EP4221678A1 - Nouvelle utilisation d'un peptide pour améliorer le confort de la peau et/ou des muqueuses et/ou l'apparence des phanères - Google Patents

Nouvelle utilisation d'un peptide pour améliorer le confort de la peau et/ou des muqueuses et/ou l'apparence des phanères

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Publication number
EP4221678A1
EP4221678A1 EP21799310.4A EP21799310A EP4221678A1 EP 4221678 A1 EP4221678 A1 EP 4221678A1 EP 21799310 A EP21799310 A EP 21799310A EP 4221678 A1 EP4221678 A1 EP 4221678A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
peptide
healthy
skin
seq
scalp
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
EP21799310.4A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Catherine BONNAUD-ROSAYE
Louis Danoux
David Herault
Philippe Moussou
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BASF Beauty Care Solutions France SAS
Original Assignee
BASF Beauty Care Solutions France SAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by BASF Beauty Care Solutions France SAS filed Critical BASF Beauty Care Solutions France SAS
Publication of EP4221678A1 publication Critical patent/EP4221678A1/fr
Pending legal-status Critical Current

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    • A61Q5/00—Preparations for care of the hair
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    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients
    • A61K2800/75—Anti-irritant

Definitions

  • the subject of the present invention is the use of a peptide of sequence SEQ ID No. 1 and/or its homologs, optionally either in the form or in combination with the peptide SEQ ID No. 2, in particular in the form of rice hydrolyzate enriched with this (these) peptide(s), and optionally in combination with the peptides SEQ ID No. 3 and/or SEQ ID No. 4 to improve the comfort of the skin, in particular of the scalp, and/or of the mucous membranes, and/or the appearance of the superficial body growths, in particular of the keratinous fibres.
  • a subject of the present invention is also the applications of this peptide in cosmetic and/or dermatological compositions.
  • Skin sensitivity is a condition that is too often neglected.
  • skin sensitivity is not limited to the face and it is estimated that between a third and half of the population has a so-called sensitive scalp.
  • the triggering factors which have a significant impact on the manifestations of sensitive skin, and in particular the sensitive scalp, are temperature variations, in particular heat and cold, humidity, dry air, sun, pollution and aggressive and/or repeated shampoos as well as aggressive hair treatments (colouring, straightening, etc.).
  • the stratum corneum otherwise known as the stratum corneum (SC) typically has a pH ranging from 4 to 6.
  • This acid character which has earned it the name “acid mantle”, is recognized as an essential condition for healthy skin.
  • This pH gradient within the skin helps to orchestrate epidermal differentiation and corneocyte excretion through the involvement of several pH-dependent enzymes.
  • the enzymes involved in the synthesis of ceramides, critical components of the stratum corneum barrier, ⁇ -glucocrebrosidase and sphingomyelinase have an optimal acid pH.
  • Elevations in pH in normal skin thus affect the integrity, cohesion and desquamation of the stratum corneum, due to increased activity of serine proteases, kallikrein 5 and 7, and reduced activity of enzymes of synthesis of ceramides. Maintaining or restoring an acid skin pH is therefore essential to preserve and/or restore healthy skin and avoid the signs of discomfort that often result, such as itching, tightness and sensitivity.
  • a sensitive scalp is manifested by a higher pH than a non-sensitive scalp, and a greater tendency to become irritated. This rise in pH could contribute more quickly to uncomfortable and/or unpleasant scalp manifestations, including itching and contribute to the appearance of dandruff, in part by affecting sensitivity to Malassezia metabolites.
  • the present invention aims to provide a new cosmetic and / or dermatological active ingredient to improve the comfort of the skin, in particular of the scalp as well as the mucous membranes and / or to improve the appearance of the appendages in particular the keratin fibers, as an alternative to cosmetic ingredients and existing dermatological conditions.
  • the present invention also aims to provide a new cosmetic and/or dermatological active ingredient for the specific care and/or treatment needs of sensitive scalps.
  • the inventors have discovered that the peptide of SEQ ID No. 1 is capable of improving the comfort of the skin, including the scalp, and/or of the mucous membranes, and/or of improving the appearance of the skin appendages, in particular the keratin fibres, preferentially the hair.
  • the peptide of SEQ ID No. 1 has already been described in the field of cosmetics among a large number of peptides derived from rice and peas in patent application W02017009484A1 (as SEQ ID No. 423) as anti-inflammatory agent capable of inhibiting TNFalpha secretion by macrophages in the presence of lipopolysaccharides, as well as in patent application WQ2017009490A1 (as SEQ ID No. 248) as an agent capable of increasing fibroblast prediferation human skin and thus treat the visible signs of aging.
  • This peptide is naturally present in a rice grain protein Oryza sativa, from which it can be obtained. However, it is not naturally present in sufficient quantity to be detected there and produce the properties that are the subject of the invention. In the context of the present invention, it was obtained by enzymatic hydrolysis.
  • Enzymatic hydrolysis by its specificity offers the advantage of being able to be carried out under controlled conditions in particular pH, temperature and pressure.
  • the enzymes are chosen so as to obtain the peptides of interest and lead to the production of specific hydrolysates, which are very different with regard to the peptide fragments which they contain, whether in terms of the nature of the fragments, of molecular weight and of distribution.
  • patent application WO03039496A1 describes a capryloyl-glutamate salt and/or capryloyl salts of rice protein hydrolyzate as a self-preserving and moisturizing agent, as well as sebum-regulating, anti-dandruff and anti-odor agents.
  • Patent KR20040108226B describes a black rice protein hydrolyzate, obtained by hydrolysis with papain to hydrate, increase collagen synthesis and inhibit melanogenesis.
  • the invention thus relates to the use of the peptide of SEQ ID No. 1 and / or its homologs for its cosmetic properties chosen from improving the comfort of healthy skin, in particular healthy scalp, and / or healthy mucous membranes , and/or improve the appearance of healthy skin appendages, preferably the hair.
  • This peptide has many additional advantages in that it does not attack or remove the sebum present on the skin, in particular the scalp, which makes it particularly suitable for the care and/or treatment of skin, in particular sensitive scalps, especially in the form of a mild shampoo.
  • the peptide according to the invention has the advantage of inhibiting the release of TNF alpha by macrophages. It also makes it possible to inhibit elastases as described in Example 10.1.
  • the peptide according to the invention through its complementary properties, provides a perfectly adapted and complete solution to the specific needs of sensitive hair and scalps.
  • the peptide according to the invention is particularly suitable for producing a complete composition for the care and/or cosmetic treatment of the body.
  • the peptide of SEQ ID No. 1 is in the form of the peptide of SEQ ID No. 2 and/or its homologs.
  • the peptide according to the invention is in the form of a hydrolyzate of Oryza sativa rice proteins, advantageously at a content of at least equal to or greater than 0.00001% by weight of dry matter relative to the weight total of the hydrolyzate, preferably between 0.0001% and 0.03%, more preferably between 0.001% and 0.01%.
  • the peptide according to the invention is used in combination with at least one peptide chosen from the peptides of SEQ ID No. 2, and/or SEQ ID No. 3 and/or SEQ ID No. 4, advantageously with the peptides of SEQ ID No. 2, SEQ ID No. 3 and SEQ ID No. 4, preferably in the form of the hydrolyzate enriched in peptide according to the invention.
  • the peptide according to the invention is the peptide of SEQ ID No. 1:
  • SEQ ID No. 1 GYYGEQQQQPGMTR This peptide contains all 14 amino acids: Gly-Tyr-Tyr-Gly-Glu-GIn-GIn-Gln-Gln-Pro-Gly-Met-Thr-Arg and has an average molecular weight of 1642.72 daltons.
  • rice grain proteins (Oryza sativ) and can be obtained by enzymatic hydrolysis of rice grains as described in patent applications W02017009484A1 and W02017009490A1, or by chemical synthesis according to conventional methods in the field. It can also be purified or obtained as indicated in Example 1.
  • the peptide according to the invention is the peptide of SEQ ID No. 2 which contains the peptide SEQ ID No. 1, preceded by the 3 additional amino acids Ser-Glu-Glu.
  • SEQ ID No. 2 SEEGYYGEQQQQPGMTR
  • the peptide SEQ ID No. 2 thus contains 17 amino acids and has an average molecular weight of 1988.01 daltons. It is also naturally present in rice grain proteins (Oryza sativa) and can be obtained by enzymatic hydrolysis of rice grains as described in patent applications WQ2017009484A1 and WQ2017009490A1, or by chemical synthesis according to conventional methods in the field. . It can also be purified or obtained as indicated in example 1
  • the peptide according to the invention is in the form SEQ ID No. 1 and/or SEQ ID No. 2, preferably in the form of a mixture of peptides SEQ ID No. 1 and SEQ ID No. 2 , in particular contained in an enriched hydrolyzate according to the invention.
  • the peptides of SEQ ID No. 1 and/or SEQ ID No. 2 can be combined with the peptides of SEQ ID No. 3 and/or SEQ ID No. 4, optionally in the form of a hydrolysis such as those described in Example 2.
  • the peptide of SEQ ID No. 1 is used in combination with the peptide of SEQ ID No. 2 and/or in combination with the peptide of SEQ ID No. 3 and/or in combination with the peptide of SEQ ID No. 4.
  • This SEQ ID No. 3 peptide has 16 amino acids and has a molecular pad of 1971.97 daltons. It can be isolated from a rice protein hydrolyzate (Oryza sativa) according to the method described in Example 3 or be obtained as described in patent application WQ2017009484 for obtaining the sequence SEQ ID No. 218 or by chemical synthesis. It can also be purified or obtained as indicated in Example 1.
  • This 12 amino acid peptide has a molecular weight of 1294.37 daltons; It can be isolated from a rice protein hydrolyzate (Oryza sativa) according to the method described in Example 3 or be obtained as described in patent application WQ2017009484 for obtaining the sequence SEQ ID No. 194 or by chemical synthesis. It can also be purified or obtained as indicated in Example 1.
  • the term “peptide” is understood to mean any isolated, natural or synthetic amino acid sequence, where appropriate capable of being obtained by chemical or biotechnological synthesis or by extraction from a biological tissue, for example a plant, an animal or a microorganism, in particular yeast, expressing naturally or after transduction the sequence of amino acids, optionally after post-translational modification of the latter.
  • the peptide can be modified by adding a functional group, for example coupled with a hydrophilic or hydrophobic penetrating agent, stability agent or with a protective group according to the conventional methods known to those skilled in the art, in particular by acylation of the group -NH 2 terminal, or amidation or alkylation of the terminal -COOH group.
  • the term "homolog" of an amino acid sequence means an amino acid sequence having a sequence identity of at least 85%, more preferably 90%, in particular of at least 95 %, and more particularly of at least 98%, more preferably at least 99% with said sequence and possessing a biological activity of the same nature.
  • sequence homology can be identified by any standard technique in the field, for example via the BLAST computer interface available on the NCBI website at the address http://blast.ncbi.nlm.nih.gov configured with the default settings.
  • a homolog of an amino acid sequence may differ from this sequence, for example, by one or more deletion(s) and/or insertion(s), and/or one or more substitution(s) of an amino acid .
  • a homolog of an amino acid sequence can comprise one or more conservative amino acid substitutions.
  • a conservative substitution is the replacement, in a sequence, of an amino acid by another amino acid endowed with physicochemical properties substantially similar, or sufficiently close to those of the original amino acid, so that the properties and functions of the peptide are not, or substantially not, affected.
  • the amino acid sequence modifications shown above may be referred to generally as a "mutation".
  • homologs of the peptides according to the invention also relate to the mutants and the variants of the amino acid sequences of the invention having a biological activity of the same nature.
  • biological activity of the same nature of an amino acid sequence of the invention, is meant in particular its ability to exhibit the properties according to the invention.
  • the term “improving the comfort of the skin and/or mucous membranes” means reducing the unpleasant and/or uncomfortable manifestations of healthy skin and/or healthy mucous membranes, in particular those due to a drop in skin homeostasis and /or mucosal and/or due to modifications of the stratum corneum, in particular due to a decrease in the involucrin content and/or the filaggrin content and/or an increase in skin pH, chosen from skin dryness and/or mucosal, in particular on the scalp, itching, redness, skin tightness, desquamation, in particular scales of the scalp, dandruff, cracking as well as skin sensitivity, in particular of the scalp, and /or provide a feeling of cutaneous and/or mucosal comfort and/or make the skin and/or the mucosa softer and/or reduce its roughness.
  • the improvement in skin comfort can be measured by conventional methods known to those skilled in the art. Mention may be made, by way of example, of the following techniques: measurement of the increase in the synthesis of involucrin by the epidermal keratinocytes as presented in example 5, measurement of the increase in the synthesis of filagrin in a reconstructed epidermis as presented in Example 6, measurement of redness, in particular of the scalp according to the method presented in Example 7, measurement of the quantity of scales, in particular of the scalp according to the method presented in Example 7, measurement of the skin hydration, in particular by a corneometer, such as that described in example 8, measurement of the skin pH, in particular via a pH meter.
  • the peptide according to the invention has the advantage of providing a lasting, persistent effect on hydration even after its use has been stopped, as demonstrated in Example 8.
  • the improvement in scalp comfort can be measured, for example, by:
  • decline in skin and/or mucosal homeostasis means an imbalance of the skin and/or mucosal barrier by a reduction in water homeostasis and/or by variation in pH, in particular an increase in pH.
  • the loss of cutaneous homeostasis of healthy skin and/or healthy mucous membrane thus does not result according to the invention from an alteration of the epithelial cells as may be the case for example during an injury, which belongs to dermatology.
  • the peptide according to the invention is thus particularly suitable for the care and/or treatment of dry mucous membranes, dry skin, in particular dry scalp, sensitive skin, irritated skin and/or mucous membranes, and/or presenting a drop in cutaneous and/or mucosal homeostasis, in particular water and/or elevation of pH.
  • the use according to the invention is intended for the care of dry and/or sensitive skin, and/or dry and/or sensitive scalp.
  • the unpleasant and uncomfortable manifestations of healthy skin and/or healthy mucous membranes are not related to age or to an alteration of epithelial cells.
  • the term “improving the comfort of the scalp” means reducing the unpleasant and uncomfortable manifestations of the healthy scalp, in particular those due to a drop in cutaneous homeostasis and/or due to modifications of the stratum corneum, in particular due to a decrease in the involucrin content and/or a decrease in the filaggrin content and/or an increase in skin pH, chosen from dryness of the scalp, itching of the scalp, redness of the scalp, tightness of the scalp, flaking of the scalp, dandruff, cracking as well as sensitivity of the scalp, and/or providing a feeling of skin comfort and/or making the scalp softer and/or or decrease its roughness.
  • the improvement in the comfort of the scalp can in particular be measured using conventional methods.
  • it can be measured according to the methods presented in Example 7, by measuring the redness of the scalp and/or by measuring the pH of the scalp and or by evaluating the scales of the scalp.
  • the peptide according to the invention, in particular the hydrolyzate according to the invention which contains it, has the advantage of not significantly reducing the quantity of sebum present on the scalp.
  • the improvement in the appearance of skin appendages, especially hair can be measured using conventional techniques.
  • mention may be made of measuring the improvement in the strength and resistance of the appendages by measuring the improvement in the structure of the keratin fibres, as described in example 12.1.
  • the growth of keratin fibers can be measured according to the method described in Example 12.2.
  • the term "cosmetic" means a non-pharmaceutical, non-therapeutic use, which is not intended for the prevention and/or treatment of skin and/or mucous membranes and/or appendages qualified as pathological by a specialist. in the field, such as a dermatologist. It is therefore a question of use on healthy skin and/or mucous membranes and/or appendages.
  • healthy skin in particular healthy scalp and/or healthy mucous membrane and/or healthy skin appendage
  • the term “skin” means the skin of all or part of the body, in particular human, including the scalp, chosen from the scalp, the face, the hands, the arms, the neckline, the legs, neck, back, shoulders, stomach, wrists, forearms, ankles, thighs, neck, joint folds and armpits.
  • the skin is that which may present uncomfortable and/or unpleasant manifestations, in particular the areas of exposure, friction and/or maceration. This is more particularly the face, scalp, hands, neck, Vietnameselleté, scalp, joint folds and armpits.
  • mucosa(s) means the ocular, nasal, vaginal, anal mucosa and/or the oral mucosa, in particular the labial buccal mucosa, preferentially, the labial, ocular and/or nasal mucous membranes .
  • keratin fibers means the hair fiber (the hair), the eyelashes, the eyebrows, the hairs in particular of the nasal mucosa, the ears, the beard and/or the mustache, in particular the hair fiber (the hair).
  • the application is topically, advantageously on specific parts and/or uncomfortable areas of the body, in particular chosen from the scalp, face, hands, arms, Vietnameselleté, legs, neck , back, shoulders, stomach, wrists, forearms, ankles, thighs, neck, joint and armpit folds, labial mucous membranes, body hair, eyelashes, eyebrows and/or hair, preferably the scalp and/or the hair.
  • topically acceptable means an ingredient suitable for topical application, non-toxic, non-irritating to the skin and/or mucous membranes and/or appendages, which does not induce allergic response and which is not chemically unstable.
  • the peptide alone or in combination is used in the form of a hydrolyzate of rice proteins (Oryza sativa), in particular enriched in peptide according to the invention.
  • hydrolyzate enriched in peptide according to the invention means a hydrolyzate in which the peptide of SEQ ID No. 1, and/or of SEQ ID No. 2 according to the invention is detected at a color ranging beyond the threshold of the detection limit with sensitive techniques in the matter, for example LC-MS/MS, that is to say in general a content at least equal to or greater than 0.00001% by weight per relative to the total dry matter weight of the hydrolyzate.
  • the peptide SEQ ID No. 1, optionally in the form of SEQ ID No. 2 or combined with a peptide of SEQ ID No. 2 is contained in a hydrolyzate of rice prdeine, preferably at a quantity of at least equal to or greater than 0.00001% by weight of dry matter relative to the total weight of the hydrolyzate, preferably between 0.0001% and 0.03%, more preferably between 0.001% and 0, 01%.
  • the peptide hydrolyzate (or protein hydrolyzate) of rice is obtained by enzymatic hydrolysis in a single step.
  • the hydrolyzate can be obtained by successive hydrolysis using the same enzyme or a mixture of enzymes.
  • Enzymatic hydrolysis is carried out by one or more proteolytic enzymes, which may be proteases of plant origin or from microorganisms.
  • the enzymatic hydrolysis takes place until its completion, which can be determined by the person skilled in the art in a known way, for example by determining the constant pH or by photometry using the detection of free NH 2 groups or by determining the constant amount of SEQ ID No. 1 and SEQ ID No. 2 peptides by liquid chromatography and mass spectroscopy.
  • the amount of enzyme(s) used is not critical per se, but should be in the range of 0.05 to 5, preferably 0.1 to 2% by weight based on the weight of the starting material containing the peptide.
  • the hydrolysates obtained can finally be treated, for example by filtration of the undissolved fractions.
  • the pH is preferably set at values between 3.0 and 7.5, preferably between 3.5 and 5.5.
  • the hydrolysates obtained are in liquid form, in particular aqueous solutions, and can be used directly or in concentrated form; they preferably have a dry matter content in the range of 1 to 50% by weight, preferably 5 to 30% by weight.
  • Adjuvants can be added such as polyols, glycols, acids (citric acid, sorbic acid, sulfuric acid, benzoic acid or their salts, etc.).
  • hydrolysates obtained at this stage can be further concentrated and/or purified to select the targeted molecular weight fractions, by successive steps of ultrafiltration or nanofiltration through filters with variable porosity, or by means of a method of the chromatographic type, for example to specifically enrich the hydrolyzate in these peptides.
  • Hydrolysates enriched according to the invention are presented in Example 2.
  • peptide hydrolysates according to the invention in powder form by drying (atomizer, freeze-dried, etc.) with or without a support such as mannitol, maltodextrin, cyclodextrin, according to conventional techniques of formulation known to those skilled in the art.
  • the preferred hydrolyzate according to the invention contains the peptide of SEQ ID No. 1 and/or the peptide of SEQ ID No. 2, preferably both peptides, in a total content at least equal to or greater than 0.00001% by weight relative to the total dry matter weight of the hydrolyzate, preferably between 0.0001% and 0.03%, more preferably between 0.001% and 0.01%.
  • this hydrolyzate also has at least one, and preferably at least two, and even more preferably all of the following characteristics:
  • - Contains at least 70%, more preferably 80%, of peptides having a molecular weight of less than 2500 daltons.
  • the preferential protein hydrolyzate according to the invention is characterized by the presence of all these characteristics.
  • the average molecular weight expressed in daltons (or g/mol) is determined by steric exclusion chromatography known to those skilled in the art.
  • the molecular weight distribution is measured according to the invention as described in example 3.
  • the rice peptide hydrolyzate according to the invention can be obtained by carrying out the following steps:
  • hydrolysis preferably the hydrolysis is carried out enzymatically by means of proteolytic enzymes, preferably of plant origin or derived from microorganisms, by selecting the enzyme and adjusting the temperature and pH conditions to obtain the right degree of hydrolysis and the molecular weight profile;
  • this inactivation is carried out according to the technical recommendation of the supplier(s) of the enzyme(s);
  • the rice protein hydrolyzate enriched in peptide according to the invention which is in liquid form and which also constitutes an embodiment of the invention.
  • the hydrolyzate also contains the peptides SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 2, SEQ ID No. 3 and SEQ ID No. 4, each in an individual content at least equal to or greater than 0.00001% by weight relative to the total dry matter weight of the hydrolyzate, the total sum of these 4 peptides being at least equal to 0.00004% by weight relative to the total dry matter weight of the hydrolyzate, preferably greater than 0 .0001%.
  • Examples of such a hydrolyzate enriched in peptide according to the invention are presented in examples 2a) 2b) and 2c) and constitute the preferred embodiments of the present invention.
  • the peptide according to the invention preferably in the form of a hydrolyzate enriched in peptide, is used topically.
  • topical route means the application of the peptide according to the invention, preferably in the form of a hydrolyzate enriched in peptide and/or of the composition and/or of the ingredient according to the invention on the surface of the skin, in particular leather scalp and/or mucous membranes, and/or skin appendages, preferably hair, in particular by direct application or by vaporization.
  • cosmetic and/or pharmaceutical ingredient(s) means one or more plant extracts and/or one or more natural or synthetic molecules and/or mixtures thereof intended for cosmetic and/or pharmaceutical application.
  • Cosmetic ingredients are notably defined by the International Nomenclature of Cosmetic Ingredients (INCI).
  • suitable cosmetic or pharmaceutical vehicle means that the composition or the components thereof are suitable for use in contact with human skin and/or mucous membranes without toxicity, incompatibility, instability, allergic response, or their equivalents, undue.
  • the cosmetic or pharmaceutical, in particular dermatological, ingredient in liquid form containing the peptide according to the invention, in particular in the form of a hydrolyzate enriched in peptide according to the invention and in particular that of Example 9, can be used in a cosmetic or pharmaceutical composition, in particular dermatological, preferably with a content by weight of dry matter relative to the total weight of the composition of between 0.01 and 10%, advantageously between 0.1 and 5%, in particular between 0.2 and 3%.
  • the peptide preferably in the form of the peptide-enriched hydrolyzate, will be included in the cosmetic or pharmaceutical composition in a content of between 1x10′ 5 % to 20% by weight, preferably 1x10 4 % to 10% by weight, again advantageously from 1 ⁇ 10 % to 3% by weight, more preferably from 0.001% and 0.1% by weight of dry matter relative to the total weight of the composition.
  • compositions according to the invention may contain any suitable solvent and/or any suitable vehicle and/or any suitable excipient, optionally in combination with other compounds of interest. They may in particular contain a cosmetically or dermatologically acceptable excipient and/or an appropriate cosmetic or pharmaceutical vehicle chosen from surfactants, preservatives, buffering agents, swelling agents, chelating agents, biocidal agents, denaturants, opacifying agents, pH adjusters, reducing agents, stabilizing agents, emulsifiers, thickeners, gelling agents, film-forming polymers, solvents, fillers, bactericides, odor absorbers, matting agents, conditioning agents, texture agents, shine agents, pigments, dyes, perfumes and chemical or mineral sun filters, trace elements, essential oils, sweeteners, taste modifying agents. These combinations are also covered by the present invention.
  • CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, Second Edition (1992) describes various cosmetic and pharmaceutical ingredients commonly used in the cosmetics and pharmaceutical industry, which are in particular suitable for oral administration and/or for topical use.
  • the excipient(s) and/or the vehicle(s) are chosen from the group comprising polyglycerols, esters, polymers and cellulose derivatives, lanolin derivatives, phospholipids, lactoferrins, lactoperoxidases, stabilizers based on sucrose, vitamin E and its derivatives, xanthan gums, natural and synthetic waxes, vegetable oils, triglycerides, unsaponifiables, phytosterols, silicones, protein hydrolysates, betaines, aminoxides, extracts plants, sucrose esters, titanium dioxides, glycines, and parabens, and more preferably from the group consisting of steareth-2, steareth-21, glycol-15 stearyl ether, cetearyl alcohol, phenoxyethanol, methylparaben, ethylparaben, propylparaben, butylparaben, butylene glycol, caprylyl glycol, tocopherols natural,
  • the cosmetic or pharmaceutical composition or the peptide, preferably the peptide-enriched hydrolyzate according to the invention, optionally in the form of a cosmetic or pharmaceutical ingredient, can be in all the dosage forms conventionally used for topical application, such as liquid or solids or even in the form of liquid under pressure.
  • aqueous or oily solution a cream or an aqueous gel or an oily gel, in particular in a jar or in a tube, in particular a shower gel, a shampoo, a milk, an emulsion, a hydrogel, a microemulsion or a nanoemulsion, in particular oil-in-water or water-in-oil or multiple or silicone-based, a serum, a lotion, in particular in a glass or plastic bottle or in a dispenser bottle or in an aerosol, an ampoule, a liquid soap, a paste, a dermatological bar, an ointment, a mousse, an aerosol, a mask, a patch, an anhydrous product, preferably liquid, pasty or solid, for example in the form of a stick, in particular in a stick or in powders , especially makeup.
  • the composition is in the form of a serum, a lotion, a cream, a milk, an ointment, a paste, a mousse, an emulsion, a a hydrogel, a shower gel, a mask, a stick, a patch, or makeup powders, advantageously a cream or a lotion.
  • the composition is in the form of a cream, lotion for the skin and/or the hair or of a shampoo, conditioner, which may or may not be rinsed off (leave-on type).
  • the peptide according to the present invention preferably the peptide-enriched hydrolyzate according to the invention, has the advantage of not attacking and/or stripping the scalp, allowing the sebum level to be maintained and is particularly suitable for the care and/or or the treatment of sensitive and/or prone to irritation scalp.
  • the cosmetic or pharmaceutical composition or the peptide according to the invention may be in the form of an eye drop, a lotion, an aerosol, a gel, or a mucoadhesive composition.
  • the cosmetic or pharmaceutical composition may also comprise other cosmetic or pharmaceutical ingredients, active in the treatment of the skin and / or mucous membranes and / or appendages inducing a complementary or synergistic effect with the peptide according to the invention, chosen for example from active ingredients for sensitive skin and/or mucous membranes, active ingredients on the scalp, anti-dandruff and/or so-called anti-hair loss active ingredients.
  • anti-hair loss ingredients mention will be made of the combination of sulphopeptides, amino acids, aminosaccharides, group B vitamins, zinc and/or extract of Panax ginseng and Artium majus marketed under the name TrichogenTM LS 8960 by the Applicant and / or a capillary protective agent such as an extract of Litchi chinensis pericarp marketed under the name LitezermTM by the Applicant, and/or a soothing and anti-itch active ingredient such as rapeseed phytosterols marketed under the name PhytosootheTM LS9766 by the Applicant and/or an active ingredient to strengthen the hair follicle such as an extract of Nephelium lappaceum and/or minodoxil, valproic acid as marketed by Amorepacific and/or stemoxidine and/or aminoxil and/or Hairgenyl as marketed by Silab and/or Rednensyl (as marketed by Givaudan-l
  • These combinations of active agents are capable of strengthening the hair follicle and thus contributing to reducing the loss of keratinous fibers, preferably hair.
  • active cosmetic ingredients promoting the firmness of the skin such as a synthetic tetrapeptide marketed under the name DermicanTM, an extract of Hibiscus abelmoschus marketed under the name of LinefactorTM, a purified pea extract marketed under the name ProteasylTM, an
  • the peptide according to the present invention in combination with active ingredients on the cutaneous and/or mucosal microbial flora and/or active on the barrier function of the skin, in particular moisturizing and/or soothing active ingredients, among which an oligosaccharide obtained by enzymatic synthesis marketed by Solabia under the name BioEcoliaTM or a complex of alpha-glucooligosaccharides marketed by the same company under the name EcoskinTM, an extract of Alisma plantago-aquatica, an extract of Argania spinosa (Lipofructyl TM Argan), a mixture of ceramides (SphingocerylTM VEG), purifying extracts of Boldo (BetapurTM), products based on inulin or fructooligosaccharides, extracts of bifidobacteria or even an extract of Orthosiphon stamineus to fight against oily skin (MAT-XSTM Bright), a natural honey extract
  • the present invention also relates to a cosmetic care and/or treatment process comprising the topical application, in particular daily, to at least one area of healthy skin, advantageously the healthy scalp, and/or healthy mucous membrane and/or or healthy skin appendage, of the peptide according to the invention, preferably in the form of a hydrolyzate enriched with peptide according to the invention or of a cosmetic composition according to the invention for improving the comfort of healthy skin, in particular the scalp healthy, and/or healthy mucous membranes, and/or the appearance of skin appendages, in particular keratin fibres.
  • the invention also relates to a cosmetic treatment method for improving the comfort of healthy skin, in particular healthy scalp, and/or healthy mucous membranes, and/or the appearance of healthy appendages, in particular fibers healthy keratins of an individual who needs/wants it including the steps
  • a subject of the present invention is also the peptide of SEQ ID 1 and/or its homologs according to the present invention, preferably in the form of a hydrolyzate enriched in peptide according to the invention, for its use alone or in a pharmaceutical composition.
  • dermatological in the treatment and/or prevention of at least one pathology associated with a drop in skin homeostasis and/or a decrease in the involucrin content and/or the filagrin content and/or an increase of cutaneous pH and/or any one of their combinations, in particular ichthyosis and alopecia as well as desquamations associated with certain pathologies such as acute irradiation, sunburn, burns.
  • the pharmaceutical, in particular dermatological, composition preferably contains the peptide according to the invention has a peptide content of between 1x10' 5 % to 20% by weight, preferably from 1x10' 4 % to 10% by weight, still advantageously from 1x10' 3 % to 3% by weight, more preferably from 0.001% and 0.1% by weight, relative to the total weight of the composition.
  • the temperature is expressed in degrees Celsius and the pressure is atmospheric pressure.
  • FIG. 1A represents a photograph of a surface of the scalp before application of a composition according to the invention and FIG. 1B shows a photograph of a surface of the human scalp after one week of application of a composition according to the invention under the conditions of Example 1.
  • FIG. 2A represents a photograph of a surface of the scalp before application of a composition according to the invention
  • FIG. 2B shows a photograph of a surface of the human scalp after three weeks of application of a composition according to the invention under the conditions of Example 1.
  • FIG. 3A represents a photograph of a surface of the scalp before application of a composition according to the invention
  • FIG. 3B shows a photograph of a surface of the human scalp after three weeks of application of a composition according to the invention and one week after stopping the application under the conditions of Example 1.
  • FIG. 4 represents a photograph by confocal microscopy of a histological section of an epidermis reconstructed after immunostaining with filaggrin (in green): 4A-untreated control; 4B—after treatment with 0.01% (w/v) of rice protein hydrolyzate from Example 4 free of peptide according to the invention; 4C—after treatment with 0.01% (w/v) of the peptide according to the invention, in particular in the form of the hydrolyzate according to Example 2b, under the conditions of Example 6.
  • Example 1 Production of the peptides of SEQ ID No. 1, SEQ IP No. 2, SEQ IP No. 3 or SEQ IP No. 4
  • Peptide SEQ ID No. 1 GYYGEQQQQPGMTR
  • This 14 amino acid peptide can be obtained from a rice protein hydrolyzate (Oryza sativ) as described in example 2 or as described in patent application WQ2017009484A1 for obtaining the sequence SEQ ID No. 423 or by chemical synthesis. It has a molecular weight of 1642.72 daltons.
  • Peptide SEQ ID No. 2 SEEGYYGEQQQQPGMTR
  • This 17 amino acid peptide can be obtained from a rice protein hydrolyzate (Oryza sativa) as described in Example 2 or be obtained as described in patent application WQ2017009484 for obtaining the sequence SEQ ID No. 424 or by chemical synthesis. It has a molecular weight of 1988.01 Daltons.
  • the peptides of SEQ ID No. 1 and/or SEQ ID No. 2 can be combined with the peptides of SEQ ID No. 3 and/or SEQ ID No. 4, optionally in the form of a hydrolyzate according to example 2.
  • This 16 amino acid peptide can be obtained from a rice protein hydrolyzate (Oryza sativa) as described in Example 2 or be obtained as described in patent application WQ2017009484 for obtaining the sequence SEQ ID N °218 or by chemical synthesis. It has a molecular weight of 1971.97 daltons.
  • This 12 amino acid peptide can be obtained from a rice protein hydrolyzate (Oryza sativa) as described in Example 2 or be obtained as described in patent application WQ2017009484 for obtaining the sequence SEQ ID N °194 or by chemical synthesis. It has a molecular weight of 1294.37 daltons.
  • Example 2 Production of hydrolysates enriched in peptide SEQ IP No. 1 and/or SEQ IP No. 2 according to the invention
  • This hydrolyzate has a pH of 4.2;
  • This hydrolyzate contains, by weight relative to the dry weight of the hydrolyzate: the peptide SEQ IP No. 1 at the content of 0.0031% and the peptide SEQ IP No. 2 at the content of 0.0028%.
  • This hydrolyzate has a pH of 4.1; - This hydrolyzate contains, by weight relative to the dry weight of the hydrolyzate: the peptide SEQ ID No. 1 at the content of 0.0033% and the peptide SEQ ID No. 2 at the content of 0.0111%.
  • This hydrolyzate has a pH of 4.2;
  • This hydrolyzate contains, by weight relative to the dry weight of the hydrolyzate: the peptide SEQ ID No. 1 at the content of 0.0016% and the peptide SEQ ID No. 2 at the content of 0.0012%.
  • Example 3 Measurement of average molecular weight and peptides.
  • the average molecular weight defined in Daltons (Da) and the distribution of the molecular weights are determined by steric exclusion chromatography.
  • the Agilent 1260 Infinity liquid chromatography apparatus with binary pump and degasser was used in combination with PSS WinGPC UniCh-rom.
  • P55 WinGPC UniChrom is a macromolecular chromatography data system with manufacturer-independent real-time data acquisition for comprehensive analysis of macromolecules, and is suitable for the analysis of protein hydrolysates.
  • the chromatographic column used is a specific chromatographic column (Superdex Peptide 10/300 GL from GE Healthcare Life Science, pore width 100 A, particle size 5 ⁇ m) for the high resolution separation of proteins and peptides.
  • This column was chosen because it is particularly well suited to determine biomolecules with a molecular weight between 100 and 7,000 daltons.
  • Dilute hydrochloric acid (0.05 M) with a flow rate of 0.5 ml/min was used as the eluent.
  • Detection was performed with a refractive index detector (RID).
  • Samples were prepared by filtration through a 0.2 ⁇ m filter before injection.
  • Liquid chromatography was performed using a 13 min gradient from 0 to 95% acetonitrile on an Aeris 1.7 ⁇ m Peptide XB-C18 150 x 2.1 mm reverse phase column (Phenomenex) coupled to a spectrometer of mass QTRAP 5500 (AB Sciex). Chromatographic peaks corresponding to predicted peptides were integrated using Skyline version 3.5 (University of Washington). Isotope-labeled peptides with a 13C, 15N labeled C-terminal arginine residue were synthesized and used as internal standards and calibration. The limit of detection (LOD) for each peptide was estimated using a signal-to-noise approach.
  • LOD limit of detection
  • a rice protein hydrolyzate marketed by BASF under the name Gluadin R Benz was studied as to its composition and its effects on the skin and the hair in the following examples.
  • Example 5 Effect of a product according to the invention on the synthesis of involucrin
  • Involucrin is a protein synthesized by the keratinocytes of the first spinous layers up to the granular layer of the human epidermis. During the differentiation of keratinocytes into corneocytes, involucrin is polymerized with other proteins to form the cornified envelope deposited on the inner face of the cell membrane. Involucrin expression is disrupted in several pro-inflammatory skin conditions; Several chemical irritants such as SDS (sodium dodecyl sulfate) and DNCB (dinitrochlorobenzene) modify the expression of involucrin by induction of TNF alpha.
  • SDS sodium dodecyl sulfate
  • DNCB dinitrochlorobenzene
  • Example 2b the hydrolyzate according to the invention of Example 2b, compared to the rice protein hydrolyzate of Example 4, or without any product (untreated control called Ctrl).
  • the content tested is expressed in weight of dry matter of the hydrolyzate on the total volume of the medium comprising the hydrolyzate.
  • HBSS Hanks balance salts solution
  • ELISA Kit ELISA Human involucrin BT601, Clinisciences France
  • Table 1 The peptide-enriched hydrolyzate according to the invention stimulated the synthesis of involucrin by the keratinocytes. At isodose, the hydrolyzate according to the invention containing the peptide according to the invention was 1.3 times more effective than the comparison hydrolyzate of example 4. The presence of the peptides SEQ ID n°1 and SEQ ID n °2 explain this difference.
  • the peptide according to the invention in particular in the form of the hydrolyzate according to Example 2b, stimulated the synthesis of filaggrin compared to the untreated control, and compared to the rice protein hydrolyzate of Example 4 devoid of peptide according to the invention.
  • compositions tested in this clinical study are as follows (the percentages being expressed by weight):
  • Table 2 The study was carried out on 44 female and male volunteers, aged 18 to 55, with a sensitive scalp and presenting with scattered and diffuse dry scales.
  • the volunteers were divided into 2 groups: one group tested the composition according to the invention in the form of a shampoo containing rice hydrolyzate at 2% (w/w), and the second group tested the composition not not containing the hydrolyzate according to the invention called placebo.
  • the shampoo was used 3 times a week for 21 days.
  • the ability to improve scalp comfort was assessed by measuring scalp redness (DermoGenius Ultra), scalp pH (pHmeter), scalp sebum (Sebumeter), and scalp flaking assessment (by a score assigned by an expert). All measurements and the clinical score were also taken immediately after the first application, 1 and 3 weeks after using the products and then 1 week after stopping treatment as well (post-treatment period)
  • the statistical analysis of the evolution of the instrumental parameters as a function of time was made after checking the normality of the distribution using the Shapiro-Wilk test: versus initial value by paired Student's t test or Wilcoxon test , and for comparison between products by unpaired Student's t-test or Mann-Whitney test.
  • the evolution of the parameter as a function of time was made with the non-parametric Wilcoxon test or Mann-Whitney test. The significance level was set at 5% (p ⁇ 0.05).
  • the first use of shampoo containing the rice protein hydrolyzate according to the invention at 2% led to an immediate significant improvement in the redness of the scalp, the pH of the scalp and the scale score.
  • the shampoo containing the rice peptide hydrolyzate according to the invention at 2% also provided a milder cleansing effect on the scalp, with a significant lower reduction in the level of sebum on the scalp than the placebo shampoo.
  • the shampoo containing the rice peptide hydrolyzate according to the invention at 2% has significantly reduced the redness of the scalp, reduced the pH of the scalp and reduced the scale score.
  • the shampoo containing the rice protein hydrolyzate according to the invention at 2% also provided a mild cleansing effect on the scalp without significant modification of the normal rate of sebum of the scalp after one week and 3 weeks of use, whereas that the placebo shampoo decreased this scalp sebum level at the same time.
  • the redness of the scalp in the group of volunteers who used the shampoo containing the rice protein hydrolyzate according to the invention at 2% was still significantly better than that of the placebo group, and the pH of their scalp was significantly lower than that of the group of volunteers who used the placebo shampoo.
  • Example 8 Clinical study on skin hydration.
  • the effect on skin hydration of the treatment with a rice protein hydrolyzate according to the invention at 2% (w/w) in a body lotion was tested versus a placebo treatment in a clinical study on human volunteers.
  • the compositions of the body lotions used were as follows (percentage by weight)
  • the hydration efficiency was evaluated using the corneometer. Measurements were taken at time points corresponding to baseline, as well as at 7, 14, and 28 days of treatment, and after 7 days after discontinuation of product use (35 days after baseline). A consumer self-perception questionnaire was also completed by the volunteers at 28 days.
  • the statistical analysis of the evolution of the instrumental parameters as a function of time was made after checking the normality of the distribution using the Shapiro-Wilk test by paired Student's t test or Wilcoxon's signed rank test. .
  • the significance level was set at 5% (p ⁇ 0.05).
  • the statistical difference in frequencies (%) between favorable (agree) and unfavorable (disagree) opinions was evaluated using the 5% two-tailed binomial test.
  • the body lotion containing the rice protein hydrolyzate according to the invention at 2% increased skin hydration significantly compared to the placebo body lotion after 2 and 4 weeks of 'use.
  • the hydration of the skin was still significantly higher for the leg treated with the body lotion containing the rice protein hydrolyzate according to the invention at 2%, compared to baseline and placebo.
  • Example 9 Formulation of a cosmetic ingredient according to the invention
  • a cosmetic ingredient according to the invention contains in percentage by weight (w/w):
  • Such an ingredient according to the invention is liquid and can be formulated according to the usual techniques known to those skilled in the art for the production of a cosmetic composition.
  • HFSCs hair follicle stem cells
  • This aging of the hair follicles is induced by the trans-epidermal elimination of stem cells by proteolysis of the hemidesmosomal protein COL17A1 (collagen BP180 / type XVII).
  • This proteolysis of hemidesmosomes which anchor hair follicle stem cells to the basement membrane, causes senescent-like asymmetrical cell divisions and hair follicle aging.
  • This proteolysis is triggered by neutrophil elastase, which is induced in aged HFSCs but is undetectable in young HFSCs, leading to COL17A1 depletion, hair follicle miniaturization or loss, and age-related hair loss.
  • the peptide according to the invention in particular in the form of the hydrolyzate according to example 2b, showed a significant inhibition of the elastase activity compared to an untreated control at a dose of 0.1% (w/w), i.e. 2.2 times more effective than the reference hydrolyzate of example 4 devoid of peptide according to the invention.
  • the peptide according to the invention in particular in the form of the hydrolyzate according to example 2b, stimulated the synthesis of collagen I significantly compared to an untreated control at a dose of 0.05% (w/w), either 2.4 times more effective than the rice protein hydrolyzate of example 4 devoid of peptide according to the invention.
  • Example 11 Clinical study on the suppleness and firmness of the skin
  • the volunteers applied a body lotion type composition similar to that of Example 7 per side of the abdomen.
  • the body lotions were used twice a day for 28 days.
  • the effect on firmness was assessed using a cutometer and the SkinFibrometer device.
  • the body lotion containing the rice protein hydrolyzate according to the invention at 2% (w/w) increased the firmness of the skin, significantly compared to the placebo body lotion.
  • Skin extensibility was also significantly increased compared to placebo after 28 days of product use.
  • the firmness of the skin was still significantly higher for the side of the abdomen treated with the body lotion containing the rice protein hydrolyzate according to the invention at 2%, relative to the baseline and to the placebo.
  • Example 12 Effects of the peptide according to the invention on the appearance of the hair
  • a hydrolyzate according to the invention was evaluated for its hair repair properties by the DSC (Differential Scanning calorimetry) method according to conventional protocols.
  • the DSC method is a common thermal analysis method for measuring the amounts of heat absorbed/emitted from a sample upon heating. Due to the different heat fluxes between the sample and the reference during the temperature change program (heating rate), conclusions can be drawn about the denaturation temperatures of treated hair (sample) compared to untreated hair ( reference).
  • the TA Instruments Q 100 DSC apparatus with automatic sampler was used. The measurement was carried out according to the method of F. J. Wortmann et al., From: J. Cosmet. Sei., 2002, 53, 219-228) with a heating rate of 2°C/min.
  • Damaged hair which has been treated with the protein hydrolyzate of the invention according to example 2 demonstrates a higher decomposition temperature, i.e. an improvement in the denaturation temperature of the hair, which is attributed to an improvement of the capillary structure.
  • the method used is based on a 3D model of hair follicle pseudopapillae from dermal papillary fibroblasts cultured in aggregates to evaluate a revitalizing effect on hair follicles and an effect on increasing hair growth.
  • the method is based on the aggregation of human hair papilla fibroblasts by gentle centrifugation of a suspension of human hair papilla fibroblasts.
  • Human dermal fibroblasts were prepared in the form of a suspension in basal medium containing the rice peptide in the form of the hydrolyzate according to the invention of example 2c, compared to the rice protein hydrolyzate of example 4, or without any product (untreated control), and transferred to 96-well microplates.
  • the cell suspensions were centrifuged for 5 minutes at 200g and then the aggregates formed were incubated for 5 days at 37°C, 5% CO2 and relative humidity over 95%.
  • the aggregates were rinsed with a balanced salt solution (PBS) then disrupted by incubation for about 1 hour with a mixture of proteases (Collagenase A, Trypsin) with EDTA. Then, part of the cell suspensions was centrifuged and the pellets were collected to measure the level of DNA (deoxyribose nucleic acid). The DNA was measured on a cell solubilized in a specific buffer according to the kit manufacturer's recommendations (CyQUANT NF Cell Proliferation Assay Kit, Invitrogen, France).
  • results are expressed as a percentage relative to the untreated control and expressed as an average.
  • the peptide according to the invention in the form of a hydrolyzate according to the invention stimulated the total DNA content in the fibroblasts of pseudopapillae compared to the untreated control and to the reference rice protein hydrolyzate (example 4).
  • the peptide according to the invention in the form of a hydrolyzate according to the invention was 5 times more effective than the rice protein hydrolyzate of Example 4.
  • Example 13 Examples of O/W polymer gel formulation
  • Suitable formulations are also those described in BASF patent application US20190216709 Examples B3 to B9, replacing the peptide of Example 2 with the hydrolyzate according to the invention described in Example 2a).
  • the peptides used in the context of the invention are collated in Table 7 below:

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Abstract

La présente invention a pour objet l'utilisation d'un peptide de séquence SEQ ID N°1 et/ou ses homologues, éventuellement sous la forme ou en combinaison avec le peptide SEQ ID N°2 notamment sous la forme d'hydrolysat de riz enrichi en ce(s) peptide(s), et optionnellement en combinaison avec les peptides SEQ ID N°3 et/ou SEQ ID N°4 pour améliorer le confort de la peau notamment du cuir chevelu et/ou des muqueuses et/ou l'apparence des phanères notamment des fibres kératiniques. La présente invention a également pour objet les applications de ce peptide dans des compositions cosmétiques et/ou dermatologiques.

Description

Nouvelle utilisation d'un peptide pour améliorer le confort de la peau et/ou des muqueuses et/ou l'apparence des phanères
Domaine Technique
La présente invention a pour objet l’utilisation d’un peptide de séquence SEQ ID N°1 et/ou ses homologues, éventuellement sois la forme ou en combinaison avec le peptide SEQ ID N°2 notamment scus la forme d’hydrolysat de riz enrichi en ce(s) peptide(s), et optionnellement en combinaison avec les peptides SEQ ID N°3 et/ou SEQ ID N°4 pour améliorer le confort de la peau, notamment du cuir chevelu , et/ou des muqueuses, et/ou l’apparence des phanères notamment des fibres kératiniques. La présente invention a également pour objet les applications de ce peptide dans des compositions cosmétiques et/ou dermatologiques.
Technique antérieure
La sensibilité cutanée tout particulièrement du cuir chevelu est une affection qui reste trop souvent négligée. Pourtant la sensibilité cutanée ne se limite pas au visage et on estime qu’entre un tiers et la moitié de la population présente un cuir chevelu dit sensible. Les facteurs déclenchants qui ont des impacts significatifs sur les manifestations des peaux sensibles et notamment du cuir chevelu sensible, sont les variations de température, notamment la chaleur et le froid, l’humidité, l’air sec, le soleil, la pollution et les shampooings agressifs et/ou répétés ainsi que les traitements capillaires agressifs (coloration, défrisage...).
La couche cornée, autrement dénommée stratum corneum (SC) présente classiquement un pH variant de 4 à 6. Ce caractère acide, qui lui vaut l’appellation de «manteau acide», est reconnu comme une condition essentielle pour une peau saine. Cela crée un gradient de pH de 2 à 3 unités entre le SC et les couches sous-jacentes que sont l’épiderme contenant les cellules épithéliales et le derme qui ont un pH quasi neutre. Ce gradient de pH au sein de la peau aide à orchestrer la différenciation épidermique et l'excrétion des cornéocytes grâce à l'implication de plusieurs enzymes dépendant du pH. Ainsi, les enzymes impliquées dans la synthèse des céramides, composants critiques de la barrière du stratum corneum, la oc-glucocrebrosidase et la sphingomyélinase ont un pH acide optimal.
Les élévations du pH dans la peau normale affectent ainsi l'intégrité, la cohésion et la desquamation du stratum corneum, du fait d’une activité accrue des sérines protéases, de la kallicréine 5 et 7, et de l’activité réduite des enzymes de synthèse des céramides. Le maintien ou la restauration d'un pH cutané acide est donc primordiale pour préserver et/ou restaurer une peau saine et éviter les manifestations d’inconfort qui en résulte souvent telles que démangeaisons, tiraillements et sensibilité.
Le cuir chevelu sensible se manifeste par un pH plus élevé qu’un cuir chevelu non sensible, et une tendance plus importante à s’irriter. Cette élévation de pH pourrait contribuer plus rapidement à des manifestations inconfortables et/ou désagréables du cuir chevelu, notamment de démangeaisons et contribuer à l’apparition de pellicules, en partie en affectant la sensibilité aux métabolites de Malassezia.
La présente invention vise à fournir un nouvel actif cosmétique et /ou dermatologique pour améliorer le confort de la peau, notamment du cuir chevelu ainsi que les muqueuses et/ou améliorer l’apparence des phanères notamment les fibres kératiniques, comme alternative aux ingrédients cosmétiques et dermatologiques existants. La présente invention vise également à fournir un nouvel actif cosmétique et/ou dermatologique pour les besoins spécifiques de soin et/ou de traitement des cuirs chevelus sensibles.
De manière surprenante et inattendue, les inventeurs ont découvert que le peptide de SEQ ID N°1 est capable d’améliorer le ccnfort de la peau, incluant le cuir chevelu, et/ou des muqueuses, et/ou d’améliorer l’apparence des phanères, notamment les fibres kératiniques, préférentiellement les cheveux.
Le peptide de SEQ ID N° 1 a déjà été décrit dans le domaine de la cosmétique parmi un grand nombre de peptides issus de riz et de pois dans la demande de brevet W02017009484A1 (en tant que SEQ ID N ° 423) en tant qu’anti-inflammatoire capable d’inhiber la sécrétion de TNFalpha par les macrophages en présence de lipopolysaccharides, ainsi que dans la demande de brevet WQ2017009490A1 (en tant que SEQ ID N ° 248) en tant qu’agent capable d’augmenter la prdifération de fibroblastes humains dermiques et ainsi traiter les signes visibles du vieillissement.
Ce peptide est naturellement présent dans une protéine de grain de riz Oryza sativa, à partir duquel il peut être obtenu. Toutefois il n’est pas naturellement présent en quantité suffisante pour y être détecté et produire les propriétés objets de l’invention. Dans le cadre de la présente invention, il a été obtenu par hydrolyse enzymatique.
S’il existe un grand nombre d’hydrolysats peptidique de riz sur le marché de la cosmétique, ceux-ci différent grandement quant à leur profil et à leur composition, en particulier par les différents fragments protéiques qu’ils contiennent, ce qui impacte fortement leurs propriétés biologiques. En matière d’hydrolyse des protéines, les ponts reliant les différents peptides et acides aminés sont en effet clivés par différentes méthodes classiques dans ce domaine telles que via des acides, des bases ou par catalyse. Mais ces différentes techniques conduisent à l’obtention d’hydrolysats protéiques de composition très variée pouvant conduire jusqu’à l’obtention d’acides aminés libres. L’hydrolyse chimique par utilisation d’acide ou de base, en ce qu’elle est aspécifique, conduit classiquement à l’obtention de produits dits de moindre qualité notamment en terme de couleurs, odeurs et/ou stabilité. L’hydrolyse enzymatique par sa spécificité offre l’avantage de pouvoir être effectuée dans des conditions ménagées notamment pH, température et pression. Toutefois, là encore, les enzymes sont choisies de manière à obtenir les peptides d’intérêt et conduisent à l’obtention d’hydrolysats spécifiques, très différents au regard des fragments peptidiques qu’ils contiennent, que ce soient en terme de nature de fragments, de poids moléculaire et de distribution.
Ces hydrolysats de riz de toute nature sont utilisés dans le domaine de la cosmétique pour des applications pour le soin de la peau et/ou des cheveux. Ainsi, la demande de brevet WO03039496A1 décrit un sel capryloyl-glutamate et/ou sels de capryloyl d’hydrolysat de protéine de riz comme agent autoconservateur et hydratants, ainsi que séborégulateurs, anti-pellicules et anti-odeurs. Le brevet KR20040108226B décrit un hydrolysat protéique de riz noir, obtenu par hydrolyse avec la papaïne pour hydrater augmenter la synthèse de collagène et inhiber la mélanogenèse.
Toutefois, de par leurs procédés d’obtention aspécifiques ou dirigés vers l’obtention d’autres peptides, tous ces hydrolysats différent grandement dans leurs compositions et leurs propriétés et aucun ne décrit ni ne contient le peptide selon l’invention en quantité suffisante pour permettre l’obtention des propriétés selon l’invention.
Description de l’invention
L’invention a ainsi pour objet l’utilisation du peptide de SEQ ID N° 1 et/ou de ses homologues pour ses propriétés cosmétiques choisies parmi améliorer le confort de la peau saine, notamment du cuir chevelu sain, et/ou des muqueuses saines, et/ou améliorer l’apparence des phanères saines, préférentiellement les cheveux. Ce peptide présente bon nombre d’avantages supplémentaires en ce qu’il n’agresse pas ni ne retire pas le sébum présent sur la peau notamment le cuir chevelu, ce qui le rend particulièrement approprié pour le soin et/ou le traitement des peaux notamment cuirs chevelus sensibles, en particulier sous la forme d’un shampoing doux. Par ailleurs, le peptide selon l’invention présente l’avantage d’inhiber la libération de TNF alpha par des macrophages. Il permet par ailleurs d’inhiber les élastases comme cela est décrit dans l’exemple 10.1 .
Le peptide selon l’invention par ses propriétés complémentaires fournit une solution parfaitement adaptée et complète aux besoins spécifiques des cheveux et cuirs chevelus sensibles.
Toutes ces propriétés complémentaires en font également un excellent agent apaisant et/ou de soin des peaux, notamment des cuirs chevelus sensibles.
Par ailleurs, par ses propriétés complémentaires sur la fermeté comme montré dans l’exemple 10.2, le peptide selon l’invention convient particulièrement pour la réalisation de composition complète pour le soin et/ou le traitement cosmétique du corps.
De manière avantageuse, le peptide de SEQ ID N° 1 est sous la forme du peptide de SEQ ID N°2 et/ou de ses homologues.
De manière préférentielle, le peptide selon l’invention est sous la forme d’un hydrolysat de protéines de riz Oryza sativa, avantageusement à une teneur d’au moins égale ou supérieure à 0,00001 % en poids de matière sèche par rapport au poids total de l’hydrolysat, préférentiellement comprise entre 0,0001 % et 0,03%, plus préférentiellement entre 0,001 % et 0,01 %.
Encore préférentiellement, le peptide selon l’invention est utilisé en combinaison avec au moins un peptide choisi parmi les peptides de SEQ ID N°2, et/ou SEQ ID N°3 et/ou SEQ ID N°4, avantagesement avec les peptides de SEQ ID N°2, SEQ ID N°3 et SEQ ID N°4, pjférentiellement sous la forme de l’hydrolysat enrichi en peptide selon l’invention.
Selon un mode préférentiel, le peptide selon l’invention est le peptide de SEQ ID N° 1 :
SEQ ID N° 1 : GYYGEQQQQPGMTR Ce peptide contient les 14 acides aminés : Gly-Tyr-Tyr-Gly-Glu-GIn-GIn- Gln-Gln-Pro-Gly-Met-Thr-Arg et a un poids moléculaire moyen de 1642,72 daltons.
Il est naturellement présent dans les protéines de grains de riz (Oryza sativ ) et peut être obtenu par hydrolyse enzymatique de grains de riz tel que décrit dans les demandes de brevets W02017009484A1 et W02017009490A1 , ou par synthèse chimique selon les méthodes classiques en la matière. Il peut également être purifié ou obtenu comme indiqué dans l’exemple 1 .
Selon une variante de l’invention, le peptide selon l’invention est le peptide de SEQ ID N°2 qui contient le peptide SEQ ID N° 1 , pécédé des 3 acides aminés supplémentaires Ser-Glu-Glu.
SEQ ID N°2 : SEEGYYGEQQQQPGMTR
Le peptide SEQ ID N°2 contient ainsi 17 acides aminées et a un poids moléculaire moyen de 1988,01 daltons. Il est également naturellement présent dans les protéines de grains de riz (Oryza sativa) et peut être obtenu par hydrolyse enzymatique de grains de riz tel que décrit dans les demandes de brevets WQ2017009484A1 et WQ2017009490A1 , ou par synthèse chimique selon les méthodes classiques en la matière. Il peut également être purifié ou obtenu comme indiqué dans l’exemple 1
De manière particulièrement avantageuse, le peptide selon l’invention est sous la forme SEQ ID N° 1 et/ou SEQ ID N°2, préférertiellement sous la forme d’un mélange de peptides SEQ ID N°1 et SEQ ID N°2, notamment contenu dans un hydrolysat enrichi selon l’invention.
Selon un mode de réalisation les peptides de SEQ ID N°1 et/ou SEQ ID N°2 peuvent être combinés avec les peptides de SEQ ID N°3 et/ou SEQ ID N°4, éventuellement sous la forme d’un hydrolyse comme ceux décrits selon l’exemple 2.
Selon un mode de réalisation le peptide de SEQ ID N°1 est utilisé en combinaison avec le peptide de SEQ ID N°2 et/ou en combinaison avec le peptide de SEQ ID N°3 et/ou en combinaison avec le peptide de SEQ ID N°4.
Peptide SEQ ID N°3 : IYGPDTGVDYKDNQMR
Ce peptide SEQ ID N°3 a 16 acides aminés et a un pads moléculaire de 1971 ,97 daltons. Il peut être isolé à partir d’un hydrolysat de protéine de riz (Oryza sativâ) selon la méthode décrite dans l’exemple 3 ou être obtenu comme décrit dans la demande de brevet WQ2017009484 pour l’obtention de la séquence SEQ ID N°218 ou par syntièse chimique. Il peut également être purifié ou obtenu comme indiqué dans l’exemple 1 . Peptide SEQ ID N°4 : FYNEGDAPVVAL
Ce peptide de 12 acides aminés a un poids moléculaire de 1294,37 daltons ; Il peut être isolé à partir d’un hydrolysat de protéine de riz (Oryza sativâ) selon la méthode décrite dans l’exemple 3 ou être obtenu comme décrit dans la demande de brevet WQ2017009484 pour l’obtention de la séquence SEQ ID N ° 194 ou par synthèse chimique. Il peut également être purifié ou obtenu comme indiqué dans l’exemple 1 .
Selon l’invention, on entend par « peptide », toute séquence d’acides aminés isolée, naturelle ou synthétique, le cas échéant susceptible d’être obtenue par synthèse chimique ou biotechnologique ou par extraction à partir d’un tissu biologique, par exemple un végétal, un animal ou un microorganisme notamment levure, exprimant naturellement ou après transduction la séquence d’acides aminés, éventuellement après modification post-traductionnelle de celle-ci. Le peptide peut être modifié par ajout d’un groupement fonctionnel, par exemple couplé avec un agent de pénétration hydrophile ou hydrophobe, agent de stabilité ou avec un groupement protecteur selon les méthodes classiques connues par l’homme du métier, notamment par acylation du groupement -NH2 terminal, ou amidation ou alkylation du groupement -COOH terminal.
Les techniques de synthèse chimique des peptides sont connues par l’homme du métier et on peut citer à titre d’exemple les techniques décrites dans les références J.M. Stewart and J.D. Yound, solid phase peptide synthesis, 2nd editions, Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois (1984), ainsi que M. Bodanzsky and . Bodanzsky, The practive of peptide synthesis, Springer Verlag. New York (1984).
Selon l’invention, on entend par «homologue» d’une séquence d’acides aminés, une séquence d’acide aminés présentant une identité de séquence d’au moins 85%, encore préférentiellement 90%, en particulier d’au moins 95%, et plus particulièrement d’au moins 98%, encore préférentiellement au moins 99% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature. L’homologie de séquence peut être identifiée par toute technique classique dans le domaine comme par exemple via l’interface informatique BLAST disponible sur le site internet NCBI à l'adresse http://blast.ncbi.nlm.nih.gov configurée avec les paramètres par défaut.
Un homologue d’une séquence d’acides aminés peut différer de cette séquence, par exemple, par une ou plusieurs délétion(s) et/ou insertion(s), et/ou une ou plusieurs substitution(s) d’un acide aminé. Selon une variante de réalisation, un homologue d’une séquence d’acides aminés peut comprendre une ou plusieurs substitutions conservatrices d’acides aminés. Une substitution conservatrice est le remplacement, dans une séquence d'un acide aminé par un autre acide aminé doté de propriétés physico-chimiques sensiblement similaires, ou suffisamment proches de celles de l'acide aminé d'origine, pour que les propriétés et fonctions du peptide ne soient pas, ou sensiblement pas, affectées. Les modifications des séquences d'acides aminés présentées ci-dessus peuvent être dénommées, de manière générale, « mutation ». Ainsi, les homologues des peptides selon l'invention concernent également les mutants et les variants des séquences d'acides aminés de l'invention ayant une activité biologique de même nature. Par « activité biologique de même nature » d'une séquence d'acides aminés de l'invention, on entend en particulier sa capacité à présenter les propriétés selon l’invention. Selon l’invention on entend par « améliorer le confort de la peau et/ou des muqueuses », diminuer les manifestations désagréables et/ou inconfortables des peaux saines et/ou des muqueuses saines, notamment celles dues à une baisse d’homéostasie cutanée et/ou mucosale et/ou dues aux modifications du stratum corneum, en particulier du fait d’une diminution de la teneur en involucrine et/ou de la teneur en filaggrine et/ou d’une élévation de pH cutané, choisies parmi la sécheresse cutanée et/ou mucosale, en particulier au niveau du cuir chevelu, les démangeaisons, les rougeurs, les tiraillements cutanés, les desquamations, en particulier les squames du cuir chevelu, les pellicules, les craquelures ainsi que la sensibilité cutanée notamment du cuir chevelu, et/ou procurer une sensation de confort cutané et/ou mucosale et/ou rendre la peau et/ou la muqueuse plus douce et/ou diminuer sa rugosité.
L’amélioration du confort de la peau peut être mesurée par les méthodes classiques connues de l’homme du métier. On pourra citer à titre d’exemple, les techniques suivantes : mesure de l’augmentation de synthèse de l’involucrine par les kératinocytes épidermiques comme présenté dans l’exemple 5, mesure de l’augmentation de la synthèse de filagrine dans un épiderme reconstruit comme présenté dans l’exemple 6, mesure des rougeurs, notamment du cuir chevelu selon la méthode présentée dans l’exemple 7, mesure de la quantité des squames, notamment du cuir chevelu selon la méthode présentée dans l’exemple 7, mesure de l’hydratation cutanée, notamment par un cornéomètre, telle que celle décrite dans l’exemple 8, mesure du pH cutané, notamment via un pHmètre.
Le peptide selon l’invention présente l’avantage de procurer un effet durable, rémanent sur l’hydratation même après l’arrêt de son utilisation, comme cela est démontré dans l’exemple 8. De même, l’amélioration du confort du chevelu peut être mesurée par exemple par:
Mesure des rougeurs, notamment du cuir chevelu selon la méthode présentée dans l’exemple 7,
Mesure de la quantité des squames, notamment du cuir chevelu selon la méthode présentée dans l’exemple 7.
On entend par « baisse d’homéostasie cutanée et/ou mucosale », un déséquilibre de la barrière cutanée et/ou mucosale par une diminution d’homéostasie hydrique et/ou par variation du pH, notamment élévation de pH. La perte d’homéostasie cutanée d’une peau saine et/ou d’une muqueuse saine ne résulte ainsi pas selon l’invention d’une l’altération des cellules épithéliales comme cela peut être le cas par exemple lors d’une blessure, qui relève de la dermatologie.
Le peptide selon l’invention convient ainsi particulièrement pour le soin et/ou le traitement des muqueuses sèches, des peaux sèches, notamment cuir chevelu sec, des peaux sensibles, des peaux et/ou muqueuses irritées, et/ou présentant une baisse d’homéostasie cutanée et/ou mucosale, notamment hydrique et/ou élévation de pH.
Ainsi avantageusement l’utilisation selon l’invention est destinée au soin des peaux sèches et/ou sensibles, et/ou du cuir chevelu sec et/ou sensible.
De manière préférentielle, les manifestations désagréables et inconfortables des peaux saines et/ou muqueuses saines ne sont pas liées à l’âge ni à une altération des cellules épithéliales.
Selon l’invention, on entend par « améliorer le confort du cuir chevelu », diminuer les manifestations désagréables et inconfortables du cuir chevelu sain, notamment celles dues à une baisse d’homéostasie cutanée et/ou dues aux modifications du stratum corneum, en particulier du fait d’une diminution de la teneur en involucrine et/ou d’une diminution de la teneur en filaggrine et/ou d’une élévation de pH cutané, choisies parmi la sécheresse du cuir chevelu, les démangeaisons du cuir chevelu, les rougeurs du cuir chevelu, les tiraillements du cuir chevelu, les desquamations du cuir chevelu, les pellicules, les craquelures ainsi que la sensibilité du cuir chevelu, et/ou procurer une sensation de confort cutané et/ou rendre le cuir chevelu plus doux et/ou diminuer sa rugosité.
L’amélioration du confort du cuir chevelu peut notamment être mesuré selon les méthodes classiques. A titre d’exemple, elle peut être mesurée selon les méthodes présentées dans l’exemple 7, par mesure des rougeurs du cuir chevelu et/ou par mesure du pH du cuir chevelu et ou par évaluation des squames du cuir chevelu.
Selon l’invention, on entend par « améliorer l’apparence des phanères », augmenter leur force et/ou leur résistance, et/ou les protéger contre les dommages des traitements oxydants cosmétiques et/ou des agents agressifs, diminuer le taux de cassure, réparer les phanères abimés, améliorer la mise en forme et/ou le volume, augmenter la croissance et/ou la brillance des fibres kératiniques et/ou diminuer leur chute. Le peptide selon l’invention en particulier l’hydrolysat selon l’invention qui le contient présente l’avantage de ne pas diminuer significativement la quantité de sébum présente sur le cuir chevelu.
L’amélioration de l’apparence des phanères, notamment des cheveux, peut être mesurée selon les techniques classiques. A titre d’exemple, on pourra citer la mesure de l’amélioration de la force et la résistance des phanères par mesure de l’amélioration de la structure des fibres kératiniques, comme décrit dans l’exemple 12.1. La croissance de fibres kératiniques pourra être mesurée selon la méthode décrite dans l’exemple 12.2.
On entend au sens la présente invention par « cosmétique » une utilisation non pharmaceutique, non thérapeutique, qui n’est pas destinée à la prévention et/ou au traitement de peaux et/ou de muqueuses et/ou phanères qualifiées de pathologiques par un spécialiste du domaine, tel qu’un dermatologue. Il s’agit donc d’une utilisation sur peaux et/ou muqueuses et/ou phanères saines. On entend par « peau saine notamment cuir chevelu sain et/ou muqueuse saine et/ou phanère saine » tout ou partie d’une zone de peau notamment le cuir chevelu et/ou muqueuse et/ou de phanère saine, notamment humaine, et sur laquelle est appliquée le peptide selon l’invention et qui est dite « non pathologique » par un dermatologue c’est-à-dire ne présentant donc pas d’infection, de cicatrice, de maladie ou d’affection cutanée telle que candidose, impétigo, psoriasis, eczéma, acné, ichtyose, gingivite ou dermatite ou de plaies ou de blessures ou aphtes ou ulcération ou de brulure et/ou autres dermatoses, ou aphtoses ou d’inflammation ou d’irritation, ou urticaire ou allergie telle que allergie de contact.
On entend au sens de la présente invention par « peau », la peau de tout ou partie du corps, notamment humain, y compris le cuir chevelu, choisi parmi le cuir chevelu, le visage, les mains, les bras, le décolleté, les jambes, le cou, le dos, les épaules, le ventre, les poignets, les avant-bras, les chevilles, les cuisses, la nuque, les plis articulaires et des aisselles. En particulier la peau est celle qui peut présenter des manifestations inconfortables et/ou désagréables, notamment les zones d’exposition, de frottements et/ou de macération. Il s’agit ainsi plus particulièrement du visage, du cuir chevelu, des mains, du cou, du décolleté, du cuir chevelu, des plis articulaires et des aisselles.
Au sens de la présente invention, on entend par « muqueuse(s) », la muqueuse oculaire, nasale, vaginale, anale et/ou la muqueuse buccale, notamment la muqueuse buccale labiale, préférentiellement, les muqueuses labiales, oculaires et/ou nasales.
On entend par « phanères », les ongles et les « fibres kératiniques ».
On entend par « fibres kératiniques », la fibre capillaire (les cheveux), les cils, les sourcils, les poils notamment de la muqueuse nasale, des oreilles, de la barbe et/ou de la moustache, en particulier la fibre capillaire (les cheveux). De manière préférentiellement, l’application est par voie topique, avantageusement sur des parties spécifiques et/ou zones du corps inconfortables, en particulier choisies parmi le cuir chevelu, le visage, les mains, les bras, le décolleté, les jambes, le cou, le dos, les épaules, le ventre, les poignets, les avant-bras, les chevilles, les cuisses, la nuque, les plis articulaires et des aisselles, les muqueuses labiales, les poils, les cils, les sourcils et/ou les cheveux, préférentiellement le cuir chevelu et/ou les cheveux.
Le peptide selon l’invention est topiquement acceptable. Au sens de la présente invention, on entend par « topiquement acceptable », un ingrédient adapté à une application par voie topique, non toxique, non irritant pour la peau et/ou les muqueuses et/ou les phanères, qui n’induit pas de réponse allergique et qui n’est pas instable sur le plan chimique.
Selon un mode préférentiel de la présente invention, le peptide seul ou en combinaison est utilisé sous la forme d’un hydrolysat de protéines de riz (Oryza sativa), en particulier enrichi en peptide selon l’invention.
Selon l’invention, on entend par Thydrolysat enrichi en peptide selon l’invention”, un hydrolysat dans lequel on détecte le peptide de SEQ ID N°1 , et/ou de SEQ ID N°2 selon l’invention à une teieur allant au-delà du seuil de la limite de détection avec les techniques sensibles en la matière, par exemple LC-MS/MS, c’est-à-dire en générale une teneur au moins égale ou supérieure à 0,00001 % en poids par rapport au poids total en matière sèche de Thydrolysat.
Selon un mode préféré de l’invention, le peptide SEQ ID N° 1 , éventuellement sous la forme de SEQ ID N°2 ou combhé avec un peptide de SEQ ID N°2 est contenu dans un hydrolysat de prdéine de riz, préférentiellement à une quantité d’au moins égale ou supérieure à 0,00001% en poids de matière sèche par rapport au poids total de l’hydrolysat, préférentiellement comprise entre 0,0001 % et 0,03%, plus préférentiellement entre 0,001 % et 0,01 %. Selon un mode préféré de réalisation, l’hydrolysat peptidique (ou hydrolysat de protéines) de riz est obtenu par hydrolyse enzymatique en une seule étape. Selon un mode alternatif, l’hydrolysat peut être obtenu par hydrolyse successive utilisant la même enzyme ou un mélange d’enzymes.
L’hydrolyse enzymatique est effectuée par une ou plusieurs enzymes protéolytiques, qui peuvent être des protéases d’origine végétale ou issues de microorganismes.
Selon un mode de réalisation, l'hydrolyse enzymatique a lieu jusqu'à son achèvement, qui peut être déterminée par l'homme du métier de manière connue, par exemple en déterminant le pH constant ou par photométrie à l'aide de la détection de groupements NH2 libres ou en déterminant la quantité constante de peptides SEQ ID N° 1 et SEQ ID N°2 par chromatographie liquide et spectroscopie de masse.
La quantité d'enzyme (s) utilisée (s) n'est pas critique en soi, mais doit être dans la gamme de 0,05 à 5, de préférence de 0,1 à 2% en poids par rapport au poids de la matière de départ contenant le peptide.
Les hydrolysats obtenus peuvent enfin être traités, par exemple par filtration des fractions non dissoutes. Pour une meilleure stabilisation, le pH est de préférence fixé à des valeurs comprises entre 3,0 et 7,5, de préférence entre 3,5 et 5,5.
Dans un mode de réalisation, les hydrolysats obtenus sont sous forme liquide, en particulier des solutions aqueuses, et peuvent être utilisés directement ou sous forme concentrée; ils ont de préférence une teneur en matières sèches dans la gamme de 1 à 50% en poids, de préférence de 5 à 30% en poids. Des adjuvants peuvent être ajoutés tels que polyols, glycols, acides (acide citrique, acide sorbique, acide sulfurique, acide benzoïque ou leurs sels....).
Les hydrolysats obtenus à ce stade peuvent être davantage concentrés et/ou purifiés pour sélectionner les fractions de poids moléculaire ciblées, par des étapes successives d'ultrafiltration ou de nanofiltration à travers des filtres à porosité variable, ou au moyen d'une méthode de type chromatographique, par exemple pour enrichir spécifiquement l’hydrolysat en ces peptides. Des hydrolysats enrichis selon l’invention sont présentés en exemple 2.
Il est également possible de produire les hydrolysats peptidiques selon l’invention sous forme de poudre par séchage, (atomiseur, lyophilisé,....) avec ou sans support tel que le mannitol, la maltodextrine, la cyclodextrine, selon les techniques classiques de formulation connues de l’homme du métier.
Selon un mode de réalisation, l’hydrolysat préféré selon l'invention contient le peptide de SEQ ID N° 1 et/ou le peptide de SEQ ID N°2, préférentiellement les deux peptides, à une teneur totale au moins égale ou supérieure à 0,00001 % en poids par rapport au poids total en matière sèche de l’hydrolysat, préférentiellement comprise entre 0,0001 % et 0,03%, plus préférentiellement entre 0,001 % et 0,01 %.
Selon un mode de réalisation préféré, cet hydrolysat a en outre au moins une, et de préférence au moins deux, et encore préférentiellement toutes les caractéristiques suivantes :
- Est sous forme liquide ;
- A une teneur en matière sèche comprise entre 15 et 25% en poids,
- A une teneur en azote de 1 ,5 à 3% en poids, préférentiellement 1 , 9 à 2,8% en poids ;
- A un poids moléculaire moyen allant de 1000 à 2500 Daltons, préférentiellement 1250 à 2000 daltons, encore préférentiellement 1500 daltons ;
- Contient au moins 50%, encore préférentiellement 60% de peptides ayant un poids moléculaire supérieur à 1000 daltons ;
- Contient au moins 70%, encore préférentiellement 80% de peptides ayant un poids moléculaire inférieur à 2500 daltons.
De manière préférentielle, l’hydrolysat protéique préférentiel selon l’invention est caractérisé par la présence de toutes ces caractéristiques. Le poids moléculaire moyen exprimé en dalton (ou g/mol) est déterminé par chromatographie d’exclusion stérique connue de l’homme du métier.
La distribution du poids moléculaire est mesurée selon l’invention comme décrite dans l’exemple 3.
L’hydrolysat peptidique de riz selon l’invention peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes :
- solubilisation de la protéine de riz, ou d'un isolat de protéine de riz contenant au moins 70%, de préférence au moins 80% de protéines, dans l'eau à une température supérieure à 70 °C pour la pasteurisation;
- l'hydrolyse des protéines ; de préférence l'hydrolyse est réalisée enzymatiquement au moyen d'enzymes protéolytiques, de préférence d'origine végétale ou dérivées de microorganismes, en sélectionnant l'enzyme et en ajustant les conditions de température et de pH pour obtenir le bon degré d'hydrolyse et le profil de poids moléculaire ;
- inactivation de la ou des enzyme (s), préférentiellement par traitement thermique: cette inactivation est réalisée selon la recommandation technique du (des) fournisseur (s) de la ou des enzyme (s);
- séparation des phases solubles et insolubles, par centrifugation et / ou filtration, et récupération de la phase soluble contenant les peptides;
- éventuellement une étape de concentration pour augmenter le taux de matière sèche, suivie d'une étape de filtration pour récupérer la phase soluble contenant les peptides;
- l'obtention d'un filtrat, l’hydrolysat de protéines de riz enrichi en peptide selon l’invention qui se présente sous forme liquide et qui constitue également un mode de réalisation de l'invention.
Les étapes des procédés décrits ci-dessus, prises individuellement, sont courantes dans le domaine des hydrolysats de protéines et l'homme du métier est à même d'ajuster les paramètres de réaction en fonction de ses connaissances générales pour obtenir l’hydrolysat de protéines de riz selon l'invention. Si les hydrolysats de protéines de riz existent déjà sur le marché de la cosmétique, ils ne contiennent pas le peptide selon l’invention et sont ainsi dépourvus des propriétés objet de la présente invention. Un produit commercialement disponible a ainsi été décrit dans l’exemple 4 et testé pour ses propriétés par comparaison au peptide selon l’invention dans les exemples 5, 6, 10 et 12.2.
De manière particulièrement intéressante, l’hydrolysat contient également les peptides SEQ ID N°1 , SEQ ID N°2, SEQ ID N°3 etSEQ ID N°4, chacun à une teneur individuelle au moins égale ou supérieure à 0,00001% en poids par rapport au poids total en matière sèche de l’hydrolysat, la somme totale de ces 4 peptides étant au moins égale à 0,00004% en poids par rapport au poids total en matière sèche de l’hydrolysat, préférentiellement supérieure à 0,0001 %. Des exemples d’un tel hydrolysat enrichi en peptide selon l’invention sont présentés dans les exemples 2a) 2b) et 2c) et constituent les modes préférentiels de la présente invention.
Le peptide selon l’invention, préférentiellement sous la forme d’hydrolysat enrichi en peptide est utilisé par voie topique.
Selon un mode de réalisation, il peut être utilisé :
- sous la forme d’un ingrédient cosmétique ou pharmaceutique destiné à être incorporé dans une composition cosmétique ou pharmaceutique, et comprenant en outre un véhicule cosmétique ou pharmaceutique approprié, ou
- sous la forme d’une composition cosmétique ou pharmaceutique le comprenant et comprenant en outre avantageusement un véhicule ou pharmaceutique approprié.
Au sens de la présente invention, on entend par « voie topique », l’application du peptide selon l’invention, préférentiellement sous la forme d’hydrolysat enrichi en peptide et/ou de la composition et/ou de l’ingrédient selon l’invention sur la surface de la peau notamment le cuir chevelu et/ou des muqueuses, et/ou des phanères, préférentiellement cheveux, notamment par application directe ou par vaporisation.
Au sens de la présente invention, on entend par « ingrédient(s) cosmétique(s) et/ou pharmaceutique(s) » un ou des extraits végétaux et/ou une ou des molécules naturelles ou synthétiques et/ou leurs mélanges destiné à une application cosmétique et/ou pharmaceutique. Les ingrédients cosmétiques sont notamment définis par la nomenclature internationale des ingrédients cosmétiques (INCI).
Au sens de la présente invention, le terme « véhicule cosmétique ou pharmaceutique approprié », signifie que la composition ou les composants de celle-ci sont adaptés à l'utilisation en contact avec la peau et/ou les muqueuses humaines sans toxicité, incompatibilité, instabilité, réponse allergique, ou leurs équivalents, indue.
L’ingrédient cosmétique ou pharmaceutique, en particulier dermatologique sous forme liquide contenant le peptide selon l’invention, notamment sous la forme d’un hydrolysat enrichi en peptide selon l’invention et notamment celui de l’exemple 9, peut être utilisé dans une composition cosmétique ou pharmaceutique, en particulier dermatologique, préférentiellement à une teneur en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition comprise entre 0,01 et 10%, avantageusement entre 0,1 et 5%, en particulier entre 0,2 et 3%.
Dans un mode de réalisation de l’invention, le peptide, préférentiellement sous la forme de l’hydrolysat enrichi en peptide sera compris dans la composition cosmétique ou pharmaceutique en une teneur comprise entre 1x10'5% à 20% en poids, préférentiellement de 1x10'4% à 10% en poids, encore avantageusement de 1x10'3% à 3% en poids, encore préférentiellement de 0,001 % et 0,1 % en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition.
Les compositions selon l’invention peuvent contenir tout solvant approprié et/ou tout véhicule approprié et/ou tout excipient approprié, éventuellement en combinaison avec d’autres composés d’intérêts. Elles peuvent notamment contenir un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable et/ou un véhicule cosmétique ou pharmaceutique approprié choisis parmi des agents tensioactifs, des conservateurs, des agents tampon, des agents gonflants, des agents chélatants, des agents biocides, des dénaturants, des agents opacifiants, des ajusteurs de pH, des agents réducteurs, des agents stabilisants, des émulsifiants, des épaississants, des gélifiants, des polymères filmogènes, des solvants, des charges, des bactéricides, des absorbeurs d'odeurs, des agents matifiants, des agents conditionneurs, des agents de texture, des agents de brillance, des pigments, des colorants, des parfums et des filtres solaires chimiques ou minéraux, des oligo-éléments, des huiles essentielles, des édulcorants, des agents modificateurs du goût. Ces combinaisons sont également couvertes par la présente invention. Le CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, Second Edition (1992) décrit différents ingrédients cosmétiques et pharmaceutiques utilisés couramment dans l'industrie cosmétique et pharmaceutique, qui sont en particulier adaptés à une administration par voie orale et/ou à une utilisation topique.
Avantageusement, le ou les excipients et/ou le ou les véhicules sont choisis dans le groupe comprenant les polyglycérols, les esters, les polymères et dérivés de cellulose, les dérivés de lanoline, les phospholipides, les lactoferrines, les lactoperoxidases, les stabilisants à base de sucrose, la vitamine E et ses dérivés, les gommes de xanthane, les cires naturelles et synthétiques, les huiles végétales, les triglycérides, les insaponifiables, les phytostérols, les silicones, les hydrolysats de protéines, les betaines, les aminoxides, les extraits de plantes, les esters de saccharose, les dioxydes de titane, les glycines, et les parabens, et encore de préférence parmi le groupe consistant en le stéareth-2, le stéareth-21 , le glycol-15 stéaryle éther, le cétéaryl alcool, le phénoxyéthanol, le méthylparabène, l'éthylparabène, le propylparabène, le butylparabène, le butylène glycol, le caprylyl glycol, les tocophérols naturels, la glycérine, le dihydroxycétyl sodium phosphate, l'isopropyl hydroxycétyl éther, le glycol stéarate, la triisononanoine, l'octyl cocoate, le polyacrylamide, l'isoparaffine, le laureth-7, un carbomer, le propylène glycol, l'hexylène glycol, le glycérol, le bisabolol, une diméthicone, l'hydroxyde de sodium, le PEG 30-dipolyhydroxystérate, les triglycérides caprique/caprylique, le cétéaryl octanoate, le dibutyl adipate, l'huile de pépins de raisin, l'huile de jojoba, le sulfate de magnésium, l'EDTA, une cyclométhicone, la gomme de xanthane, l'acide citrique, le lauryl sulfate de sodium, les cires et les huiles minérales, l'isostéaryl isostéarate, le dipélargonate de propylène glycol, l'isostéarate de propylène glycol, le PEG 8, la cire d'abeille, les glycérides d'huile de cœur de palme hydrogénée, l'huile de lanoline, l'huile de sésame, le cétyl lactate, le lanoline alcool, l'huile de ricin, le dioxyde de titane, le lactose, le saccharose, le polyéthylène basse densité, une solution isotonique salée, et leurs mélanges.
La composition cosmétique ou pharmaceutique ou le peptide, préférentiellement l’hydrolysat enrichi en peptide selon l’invention éventuellement sous forme d’ingrédient cosmétique ou pharmaceutique, peut se présenter sous toutes les formes galéniques classiquement utilisées pour une application topique telles que les formes liquides ou solides ou même sous la forme de liquide sous pression. Elles peuvent notamment être formulées sous la forme d’une solution, aqueuse ou huileuse, une crème ou un gel aqueux ou un gel huileux, notamment en pot ou en tube, notamment un gel douche, un shampoing, un lait, une émulsion, un hydrogel, une microémulsion ou une nanoémulsion, notamment huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple ou siliconée, un sérum, une lotion, notamment en flacon de verre, de plastique ou en flacon doseur ou en aérosol, une ampoule, un savon liquide, une pâte, un pain dermatologique, une pommade, une mousse, un aérosol, un masque, un patch, un produit anhydre, de préférence liquide, pâteux ou solide, par exemple sous forme de bâtonnet notamment en stick ou en poudres, notamment de maquillage. En particulier la composition se présente sous la forme d’un sérum, d’une lotion, d’une crème, d'un lait, d'une pommade, d'une pâte, d'une mousse, d'une émulsion, d’un hydrogel, d’un gel douche, d’un masque, d’un stick d’un patch, ou de poudres de maquillage, avantageusement d’une crème ou d’une lotion. De manière préférentielle, la composition se présente sous la forme d’une crème, lotion pour la peau et/ou les cheveux ou d’un shampoing, après-shampoing, rinçable ou non (type leave-on).
Le peptide selon la présente invention, préférentiellement l’hydrolysat enrichi en peptide selon l’invention, présente l’avantage de ne pas agresser et/ou décaper le cuir chevelu permettant le maintien du taux de sébum et convient tout particulièrement pour le soin et/ou le traitement du cuir chevelu sensible et/ou ayant tendance à s’irriter.
Dans le cas d’une administration par voie mucosale, la composition cosmétique ou pharmaceutique ou le peptide selon l’invention éventuellement sous forme d’ingrédient cosmétique ou pharmaceutique, peut se présenter sous la forme d’un collyre, d’une lotion, d’un aérosol, d’un gel, ou d’une composition mucoadhésive.
La composition cosmétique ou pharmaceutique pourra en outre comprendre d’autres ingrédients cosmétiques ou pharmaceutiques, actifs sur le traitement de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères induisant un effet complémentaire ou de synergie avec le peptide selon l’invention, choisi par exemple parmi les ingrédients actifs pour les peaux et/ou muqueuses sensibles, les ingrédients actifs sur le cuir chevelu, antipelliculaires et/ou les ingrédients actifs dit anti-chute.
Parmi les ingrédients actifs pour les peaux sensibles, on citera , l’extrait protéique de graine non germée déshuilée de Moringa oleifera commercialisé sous la dénomination commerciale Purisoft®, un extrait végétal de Cestrum latifolium commercialisé sous le nom de Symbiocell ™, un beurre extrait du fruit de l’arbre Irvingia gabonensis commercialisé sous le nom Irwinol™ , un extrait de racine d’Eperua falcata commercialisé sous le nom de Eperuline™ , un peptide N-acetyl-L-Tyrosyl-L-Prolyl-L- Phenylalanyl-L- Phenylalaninamide (INCI :Acetyl Tetrapeptide 15) commercialisé sous le nom de Skinasensyl™, un extrait de Inonotus obliquus commercialisé sous le nom d’Inolixir™ par la Demanderesse.
Parmi les ingrédients anti-chute des cheveux, on citera l’association de sulfopeptides, acides aminés, aminosaccharides, vitamine du groupe B, zinc et / ou extrait de Panax ginseng et Artium majus commercialisé sous le nom Trichogen™ LS 8960 par la Demanderesse et / ou un agent protecteur capillaire tel qu’un extrait de péricarpe de Litchi chinensis commercialisé sous le nom Litchiderm™ par la Demanderesse, et / ou un actif apaisant et anti-démangeaisons tels que les phytostérols de colza commercialisé sous le nom de Phytosoothe™ LS9766 par la Demanderesse et / ou un actif pour renforcer le follicule pileux tel qu’un extrait de Nephelium lappaceum et / ou de minodoxil, d’acide valproique tel que commercialisé par Amorepacific et / ou de stemoxidine et / ou d’aminoxil et / ou d’Hairgenyl tel que commercialisé par Silab et / ou de Rednensyl (tel que commercialisé par Givaudan-lnduchem et / ou d’Anagain tel que commercialisé par Mibelle et / ou de Baïcapil tel que commercialisé par Provital, des actifs anti pelliculaires tel que le zinc pyrithione et / ou l’octopirox et / ou le kétoconazole glycolipides extraits de levure commercialisés par BASF sous le nom de BioToLife et/ou l’hexamidine diisethionate commercialisé sous le nom d’Elestab™ HP 100 et/ou le complexe contenant un extrait de baies de Piper nigrum, un extrait d’écorce d’Inga alba et du lactylate lauroyl de sodium commercialisé sous le nom de Sanicapyl par la Demanderesse, et/ou les actifs antipelliculaires tels que le piroctone olamine notamment combiné avec l’acide salicylique.
Parmi les ingrédients actifs sur le cuir chevelu, on pourra citer un extrait de feuilles de Cassia alata commercialisé sous le nom de DN-Age™ en tant qu’actif anti-oxydant pour le soin des cheveux notamment, d’une combinaison d’un extrait de Salvia miltiorhizza et de niacinamide commercialisé sous le nom de ColIRepair™ en tant qu’agent déglyquant, un extrait d’Orthosiphon stamineus commercialisé sous le nom de MAT- XS™ Bright, la sarcosine commercialisé sous le nom Scalposine™ par la Demanderesse. Ces associations d’actifs sont susceptibles de renforcer le follicule pileux et ainsi contribuer à diminuer la chute des fibres kératiniques, préférentiellement des cheveux.
On pourra également citer dans le cadre de composition pour le soin du corps, la combinaison avec des ingrédients cosmétiques actifs favorisant la fermeté de la peau tels qu’un tétrapeptide synthétique commercialisé sous le nom de Dermican™, un extrait d’Hibiscus abelmoschus commercialisé sous le nom de Linefactor™, un extrait purifié de pois commercialisé sous le nom de Proteasyl™, un extrait de Manilkara multinervis commercialisé sous le nom d’Elestan™, un extrait de Khaya senegalensis commercialisé sous le nom de Collalift™18, un extrait de pulpe d’Argan commercialisé sous le nom d’Argassential™, un extrait de Schizandra chinensis commercialisé sous le nom de Sqisandryl™ par la Demanderesse.
On pourra également utiliser le peptide selon la présente invention en combinaison avec des ingrédients actifs sur la flore microbienne cutanée et/ou mucosale et/ou actifs sur la fonction barrière de la peau notamment actifs hydratants et/ou apaisants, parmi lesquels un oligosaccharide obtenu par synthèse enzymatique commercialisé par la société Solabia sous le nom de BioEcolia™ ou un complexe d’alpha- glucooligosaccharides commercialisé par la même société sous le nom de Ecoskin™, un extrait d’Alisma plantago-aquatica, un extrait d’Argania spinosa (Lipofructyl™ Argan), un mélange de céramides (Sphingoceryl™ VEG) , des extraits purifiants de Boldo (Betapur™), des produits à base d’inuline ou de fructooligosaccharides, des extraits de bifidobactéries ou encore un extrait d’Orthosiphon stamineus pour lutter contre la peau grasse (MAT-XS™ Bright), un extrait naturel de miel commercialisé par la Demanderesse sous le nom de Melhydran™ pour son propriété hydratante, un extrait de lin commercialisé sous le nom Oligolin™ par la Demanderesse, un extrait de levure modifié par biotechnologique et commercialisé par la Demanderesse sous le nom Relipidium™ , un extrait de racine de Pueraria lobata commercialisé sous le nom Inhipase™ par la Demanderesse, un dérivé de beta-glucan issu de levure de boulanger commercialisé par Mibelle sous le nom CM-Glucan Forte ™ et/ou un extrait de Mirabilis jalapa commercialisé sous le nom de Pacifeel™ par Sederma.
La présente invention a également pour objet un procédé de soin et/ou traitement cosmétique comprenant l’application par voie topique, en particulier quotidienne sur au moins une zone de peau saine, avantageusement du cuir chevelu sain, et/ou de muqueuse saine et/ou de phanère saine, du peptide selon l’invention, préférentiellement sous la forme d’un hydrolysat enrichi en peptide selon l’invention ou d’une composition cosmétique selon l’invention pour améliorer le confort de la peau saine, notamment du cuir chevelu sain, et/ou des muqueuses saines, et/ou l’apparence des phanères notamment des fibres kératiniques.
De manière avantageuse, l’invention a également pour objet une méthode de traitement cosmétique pour améliorer le confort de la peau saine, notamment du cuir chevelu sain, et/ou des muqueuses saines, et/ou l’apparence des phanères saines notamment des fibres kératiniques saines d’un individu qui en a besoin/qui le souhaite comprenant les étapes
- L’identification sur l’individu d’une zone de peau saine notamment du cuir chevelu sain, et/ou de muqueuses saines, dont on souhaite améliorer le confort et/ou de phanères saines dont on souhaite améliorer apparence, et
- L’application topique sur cette zone de peau saine notamment du cuir chevelu sain, et/ou de muqueuses saines et/ou de phanères saines notamment de fibres kératiniques saines, d’une composition cosmétique contenant le peptide selon l’invention en une quantité efficace pour améliorer le confort de la peau saine, notamment du cuir chevelu sain, et/ou des muqueuses saines, et/ou l’apparence des phanères saines notamment des fibres kératiniques saines, en particulier en une teneur de peptide comprise entre 1x10'5% à 20% en poids, préférentiellement de 1x10'4% à 10% en poids, encore avantageusement de 1x10'3% à 3% en poids, encore préférentiellement de 0,001 % et 0,1 % en poids, par rapport au poids total de la composition.
La présente invention a également pour objet le peptide de SEQ ID 1 et/ou ses homologues selon la présente invention, préférentiellement sous forme sous la forme d’un hydrolysat enrichi en peptide selon l’invention, pour son utilisation seul ou dans une composition pharmaceutique, notamment dermatologique dans le traitement et/ou la prévention d’au moins une pathologie associée à une baisse d’homéostasie cutanée et/ou à une diminution de la teneur en involucrine et/ou de la teneur en filagrine et/ou à une élévation de pH cutané et/ou l'une quelconque de leurs combinaisons, notamment l’ichtyose et l’alopécie ainsi que les desquamations associées à certaines pathologies telles que irradiations aigues, coup de soleil, brulure. La composition pharmaceutique, notamment dermatologique contient préférentiellement le peptide selon l’invention a une teneur de peptide comprise entre 1x10'5% à 20% en poids, préférentiellement de 1x10'4% à 10% en poids, encore avantageusement de 1x10'3% à 3% en poids, encore préférentiellement de 0,001 % et 0,1 % en poids, par rapport au poids total de la composition. D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront clairement à l'homme de l'art suite à la lecture de la description explicative qui fait référence à des exemples et aux figures qui sont donnés seulement à titre d'illustration et qui ne sauraient en aucune façon limiter la portée de l'invention.
Les exemples font partie intégrante de la présente invention et toute caractéristique apparaissant nouvelle par rapport à un état de la technique antérieure quelconque à partir de la description prise dans son ensemble, incluant les exemples, fait partie intégrante de l'invention dans sa fonction et dans sa généralité.
Ainsi, chaque exemple a une portée générale.
D'autre part, dans les exemples, et sauf indication contraire, la température est exprimée en degré Celsius et la pression est la pression atmosphérique.
Brève description des dessins
La figure 1A représente une photographie d’une surface de cuir chevelu avant application d’une composition selon l’invention et la figure 1 B montre une photographie d’une surface du cuir chevelu humain après une semaine d’application d’une composition selon l’invention dans les conditions de l’exemple 1 .
La figure 2A représente une photographie d’une surface de cuir chevelu avant application d’une composition selon l’invention, et la figure 2B montre une photographie d’une surface du cuir chevelu humain après trois semaines d’application d’une composition selon l’invention dans les conditions de l’exemple 1 .
La figure 3A représente une photographie d’une surface de cuir chevelu avant application d’une composition selon l’invention, et la figure 3B montre une photographie d’une surface du cuir chevelu humain après trois semaines d’application d’une composition selon l’invention et une semaine après l’arrêt de l’application dans les conditions de l’exemple 1 .
La figure 4 représente une photographie par microscopie confocal d’une coupe histologique d’un épiderme reconstruit après immunomarquage de la filaggrine (en vert) : 4A-témoin non traité ; 4B-après traitement par 0,01 % (p/v) d’hydrolysat de protéine de riz de l’exemple 4 dépourvu de peptide selon l’invention ; 4C-après traitement par 0,01 % (p/v) du peptide selon l’invention notamment sous la forme de l’hydrolysat selon l’exemple 2b, dans les conditions de l’exemple 6. Tl
Exemples
Exemple 1 : Réalisation des peptides de SEQ ID N°1, SEQ IP N°2, SEQ IP N°3 ou SEQ IP N°4
Peptide SEQ ID N°1 : GYYGEQQQQPGMTR
Ce peptide de 14 acides aminés peut être obtenu à partir d’un hydrolysat de protéine de riz (Oryza sativ ) comme décrit dans l’exemple 2 ou comme décrit dans la demande de brevet WQ2017009484A1 pour l’obtention de la séquence SEQ ID N°423 ou par syntièse chimique. Il a un poids moléculaire de 1642,72 daltons.
Peptide SEQ ID N°2 : SEEGYYGEQQQQPGMTR
Ce peptide de 17 acides aminés peut être obtenu à partir d’un hydrolysat de protéine de riz (Oryza sativa) comme décrit dans l’exemple 2 ou être obtenu comme décrit dans la demande de brevet WQ2017009484 pour l’obtention de la séquence SEQ ID N°424 ou par syntièse chimique. Il a un poids moléculaire de 1988,01 Daltons.
Les peptides de SEQ ID N° 1 et/ou SEQ ID N°2 peuventêtre combinés avec les peptides de SEQ ID N°3 et/ou SEQ ID N°4, éventuellement sous la forme d’un hydrolysat selon l’exemple 2.
Peptide SEQ ID N°3 : IYGPDTGVDYKDNQMR
Ce peptide de 16 acides aminés_peut être obtenu à partir d’un hydrolysat de protéine de riz (Oryza sativa) comme décrit dans l’exemple 2 ou être obtenu comme décrit dans la demande de brevet WQ2017009484 pour l’obtention de la séquence SEQ ID N°218 ou par syntièse chimique. Il a un poids moléculaire de 1971 ,97 daltons.
Peptide SEQ ID N°4 : FYNEGDAPVVAL
Ce peptide de 12 acides aminés_peut être obtenu à partir d’un hydrolysat de protéine de riz (Oryza sativa) comme décrit dans l’exemple 2 ou être obtenu comme décrit dans la demande de brevet WQ2017009484 pour l’obtention de la séquence SEQ ID N°194 ou par syntièse chimique. Il a un poids moléculaire de 1294,37 daltons. Exemple 2 : Réalisation d’hydrolysats enrichis en peptide SEQ IP N°1 et/ou SEQ IP N°2 selon l’invention
2a) Hydrolysat de riz enrichi en peptide SEQ IP N°1 et SEQ IP N°2
Cet hydrolysat de riz a été obtenu par hydrolyse enzymatique avec une seule protéinase et présente les caractéristiques suivantes :
- Hydrolysat liquide ayant une teneur en matière sèches de 20,4 % en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat;
- Contenu en azote de 2,5% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat;
- Poids moléculaire moyen: 1540g/mol;
- Pistribution : 64,2% des peptides ont un poids moléculaire supérieur à 1000 daltons et 84,5% des peptides ont un poids moléculaire inférieur à 2,5 kPa ;
- Cet hydrolysat a un pH de 4,2 ;
- Cet hydrolysat contient, en poids par rapport au poids sec de l’hydrolysat : le peptide SEQ IP N°1 à la teneur de 0,0031 % et le peptide SEQ IP N°2 à la teneur de 0,0028%.
2b) Hydrolysat de riz enrichi en peptide SEQ IP N°1 et SEQ IP N°2
Cet hydrolysat de riz a été obtenu par hydrolyse enzymatique avec une seule protéinase et présente les caractéristiques suivantes :
- Hydrolysat liquide ayant une teneur en matière sèches de 20,0% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat;
- Contenu en azote de 2,6% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat;
- Poids moléculaire moyen: 1500g/mol;
- Pistribution : 62,4% des peptides ont un poids moléculaire supérieur à 1000 daltons et 85,5% des peptides ont un poids moléculaire inférieur à 2,5 kPa.
- Cet hydrolysat a un pH de 4,1 ; - Cet hydrolysat contient, en poids par rapport au poids sec de l’hydrolysat : le peptide SEQ ID N° 1 à la teneur de 0,0033% et le peptide SEQ ID N ° 2 à la teneur de 0,0111 %.
2c) Hydrolysat de riz enrichi en peptide SEQ ID N° 1 et SEQ ID N°2
Cet hydrolysat de riz a été obtenu par hydrolyse enzymatique avec une seule protéinase et présente les caractéristiques suivantes :
- Hydrolysat liquide ayant une teneur en matière sèches de 15,5% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat;
- Contenu en azote de 2,0% en poids par rapport au poids total de l’hydrolysat;
- Poids moléculaire moyen: 1440g/mol;
- Distribution : 61 ,5% des peptides ont un poids moléculaire supérieur à 1000 daltons et 87,1 % des peptides ont un poids moléculaire inférieur à 2,5 kDa.
- Cet hydrolysat a un pH de 4,2 ;
- Cet hydrolysat contient, en poids par rapport au poids sec de l’hydrolysat : le peptide SEQ ID N°1 à la teneur de 0,0016% et le peptide SEQ ID N ° 2 à la teneur de 0,0012%.
Exemple 3 : Mesure du poids moléculaire moyen et des peptides.
Le poids moléculaire moyen défini en Daltons (Da) et la distribution des poids moléculaires sont déterminée par chromatographie d’exclusion stérique.
Afin de déterminer le poids moléculaire moyen et la distribution des poids moléculaires, l'appareil de chromatographie liquide Agilent 1260 Infinity avec pompe binaire et dégazeur a été utilisé en combinaison avec PSS WinGPC UniCh-rom. P55 WinGPC UniChrom est un système de données de chromatographie macromoléculaire avec acquisition de données en temps réel indépendante du fabricant pour une analyse complète des macromolécules, et convient à l'analyse des hydrolysats de protéines. La colonne chromatographique utilisée est une colonne chromatographique spécifique (Superdex Peptide 10/300 GL de GE Healthcare Life Science, largeur de pore 100 A, taille de particule 5 tm) pour la séparation haute résolution des protéines et des peptides. Cette colonne a été choisie car elle est particulièrement bien adaptée pour déterminer des biomolécules de poids moléculaire compris entre 100 et 7 000 daltons. De l'acide chlorhydrique dilué (0,05 M) avec un débit de 0,5 ml / min a été utilisé comme éluant. La détection a été réalisée avec un détecteur d'indice de réfraction (RID).
Les échantillons ont été préparés par filtration sur un filtre de 0,2 pm avant injection.
Analyse des peptides SEQ IP N°1 et SEQ IP N°2 dansl'hydrolysat de protéines de riz.
Entre 5 et 15 mg de l'hydrolysat de protéines de riz ont d'abord été mis en suspension dans de l'acétonitrile / eau (1/ 1 , v / v), puis dilués avec 0,1 % d'acide formique aqueux à une concentration finale de 2 mg mL-1 en protéine de riz et 5% en acétonitrile. Après centrifugation, 100 pL du surnageant ont été mélangés avec une quantité égale de solution standard interne. 20 pl de ce mélange ont été analysés par chromatographie liquide spectrométrie de masse en tandem (LC-MS / MS), avec une limite de détection de 0,00001 % en poids de matières sèches.
La chromatographie liquide a été réalisée en utilisant un gradient de 13 minutes de 0 à 95% d'acétonitrile sur une colonne à phase inverse Aeris 1 ,7 pm Peptide XB-C18 150 x 2,1 mm (Phenomenex) couplée à un spectromètre de masse QTRAP 5500 (AB Sciex). Les pics chromatographiques correspondant aux peptides prédits ont été intégrés en utilisant Skyline version 3.5 (Université de Washington). Des peptides marqués par un isotope avec un résidu d'arginine C-terminal marqué 13C, 15N ont été synthétisés et utilisés comme standards internes et d'étalonnage. La limite de détection (LOD) pour chaque peptide a été estimée en utilisant une approche signal-bruit.
Exemple 4 -Hydrolysat selon l’art antérieur
Un hydrolysat de protéine de riz commercialisé par BASF sous le nom Gluadin R Benz a été étudié quant à sa composition et ses effets sur la peau et les cheveux dans les exemples suivants.
Ce produit hydrolysat de l’art antérieur présent le profil de poids moléculaire suivant :
- Un poids moléculaire moyen de 1430g/mol
- Distribution : 59,6% des peptides ont un poids moléculaire supérieur à 1000 daltons et 79,6% des peptides ont un poids moléculaire inférieur à 2,5 kDa
- Les peptides de SEQ ID N° 1 et SEQ ID N°2 ne sontpas présents dans l’hydrolysat (non détecté au seuil de détection de 0,00001 %)
- Le pH est de 4,3
Ce produit de comparaison a été choisi en raison de sa nature proche en terme de distribution de peptides.
Exemple 5 : Effet d’un produit selon l’invention sur la synthèse d’involucrine
L'involucrine est une protéine synthétisée par les kératinocytes des premières couches épineuses jusqu'à la couche granulaire de l'épiderme humain. Lors de la différenciation des kératinocytes en cornéocytes, l'involucrine est polymérisée avec d'autres protéines pour former l'enveloppe cornifiée déposée sur la face interne de la membrane cellulaire. L'expression de l'involucrine est perturbée dans plusieurs affections cutanées pro-inflammatoires; Plusieurs agents irritants chimiques tels que le SDS (sulfate de dodécyle de sodium) et le DNCB (dinitrochlorobenzène) modifient l'expression de l'involucrine par induction du TNF alpha.
Culture cellulaire et traitement: Des kératinocytes épidermiques humains normaux obtenus à partir de biopsies abdominales de femmes de 26 et 30 ans ont été ensemencés dans un milieu de croissance DMEM (Invitrogen, France) contenant du sérum de veau foetal (Dutscher, France) sur des microplaques revêtues de collagène puis incubés pendant 3 jours à 37° C et5% de CO2.
Puis les cellules ont été à nouveau incubées pendant 3 jours dans du milieu standard contenant du calcium à 1 mM, du TNFoc (Gibco Invitrogen France) à 10 ng/mL et l’hydrolysat selon l'invention de l'exemple 2b, comparativement à l’hydrolysat de protéines de riz de l'exemple 4, ou sans aucun produit (témoin non traité dit Ctrl). La teneur testée est exprimée en poids de matières sèches de l’hydrolysat sur le volume total du milieu comprenant l’hydrolysat.
Quantification d’involucrine
Les couches cellulaires ont été rincées avec une solution saline (dite HBSS pour Hanks balance salts solution) et le taux d’involucrine a été mesuré sur homogénat cellulaire par ELISA (Kit ELISA Human involucrine BT601 , Clinisciences France) selon le protocole du fabricant. Des dosages de MTT cellulaire ont également été effectués en parallèle, pour valider l’absence de cytotoxicité des produits aux doses testées (taux de MTT> 75% versus contrôle).
Tests statistiques :
Les résultats sont exprimés en pourcentage par rapport au témoin non traité Ctrl.
Résultats:
Tableau 1 L’hydrolysat enrichi en peptide selon l’invention a stimulé la synthèse d’involucrine par les kératinocytes. A isodose, l’hydrolysat selon l’invention contenant le peptide selon l’invention a été 1 ,3 fois plus efficace que l’hydrolysat de comparaison de l’exemple 4. La présence des peptides SEQ ID n°1 et SEQ ID n°2 expliquent cette différene.
Exemple 6. Effet d’un produit selon l’invention sur la synthèse de filaqqrine
L’effet d’un produit selon l’invention sur la synthèse de filaggrine, marqueur tardif de la différentiation, a été évalué sur un épiderme reconstruit à partir de kératinocytes humains primaires. Après 7 jours de prolifération et différentiation des kératinocytes, l’épiderme reconstruit a été traité ou non (témoin non traité) avec le peptide selon l’invention notamment sous la forme de l’hydrolysat selon l’exemple 2b ou le l’hydrolysat de protéine de riz de l’exemple 4 dépourvu de peptide selon l’invention, puis après 2 jours d’incubation 10 ng/ml de TNFalpha ont été ajouté et l’incubation poursuivie pendant 2 jours. Les épidermes reconstruits ont ensuite été inclus en paraffine et coupés pour immunomarquage de la filaggrine et analyse d’image par microscopie confocale.
Les résultats sont présentés dans la figure 4.
Le peptide selon l’invention notamment sous la forme de l’hydrolysat selon l’exemple 2b a stimulé la synthèse de filaggrine par rapport au témoin non traité, et par rapport à l’hydrolysat de protéine de riz de l’exemple 4 dépourvu de peptide selon l’invention.
Exemple 7 : Test Clinique sur les cheveux et le cuir chevelu
Les effets d’un traitement contenant un hydrolysat enrichi selon l’invention à 2%(p/p) dans la composition shampooing ci-dessous ont été évalués et comparés avec les effets d’un traitement avec un shampoing ne contenant pas l’hydrolysat selon l’invention (dit placebo) dans le cadre d’un test clinique sur volontaires humains. Les compositions testées dans cette étude Clinique sont les suivantes (les pourcentages étant exprimés en poids)
Tableau 2 L’étude a été réalisée sur 44 femmes et hommes volontaires, âgés de 18 à 55 ans, présentant un cuir chevelu sensible et présentant des squames secs parsemés et diffus. Les volontaires ont été répartis en 2 groupes : un groupe a testé la composition selon l’invention sous la forme d’un shampoing contenant l’hydrolysat de riz à 2% (p/p), et le deuxième groupe a testé la composition ne contenant pas l’hydrolysat selon l’invention dit placebo. Le shampooing a été utilisé 3 fois par semaine pendant 21 jours. La capacité à améliorer le confort du cuir chevelu a été évalué par mesure de la rougeur du cuir chevelu (DermoGenius Ultra), du pH du cuir chevelu (pHmètre), du sébum du cuir chevelu (Sébumètre) et par évaluation des squames du cuir chevelu (par un score attribué par un expert). Toutes les mesures et le score clinique ont également été effectués immédiatement après la première application, 1 et 3 semaines après l'utilisation des produits et ensuite 1 semaine après l'arrêt du traitement également (période post-traitement)
L'analyse statistique de l'évolution des paramètres instrumentaux en fonction du temps a été faite après la vérification de la normalité de distribution à l'aide du test de Shapiro-Wilk: versus valeur initiale par test t de Student apparié ou test de Wilcoxon, et pour comparaison entre produits par test t de Student non apparié ou test de Mann-Whitney. Pour la grille des scores, l'évolution du paramètre en fonction du temps a été faite avec le test non paramétrique de Wilcoxon ou test de Mann-Whitney. Le seuil de signification a été fixé à 5% (p <0,05).
Les résultats sont présentés dans les figures 1 à 3.
La première utilisation de shampooing contenant l'hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2% a conduit à une amélioration significative immédiate de la rougeur du cuir chevelu, du pH du cuir chevelu et du score des squames. Le shampooing contenant l'hydrolysat de peptide de riz selon l'invention à 2% a également fourni un effet lavant plus doux sur le cuir chevelu, avec une diminution significative moins importante du taux de sébum du cuir chevelu que le shampoing placebo.
Après une et trois semaines d'utilisation, le shampooing contenant l'hydrolysat de peptide de riz selon l'invention à 2% a significativement diminué la rougeur du cuir chevelu, diminué le pH du cuir chevelu et diminué le score des squames. Le shampooing contenant l'hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2% a également fourni un effet lavant doux sur le cuir chevelu sans modification significative du taux normal de sébum du cuir chevelu après une semaine et 3 semaines d'utilisation, alors que le shampooing placebo a diminué ce taux de sébum du cuir chevelu en même temps.
De manière remarquable, même une semaine après l'arrêt de l'utilisation des shampoings testés, la rougeur du cuir chevelu dans le groupe de volontaires qui a utilisé le shampooing contenant l'hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2% était encore significativement meilleure que celle du groupe placebo, et le pH de leur cuir chevelu était significativement inférieur à celui du groupe de volontaires ayant utilisé le shampoing placebo.
Exemple 8. Etude clinique sur l’hydratation de la peau.
L'effet sur l'hydratation cutanée du traitement avec un hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2% (p/p) dans une lotion corporelle a été testé versus un traitement placebo dans une étude clinique sur des volontaires humains. Les compositions des lotions corporelles utilisées étaient les suivantes (pourcentage en poids)
Tableau 3
L'étude a été réalisée sur 24 femmes volontaires, âgées de 40 à 65 ans, ayant la peau sèche sur les jambes. Les volontaires ont appliqué une composition de lotion pour le corps par jambe. Les lotions pour le corps ont été utilisées deux fois par jour pendant 28 jours.
L'efficacité d'hydratation a été évaluée à l'aide du cornéomètre. Les mesures ont été prises à des moments correspondant à la valeur initiale, ainsi qu'à 7, 14 et 28 jours de traitement, et après 7 jours après l’arrêt de l'utilisation du produit (35 jours après la valeur initiale). Un questionnaire d'auto-perception du consommateur a également été rempli par les volontaires à 28 jours.
L'analyse statistique de l'évolution des paramètres instrumentaux en fonction du temps a été faite après la vérification de la normalité de la distribution à l'aide du test de Shapiro-Wilk par test t de Student apparié ou test de rang signé de Wilcoxon. Le seuil de signification a été fixé à 5% (p <0,05). Pour le questionnaire d'auto-perception du consommateur, la différence statistique de fréquences (%) entre les opinions favorables (accord) et défavorables (désaccord) a été évaluée à l'aide du test binomial bilatéral à 5%.
Après une, deux, et quatre semaines d'utilisation, la lotion corporelle contenant l'hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2% a augmenté l'hydratation cutanée significativement par rapport à la lotion corporelle placebo après 2 et 4 semaines d'utilisation.
De manière remarquable, même une semaine après l'arrêt de l'utilisation des compositions, l'hydratation de la peau était encore significativement plus élevée pour la jambe traitée par la lotion corporelle contenant l'hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2%, par rapport à la valeur initiale et au placebo.
Après avoir utilisé pendant quatre semaines la lotion corporelle contenant l'hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2%, une majorité significative des volontaires ont convenu que leur peau était profondément hydratée, la peau avait l'air nourrie et qu’ils la sentaient nourrie, qu’ils ressentaient que la barrière cutanée sur leur jambe était renforcée, que la peau était visiblement plus lisse et douce, moins rugueuse, apaisée et plus confortable.
Exemple 9 : Formulation d’un ingrédient cosmétique selon l’invention
Un ingrédient cosmétique selon l’invention contient en pourcentage en poids (p/p) :
Acide benzoïque 0,4% en conservateur hydrolysat de riz selon l’exemple 2 20%, eau qsp 100%
Un tel ingrédient selon l’invention est liquide et peut être formulé selon les techniques habituelles connues par l’homme du métier pour la réalisation d’une composition cosmétique.
Exemple 10 : autres avantaqes/propriétés du peptide selon l’invention
10.1 activité anti-élastase : test d’inhibition ELH (Elastase Leucocytaire Humaine)
Le vieillissement des cellules souches des follicules pileux (HFSC) entraîne un vieillissement et une miniaturisation progressive des follicules pileux. Ce vieillissement des follicules pileux est induit par l'élimination trans-épidermique des cellules souches par protéolyse de la protéine hémidesmosomale COL17A1 (collagène BP180 / type XVII). Cette protéolyse des hémidesmosomes, qui ancrent les cellules souches des follicules pileux à la membrane basale, provoque des divisions cellulaires asymétriques de type sénescente et le vieillissement des follicules pileux. Cette protéolyse est déclenchée par l'élastase neutrophile, qui est induite dans les HFSC âgés mais est indétectable chez les jeunes HFSC, entraînant une déplétion de COL17A1 , une miniaturisation ou une perte des follicules pileux et une perte de cheveux liée à l'âge.
Le peptide selon l’invention notamment sous la forme de l’hydrolysat selon l’exemple 2b a montré une inhibition significative de l’activité élastase par rapport à un témoin non traité à la dose de 0,1% (p/p), soit 2,2 fois plus efficace que l’hydrolysat de référence de l’exemple 4 dépourvu de peptide selon l’invention.
10.2 activité sur la synthèse de collagène
La synthèse de collagène I déposée a été évaluée selon la méthode décrite dans la demande de brevet WO2012/175454A2.
Le peptide selon l’invention notamment sous la forme de l’hydrolysat selon l’exemple 2b a stimulé la synthèse du collagène I de manière significative par rapport à un témoin non traité à la dose de 0,05% (p/p), soit 2,4 fois plus efficace que l’hydrolysat de protéine de riz de l’exemple 4 dépourvu de peptide selon l’invention.
Exemple 11 : Etude clinique sur la souplesse et la fermeté de la peau
L'étude a été réalisée sur 34 femmes volontaires, âgées de 40 à 65 ans. Les volontaires ont appliqué une composition de type lotion corporelle similaire à celle de l’exemple 7 par côté de l'abdomen. Les lotions corporelles ont été utilisées deux fois par jour pendant 28 jours.
L'effet sur la fermeté a été évaluée à l'aide d’un cutomètre et de l’appareil SkinFibrometer. Après 2 et 4 semaines d'utilisation, la lotion corporelle contenant l’hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2% (p/p) a augmenté la fermeté de la peau, significativement par rapport à la lotion corporelle placebo. L'extensibilité de la peau était également significativement augmentée par rapport au placebo après 28 jours d'utilisation du produit.
De manière remarquable, même une semaine après l'arrêt de l'utilisation des lotions, la fermeté de la peau était encore significativement plus élevée pour le côté de l'abdomen traité par la lotion corporelle contenant l’hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2%, par rapport au départ et au placebo.
Après avoir utilisé pendant 4 semaines la lotion corporelle contenant l’hydrolysat de protéines de riz selon l'invention à 2%, une majorité significative des volontaires ont convenu que leur peau de l'abdomen paraissait plus jeune et était plus confortable. Exemple 12 : Effets du peptide selon l’invention sur l’apparence des cheveux
12.1 ) Sur la structure des fibres kératiniques:
Un hydrolysat selon l’invention a été évalué pour ses propriétés à réparer les cheveux par la méthode DSC (Differential Scanning calorimetry) selon les protocoles classiques.
Le procédé DSC est un procédé d'analyse thermique courant pour mesurer les quantités de chaleur absorbée / émise d'un échantillon lors du chauffage. En raison des différents flux de chaleur entre l'échantillon et la référence pendant le programme de changement de température (vitesse de chauffage), des conclusions peuvent être tirées sur les températures de dénaturation des cheveux traités (échantillon) par rapport aux cheveux non traités (référence). L'appareil DSC TA Instruments Q 100 avec échantillonner automatique a été utilisé. La mesure a été réalisée selon la méthode de F. J. Wortmann et al., De: J. Cosmet. Sei., 2002, 53, 219- 228) avec une vitesse de chauffage de 2 ° C / min. Comme échantillon, des cheveux caucasiens ont été ultra-blanchis, puis traités trois fois, par une solution aqueuse contenant 1 % (exprimée en matière sèche, p/v) de l'hydrolysat de protéines de riz selon l'exemple 2 de l'invention. Un traitement à l’eau seul a été effectué comme témoin négatif.
Les cheveux abîmés qui ont été traités avec l'hydrolysat de protéines de l'invention selon l'exemple 2 démontrent une température de décomposition plus élevée, c'est-à-dire une amélioration de la température de dénaturation des cheveux, qui est attribuée à une amélioration de la structure capillaire.
Tableau 4
12.2) sur la prolifération des fibroblastes de la papille dermique La méthode utilisée est basée sur un modèle 3D de pseudo-papilles de follicule pileux à partir de fibroblastes papillaires dermiques cultivés en agrégats pour évaluer un effet revitalisant sur les follicules pileux et un effet sur l’augmentation de la croissance des cheveux.
Culture et traitement cellulaire:
Le procédé est basé sur l'agrégation de fibroblastes de papilles de cheveux humains par une centrifugation douce d'une suspension de fibroblastes de papilles de cheveux humains. Des fibroblastes dermiques humains ont été préparés sous forme de suspension en milieu basal contenant le peptide de riz sous forme de l’hydrolysat selon l'invention de l'exemple 2c, comparativement à l’hydrolysat de protéines de riz de l'exemple 4, ou sans aucun produit (témoin non traité), et transférés sur des microplaques à 96 puits. Les suspensions cellulaires ont été centrifugées pendant 5 minutes à 200 g puis les agrégats formés ont été incubés pendant 5 jours à 37 ° C, CO2 à 5% et humidté relative de plus de 95%.
Quantification d'ADN
Les agrégats ont été rincés par une solution saline équilibrée (PBS) puis disloqués par incubation pendant environ 1 heure avec un mélange de protéases (Collagénase A, Trypsine) avec de l’EDTA. Ensuite, une partie des suspensions cellulaires a été centrifugée et les culots ont été récupérés pour mesurer le niveau d'ADN (acide nucléique désoxyribose). L'ADN a été mesuré sur cellule solubilisée dans un tampon spécifique selon les recommandations du fabricant du kit (Kit CyQUANT NF Cell Proliferation Assay, Invitrogen, France).
Les résultats sont exprimés en pourcentage par rapport au témoin non traité et exprimés en moyenne.
Résultats: Tableau 5
Le peptide selon l'invention sous la forme d’un hydrolysat selon l’invention a stimulé la teneur totale en ADN dans les fibroblastes de pseudo-papilles par rapport au témoin non traité et à l'hydrolysat de protéine de riz de référence (exemple 4). A la même dose de 0,01 % (poids sec), Le peptide selon l'invention sous la forme d’un hydrolysat selon l’invention était 5 fois plus efficace que l'hydrolysat de protéine de riz de l’exemple 4.
Exemple 13 :Exemples de formulation O/W polymer gel
Tableau 6
Les formulations appropriées sont également celles décrites dans la demande de brevet BASF US20190216709 exemples B3 à B9, en remplaçant le peptide de l’exemple 2 par l’hydrolysat selon l’invention décrit dans l’exemple 2a). Les peptides utilisés dans le cadre de l’invention sont rassemblés dans le tableau 7 ci -après :
Tableau 7

Claims

44 Revendications
1. Utilisation du peptide de SEQ ID N°1 et/ou de ses homologues pour ses propriétés cosmétiques choisies parmi améliorer le confort de la peau saine, notamment du cuir chevelu sain, et/ou des muqueuses saines et/ou améliorer l’apparence des phanères saines.
2. Utilisation selon la revendication 1 pour diminuer et/ou prévenir les manifestations désagréables et/ou inconfortables de la peau saine, notamment du cuir chevelu sain, et/ou des muqueuses saines dues à une baisse d’homéostasie cutanée et/ou mucosale et/ou à une diminution de la teneur en involucrine et/ou de la teneur en filagrine et/ou à une élévation de pH cutané.
3. Utilisation selon la revendication 2, caractérisée en ce que les manifestations désagréables et/ou inconfortables des peaux saines et/ou muqueuses saines ne sont pas liées à l’âge ni à une altération des cellules épithéliales.
4. Utilisation du peptide de SEQ ID N°1 et/ou de ses homologues, en particulier présentant une identité de séquence d’au moins 85% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature, pour ses propriétés cosmétiques choisies parmi
- améliorer le confort de la peau saine, notamment du cuir chevelu sain, et/ou des muqueuses saines pour diminuer et/ou prévenir les manifestations désagréables et/ou inconfortables de la peau saine, notamment du cuir chevelu sain, et/ou des muqueuses saines dues à une baisse d’homéostasie cutanée et/ou mucosale et/ou à une diminution de la teneur en involucrine et/ou de la teneur en filagrine et/ou à une élévation de pH cutané ;
- et/ou améliorer l’apparence des phanères saines, 45 les manifestations désagréables et inconfortables des peaux saines et/ou muqueuses saines n’étant pas liées à l’âge ni à une altération des cellules épithéliales.
5. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes pour diminuer et/ou prévenir la sécheresse cutanée et/ou mucosale, en particulier au niveau du cuir chevelu, les démangeaisons, les rougeurs, les tiraillements cutanés, les desquamations, en particulier les squames du cuir chevelu, les pellicules, les craquelures ainsi que la sensibilité cutanée notamment du cuir chevelu, et/ou procurer une sensation de confort cutané et/ou mucosale et/ou rendre la peau et/ou la muqueuse plus douce et/ou diminuer sa rugosité.
6. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes dans laquelle l’amélioration de l’apparence des phanères, préférentiellement des cheveux est choisie parmi augmenter leur force et/ou leur résistance, et/ou les protéger contre les dommages des traitements oxydants cosmétiques et/ou des agents agressifs, diminuer le taux de cassure, réparer les phanères abimées, améliorer la mise en forme et/ou le volume, augmenter la croissance et/ou la brillance des fibres kératiniques et/ou diminuer leur chute.
7. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes dans laquelle les phanères sont les cheveux.
8. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes dans laquelle le peptide et/ou ses homologues, en particulier présentant une identité de séquence d’au moins 85% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature, est sous la forme du peptide de SEQ ID N°2 et/ou de ses homologues, en particulier présentant une identité de séquence d’au moins 85% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature.
9. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes dans laquelle le peptide de SEQ ID N°1 et/ou ses homologues, en particulier présentant une identité de séquence d’au moins 85% avec 46 ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature, est sous la forme d’un hydrolysat peptidique de Oryza sativa, en particulier enrichi en peptide de SEQ ID N° 1, préférentiellement sous forme liquide.
10. Utilisation selon la revendication précédente dans laquelle l’hydrolysat présente au moins deux des caractéristiques choisies parmi :
- A une teneur en matière sèche comprise entre 15 et 25% en poids,
- A une teneur en azote de 1 ,5 à 3% en poids ;
- A un poids moléculaire moyen allant de 1000 à 2500 daltons, préférentiellement 1250 à 2000 daltons, encore préférentiellement 1500 daltons ;
- Contient au moins 50%, encore préférentiellement 60% de peptides ayant un poids moléculaire supérieur à 1000 daltons ;
- Contient au moins 70%, encore préférentiellement 80% de peptides ayant un poids moléculaire inférieur à 2500 daltons.
11. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes dans laquelle le peptide de SEQ ID N°1 et/ou ses homologues, en particulier présentant une identité de séquence d’au moins 85% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature, est utilisé :
- en combinaison avec le peptide de SEQ ID N°2 et/cu ses homologues, en particulier présentant une identité de séquence d’au moins 85% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature, et/ou
- en combinaison avec le peptide de SEQ ID N°3 et/cu ses homologues, en particulier présentant une identité de séquence d’au moins 85% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature, et/ou
- en combinaison avec le peptide de SEQ ID N°4 et/cu ses homologues, en particulier présentant une identité de séquence d’au moins 85% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature.
12. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le peptide de SEQ ID N°1 etôu ses homologues, en particulier présentant une identité de séquence d’au moins 85% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature, se trouve sous la forme d’une composition cosmétique le comprenant et comprenant en outre avantageusement un véhicule cosmétique approprié.
13. Utilisation selon la revendication 12 caractérisée en ce que le peptide de SEQ ID N°1 et/ou ses homologues, en pariculier présentant une identité de séquence d’au moins 85% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature, est présent dans la composition cosmétique en une teneur comprise entre 1x10'5% à 20% en poids, préférentiellement de 1x10'4% à 10% en poids, encore avantageusement de 1x10'3% à 3% en poids, encore préférentiellement de 0,001 % et 0,1 % en poids, de matière sèche par rapport au poids total de la composition.
14. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’il s’agit d’une utilisation par voie topique.
15. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle est destinée au soin des peaux sèches et/ou sensibles, et/ou du cuir chevelu sec et/ou sensible.
16. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l’homologue du peptide présente une identité de séquence d’au moins 85% avec ladite séquence et possède une activité biologique de même nature.
17. Procédé de soin et/ou traitement cosmétique caractérisé en ce qu’il comprend l’application par voie topique sur au moins une zone de peau saine, avantageusement le cuir chevelu sain et/ou de muqueuse saine et/ou de phanère saine, du peptide de SEQ ID N°1 etou de ses homologues, en particulier présentant une identité de séquence d’au moins 85% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature, pour améliorer le confort de la peau saine, notamment du cuir chevelu sain, et/ou des muqueuses saines et/ou améliorer l’apparence des phanères saines, notamment des fibres kératiniques.
18. Procédé de soin et/ou traitement cosmétique caractérisé en ce qu’il comprend l’application par voie topique sur au moins une zone de peau saine, avantageusement le cuir chevelu sain et/ou de muqueuse saine et/ou de phanère saine, du peptide de SEQ ID N°1 etou de ses homologues, en particulier présentant une identité de séquence d’au moins 85% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature, pour
- améliorer le confort de la peau saine, notamment du cuir chevelu sain, et/ou des muqueuses saines pour diminuer et/ou prévenir les manifestations désagréables et/ou inconfortables de la peau saine, notamment du cuir chevelu sain, et/ou des muqueuses saines dues à une baisse d’homéostasie cutanée et/ou mucosale et/ou à une diminution de la teneur en involucrine et/ou de la teneur en filagrine et/ou à une élévation de pH cutané
- et/ou améliorer l’apparence des phanères saines, notamment des fibres kératiniques, les manifestations désagréables et inconfortables des peaux saines et/ou muqueuses saines n’étant pas liées à l’âge ni à une altération des cellules épithéliales.
19. Procédé de soin cosmétique selon la revendication 17 ou 18 dans lequel le peptide de SEQ ID N° 1 et/ou ses homologues, en particulier présentant une identité de séquence d’au moins 85% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature, est tel que défini selon l’une des revendications 8 à 13 ou 16.
20. Procédé selon l’une quelconque des revendications 17 à 19 dans lequel la zone de peau et/ou muqueuse et/ou phanère est choisi parmi le cuir chevelu, le visage, les mains, les bras, le décolleté, les jambes, le cou, le dos, les épaules, le ventre, les poignets, les avant-bras, les 49 chevilles, les cuisses, la nuque, les plis articulaires et des aisselles, les muqueuses labiales, les poils, les cils, les sourcils et/ou les cheveux.
21. Peptide de SEQ ID N°1 et/ou ses homologues, en particulier présentant une identité de séquence d’au moins 85% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature, pour son utilisation dans le traitement et/ou la prévention d’une pathologie associée à une baisse d’homéostasie cutanée et/ou à une diminution de la teneur en involucrine et/ou de la teneur en filagrine et/ou à une élévation de pH cutané et/ou l'une quelconque de leurs combinaisons, notamment l’ichtyose et l’alopécie ainsi que les desquamations associées à certaines pathologies telles que irradiations aigues, coup de soleil, brulure.
22. Peptide de SEQ ID N°1 et/ou ses homologues, en particulier présentant une identité de séquence d’au moins 85% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature, pour son utilisation selon la revendication 21 , caractérisé en ce que le peptide de SEQ ID N° 1 et/ou ses homologues est tel que défini selon l’une des revendications 8 à 11 ou 16.
23. Peptide de SEQ ID N°1 et/ou ses homologues, en particulier présentant une identité de séquence d’au moins 85% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature, pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications 21 ou 22, caractérisé en ce que le peptide et/ou ses homologues, en particulier présentant une identité de séquence d’au moins 85% avec ladite séquence et possédant une activité biologique de même nature, est présent dans une composition pharmaceutique en une teneur comprise entre 1x10'5% à 20% en poids, préférentiellement de 1x10'4% à 10% en poids, encore avantageusement de 1x10'3% à 3% en poids, encore préférentiellement de 0,001 % et 0,1 % en poids, de matière sèche par rapport au poids total de la composition, ladite composition comprenant en outre avantageusement un véhicule pharmaceutique approprié.
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