WO2008035583A1

WO2008035583A1 - Agent hydratant, agent d'activation cellulaire, agent anti-oxydant, agent renforçant l'activité de la protéase, agent anti-vieillissement, agent blanchissant la peau, agent anti-inflammatoire et agent neutre inhibant l'accumulation de graisse

Info

Publication number: WO2008035583A1
Application number: PCT/JP2007/067595
Authority: WO
Inventors: Masaki Arashima; Rika Negishi; Yoko Asano; Hiroko Yoshida
Original assignee: Noevir Co., Ltd.
Priority date: 2006-09-20
Filing date: 2007-09-10
Publication date: 2008-03-27
Also published as: JP5312733B2; JP2008074743A

Description

明細書

保湿剤、細胞賦活剤、抗酸化剤、プロテアーゼ活性促進剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、および中性脂肪蓄積抑制剤

技術分野

[0001] 本発明は、保湿剤、細胞賦活剤、抗酸化剤、プロテアーゼ活性促進剤、抗老化剤

、美白剤、抗炎症剤、および中性脂肪蓄積抑制剤に関する。

背景技術

[0002] 皮膚の老化は、大別して、自然老化、光老化により惹き起こされると考えられている、老化皮膚の外観変化としては、例えば、シヮ、色素沈着'色調変化、皮膚の弾性低下、皮膚表面形態の乱れなどが挙げられる。これら老化症状の要因としては、例えばシヮゃタルミは、加齢等による真皮線維芽細胞の機能低下や、それに伴うコラーゲンゃエラスチン等の真皮マトリックスの減少や変性、さらには紫外線等の外来ストレスによる酸化障害などが重要な要因となっている。また、皮膚の色黒は一部不明な点もあるがホルモンの異常や日光の紫外線の刺激によるメラニン色素の産生が原因であり、その中でも、シミゃソバカスはメラニン色素が異常沈着すること力その要因であると考えられている。

[0003] このような悩みを解決するために、様々な方法が従来から検討されている。例えば、細胞賦活剤としては、ボンカンのエッセンス（特開 2001— 131045号公報）、抗酸化剤としては、キク科へテロテカ属植物抽出物（特開平 11— 180886号公報）、さらにメラニン産生抑制剤としては、ショウガ属植物の抽出物（特開 2000— 159626号公報）が知られている。

[0004] また、近年、過剰な食物の摂取、運動不足、ストレスなどが原因で生じる肥満や高脂血症を始めとする様々な疾患は、社会的に大きな問題となっており、このような肥満ゃ疾患を予防 '改善するために様々な方法が従来から検討されている。例えば、食事制限や運動、食物繊維の摂取、脂肪分解促進剤などが利用されている。しかし、これらは主に既に体内に蓄積された脂肪を減少させる方法であり、根本的な改善としては不十分であると考えられた。肥満や疾患の根本的な改善を目的として、体内での脂肪の蓄積を抑制するための方法も提案されるようになってきた。

[0005] このような生体内における脂肪の蓄積を抑制する脂肪蓄積抑制作用を有するものとして、哺乳動物の乳由来のリン脂質（特開 2001— 275614号公報）、褐藻の酵素分解物（特開平 7— 278005号公報）がこれまでに報告されている。

発明の開示

[0006] このように、これまでに様々な天然由来成分が応用されている。し力、し、天然由来成分の中には、未だその効果が知られていないものも数多く存在し、優れた保湿作用、細胞賦活作用、抗酸化作用、美白作用などを有する有効成分の開発が期待されていた。

本発明は、皮膚外用剤や経口用剤に幅広く応用が可能な保湿剤、細胞賦活剤、抗酸化剤、プロテアーゼ活性促進剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、および中性脂肪蓄積抑制剤を提供することを目的とする。

[0007] 本発明者らは、天然由来の種々の成分について検討を行った結果、従来その効果が知られて!/、な力、つたスギ科ァケボノスギ属植物に優れた保湿作用、細胞賦活作用、抗酸化作用、プロテアーゼ活性促進作用、抗老化作用、美白作用、抗炎症作用、および中性脂肪蓄積抑制作用が存在することを見出し、さらに検討を重ねて本発明を完成させるに至った。

すなわち、本発明の第一の側面によれば、スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を有効成分とする保湿剤、細胞賦活剤、抗酸化剤、プロテアーゼ活性促進剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、および中性脂肪蓄積抑制剤が提供される。

本発明の第二の側面によれば、スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を含む組成物が提供される。

発明を実施するための最良の形態

[0008] 本発明に用いられる植物は、スギ科ァケボノスギ属に属する落葉性高木であり、長江中流域に自生する。力、かるスギ科ァケボノズギ属の植物としては、メタセコイア（Me taseauoia glyptostroboides)、別名ァケボノスギが挙げられる。

スギ科ァケボノスギ属植物の用途としては、これまでに報告されて!/、るものとしては、消臭剤（特開昭 64— 16713号公報）、ロイシン脱水素酵素剤（特開 2002— 8797 3号公報）、脂肪分解促進剤（特表 2004— 504267号公報）が挙げられる。しかし、その他の用途につ!/、ては現在のところほとんど認められて!/ヽなレ、。

[0009] このスギ科ァケボノスギ属植物を使用する際は、その使用部位には特に制限はなく、全体または花、葉、茎、枝、根、種子、樹皮、樹液、果皮、果実、芽などの任意の部位を使用することができる。複数の部位を組み合わせて使用してもよい。利用性、有効性の点からは枝、茎、葉を用いるのがより好ましい。

それらはそのまま粉砕して、その原体や乾燥物を使用することもできる力それらの部位からの抽出物を用いることが好ましい。

[0010] 抽出には、スギ科ァケボノスギ属植物のいずれの部位を用いても構わないが、簡便に利用するには、葉や樹皮などを用いるとよい。その際、複数の部位を用いて抽出物を得るようにしてもよい。また、異なる溶媒を用いて抽出された抽出物を 2種以上混合して用いてもよい。

抽出の際は、植物を生のまま用いてもよいが、抽出効率を考えると、細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。

[0011] 抽出方法としては、室温、冷却または加温した状態で、任意の抽出溶媒に所定時間浸漬させて抽出する方法、水蒸気蒸留等の蒸留法を用いて抽出する方法、生の植物から圧搾して抽出物を得る圧搾法等が例示できる。これらの任意の方法を単独で、または 2種以上を組み合わせて、抽出を行うこと力 Sできる。あるいは、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効率を上げるため、撹拌したり抽出溶媒中でホモジナイズしたりしてもよい。オートクレーブなどを用いて、カロ圧下で抽出することも可能である。

[0012] 抽出温度としては、 5°C程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は、抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、 1時間〜 14日間程度とするのが適切である。

抽出の際の植物と溶媒との比率は特に限定されるものではないが、植物 1に対し、溶媒 0. 5〜； 1000質量倍が好ましぐ特に抽出操作、効率の点で 0. 5〜； 100質量倍が好ましい。

[0013] 抽出溶媒としては、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール； 1 , 3—ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール；ェチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸ブチル、酢酸ェチル等のエステル類；アセトン、ェチルメチノレケトン等のケトン類などの溶媒を用いることができる。これらは、単独で用いられるほ力、、任意の 2種以上を組み合わせて用いてもよい。生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニアなどの 1種または 2種以上の超臨界液体や亜臨界液体を用いてもよい。

[0014] スギ科ァケボノスギ属植物の上記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができる力 S、一定期間放置して熟成させて用いてもよいし、濃縮、乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解して使用することもできる。あるいは、これらの生理作用を損なわない範囲で、脱色、脱臭、脱塩等の精製処理や、カラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。ォォハマボウの上記抽出物やその処理物および分画物は、各処理および分画後に凍結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることもできる。また、リボソーム等のべシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。

[0015] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物は、優れた保湿作用、細胞賦活作用、抗酸化作用、プロテアーゼ活性促進作用、抗老化作用、美白作用、抗炎症作用、中性脂肪蓄積抑制作用を有し、保湿剤、細胞賦活剤、抗酸化剤、プロテアーゼ活性促進剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、中性脂肪蓄積抑制剤、痩身剤として利用すること力 Sでさる。

これらの各剤は、スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を有効成分として含む限り、その形態およびその他の成分の配合の有無等については、何ら制限されない。形態については、液状、ペースト状、ゲル状、固体状、粉末状等の任意の形態を、その用途等に応じて選択でき、その形態とするために必要なビヒクル (賦形剤）、溶剤、その他の一般的な添加剤（酸化防止剤、着色剤、分散剤等）を任意に含むことができる。

[0016] 各剤中の有効成分である、スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物の量は、剤の種類や使用目的等によって調整することができるが、効果や安定性などの点から、全量に対して、固形分換算で 0. 00001〜； 100質量％が好ましぐより好ましくは 0. 0 0；!〜 50質量％である。

[0017] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を有効成分とする保湿剤は、皮膚や毛髪に対して優れた保湿作用を発揮し、特に皮膚に対する保湿効果が高い。

[0018] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を有効成分とする抗老化剤は、種々の細胞に対して優れた細胞賦活作用を発揮するが、特に真皮繊維芽細胞に対して優れた効果を発揮し、真皮繊維芽細胞賦活剤として有用である。

[0019] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を有効成分とする抗老化剤は、優れた抗酸化作用を発揮し、抗酸化剤として有用である。

[0020] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を有効成分とするプロテアーゼ活性促進剤は、優れたプロテアーゼ活性作用を発揮し、プロテアーゼ活性促進剤として有用である。表皮ターンオーバーを正常化することにより、表皮バリア機能改善、水分保持能の向上、抗老化などの効果が期待できる。また、プロテアーゼの活性化により落屑を促し、不全角化の角質層を積極的に取り除くことにより、皮膚の新陳代謝が促進され、ケミカルピーリング的効果も期待できる。

[0021] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を有効成分とする美白剤は、優れた美白作用を発揮するが、特にメラニン産生促進作用に対して優れた効果を発揮し、美白剤として有用である。

[0022] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を有効成分とする抗炎症剤は、優れた抗炎症作用を発揮し、抗炎症剤として有用である。

[0023] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を有効成分とする中性脂肪蓄積抑制剤は、優れた中性脂肪蓄積抑制作用を発揮し、中性脂肪蓄積抑制剤、痩身剤として有用である。中性脂肪の過剰な蓄積が原因として起こる疾患としては、高脂血症、動脈硬化、脂肪肝などが知られており、スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物を有効成分とする中性脂肪蓄積抑制剤は、肥満の予防'改善だけでなぐこのような疾患の予防 •改善にも効果を期待することができる。

[0024] これらの各剤は、皮膚に外用するだけではなぐ毛髪等への利用や経口摂取も可能であり、外用組成物、経口用組成物などの各種組成物に応用することが可能であここで、外用組成物とは、化粧料、皮膚外用剤、医薬部外品、外用医薬品等のいずれかのカテゴリ一に限定されることはなく、皮膚または毛髪に外用される全ての組成物を意味している。経口用組成物についても、医薬品、食品、飲料等の種類を問わず、経口により摂取される全ての組成物を意味するものである。

[0025] 外用組成物の剤型は任意であり、例えば、ローションなどの可溶化系やカラミン口ーシヨン等の分散系、クリームや乳液などの乳化系として提供することができる。さらに、噴射剤と共に充填するエアゾール形態、軟膏剤、パップ剤などの種々の剤型で提供することあでさる。

具体的には、乳液、クリーム、ローション、化粧水、パック、美容液、洗浄料、リップスティック、メーキャップ化粧料、ファンデーション等の各種化粧料;液剤、軟膏、粉末、顆粒、エアゾール剤、貼布剤、パップ剤、等の様々な形態の医薬部外品や外用医薬品などが例示できる。

[0026] 経口用組成物の形態も任意であり、液剤、シロップ剤、エキス等の液状の形態、または、顆粒剤、錠剤、散剤、カプセル剤、飴剤等の固形剤、あるいはゼリー、グミ、ガムなどの様々な形態に加工し使用することができ、特に限定されることはない。

具体的には、飲料を含む一般食品、健康食品（サプリメント）、機能性食品、栄養補助食品、経口医薬品、医薬部外品などが例示できる。

[0027] スギ科ァケボノスギ属植物を、たとえば化粧品、外用医薬品、医薬部外品等を含む皮膚外用剤に配合することにより、シヮ、タルミ、肌のハリゃ皮膚の弾力低下、シミ、くすみ、乾燥、小じわといった種々の皮膚症状の防止 ·改善に優れた効果を発揮する外用組成物を得ることができ、保湿用皮膚外用剤あるいは美白用皮膚外用剤として用いること力 Sできる。特に、スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を含む老化防止改善用皮膚外用剤として使用することが好ましい。

[0028] あるいは、スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を配合することにより、腹部、太腿、顔などの部分的な肥満防止 ·改善に優れた効果を発揮する皮膚外用剤を得ること力 Sでき、痩身用皮膚外用剤としても用いることができる。ささらに、スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物は、美白等の美容、健康維持、または栄養補給を目的とするような飲食品や健康食品（サプリメント）、医薬部外品、機能性食品等にも用いることができる。

[0029] 外用組成物または経口用組成物等の組成物には、スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物の他に、その用途および必要に応じて、通常皮膚化粧料、毛髪用化粧料、医薬部外品、医薬品等の製剤に使用される任意の成分が含まれる。そのような成分としては、水、油剤（油性成分）、アルコール類、賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、矯味剤、色素、着色剤、乳化剤、可溶化剤、分散剤、ゲル化剤、可塑剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、増粘剤、 pH調整剤、緩衝剤、界面活性剤、滑沢剤、キレート剤、薬剤 (薬効成分)、香料、樹脂、コーティング剤、防菌防黴剤、防腐剤、保存剤、酸化防止剤、 pH調整剤等が挙げられる。また、本発明の効果を損なわない範囲において、他の保湿剤、細胞賦活剤、抗酸化剤、プロテアーゼ活性促進剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、中性脂肪蓄積抑制剤、あるいはスギ科ァケボノスギ属植物以外の植物またはその抽出物との併用も可能である。

[0030] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を含む飲食品の場合も、食品に用いられる各種成分との組合せにおいては、特に限定されるものはない。

すなわち、食品の剤型は任意であって、粉末剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤などの種々の剤型で提供することができ、必要に応じて、医薬品'医薬部外品'食品などに配合される油性成分、保湿剤、粉体、乳化剤、可溶化剤、増粘剤、薬剤、香料、防菌防黴剤、アルコール類、砂糖、練乳、小麦粉、食塩、ブドウ糖、鶏卵、バター、マーガリン、水飴、カルシウム、鉄分、調味料、香辛料、ビタミン Aおよびそれらの誘導体、力ロテノイド類、リボフラビンおよびその誘導体、ビタミン B類およびそれらの塩もしくは誘導体、ァスコルビン酸およびその誘導体、コバラミン類、ビタミン Eおよびそれらの誘導体、ビタミン、アデノシンおよびその誘導体、フラボノイド類およびタンニン類を酉己合することもできる。さらに、本発明の効果を損なわない範囲において、他の抗老化剤、美白剤、抗酸化剤、あるいは抗炎症剤との併用も可能である。

[0031] スギ科ァケボノスギ属植物を皮膚外用剤や経口用剤に配合する際の配合量は、皮膚外用剤や経口用剤の種類や使用目的等によって調整することができるが、効果や安定性などの点から、全量に対して、全量に対して、固形分換算で 0. 0000；!〜 50. 0質量⁰ /₀カ好ましく、より好ましくは、 0. 0001-25. 0質量⁰ /₀である。さらには、 0. 0 001〜； 10質量⁰ /₀が好ましぐより好ましくは 0. 000；!〜 5質量⁰ /₀であり、さらに好ましくは 0. 00；!〜 5質量％であり、一層好ましくは 0. 0；!〜 5質量％、特に好ましくは 0. ；!〜 5質量％である。

実施例

[0032] 以下に、スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物の製造例、各作用を評価するための試験、皮膚外用剤や経口用剤の処方例、使用試験についてさらに詳細に説明する力 S、本発明の技術的範囲はこれによってなんら限定されるものではない。

[0033] <抽出物製造例 1〉

ァケボノスギの葉の乾燥粉砕物 100gを、 2. 0kgの 50容量⁰ /₀エタノール水溶液に分散させ、攪拌しながら室温にて 2時間抽出した。抽出上清を濾別したのち、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物 1を得た。

[0034] <抽出物製造例 2〉

ァケボノスギの葉の乾燥粉砕物 100gを、 2. 0kgの精製水に分散させ、オートタレーブを用い 120°Cで 20分間加熱抽出した。抽出上清を濾別したのち、凍結乾燥を行い、抽出物 2を得た。

[0035] <抽出物製造例 3〉

ァケボノスギの枝葉の乾燥粉砕物 100gを、 2. 0kgの 50容量％エタノール水溶液に分散させ、攪拌しながら室温にて 2時間抽出した。抽出上清を濾別したのち、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物 3を得た。

[0036] <抽出物製造例 4〉

ァケボノスギの枝葉の乾燥粉砕物 100gを、 2. 0kgの精製水に分散させ、オートクレーブを用い 120°Cで 20分間加熱抽出した。抽出上清を濾別したのち、凍結乾燥を行い、抽出物 4を得た。

[0037] <ヒト真皮線維芽細胞賦活作用の評価〉

倉敷紡績 (株)製正常ヒト真皮線維芽細胞を、 1ゥエルあたり 2. 0 X 10⁴個となるように 96ウェルマイク口プレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 1質量。/。のゥシ胎児血清（FBS)を添加したものを用いた。 24時間培養後、 1質量°/ 83添加 DMEM培地により表 1に示す各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、さらに 48時間培養した。上清を除いた後、 3— (4, 5—ジメチルー 2—チアゾリル） - 2, 5—ジフエニルテトラゾリゥムブロミド（MTT試薬）を 400 μ g Zml含有する培地に交換し、約 2時間培養した。その後、テトラゾリゥム環の開環により生じるフオルマザンを 2—プロパノールにより抽出し、マイクロプレートリーダーで 55 Onmの吸光度を測定した。同時に、濁度として 650nmにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。

得られた結果を、試料無添加のコントロールにおける細胞賦活作用を 100としたときの相対値により表 1に示す。

表中の *および * *は、 t検定における有意確定 P値に対し、有意確率 5%未満（ P < 0. 05)を *、有意確率 1 %未満（P< 0. 01)を * *で表したものである。以降、表中 *および * *についても同様とする。

[0038] [表 1]

[0039] 表 1から明らかなように、スギ科ァケボノスギ属植物を添加した培地では、有意な真皮繊維芽細胞賦活作用が認められた。このことから、スギ科ァケボノスギ属植物は、優れた細胞賦活作用を有することが明らかとなった。

[0040] < B16マウスメラノーマ細胞メラニン産生抑制作用の評価〉

B16マウスメラノーマ細胞（B16F0細胞）を 1ディッシュあたり 1 · 8 X 10⁴個となるように 90mmディッシュに播種した。播種培地にはダルベッコ改変イーグル培地（DME M)に 5質量％ゥシ胎児血清 (FBS)を添加したものを用いた。 24時間培養後、 5質 i%FBS添加 DMEM培地により表 3に示す各試料濃度に調整したサンプル培養液に交換し、さらに 5日間培養した。培養終了後、トリプシン処理により細胞を剥離し、 1 . 5mlマイクロチューブに移して遠心操作して、細胞沈殿物を得た。得られた沈殿物の色を、下記の判定基準に基づいて、その黒化状況を目視判定した。評価は表 2に示す 5段階評価とし、ネガティブコントロール（判定 5)として試料無添加の 5質量％？ BS添加 DMEM培地、ポジティブコントロール（判定 1 )として抽出物 2の代りに乳酸ナトリウムを 50mM含有する 5質量°/ 83添加 DMEM培地を用いた。

また、メラニン産生量を評価するために、沈殿物に細胞溶解剤 Soluen— 350 (¾ 式会社パーキンエルマ一ジャパン)を加えて煮沸し、室温に戻して分光光度計（(株) 日立ハイテクノロジーズ製分光光度計 U— 3010)により 500nmにおける吸光度を測定した。

得られた結果を表 3に示す。

[表 2]

[0042] [表 3]

[0043] 表 3から明らかなように、スギ科ァケボノスギ属植物は色素細胞内のメラニン産生を著しく抑制することが認められた。このことから、スギ科ァケボノスギ属植物が優れたメラニン産生抑制作用を有することが明らかとなった。

[0044] < DPPHラジカル消去による抗酸化作用の評価〉

50質量％エタノールを用いて、表 4に示す試料濃度となるように試料溶液を調整し、 96ウェルマイク口プレートに 100〃 1ずつ添加した。そこへ、 0. 2mMの 1 , 1ージフェニル 2 ピクリルヒドラジル（DPPH)エタノール溶液を 100 μ 1ずつ添加し、よく混合後、室温、喑所にて 10分間静置した。最後に、 DPPHラジカルに由来する 516η mの吸光度を測定した。試料を添加しなかった場合の吸光度を (A)、試料を添加した場合の吸光度を (B)としたとき、 DPPHラジカルの消去率を次式より求めた。

ラジカル消去率 = { 1— (B) / (A) } X 100

結果を表 4に示す。

[表 4]

[0046] 表 4に示した通り、スギ科ァケボノスギ属植物は、非常に高レ、DPPHラジカル消去作用を発揮し、優れた抗酸化作用を有することが明らかとなった。

[0047] < SOD様活性評価 (スーパーオキサイドァニオン消去能の評価）〉

0. 25mM WST— 1および ImM Hypoxanthineを含む HANK' S ( + )溶液 7 5 a 1に、 HANK' S ( + )溶液により表 5に示す各試料濃度に調製したサンプル溶液 2 5 / 1を添カロした。さらに、キサンチンォキシダーゼ 25〃1 (0. 0075 Units)を添加し、 37°C、 15分間反応させた後、 450nmの吸光度を測定した。サンプル溶液に代えて HANK' S ( + )溶液のみを添加した場合の吸光度を (A)、サンプル溶液を添加した場合の吸光度を (B)としたとき、スーパーオキサイドァニオン消去率は次式に定義される。

消去率（％) = { 1一（B) Z (A) } X 100

得られた結果を表 5に示す。

[0048] [表 5]

[0049] 表 5に示した通り、スギ科ァケボノスギ属植物は、高いスーパーオキサイドァニオン消去作用を発揮し、優れた抗酸化作用を有することが明らかとなった。

[0050] <正常ヒト前駆脂肪細胞を用レ、た中性脂肪蓄積抑制評価〉

皮下脂肪由来正常ヒト前駆脂肪細胞 Cryo HPRAD- SQ (三光純薬株式会社）を、 1ゥエル当り 1 · 0 X 10⁴個となるように、 96ウェルマイク口プレートに播種した。播種培地には、 PGM培地（10質量％FBS、 2mM L-glutamine, 100units/mL Penicilline, lOO ^ g/mL Streptomycine含有）を用いた。細胞がコンフルェントになる直前に、表 6に示す濃度の抽出物 1を添加した PGM—分化用培地（10 ^ g / mL インシュリン、丄 dexamethasone 200 μ M indomethacin^ 500 μ Μ Isobutyl— methylxanthine含有）に交換し、脂肪細胞への分化誘導を行った。分化誘導開始後、コントロール群が成熟して細胞内に多数の脂肪滴が蓄積されるまで、 10日〜 14日間培養した。細胞を回収後、 10%中性緩衝ホルムアルデヒド液を用いて細胞を固定した。 PBS (―)にて洗浄の後、 0· 5w/v% オイルレッド O溶液を添加し、 37°Cで 2時間インキュベートした。 PBS (―)にて洗浄の後、メタノールを添加し、色素を抽出した。

マイクロプレートリーダーにより、得られた試験液の 550nmの吸光度を測定した。同時に、濁度として 650nmの吸光度を測定し、両測定値の差を用いて中性脂肪蓄積抑制作用を評価した。評価は、抽出物を含まないコントロール群における蓄積脂肪量を 100とした時の相対値を求めて行った。

結果を表 6に示す。

[表 6]

[0052] 表 6より明らかなように、スギ科ァケボノスギ属植物を添加した培地では、有意な中性脂肪蓄積抑制作用が認められた。このことより、スギ科ァケボノスギ属植物が優れた中性脂肪蓄積抑制作用を有することが明らかとなった。

[0053] <抗炎症作用 >

終濃度 20ng/mLとなるよう調整した PhospholipaseA2 (PLA2)と、任意の濃度に調整した試料 (抽出物 1)と、終濃度 3. 3mMとなるように調整した DTNB (5, 5— d ithio -bis - (2 -nitrobenzoic acid) )とを混合し、室温で 10分間静置した。さらに基質として 1. 66mMの Diheptanoyl Thio— PCを添加し、室温で 45分間反応させ、 414nmの吸光度を測定した。また、 PLA2溶液に代えてバッファーのみを添加した場合の吸光度を測り、両測定値の差を求めた。コントロールの値を (A)、試料添カロ時の値を（B)としたとき、 PLA2酵素阻害作用は次式によって求められる。

消去率 (%) = { 1一（B) / (A) } X 100

評価結果を表 7に示す。

[表 7]

[0055] 炎症、アレルギー等に関与する生体内物質としてプロスタグランジン、ロイコトリェン等が知られている力これら物質は、活性化されたホスホリパーゼ A2の作用により細胞膜中のリン脂質からァラキドン酸が遊離され、これを出発物質とする生合成により生成するとされている。

表 7からも明らかなように、スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物存在下において、有意な PLA2酵素阻害作用が認められた。このことより、スギ科ァケボノスギ属植物が優れた抗炎症作用を有することが明ら力、となった。

[0056] <プロテアーゼ活性促進作用〉

任意の濃度に調整した試料 (抽出物 1)に 83 g/mLの濃度となるようにトリプシノ一ゲン（トリプシンの不活性型前駆体）を添加し、 0. 25質量％の濃度となるようにフルォレセイン修飾カゼイン（トリプシンの基質）を添加し、 24時間 37。Cで培養した。 3 . 3質量％の濃度となるようにトリクロ口酢酸を加えて 20分間 37°Cで培養し、未反応のフルォレセイン修飾カゼインを沈殿させた。上清について励起波長 485nm、発光波長 538nmにて蛍光測定を行った。フルォレセイン修飾カゼインは活性化されたトリプシンにより分解され蛍光を生じるため、蛍光測定によりプロテアーゼ活性化促進能の定量を行った。

評価結果を、試料無添加のコントロールにおけるプロテアーゼ活性化促進能を 10 0とした相対値により、表 8に示した。

[0057] [表 8] 抽出物 1添加量（m g/mL) 相対値

0 1 0 0

0. 5 1 44

[0058] 表 8から明らかなように、スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物を添加した場合に、高いプロテアーゼ活性促進作用を示すことが認められた。このことから、スギ科ァケボノスギ属植物が優れたプロテアーゼ活性促進作用を発揮することが明らかとなった。

[0059] 本発明を実施した処方例を示す。

[処方例 1]乳液

[表 A]

( 1 ) スクヮラン 0 0 (質量％)

(2) メチルフエ二ルポリシロキサン 4 0

(3) 水素添加パーム核油 0 5 (4 ) 水素添加大豆リン脂質 0

(5) モノステアリン酸ポリオキシエチレン

ソルビタン（ 2 0 E O.)

(6 ) モノステアリン酸ソルビタン 0

( 7 ) グリセリン 4 0

( 8) パラォキシ安息香酸メチル 0

(9) カルボキシビ二ルポリマ一 0 1 5

(10) 精製水 5 3 8 5

(11) アルギニン（ 1質量％水溶液） 2 0 0

(12) スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物 1 5 0 製法：（1)〜（6)の油相成分を 80°Cにて加熱溶解する。一方（7)〜（10)の水相成分を 80°Cにて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザ一により均一に乳化する。乳化終了後、冷却を開始し、（U)と（12)を順次加え、均一に混合する。

[処方例 2]化粧水

[表 B]

( 1 ) ェタノール 1 5. 0

( 2) ポリオキシエチレン（40 E. O. ) 硬化ヒマシ油 0. 3

( 3 ) 香料 0 · 1

(4) 精製水 7 8. 3

(5) クェン酸 0. 0

( 6 ) タエン酸ナトリウム 0. 1

( 7) グリセリン 1. 0

(8) ヒドロキシェチノレセノレ口一ス 0. 1

(9) スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物 2 5 · 0 製法：（1)に（²)及び (3)を溶解する。溶解後、（4)〜（8)を順次添加した後、十分に攪拌し、（9)を加え、均一に混合する。

[処方例 3]クリーム

[表 C]

( 1 ) スクヮラン 1 0. 0

( 2 ) ステアリン酸 2. 0

( 3 ) 水素添加パーム核油 0. 5

(4) 水素添加大豆リン脂質 0. 1

( 5 ) セタノール 3. 6

(6) 親油型モノステアリン酸グリセリン 2. 0

( 7 ) グリセリン 1 0. 0

(8) パラォキシ安息香酸メチル 0. 1

(9) アルギニン（2 0質量％水溶液） 1 5. 0

( 1 0) 精製水 4 0. 7

( 1 1 ) カルボキシビ二ルポリマー（ 1質量％水溶液） 1 5. 0

( 1 2) スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物 3 1. 0 製法：（1)〜（6)の油相成分を 80°Cにて加熱溶解する。一方（7)〜（ 10)の水相成分を 80°Cにて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザ一により均一に乳化する。乳化終了後、（11)を加え、冷却を開始し、 40°Cにて（12) を加え、均一に混合する。

[処方例 4]美容液

[表 D]

( I ) 精製水

( 2 ) グリセリン

(3) ショ糖脂肪酸エステル

(4) カルボキシビ二ルポリマー（ 1質量％水溶液）

(5) アルギン酸ナトリウム（ 1質量％水溶液）

(6 ) モノラウリン酸ポリグリセリル

( 7) マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル

( 8 ) N-ラゥロイル -L-グルタミン酸

ジ（フィトステリル 2—ォクチルドデシル）

(9 ) 硬化パーム油

( 1 0) スクヮラン（ォリーブ由来）

( I I ) ベへニノレアノレコ一ノレ

( 1 2) ミツロウ

( 1 3) ホ.ホバ油

( 1 4) 1、 3—ブチレングリコール

( 1 5) L一アルギニン（ 1 0質量％水溶液）

( 1 6) スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物 4 製法：（1)〜½)の水相成分を混合し、 75°Cにて加熱溶解する。一方、（7)〜（14)の油相成分を混合し、 75°Cにて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、 50°Cにて（15)を加える。さらに 40°Cまで冷却し、（16)を加え、均一に混合する。

[処方例 5]水性ジエル

[表 E]

( 1 ) カルボキシビ二ルポリマ一 0. 5

( 2 ) 精製水 8 6 · 7

( 3 ) 水酸化ナトリウム（ 1 0質量。 /₀水溶液） 0. 5

( 4 ) エタノール 1 0. 0

( 5 ) パラォキシ安息香酸メチル 0. 1

( 6 ) 香料 0. 1

( 7 ) スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物 2 2. 0

( 8 ) ポリオキシエチレン（ 6 0 E . O. ) 硬化ヒマシ油 0. 1 製法：（1)を (2)に加え、均一に攪拌した後、（3)を加える。均一に攪拌した後、（4) に予め溶解した（5)を力□える。均一に攪拌した後、予め混合しておいた（6)〜（8)を加え、均一に攪拌混合する。

[処方例 6]クレンジング料

[表 F]

( 1 ) スクヮラン 8 1 . 0 (質量⁰ ）

( 2 ) イソステアリン酸ポリォキシェチレングリセリル 1 5. 0

( 3 ) 精製水 3. 0

( 4 ) スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物 1 1 . 0 製法：（1)と（2)を均一に溶解する。これに、（3)と（4)を順次加え、均一に混合する。

[処方例 7]洗顔フォーム

[表 G]

( 1 ) ステアリン酸 1 6. (質量％)

( 2 ) ミリスチン酸 1 6.

( 3 ) 親油型モノステアリン酸グリセリン 2.

(4 ) グリセリン 2 0.

( 5 ) 水酸化ナトリウム 7.

( 6 ) ヤシ油脂肪酸アミドプロピルべタイン

( 7 ) 精製水 3 6.

( 8 ) スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物 4 製法：（1)〜（4)の油相成分を 80°Cにて加熱溶解する。一方（5)〜（7)の水相成分を 80°Cにて加熱溶解し、油相成分と均一に混合撹拌する。冷却を開始し、 40°Cにて (8)を加え、均一に混合する。

[処方例 8]メイクアップベースクリーム

[表 H]

( 1 ) スクヮラン

( 2 ) セタノール

(3) グリセリントリ一 2—ェチルへキサン酸エステル

(4) 親油型モノステアリン酸グリセリル

(5) プロピレングリコール

(6) ショ糖脂肪酸エステル

( 7) 精製水

( 8 ) 酸化チタン

(9) ベンガラ

( 1 0) 黄酸化鉄

( 1 1 ) 香料

( 1 2) スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物 3 製法：（1)〜（4)の油相成分を混合し、 75°Cにて加熱溶解する。一方、（5)〜（7)の水相成分を混合し、 75°Cにて加熱溶解し、これに（8)〜（10)の顔料を加え、ホモミキサ一にて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、 40°Cにて（11)と（12)の成分を加え、均一に混合する。

[処方例 9]乳液状ファンデーション

[表 I]

1 ) メチルポリシロキサン 2. 0

2) スクヮラン 5. 0

3) ミリスチン酸ォクチルドデシル 5. 0

4) セタノール 1. 0

5) ポリオキシエチレン（ 20 E . O . )

ソビタンモノステアリン酸エステ 1. 3

6 ) モノステアリン酸ソルビタン 0. 7

7) 1、 3ーブチレンダリコール 8. 0

8) キサンタンガム 0. 1

9) パラォキシ安息香酸メチル 0. 1

1 0 ) 精製水 5 7. 4

1 1 ) 酸化チタン 9. 0

1 2 ) タルク 7. 4

1 3 ) ベンガラ 0. 5

1 4 ) 黄酸化鉄 1. 1

1 5 ) 黒酸化鉄 0. 1

1 6 ) 香料 0. 1

1 7 ) スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物 1 1. 2 製法：（1 6)の油相成分を混合し、 75°Cにて加熱溶解する。一方、（7 10)の水相成分を混合し、 75°Cにて加熱溶解し、これに（11)〜（15)の顔料を力□え、ホモミキサ一にて均一に分散する。油相成分を加え、乳化を行う。乳化終了後に冷却を開始し、 40°Cにて（16)と（17)の成分を順次加え、均一に混合する。

[処方例 10]油中水型ェモリエントクリーム

[表 J]

1 ) 流動パラフィン 3 0. 0

2) マイクロクリスタリンワックス 2. 0

3) ワセリン 5. 0

4) ジグリセリンォレイン酸エステル 5. 0

5) 塩化ナトリウム 1. 3

6) 塩化力リウム 0. 1

7) プロピレングリコ 3. 0

8) 1、 3—ブチレングリコール 5. 0

9) パラォキシ安息香酸メチル 0. 1

1 0 ) スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物 1 1. 0

1 1 ) 精製水 4 7. 4

1 2 ) 香料 0. 1 製法：（5)と（6)を（11)の一部に溶解して 50°Cとし、 50°Cに加熱した (4)に撹拌しながら徐々に加える。これを混合した後、 70°Cにて加熱溶解した（1 3)に均一に分散する。これに（7)〜 10)を（11)の残部に 70°Cにて加熱溶解したものを撹拌しながら加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、 40°Cにて（12)を加え、均一に混合する。

[0069] [処方例 11]パック

[表 K]

( 1 ) 精製水 5 8. 9 (質量％)

( 2 ) ポリビ-ルアルコール 1 2. 0 ( 3 ) ェタノール 1 7. 0

(4) グリセリン 5. 0

(5) ポリエチレングリコール（平均分子量 0 0 0 ) 2. 0

(6) スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物 2 5. 0

( 7) 香料 0. 製法：（2)と（3)を混合し、 80°Cに加温した後、 80°Cに加温した（1)に溶解する。均一に溶解した後、（4)と（5)を加え、攪拌しながら冷却を開始する。 40°Cまで冷却し、 (6)と（7)を加え、均一に混合する。

[0070] [処方例 12]入浴剤

[表し]

( 1 ) 香料 3 (質量％)

(2) スギ科ァケポノスギ属植物の抽出物 4 0 ( 3 ) 炭酸水素ナトリウム 5 0 0

(4 ) 硫酸ナトリウム 4 8 7 製法：（1)〜（4)を均一に混合する。

[0071] [処方例 15]内服液

[表 M]

( 1 ) スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物 2 0 (質量％) ( 2 ) エリスリトール 0

(3) クェン酸 0

( 4 ) ステビア 0 0 1

( 5) 精製水 9 0 8 9 製法：（1)〜（5)を均一に混合する。

[0072] [処方例 16]顆粒剤

[表 N] スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物 1 0 2 (質量部）乳糖 0 6 5

トウモロコシデンプン 0 1 5 製法：（1)〜（3)をし過して混合し、造粒機にて造粒し、乾燥、整粒して全量が 1500 mgの顆粒剤を得た。

[0073] 次に、スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物を配合した処方を用いて使用試験を行い、乾燥による肌荒れについて改善効果を評価した。その際、処方例 2に示した化粧水の処方において、成分（9)として抽出物 1または抽出物 2をそれぞれ配合し、実施例 1〜2として使用試験を行った。比較例として、成分（9)の抽出物を精製水に代替した化粧水を用い、同時に使用試験を行った。

[0074] 各試料について、肌荒れ症状が顕著に認められる 30〜50才代の乾燥肌の女性パネラー 10名をそれぞれ一群とし、ブラインドにて 1週間使用させ、使用前後の皮膚状態の変化を観察して評価した。皮膚症状の指標として、乾燥による肌荒れについて、「改善」、「やや改善」、「変化なし」の三段階で評価した。

表 9に各評価を得たパネラー数を示す。

[0075] [表 9]

[0076] 表 9より、スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物を含有しない比較例使用群においては、 7割以上のパネラーに改善は認められな力、つた力スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物を配合した実施例使用群においては、 6割以上のパネラーに明確な肌荒れの改善が認められた。このことから、スギ科ァケボノスギ属植物の抽出物は優れた保湿効果、肌荒れ改善効果を有することが明らかとなった。

[0077] 本発明によれば、優れた効果を有する保湿剤、細胞賦活剤、抗酸化剤、プロテアーゼ活性促進剤、抗老化剤、美白剤、抗炎症剤、中性脂肪蓄積抑制剤を得ることができる。また、本発明の植物抽出物は、天然物由来成分であり副作用等の心配がなく日常的に連用可能であり、皮膚外用剤、経口用剤として、医薬品、医薬部外品、化粧品、食品などの分野に広く利用することができる。

[0078] 本願の開示は、 2006年 9月 20日に出願された特願 2006— 254248号に記載の主題と関連しており、それらのすべての開示内容は引用によりここに援用される。既に述べられたもの以外に、本発明の新規かつ有利な特徴から外れることなぐ上記の実施形態に様々な修正や変更を加えてもよいことに注意すべきである。したがつて、そのような全ての修正や変更は、添付の請求の範囲に含まれることが意図されている。

Claims

請求の範囲

[1] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を有効成分とする保湿剤。

[2] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を有効成分とする細胞賦活剤。

[3] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を有効成分とする抗酸化剤。

[4] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を有効成分とするプロテアーゼ活性促進剤。

[5] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を有効成分とする抗老化剤。

[6] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を有効成分とする美白剤。

[7] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を有効成分とする抗炎症剤。

[8] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を有効成分とする中性脂肪蓄積抑制剤。

[9] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を含む外用組成物。

[10] スギ科ァケボノスギ属植物またはその抽出物を含む経口用組成物。