CN113030072A - 一种白细胞酯酶检测试纸、制备方法及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种白细胞酯酶检测试纸、制备方法及检测方法，所述白细胞酯酶检测试纸包括底物、缓冲液、稳定剂、反应促成剂、显色剂、有机酸、有机溶剂、表面活性剂和滤纸，基于制备要求，将获取的底物和显色剂分别制成两种混合溶液，并按照设定的混合比例将两种混合溶液进行混合，得到白细胞酯酶溶液；将浸入所述白细胞酯酶溶液的滤纸进行沥干和转动流匀，并利用电热鼓风干燥箱对平铺在干燥托板上的所述滤纸进行烘干、裁剪和密封保存，得到白细胞酯酶检测试纸，将得到的所述白细胞酯酶检测试纸分别用于尿白细胞酯酶检测和阴道分泌物白细胞酯酶检测，操作简单，应用广泛。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断试剂技术领域，尤其涉及一种白细胞酯酶检测试纸、制备方法及检测方法。
背景技术
白细胞酯酶是中性粒细胞质中含有的特异性酯酶。尿液和阴道分泌物中白细胞酯酶多为中性粒细胞释放出的酯酶，在健康状态下含量低，因此一般引起人体白细胞酯酶指标升高的原因大多都是生殖泌尿系统的炎症，因此白细胞酯酶项目是尿液和阴道分泌物检测重要指标。在尿液中，尿白细胞酯酶检测主要用于诊断泌尿系统感染。阴道中白细胞酯酶检测可反应阴道炎症的程度，也可用于评价以阴道分泌物中清洁度和阴道粘膜损伤。但是目前针对白细胞酯酶的检测中，不同的检测项目须使用不同的检测方法，操作复杂，速度慢，应用范围小。
发明内容
本发明的目的在于提供一种白细胞酯酶检测试纸、制备方法及检测方法，操作简单，应用广泛。
为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种白细胞酯酶检测试纸的制备方法，包括以下步骤：
基于制备要求，将获取的底物和显色剂分别制成两种混合溶液，并按照设定的混合比例将两种混合溶液进行混合，得到白细胞酯酶溶液；
将浸入所述白细胞酯酶溶液的滤纸进行沥干和转动流匀，并利用电热鼓风干燥箱对平铺在干燥托板上的所述滤纸进行烘干、裁剪和密封保存，得到白细胞酯酶检测试纸。
其中，将获取的底物和显色剂分别制成两种混合溶液，并按照设定的混合比例将两种混合溶液进行混合，得到白细胞酯酶溶液，包括：
将0.1g/L-10g/L底物溶解于pH值为6-9、浓度为0.1mM-2mM的缓冲液，并加入1g/L-10g/L稳定剂和0.5g/L-5g/L反应促进剂形成第一混合溶液；
将0.1g/L-10g/L显色剂溶于含有0.5g/L-10g/L有机酸的有机溶剂中，并加入0.1g/L-5g/L表面活性剂形成第二混合溶液；
按照设定的混合比例将所述第一混合溶液和所述第二混合溶液进行混合，得到白细胞酯酶溶液。
其中，按照设定的混合比例将所述第一混合溶液和所述第二混合溶液进行混合，得到白细胞酯酶溶液，包括：
按照1:1～9:1的体积比，将所述第一混合溶液和所述第二混合溶液进行混合，得到白细胞酯酶溶液。
其中，将浸入所述白细胞酯酶溶液的滤纸进行沥干和转动流匀，并利用电热鼓风干燥箱对平铺在干燥托板上的所述滤纸进行烘干、裁剪和密封保存，得到白细胞酯酶检测试纸之前，所述方法还包括：
将获取的滤纸浸入所述白细胞酯酶溶液中浸泡2秒。
其中，将浸入所述白细胞酯酶溶液的滤纸进行沥干和转动流匀，并利用电热鼓风干燥箱对平铺在干燥托板上的所述滤纸进行烘干、裁剪和密封保存，得到白细胞酯酶检测试纸，包括：
将进入所述白细胞酯酶溶液中的所述滤纸取出自然沥干成滴，并转动所述滤纸270°使所述白细胞酯酶溶液在所述滤纸上流匀；
将所述滤纸平铺在干燥托板上，并放入45℃-75℃的电热鼓风干燥箱中干燥15-30min，以及在烘干结束后，将所述滤纸粘贴在基板上，分裁成条，室温下将得到的白细胞酯酶检测试纸密封保存。
第二方面，本发明提供了一种白细胞酯酶检测试纸，适用于如第一方面所述的一种白细胞酯酶检测试纸的制备方法，所述白细胞酯酶检测试纸包括0.1g/L-10g/L底物、pH值为6-9、浓度为0.1mM-2mM的缓冲液、1g/L-10g/L稳定剂、0.5g/L-5g/L反应促成剂、0.1g/L-10g/L显色剂、0.5g/L-10g/L有机酸、体积分数为10％-50％的有机溶剂、0.1g/L-5g/L表面活性剂和滤纸。
第三方面，本发明提供了一种白细胞酯酶检测试纸的检测方法，应用于如第二方面所述的一种白细胞酯酶检测试纸，所述白细胞酯酶检测试纸应用于尿白细胞酯酶检测和阴道分泌物白细胞酯酶检测，包括以下步骤：
将所述白细胞酯酶检测试纸浸入尿液样品中，并在2秒后取出沥干，根据1分钟内所述白细胞酯酶检测试纸的颜色变化，判断所述尿白细胞酯酶检测结果；
将获取的阴道分泌物样本按照规定进行稀释，并滴加一滴稀释后的样本至所述白细胞酯酶检测试纸上，根据1分钟内所述白细胞酯酶检测试纸的颜色变化，判断所述阴道分泌物白细胞酯酶检测结果。
本发明的一种白细胞酯酶检测试纸、制备方法及检测方法，所述白细胞酯酶检测试纸包括0.1g/L-10g/L底物、pH值为6-9、浓度为0.1mM-2mM的缓冲液、1g/L-10g/L稳定剂、0.5g/L-5g/L反应促成剂、0.1g/L-10g/L显色剂、0.5g/L-10g/L有机酸、10％-50％(体积分数)有机溶剂、0.1g/L-5g/L表面活性剂和滤纸，基于制备要求，将获取的底物和显色剂分别制成两种混合溶液，并按照设定的混合比例将两种混合溶液进行混合，得到白细胞酯酶溶液；将浸入所述白细胞酯酶溶液的滤纸进行沥干和转动流匀，并利用电热鼓风干燥箱对平铺在干燥托板上的所述滤纸进行烘干、裁剪和密封保存，得到白细胞酯酶检测试纸，将得到的所述白细胞酯酶检测试纸分别用于尿白细胞酯酶检测和阴道分泌物白细胞酯酶检测，根据试纸颜色变化得到检测结果，操作简单，应用广泛。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明提供的一种白细胞酯酶检测试纸的制备方法的步骤示意图。
图2是本发明提供的一种白细胞酯酶检测试纸的检测方法的步骤示意图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
请参阅图1，本发明提供一种白细胞酯酶检测试纸的制备方法，包括以下步骤：
S101、基于制备要求，将获取的底物和显色剂分别制成两种混合溶液，并按照设定的混合比例将两种混合溶液进行混合，得到白细胞酯酶溶液。
具体的，将0.1g/L-10g/L底物溶解于PH值为6-9、浓度为0.1mM-2mM的缓冲液，并加入1g/L-10g/L稳定剂，0.5g/L-5g/L反应促进剂形成第一混合溶液。将0.1g/L-10g/L重氮盐类显色剂溶于含有0.5g/L-10g/L有机酸有机溶剂中，并加入0.1g/L-5g/L表面活性剂形成第二混合溶液。将第一混合溶液与第二混合溶液按照1:1～9:1比例进行混合，形成白细胞酯酶溶液。
S102、将浸入所述白细胞酯酶溶液的滤纸进行沥干和转动流匀，并利用电热鼓风干燥箱对平铺在干燥托板上的所述滤纸进行烘干、裁剪和密封保存，得到白细胞酯酶检测试纸。
具体的，拿住滤纸的一端，把滤纸浸入配制好的白细胞酯酶试剂液中，在试剂液中保持约2s后取出，让试剂液自然沥干成滴后，转动滤纸270°使所述白细胞酯酶溶液在滤纸上流匀，然后把滤纸正面标记朝上平铺在干燥托板上，注意要铺平，不要有气泡，铺好后平稳地放入45℃-75℃℃的电热鼓风干燥箱中干燥(15-30)min。烘干后分裁成白细胞酯酶检测条，粘贴在基片上，分裁成条，得到白细胞酯酶检测试纸，并室温(2℃～30℃)密封保存。
本发明提供一种白细胞酯酶检测试纸，适用于所述的一种白细胞酯酶检测试纸的制备方法，所述白细胞酯酶检测试纸包括0.1g/L-10g/L底物、pH值为6-9、浓度为0.1mM-2mM的缓冲液、1g/L-10g/L稳定剂、0.5g/L-5g/L反应促成剂、0.1g/L-10g/L显色剂、0.5g/L-10g/L有机酸、10％-50％(体积分数)有机溶剂、0.1g/L-5g/L表面活性剂和滤纸。
在本实施方式中，所述白细胞酯酶检测试纸包括0.1g/L-10g/L底物、pH值为6-9、浓度为0.1mM-2mM的缓冲液、1g/L-10g/L稳定剂、0.5g/L-5g/L反应促成剂、0.1g/L-10g/L显色剂、0.5g/L-10g/L有机酸、10％-50％(体积分数)有机溶剂、0.1g/L-5g/L表面活性剂和滤纸；所述的底物为吲哚酚酯类及其衍生物或吡咯酚酯类及其衍生物；所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液或硼酸-TRIS缓冲液中的一种或多种；所述稳定剂为乙二胺四乙酸钠盐或是钾盐、三-吗啉基氧化膦、维生素C乙基醚中的一种或多种；所述反应促进剂为氯化钠、硫氰化钾中的一种或两种组合；所述显色剂为重氮盐类试剂；所述有机酸为酒石酸、苯甲酸、柠檬酸、苹果酸等中的一种或多种；所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中的一种或多种；所述的表面活性剂为曲拉通X-100、OP乳化剂、吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、聚乙二醇中的一种或多种；所述滤纸为棉纤维滤纸或玻纤滤纸。
请参阅图2，本发明提供一种白细胞酯酶检测试纸的检测方法，应用于所述的一种白细胞酯酶检测试纸，所述白细胞酯酶检测试纸应用于尿白细胞酯酶检测和阴道分泌物白细胞酯酶检测，包括以下步骤：
S201、将所述白细胞酯酶检测试纸浸入尿液样品中，并在2秒后取出沥干，根据1分钟内所述白细胞酯酶检测试纸的颜色变化，判断所述尿白细胞酯酶检测结果。
具体的，取白细胞酯酶检测试纸，浸入尿液试管或样品杯中，试纸块完全浸没2s取出，在滤纸上滤干多于的尿样与室温下反应1min观察白细胞酯酶试纸块颜色变化，试纸块由无色或浅黄色变成紫色、紫红色、深紫色，即判断为白细胞酯酶为阳性结果。
S202、将获取的阴道分泌物样本按照规定进行稀释，并滴加一滴稀释后的样本至所述白细胞酯酶检测试纸上，根据1分钟内所述白细胞酯酶检测试纸的颜色变化，判断所述阴道分泌物白细胞酯酶检测结果。
具体的，取按规定稀释好的阴道分泌物样本，滴加一滴在试纸上，与室温下反应1min观察白细胞酯酶试纸块颜色变化，试纸块由无色或浅黄色变成紫色、紫红色、深紫色，即判断为白细胞酯酶为阳性结果。
白细胞酯酶滤纸干片上，底物(吲哚酚酯类及其衍生物或吡咯酚酯类及其衍生物)经白细胞酯酶水解，其产物之一在空气中氧作用下发生自我聚合后呈蓝绿色或蓝色，呈色深度与白细胞酯酶活性成正比。这一步的反应须在空气中自动聚合显色，反应速度慢，需要在37℃孵育10min-15min才能达到反应检测要求。若在白细胞酯酶反应中加入重氮盐，反应产物与重氮盐发生重氮偶尔反应，阳性反应呈紫红色，阴性为无色，反应速度缩短至1min且在室温下可以进行，显色明显，便于鉴别。
在试剂液配方中，反应底物与重氮盐在水剂溶解度不一致，若直接采用水作为缓冲溶液，溶解困难。因此传统做法是分两步操作，先进行水剂溶剂浸制烘干滤纸，然后再进行有机溶剂浸制烘干形成白细胞酯酶检测试纸，操作繁琐。本发明通过非离子型表面活性的作用，将水剂与有机溶剂两部分结合，简化操作步骤。
重氮盐受金属离子或具有氧化性的物质影响，稳定性变差，因此乙二胺四乙酸钠盐或是钾盐，三-吗啉基氧化膦，维生素C乙基醚可有效去除干扰，提高试纸稳定性。
白细胞酯酶是中性粒细胞质中含有的特异性酯酶。尿液和阴道分泌物中白细胞酯酶多为中性粒细胞释放出的酯酶，在健康状态下含量低，因此一般引起人体白细胞酯酶指标升高的原因大多都是生殖泌尿系统的炎症，可同时用于检测人体尿液和女性阴道分泌物中白细胞酯酶，可作为尿路感染筛查和阴道炎症辅助评判指标。
有益效果
1.本发明提供的白细胞酯酶快速检测试纸可同时用于检测人体尿液和女性阴道分泌物中白细胞酯酶，可作为尿路感染筛查和阴道炎症辅助评判指标，适用于门诊筛查和个人健康监测，应用广泛。
2.本发明提供白细胞酯酶检测试纸在常温条件反应时间为1min，检测速度快，无需孵育，灵敏度高，特性好，操作简单，成本低，结果准确可靠。
3.本发明检测试纸制备方法：将反应底物水相与重氮盐显色剂有机相进行混合，表面活性剂增加两相均匀性，维生素C乙基醚，三吗啉基氧化膦具有稳定左右，可保证白细胞酯酶试剂液在常温条件下存放时间长。无需进行多次干燥，一次干燥形成白细胞酯酶检测试纸，制备工艺简单。
本发明的一种白细胞酯酶检测试纸、制备方法及检测方法，所述白细胞酯酶检测试纸包括0.1g/L-10g/L底物、pH值为6-9、浓度为0.1mM-2mM的缓冲液、1g/L-10g/L稳定剂、0.5g/L-5g/L反应促成剂、10％-50％(体积分数)显色剂、0.5g/L-10g/L有机酸、0.1g/L-10g/L有机溶剂、0.1g/L-5g/L表面活性剂和滤纸，基于制备要求，将获取的底物和显色剂分别制成两种混合溶液，并按照设定的混合比例将两种混合溶液进行混合，得到白细胞酯酶溶液；将浸入所述白细胞酯酶溶液的滤纸进行沥干和转动流匀，并利用电热鼓风干燥箱对平铺在干燥托板上的所述滤纸进行烘干、裁剪和密封保存，得到白细胞酯酶检测试纸，将得到的所述白细胞酯酶检测试纸分别用于尿白细胞酯酶检测和阴道分泌物白细胞酯酶检测，根据试纸颜色变化得到检测结果，操作简单，应用广泛。
以上所揭露的仅为本发明一种较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。
Claims (7)
1.一种白细胞酯酶检测试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
基于制备要求，将获取的底物和显色剂分别制成两种混合溶液，并按照设定的混合比例将两种混合溶液进行混合，得到白细胞酯酶溶液；
将浸入所述白细胞酯酶溶液的滤纸进行沥干和转动流匀，并利用电热鼓风干燥箱对平铺在干燥托板上的所述滤纸进行烘干、裁剪和密封保存，得到白细胞酯酶检测试纸。
2.如权利要求1所述的白细胞酯酶检测试纸的制备方法，其特征在于，基于制备要求，将获取的底物和显色剂分别制成两种混合溶液，并按照设定的混合比例将两种混合溶液进行混合，得到白细胞酯酶溶液，包括：
将0.1g/L-10g/L底物溶解于pH值为6-9、浓度为0.1mM-2mM的缓冲液，并加入1g/L-10g/L稳定剂和0.5g/L-5g/L反应促进剂形成第一混合溶液；
将0.1g/L-10g/L显色剂溶于含有0.5g/L-10g/L有机酸的有机溶剂中，并加入0.1g/L-5g/L表面活性剂形成第二混合溶液；
按照设定的混合比例将所述第一混合溶液和所述第二混合溶液进行混合，得到白细胞酯酶溶液。
3.如权利要求2所述的白细胞酯酶检测试纸的制备方法，其特征在于，按照设定的混合比例将所述第一混合溶液和所述第二混合溶液进行混合，得到白细胞酯酶溶液，包括：
按照1:1～9:1的体积比，将所述第一混合溶液和所述第二混合溶液进行混合，得到白细胞酯酶溶液。
4.如权利要求1所述的白细胞酯酶检测试纸的制备方法，其特征在于，将浸入所述白细胞酯酶溶液的滤纸进行沥干和转动流匀，并利用电热鼓风干燥箱对平铺在干燥托板上的所述滤纸进行烘干、裁剪和密封保存，得到白细胞酯酶检测试纸之前，所述方法还包括：
将获取的滤纸浸入所述白细胞酯酶溶液中浸泡2秒。
5.如权利要求4所述的白细胞酯酶检测试纸的制备方法，其特征在于，将浸入所述白细胞酯酶溶液的滤纸进行沥干和转动流匀，并利用电热鼓风干燥箱对平铺在干燥托板上的所述滤纸进行烘干、裁剪和密封保存，得到白细胞酯酶检测试纸，包括：
将进入所述白细胞酯酶溶液中的所述滤纸取出自然沥干成滴，并转动所述滤纸270°使所述白细胞酯酶溶液在所述滤纸上流匀；
将所述滤纸平铺在干燥托板上，并放入45℃-75℃的电热鼓风干燥箱中干燥15-30min，以及在烘干结束后，将所述滤纸粘贴在基板上，分裁成条，室温下将得到的白细胞酯酶检测试纸密封保存。
6.一种白细胞酯酶检测试纸，适用于如权利要求1至权利要求5任一项所述的一种白细胞酯酶检测试纸的制备方法，其特征在于，
所述白细胞酯酶检测试纸包括0.1g/L-10g/L底物、pH值为6-9、浓度为0.1mM-2mM的缓冲液、1g/L-10g/L稳定剂、0.5g/L-5g/L反应促成剂、0.1g/L-10g/L显色剂、0.5g/L-10g/L有机酸、体积分数为10％-50％的有机溶剂、0.1g/L-5g/L表面活性剂和滤纸。
7.一种白细胞酯酶检测试纸的检测方法，应用于如权利要求6所述的一种白细胞酯酶检测试纸，其特征在于，所述白细胞酯酶检测试纸应用于尿白细胞酯酶检测和阴道分泌物白细胞酯酶检测，包括以下步骤：
将所述白细胞酯酶检测试纸浸入尿液样品中，并在2秒后取出沥干，根据1分钟内所述白细胞酯酶检测试纸的颜色变化，判断所述尿白细胞酯酶检测结果；
将获取的阴道分泌物样本按照规定进行稀释，并滴加一滴稀释后的样本至所述白细胞酯酶检测试纸上，根据1分钟内所述白细胞酯酶检测试纸的颜色变化，判断所述阴道分泌物白细胞酯酶检测结果。
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