JP2001190278A - 尿路感染症関連遺伝子 - Google Patents
尿路感染症関連遺伝子Info
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 配列番号２のアミノ酸配列等からなるタ
ンパク質をコードする遺伝子；配列番号１の塩基配列を
有するＤＮＡ等又はそのフラグメントを含有する組み換
えベクター；配列番号２のアミノ酸配列等からなるタン
パク質；配列番号１の塩基配列を有するＤＮＡ等又はそ
れらのフラグメントを用いることを特徴とする遺伝子ｕ
ｐｓの検出法；配列番号２のアミノ酸配列からなるタン
パク質等又はこれらのフラグメントに対する抗体を用い
ることを特徴とするタンパク質ＵＳＰの検出法。 【効果】 本発明の遺伝子ｕｓｐ及びそれによりコード
されるタンパク質ＵＳＰは、尿路病原性大腸菌中に存在
する特異的因子であり、尿路感染症を遺伝子レベル及び
免疫学的に診断するためのマーカーとして有用である。
ンパク質をコードする遺伝子；配列番号１の塩基配列を
有するＤＮＡ等又はそのフラグメントを含有する組み換
えベクター；配列番号２のアミノ酸配列等からなるタン
パク質；配列番号１の塩基配列を有するＤＮＡ等又はそ
れらのフラグメントを用いることを特徴とする遺伝子ｕ
ｐｓの検出法；配列番号２のアミノ酸配列からなるタン
パク質等又はこれらのフラグメントに対する抗体を用い
ることを特徴とするタンパク質ＵＳＰの検出法。 【効果】 本発明の遺伝子ｕｓｐ及びそれによりコード
されるタンパク質ＵＳＰは、尿路病原性大腸菌中に存在
する特異的因子であり、尿路感染症を遺伝子レベル及び
免疫学的に診断するためのマーカーとして有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は尿路感染症の起炎菌
となる大腸菌が産生する特異タンパク質ＵＳＰ及びそれ
をコードする遺伝子ｕｓｐ、並びに当該遺伝子又はタン
パク質の検出法に関する。
となる大腸菌が産生する特異タンパク質ＵＳＰ及びそれ
をコードする遺伝子ｕｓｐ、並びに当該遺伝子又はタン
パク質の検出法に関する。
【０００２】
【従来の技術】尿路感染症は、尿路臓器に炎症を引き起
こす細菌感染症であり、非特異性感染症と特異性感染症
に分けられ、また疾病臓器により膀胱炎、腎盂腎炎、前
立腺炎などに分類される。斯かる尿路感染症のうち、近
年結核菌、カンジダ・アクチノミコジス等を起炎菌とす
る特異性尿路感染症は減少し、その大部分が非特異性尿
路感染症となっている。非特異性尿路感染症は、大腸
菌、変形菌、緑膿菌等のグラム陰性桿菌が主な起炎菌と
なり、膀胱炎、腎盂腎炎、無症候性細菌尿症等の症状を
引き起こすが、特に急性期においてはその約８０％が大
腸菌による感染となっている。
こす細菌感染症であり、非特異性感染症と特異性感染症
に分けられ、また疾病臓器により膀胱炎、腎盂腎炎、前
立腺炎などに分類される。斯かる尿路感染症のうち、近
年結核菌、カンジダ・アクチノミコジス等を起炎菌とす
る特異性尿路感染症は減少し、その大部分が非特異性尿
路感染症となっている。非特異性尿路感染症は、大腸
菌、変形菌、緑膿菌等のグラム陰性桿菌が主な起炎菌と
なり、膀胱炎、腎盂腎炎、無症候性細菌尿症等の症状を
引き起こすが、特に急性期においてはその約８０％が大
腸菌による感染となっている。
【０００３】従って、尿路感染症の診断においては、尿
中の大腸菌を的確に検出することが重要となるが、従
来、尿路感染症の診断は、尿中の細菌を定量培養するこ
とにより行われていた。すなわち患者尿を希釈して適当
な細菌培養用培地上で培養し、コロニー数を計測して細
菌数を測定し、一定数以上の細菌数が確認された場合、
尿路感染症と診断していた。
中の大腸菌を的確に検出することが重要となるが、従
来、尿路感染症の診断は、尿中の細菌を定量培養するこ
とにより行われていた。すなわち患者尿を希釈して適当
な細菌培養用培地上で培養し、コロニー数を計測して細
菌数を測定し、一定数以上の細菌数が確認された場合、
尿路感染症と診断していた。
【０００４】しかし、斯かる診断方法は、細菌数を正確
に把握できるものの、通常一昼夜の培養時間が必要であ
ることから、尿路感染症が確定しないにも拘わらず不要
で過剰な薬剤が投与されがちであり、耐性菌の出現を助
長する原因にもなっていた。従って、できるだけ迅速に
尿路感染症であることを診断できる診断キットの開発が
望まれていた。
に把握できるものの、通常一昼夜の培養時間が必要であ
ることから、尿路感染症が確定しないにも拘わらず不要
で過剰な薬剤が投与されがちであり、耐性菌の出現を助
長する原因にもなっていた。従って、できるだけ迅速に
尿路感染症であることを診断できる診断キットの開発が
望まれていた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、迅速且つ確
実に尿路感染症を診断するためのマーカーとなり得るタ
ンパク質、並びに当該タンパク質をコードする遺伝子を
提供することを目的とする。
実に尿路感染症を診断するためのマーカーとなり得るタ
ンパク質、並びに当該タンパク質をコードする遺伝子を
提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、斯かる実
状に鑑み、非特異性尿路感染症の起炎菌である大腸菌に
ついて、コレラ菌が産生する毒素ＺＯＴをコードするｚ
ｏｔ遺伝子の一部の塩基配列を有するＤＮＡ断片をプロ
ーブとして用い、遺伝子レベルで解析したところ、尿路
病原性大腸菌のＤＮＡ中に特有のタンパク質（ＵＳＰ）
をコードする遺伝子（ｕｓｐ）が存在することを発見
し、当該タンパク質ＵＳＰ又はこれをコードする遺伝子
ｕｓｐを測定することにより尿路感染症を簡易に診断で
きることを見出し、本発明を完成するに至った。
状に鑑み、非特異性尿路感染症の起炎菌である大腸菌に
ついて、コレラ菌が産生する毒素ＺＯＴをコードするｚ
ｏｔ遺伝子の一部の塩基配列を有するＤＮＡ断片をプロ
ーブとして用い、遺伝子レベルで解析したところ、尿路
病原性大腸菌のＤＮＡ中に特有のタンパク質（ＵＳＰ）
をコードする遺伝子（ｕｓｐ）が存在することを発見
し、当該タンパク質ＵＳＰ又はこれをコードする遺伝子
ｕｓｐを測定することにより尿路感染症を簡易に診断で
きることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】すなわち、本発明は、配列番号２のアミノ
酸配列又は当該アミノ酸配列において、１若しくは数個
のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配
列からなるタンパク質をコードする遺伝子を提供するも
のである。
酸配列又は当該アミノ酸配列において、１若しくは数個
のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配
列からなるタンパク質をコードする遺伝子を提供するも
のである。
【０００８】また本発明は、配列番号１の塩基配列を有
するＤＮＡ若しくは当該ＤＮＡと８０％以上の相同性を
有するＤＮＡ又はそれらのフラグメントを含有する組み
換えベクターを提供するものである。
するＤＮＡ若しくは当該ＤＮＡと８０％以上の相同性を
有するＤＮＡ又はそれらのフラグメントを含有する組み
換えベクターを提供するものである。
【０００９】また本発明は、配列番号２のアミノ酸配列
又は当該アミノ酸配列において、１若しくは数個のアミ
ノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列から
なるタンパク質を提供するものである。
又は当該アミノ酸配列において、１若しくは数個のアミ
ノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列から
なるタンパク質を提供するものである。
【００１０】また本発明は、配列番号１の塩基配列を有
するＤＮＡ若しくは当該ＤＮＡと８０％以上の相同性を
有するＤＮＡ又はそれらのフラグメントを用いることを
特徴とするｕｓｐ遺伝子の検出法を提供するものであ
る。
するＤＮＡ若しくは当該ＤＮＡと８０％以上の相同性を
有するＤＮＡ又はそれらのフラグメントを用いることを
特徴とするｕｓｐ遺伝子の検出法を提供するものであ
る。
【００１１】更に本発明は、配列番号２のアミノ酸配列
若しくは当該アミノ酸配列において、１若しくは数個の
アミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列
からなるタンパク質又はこれらのフラグメントに対する
抗体を用いることを特徴とするＵＳＰタンパク質の検出
法を提供するものである。
若しくは当該アミノ酸配列において、１若しくは数個の
アミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列
からなるタンパク質又はこれらのフラグメントに対する
抗体を用いることを特徴とするＵＳＰタンパク質の検出
法を提供するものである。
【００１２】
【発明の実施の形態】本発明における遺伝子ｕｓｐは、
例えば尿路病原性大腸菌の全ＤＮＡ又はｃＤＮＡを数種
類の制限酵素で切断して調整したＤＮＡ又はｃＤＮＡラ
イブラリーに対して、ｕｓｐ検出用ＤＮＡプローブを用
いてスクリーニングすることにより単離することができ
る。
例えば尿路病原性大腸菌の全ＤＮＡ又はｃＤＮＡを数種
類の制限酵素で切断して調整したＤＮＡ又はｃＤＮＡラ
イブラリーに対して、ｕｓｐ検出用ＤＮＡプローブを用
いてスクリーニングすることにより単離することができ
る。
【００１３】具体的には、尿路病原性大腸菌の全ＤＮＡ
を例えばＢａｍＨＩ、ＣｌａＩ等で切断し、得られたＤ
ＮＡ断片をそれぞれｐＭＷ１１８等のプラスミドの当該
制限酵素切断部位に挿入し、この組み換えプラスミドを
大腸菌にトランスフォームさせ、該トランスフォーム大
腸菌に対して、ｕｓｐ検出用ＤＮＡプローブを用いて常
法に従ってコロニーハイブリダイゼーションを行うこと
によりｕｓｐ遺伝子断片を単離、精製することができ
る。
を例えばＢａｍＨＩ、ＣｌａＩ等で切断し、得られたＤ
ＮＡ断片をそれぞれｐＭＷ１１８等のプラスミドの当該
制限酵素切断部位に挿入し、この組み換えプラスミドを
大腸菌にトランスフォームさせ、該トランスフォーム大
腸菌に対して、ｕｓｐ検出用ＤＮＡプローブを用いて常
法に従ってコロニーハイブリダイゼーションを行うこと
によりｕｓｐ遺伝子断片を単離、精製することができ
る。
【００１４】ここで用いられるｕｓｐ検出用ＤＮＡプロ
ーブは、配列番号３のＤＮＡ断片をＴＡクローニングに
よりｐＣＲTM２．１に挿入し、得られた組み換えプラス
ミドＤＮＡをＥｃｏＲＩで切断して生じる約４００ｂｐ
のＤＮＡ断片である。
ーブは、配列番号３のＤＮＡ断片をＴＡクローニングに
よりｐＣＲTM２．１に挿入し、得られた組み換えプラス
ミドＤＮＡをＥｃｏＲＩで切断して生じる約４００ｂｐ
のＤＮＡ断片である。
【００１５】当該配列番号３のＤＮＡ断片は、コレラ菌
が産生する毒素ＺＯＴをコードする遺伝子中のプリンＮ
ＴＰ−バイディングモチーフ（Koonin, E. V. (1992) F
EBSLetts 312; 3-6.）のうちの一つを元にして作製され
たものであり（図１）、当該ＤＮＡを含有するｕｓｐ検
出用ＤＮＡプローブは、３７８株の尿路病原性大腸菌に
対するサザーンハブリダイゼーションにおいて、膀胱炎
患者由来株では１９５株中１５５株（７９．５％）、腎
盂腎炎患者由来株では７６株中７１株（９３．４％）、
前立腺炎患者由来株では１０７株中９５株（８８．８
％）に反応性を示すが、健常人糞便由来の大腸菌とは２
４％しか反応性を示さないものである。
が産生する毒素ＺＯＴをコードする遺伝子中のプリンＮ
ＴＰ−バイディングモチーフ（Koonin, E. V. (1992) F
EBSLetts 312; 3-6.）のうちの一つを元にして作製され
たものであり（図１）、当該ＤＮＡを含有するｕｓｐ検
出用ＤＮＡプローブは、３７８株の尿路病原性大腸菌に
対するサザーンハブリダイゼーションにおいて、膀胱炎
患者由来株では１９５株中１５５株（７９．５％）、腎
盂腎炎患者由来株では７６株中７１株（９３．４％）、
前立腺炎患者由来株では１０７株中９５株（８８．８
％）に反応性を示すが、健常人糞便由来の大腸菌とは２
４％しか反応性を示さないものである。
【００１６】上記のようにして得られた目的の遺伝子ｕ
ｓｐを含むＤＮＡ断片について、常法に従って制限酵素
地図を作製し（図２）、サンガー法等の通常汎用される
塩基配列決定方法を用いることにより全塩基配列を決定
することができ（配列番号１）、更に当該塩基配列から
予想されるタンパク質のアミノ酸配列を決定することが
できる（配列番号２）。
ｓｐを含むＤＮＡ断片について、常法に従って制限酵素
地図を作製し（図２）、サンガー法等の通常汎用される
塩基配列決定方法を用いることにより全塩基配列を決定
することができ（配列番号１）、更に当該塩基配列から
予想されるタンパク質のアミノ酸配列を決定することが
できる（配列番号２）。
【００１７】また、塩基配列中のタンパク質をコードす
る領域（ＯＲＦ）の存在は、塩基配列をコンピューター
プログラムを用いて解析する汎用の方法により確認する
ことができ、本発明者らは、該配列中に一つのＯＲＦを
見いだし、この遺伝子を遺伝子ｕｓｐ、該遺伝子にコー
ドされるタンパク質をＵＳＰと命名した。
る領域（ＯＲＦ）の存在は、塩基配列をコンピューター
プログラムを用いて解析する汎用の方法により確認する
ことができ、本発明者らは、該配列中に一つのＯＲＦを
見いだし、この遺伝子を遺伝子ｕｓｐ、該遺伝子にコー
ドされるタンパク質をＵＳＰと命名した。
【００１８】斯かる遺伝子ｕｓｐ及びタンパク質ＵＳＰ
は、尿路病原性大腸菌によく見られる一群の病原因子
（sfa、afaI、aer、hyl、cnf1、pil、pap等）とは、ホ
モロジーがなく、また既報の如何なる塩基又はアミノ酸
配列ともホモロジーを示すものではない。更に、当該遺
伝子ｕｓｐをｐＭＷ１１８ベクターに挿入し、大腸菌に
トランスフォームさせたものでマウスにおける尿路感染
症の感染実験を行ったところ、該遺伝子を挿入せずベク
ターのみトランスフォームした大腸菌では、１×１０8
個の大腸菌を用いても感染を成立させることはできなか
ったが、遺伝子ｕｓｐを含むベクターをトランスフォー
ムしたものは、６．５×１０6個の菌数で感染が成立し
た。従って、本発明の遺伝子ｕｓｐ及びそれによりコー
ドされるタンパク質ＵＳＰは尿路感染症に特異的な因子
であると考えられる。
は、尿路病原性大腸菌によく見られる一群の病原因子
（sfa、afaI、aer、hyl、cnf1、pil、pap等）とは、ホ
モロジーがなく、また既報の如何なる塩基又はアミノ酸
配列ともホモロジーを示すものではない。更に、当該遺
伝子ｕｓｐをｐＭＷ１１８ベクターに挿入し、大腸菌に
トランスフォームさせたものでマウスにおける尿路感染
症の感染実験を行ったところ、該遺伝子を挿入せずベク
ターのみトランスフォームした大腸菌では、１×１０8
個の大腸菌を用いても感染を成立させることはできなか
ったが、遺伝子ｕｓｐを含むベクターをトランスフォー
ムしたものは、６．５×１０6個の菌数で感染が成立し
た。従って、本発明の遺伝子ｕｓｐ及びそれによりコー
ドされるタンパク質ＵＳＰは尿路感染症に特異的な因子
であると考えられる。
【００１９】タンパク質ＵＳＰは、配列番号２に示され
るように３４６個のアミノ酸残基からなる、分子量３８
６５９ダルトンのタンパク質である。斯かる本発明のタ
ンパク質ＵＳＰを大腸菌で発現させるには、ＵＳＰをコ
ードするＤＮＡを、適当なプロモーター（例えば、ｔｒ
ｐプロモーター、ｌａｃプロモーター、λｐＬプロモー
ター等）の下流に接続し、大腸菌内で機能するベクター
（例えば、ｐＱＥ６０、ｐＯＵ７１等）に挿入して発現
プラスミドを構築する。次に、この発現プラスミドで形
質転換した大腸菌（例えば、Ｍ１５、ＨＢ１０１株等）
を適当な培地で培養して、その菌体より目的とするタン
パク質ＵＳＰを得ることができる。また、バクテリアの
シグナルペプチドを利用すれば、ペリプラズム中に目的
とするタンパク質を分泌させることもできる。更に、他
のタンパク質との融合タンパクを生産することもでき
る。
るように３４６個のアミノ酸残基からなる、分子量３８
６５９ダルトンのタンパク質である。斯かる本発明のタ
ンパク質ＵＳＰを大腸菌で発現させるには、ＵＳＰをコ
ードするＤＮＡを、適当なプロモーター（例えば、ｔｒ
ｐプロモーター、ｌａｃプロモーター、λｐＬプロモー
ター等）の下流に接続し、大腸菌内で機能するベクター
（例えば、ｐＱＥ６０、ｐＯＵ７１等）に挿入して発現
プラスミドを構築する。次に、この発現プラスミドで形
質転換した大腸菌（例えば、Ｍ１５、ＨＢ１０１株等）
を適当な培地で培養して、その菌体より目的とするタン
パク質ＵＳＰを得ることができる。また、バクテリアの
シグナルペプチドを利用すれば、ペリプラズム中に目的
とするタンパク質を分泌させることもできる。更に、他
のタンパク質との融合タンパクを生産することもでき
る。
【００２０】本発明においては、配列番号１のＤＮＡと
ストリンジェンドな条件下でハイブリダイズし、かつ尿
路感染性タンパク質をコードするＤＮＡであって、少な
くとも８０％以上の塩基配列上の相同性を有するもので
あれば、配列番号１に示したＤＮＡ配列と多少相違して
いてもその範囲に包含されるものである。具体的には遺
伝子ｕｓｐの塩基配列において、一又は複数個の塩基の
欠損、付加（挿入）、置換等が認められる変異型遺伝
子、例えば自然界で発見される変異型遺伝子、人為的に
改変した変異型遺伝子、異種生物由来の相同遺伝子等が
含まれる。
ストリンジェンドな条件下でハイブリダイズし、かつ尿
路感染性タンパク質をコードするＤＮＡであって、少な
くとも８０％以上の塩基配列上の相同性を有するもので
あれば、配列番号１に示したＤＮＡ配列と多少相違して
いてもその範囲に包含されるものである。具体的には遺
伝子ｕｓｐの塩基配列において、一又は複数個の塩基の
欠損、付加（挿入）、置換等が認められる変異型遺伝
子、例えば自然界で発見される変異型遺伝子、人為的に
改変した変異型遺伝子、異種生物由来の相同遺伝子等が
含まれる。
【００２１】また本発明には、本発明の遺伝子と選択的
にハイブリダイズし得る核酸、例えばアンチセンスＤＮ
Ａ、アンチセンスＲＮＡ又はリボザイム等が含まれる。
にハイブリダイズし得る核酸、例えばアンチセンスＤＮ
Ａ、アンチセンスＲＮＡ又はリボザイム等が含まれる。
【００２２】また本発明においては、遺伝子ｕｓｐと相
同性の高い変異体遺伝子にコードされるタンパク質であ
って尿路感染性を有するタンパク質、或いはタンパク質
ＵＳＰと免疫学的同等性を有するタンパク質もまた包含
されるものである。具体的には、タンパク質ＵＳＰのア
ミノ酸配列においてその一部が欠損したもの、その一部
が他のアミノ酸と置換したもの、及びその一部に他のア
ミノ酸が付加または挿入されたもの等が挙げられ、自然
界で発見される変異型ポリペプチドの他、人為的に改変
した変異ポリペプチド、異種生物由来で同様の生物活性
を有する相同タンパク質等が含まれる。
同性の高い変異体遺伝子にコードされるタンパク質であ
って尿路感染性を有するタンパク質、或いはタンパク質
ＵＳＰと免疫学的同等性を有するタンパク質もまた包含
されるものである。具体的には、タンパク質ＵＳＰのア
ミノ酸配列においてその一部が欠損したもの、その一部
が他のアミノ酸と置換したもの、及びその一部に他のア
ミノ酸が付加または挿入されたもの等が挙げられ、自然
界で発見される変異型ポリペプチドの他、人為的に改変
した変異ポリペプチド、異種生物由来で同様の生物活性
を有する相同タンパク質等が含まれる。
【００２３】本発明の配列番号１の塩基配列を有するＤ
ＮＡ若しくは当該ＤＮＡと８０％以上の相同性を有する
ＤＮＡ又はそのフラグメントを含有する組み換えベクタ
ーとしては、複製起点（ｏｒｉ領域）を含む複製ベクタ
ー、プロモーター領域、プロモーターの制御因子、ＲＮ
Ａのスプライス部位、ポリアデニル化部位又は転写終結
配列等を含む発現ベクターが挙げられる。斯かるベクタ
ーの具体例としては、ベクターの具体例としてはｐＢＲ
３２２、ｐＫＫ２２３−３、ｐＧＥＸシリーズ、ｐＭＣ
１８７１、ｐＯＵ７１、ｐＭＡＬ−２ｃ等のプラスミド
ベクター、λｇｔ１１、λＥｘＣｅｌｌ等のファージベ
クターが挙げられる。斯かるベクターは、例えばＤＮＡ
に相当するＲＮＡを調製するため、宿主細胞を形質転換
するために用いられる。宿主細胞としては、例えば細
菌、酵母、昆虫細胞、哺乳動物細胞が挙げられ、用いる
ベクターに合わせて適当な宿主細胞を選択すればよい。
ＮＡ若しくは当該ＤＮＡと８０％以上の相同性を有する
ＤＮＡ又はそのフラグメントを含有する組み換えベクタ
ーとしては、複製起点（ｏｒｉ領域）を含む複製ベクタ
ー、プロモーター領域、プロモーターの制御因子、ＲＮ
Ａのスプライス部位、ポリアデニル化部位又は転写終結
配列等を含む発現ベクターが挙げられる。斯かるベクタ
ーの具体例としては、ベクターの具体例としてはｐＢＲ
３２２、ｐＫＫ２２３−３、ｐＧＥＸシリーズ、ｐＭＣ
１８７１、ｐＯＵ７１、ｐＭＡＬ−２ｃ等のプラスミド
ベクター、λｇｔ１１、λＥｘＣｅｌｌ等のファージベ
クターが挙げられる。斯かるベクターは、例えばＤＮＡ
に相当するＲＮＡを調製するため、宿主細胞を形質転換
するために用いられる。宿主細胞としては、例えば細
菌、酵母、昆虫細胞、哺乳動物細胞が挙げられ、用いる
ベクターに合わせて適当な宿主細胞を選択すればよい。
【００２４】本発明の遺伝子ｕｓｐ若しくは当該ＤＮＡ
と８０％以上の相同性を有するＤＮＡ又はそれらのフラ
グメントは、該ヌクレオチドを標識した核酸プローブと
することにより、尿路感染症を遺伝子レベルで診断する
ための検出試薬となり得る。
と８０％以上の相同性を有するＤＮＡ又はそれらのフラ
グメントは、該ヌクレオチドを標識した核酸プローブと
することにより、尿路感染症を遺伝子レベルで診断する
ための検出試薬となり得る。
【００２５】ここで、遺伝子ｕｓｐ若しくは当該ＤＮＡ
と８０％以上の相同性を有するＤＮＡのフラグメントと
は、少なくとも２４塩基、好ましくは少なくとも１５塩
基、より好ましくは少なくとも８塩基の連続する部分を
意味する。
と８０％以上の相同性を有するＤＮＡのフラグメントと
は、少なくとも２４塩基、好ましくは少なくとも１５塩
基、より好ましくは少なくとも８塩基の連続する部分を
意味する。
【００２６】標識法としては、一般的に放射性同位元
素、酵素、蛍光色素、着色色素、発光性物質、金属コロ
イド、ラテックス等による方法が挙げられ、またヌクレ
オチドをビオチンで標識した後、上述したような標識物
で標識されたアビジン或いはストレプトアビジンと結合
させることにより標識することも可能である。
素、酵素、蛍光色素、着色色素、発光性物質、金属コロ
イド、ラテックス等による方法が挙げられ、またヌクレ
オチドをビオチンで標識した後、上述したような標識物
で標識されたアビジン或いはストレプトアビジンと結合
させることにより標識することも可能である。
【００２７】また、本発明の遺伝子ｕｓｐ若しくは当該
ＤＮＡと８０％以上の相同性を有するＤＮＡ又はそれら
のフラグメントは、ＰＣＲ用のプライマーとして用いる
ことにより、非常に少量の尿路感染症を惹起する大腸菌
のヌクレオチドの全部又は一部を増幅させ検出すること
が可能となる。
ＤＮＡと８０％以上の相同性を有するＤＮＡ又はそれら
のフラグメントは、ＰＣＲ用のプライマーとして用いる
ことにより、非常に少量の尿路感染症を惹起する大腸菌
のヌクレオチドの全部又は一部を増幅させ検出すること
が可能となる。
【００２８】更に、本発明のタンパク質ＵＳＰに対する
抗体検出法を用いること、或いは本発明のタンパク質Ｕ
ＳＰ若しくはそのアミノ酸配列において１若しくは数個
のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配
列からなるタンパク質又はそれらのフラグメントに対す
るモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体を取得
し、当該抗体を用いて酵素免疫測定法、イムノクロマト
法（テストストリップ法）、ラジオイムノアッセイ法等
の一般公知の検出法を利用したＵＳＰタンパク質又は類
似の構造若しくは免疫原性を有するポリペプチドの検出
法を用いることにより、尿路感染症の免疫学的診断が可
能となる。
抗体検出法を用いること、或いは本発明のタンパク質Ｕ
ＳＰ若しくはそのアミノ酸配列において１若しくは数個
のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配
列からなるタンパク質又はそれらのフラグメントに対す
るモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体を取得
し、当該抗体を用いて酵素免疫測定法、イムノクロマト
法（テストストリップ法）、ラジオイムノアッセイ法等
の一般公知の検出法を利用したＵＳＰタンパク質又は類
似の構造若しくは免疫原性を有するポリペプチドの検出
法を用いることにより、尿路感染症の免疫学的診断が可
能となる。
【００２９】ここで、タンパク質ＵＳＰ若しくはそのア
ミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、
置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるタンパク
質又はそれらのフラグメントとは、タンパク質ＵＳＰ又
はそれと相同生のあるタンパク質の少なくとも８アミノ
酸、好ましくは少なくとも５アミノ酸の連続した部分を
意味する。
ミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、
置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるタンパク
質又はそれらのフラグメントとは、タンパク質ＵＳＰ又
はそれと相同生のあるタンパク質の少なくとも８アミノ
酸、好ましくは少なくとも５アミノ酸の連続した部分を
意味する。
【００３０】また、抗体検出法においては、抗原を直
接、放射性同位元素、酵素、蛍光色素、着色色素、発光
性物質、金属コロイド、ラテックスで標識したものと、
固相に抗原を結合させたものとで構成される場合と、抗
原を固相に結合させたものと測定対象とする動物種の抗
体に特異的に結合する他の動物種の抗体を標識したもの
により構成される場合があるが、何れの方法も適用でき
る。また、後者の場合においては、測定対象とする動物
種の抗体に特異的に結合する他の動物種の抗体を標識し
たもののかわりに、ＩｇＧに特異的に結合するプロテイ
ンＡ或いはプロテインＧを標識したものを用いることが
できる。
接、放射性同位元素、酵素、蛍光色素、着色色素、発光
性物質、金属コロイド、ラテックスで標識したものと、
固相に抗原を結合させたものとで構成される場合と、抗
原を固相に結合させたものと測定対象とする動物種の抗
体に特異的に結合する他の動物種の抗体を標識したもの
により構成される場合があるが、何れの方法も適用でき
る。また、後者の場合においては、測定対象とする動物
種の抗体に特異的に結合する他の動物種の抗体を標識し
たもののかわりに、ＩｇＧに特異的に結合するプロテイ
ンＡ或いはプロテインＧを標識したものを用いることが
できる。
【００３１】また、モノクローナル抗体は、タンパク質
ＵＳＰ若しくはそのアミノ酸配列において１若しくは数
個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸
配列からなるタンパク質又はそれらのフラグメントを抗
原として用い、通常のハイブリドーマ法などの技術によ
り製造できる。ポリクローナル抗体は、宿主動物（例え
ば、ウサギ、マウス、ヤギ、ヒツジ、ウマ、ニワトリ
等）に、本発明のタンパク質又はそのフラグメント等を
接種し、免疫血清を回収する等の通常の方法により製造
することができる。
ＵＳＰ若しくはそのアミノ酸配列において１若しくは数
個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸
配列からなるタンパク質又はそれらのフラグメントを抗
原として用い、通常のハイブリドーマ法などの技術によ
り製造できる。ポリクローナル抗体は、宿主動物（例え
ば、ウサギ、マウス、ヤギ、ヒツジ、ウマ、ニワトリ
等）に、本発明のタンパク質又はそのフラグメント等を
接種し、免疫血清を回収する等の通常の方法により製造
することができる。
【００３２】斯かる免疫学的な検出法は、遺伝子工学的
な方法と異なり、検体の前処理が不要である場合が多
く、遺伝子工学的な方法に比べ迅速に尿路感染症を惹起
している菌を特定することができるという利点がある。
な方法と異なり、検体の前処理が不要である場合が多
く、遺伝子工学的な方法に比べ迅速に尿路感染症を惹起
している菌を特定することができるという利点がある。
【００３３】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳細に説
明する。
明する。
【００３４】参考例１ zot DNA probeの調製 唐沢らの方法(Karasawa, T., Mihara, T., Kurazono,
H., Nair, G. B., Garg, S., Ramamurthy, T., and Tak
eda, Y. (1993) FEMS Microbiol. Lett. 106; 143-14
6.)に従った。すなわち、Vibrio cholerae O1 GP14株由
来のｚｏｔの一部分（７９０ｂｐ）をｐＵＣ１１９に挿
入したｐＭＺＰ１１をＥｃｏＲＩとＰｓｔＩで切断し、
得られたＤＮＡ断片をｚｏｔに対する特異的なＤＮＡプ
ローブとして使用した。
H., Nair, G. B., Garg, S., Ramamurthy, T., and Tak
eda, Y. (1993) FEMS Microbiol. Lett. 106; 143-14
6.)に従った。すなわち、Vibrio cholerae O1 GP14株由
来のｚｏｔの一部分（７９０ｂｐ）をｐＵＣ１１９に挿
入したｐＭＺＰ１１をＥｃｏＲＩとＰｓｔＩで切断し、
得られたＤＮＡ断片をｚｏｔに対する特異的なＤＮＡプ
ローブとして使用した。
【００３５】参考例２ 尿路感染症患者由来大腸菌のzo
t DNA probeに対する反応性 上記のｚｏｔ特異プローブを用いて尿路病原性大腸菌３
７８株に対して高ストリンジェントな条件で（５０％フ
ォルムアミド、６５℃洗浄）でサザンハイブリダーゼー
ションを行ったところ、いずれの株でも反応は見られな
かった。低ストリンジェントな条件で（３０％フォルム
アミド、５０℃洗浄）でサザンハイブリダーゼーション
を再度行ったところ、前立腺患者由来株３７株が弱く反
応した。
t DNA probeに対する反応性 上記のｚｏｔ特異プローブを用いて尿路病原性大腸菌３
７８株に対して高ストリンジェントな条件で（５０％フ
ォルムアミド、６５℃洗浄）でサザンハイブリダーゼー
ションを行ったところ、いずれの株でも反応は見られな
かった。低ストリンジェントな条件で（３０％フォルム
アミド、５０℃洗浄）でサザンハイブリダーゼーション
を再度行ったところ、前立腺患者由来株３７株が弱く反
応した。
【００３６】参考例３ ｕｓｐ検出用ＤＮＡプローブの
調製 尿路感染症患者から分離された大腸菌（ＵＰＥＣ） Ｚ
４２株から調製された全ＤＮＡ１０μｌとプリンＮＴＰ
バインディングモチーフ（purine NTP bindingmotif；
図１参照）から推察される上流プライマー（配列１：Ｔ
ＣＴＴＡＴＡＡＡＡＣＧＴＣＣＧ）、下流プライマー
（配列２：ＴＴＣＡＴＣＡＡＴＡＡＡＧＡＧＡＡＡ、配
列３：ＡＡＴＧＴＴＡＧＧＣＧＴＧＧＴ（配列番号
３））１μｌ（２０ｐｍｏｌ）、デオキシヌクエオシド
３燐酸混合物（１０ｍＭｄＡＴＰ、１０ｍＭｄＣＴＰ、
１０ｍＭｄＴＴＰ、１０ｍＭｄＧＴＰを含む）１．２５
μｌ、５００ｍＭ塩化カリウム、１５ｍＭＭｇＣｌ２、
１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含む１００ｍＭトリス
−塩酸緩衝液ｐＨ８．８ ５μｌ、Ｔａｑ ＤＮＡポリ
メラーゼ（和光純薬社製）０．３μｌ（１．５Ｕ）、蒸
留水３１．２μｌを混和し、変性を９４℃で１分間、ア
ニーリングを４６℃で１．５分間、伸長反応を７２℃で
１．５分というサイクルで、２０サイクル、DNA therma
l cycler（ペーキンエルマーシータス社製）を用いてＰ
ＣＲを行った。その結果、下流プライマー配列２を用い
た場合は、特異的なバンドは認められなかったが、下流
プライマー配列３（配列番号３）を用いた場合には３９
３ｂｐの特異的なバンドが認められた。この後、２％ア
ガロースゲル電気泳動を行い、ＰＣＲ生成物をＵｌｔｒ
ａＦｒｅｅ−ＭＣ（ミリポア社製）を用いて抽出し、こ
の抽出したＤＮＡ断片をＴＡクローニングによりｐＣＲ
ＴＭ２．１（Invitrogen社製）に挿入し、この組換えプ
ラスミドＤＮＡをＥｃｏＲＩで切断して生じる約４００
ｂｐの断片をｕｓｐ検出用ＤＮＡプローブとした。
調製 尿路感染症患者から分離された大腸菌（ＵＰＥＣ） Ｚ
４２株から調製された全ＤＮＡ１０μｌとプリンＮＴＰ
バインディングモチーフ（purine NTP bindingmotif；
図１参照）から推察される上流プライマー（配列１：Ｔ
ＣＴＴＡＴＡＡＡＡＣＧＴＣＣＧ）、下流プライマー
（配列２：ＴＴＣＡＴＣＡＡＴＡＡＡＧＡＧＡＡＡ、配
列３：ＡＡＴＧＴＴＡＧＧＣＧＴＧＧＴ（配列番号
３））１μｌ（２０ｐｍｏｌ）、デオキシヌクエオシド
３燐酸混合物（１０ｍＭｄＡＴＰ、１０ｍＭｄＣＴＰ、
１０ｍＭｄＴＴＰ、１０ｍＭｄＧＴＰを含む）１．２５
μｌ、５００ｍＭ塩化カリウム、１５ｍＭＭｇＣｌ２、
１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含む１００ｍＭトリス
−塩酸緩衝液ｐＨ８．８ ５μｌ、Ｔａｑ ＤＮＡポリ
メラーゼ（和光純薬社製）０．３μｌ（１．５Ｕ）、蒸
留水３１．２μｌを混和し、変性を９４℃で１分間、ア
ニーリングを４６℃で１．５分間、伸長反応を７２℃で
１．５分というサイクルで、２０サイクル、DNA therma
l cycler（ペーキンエルマーシータス社製）を用いてＰ
ＣＲを行った。その結果、下流プライマー配列２を用い
た場合は、特異的なバンドは認められなかったが、下流
プライマー配列３（配列番号３）を用いた場合には３９
３ｂｐの特異的なバンドが認められた。この後、２％ア
ガロースゲル電気泳動を行い、ＰＣＲ生成物をＵｌｔｒ
ａＦｒｅｅ−ＭＣ（ミリポア社製）を用いて抽出し、こ
の抽出したＤＮＡ断片をＴＡクローニングによりｐＣＲ
ＴＭ２．１（Invitrogen社製）に挿入し、この組換えプ
ラスミドＤＮＡをＥｃｏＲＩで切断して生じる約４００
ｂｐの断片をｕｓｐ検出用ＤＮＡプローブとした。
【００３７】参考例４ ＵＰＥＣのｕｓｐ検出用ＤＮＡ
プローブとの反応性 ｕｓｐ検出用ＤＮＡプローブを用いて３７８株の尿路病
原性大腸菌に対して高ストリンジェントな条件でサザン
ハイブリダーゼーションを行った。その結果、膀胱炎患
者由来株では１９５株中１５５株が陽性（７９．５％）
で、腎盂腎炎患者由来株では７６株中７１株が陽性（９
３．４％）、そして前立腺炎患者由来株では１０７株中
９５株が陽性（８８．８％）であった。
プローブとの反応性 ｕｓｐ検出用ＤＮＡプローブを用いて３７８株の尿路病
原性大腸菌に対して高ストリンジェントな条件でサザン
ハイブリダーゼーションを行った。その結果、膀胱炎患
者由来株では１９５株中１５５株が陽性（７９．５％）
で、腎盂腎炎患者由来株では７６株中７１株が陽性（９
３．４％）、そして前立腺炎患者由来株では１０７株中
９５株が陽性（８８．８％）であった。
【００３８】実施例１ 遺伝子ｕｓｐのクローニング Ｚ４２の全ＤＮＡを数種類の制限酵素で切断しｕｓｐ検
出用ＤＮＡプローブをマーカーにして、サザンハイブリ
ダーゼーションを行った。その結果、７ｋｂのＢａｍＨ
ＩとＣｌａＩフラグメント両方がこのプローブに反応し
た。この結果より、全ＤＮＡをＢａｍＨＩとＣｌａＩで
切断し、それぞれ１％アガロースゲル電気泳動を行い、
それぞれ７ｋｂのＤＮＡ断片を電気泳動ゲルからＵｌｔ
ｒａｆｒｅｅ−ＭＣ（ミリポア社製）を用いて抽出し
た。これらのＤＮＡ断片をそれぞれｐＭＷ１１８のＢａ
ｍＨＩあるいはＡｃｃＩの切断部位に挿入し、このプラ
スミドを大腸菌のＪＭ１０９株にトランスフォームし
た。このトランスフォームした大腸菌を、コロニーハイ
ブリダーゼーションにより参考例３において調製したｕ
ｓｐ検出用ＤＮＡプローブを用いてトランスフォームし
た大腸菌を確認した。ここで反応性が認められた、Ｂａ
ｍＨＩ断片を挿入したプラスミドｐＮＴ０２とＣｌａＩ
断片を挿入したｐＮＴ０３を、大腸菌よりＱＩＡＧＥＮ
カラム（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いて精製した。
出用ＤＮＡプローブをマーカーにして、サザンハイブリ
ダーゼーションを行った。その結果、７ｋｂのＢａｍＨ
ＩとＣｌａＩフラグメント両方がこのプローブに反応し
た。この結果より、全ＤＮＡをＢａｍＨＩとＣｌａＩで
切断し、それぞれ１％アガロースゲル電気泳動を行い、
それぞれ７ｋｂのＤＮＡ断片を電気泳動ゲルからＵｌｔ
ｒａｆｒｅｅ−ＭＣ（ミリポア社製）を用いて抽出し
た。これらのＤＮＡ断片をそれぞれｐＭＷ１１８のＢａ
ｍＨＩあるいはＡｃｃＩの切断部位に挿入し、このプラ
スミドを大腸菌のＪＭ１０９株にトランスフォームし
た。このトランスフォームした大腸菌を、コロニーハイ
ブリダーゼーションにより参考例３において調製したｕ
ｓｐ検出用ＤＮＡプローブを用いてトランスフォームし
た大腸菌を確認した。ここで反応性が認められた、Ｂａ
ｍＨＩ断片を挿入したプラスミドｐＮＴ０２とＣｌａＩ
断片を挿入したｐＮＴ０３を、大腸菌よりＱＩＡＧＥＮ
カラム（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いて精製した。
【００３９】実施例２ 塩基配列及びアミノ酸配列の決
定 実施例１において精製したプラスミドｐＮＴ０３を、Ｘ
ｂａＩとＳａｃＩで切断し、Deletion kit（ＴＡＫＡＲ
Ａ社製）を用いて欠失変異体を調製し、Dye-terminator
sequenceing kit（パーキンエルマー社製）とABI Pris
m310（パーキンエルマー社製自動ＤＮＡ配列決定装置）
により塩基配列を決定した。この塩基配列より予測され
るアミノ酸配列をＤＮＡｓｉｓ（日立ソフトウェアエン
ジニアリング社製）により決定した。
定 実施例１において精製したプラスミドｐＮＴ０３を、Ｘ
ｂａＩとＳａｃＩで切断し、Deletion kit（ＴＡＫＡＲ
Ａ社製）を用いて欠失変異体を調製し、Dye-terminator
sequenceing kit（パーキンエルマー社製）とABI Pris
m310（パーキンエルマー社製自動ＤＮＡ配列決定装置）
により塩基配列を決定した。この塩基配列より予測され
るアミノ酸配列をＤＮＡｓｉｓ（日立ソフトウェアエン
ジニアリング社製）により決定した。
【００４０】実施例３ 感染実験 マウスを体重１ｋｇ当たり５０ｍｇになるようにネンブ
タール（アボット社製）を静脈注射により投与して麻酔
し、膀胱から尿を腹部圧迫により放尿させて膀胱を空に
した。先端をヤスリで丸めた２３ゲージの注射針を装着
したツベルクリンシリンジにバクテリア懸濁液を装填し
て、尿道を経由して膀胱にバクテリア懸濁液を接種し
た。接種後、すぐに尿道口を閉塞して5時間放置した。
一週間後、腎臓より細菌が回収できるかどうかを確認し
た。その結果、ｕｓｐＤＮＡ断片を含まないｐＭＷ１１
８（陰性コントロール）をトランスフォームした大腸菌
は、１．０×１０8個以上を接種しても感染は成立しな
かった。しかしながら、ｕｓｐＤＮＡ断片を含むｐＭＷ
１１８であるｐＮＴ０３をトランスフォームした大腸菌
では、６．５×１０6個の接種で感染が成立した。この
ことより、ｕｓｐＤＮＡ断片が尿路感染において非常に
重要な役割を果たしていることがわかった。
タール（アボット社製）を静脈注射により投与して麻酔
し、膀胱から尿を腹部圧迫により放尿させて膀胱を空に
した。先端をヤスリで丸めた２３ゲージの注射針を装着
したツベルクリンシリンジにバクテリア懸濁液を装填し
て、尿道を経由して膀胱にバクテリア懸濁液を接種し
た。接種後、すぐに尿道口を閉塞して5時間放置した。
一週間後、腎臓より細菌が回収できるかどうかを確認し
た。その結果、ｕｓｐＤＮＡ断片を含まないｐＭＷ１１
８（陰性コントロール）をトランスフォームした大腸菌
は、１．０×１０8個以上を接種しても感染は成立しな
かった。しかしながら、ｕｓｐＤＮＡ断片を含むｐＭＷ
１１８であるｐＮＴ０３をトランスフォームした大腸菌
では、６．５×１０6個の接種で感染が成立した。この
ことより、ｕｓｐＤＮＡ断片が尿路感染において非常に
重要な役割を果たしていることがわかった。
【００４１】
【発明の効果】本発明の遺伝子ｕｓｐ及びそれによりコ
ードされるタンパク質ＵＳＰは、尿路病原性大腸菌中に
存在する特異的因子であり、尿路感染症を遺伝子レベル
及び免疫学的に診断するためのマーカーとして有用であ
る。従って、本発明のｕｓｐ関連遺伝子を用いた標識プ
ローブは尿路感染症を遺伝子レベルで診断するための検
出試薬として、またＵＳＰ関連タンパク質又はこれに対
する抗体は、尿路感染症を免疫学的に診断するための検
出試薬として利用できる。
ードされるタンパク質ＵＳＰは、尿路病原性大腸菌中に
存在する特異的因子であり、尿路感染症を遺伝子レベル
及び免疫学的に診断するためのマーカーとして有用であ
る。従って、本発明のｕｓｐ関連遺伝子を用いた標識プ
ローブは尿路感染症を遺伝子レベルで診断するための検
出試薬として、またＵＳＰ関連タンパク質又はこれに対
する抗体は、尿路感染症を免疫学的に診断するための検
出試薬として利用できる。
【００４２】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110>NISSUI PHRMACEUTICAL CO., LTD <120>Genes relating to urinary tract infection <130> P00141201 <160>3 <210>1 <211>1038 <212>DNA <213>Escherichia coli strain Z42 <400>1 atgctactgt tcccgagtag tgtgttggcg actcaaatat ggggaaaatg gtcgctcagt 60 ggcgtactca gtgcaacccg cggctcttac atcggtgcgt tggcatctgc tttgtatatt 120 ccctctgcgg gcgagggcag tgctcgcgtg cccggacgtg atgagttctg gtatgaggaa 180 gaactgcggc agaaagcact agcaggcagt accgccacca cccgggtacg ttttttctgg 240 ggaactgaca ttcacggcaa gcctcaggtg tatggtgttc atacgggtga aggtacgccg 300 tatgaaaacg tccgcgtggc gaacatgcag tggaacgagc agacgcagcg ttatgaattt 360 acccccgctc acgatgtcga tggccccctg attacctgga cgccggaaaa tccggaacat 420 gggaatgttc cgggccatac cggtaacgac aggccgccgc tggatcagcc caccattctg 480 gtgacgccga ttccggacgg caccgatacc tataccacgc cgccattccc ggttcctgat 540 ccgaaagaat tcaacgatta tattctggtt tttccggcgg gatccggtat taagcccatc 600 tatgtttacc tgaaggagga tccgcgaaag ctgcctggtg ttgtaacagg gcgcggcgtc 660 ccgctttcac caggaactcg ctggctggat atgtcggtat ccaataacgg caacggcgca 720 ccaatcccgg cgcatattgc tgataaattg cgcggacggg agtttaaaac ctttgatgag 780 tttcgcgagg cgctgtggct ggaggtgagt aaagactcag tgttattggc gcagtttata 840 aaaagtaatc agaataacgt tagtcaagga tattccccct atgtccctga ggaggggtat 900 tattacggac caaatgagat agttaagaaa ttccagatac atcatgtagt tgctatagaa 960 catggtggtg gagtgtatga tattgataat tttaggattg ttacgccccg actacatgat 1020 gaaattcact acaggaga
【００４３】 <210>2 <211>346 <212>PRT <213>Escherichia coli strain Z42 <400>2 Met Leu Leu Phe Pro Ser Ser Val Leu Ala Thr Gln Ile Trp Gly Lys 1 5 10 15 Trp Ser Leu Ser Gly Val Leu Ser Ala Thr Arg Gly Ser Tyr Ile Gly 20 25 30 Ala Leu Ala Ser Ala Leu Tyr Ile Pro Ser Ala Gly Glu Gly Ser Ala 35 40 45 Arg Val Pro Gly Arg Asp Glu Phe Trp Tyr Glu Glu Glu Leu Arg Gln 50 55 60 Lys Ala Leu Ala Gly Ser Thr Ala Thr Thr Arg Val Arg Phe Phe Trp 65 70 75 80 Gly Thr Asp Ile His Gly Lys Pro Gln Val Tyr Gly Val His Thr Gly 85 90 95 Glu Gly Thr Pro Tyr Glu Asn Val Arg Val Ala Asn Met Gln Trp Asn 100 105 110 Glu Gln Thr Gln Arg Tyr Glu Phe Thr Pro Ala His Asp Val Asp Gly 115 120 125 Pro Leu Ile Thr Trp Thr Pro Glu Asn Pro Glu His Gly Asn Val Pro 130 135 140 Gly His Thr Gly Asn Asp Arg Pro Pro Leu Asp Gln Pro Thr Ile Leu 145 150 155 160 Val Thr Pro Ile Pro Asp Gly Thr Asp Thr Tyr Thr Thr Pro Pro Phe 165 170 175 Pro Val Pro Asp Pro Lys Glu Phe Asn Asp Tyr Ile Leu Val Phe Pro 180 185 190 Ala Gly Ser Gly Ile Lys Pro Ile Tyr Val Tyr Leu Lys Glu Asp Pro 195 200 205 Arg Lys Leu Pro Gly Val Val Thr Gly Arg Gly Val Pro Leu Ser Pro 210 215 220 Gly Thr Arg Trp Leu Asp Met Ser Val Ser Asn Asn Gly Asn Gly Ala 225 230 235 240 Pro Ile Pro Ala His Ile Ala Asp Lys Leu Arg Gly Arg Glu Phe Lys 245 250 255 Thr Phe Asp Glu Phe Arg Glu Ala Leu Trp Leu Glu Val Ser Lys Asp 260 265 270 Ser Val Leu Leu Ala Gln Phe Ile Lys Ser Asn Gln Asn Asn Val Ser 275 280 285 Gln Gly Tyr Ser Pro Tyr Val Pro Glu Glu Gly Tyr Tyr Tyr Gly Pro 290 295 300 Asn Glu Ile Val Lys Lys Phe Gln Ile His His Val Val Ala Ile Glu 305 310 315 320 His Gly Gly Gly Val Tyr Asp Ile Asp Asn Phe Arg Ile Val Thr Pro 325 330 335 Arg Leu His Asp Glu Ile His Tyr Arg Arg 340 345
【００４４】 <210>3 <211>15 <212>DNA <213>Artificial sequence <220> <223>Designed oligo ncleotide based on USP <400>3 AATGTTAGGC GTGGT 15
【図１】ＺＯＴ遺伝子中のプリンＮＴＰ−バインディン
グモチーフ部分を示す図である。
グモチーフ部分を示す図である。
【図２】遺伝子ｕｓｐを含むＢａｍＨＩ断片の制限酵素
地図を示す図である。
地図を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｆターム(参考） 4B024 AA13 BA80 CA03 DA06 GA11 4B063 QA01 QA13 QA18 QQ03 QQ06 QQ42 QR08 QR62 QS25 QS34 4B064 AG01 CA19 CC24 DA15 4H045 AA10 AA11 BA10 CA11 EA50 FA72 FA74
Claims (6)
- 【請求項１】 配列番号２のアミノ酸配列又は当該アミ
ノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、
置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるタンパク
質をコードする遺伝子。 - 【請求項２】 配列番号１の塩基配列からなる請求項１
記載の遺伝子。 - 【請求項３】 配列番号１の塩基配列を有するＤＮＡ若
しくは当該ＤＮＡと８０％以上の相同性を有するＤＮＡ
又はそのフラグメントを含有する組み換えベクター。 - 【請求項４】 配列番号２のアミノ酸配列又は当該アミ
ノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、
置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるタンパク
質。 - 【請求項５】 配列番号１の塩基配列を有するＤＮＡ若
しくは当該ＤＮＡと８０％以上の相同性を有するＤＮＡ
又はそれらのフラグメントを用いることを特徴とする遺
伝子ｕｓｐの検出法。 - 【請求項６】 請求項４記載のタンパク質又はこれらの
フラグメントに対する抗体を用いることを特徴とするタ
ンパク質ＵＳＰの検出法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000003809A JP2001190278A (ja) | 2000-01-12 | 2000-01-12 | 尿路感染症関連遺伝子 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000003809A JP2001190278A (ja) | 2000-01-12 | 2000-01-12 | 尿路感染症関連遺伝子 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001190278A true JP2001190278A (ja) | 2001-07-17 |
Family
ID=18532690
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000003809A Withdrawn JP2001190278A (ja) | 2000-01-12 | 2000-01-12 | 尿路感染症関連遺伝子 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001190278A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010517552A (ja) * | 2007-02-08 | 2010-05-27 | ビオメリュー | 細菌検出および／または同定培地 |
-
2000
- 2000-01-12 JP JP2000003809A patent/JP2001190278A/ja not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010517552A (ja) * | 2007-02-08 | 2010-05-27 | ビオメリュー | 細菌検出および／または同定培地 |
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