葡萄糖苷以及其衍生物；所述显色剂为重氮盐类试剂。
2.根据权利要求1所述的N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸，其特征在于，所述的固化方法为：将底物溶解于含有辅助试剂pH值为5-7、浓度为50-300mM的缓冲液中，形成底物浓度为5-10mg/mL的浸液A，将浸液A浸润滤纸，50℃-70℃进行干燥；再将显色剂溶解于含有表面活性剂的醇溶剂中，形成显色剂浓度为0.5-1.0mg/L的浸液B，将浸液B再次浸润滤纸，50℃-70℃进行再次干燥；所述辅助试剂包括多羟基糖类物质和分散剂。
3.根据权利要求2所述的N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸，其特征在于，所述缓冲液为柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液、Tris-HCl缓冲液或乙酸-乙酸钠缓冲液。
4.根据权利要求2所述的N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸，其特征在于，所述多羟基糖类物质为海藻糖，其浓度为1.0-3.0mg/mL。
5.根据权利要求2所述的N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸，其特征在于，所述分散剂为磷酸三吗啉酯，其浓度为30.0-50.0mg/mL。
6.根据权利要求2所述的N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸，其特征在于，所述醇溶剂为无水乙醇溶液。
7.根据权利要求2所述的N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸，其特征在于，所述表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮，其浓度为3.0-8.0mg/mL。
8.根据权利要求2所述的N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸，其特征在于，所述浸液A干燥的温度范围为55℃-65℃，所述浸液B干燥的温度范围为55℃-65℃。
9.根据权利要求2所述的N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸，其特征在于，所述显色剂为2-乙氧基-4-吗啉基重氮苯。
10.根据权利要求1-9任一项所述的N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸的制备方法，其特征在于，将底物溶解于含有辅助试剂pH值为5-7、浓度为50-300mM的缓冲液中，形成底物浓度为5-10mg/mL的浸液A，将浸液A浸润滤纸，50℃-70℃进行干燥；再将显色剂溶解于含有表面活性剂的醇溶剂中，形成显色剂浓度为0.5-1.0mg/L的浸液B，将浸液B再次浸润滤纸，50℃-70℃进行再次干燥，烘干后经过裁切即成为N-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸，室温密封保存，所述辅助试剂包括多羟基糖类物质和分散剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811424614.7A CN109580947A (zh) | 2018-11-27 | 2018-11-27 | 一种n-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811424614.7A CN109580947A (zh) | 2018-11-27 | 2018-11-27 | 一种n-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109580947A true CN109580947A (zh) | 2019-04-05 |
Family
ID=65924334
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811424614.7A Pending CN109580947A (zh) | 2018-11-27 | 2018-11-27 | 一种n-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109580947A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113030077A (zh) * | 2021-03-17 | 2021-06-25 | 桂林优利特医疗电子有限公司 | 一种n-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸及其制备方法 |
| CN113030072A (zh) * | 2021-02-24 | 2021-06-25 | 桂林优利特医疗电子有限公司 | 一种白细胞酯酶检测试纸、制备方法及检测方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN201247244Y (zh) * | 2008-07-18 | 2009-05-27 | 杭州健宝医疗器械有限公司 | 妇科多项目干化学联合检测试纸条 |
| CN101631873A (zh) * | 2007-02-08 | 2010-01-20 | 生物梅里埃公司 | 细菌检测和/或鉴定培养基 |
| CN101948902A (zh) * | 2010-09-10 | 2011-01-19 | 中国检验检疫科学研究院 | 念珠菌显色培养基、检测试剂盒及检测方法 |
| CN102827918A (zh) * | 2012-08-27 | 2012-12-19 | 广东环凯微生物科技有限公司 | 一种用于检测沙门氏菌的显色培养基 |
| CN207894938U (zh) * | 2017-12-19 | 2018-09-21 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 重氮盐法β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸 |
-
2018
- 2018-11-27 CN CN201811424614.7A patent/CN109580947A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101631873A (zh) * | 2007-02-08 | 2010-01-20 | 生物梅里埃公司 | 细菌检测和/或鉴定培养基 |
| CN201247244Y (zh) * | 2008-07-18 | 2009-05-27 | 杭州健宝医疗器械有限公司 | 妇科多项目干化学联合检测试纸条 |
| CN101948902A (zh) * | 2010-09-10 | 2011-01-19 | 中国检验检疫科学研究院 | 念珠菌显色培养基、检测试剂盒及检测方法 |
| CN102827918A (zh) * | 2012-08-27 | 2012-12-19 | 广东环凯微生物科技有限公司 | 一种用于检测沙门氏菌的显色培养基 |
| CN207894938U (zh) * | 2017-12-19 | 2018-09-21 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 重氮盐法β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113030072A (zh) * | 2021-02-24 | 2021-06-25 | 桂林优利特医疗电子有限公司 | 一种白细胞酯酶检测试纸、制备方法及检测方法 |
| CN113030077A (zh) * | 2021-03-17 | 2021-06-25 | 桂林优利特医疗电子有限公司 | 一种n-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸及其制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN207894938U (zh) | 重氮盐法β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸 | |
| CN109490519A (zh) | 一种白细胞酯酶检测试纸及其制备方法 | |
| EP2407549B1 (en) | Detection of trichomonas and candida | |
| CN107779494B (zh) | 一种检测感染性阴道炎的试剂盒及其制备方法 | |
| CN110940646A (zh) | 一种阴道微生物检测双重荧光染色液及其应用 | |
| WO2018001215A1 (zh) | 检测细菌性阴道病的试剂盒 | |
| CN108344613A (zh) | 一种标记白带及宫颈脱落细胞病原菌的荧光染色试剂 | |
| ES2606716T3 (es) | Método para detectar la infección de una herida | |
| CN110308145A (zh) | 一种沙眼衣原体糖原检测试剂、沙眼衣原体糖原检测试纸条及其制备方法 | |
| CN109580947A (zh) | 一种n-乙酰氨基己糖苷酶检测试纸及其制备方法 | |
| CN204666520U (zh) | 一种阴道病联合检测反应板 | |
| CN103266163B (zh) | 一种检测鉴别念珠菌和滴虫的联检试剂盒 | |
| IE41901B1 (en) | Improvements in or relating to the determination of isoenzymes | |
| CN103234962A (zh) | 一种阴道微生态环境传感器及其制作方法 | |
| CN109374384A (zh) | 一种荧光染色试剂 | |
| CN109459428A (zh) | 一种乳酸检测干化学试纸及其制备方法 | |
| CN104711315A (zh) | 一种肺炎链球菌的荚膜染色方法 | |
| CN102260731A (zh) | 用于膀胱癌筛查的酶标液基细胞学染色试剂盒 | |
| CN106319028B (zh) | 用于检测解脲支原体和人型支原体的试剂盒 | |
| CN204714784U (zh) | 一种阴道炎联合测定试剂盒 | |
| CN109856124A (zh) | 一种过氧化氢检测干化学试纸及其制备方法 | |
| CN110283921A (zh) | 加德纳杆菌、白色念珠菌双重检测的引物、探针组、试剂盒及检测方法 | |
| CN109991218A (zh) | 一种凝固酶检测试纸的制备方法 | |
| CN109991220A (zh) | 一种α-葡萄糖醛酸酶检测试纸的制备方法 | |
| CN208026634U (zh) | 一种阴道炎七孔检测卡 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190405 |