WO2008087361A2 - Procede d'obtention d'un actif cosmetique amincissant, principe actif obtenu et compositions l'incluant - Google Patents

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WO2008087361A2
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Jean Paufique
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Societe Industrielle Limousine D'application Biologique, Dite Silab
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    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]

Definitions

  • the present invention relates to a process for obtaining a cosmetic active ingredient derived from Nelumbo nucifera for a slimming activity, in particular anti-cellulite and draining.
  • the invention also relates to the active ingredient that can be obtained by this process, its cosmetic uses and the associated cosmetic compositions.
  • the cult of slimming models a certain ideal of silhouette and we care more and more about its image and its external appearance.
  • many women seek to fight against cellulite that gives the skin a quilted, grainy and padded appearance said "orange peel" and a soft and flaccid consistency.
  • Cellulite is an excessive development of fat mass in the deep layer of the skin, adipose tissue, usually at the hips and thighs. This accumulation of fat triggers local inflammation responsible for water retention.
  • the inflated fat cells compress the blood or lymphatic vessels and block the flow of fluids.
  • connective tissue structures that partition the adipose compartment are deformed under the pressure of fat-filled cells.
  • Growing fat lobules push the upper tissues to the skin surface causing the lumpy appearance of the skin.
  • the present invention provides by proposing an overall slimming active ingredient, derived from Nelumbo nucifera, rich in flavonols, which promotes the destocking of fat and restores homeostasis of adipose tissue by a triple action.
  • the present invention proposes to act simultaneously by reducing the storage of fat within mature adipocytes, by reducing the inflammation of adipose tissue, and by limiting the degradation of its fibrous architecture.
  • Adipose tissue is composed of specialized cells: adipocytes.
  • Mature adipocytes are round cells containing lipids in the form of droplets consisting almost exclusively of triglycerides. These cells play a role in the energetic homeostasis of the body, maintaining a balance between two antagonistic metabolic pathways: lipogenesis which leads to the formation of triglycerides and lipolysis by which they are mobilized for later use by the organization. When fat storage is more important than elimination, lipogenesis-lipolysis balance is broken, leading to enlarged adipocytes and cellulite development.
  • the present invention proposes to reduce the storage of fat within mature adipocytes, both by increasing lipolysis.
  • the active ingredient according to the invention stimulates the hydrolysis of triglycerides present in the lipid compartment of differentiated adipocytes, thus promoting the elimination of stored lipids.
  • the phenomenon of cellulite and increase of fat storage is also linked to an increase in adipogenesis, differentiation process ⁇ dipocyt ⁇ ire, leading to hyperplasia of adipocytes and therefore to an increase in adipose tissue.
  • Adipogenesis results from the activation of many mediators, including the PPAR-v (Peroxysome Proliferator-Activated Receptors gamma) and C / EBPs (CAAT I Enhancer Binding Protein) transcription factors that are induced early.
  • PPAR-v Peroxysome Proliferator-Activated Receptors gamma
  • C / EBPs CAAT I Enhancer Binding Protein
  • the present invention aims to modulate the activity of PPAR-v and C / EBPs transcription factors.
  • the active ingredient according to the invention stimulates the expression of known SIRT-I proteins to limit the expression of PPAR- ⁇ and C / EBPs factors, and thus makes it possible to reduce the number of mature adipocytes in adipose tissue. .
  • TNF ⁇ pro-inflammatory mediators
  • ICAM-I ICAM-I
  • VCAM-I pro-inflammatory mediators
  • the present invention proposes to reduce the inflammatory state of the adipose tissue by stimulating the synthesis of adiponectin, a hormone capable of regulating the local inflammation of adipose tissue.
  • adipose tissue is accompanied by a significant remodeling of the MEC (Extra Cellular Matrix), a process regulated in part by the MMPs and their inhibitors, the TTMPs.
  • MEC Extra Cellular Matrix
  • the present invention proposes to reduce the degradation of the ECM and to limit the matrix and vascular remodeling for the development of adipose tissue.
  • the active ingredient according to the invention in particular inhibits the activity of the MPPs involved in adipogenesis.
  • the active ingredient according to the invention thus makes it possible to improve the functionality of the adipose tissue and to limit the retention of water simultaneously:
  • the active ingredient according to the invention has an anti-cellulite and draining effect leading to overall thinning. It can therefore be used to incorporate a slimming cosmetic composition, in particular a cosmetic composition with an anti-cellulite effect and / or draining adipose tissue.
  • the process for obtaining the active ingredient according to the invention comprises at least the succession of the following two stages:
  • the process for obtaining the active principle according to the invention comprises the following succession of steps:
  • the solids content is between 3 and 100 g / l, more particularly between 5 and 12 g / l. 2-2 / pH measurement:
  • the phenolic compounds form colored compounds, the intensity of this coloration being proportional to the amount of phenolic compounds.
  • gallic acid in this case from 40 to 120 mg / l, the amount of phenolic compounds can be deduced.
  • the results give 0.3 to 6.7 g / l and more particularly 0.4 to 0.8 g / l.
  • These compounds can be characterized by high pressure liquid chromatography, which shows the presence of flavonols, flavanols, hydroxybenzoic compounds and flavones including isoquercitin.
  • the content of flavonols and flavanols is greater than 50% of the total polyphenols, and preferably greater than 75% of the total polyphenols.
  • the active fraction of the active ingredient can be determined vis-a-vis the lipolytic activity of the adipocytes.
  • the lipolytic activity of adipocytes is determined by the level of AGNE
  • Non-esterified fatty acids expressed in ⁇ M of the control.
  • 0.5% of active principle according to the invention or 0.5% of active principle previously treated with a polyphenol-eliminating compound is added to adipocyte cultures.
  • the level of AGNE is evaluated at 453 ⁇ M in the presence of the active principle according to the present invention, compared to 38 ⁇ M for the untreated control and 69 ⁇ M in the presence of the active ingredient previously treated with the polyphenol-removing compound.
  • the active fraction of the active ingredient for the lipolytic activity therefore consists of phenolic compounds.
  • This study aims to evaluate in vitro the influence of the active ingredient according to the invention on lipolytic activity.
  • the study is performed on preadipocytes by measurement of non-esterified free fatty acids (FANE) after complete differentiation of preadipocytes into mature adipocytes.
  • Pre-adipocytes are seeded and incubated in a culture medium containing donor calf serum (SVD) to obtain proliferation of preadipocytes. After several days, the culture conditions are changed to induce adipocyte differentiation of preadipocytes. At the end of the incubation, the culture medium is rinsed and replaced with a solution KRB (Krebs-Ringer-Bicarbonate-Albumin) containing either the active ingredient according to the invention assayed at 0.25%, or a caffeine solution. at 2%, positive control.
  • KRB Keratibility-Ringer-Bicarbonate-Albumin
  • the AGNE is then measured at 550 nm using a colorimetric kit.
  • the active ingredient according to the invention promotes the hydrolysis of triglycerides present in the lipid compartment of adipocytes significantly.
  • the active ingredient according to the invention stimulates the lipolytic activity of adipocytes by 821%.
  • the objective of this study is to evaluate the effect of the active principle according to the invention on its ability to stimulate the synthesis of SIRT-I proteins which modulate the activity of PPAR-v and C / EBPs transcription factors and limit adipocyte differentiation.
  • the study is performed on adipocytes by Western blotting, according to the operating procedure described below.
  • Pre-adipocytes are seeded and incubated in a culture medium containing donor calf serum (SVD).
  • SVD donor calf serum
  • the culture conditions are changed to induce adipocyte differentiation of preadipocytes.
  • the active ingredient according to the invention which is 0.50%, is also added to the culture medium.
  • the cell extracts are recovered and an assay of the total proteins is carried out. Gel electrophoresis is performed and immunolabeling is performed using suitable antibodies.
  • This study aims to determine the effect of the active ingredient according to the invention on the synthesis of adiponectin, an anti-inflammatory molecule secreted by the adipocyte cells.
  • the study is carried out by Western blotting on preadipocyte cultures.
  • Pre-adipocytes are seeded and incubated in a culture medium containing donor calf serum (SVD) to obtain proliferation of preadipocytes.
  • SVD donor calf serum
  • the culture conditions are changed to induce adipocyte differentiation of preadipocytes.
  • the active ingredient according to the invention which is 0.50%, is also added to the culture medium. At the end of the incubation, the cell extracts are recovered and an assay of the total proteins is carried out.
  • the active ingredient according to the invention significantly stimulates the synthesis of adiponectin, an anti-inflammatory molecule of adipose tissue. 3-3 / Study of the effect on cellulite
  • the objective of this study is to evaluate, on volunteers, the effect on cellulite of the active ingredient according to the invention formulated at 4% in emulsion.
  • the study is conducted on 23 healthy female volunteers of average age 30 years, selected according to their body mass index between 21 and 26 and the presence of visible cellulite in the thighs. Clinical evaluation of the severity of cellulite is performed by a trained evaluator at both thighs based on clinical scores in 5 points:
  • Stage 2 a few panicles, separated by shallow depressions
  • Stage 4 large panicles in relief, separated by deep depressions.
  • the selected volunteers are weighed and evaluated without applying any product on the thighs.
  • the active emulsion and the placebo are applied twice a day by the volunteers.
  • the volunteers are once again weighed and evaluated.
  • the active ingredient according to the invention leads to a statistically significant improvement in the visual appearance of cellulite compared to a placebo formula.
  • the objective of this study is to evaluate, on volunteers, the effect of the active ingredient according to the invention formulated at 4% in emulsion, on cellulite and on surface irregularities.
  • the study is conducted on 20 healthy female volunteers, mean age 43 years, selected according to their body mass index between 21 and 26 and the presence of visible cellulite in the thighs.
  • the study consists of taking photographs of an area on the outside of the thigh of volunteers and having them evaluated on a score scale by a trained jury. The photographs are made on a subject in a vertical position. In order to accentuate the surface irregularities caused by cellulite, a controlled pinching system is achieved by applying a standardized pressure on the studied area.
  • the clinical evaluation of the severity of cellulite is performed by a panel consisting of 5 people, at the level of both thighs on the basis of clinical scores in 6 points of stage 1 (absence of cellulite) at stage 6.
  • the operating protocol is as follows.
  • the volunteers are weighed.
  • the study areas are then repositioned on the outer side of the thigh and then, after a resting phase, photographs are taken.
  • Active ingredient according to the invention 4% in emulsion -19
  • the active ingredient according to the invention formulated at 4% leads to a significant decrease in the irregularities of the skin surface related to the presence of underlying cellulitis.
  • the active ingredient according to the invention therefore has an anti-cellulite effect.
  • the purpose of this study is to evaluate, on a voluntary basis, the draining effect of the active ingredient according to the invention formulated at 4% in emulsion.
  • the study is conducted on 20 healthy female volunteers, mean age 43 years, selected according to their body mass index between 21 and 26 and the presence of visible cellulite in the thighs. It consists in evaluating existing thermal variations at the level of cellulite zones using thermographic plates. Photographs of the plates applied on the thighs are carried out and evaluated by a jury composed of 5 people who evaluate the intensity of the thermographic response of each photo on a score scale defined as follows:
  • stage 2 edema
  • stage 3 general edema
  • stage 4 micronodules
  • stage 5 macronodules
  • the volunteers are weighed.
  • the study areas on the outer side of the thigh and the thermographic plate adapted to the volunteer are determined, and photographs of the plates are taken.
  • Active ingredient according to the invention 4% in emulsion -29
  • the purpose of this study is to evaluate, on volunteers, the slimming effect of the active ingredient according to the invention formulated at 4% by emulsion, by centimeter measurement of the thigh circumference after 28 days of application, and hips after 56 days of application.
  • the study is carried out on 20 healthy volunteers of female, chosen according to their index of body mass between 21 and 26 and the visual presence of cellulite.
  • the study is carried out on 41 healthy volunteers of female sex, divided into two groups, one applying the active ingredient according to the invention in emulsion, the other applying a placebo formula.
  • the volunteers are chosen according to their body mass index between 21 and 26.
  • the operative protocol is as follows. On D-14, the volunteers stop applying cream at the level of the study areas.
  • the volunteers are weighed. Benchmarks are then determined around the study areas, and measurements taken.
  • the average decrease in the turn of the thigh treated with the active ingredient according to the invention compared with the placebo is -0.5% in 28 days of twice daily application, without weight loss.
  • the volunteers lose on average 2.4% of belly turn without weight loss.
  • the present invention also covers the cosmetic compositions including the active ingredient according to the present invention in different galenical forms, in particular gel, solution, emulsion, cream. analyze the stability of the dosage forms including the active ingredient according to the invention, this in proportions of between 1 and 5%. The stability is characterized by a lack of precipitation of the asset, an absence of creaming and a lack of phase shift.

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Abstract

L'objet de l'invention est un procédé d'obtention d'un principe actif cosmétique amincissant comprenant au moins la succession les deux étapes suivantes: -solubilisation de poudre de Nelumbo nucifera, et -extraction sélective des composés polyphénoliques. L'invention se rapporte également au principe actif obtenu par ce procédé, aux compositions cosmétiques l'incluant et à ses utilisations cosmétiques.

Description

PROCEDE D'OBTENTION D'UN ACTIF COSMETIQUE AMINCISSANT, PRINCIPE ACTIF OBTENU ET COMPOSITIONS L'INCLUANT
La présente invention se rapporte à un procédé d'obtention d'un principe actif cosmétique issu de Nelumbo nucifera pour une activité amincissante, en particulier anti-cellulite et drainante.
L'invention concerne également le principe actif susceptible d'être obtenu par ce procédé, ses utilisations cosmétiques et les compositions cosmétiques associées. De nos jours, le culte de la minceur modèle un certain idéal de silhouette et on se soucie de plus en plus de son image et de son aspect extérieur. En particulier, beaucoup de femmes cherchent à lutter contre la cellulite qui donne à la peau un aspect matelassé, granuleux et capitonné dit « en peau d'orange » et une consistance molle et flasque.
La cellulite correspond à un développement excessif de la masse grasse dans la couche profonde de la peau, le tissu adipeux, généralement au niveau des hanches et des cuisses. Cette accumulation de graisse déclenche une inflammation locale responsable de la rétention d'eau. Les cellules adipeuses gonflées compriment les vaisseaux sanguins ou lymphatiques et bloquent la circulation des fluides. Parallèlement, les structures du tissu conjonctif qui cloisonnent le compartiment adipeux sont déformées sous la pression des cellules gorgées de lipides. Les lobules graisseux se développant poussent les tissus supérieurs vers la surface cutanée causant l'aspect bosselé de la peau.
Bien que ce phénomène soit physiologique à taux modéré, il est très souvent considéré comme un problème cosmétique et esthétique qu'on aimerait éliminer. II existe donc un besoin pour un produit cosmétique amincissant capable de lutter efficacement contre la « peau d'orange » et de limiter la rétention d'eau. C'est ce à quoi répond la présente invention en proposant un principe actif amincissant global, issu de Nelumbo nucifera, riche en flavonols, qui favorise le destockage des graisses et restaure l'homéostasie du tissu adipeux par une triple action. En particulier la présente invention se propose d'agir simultanément en réduisant le stockage des graisses au sein des adipocytes matures, en réduisant l'inflammation du tissu adipeux, et en limitant la dégradation de son architecture fibreuse. Le tissu adipeux est composé de cellules spécialisées : les adipocytes.
Ces cellules proviennent de cellules précurseurs, les préadipocytes, et sont présentes à différents stades de différenciation au niveau du tissu adipeux. Les adipocytes matures sont des cellules arrondies contenant des lipides sous forme de gouttelettes constituées presque exclusivement de triglycérides. Ces cellules jouent un rôle dans l'homéostasie énergétique de l'organisme, en maintenant un équilibre entre deux voies métaboliques antagonistes : la lipogenèse qui conduit à la formation des triglycérides et la lipolyse par laquelle ces derniers sont mobilisés pour être ensuite utilisés par l'organisme. Lorsque le stockage des graisses est plus important que l'élimination, l'équilibre lipogenèse-lipolyse est brisé, conduisant à une hypertrophie des adipocytes et au développement de cellulite.
C'est pourquoi, la présente invention propose de réduire le stockage des graisses au sein des adipocytes matures, à la fois en augmentant la lipolyse. Le principe actif selon l'invention stimule l'hydrolyse des triglycérides présents dans le compartiment lipidique des adipocytes différenciés, favorisant ainsi l'élimination des lipides stockés.
Le phénomène de cellulite et d'augmentation du stockage des graisses est lié également à une augmentation de l'adipogenèse, processus de différenciation αdipocytαire, conduisant à une hyperplasie des adipocytes et donc à une augmentation du tissu adipeux.
L'adipogenèse résulte de l'activation de nombreux médiateurs, notamment les facteurs de transcription PPAR-v (Peroxysome Proliferator-Activated Receptors gamma) et C/EBPs (CAAT I Enhancer Binding Protein) qui sont induits de façon précoce.
De fait, pour limiter l'adipogenèse et réduire le stockage des graisses, la présente invention vise à moduler l'activité des facteurs de transcription PPAR-v et C/EBPs. En particulier, le principe actif selon l'invention stimule l'expression des protéines SIRT-I connues pour limiter l'expression des facteurs PPAR-γ et C/EBPs, et permet ainsi de diminuer le nombre d'adipocytes matures dans le tissu adipeux.
Lors d'une augmentation excessive des réserves adipeuses, les préadipocytes et adipocytes matures expriment et sécrètent de façon accrue des médiateurs pro- inflammatoires (TNFa, IL8, ICAM-I, VCAM-I). Ces molécules modifient les propriétés d'adhérence des cellules endothéliales et favorisent le recrutement et l'infiltration des macrophages circulant au sein du tissu adipeux. Les macrophages ainsi activés et accumulés contribuent au maintien de l'inflammation en sécrétant à leur tour des cytokines pro-inf lammatoires (TNFa, IL6). De plus, ils favorisent l'extension du réseau capillaire nécessaire au développement du tissu adipeux pour assurer son irrigation et son approvisionnement. L'homéostasie et la fonctionnalité du tissu adipeux sont altérées, le métabolisme énergétique résultant de l'équilibre entre les processus de lipolyse et de lipogenèse est déréglé. De fait, la présente invention propose de réduire l'état inflammatoire du tissu adipeux en stimulant la synthèse de l'adiponectine, hormone capable de réguler l'inflammation locale du tissu adipeux. Le développement du tissu adipeux est accompagné d'un remodelage important de la MEC (Matrice Extra Cellulaire), processus régulé en partie par les MMPs et leurs inhibiteurs, les TTMPs. Une dégradation excessive des structures matricielles du compartiment adipeux par les MMPs, laisse le champ libre au développement des vaisseaux sanguins, ce qui permet au tissu adipeux d'être bien approvisionné et de s'étendre.
Ainsi, pour limiter le développement du tissu adipeux, la présente invention propose de réduire la dégradation de la MEC et de limiter le remodelage matriciel et vasculaire permettant le développement du tissu adipeux. Le principe actif selon l'invention inhibe notamment l'activité des MPPs impliqués dans l'adipogenèse.
Le principe actif selon l'invention permet donc d'améliorer la fonctionnalité du tissu adipeux et de limiter la rétention d'eau simultanément :
- en réduisant le stockage des graisses par activation de la lipolyse et réduction de la différenciation adipocytaire par stimulation des SIRT-I,
- en limitant l'inflammation du tissu adipeux, par stimulation de la synthèse de l'adiponectine, et
- en préservant l'architecture fibreuse du tissu adipeux par inhibition de l'activité des MMPs adipocytaires. Ainsi, en favorisant le destockage des graisses et en restaurant l'homéostasie du tissu adipeux, le principe actif selon l'invention présente un effet anti- cellulitique et drainant conduisant à un amincissement global. Il peut donc être utilisé pour incorporer à une composition cosmétique amincissante, en particulier une composition cosmétique à effet anti-cellulitique et/ou drainant du tissu adipeux.
Avantageusement il permet d'améliorer l'aspect « peau d'orange » et de favoriser le drainage des zones cellulitiques. La présente invention est maintenant décrite en détail pour permettre de mieux appréhender les résultats obtenus.
1/ PROCEDE D'OBTENTION E)U PRINCIPE ACTIF SELON L 'INVENTION : Le procédé d'obtention du principe actif selon l'invention comprend au moins la succession des deux étapes suivantes :
- solubilisation de poudre de Nelumbo nucifera, et
- extraction sélective des composés polyphénoliques.
Selon un mode de réalisation préféré, le procédé d'obtention du principe actif selon l'invention comprend la succession des étapes suivantes :
- solubilisation de poudre de feuilles de Nelumbo nucifera dans un mélange eau/butylène glycol,
- extraction sélective des polyphénols,
- séparation des phases soluble et insoluble par filtration, décantation et/ou centrifugation,
- décoloration de la phase soluble,
- purification de la fraction active contenant les polyphénols par filtration, ultraf iltration, osmose inverse et/ou nanof iltration, et
- filtration stérilisante.
2/ CARACTERISATION E>U PRINCIPE ACTIF SELON L'INVENTION : 2-1/ Matières sèches :
On mesure le taux de matières sèches par passage à l'étuve à 1050C d'un échantillon de 6g en présence de 20g de sable pendant 40 heures. Le taux de matières sèches est compris entre 3 et 100 g/1, plus particulièrement entre 5 et 12 g/1. 2-2/ Mesure du pH :
Le pH mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante conduit à des valeurs comprises entre 3 et 6, plus particulièrement entre 4 et 5. 2-3/ Dosage et caractérisation des composés phénoliques :
Les composés phénoliques forment en présence de ferricyanure de potassium des composés colorés, l'intensité de cette coloration étant proportionnelle à la quantité de composés phénoliques.
En se rapportant à une gamme étalon d'acide gallique, en l'occurrence de 40 à 120 mg/l, on peut déduire la quantité de composés phénoliques.
Les résultats donnent 0,3 à 6,7 g/1 et plus particulièrement 0,4 à 0,8 g/1.
Ces composés peuvent être caractérisés par chromatographie liquide haute pression, qui montre la présence de flavonols, de flavanols, de composés hydroxybenzoiques et de flavones dont l'isoquercitine. La teneur en flavonols et flavanols est supérieure à 50% des polyphénols totaux, et préférentiellement supérieure à 75% des polyphénols totaux.
2-4/ Identification de la fraction active
On peut déterminer la fraction active du principe actif vis-à-vis de l'activité lipolytique des adipocytes. L'activité lipolytique des adipocytes est déterminée par le taux d'AGNE
(Acides Gras Non Estérifiés) exprimé en μM du témoin. A des cultures d' adipocytes, on ajoute 0,5% de principe actif selon l'invention ou 0,5% de principe actif traité préalablement par un composé éliminant les polyphénols. Le taux d'AGNE est évalué à 453 μM en présence du principe actif selon la présente invention, comparé à 38 μM pour le témoin non traité et à 69 μM en présence du principe actif traité préalablement par le composé éliminant les polyphénols. La fraction active du principe actif pour l'activité lipolytique est donc constituée des composés phénol iques. /EVALUATION E)E L'EFFET AMINCISSANT E)U PRINCIPE ACTIF SELON L 'INVENTION 3-1/Evaluation de l'effet sur le stockage des graisses
3-1-1/Effet sur l'activité lipolytique des adipocytes
Cette étude a pour objectif d'évaluer in vitro l'influence du principe actif selon l'invention sur l'activité lipolytique.
L'étude est réalisée sur préadipocytes par mesure des acides gras libres non estérifiés (AGNE) après différenciation complète des préadipocytes en adipocytes matures. Des préadipocytes sont ensemencés et incubés dans un milieu de culture contenant du sérum de veau donneur (SVD), afin d'obtenir la prolifération des préadipocytes. Après plusieurs jours, les conditions de cultures sont changées afin d'induire la différenciation adipocytaire des préadipocytes. A la fin de l'incubation, le milieu de culture est rincé et remplacé par une solution KRBA (Krebs-Ringer-Bicarbonate-Albumine) contenant soit le principe actif selon l'invention dosé à 0,25%, soit une solution de caféine à 2%, témoin positif.
On réalise ensuite le dosage des AGNE à 550nm à l'aide d'un kit colorimétrique.
Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau suivant :
Figure imgf000009_0001
On constate que le principe actif selon l'invention favorise l'hydrolyse des triglycérides présents dans le compartiment lipidique des adipocytes de façon significative. En particulier, testé à 0,25%, le principe actif selon l'invention stimule l'activité lipolytique des adipocytes de 821%.
3-1-2/Effet sur la différenciation adipocytaire
L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet du principe actif selon l'invention sur sa capacité à stimuler la synthèse des protéines SIRT-I qui modulent l'activité des facteurs de transcription PPAR-v et C/EBPs et limite la différenciation adipocytaire.
L'étude est réalisée sur des adipocytes par Western blot, selon le protocole opératoire décrit ci-dessous.
Des préadipocytes sont ensemencés et incubés dans un milieu de culture contenant du sérum de veau donneur (SVD).
Après plusieurs jours, les conditions de cultures sont changées afin d'induire la différenciation adipocytaire des préadipocytes.
On ajoute également au milieu de culture le principe actif selon l'invention dosé à 0,50%.
A la fin de l'incubation, on récupère les extraits cellulaires et on réalise un dosage des protéines totales. On réalise une électrophorèse sur gel et on effectue un immunomarquage à l'aide d'anticorps adaptés.
Les résultats obtenus sont présentés en pourcentage de taux de
SIRT-I synthétisé, dans le tableau ci-dessous :
Figure imgf000010_0001
Ces résultats montrent que le principe actif selon l'invention stimule la synthèse des SIRT-I par les adipocytes de 22% et limite ainsi la différenciation adipocytaire.
3-2/Evaluation de l'effet sur l'inflammation du tissu adipeux
Cette étude a pour but de déterminer l'effet du principe actif selon l'invention sur la synthèse d'adiponectine, molécule anti-inflammatoire sécrétée par les cellules adipocytaires. L'étude est réalisée par Western blot sur cultures de préadipocytes.
Des préadipocytes sont ensemencés et incubés dans un milieu de culture contenant du sérum de veau donneur (SVD), afin d'obtenir la prolifération des préadipocytes.
Après plusieurs jours, les conditions de cultures sont changées afin d'induire la différenciation adipocytaire des préadipocytes.
On ajoute également au milieu de culture le principe actif selon l'invention dosé à 0,50%. A \a fin de l'incubation, on récupère les extraits cellulaires et on réalise un dosage des protéines totales.
On réalise une électrophorèse sur gel et on effectue un immunomarquage à l'aide d'anticorps adaptés.
Les résultats obtenus sont présentés en pourcentage de taux d'adiponectine synthétisé, dans le tableau ci-dessous :
Figure imgf000011_0001
On constate que le principe actif selon l'invention stimule significativement la synthèse d'adiponectine, molécule antiinflammatoire du tissu adipeux. 3-3/Etude de l'effet sur la cellulite
3-3-1/Evaluation clinique par un évaluateur entraîné
L'objectif de cette étude est d'évaluer sur volontaires, l'effet sur la cellulite de l'actif selon l'invention formulé à 4% en émulsion.
L'étude est réalisée sur 23 volontaires sains de sexe féminin d'âge moyen 30 ans, choisis en fonction de leur indice de masse corporelle compris entre 21 et 26 et de la présence de cellulite visible au niveau des cuisses. L'évaluation clinique de la sévérité de la cellulite est réalisée par un évaluateur entraîné, au niveau des deux cuisses sur la base des scores cliniques en 5 points :
- stade 0 : absence - stade 1 : pas de panicules, quelques dépressions peu profondes
- stade 2 : quelques panicules, séparés par des dépressions peu profondes,
- stade 3 : nombreux panicules séparés par des dépressions moyennement profondes,
- stade 4 : gros panicules en relief, séparés par des dépressions profondes.
Le protocole opératoire est décrit ci-dessous.
A JO, les volontaires sélectionnés sont pesés, puis évalués sans avoir appliqué de produit sur les cuisses.
Entre JO et J27, l'actif en émulsion et le placebo sont appliqués deux fois par jour par les volontaires.
A J28, les volontaires sont à nouveau pesés et évalués.
Entre J28 et J55, l'actif et le placebo sont appliqués deux fois par jour par les volontaires.
A J56, les volontaires sont une dernière fois pesés et évalués.
Les résultats obtenus pour le principe actif selon l'invention sont présentés dans le tableau qui suit en pourcentage de variation par rapport aux résultats obtenus avec le placebo :
Variation/Placebo (%)
J28 J56
Principe actif selon l'invention 4% en -3 -6
Figure imgf000013_0001
On constate que, après 2 mois d'applications biquotidiennes sur les cuisses, le principe actif selon l'invention conduit à une amélioration statistiquement significative de l'aspect visuel de la cellulite en comparaison à une formule placebo.
3-3-2/Evaluation sur échelle photographique et évaluation sub jective L'objectif de cette étude est d'évaluer sur volontaires, l'effet de l'actif selon l'invention formulé à 4% en émulsion, sur la cellulite et sur les irrégularités de surface. L'étude est réalisée sur 20 volontaires sains de sexe féminin, d'âge moyen 43 ans, choisis en fonction de leur indice de masse corporelle compris entre 21 et 26 et de la présence de cellulite visible au niveau des cuisses.
L'étude consiste à réaliser des photographies d'une zone située sur le côté extérieur de la cuisse des volontaires et de les faire évaluer sur une échelle de score par un jury entraîné. Les photographies sont réalisées sur un sujet en position verticale. Afin d'accentuer les irrégularités de surface causées par la cellulite, un système de pincement contrôlé est réalisé en appliquant une pression standardisée sur la zone étudiée. L'évaluation clinique de la sévérité de la cellulite est réalisée par un jury composé de 5 personnes, au niveau des deux cuisses sur la base des scores cliniques en 6 points du stade 1 (absence de cellulite) au stade 6. Le protocole opératoire est le suivant.
A J-14, les volontaires cessent toute application de crème au niveau de la zone d'étude.
A JO, les volontaires sont pesés. On détermine ensuite des zones d'étude sur le côté externe de la cuisse, puis, après une phase de repos on réalise des photographies.
Entre JO et J 27, les volontaires appliquent l'actif en émulsion et le placebo biquotidiennement.
A J28, les volontaires sont pesés. On recale ensuite les zones d'étude sur le côté externe de la cuisse, puis, après une phase de repos on réalise des photographies.
Les résultats obtenus pour le principe actif selon l'invention sont présentés dans le tableau qui suit en pourcentage de variation par rapport aux résultats obtenus awec le placebo :
Variation/Placebo (%)
Principe actif selon l'invention 4% en émulsion -19
On constate qu'après 28 jours de traitement bioquotidien, le principe actif selon l'invention formulé à 4% conduit à une diminution significative des irrégularités de la surface de la peau liée à la présence de cellulite sous-jacente.
Le principe actif selon l'invention présente donc un effet anti- cellulitique.
3-4/Etude de l'effet drainant
Le but de cette étude est d'évaluer sur volontaires l'effet drainant de l'actif selon l'invention formulé à 4% en émulsion. L'étude est réalisée sur 20 volontaires sains de sexe féminin, d'âge moyen 43 ans, choisis en fonction de leur indice de masse corporelle compris entre 21 et 26 et de la présence de cellulite visible au niveau des cuisses. Elle consiste à évaluer des variations thermiques existantes au niveau de zones cellulitiques à l'aide de plaques thermographiques. Des photographies des plaques appliquées sur les cuisses sont réalisées et évaluées par un jury composé de 5 personnes qui évalue l'intensité de la réponse thermographique de chaque photo sur une échelle de score définie comme suit :
- stade 1 : normalité,
- stade 2 : oedème,
- stade 3 : oedème généralisé,
- stade 4 : micronodules, et - stade 5 : macronodules.
Le protocole opératoire de l'étude est décrit ci-dessous.
A J- 14, les volontaires cessent toute application de crème au niveau de la zone d'étude.
A JO, les volontaires sont pesés. On détermine les zones d'étude sur le côté externe de la cuisse et la plaque thermographique adaptée au volontaire, et on prend des photographies des plaques.
Entre JO et J 27, les volontaires appliquent l'actif en émulsion et le placebo biquotidiennement.
A J28, les volontaires sont pesés. On recale ensuite les zones d'étude sur le côté externe de la cuisse, puis on prend des photographies des plaques. Les résultats obtenus pour le principe actif selon l'invention sont présentés dans le tableau qui suit en pourcentage de variation par rapport aux résultats obtenus avec le placebo :
Variation/Placebo (%)
Principe actif selon l'invention 4% en émulsion -29
Ces résultats montrent qu'après 28 jours d'application biquotidienne, le principe actif selon l'invention améliore les échanges thermiques de 29%.
L'utilisation du principe actif selon l'invention favorise ainsi le drainage des zones cellulitiques en réduisant les zones oedémateuses. 3-5/Etude des propriétés amincissantes
Cette étude a pour objectif d'évaluer sur volontaires l'effet amincissant de l'actif selon l'invention formulé à 4% en émulsion, par mesure centimétrique du tour de cuisse après 28 jours d'application, et du tour de ventre et de hanches après 56 jours d'application. Pour la mesure du tour de cuisse, l'étude est réalisée sur 20 volontaires sains de sexe féminin, choisis en fonction de leur indice de masse corporelle compris entre 21 et 26 et la présence visuelle de cellulite. Pour la mesure du tour de ventre et des hanches, l'étude est réalisée sur 41 volontaires sains de sexe féminin, répartis en deux groupes, un appliquant le principe actif selon l'invention en émulsion, l'autre appliquant une formule placebo. Les volontaires sont choisis en fonction de leur indice de masse corporelle compris entre 21 et 26. Le protocole opératoire est le suivant. A J-14, les volontaires cessent toute application de crème au niveau des zones d'étude.
A JO, les volontaires sont pesés. On détermine ensuite des repères sur le pourtour des zones d'étude, puis on prend les mesures.
Entre JO et J27, les volontaires appliquent l'actif et le placebo biquotidiennement.
A J28, les volontaires sont pesés. On détermine ensuite des repères sur le pourtour des zones d'étude, puis on prend les mesures.
Entre J28 et J55, les volontaires appliquent l'actif et le placebo biquotidiennement.
A J56, les volontaires sont pesés. On détermine ensuite des repères sur le pourtour des zones d'étude, puis on prend les mesures.
Les résultats obtenus pour le principe actif selon l'invention sont présentés dans le tableau qui suit en pourcentage de variation par rapport aux résultats obtenus avec le placebo :
Figure imgf000017_0001
Au niveau des cuisses, la diminution moyenne du tour de cuisse traitée par le principe actif selon l'invention par rapport au placebo est de -0,5% en 28 jours d'application biquotidienne, sans perte de poids. Au niveau du ventre, après 56 jours d'application biquotidienne du principe actif selon l'invention, par rapport au placebo, les volontaires perdent en moyenne 2,4% de tour de ventre sans perte de poids.
Au niveau des hanches, après 56 jours d'application biquotidienne du principe actif selon l'invention, par rapport au placebo les volontaires perdent en moyenne 1% de tour de hanches sans perte de poids.
Ces résultats montrent donc que le principe actif selon l'invention présente un effet amincissant global.
4/ COMPOSITION COSMÉTIQUE INCLUANT LE PRINCIPE ACTIF SELON L'INVENTION : La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques incluant le principe actif selon la présente invention dans différentes formes galéniques, notamment gel, solution, émulsion, crème.... II convient alors d'analyser la stabilité des formes galéniques incluant le principe actif selon l' invention, ceci dans des proportions comprises entre 1 et 5 %. La stabilité est caractérisée par une absence de précipitation de l'actif, une absence de crémage et une absence de déphasage.
On peut citer des formulations ayant montré une stabilité physique incluant 5% de principe actif selon l' invention. Gel limpide :
- Carbopol : 0,5% avec Triéthanolamine : qsp pH=6,5
- Glycérol : 10%
- Propylène glycol : 10% - Conservateur : 1,0%
- Principe actif 5,0%
- Eau : 73,5% Gel opaque :
- Sépigel 305 : 3% - Lanol 99 : 12%
- Conservateur : 1,0%
- Principe actif 5,0%
- Eau : 79% Gel émulsionné : - Montanov 202 : 3,0%
- Isopropyl palmitate : 10%
- Conservateur : 1,0% - Sépigel 305 : 2%
- Principe actif : 5,0%
- Eau : 79% Emulsion non ionique : - Montane 60 : 2,0%
- Montanox 60 : 4,0%
- Isopropyl myristate : 8%
- Paraff in wax 130/135 : 3%
- Conservateur : 1,0% - Principe actif : 5,0%
- Eau : 77% Emulsion anionique :
- Acide stéarique : 7,0% Triéthanolamine qsp pH=8
- Ritaphyl ICS : 20% - Conservateur : 1,0%
- Principe actif : 5,0%
- Eau : 67% Emulsion cationique :
- Quaternium-82 : 5,0% - Alcool cétylique : 1%
- Gemseal 60 : 8% -Alcool cétéarylique : 1%
- PEG 100 stéarate : 1%
- Conservateur : 1,0% - Principe actif : 5,0%
- Eau : 78%
De plus, des tests ont montré la compatibilité du principe actif les matières premières utilisées en cosmétique : épaississants, émulsionnants, solvants.

Claims

REVENDICATIONS
1. Procédé d'obtention d'un principe actif cosmétique amincissant, caractérisé en ce qu'il comprend au moins la succession les deux étapes suivantes : - solubilisation de poudre de Nelumbo nucifera, et
- extraction sélective des composés polyphénoliques.
2. Procédé d'obtention d'un principe actif amincissant selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend la succession des étapes suivantes : - solubilisation de poudre de feuilles de Nelumbo nucifera dans un mélange eau/butylène glycol,
- extraction sélective des polyphénols,
- séparation des phases soluble et insoluble par filtration, décantation et/ou centrif ugation, - purification de la fraction active contenant les polyphénols par filtration, ultraf iltration, osmose inverse et/ou nanof iltration, et
- filtration stérilisante.
3. Principe actif susceptible d'être obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé par : - un taux de matières sèches compris entre 3 et 100 g/1,
- un pH compris entre 3 et 6,
- une teneur en composés phénoliques comprise entre 0,3 et6,7g/l, et
- une teneur en flavonols et flavanols supérieure à 50% des polyphénols totaux. 4. Principe actif selon la revendication 3, caractérisé par :
- un taux de matières sèches compris entre 5 et 12g/l, - un pH compris entre 4 et 5,
- une teneur en composés phénoliques comprise entre 0,
4 et 0,8 g/l, et
- une teneur en f lαvonols et f lαvαnols supérieure à 75% des polyphénols totaux.
5. Utilisation cosmétique du principe actif selon l'une des revendications 3 ou 4 pour incorporation à une composition cosmétique amincissante.
6. Utilisation cosmétique du principe actif selon l'une des revendications 3 ou 4 pour incorporation à une composition cosmétique à effet anti-cellulitique.
7. Utilisation cosmétique du principe actif selon l'une des revendications 3 ou 4 pour incorporation à une composition cosmétique à effet drainant du tissu adipeux.
8. Utilisation cosmétique du principe actif selon l'une des revendications 3 ou 4 pour réduire le stockage des graisses, limiter l'inflammation et préserver l'architecture fibreuse du tissu adipeux.
9. Composition cosmétique incluant le principe actif selon l'une des revendications 3 ou 4, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples, solutions, suspensions ou poudres.
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