FR3040625A1 - Principe actif cosmetique issu d'helichrysum stoechas et utilisation pour lutter contre le vieillissement de la peau - Google Patents
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Abstract
L'objet de l'invention est un principe actif cosmétique issu d'Helichrysum stoechas. L'invention vise également des compositions cosmétiques l'incluant et son utilisation cosmétique pour régénérer les tissus cutanés et lutter contre le vieillissement de la peau.
Description
Principe actif cosmétique issu d'helichrysum stoechas
ET UTILISATION POUR LUTTER CONTRE LE VIEILLISSEMENT DE LA PEAU
La présente invention concerne l'utilisation d’Helichrysum stoechas en cosmétique pour un effet anti-âge.
En particulier l'invention se rapporte à un principe actif cosmétique obtenu en milieu aqueux issu d’Helichrysum stoechas, à des compositions cosmétiques incluant un tel principe actif et à son utilisation cosmétique en application topique.
Le nombre de produits cosmétiques dédiés à la lutte contre le vieillissement cutané ne cesse d'augmenter. Il a doublé au cours des six dernières années. Parmi ces produits antiâges, de plus en plus tentent d'agir sur la régénération de la peau.
Les travaux sur la régénération de la peau sont directement inspirés de la médecine régénératrice. En particulier, les chercheurs en biologie cutanée s'inspirent des avancées scientifiques réalisées sur l'os et le cœur afin de développer de nouveaux traitements visant le remodelage de la matrice dermique. En effet, d'un point de vue structural et fonctionnel, l'os et la peau présentent de grandes similitudes : structuralement : tous deux reposent sur un puissant réseau matriciel qui est constitué principalement par des fibres de collagène I. - fonctionnellement : les matrices osseuses et dermiques sont sécrétées localement, puis organisées sous la forme de « réseaux de maille » qui assurent un support physique pour les cellules. Elles fournissent également des signaux moléculaires à destination des cellules résidentes qui sont indispensables au maintien et au renouvellement de la matrice. Ce sont des structures hautement dynamiques capables de se remodeler continuellement. Ainsi, elles peuvent répondre favorablement aux stimuli mécaniques et assurent la réparation d'éventuels dommages afin de maintenir la structure et la fonction tissulaire. Toutefois, os et peau sont tous deux confrontés au vieillissement, au cours duquel les « matrices extracellulaires » subissent un profond remodelage. La matrice osseuse se fragilise entraînant les problèmes d'ostéoporose. Au niveau de la peau, l'architecture des collagènes subit une transformation spectaculaire. Alors que les fibres de collagène sont alignées parallèlement à la jonction dermo-épidermique (JDE) dans le cas d'individus jeunes, elles apparaissent dégradées chez les individus âgés. Sous cette forme, elles ne sont alors plus capables de conférer à la peau une bonne résistance aux pressions mécaniques. La peau perd son élasticité et les rides apparaissent.
Considérant cette homologie fonctionnelle, des chercheurs se sont particulièrement intéressés à une famille de protéines : les protéines matri-cellulaires. Ces dernières n'exercent aucune fonction structurale mais jouent un rôle capital dans le remodelage et la régénération matricielle. Classiquement exprimées au cours du développement ou bien de façon restreinte chez l'adulte (cicatrisation de blessures), les protéines matri-cellulaires comptent dans leurs rangs une exception : la periostine. Cette protéine a été identifiée dans l'os et largement décrite pour son implication dans le remodelage de ce tissu. Elle est constituée de multiples domaines qui lui confèrent une capacité à se lier spécifiquement à différents éléments. Ainsi, en se liant aux intégrines, elle module l'activité des cellules alors qu'en interagissant avec diverses protéines matricielles tel que le collagène I, elle promeut leur organisation. Contrairement aux autres protéines matri-cellulaires, la periostine présente la particularité d'être également exprimée chez les adultes indépendamment d'une blessure. Cette spécificité fait donc de la periostine une protéine « régénératrice » inédite impliquée dans le maintien de l'homéostasie et de l'architecture tissulaire.
Au niveau cutané, l'absence de periostine est corrélée à l'apparition de structures de collagène aberrantes qui présentent une sensibilité accrue aux protéases. Le déficit en periostine entraîne également une altération des propriétés biomécaniques du collagène et consécutivement de la peau. Elle est donc indispensable au maintien de l'intégrité du tissu cutané et de sa protection vis-à-vis de stress mécaniques. Toutefois, sa synthèse se détériore au fil des années, si bien qu'il est primordial de trouver des molécules capables de maintenir la synthèse de periostine dans les cellules cutanées au cours du vieillissement et d'en assurer sa fonctionnalité. C'est l'objectif de la présente invention qui propose à cet effet d'utiliser un principe actif obtenu à partir d’Helichrysum stoechas.
Helichrysum stoechas est le nom latin de l'immortelle des dunes, qui désignait dans l'antiquité grecque une plante à fleurs jaunes. Cette espèce se développe dans des conditions rudes (rochers et sables maritimes des côtes sud-atlantiques) sous forme de touffe de 10 à 50 cm de hauteur. Lors des journées chaudes, elle dégage un parfum épicé évoquant le curry. La floraison s'étale de juin à juillet. Les fleurs qui fanent et se dessèchent persistent sur la plante tout en gardant leur couleur or éclatant évoquant l'immortalité.
De façon surprenante, Helichrysum stoechas présente un effet sur la synthèse de la periostine, sur la reconstuction des fibres de collagène et la densité de la matrice dermique et permet ainsi de stimuler la régénération tissulaire au cours du vieillissement cutané. L'invention vise ainsi l'utilisation sur la peau en application topique au sein d'une composition cosmétique d'un principe actif cosmétique obtenu à partir d’Helichrysum stoechas pour lutter contre le vieillissement cutané.
Avantageusement un principe actif cosmétique obtenu à partir d’Helichrysum stoechas permet de renforcer les propriétés biomécaniques de la peau, de diminuer le phénomène de relâchement du visage, et de réduire les rides. L'invention a également pour objet un principe actif cosmétique obtenu en milieu aqueux à partir d’Helichrysum stoechas, notamment un principe actif cosmétique obtenu à partir d’Helichrysum stoechas comprenant plus de 20% en poids de sucres par rapport au poids total de matière sèche du principe actif.
Enfin l'invention vise aussi une composition cosmétique incluant ce principe actif ainsi qu'un procédé de traitement cosmétique. D'autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description en détail de l'invention qui va suivre. L'invention a donc pour objet un principe actif cosmétique issu d’Helichrysum stoechas. Par « actif cosmétique » ou « principe actif cosmétique » au sens de l'invention, on entend un ensemble de plusieurs molécules présentant un effet sur les cellules de la peau.
Par actif cosmétique ou principe actif cosmétique « issu de » ou « obtenu à partir de » Helichrysum stoechas au sens de l'invention, on entend un ensemble de plusieurs molécules extraites de graines d’Helichrysum stoechas présentant un effet sur les cellules de la peau. Les molécules peuvent être présentes à l'état naturel dans Helichrysum stoechas ou bien être préférentiellement obtenues par transformation des molécules présentes à l'état naturel dans Helichrysum stoechas par exemple par hydrolyse.
Le principe actif selon l'invention est préférentiellement un principe actif obtenu en milieu aqueux à partir d’Helichrysum stoechas. Par obtenu en milieu aqueux au sens de l'invention on entend un milieu contenant principalement de l'eau, ou un milieu aqueux basique ou acide. Notamment, il ne s'agit pas d'une huile, ni d'une huile essentielle. Encore plus préférentiellement, il s'agit d'un principe actif cosmétique obtenu à partir d'Helichrysum stoechas comprenant plus de 20% en poids de sucres par rapport au poids total de matière sèche du principe actif.
De façon préférée, le principe actif comprend des oligosaccharides de degré de polymérisation compris entre 2 et 7. Ces oligosaccharides représentent préférentiellement au moins 20% en poids des sucres présents dans le principe actif, en particulier au moins 26%, préférentiellement au moins 40%.
Ces oligosaccharides de degré de polymérisation compris entre 2 et 7 sont préférentiellement constitués majoritairement par les sucres simples suivants : glucose, fructose et acide galacturonique. Il peuvent également être constitués minoritairement par un ou plusieurs des sucres simples suivants : arabinose, galactose, saccharose, xylose et rhamnose.
En plus des composés saccharidiques, le principe actif peut contenir d'autres molécules, en particulier des protéines.
Selon une variante particulièrement adaptée, le principe actif selon l'invention est un hydrolysat d'Helichrysum stoechas, préférentiellement un hydrolysat enzymatique.
Selon un autre aspect le principe actif est préférentiellement obtenu à partir des parties aériennes fleuries d’Helichrysum stoechas.
Selon un mode de réalisation adapté, le principe actif utile selon l'invention se présente sous forme liquide et présente au moins une des caractéristiques suivantes, préférentiellement toutes :
Un taux de matières sèches compris entre 10 et 60g/l, préférentiellement entre 15 et 23g/l,
Une teneur en sucres comprise entre 4 et 25g/l, préférentiellement entre 6 et 9.5g/l, Des sucres principalement sous forme d'oligosaccharides de degré de polymérisation compris entre 2 et 7,
Une teneur en composés peptidiques inférieure à 10%,
Une teneur en cendres inférieure à 31% en poids par rapport au poids de matières sèches.
Le taux de matières sèches peut être mesuré par passage à l'étuve à 105°C d'un échantillon jusqu'à obtention d'un poids constant.
La teneur globale en sucres peut être déterminée par la méthode de DUBOIS (Dubois M. et al., Analytical chemistry, 28, 3, 350-356, 1956). La caractérisation de la masse molaire des carbohydrates présents dans le principe actif de la présente invention est réalisée par méthode HPLC. Le dosage des sucres simples est réalisé par chromatographie liquide ionique.
La teneur en composés peptidiques est déterminée par la méthode de LOWRY (Lowry et al., Protein measurement with the folin reagent, J. Biol. Chem., 193, 265,1951).
La teneur en cendres brutes peut être déterminée par la pesée des résidus issus de l'incinération des échantillons du principe actif à 550°C dans un four à moufle électrique. Le principe actif selon l'invention peut être obtenu par tout procédé adapté, très préférentiellement en milieu aqueux. Préférentiellement, il est obtenu par un procédé comprenant une étape d'hydrolyse, en particulier d'hydrolyse enzymatique.
Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, le principe actif est obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - Solubilisation de poudre de d’Helichrysum stoechas (préférentiellement parties aériennes fleuries) dans l'eau, préférentiellement entre 10 et 100g/l, - Hydrolyse enzymatique avec une enzyme hydrolysant les saccharides, préférentiellement dans les conditions optimales d'utilisation de l'enzyme connues de l'homme du métier, - Séparation des phases soluble et insoluble préférentiellement par filtration, décantation ou centrifugation, - Récupération de la phase soluble contenant les sucres hydrolysés, - Inactivation enzymatique par traitement thermique, - Filtration et concentration, en vue de sélectionner les molécules de poids moléculaire inférieur à 2000Da.
Les paramètres des différentes étapes doivent être ajustés afin d'obtenir des principes actifs présentant les caractéristiques de l'invention. Certaines étapes peuvent être ajoutées afin d'obtenir un actif particulier, comme une étape de : - Clarification ayant pour but de retirer les composés rendus insolubles lors du traitement thermique, cette clarification peut, par exemple, être réalisée par filtration sur tamis, - Filtration finale et filtration stérilisante ayant pour but d'éliminer les microorganismes qui pourraient être présents dans le produit.
Ces étapes prises individuellement sont usuelles dans le domaine des extractions d'actifs à partir de plantes ou de levures et l'homme du métier est à même d'en ajuster les paramètres réactionnels sur la base de ses connaissances générales.
Le principe actif selon l'invention est préférentiellement utilisé dans une composition, cette composition comprenant un milieu cosmétiquement acceptable. Il s'agit de compositions dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée.
Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d'émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide.
Il peut s'agir de compositions comprenant au moins 0,5% de principe actif issu d’Helichrysum stoechas selon la présente invention, préférentiellement entre 0,5 et 10%. Ces compositions comprennent, outre l'actif, un milieu physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d'inconfort inacceptables pour l'utilisateur telles que des rougeurs, tiraillements ou picotements.
Les compositions selon l'invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un composé choisi parmi : - les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ; -les cires, telles que l'ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d'abeille ou la cire de carnauba, - les élastomères de silicone, - les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu'ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères, - les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires, - les épaississants et/ou gélifiants, - les humectants, tels que les polyols comme la glycérine, - les filtres organiques, - les filtres inorganiques, - les colorants, les conservateurs, les charges, - les tenseurs, - les séquestrants, - les parfums, -et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative.
Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA (International Cosmetic Ingrédient Dictionary and Handbook publié par le Personal Care Product Council).
Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée.
Ces compositions sont notamment destinées à être utilisées pour stimuler la régénération tissulaire et lutter contre le vieillissement cutané L'invention vise ainsi également l'utilisation cosmétique d'un principe actif cosmétique obtenu à partir d’Helichrysum stoechas pour lutter contre le vieillissement cutané, préférentiellement un principe actif obtenu à partir de d’Helichrysum stoechas tel que décrit dans la présente demande de brevet.
Selon un mode de réalisation préféré, le principe actif cosmétique est formulé au sein d'une composition cosmétique, préférentiellement une composition cosmétique telle que décrite dans la présente demande de brevet.
Le principe actif cosmétique selon l'invention est capable de maintenir la synthèse de periostine au cours du vieillissement.
La periostine est une protéine matri-cellulaire. Les protéines matri-cellulaires sont exprimées dans des conditions particulières à savoir au cours de l'embryogénèse et du développement, et en réponse à des dommages tels que ceux provoqués par une blessure chez l'adulte.
Elles sont décrites comme des médiateurs régulant les interactions matrice-cellule. Sécrétées dans le milieu extracellulaire, elles modulent les fonctions cellulaires en interagissant avec des récepteurs membranaires, des molécules bioactives ou des composants de la matrice extracellulaire tels que les collagènes. Contrairement aux autres protéines de la matrice extracellulaire, les protéines matri-cellulaires n'exercent pas de fonctions structurales.
Parmi les protéines matri-cellulaires, la periostine présente une spécificité quant à son expression. En effet, contrairement à la plupart des protéines matri-cellulaires, la periostine s'exprime aussi chez les individus adultes sains.
Au niveau cutané, la periostine est fortement exprimée par un grand nombre de fibroblastes. On la retrouve déposée au niveau de la jonction dermo-épidermique, du derme papillaire et autour des follicules pileux. Dans le derme, la periostine joue un rôle dans la formation et la maturation des fibres de collagène assurant ainsi des fonctions biomécaniques optimales. De plus, de par sa capacité à se lier aux intégrines présentes à la surface cellulaire, la periostine module l'activité des cellules. Elle favorise ainsi la migration, la prolifération et la différenciation cellulaire et contribue de façon inédite au maintien de l'intégrité du tissu cutané et à la protection contre les agressions mécaniques. La periostine est déprimée par divers facteurs parmi lesquels l'exposition aux rayons UV et le vieillissement qu'il soit de nature intrinsèque ou extrinsèque.
Selon l'invention, l'utilisation d'un principe actif cosmétique obtenu à partir à'Helichrysum stoechas sur la peau stimule la synthèse de periostine pour contrer cette détérioration et retrouver une synthèse normale de periostine.
Le principe actif cosmétique selon l'invention est capable de régénérer les fibres de la matrice extracellulaire au cours du vieillissement.
Au cours du vieillissement, le contenu en collagène du derme décroît. Les fibres apparaissent de plus en plus fragmentées et déstructurées compromettant en retour les fonctions fibroblastiques et les propriétés biomécaniques de la peau. Comme évoqué précédemment, la periostine est une protéine multifonctionnelle qui est décrite pour son implication dans la fibrillogénèse. En effet, l'utilisation de différents modèles déficients en periostine a montré que son absence était associée à une réduction du diamètre des fibres de collagène et de leur réticulation. Or, il est établi que le diamètre des fibres de collagène conditionne les propriétés biomécaniques de la peau. En interagissant avec le collagène, la periostine agit donc sur l'élasticité de la peau.
Dans l'organisation des fibres de collagène, la periostine agit selon plusieurs modes d'action : - la periostine facilite l'activation de la Lysyl OXidase (LOX) : enzyme impliquée dans la réticulation du collagène (Maruhashi et al., 2010), - la periostine est une molécule de liaison entre les collagènes I, V et la fibronectine est capable d'assurer l'association latérale des fibres de collagène, - enfin, au-delà de son effet direct sur l'organisation du collagène, la periostine exerce également un effet protecteur sur les fibres en régulant leur susceptibilité vis à vis de protéases telles que les métalloprotéases (MMP)
Selon l'invention, l'application d'un principe actif cosmétique obtenu à partir d’Helichrysum stoechas sur la peau améliore significativement la structure des fibres de la matrice extracellulaire en favorisant la réticulation de ces dernières et la formation de fibres intactes et allongées. Par ailleurs, il est capable d'exercer un effet favorable sur l'organisation de la matrice.
En favorisant la synthèse de la periostine, l'utilisation cosmétique d'un principe actif cosmétique obtenu à partir d’Helichrysum stoechas régénère l'organisation et la structure des fibres de collagène abîmées par le vieillissement. Ce mécanisme permet d'optimiser la fonctionnalité de la matrice extracellulaire et de renforcer les propriétés mécaniques des fibres. L'application d'un principe actif cosmétique obtenu à partir d'Helichrysum stoechas sur la peau permet en particulier : - d'augmenter la densité du derme, - d'augmenter la fermeté et la tonicité de la peau, - de réduire le relâchement global du bas du visage, - de diminuer les rides.
La peau est ainsi plus ferme, le visage remodelé et l'ovale redessiné, les rides et ridules sont réduites.
Le principe actif selon l'invention peut ainsi être utilisé pour stimuler la régénération tissulaire de la peau, en particulier pour augmenter la densité de la matrice dermique et/ou pour reconstruire les fibres de collagène de la peau et/ou pour augmenter la synthèse de la periostine par les cellules cutanées. Il permet ainsi d'augmenter la fermeté et la tonicité de la peau et/ou de diminuer le relâchement de la peau du visage et/ou de réduire les rides. L'invention vise aussi spécifiquement un procédé cosmétique de soin de la peau pour lutter contre le vieillissement cutané, en particulier pour augmenter la fermeté et la tonicité de la peau et/ou diminuer le relâchement de la peau du visage et/ou réduire les rides, qui consiste à appliquer au moins une fois par jour sur la peau du visage une composition comprenant au moins 0,5% en poids de matières sèches d'un principe actif cosmétique issu d’Helichrysum stoechas.
Afin d'illustrer ces effets cosmétiques sur la peau, les exemples suivants avec leurs résultats d'essais sont présentés. I. Exemples 1.1 Exemple 1 : Principe actif selon l'invention
Un exemple de procédé d'obtention d'un principe actif selon l'invention, comprend la mise en œuvre des étapes suivantes : - Solubilisation de poudre des parties aériennes fleuries d’Helichrysum stoechas dans l'eau à raison de 10g/l,
Hydrolyse enzymatique avec une carbohydrase, - Séparation des phases soluble et insoluble par centrifugation, Récupération de la phase soluble contenant les sucres hydrolysés,
Inactivation enzymatique par traitement thermique à 80°C pendant lh,
Filtration sur filtre membranaire en vue de sélectionner les molécules de poids moléculaire inférieur à 2000Da,
Filtration stérilisante sur filtre 0.22pm.
Le principe actif obtenu est un liquide limpide jaune pâle présentant une matière sèche de 19.1 g/l, un pH de 4.5 et une teneur en sucres (méthode de Dubois) de 8.1 g/l, soit 42% de la matières sèches et une teneur en protéines (méthode de Lowry) de 1.3 g/l. Le principe actif contient 42% d'oligosaccharides de DP compris entre 2 et 7, soit entre 360 et 1260Da.
La proportion des principaux sucres simples du principe actif selon l'invention est 32% de glucose, 25% de fructose, 20% d'acide galacturonique, par rapport à la totalité des sucres. 1.2 Exemple 2 : Principe actif selon l'invention
Un exemple de procédé d'obtention d'un principe actif selon l'invention, comprend la mise en oeuvre des étapes suivantes : - Solubilisation de poudre des parties aériennes fleuries d’Helichrysum stoechas dans l'eau à 30g/l,
Hydrolyse enzymatique avec une enzyme hydrolysant les saccharides, type cellulase, Séparation des phases soluble et insoluble par centrifugation,
Inactivation enzymatique par traitement thermique à 80°C pendant lh,
Filtration sur filtre membranaire en vue de sélectionner les molécules de poids moléculaire inférieur à 2000Da,
Purification des carbohydrates neutres par absorptions successives des composés cationiques et anioniques sur des résines ioniques,
Filtration stérilisante sur filtre 0.22pm.
Le principe actif obtenu est un liquide limpide jaune présentant une matière sèche de 11 g/l, et une teneur en sucres (méthode de Dubois) de 10.6g/l, soit 96% de la matières sèches et une teneur en protéines (méthode de Lowry) de 0.14 g/l, soit 1%. Le principe actif contient 96% d'oligosaccharides de DP compris entre2 et 7. 1.3. Exemple 3 : Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une émulsion silicone A. Eau qsp 100%
Conservateur 0,7%
Glycérine 3%
Propylène Glycol 3,2% B. DC 200 (Dow Corning) 30% INCROQUAT BEHENYL TMS (Croda) 5% DC9040 (Dow Corning) 3% KF-6028 (DKSH) 3,6% KF-6017 (DKSH) 5,2%
Microcare silicone C1024 (Thor) 3% C. Principe actif de l'exemple 1 2% EUSOLEX T 0,8%
Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids.
Cette émulsion blanche, souple brillante et légèrement odorante, présente un pH de 5,7.
Elle présente une préhension liquide et une application riche et douce avec un fini doux.
Elle peut être obtenue par la mise en œuvre des étapes suivantes : Mélanger A et chauffer au bain-marie à 50°C en veillant à bien disperser les différents constituants, Mélanger B,
Chauffer A et B séparément sous agitation au bain marie à 80°C, Emulsionner A dans B sous rotor sator à 2500 tr/min, A 40°C, ajouter C,
Laisser homogénéiser à 1500 tr/min jusqu'à complet refroidissement. 1.4. Exemple 4 : Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une crème de nuit hydratante A. Eau qsp 100%
Conservateur 0,7%
Carbopol Ultrez 20 (Novéon) 1% B. DU B MCT 5545 (Stéarinerie Dubois) 5% DUBCG70E (Stéarinerie Dubois) 2% DUBaprilose (Stéarinerie Dubois) 2,1% DUBZenoat (Stéarinerie Dubois) 6% DUB BA (Stéarinerie Dubois) 2,3% DUBVinyl (Stéarinerie Dubois) 1,7% C. Principe actif de l'exemple 1 2% D. NaOH Qsp pH 5,5
Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids.
Ce gel émulsionné blanc épais et ferme et sans odeur présente un pH de 5,5.
Il présente une préhension aisée, une application glissante, un effet hydratant immédiat, une pénétration rapide et un fini sec et mate pour un aspect unifié.
Il peut être obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes : - Mélanger A et chauffer au bain-marie à 50°C sous agitation magnétique, en veillant à bien disperser le gel, - Mélanger B, - Chauffer A et B séparément sous agitation au bain marie à 80°C, sous agitation magnétique, - Emulsionner A et B sous rotor sator à 2000 tr/min, - A 30°C, ajouter C, sous rotor sator à 1500 tr/min, et laisser sous agitation jusqu'à complète homogénéisation, - Sous la pâle mécanique ajuster le pH avec D ; laisser sous agitation 20 à 30 minutes.
II. EVALUATION DE L'EFFICACITE COSMETIQUE SELON L'INVENTION II. A. Tests in vitro
A.l - Effet sur la synthèse de la periostine a- Modèle 2D L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité d'un principe actif cosmétique issu d’Helichrysum stoechas à favoriser la synthèse de la periostine, protéine matricielle, ayant un rôle clé dans la réticulation du collagène, et dont la synthèse est diminuée lors du vieillissement. L'action du principe actif de l'exemple 1 a été étudiée sur culture de fibroblastes normaux issus de donneurs jeunes (<30 ans) et âgés (>60ans).
Cette étude a été réalisée par Western blot.
Le protocole opératoire est décrit en suivant : A JO : les fibroblastes humains sont ensemencés et incubés à 37°C A J4 : les fibroblastes sont traités o Le milieu de culture est éliminé.
o Les cellules sont traitées avec le principe actif à 0,10% ou 0,25%, puis incubées à 37°C A J7 : les surnageants cellulaires sont récupérés, concentrés, puis stockés à -80°C en attente du dosage par Western blot.
Une électrophorèse est réalisée sur gel précoulé. Les protéines sont ensuite transférées sur membrane. L'immunomarquage est réalisé avec les caractéristiques suivantes : * Anticorps primaire : anticorps polyclonal de lapin anti-periostine. * Anticorps secondaire : anticorps anti-IgG de lapin couplé au HRP. * Système de révélation : substrat peroxydase et solution chromogène.
Les bandes sont visualisées, semi-quantifiées par densitométrie puis analysées à l'aide d'un logiciel.
Les résultats sont donnés dans le tableau 1 :
Tableau 1 : Effet du principe actif selon l’invention sur la synthèse de periostine par des fibroblastes normaux issus de donneurs jeunes ou âgés
Ces résultats montrent que sur fibroblastes humains issus de donneurs âgés, la synthèse de periostine est diminuée de 78% par rapport aux fibroblastes humains issus de donneurs jeunes.
Testé à 0,25% sur fibroblastes humains issus de donneurs âgés, le principe actif de l'exemple 1 favorise la synthèse de periostine de 122%.
b- Modèle 3D L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité d'un principe actif cosmétique issu d'Helichrysum stoechas à favoriser la synthèse de periostine sur un modèle ex vivo.
Cet essai consiste à étudier par immunohistochimie la synthèse de la periostine sur expiants de peaux issus de donneurs jeunes (<30 ans) et âgés (>50 ans).
Le protocole opératoire est décrit en suivant : à JO : des punchs de 8 mm de diamètre sont réalisés à partie de plasties humaines et maintenus en survie dans du milieu de culture - A Jl, J2, J3, J4, J5 : ces expiants sont traités en topique avec le principe actif de l'exemple 1 formulé à 0,5% et 1% (V/V) ou avec le placebo. - A J6 : les expiants sont récupérés 24h après le dernier traitement et sont fixés, déshydratés et inclus en paraffine. Des coupes (4 pm) sont ensuite réalisées à l'aide d'un microtome.
Le marquage immunohistochimique de la periostine est réalisé dans les conditions suivantes : - Déparaffinage en xylène - Démasquage - Saturation - Anticorps primaire : anticorps polyclonal de lapin anti-periostine - Anticorps secondaire : anticorps anti-IgG de lapin couplé Alexa Fluor 568
La visualisation est réalisée sur microscope couplé à un système d'analyse d'images.
La synthèse de periostine est proportionnelle à l'intensité moyenne de fluorescence verte (intensité de fluorescence totale / surface du derme).
Les noyaux des cellules apparaissent colorés en bleu.
Les résultats sont présentés dans le tableau 2
Tableau 2 : Effet du principe actif selon l’invention sur la synthèse de periostine sur expiants de peaux jeunes et âgées
Ces résultats montrent que sur expiants de peaux âgés, la synthèse de periostine est significativement diminuée de 29% par rapport à des expiants de peaux jeunes.
Testé à 1% sur expiants de peaux âgés le principe actif selon l'invention permet de restaurer la synthèse de la periostine. A.2 - Effet sur la synthèse et l'organisation du réseau matriciel L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité d'un principe actif cosmétique issu d’Helichrysum stoechas à favoriser la production d'un réseau matriciel fonctionnel par des fibroblastes issus de donneurs âgés.
Afin de visualiser le réseau matriciel, différentes techniques de microscopie sur des fibroblastes normaux issus de donneurs jeunes (<30 ans) et âgés (>60ans) ont été utilisées : - la microscopie photonique, nous a permis de quantifier la synthèse et la formation du réseau de collagène I, protéine majeure de la matrice, - la microscopie électronique à transmission, nous a permis de visualiser l'organisation du réseau matriciel.
Le protocole opératoire est le suivant :
- A JO : les fibroblastes humains sont ensemencés et incubés à 37°C A Jl, J2, J3 et J4 : les fibroblastes humains issus de donneurs jeunes et âgés sont traités en présence ou absence du principe actif de l'exemple 1 à 0,25% (V/V) ou de TGF3 à 10 ng/mL (témoin positif). - A J7 : Etudes microscopiques
• Microscopie photonique : étude de la synthèse et de la formation du réseau de collagène I
* Rinçage des lames dans un tampon PBS * Fixation dans une solution de méthanol * Perméabilisation dans une solution de triton
* Rinçage dans un tampon PBS
* Anticorps primaire : anticorps monoclonal de souris anti-collagène I * Anticorps secondaire : anticorps anti-IgG de souris couplé alexa fluor-488 La visualisation est réalisée sur microscope couplé à un système d'analyse d'images . L'intensité du marquage du collagène I est proportionnelle à l'intensité de fluorescence verte présente. Plus la couleur verte est importante, plus le réseau matriciel est élevé. • Microscopie électronique à transmission: Visualisation de l'organisation des fibres de la matrice * Rinçage des échantillons dans un tampon Cacodylate * Fixation dans un mélange de Glutaraldehyde-Paraformaldehyde * Les échantillons subissent une post-fixation avec du Tétroxyde d'osmium * Déshydratation éthylique * Inclusion en résine Epoxy
Des coupes sont ensuite réalisées à l'aide d'un ultra-microtome.
Les observations sont réalisées sur un microscope électronique.
Les résultats sont donnés sur le tableau 3.
Tableau 3 : Effet du principe actif de l'exemple 1 sur la synthèse de réseau de collagène I par des fibroblastes normaux issus de donneurs jeunes ou âgés.
On constate qu'avec l'âge, la synthèse et l'organisation du réseau matriciel sont altérées. Testé à 0,25% sur fibroblastes issus de donneurs âgés, le principe actif selon l'invention restaure la production du réseau de collagène I de 361% et améliore l'organisation des fibres de la matrice. II. B. Tests in vivo L'effet du principe actif selon l'invention formulé à 2% en émulsion et en comparaison à un placebo a été évalué après 42 jours d'applications, en étudiant les caractéristiques cutanées suivantes : L'organisation des fibres de la matrice dermique (Microscopie confocale)
La densité du derme (Echographie haute fréquence)
Les propriétés biomécaniques (Cutomètre'1’)
Les contours du visage (Photographies numériques)
Le relief cutané au niveau de la patte d'oie (Projection de franges et photographies numériques)
Pour la réalisation de ces tests in vivo, le principe actif selon l'invention a été formulé selon la composition suivante :
Isononyl isononoate (Lanol 99, Seppic) 5,0 %
Principe actif de l'exemple 1 3,0 %
Behenyl alcohol / arachidyl glucoside / arachidyl alcohol (Montanov 202, 3,0%
Seppic)
Cetearyl alcohol / cetearyl glucoside (Montanov 68, Seppic) 2,0 %
Conservateurs 0,7 %
Polyacrylamide / C13-14 isoparaffin / Laureth-7 (Sepigel 305, Seppic) 0,3 %
Eau qsp 100%
Les volontaires participant à l'étude sont âgés de 41 à 71 ans et présentent un stade d'organisation des fibres de la matrice dermique correspondant à un morphotype de peau âgée.
Le protocole opératoire est le suivant :
Entre J-14et J0, • Applications biquotidiennes sur l'ensemble du visage d'une crème placebo - A J0, • les volontaires viennent au laboratoire sans avoir appliqué de produit sur le visage le matin (ni crème, ni maquillage). • détermination de deux zones cutanées symétriques au niveau du visage. • réalisation de mesures - Entre J0 et Ji-1, • Applications biquotidiennes des produits, - A Ji, • Les volontaires viennent au laboratoire sans avoir appliqué de produit sur le visage • Détermination de deux zones symétriques au niveau du visage. • Réalisation de mesures B.l - Effet sur l'organisation des fibres de la matrice dermique L'objectif de l'étude est d'évaluer, in vivo, la capacité d'un principe actif selon l'invention formulé à 2% en émulsion, à améliorer l'organisation des fibres de la matrice dermique.
Des acquisitions du réseau des fibres ont été réalisées par microscopie confocale avant et après 42 jours de traitement biquotidien.
Ces acquisitions ont été réalisées à l'aide d'un Vivascope 1500 trilaser. Les images ont été retenues pour l'analyse visuelle réalisée à l'aide d'une échelle de score comprenant 4 stades par un jury entraîné, composé de 3 experts.
Lors de son évaluation, le jury prend en compte à la fois l'aspect de la matrice dermique et celui des fibres : lorsque la matrice dermique n'est pas altérée comme dans le cas d'une peau jeune ou sur des zones protégées, le collagène apparaît sous forme de structures fibrillaires brillantes et allongées disposées à la façon d'une toile d'araignée (Pellacani G, Longo C, Expression cosmétique, sept / oct 2011). L'observation d'une peau âgée ou de zones photoexposées montrent, à l'inverse, un collagène composé de fibres épaisses, grossièrement disposées, recroquevillées et fragmentées, présentant un aspect spongieux.
Les stades utilisés pour l'évaluation sont présentés dans le tableau 4 ci-après :
Tableau 4 : stades pour l'évaluation de la matrice dermique par jury d'experts :é ration derme ▼
Dans les conditions de cette étude, après 42 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, l'évaluation réalisée sur échelle de score par un jury d'experts a montré une amélioration de l'aspect de la matrice dermique de 28,0% avec le principe actif de l'exemple 1 formulé à 2%.
Le principe actif selon l'invention permet ainsi : - à 77% des volontaires d'améliorer l'organisation de la matrice dermique, - à 59% des volontaires de passer d'un morphotype peau âgée (stade 1 ou 2) à un morphotype se rapprochant de celui d'une peau jeune (stade 3 à 4). B.2 - Effet sur la densité du derme L'objectif de l'étude est d'évaluer, in vivo, la capacité d'un principe actif selon l'invention formulé à 2% en émulsion, à améliorer la densité de la matrice dermique. Cette étude a été réalisée contre placebo, au niveau des joues, par échographie haute fréquence.
Des acquisitions de la peau par échographie haute fréquence (40MHz) ont été réalisées avant et après 42 jours de traitement biquotidien.
Les acquisitions ont été réalisées au niveau du bas du visage (figure 10) à l'aide d'un échographe haute fréquence équipé d'une sonde multifréquence. La fréquence choisie est 40 Mhz. Les zones de mesure sont repérées à l'aide d'une feuille transparente permettant de noter les repères éventuels présents à la surface de la peau du sujet (grains de beauté, veines, cicatrices...). Ainsi, la zone d'étude peut être plus facilement localisée aux différents temps de mesure en superposant les marques de la feuille transparente avec les repères cutanés.
Un résumé des résultats correspondant à la densité du derme et à l'épaisseur de la SLEB étudié par échographie haute fréquence est présenté dans le tableau 5 :
Tableau 5 : Effet d'un principe actif selon l'invention formulé à 2% en émulsion sur la densité du derme après 42 jours d'utilisation.
On constate que dans les conditions de cette étude, après 42 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, le principe actif selon l'invention améliore la densité du derme de 9,3%.
De plus, le principe actif selon l'invention permet une diminution de l'épaisseur de la SLEB de 8,2% . Cet effet a été observé chez 77% des volontaires. B.3 - Effet sur les propriétés biomécaniques de la peau L'objectif de cette étude a été d'évaluer, in vivo, l'effet du principe actif de l'exemple 1 formulé à 2% en émulsion sur les propriétés biomécaniques de la peau en comparaison à un placebo. L'évaluation des propriétés biomécaniques de la peau a été réalisée à l'aide d'un Cutomètre® avant et après 42 jours d'applications biquotidiennes. L'étude des propriétés biomécaniques de la peau est réalisée à l'aide d'un Cutomètre® au niveau des joues. La peau est aspirée dans l'orifice d'une sonde de diamètre 6 mm par une dépression constante pendant une durée constante. Plusieurs aspirations successives sont effectuées. La profondeur de pénétration de la peau dans la sonde est mesurée par le biais de deux prismes optiques placés à l'ouverture de la sonde (pas de friction, pas d'effet mécanique). A partir des courbes obtenues il est possible de calculer divers paramètres caractéristiques des propriétés biomécaniques de la peau.
Un résumé des résultats correspondant à l'effet du principe actif de l'exemple 1 formulé à 2% sur les propriétés biomécaniques de la peau mesuré à l'aide d'un Cutomètre® est présenté dans le tableau 7.
Parmi les paramètres calculés à partir des courbes obtenues, les paramètres retenus pour quantifier l'évolution des propriétés biomécaniques sous l'effet du principe actif au niveau des joues sont les suivants :
La fermeté de la peau est appréciée par le paramètre suivant : • Paramètre RO : RO = Uf
Si -RO augmente, la fermeté de la peau est plus importante.
La tonicité de la peau est appréciée par le paramètre suivant : • Paramètre X : tonicité ou rétractation élastique X = (Uf-Ur) = RO (1-R7)
Si -X augmente, la tonicité augmente. NB : RO et R7 sont des paramètres calculés par le logiciel du Cutomètre®.
Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 6 :
Tableau 6 : Effet du principe actif selon l'invention formulé à 2% en émulsion sur les propriétés biomécaniques de la peau au niveau des joues après 42 jours d'utilisation.
Dans les conditions de cette étude, après 42 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, le principe actif selon l'invention formulé à 2% : améliore la fermeté de la peau de 11,3% augmente la tonicité de la peau de 13,7% B.5 -Effet sur les contours du visage L'objectif de l'étude est d'évaluer in vivo l'effet d'un principe actif selon l'invention, formulé à 2% en émulsion, sur l'amélioration des contours du visage par scorage visuel sur photographies numériques et en comparaison à un placebo.
Des photographies de profil ont été réalisées dans des conditions standardisées avant et après 42 jours d'applications biquotidiennes du principe actif et du placebo. A partir de ces photographies, une évaluation du niveau du relâchement du bas du visage de chaque volontaire a été réalisée par un panel d'experts.
Les photographies du visage ont été réalisées alors que le volontaire était installé sur un banc de repositionnement permettant de limiter ses mouvements et de maîtriser sa position aux différents temps de l'étude. Les photographies ont été réalisées dans des conditions d'éclairage reproductibles et adaptées pour la mise en évidence des contours du bas du visage.
Dans les conditions de cette étude, après 42 jours d'applications biquotidiennes, le principe actif selon l'invention formulé à 2% en émulsion améliore les contours du visage en réduisant de 9,7%, le relâchement global de cette zone après une évaluation visuelle réalisée en aveugle sur photographies.
Ainsi, le jury d'experts a noté une amélioration du relâchement du bas du visage dans 77% des cas sur le côté traité par le principe actif contre seulement 32% avec le placebo.
En améliorant le niveau de relâchement global du bas du visage, le principe actif selon l'invention permet de limiter les effets délétères de la dégradation de la structure de la matrice extracellulaire sur les contours du visage. B.6 - Effet sur le relief cutané L'objectif de cette étude a été d'évaluer, in vivo, l'effet anti-rides d'un principe actif selon l'invention formulé à 2% en émulsion en comparaison à un placebo.
Des acquisitions en 3D par projection de franges de la patte d'oie ont été réalisées avant et après 42 jours d'applications biquotidiennes.
De plus, des photographies de profil ont été réalisées dans des conditions standardisées avant et après 42 jours d'applications biquotidiennes du principe actif et du placebo. A partir de ces photographies, une évaluation des photos portant sur une visualisation d'un effet anti-rides de chaque volontaire a été réalisée par un panel d'évaluateurs non entraînés.
Un résumé des résultats correspondant à l'effet du principe actif selon l'invention formulé à 2% sur le relief cutané de la patte d'oie en comparaison à un placebo et mesuré par projection de franges est présenté dans le tableau 7.
Tableau 7 : Effet du principe actif selon l'invention* formulé à 2% en émulsion sur le relief cutané de la
patte d'oie après 42 jours d'utilisation.
Un résumé des résultats correspondant à l'effet du principe actif selon l'invention formulé à 2% sur l'effet anti-rides en comparaison à un placebo et évalué visuellement par un panel d'évaluateurs non entraîné est présenté dans le tableau 8.
Tableau 8 : Effet d'un principe actif selon l'invention formulé à 2% en émulsion sur l'effet anti-rides évalué visuellement par un panel d'évaluateurs naïfs après 42 jours d'utilisation.
On constate que dans les conditions de cette étude, après 42 jours d'applications biquotidiennes, le principe actif selon l'invention formulé à 2% permet une amélioration significative et visible du relief cutané. L'étude menée par projection de franges a permis de mettre en évidence une amélioration du relief cutané au niveau des pattes d'oie. En diminuant : - le paramètre Sa de 8,0% - le paramètre Sq de 8,1% - le volume négatif de 28,7%.
De plus, un effet anti-rides visible a pu être montré suite à une évaluation visuelle sur photographies numériques par un panel de personnes non entraînées. Ainsi, lors de cette évaluation le panel de personnes a observé une amélioration des rides avec le principe actif selon l'invention dans 57% des cas contre seulement 8% avec le placebo.
Claims (16)
- REVENDICATIONS1. Utilisation sur la peau en application topique au sein d'une composition cosmétique d'un principe actif cosmétique obtenu à partir d’Hëlichrysum stoechas pour lutter contre le vieillissement cutané.
- 2. Utilisation selon la revendication 1, pour augmenter la fermeté et la tonicité de la peau et/ou pour diminuer le relâchement de la peau du visage et/ou pour réduire les rides.
- 3. Principe actif cosmétique obtenu à partir d'Helichrysum stoechas en milieu aqueux.
- 4. Principe actif cosmétique selon la revendication 3, obtenu à partir d'Helichrysum stoechas comprenant au moins 20% en poids de sucres par rapport au poids total de matières sèches du principe actif.
- 5. Principe actif cosmétique selon la revendication 3 ou 4, caractérisé en ce qu'il comprend des oligosaccharides de degré de polymérisation compris entre 2 et 7.
- 6. Principe actif cosmétique selon la revendication 5, caractérisé en ce que les oligosaccharides de degré de polymérisation compris entre 2 et 7 sont constitués majoritairement par les sucres simples suivants : glucose, fructose et acide galacturonique.
- 7. Principe actif cosmétique selon la revendication 6 , caractérisé en ce que les Oligosaccharides de degré de polymérisation compris entre 2 et 7 sont constitués également par un ou plusieurs des sucres simples suivants : arabinose, galactose, saccharose, xylose et rhamnose.
- 8. Principe actif cosmétique selon l'une des revendications 3 à 7, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un hydrolysat d'Helichrysum stoechas.
- 9. Principe actif cosmétique selon l'une des revendications 3 à 8, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un hydrolysat enzymatique d'Helichrysum stoechas. 1Q. Principe actif cosmétique selon l'une des revendications 3 à 9, caractérisé en ce qu'il est obtenu à partir des parties aériennes fleuries d'Helichrysum stoechas.
- 11. Principe actif cosmétique selon l'une des revendications 3 à 10, pour son utilisation pour stimuler la régénération tissulaire de la peau.
- 12. Principe actif cosmétique selon l'une des revendications 3 à 10, pour son utilisation pour augmenter la densité de la matrice dermique et/ou pour reconstruire les fibres de collagène de la peau et/ou pour augmenter la synthèse de la periostine par les cellules cutanées.
- 13. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 2, caractérisée en ce que le principe actif cosmétique est un principe actif selon l'une des revendications 3 à 10.
- 14. Composition cosmétique, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins 0,5% en poids de matières sèches d'un principe actif cosmétique selon l'une des revendications 3 à 10.
- 15. Composition cosmétique selon la revendication 14, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme d'émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels aqueux ou poudres.
- 16. Procédé cosmétique de soin de la peau pour lutter contre le vieillissement cutané, caractérisé en ce qu'il consiste à appliquer au moins une fois par jour sur la peau du visage une composition selon l'une des revendications 14 ou 15.
- 17. Procédé cosmétique de soin de la peau selon la revendication 16, pour augmenter la fermeté et la tonicité de la peau et/ou pour diminuer le relâchement de la peau du visage et/ou pour réduire les rides.
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|---|---|---|---|
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