WO2007138689A1 - 鳥類由来細胞用の培養液、及び培養方法 - Google Patents

鳥類由来細胞用の培養液、及び培養方法 Download PDF

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Katsuyuki Kadoi
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Nihon University
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/32—Amino acids

Definitions

  • the present invention relates to a culture solution and a culture method for avian-derived cells, and more particularly to a culture solution and a culture method capable of subculture a large number of avian-derived cells.
  • the various cell culture solutions provided conventionally are suitable for culturing cells derived from mammalian tissues, but are not suitable for culturing cells derived from avian tissues, A large number of subcultures have never been realized with avian-derived cells.
  • this inventor aims at providing the culture solution and culture
  • the present inventor has conducted extensive research, and as a result, cultured using an avian-derived cell culture medium containing at least L-ortin, thereby extremely avian-derived cells.
  • the inventors have found that culturing can be performed predominantly, and have completed the present invention.
  • the present invention provides:
  • a method for culturing avian-derived cells comprising: (a) a step of preparing avian-derived cells; and (b) a step of culturing the cells in a culture solution, wherein the culture solution comprises: A culture method comprising at least L-ornithine;
  • a culture solution and a culture method capable of performing many subcultures of avian-derived cells.
  • the culture solution of the present invention is a culture solution for avian-derived cells and contains at least sputum ortine.
  • avian-derived cells can be easily and advantageously cultured in a flask container, and a large number of subcultures of avian-derived cells are possible.
  • the content of L-orthine in 1 liter of solvent is preferably 170 to 250 mgZL, and particularly preferably 190 to 220 mgZL. preferable.
  • bird-derived cells mean cells derived from birds such as chickens (chicken), turkeys, ducks, duck, chibos, and ostriches.
  • double-distilled water as a solvent for the culture solution, for example, deionized water.
  • Sterilization of the culture solution is performed by membrane filter treatment.
  • the culture medium further contains a rabbit fetal serum that has been heat-inactivated (eg, 56 ° C, 30 minutes) or a healthy chick chicken serum.
  • a rabbit fetal serum that has been heat-inactivated (eg, 56 ° C, 30 minutes) or a healthy chick chicken serum.
  • the culture broth is L-alanine, L-arginine, L-cystine, L-glutamine, glycine, L-histidine, L-isoleucine, L-leucine, L-lysine, L-methionine, L-ornii
  • it contains tin, L-phenylalanine, L-proline, L-serine, L-threonine, L-tryptophan, L-tyrosin, and L-parin.
  • the culture solution may be prepared in a state containing sodium carbonate at the time of preparation of the culture solution.
  • it may be prepared without sodium carbonate at the time of preparation of the culture solution, and 7.5% sodium carbonate solution that has been separately sterilized by filtration at the same time as the serum-added calorie may be added.
  • the amount of 7.5% sodium carbonate solution added is preferably 20-30 mL per 10 mL of culture solution.
  • the culture solution may contain salts, sugars, amino acids, vitamins, antibiotics and the like! ⁇ .
  • antibiotics for example, pecillin, streptomycin, kanamycin, gentamicin, nystatin, etc.
  • pecillin for example, pecillin, streptomycin, kanamycin, gentamicin, nystatin, etc.
  • the culture medium preferably has the composition shown in Table 1.
  • the culture medium is preferably stored in a refrigerated place at 2-8 ° C. If the pH changes after storage, the formation of precipitates or aggregates is observed, the turbidity, or the color changes, it cannot be used.
  • the culture broth can be dried and stored in powder form. In this case, it is preferable to store in a dry state at 2 to 8 ° C. If the powder shows discoloration, granular Z aggregation, or insolubility, it cannot be used.
  • the culture method of the present invention is a method for culturing avian-derived cells, comprising: (a) preparing avian-derived cells; and (b) culturing the cells in a culture solution, Culture fluid strength Contains at least L-ortin.
  • avian-derived cells can be easily and advantageously cultured in a flask, and a large number of subcultures of avian-derived cells are possible.
  • the above culture solution can be used.
  • the culture solution preferably further contains heat-inactivated (eg, 56 ° C., 30 minutes) eagle fetal serum or healthy chick chicken serum.
  • heat-inactivated eg, 56 ° C., 30 minutes
  • the culture step is performed in a borosilicate glass container or a cell culture plastic container.
  • a washed 'sterilized neutral glass cell culture bottle or a commercially available plastic flask for cell culture for example, a product of Nunc in Denmark, a product of Corning in the United States) US Falcon products and Japanese Sumitomo Bakelite products.
  • the water was distilled twice and sterilized by high-pressure sterilization, or water prepared with an ultrapure water device (Millipore, USA), which was at room temperature (20 to 20 24 ° C), add the culture solution composition to the purified water for about 90% volume until it is completely dissolved and clear. Stir. After adding 1 mL of IN-HC1 solution to about 9000 mL of this solution, purified water was further added to make 100 volumes.
  • the solution was sterilized by filtration through a membrane filter having pores of 200 to 220 nm. Then, 10 vol% of fetal bovine serum inactivated by heating as described above was added to this solution to obtain a cell growth solution (practical cell culture solution).
  • Tissue subsections are separated into 0.1 to 0.05% EDTA (ethylene diamine tetraacetic acid Z phosphate buffer) solution, the cells are collected by centrifugation, suspended in cell growth solution, and flasks. The aliquots were cultured at 38.5-39.0 ° C. Sufficient cell growth was obtained by culturing for about 7 days (primary cultured cells).
  • EDTA ethylene diamine tetraacetic acid Z phosphate buffer
  • the primary cultured cells are further dispersed into single pieces with an EDTA solution, and the cells suspended in the cell growth solution are cultured in a 96-well microplate (manufactured by Flow laboratories, Inc.) by the limiting dilution method.
  • a clonal cell line was established. Each clonal cell line was transferred to a flask culture and subcultured to establish a cell line.
  • Two cell lines were established from cultured cells derived from the fetus lung and kidney. All of these cell lines grew easily under culture temperature conditions of 38.5 to 39.0 ° C. and succeeded in passage up to at least 40 generations.
  • the virus proliferated in the cells and caused strong cell lesions, and most of the cells died in the culture process 2 to 4 days after the virus infection.
  • a significant replication of the inoculated virus infectious virus propagation was also observed.
  • the chicken-derived cells were cultured using a culture solution in which 10% by volume of heat-inactivated urchin fetus serum was added to various commercially available mammalian cell culture solutions that did not contain L-orthine. I could't pass the power until 5-6.
  • the culture solution of the present invention when used, various cells derived from birds can be easily cultured, and thus it is possible to culture a bird-derived virus that can grow on these cultured cells.
  • vaccines can be developed by using, as antigens, viruses that can be grown in cell culture.
  • cells cultured with the culture medium of the present invention have various applications in virology, immunology, biochemistry, pharmacology, and pathology of avian-derived cells.
  • the culture solution of the present invention is useful for research on avian influenza viruses.

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Abstract

本発明の目的は、鳥類由来細胞の多数の継代培養を実現することができる培養液及び培養方法を提供することである。そして、上記目的は、L-オルニチンを少なくとも含む、鳥類由来細胞用の培養液によって達成される。また、上記目的は、鳥類由来細胞の培養方法であって、（ａ）鳥類由来細胞を準備する工程と、（ｂ）培養液中にて前記細胞を培養する工程と、を含み、前記培養液が、L-オルニチンを少なくとも含む、培養方法によって達成される。                                                                                                                                               

Description

鳥類由来細胞用の培養液、及び培養方法
技術分野
[0001] 本発明は、鳥類由来細胞用の培養液及び培養方法に係り、より詳細には、鳥類由 来細胞の多数の継代培養が可能な培養液及び培養方法に関する。
背景技術
[0002] 培養細胞を用いた実験研究では、試験管や細胞培養フラスコ内で容易に長期培 養できる株化細胞を用いると実験が容易に行えることが知られて 、る。基礎免疫学の 実験では、実験動物由来株化細胞を用い、その同種の実験動物で実験研究が行わ れている。
従来から、哺乳動物の組織由来の細胞の培養に適した多種の細胞培養液が、提 供されている。
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0003] し力しながら、従来提供されている各種の細胞培養液は、哺乳動物の組織由来の 細胞の培養には適しているが、鳥類組織由来の細胞の培養には適しておらず、鳥類 由来細胞にっ 、ての多数の継代培養は実現されて 、なかった。
そこで、本発明者は、鳥類由来細胞の多数の継代培養を実現することができる培 養液及び培養方法を提供することを目的とする。
課題を解決するための手段
[0004] 本発明者は、上記事情に鑑み、鋭意研究を重ねた結果、 L-オル-チンを少なくとも 含む、鳥類由来細胞用の培養液を用いて培養することにより、鳥類由来細胞を極め て優位に培養することができることを見出し、本発明を完成させるに至った。
[0005] すなわち、本発明は、
(1) L-オル-チンを少なくとも含む、鳥類由来細胞用の培養液；
(2)前記 L-オル-チンの含有量力 170〜250mgZLである、前記（1)記載の培養 液； (3)前記培養液が、加熱不活化したゥシ胎児血清、又は健常なヒナ鶏血清をさらに 含む、前記（1)又は（2)記載の培養液；
(4) L-ァラニン、 L-アルギニン、 L-システィン、 L-グルタミン、グリシン、 L-ヒスチジン、 L-イソロイシン、 L-ロイシン、 L-リジン、 L-メチォニン、 L-オル二チン、 L-フエ二ルァラ ニン、 L—プロリン、 L—セリン、 L—スレオニン、 L—トリプトファン、 L—タイ口シン、及び L—バ リン、を含む、前記（1)〜（3)の何れかに記載の培養液；
(5)鳥類由来細胞の培養方法であって、（a)鳥類由来細胞を準備する工程と、（b)培 養液中にて前記細胞を培養する工程と、を含み、前記培養液が、 L-オル二チンを少 なくとも含む、培養方法；
(6)前記培養液が、加熱不活化したゥシ胎児血清、又は健常なヒナ鶏血清をさらに 含む、前記（5)記載の培養方法；
(7)前記培養工程は、ホウケィ酸ガラス容器又は細胞培養用プラスチック容器内で 行われる、前記（5)又は（6)記載の培養方法；を提供する。
発明の効果
[0006] 本発明によれば、鳥類由来細胞の多数の継代培養が可能な培養液及び培養方法 が提供される。
発明を実施するための最良の形態
[0007] 次に、本発明の実施の形態について、詳細に説明する。以下の実施形態は、本発 明を説
明するための例示であり、本発明をこの実施形態にのみ限定する趣旨ではない、本 発明は、その要旨を逸脱しない限り、さまざまな形態で実施することできる。
[0008] 〔培養液〕
本発明の培養液は、鳥類由来細胞用の培養液であって、卜オル-チンを少なくとも 含むものである。
このような培養液を用いれば、鳥類由来細胞をフラスコ容器内で容易に優位に培 養することができ、鳥類由来細胞の多数の継代培養が可能となる。
[0009] 本発明の目的を一層達成するために、 L-オル-チンの溶媒 1リットル中における含有 量は、 170〜250mgZLであること力 子ましく、特に、 190〜220mgZLであること力 S 好ましい。
[0010] 上記「鳥類由来細胞」とは、ニヮトリ（鶏）、七面鳥、ァヒル、鴨、チヤボ、ダチョウ等の 鳥類に由来する細胞という意味である。
[0011] 上記培養液は、溶媒として再蒸留水を用いることが好ましぐ例えば、脱イオン化し
、 2回蒸留後に、オートクレープ処理した水が好ましい。培養液の無菌化は、メンブラ ンフィルター処理により行われる。
[0012] 上記培養液は、加熱不活化 (例えば、 56°C、 30分)したゥシ胎児血清、又は健常な ヒナ鶏血清をさらに含むことが好ましい。これにより、本発明の目的を一層達成するこ とがでさる。
前記のごとく加熱不活ィ匕したゥシ胎児血清、又は健常なヒナ鶏血清は、培養液に対 して 5〜10容量％添加することが好ましい。
[0013] 上記培養液は、 L-ァラニン、 L-アルギニン、 L-システィン、 L-グルタミン、グリシン、 L-ヒスチジン、 L-イソロイシン、 L-ロイシン、 L-リジン、 L-メチォニン、 L-オル二チン、 L —フエ二ルァラニン、 L—プロリン、 L—セリン、 L—スレオニン、 L—トリプトファン、 L—タイロシ ン、及び L-パリン、を含むことが好ましい。これにより、本発明の目的を一層達成する ことができる。
[0014] 上記培養液は、培養液作製時に炭酸ナトリウムを含んだ状態で作製してもよい。また 、培養液作製時に炭酸ナトリウムを不含の状態で作製しておき、使用時に血清添カロ と同時に、別に濾過滅菌しておいた 7. 5%の炭酸ナトリウム液を添加してもよい。そ の場合、 7. 5%の炭酸ナトリウム液の添カ卩量は、 lOOOmLの培養液当たり 20〜30m Lが好ましい。
[0015] 上記培養液は、塩類、糖、アミノ酸、ビタミン類、抗生物質等を含んでもよ！ヽ。
上記培養液には、通常の細胞培養液に添加される各種抗生物質 (例えば、ぺ -シリ ン、ストレプトマイシン、カナマイシン、ゲンタマイシン、ナイスタチン等）を添カ卩してもよ い。
上記培養液は、表 1に示す組成を有することが好まし ヽ。
[0016] [表 1] 成分 m g/L
塩ィ匕ナトリウム 4900〜7500 塩化力リウム 300〜500 塩ィ匕カルシウム 210〜320 硫酸マグネシウム 1 60〜240 リン酸ニ水素ナトリウム 1 10〜 ： 1 70 炭酸水素ナトリウム 1 600〜2400 硝酸鉄 （ffl) 九水和物 0. 08〜0. 12 へぺス （C8H1804N2S) 200〜300 ブドウ糖 800〜3000 nノヽ夕酸 80〜 ： 120
L -ァラニン 240〜360
L-アルギニン- HC1 60〜 ： 100
L -システィン- HC1 50〜90
L-グルタミン 480〜720 グリシン 180〜280
L-ヒスチジン- HC1 32〜48
L-イソロイシン 80〜 120 ロイシン 80〜 ： 120
L -リジン- HC1 1 92〜288
L -メチォニン 32〜48
L -オル二チン - HC1 1 70〜250
L-フエ二ルァラニン 48〜72
L -プロリン 80〜 ： 120
L-セリン 50〜80
L -スレオニン 392〜588
L -トリブトファン 1 2〜20
L—タイ口シン- 2Na 72〜 ： 108
L-バリン 8〜： 1 2
重酒石酸コリン 8〜1 2
葉酸 3. 2〜4. 8 ニコチンアミ ド 3. 2〜4. 8 パントテン酸カルシウム 3. 2〜4. 8 塩酸ピリ ドキシン 3. 2〜4. 8 リボフラビン 0. 32〜0. 48 塩酸チアミン 3. 2〜4. 8 イノシトール 8〜 ； 1 2
フエノ一ノレレッド 4〜6 なお、上記培養液は 2〜8°Cの冷喑所に保存することが好ましい。保存に供した後、 p Hが変化した場合、沈殿物や凝集物の形成が認められた場合、混濁した場合、又は 色調が変化した場合は、使用不可とする。
上記培養液は乾燥させ、粉末状にして保存することもできる。この場合、 2〜8°Cで乾 燥状態にて保存することが好ましい。粉末が変色、顆粒状 Z凝集状態、不溶解性を 示した場合は、使用不可とする。
[0017] 〔培養方法〕
本発明の培養方法は、鳥類由来細胞の培養方法であって、（a)鳥類由来細胞を準 備する工程と、（b)培養液中にて前記細胞を培養する工程と、を含み、前記培養液 力 L-オル-チンを少なくとも含むものである。
このような培養方法によれば、鳥類由来細胞をフラスコ内で容易に優位に培養する ことができ、鳥類由来細胞の多数の継代培養が可能となる。
[0018] 本発明の培養方法においては、上記の培養液を用いることができる。
本発明の培養方法においては、培養液は、加熱不活化 (例えば、 56°C、 30分)し たゥシ胎児血清、又は健常なヒナ鶏血清をさらに含むことが好ましい。
[0019] 本発明の培養方法にお!ヽては、前記培養工程は、ホウケィ酸ガラス容器又は細胞 培養用プラスチック容器内で行われることが好ましい。
具体的には、前記培養工程では、容器として、洗浄 '滅菌した中性ガラス製細胞培養 瓶、又は市販の滅菌済み細胞培養用プラスチックフラスコ（例えば、デンマークの Nu nc社製品、米国の Corning社製品、米国の Falcon社製品、日本の住友ベークライト社 製品）を用いることが好ましい。
実施例
[0020] 以下に、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるも のではない。
[0021] 〔実施例 1〕
上記表 1に示す組成を、脱イオンィ匕した後、 2回蒸留し、高圧滅菌処理した水、又 は超純水装置 (米国のミリポア社製)で作製した水であって、室温（20〜24°C)下で、 約 90%容量分の上記精製水に培養液組成を添加し、完全に溶解し透明になるまで 撹拌した。この溶液約 9000mLに対して IN- HC1液を lmL加えた後、さらに精製水 を加えて 100容量分とした。
次に、 200〜220nmの細孔のメンブランフィルターで濾過滅菌した。そして、この溶 液に、前記のごとく加熱不活ィ匕したゥシ胎児血清を 10容量％添加して細胞増殖液 ( 実務上の細胞培養液)を得た。
[0022] 得られた上記細胞培養液を用いて、ホウケィ酸ガラス製フラスコ、及び細胞培養用プ ラスチック製フラスコ内で、孵化直前の鶏胎児及びヒナ鶏の、肺臓、腎臓、脾臓、及 び骨髄の細胞を培養した。
組織細切片を 0. 1〜0. 05%EDTA (エチレンジァミン四酢酸 Zリン酸緩衝液)液中 で単個に分離し、その細胞を遠心沈殿して集め、細胞増殖液中に浮遊させ、フラスコ に分注して 38. 5〜39. 0°Cに培養した。 7日程度の培養 (初代培養細胞)で充分の 細胞増殖が得られた。
この初代培養細胞をさらに EDTA液で単個に分散し、細胞増殖液中に浮遊したもの を 96穴のマイクロプレート（Flow laboratories, Inc社製）に、限界希釈法（Limited Dilu tion Method)によって培養し、クローン細胞株を榭立した。各クローン細胞株は、フラ スコ培養に移し、継代することで、株化細胞を榭立した。鶏胎児の肺臓及び腎臓由 来の培養細胞から、 2つの株化細胞を榭立した。これらいずれの細胞株も、 38. 5〜 39. 0°Cの培養温度条件で容易に増殖し、少なくとも 40代までの継代に成功した。
[0023] これより、鶏胎児の肺臓及び腎臓からの培養細胞が、 in vitroで極めて優位に培養で きることが分力つた。なお、鶏胎児の肺由来の細胞は、繊維芽細胞形態を示し、鶏胎 児腎臓由来の細胞は、上皮細胞形態を示した。
[0024] 次に、細胞における、非特異的エステラーゼ及び酸ホスファターゼの生産性を、常 法により検査した。その結果、鳥胎児の肺由来細胞について両酵素の生産が認めら れたことから、これら細胞は単球一マクロファージ系統であることが分力つた。
[0025] 次に、発ガン性との関連を調べる目的で、細胞の浮遊液 (リン酸緩衝液 lmL当たり 2 , 000, 000個の細胞を含む） 0. 5mLを、生後 3日目の白色レグホーン種のヒナ鶏 1 0体の皮下にそれぞれ接種し、 1ヶ月後に剖検した結果、発ガン性に関する病理学 的な所見は認められなかった。 [0026] また、これらの培養細胞を、鶏白血病の共通抗原として知られる P27抗原の検出キ ット (米国の IDEXX社製)を用いて調べたところ、明確な陽性反応は認められなかつ た。
[0027] さらに、これらの細胞培養に、鶏-ユーカツスル病ウィルス（宫寺株）を感染重度 0.
01で感染させたところ、結果として、ウィルスは細胞内で増殖し、強い細胞病変を惹 起し、ウィルス感染後、 2〜4日の培養過程で、大部分の細胞は死滅した。また、接種 ウィルスの有意の複製 (感染させたウィルスの増殖)も認められた。
[0028] 〔実施例 2〕
加熱不活ィ匕したゥシ胎児血清の代わりに、健常なヒナ鶏血清を 10容量％添加した 培養液を用いた場合であっても、上記の細胞株は極めて良く増殖し、少なくとも 40代 までのフラスコ培養での継代に成功した。
[0029] 〔比較例 1〕
L-オル-チンを含まない、市販の各種哺乳動物用細胞培養液に、加熱不活化した ゥシ胎児血清を 10容量％添加した培養液を用いて、上記鶏由来の細胞を培養した ところ、 5〜6代までし力継代できなかった。
産業上の利用可能性
[0030] 以上の結果から、本発明の培養液を用いれば、鳥類由来細胞のフラスコ内培養が 極めて容易にできることが分力つた。特に、培養液に加熱不活化したゥシ胎児血清、 又は健常なヒナ鶏血清を添加して用いることにより、鳥類細胞の単個培養や骨髄細 胞の培養も可能となることが分力つた。
これにより、本発明の培養液を用いれば、鳥類由来の種々の細胞が容易に培養で きたことから、それら培養細胞で増殖可能な鳥類由来のウィルスの培養が可能となる 。すなわち、細胞培養で増殖が可能となったウィルスを抗原として用いれば、ワクチン 開発も可能となる。また、本発明の培養液により培養される細胞は、鳥類由来細胞の ウィルス学、免疫学、生化学、薬理学、病理学に多様な応用の可能性がある。例え ば、本発明の培養液は、鳥インフルエンザウイルスの研究に有用である。

Claims

請求の範囲
[1] L-オル-チンを少なくとも含む、鳥類由来細胞用の培養液。
[2] 前記 L-オル-チンの含有量力 170〜250mgZLである、請求項 1記載の培養液
[3] 前記培養液が、加熱不活化したゥシ胎児血清、又は健常なヒナ鶏血清をさらに含 む、請求項 1又は 2記載の培養液。
[4] L-ァラニン、 L-ァノレギニン、 L-システィン、 L-グルタミン、グリシン、 L-ヒスチジン、 L- イソロイシン、 L-ロイシン、 L-リジン、 L-メチォニン、 L-オル二チン、 L-フエニノレアラニ ン、 L-プロリン、 L-セリン、 L-スレオ-ン、 L-卜リプ卜ファン、 L-タイ口シン、及び L-ノ リ ン、を含む、請求項 1〜3の何れかに記載の培養液。
[5] 鳥類由来細胞の培養方法であって、
(a)鳥類由来細胞を準備する工程と、
(b)培養液中にて前記細胞を培養する工程と、を含み、
前記培養液が、 L-オル-チンを少なくとも含む、培養方法。
[6] 前記培養液が、加熱不活化したゥシ胎児血清、又は健常なヒナ鶏血清をさらに含 む、請求項 5記載の培養方法。
[7] 前記培養工程は、ホウケィ酸ガラス容器又は細胞培養用プラスチック容器内で行 われる、請求項 5又は 6記載の培養方法。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10918389B2 (en) 2004-05-25 2021-02-16 Covidien Lp Flexible vascular occluding device

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000512128A (ja) * 1997-03-12 2000-09-19 ユニバーシティ・オブ・ピッツバーグ 哺乳類細胞用の細胞培養培地

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000512128A (ja) * 1997-03-12 2000-09-19 ユニバーシティ・オブ・ピッツバーグ 哺乳類細胞用の細胞培養培地

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"GIBCO katalog 2003-2004", 2003, pages: 24 - 26, XP003002155 *
HAGIWARA Y. AND OZAWA E.: "Class specificity of avian and mammalian sera in regards to myogenic cell growth in vitro. Possible role of transferrin in the specificity", DEV. GROWTH DIFFER., vol. 24, no. 1, 1982, pages 115 - 123, XP003002463 *
TERRY T.L. AND GALLIN W.J.: "Effects of fetal calf serum and disruption of cadherin function on the formation of bile canaliculi between hepatocytes", EXP. CELL RES., vol. 214, no. 2, 1994, pages 642 - 653, XP003002462 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10918389B2 (en) 2004-05-25 2021-02-16 Covidien Lp Flexible vascular occluding device

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