WO2005123651A1

WO2005123651A1 - L-2-(α-HYDROXYPENTYL)BENZOATES, THE PREPARATION AND THE USE THEREOF

Info

Publication number: WO2005123651A1
Application number: PCT/CN2005/000102
Authority: WO
Inventors: Quanzhi Liu; Wenbin Yang; Hua Qin; Xingkai Zhao
Original assignee: Team Academy Of Pharmaceutical Science
Priority date: 2004-06-17
Filing date: 2005-01-24
Publication date: 2005-12-29
Also published as: WO2005123651A8; CN100540523C; CN1594270A

Description

新的 L- 2 - ( α-羟基戊基）苯曱酸盐及其制法和用途技术领域

本发明涉及新的 L- 2 - ( α-羟基戊基 )苯曱酸盐及其制法，以及以该化合物为活性成分的药物组合物，还涉及该类化合物及组合物在预防和治疗心脑缺血性疾病及改善心脑循环障碍、抗血栓等方面的应用。

背景技术

急性缺血性脑卒中和冠心病以及心肌梗死，都是由于各种因素诱发血栓形成所导致的缺血性损伤的疾病，该类疾病给病人带来极大的痛苦甚至生命危险。目前，该类药物的研究一直是药物研究开发的热点和前沿。

3-烃基苯酞类化合物，多数有药理活性，其中 DL- 3-正丁基苯酞，中国专利 ZL 93117148. 2公开了抗脑缺血的活性，并且国内已经作为一类新药上市，商品名 "恩必普"，剂型为软胶袁。

L- 3-正丁基苯酞，是 3-正丁基苯酞的左旋光学异构体，中国专利 ZL 98125618. X公开其具有相对于 DL-3-正丁基苯舦和 D-3-正丁基苯酞更优异的抗血栓和抗血小板聚集活性。

由于 DL-3-正丁基苯酞和 L-3-正丁基苯酞都是不溶于水的粘稠液体，并不便于制药工业制成合适的制剂形式，如已上市的 DL- 3-正丁基苯肽，只是简单地做成软胶袭供口服使用。

中国专利 CN1382682A, 申请号 01109795. 7，首次公开了以 DL-3 -正丁基苯酞为先导物制备 DL- 2 - ( α-羟基戊基）苯曱酸盐及其用途，涉及一价金属离子、二价金属离子和有积减基的盐，具体公开了钾、钠、钙、镁、锌、苯胺、苄胺、吗啉、二乙胺的盐。其说明书中公开了钾盐、钠盐、锂盐、钙盐、苄胺盐的制备，但没有公开锌盐、苯胺、吗啉、二乙胺盐的具体制备方法。其说明书中还公开了钾盐对局部脑缺血大鼠脑梗塞面积的影响，对大鼠血小板聚集的影响，以及大鼠离体心脏缺血-再灌注心率失常的保护作用，证明钾盐在上述实验中发挥了有益作用。其他盐类化合物则未进行药效实脸证明其效果。

发明内容

本发明的发明人在研制新的心脑血管类药物时，研究大量 2 -取代苯曱酸盐的过程中，意外地发现 L- 2 - ( α-羟基戊基）苯曱酸盐，即 2 - ( α-羟基戊基）苯甲酸的左旋光学单一异构体的盐，该类化合物与现有技术的 DL- 2 - ( α-羟基戊基）苯曱酸盐以及 L-3-正丁基苯目比，出人意料地具有更加优异的心脑血管活性，并且有更好的物理和化学性能。

本发明的目的，就是提供一种新的，具有明显的抗脑缺血、抑制血栓形成，从而改善心脑循环、预防和治疗心脑缺血性疾病的一类新的化合物，即 L-2 - ( α-羟基戊基）苯甲酸盐，该化合物具有良好的外观及物理形态，稳定性更加优异。

本发明的另一目的，是提供一种制备 L- 2 - ( α-羟基戊基）苯甲酸盐的合成方法。

本发明的进一步的目的是为临床提供一种可有效预防和治疗心脑缺血性疾病及改善心脑循环障碍、抗血栓的一类药物组合物。

本发明的另一目的是提供上述化合物和组合物在制备预防和治疗心脑缺血性疾病及改善心脑循环障碍、抗血栓药物中的应用。

为了完成本发明的目的，本发明的发明人制备并研究了一大批 2 - 烃基苯甲酸盐，包括中国专利 CN1382682A已公开的盐，经过理化性盾、药效、毒性研究，意外地发现具有下式结构的化合物，具有各方面优异的性能，现有技术中未见对该类化合物的报道。

其中， n=l，2; M为一价金属离子如锂，钠，钾，或是二价金属离子如镁、钙、锌，或有 ^ ^, 如苄胺、曱基苄胺、叔丁胺、 N， N， -二苄基乙二胺。一价金属离子优选钾，二价金属离子优选钙，有优选 N, N， -二苄基乙二胺。

本发明化合物可按如下方法制备：

M为有机碱基的制备方法：由 L~3-正丁基苯酞（可按现有公知技术所述方法制备，例如中国专利申请 99109673. 8 )緘性条件下水解，再酸化得到 L~2 - ( α-羟基戊基）苯曱酸，溶于低极性溶剂后与有机碱的溶 '紘，分离反应产物，即得到白色固体状的本发明化合物中有 ^的盐。上述所用低极性溶剂包括苯类（如甲苯）、乙醚、二氯曱烷、乙酸乙酯，优选乙醚。

Μ为一价金属离子的制备方法： L_2 - ( α-羟基戊基）苯甲酸溶于强极性溶剂后与金属离子的碱反应成盐，然后搅拌下加入低极性溶剂，分离反应产物，即得到白色固体状的本发明化合物中一价金属离子的的盐。上述所用强极性溶剂包括 C1-C4低级醇类，优选曱醇，低极性溶剂包括苯类（如甲苯）、乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯，优选乙醚。

Μ为二价金属离子的制备方法：用已制备好的 2 - ( α-羟基戊基）苯曱酸一价金属离子盐的溶液，与二价金属离子盐的溶液混合，进行盐交换反应，制得二价金属离子的 L-2 - ( α-羟基戊基）苯曱酸盐。适合的溶剂包括常见的极性溶剂，如水和醇类，优选水和 CI- C4低级醇类如曱醇、乙醇。

本发明人发现本发明的化合物尤其是优选的化合物具有如下优异的性能：

1、具有良好的物理形态，便于制药工业加工成合适的制剂形式。

2、只需简单的后处理即可达到药用纯度。

3、稳定性实验表明本发明的化合物非常稳定，与已公开的 DL-2 - ( α-羟基戊基）苯甲酸盐相比，本发明的化合物更加稳定。

4、动物急性毒性试脸表明本发明的化合物与已公开的 DL-2 -( α- 羟基戊基）苯曱酸盐相比，毒性更小。

5、在动物药效模型试验中，与已公开的 DL~3 -正丁基苯酞、 DL-2 - ( α-羟基戊基）苯甲酸盐及 3 -正丁基苯目比，本发明的化合物对大脑中动脉阻塞引起的脑组织损伤显示出更加优异的保护作用，表现在可使大脑中动脉血栓模型大鼠的神经症状明显改善，梗塞面积明显减少，并能明显抑制大鼠动 -静脉旁路血栓形成，说明本发明化合物可有效抑制血栓形成，对心脑缺血性疾病具有较好的预防和治疗作用。

6、在对大脑中动脉血栓模型大鼠神经症状及脑梗塞范围的影响试验中，与已公开的 DL-3 -正丁基苯酞、 DL- 2 - ( α-羟基戊基）苯曱酸盐相比，本发明的化合物具有更小的显著性疗效剂量，即在较低剂量下，即可表现出显著性的效果。

本发明的药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物为活性成份，以及含有一种或多种药学上可以接受的载体。上文所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体（也称为辅料），其中固体制剂常用的辅料包括填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯醇吡咯坑酮；湿润剂如乙醇、水；崩解剂如淀粉及其衍生物如羧曱基淀粉钠（CMS- Na )、低取代羟丙基纤维素（LS-HPC )、交联聚乙烯吡咯烷酮（PVPP )、交联羧甲基纤维素钠 ( CCMC- Na )等以及泡腾崩解剂；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂黏土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁；另外还可在组合物中加入其它辅助剂如香味剂、甜味剂等。液体制剂的辅料包括注射用水，以及 pH调节剂如氢氧化钠，还有其他辅料如等渗调节剂等，本领域技术人员，可按照药学领域的液体制剂常规制备方法合理选择常用的辅料种类和用量，使最终产品符合常规静脉注射剂或静脉注射用冻干剂的要求。

本发明的化合物和药物组合物可用于制备预防和治疗心脑缺血性疾病，抗血栓、改善心脑循环障碍等的药物。

本发明药物组合物的各种剂型可以由本领域技术人员，按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型，包括片剂、胶袭、颗粒剂，本发明化合物中水溶性的盐还可以由本领域技术人员，按照药学领域的静脉注射剂常规生产方法制成静脉注射剂、静脉注射冻干剂等。

具体实施方式

下面的实施例可帮助本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明的保护范围。

实施例 1 : L-2- (a-羟基戊基)苯曱酸的制备

在反应瓶中加入 L-3-正丁基苯酞 l OOg ( 0. 53mol， [ ot ] _D ²°=-67. 8。， c=4. 0, 氯仿）、曱醇 300ml， NaOH 40 g和水 50 ml , 回流 8小时后，减压除去曱醇后再补加 200ml水，冷却。搅拌下滴加浓度为 2M的盐酸，调 PH=2-3。用乙醚萃取，萃取液用水洗，干燥，过滤，减压将乙醚抽干，得白色固体 100g，收率为： 91%。

实施例 2: L-2- (a-羟基戊基)苯甲酸钠盐的制备

在反应瓶中加入 NaOH 4. Og ( 0. 1 mol )、曱醇 50ml , L-2- (α-羟基戊基）苯曱酸 21g ( 0. lmol ), 室温搅拌 2小时，分批加入 1000 ml 乙醚，析出白色油状物，搅拌 2小时后静置，倾出上层清液，油状物减压蒸干，得白色泡沫状 L-2- (a-羟基戊基)苯甲酸钠盐。

实施例 3: L-2- ( a-羟基戊基）苯曱酸钾盐的制备

(1)取 21.5gKOH(0.38mol)溶于 100ml甲醇中，然后分批加入 lOOg ( 0.48mol ) L-2- (α-羟基戊基）苯曱酸， 1小时加完；加毕，继续搅拌 2小时，然后慢慢倒入 4升乙醚溶液中，立即有白色固体析出，加毕，继续搅拌 2小时，过滤，真空干燥得白色固体。收率 57.8%。 m. p. : 151.5-152· 5"C, 旋光 [ c ] _D ²°=+15.66。（c=l.0，曱醇）。

( 2 )按照（ 1 )的操作，只将甲醇换成等体积乙醇，得白色粉末状固体 50g，收率 53.5%， m. p.： 150.0-152.0"C_o

(3)按照（1)的操作，将乙醚换成等体积的曱苯、二氯曱烷、乙酸乙酯，收率均有所下降。

红外吸收光语： KBr, 3205 cm"¹ (γ。_Η) ， 3060 cm"¹ ( γ Ar- H)， 1603、

1400 cm"¹ ( γ coo)

核磁共振氢谱：（ 600MHz, DMS0 ) δ ( ppm ) 7.0530-7.6688 (m, 4H, Ar-H) , 4.3159-4.3260 (m, 1H, -CH-) , 1.6005-1.7528 (dt， 2H, 一 CH厂）， 1.0629-1.3066 (m, 4H, -CH -CH₂-) , 0.793-0.8172 (t， 3H， -CH₃) ESI-MS: Negative M/Z 207

元素分析： C₁₂H₁₅K0₃ FW246.35 c H

理论值％ 58.51 6.14

实测值％ 58.60 6.10 实施例 4: L-2- (α-羟基戊基）苯曱酸钙盐的制备

取 L-2- (α-羟基戊基）苯甲酸钟盐 100g ( 0.41mol ), 溶于 500ml 水中，另取 22g CaCl₂ ( 0.2mol )溶于 300ml水中，放冷，然后将 CaCl₂ 水溶液在搅拌下慢慢滴入到 L- 2- ( α-羟基戊基）苯甲酸钾盐的水溶液中 , 1小时加完，加毕，继续搅拌 2小时；过滤，抽干后，真空干燥得 60g白色固体，收率 68.2%，m.p. : 236"C以上分解，旋光 [ct]_D ²°=+49.5 。 (c=l.0, DMSO)。

红外吸收光谱: KBr, 3305 cm— ¹ (ΥΟΗ)， 3064 cm"¹ (vAr-H), 1604, 1412 cm"¹ ( v coo)

核磁共振氢 i普： ( 600MHz, DMSO ) δ ( ppm ) 7.1284-7.7728 (m, 4H, Ar-H) ， 4.4784 ( t， 1H， -CH- ) ， 1.6385-1.6955 (m, 2H, -CH2-) ， 1.1218-1.3227 (m， 4H， -CH2CH2-)， 0.7795-0.8036 (t, 3H, -CH3)

ESI— MS: Negative M/Z 207

元素分析： C₂₄H₃oCa0₆ FW454.57 c H

理论值％ 63.41 6.65

实测值％ 63.50 6.61 实施例 5: L- 2- (α-羟基戊基）苯曱酸 N， N， -二苄基乙二胺盐的制

取 L-2- (α-羟基戊基）苯甲酸 100g ( 0.48mol )溶于 500ml无水乙醚中，另取 N， N， -二苄基乙二胺 43g (0.19mol)溶于 500ml无水乙醚中，然后将胺的乙醚液在搅拌下慢慢加入酸的乙醚液中，生成白色沉淀，加毕继续搅拌 2小时，过滤，乙醚（ 200ml X 3) 洗涤，真空干燥，得白色固体 68g, 收率 54.5%。 m. p.： 80.5-82. 旋光 [ot]_D ²°= -5.83° (c=l.0, 曱醇）。

红外吸收光谱: KBr, 3410 cm"¹ (γ_ΝΗ), 3317 cm¹ (γ。„) ， 3030、 3060 cm"¹ ( γ Ar-H) ， 1603、 1392 cm—¹ ( γ COO)。

核磁共振氢语：（ 600MHz, CD₃C1) δ (ppm) 7.2516—7.9151 (m， 18H)，

4.6634-4.6871 ( t， 2H，两个 — CH- ) 3.8889-3.9332 (t, 4H, 两个 Ar-CH₂), 3.0159-3.0319 (t, 4H, N-CH₂CH -N) , 1.8322-2.0543 ( m, 4H, 两个 -CH₂-)， 1.3070-1.44569 (m, 8H, 两个 -CH₂CH₂-)， 0.8551-0.9335 (m, 6H, 两个 -CH₃)

ESI-MS: Negative M/Z 207

Positive M/Z 241

r 、

元素分析： C₄„H₅₂N₂0₆ FW656.86

实施例 6: L-2- (a-羟基戊基）苯曱酸叔丁胺盐的制备

将 L- 2- ( α-羟基戊基 )苯甲酸 20g ( 0.096mol )溶于 50ml无水乙醚中，另取 7g ( 0.096mol )新蒸的叔丁胺溶于 50ml无水乙醚中，然后将叔丁胺溶液在搅拌下慢慢加入到酸的乙醚溶液中，立即有针状晶体出现，加毕，继续搅拌 1小时，过滤，乙醚洗涤，真空干燥得 20g白色针状晶体，收率 74%, m. p. : 125.5 — 127.0 ，旋光 [o ]_D ²°=+15.3。（c=1.0，曱醇）。

元素分析： C₁₆H₂₇N0₃ FW281.40

实施例 7: L- 2- (α-羟基戊基）苯曱酸苄胺盐的制备

将 L-2-(a -羟基戊基）苯甲酸 25g(0.120mol )溶于 700ml乙醚中，加入苄胺 12.8g (0.120mol)，室温搅拌 10分钟后析出白色固体，继续搅拌 2小时。抽滤，滤饼用乙醚洗，抽干，干燥得 35g白色固体，收率: 93%, m. p. : 98. 0-99. 0"C , 旋光 [ ot ] _D ²°=+l l. 0。 ( c=l. 0, 甲醇）。

元素分析： C₁₉H₂₅N0₃ FW315. 42

实施例 8: L-2- ( α-羟基戊基）苯甲酸锌盐的制备

在烧杯中加入 47. 5g ( 0. 193mol ) L-2- ( α -羟基戊基）苯曱酸钾盐和 95ml水，搅拌下全溶。将 13. 2g ZnCl₂ ( 0. 096mol )溶于 125ml水中，冷却至室温，分批加入到搅拌着的钾盐水溶液中，立即析出白色粘稠固体，室温搅拌 2小时抽滤，抽滤困难，滤饼白色粘稠固体，真空干^ 为白色胶状固体。

实施例 9: L-2- ( α-羟基戊基）苯曱酸镁盐的制备

在烧杯中加入 47. 5g ( 0. 193mol ) L-2- ( α -羟基戊基)苯甲酸钾盐和 95ml水，室温搅拌下全溶。将 11. 5g MgS0₄ ( 0. 096mol )溶于 125ml 水中，冷却至室温，分批加入到搅拌着的钾盐水溶液中，析出白色粘稠固体，搅拌 2小时抽滤，滤饼为白色粘稠固体，真空干;^为白色泡沫状固体。

实施例 10: L-2- ( a-羟基戊基）苯曱酸锂的制备

在反应瓶中加入 LiOH 2. 0g ( 0. 085 mol )、甲醇 50ml、 2- ( a -羟基戊基）苯曱酸 21g ( 0. lmol )，室温搅拌 1小时，分批加入 1000 ml 乙醚，析出大量白色粘稠物，搅拌 2小时后过滤抽干，将粘稠物用乙醚洗涤，抽滤，滤饼放到真空干燥器中干燥，得白色泡沫状固体。

小结：钠盐、锂盐、镁盐、锌盐均为泡沫状或胶状固体，无明显的熔点。钾盐、钙盐、苄胺盐、 N， N， -二苄基乙二胺盐、叔丁胺盐有良好的外观物理形态和固定的熔点。

实施例 11: 水溶液稳定性

将各化合物溶于水中，制成 0. 2mg/ml的溶液，测定一定时间后分解产物的量，结果见表 1。表 1 水溶液稳定性比较

*: 实施例中所用 DL- 2- (α-羟基戊基）苯曱酸盐均按照 CN1382682A 的方法制备，下同。

分解产物的测定采用 HPLC方法，按照中国药典 2000版二部附录 VD 试验， C18柱，流动相乙腈： 0.021 磷酸二氢钠-40:60，检测波长 220nm, 流速 lml/min。

从结果可以看出， L- 2- (α-羟基戊基）苯曱酸钾盐，其水溶液稳定性明显好于 DL- 2 - (α-羟基戊基）苯甲酸钾盐。

实施例 12: 湿稳定性

将 L- 2- (α-羟基戊基）苯曱酸的钾盐、钙盐、 Ν， Ν，-二苄基乙二胺盐和 DL-2 - (α-羟基戊基）苯曱酸钟盐、钙盐，按照中国药典 2000版二部附录 XIX C "药物稳定性指导原则" 项下 "高湿度试验方法" 所述方法试验，时间为 10天。纯度的测定采用 HPLC方法，按照中国药典 2000 版二部附录 V D试脸， C18柱，流动相乙腈： 0.0214磷酸二氢钠=40:60, 检测波长 220nm, 流速 lml/min₀

实验结果表明， L- 2- (α-羟基戊基）苯曱酸的钾盐、钙盐及 DL-2 - (α -羟基戊基）苯曱酸钾盐在湿度条件下均有吸湿，但是与 DL-2- (α- 羟基戊基）苯甲酸钟盐吸湿后分解严重相比， L-2- (α-羟基戊基）苯曱酸钟盐、钙盐吸湿后分解程度要小的多。 L-2- (α-羟基戊基）苯甲酸的 Ν, Ν，- 二苄基乙二胺盐基本不吸湿而且稳定。

实施例 13: 光照稳定性

按照中国药典 2000版二部附录 XIX C "药物稳定性指导原则" 项下 "光照稳定性试验方法" 所述方法试验，时间为 10天，纯度的测定釆用 HPLC方法，按照中国药典 2000版二部附录 V D试验， C18柱，流动相乙腈：0.021 磷酸二氢钠=40:60，检测波长 220nm, 流速 lml/min。结果表明本发明的 L- 2- (α-羟基戊基）苯甲酸钾、钙以及 Ν， Ν，-二苄基乙二胺盐均未检出分解产物，说明对光照稳定性艮好。

实施例 14: 热稳定性

按照中国药典 2000版二部附录 XIX C "药物稳定性指导原则" 项下 "热稳定性试验方法"所述方法试脸，温度为 60"C, 时间为 10天，纯度的测定采用 HPLC方法，按照中国药典 2000版二部附录 VD试验， C18 柱，流动相乙腈： 0.021 磷酸二氢钠=40:60, 检测波长 220nm，流速 lml/min₀ 结果表明本发明的 L- 2- (α-羟基戊基）苯曱酸钟、钙均未检出分解产物，说明对热稳定性很好， Ν, Ν，-二苄基乙二胺盐略有分解。

实施例 15: 片剂成分数量（mg/片）

L-2- ( α-羟基戊基）苯甲酸盐 100

淀粉 50

微晶纤维素 35

硬脂酸镁 2

羧曱基纤维素钠 5 制备方法：按配比将活性成分、淀粉、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠混匀，用水润湿，制颗粒，干燥，整粒，加入硬脂酸镁，混匀后将混合物压片即得本品片剂。

实施例 16: 胶袭剂

制备方法：按配比将活性成分和辅料混勾，湿法制颗粒，干燥，整粒，加入硬脂酸镁，混匀后将混合物按定量装入胃溶性硬胶囊中，即得本品胶囊剂。

实施例 17: 颗粒剂成分数量（mg/包）

L-2- ( α-羟基戊基）苯曱酸盐 100

淀粉 1000

糊精 150

糖粉 150

制备方法：按配比将活性成分和辅料混匀后湿法制粒，干燥，整粒分级，分剂量包装，即得本品颗粒剂。

实施例 18: 静脉注射剂

制备方法：将水溶性 L- 2- ( α-羟基戊基）苯曱酸盐溶于适量的注射用水中，加适量氢氧化钠，将 pH调至 9. 0 (范围可以在 7. 5-9. 5之间），根据需要添加适量氯化钠，在无菌条件下装入瓶中，灭菌，即得本品静脉注射液。

实施例 19: 静脉注射冻干剂成分数量

L-2- ( α-羟基戊基）苯曱酸盐 l OOmg/瓶

氢氧化钠适量

甘露醇适量制备方法：将水溶性 L- 2- ( α-羟基戊基）苯曱酸盐溶于适量的注射用水中，加适量氢氧化钠，将 ρΗ调至 9. 0 (范围可以在 7. 5-9. 5之间），根据需要添加适量甘露醇，过滤，装瓶冻干，即得本品静脉注射冻干剂。使用时用 0. 9%生理盐水或 5%葡萄糖注射液稀释后进行静脉注射或静脉点滴。

实施例 20: 急性毒性试验

本实施例选用：

一、动物

ICR小鼠，雌雄各半，体重 18-20g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。合格证号为： SCXK (京） 2002-0003。

二、受试药

L-3-正丁基苯酞、 L-2- ( α-羟基戊基）苯曱酸钾盐、钙盐、 Ν， Ν，- 二苄基乙二胺盐， DL- 3-正丁基苯酞、 DL- 2- ( α -羟基戊基）苯甲酸钾盐、钙盐，由北京天衡药物研究院提供，试验前用食用色拉油混悬，配制成不同浓度。

三、试验方法

取 ICR小鼠，按体重和性别随机分组，每组 10只，雌雄各半，根据预试验结果,按组间距 1: 0. 8设计各组剂量。经口灌胃，给药容量为 0. 2ml /10g体重，试验前禁食不禁水 12小时，给药后常规饲养，连续观察 7 天，记录动物毒性反应和死亡情况，死亡组进行尸检，肉眼观察病理变化，用 Bliss法计算 LD₅。值及 95%可信限。

四、试验结果

结果显示， L-3-正丁基苯酞的急性毒性弱于 DL-3-正丁基苯酞， L-2- (α -羟基戊基）苯甲酸钟盐、钙盐的急性毒性均分别弱于 DL- 2- (α -羟基戊基）苯曱酸钟盐和钙盐，见表 2。表 2 急性毒性试验结果

化合物名称 LD₅。值（ g/kg ) 95%可信限 ( g/kg )

L-3-正丁基苯酞 2.4264 2.2237 - -2.6476

L-2- (α-羟基戊基）苯曱酸钾盐 2.8561 2.3522 - - 3.4681

L-2- (α-羟基戊基）苯曱酸钙盐 2.3427 2.1241 - -2.5839

L-2- (α-羟基戊基）苯曱酸 Ν, Ν，-二苄基乙

2.5560 2.2645 - -2.8849 二胺盐

DL-3-正丁基苯酞 2.1387 1.9082 - -2.3971

DL-2- (α-羟基戊基）苯曱酸钟盐 1.2840 1.1873 - ' 1.3886

DL-2- (α-羟基戊基）苯曱酸钙盐 1.4311 1.2788 - -1.6015

实施例 21: 对大脑中动脉血栓模型（Middle Cerebral Artery

Thrombosis, MCAT) 大鼠神经症状及脑梗塞范围的影响

本实施例选用：

一、动物

SD大鼠，雌雄兼用，体重 190~ 250g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号为： SCXK (京） 2002-0003。二、药物与试剂

受试药： L-3-正丁基苯酞、 L-2- ( α-羟基戊基）苯曱酸钾盐、钙盐、 Ν, Ν，-二苄基乙二胺盐， DL- 3-正丁基苯酞、 DL- 2- ( α-羟基戊基）苯曱酸钾盐、钙盐，由北京天衡药物研究院提供，试脸前用食用色拉油混悬，配制成不同浓度。

试剂： FeCl₃-6H₂0 ( A. R. )，北京化工厂生产，用 lmol/L盐酸配制；红四氮唑（TTC )，（C. P. ), 批号： 030227，北京化学试剂公司提供。

三、仪器

XTT实体显微镜：北京电光科学仪器厂生产；恒温水浴振荡器 SHZ-22 型：江苏大仓医疗器械厂生产；电子分析天平： AEG- 220 型，日本岛津产。

四、试验方法及结果

(一）对 MCAT大鼠神经症状的影响

1、分组及给药：将实验动物随机分成以下各组，即假手术组， MCAT 模型组， L- 3-正丁基苯酞、 L-2- ( α-羟基戊基）苯甲酸钾盐、钙盐、 Ν， Ν，-二苄基乙二胺盐， DL-3-正丁基苯舦、 DL- 2- ( α-羟基戊基）苯甲酸钟盐、钙盐各 50mg/kg、 100mg/kg和 200mg/kg组。造模前预防给药，每天濯胃给药 1次，连续给药 3天，第 4天造模，造模后即刻灌胃给予一天剂量。造模后 12小时再璀胃给予一天剂量，对照组给予等量溶媒。

2、实施造模手术：大鼠腹腔注射 12 %水合氯醛溶液（ 350mg/kg ) 麻醉。参照 Tamura等的方法 ( Tamura A, Graham DI , McCul luoch J et al. Focal Cerebral i schemia in the rat. 1. Description of technique and early neuropathological consequences fol lowing middle cerebral artery occlus ion. J Cereb Blood Flow Metab, 1981， 1： 53 )并加以改进，将大鼠右侧卧位固定，在眼外眦和外耳道连线中点作一弧形切口，长约 1. 5cm，夹断颞肌并切去，暴露颞骨，用牙科钻在颧骨与颞鱗骨接合处向口侧 1隱处作一直径为 2. 5隱的骨窗，清理残渣，暴露大脑中动脉（位于嗅束及大脑下静脉之间）。将吸有 50 %氯化铁溶液 ( lmol/L盐酸） ΙΟμΙ的小片定量滤纸敷在此段大脑中动脉上，约 30min 待血管颜色变黑后取下滤纸，用生理盐水冲洗局部组织，逐层缝合，回笼饲养。

3、行为检测：参照 Bederson等的方法（Bederson JB， Pi tts LH， Tsuj i M et al. Rat middle cerebral artery occlus ion: evaluation of the mode and development of a neurologic examinat ion. Stroke, 1986， 17： 472 )并加以改进，在术后不同时间点（6h， 24h )对动物进行行为评分。（1 )提鼠尾离开地面约一尺，观察前肢屈曲情况。如双前肢对称伸向地面，记为 0分；如手术对侧前肢出现肩屈曲、肘屈曲、肩内旋或既有腕肘的屈曲又有内旋者，记为 1分。（2 )将动物置于平滑地面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力记为 0 分；如向手术对侧推动时阻力下降者，记为 1分。（3 )将动物两前肢置一金属网上，观察两前肢的肌张力。双侧肌张力对等且有力者为 0分; 手术对侧前肢肌张力下降记为 1分。（4 )提鼠尾离开地面约一尺，动物有不停地向手术对侧旋转者，记为 1分，否则记为 0分。根据以上标准评分，满分为 4分，分数越高，动物的行为障碍越严重。

4、结果分析：对行为检测评分值进行组间比较， t检验。结果见表

3₀ 表 3 各化合物对 MCAT大鼠神经症状的影响

注：与模型组比较， … P<0. 001 , '· P<0. 01 , ' P<0. 05。

结果显示，假手术组未见行为异常改变，模型组大鼠在术后 6h、 24h 均出现偏瘫样症状，主要表现为手术对侧前肢内收，肩内旋，前肢肌张力降低，肩抗力下降。与模型组相比，化合物 L- 2- ( α-羟基戊基）苯曱酸钾盐、钙盐和 Ν, Ν，-二苄基乙二胺盐 50-200mg/kg组大鼠在术后 24h 的神经症状均显著改善（P<0. 05， P<0. 01或 P<0. 001 ), 并有明显的量效关系。其中 L- 2- ( α-羟基戊基）苯甲酸钾盐对 MCAT大鼠神经症状的改善作用强于 Ν， Ν，-二苄基乙二胺盐和钙盐。此外，从 24小时抑制作用百分比的数值来看，相同剂量下， L- 2- ( α-羟基戊基）苯曱酸钟盐、钙盐对 MCAT大鼠神经症状的改善作用均分别强于 DL- 2- ( α-羟基戊基）苯曱酸钾盐和钙盐。 L-2- ( α-羟基戊基）苯甲酸钾盐、钙盐，与 D 3 -正丁基苯酞及 L-3 -正丁基苯 Ι 目比，对 MCAT大鼠神经症状的改善作用更强。

结果提示， L-2- ( α-羟基戊基）苯甲酸盐系列化合物对缺血性脑损伤引起的肢体张力改变有明显的改善作用，与已公开的 D 3 -正丁基苯酞及 DL-2- ( α-羟基戊基）苯甲酸盐相比，本发明的化合物具有更小的显著性疗效剂量，即在较低剂量（50mg/kg )下，本发明的化合物即可表现出显著性效果。

(二）对 MCAT大鼠脑梗塞范围的影响

动物经末次行为评分后，断头取脑。去掉嗅球、小脑和低位脑干，剩余部份在 4°C以下冠状切成 5片。迅速将脑片置于 TTC染液中（每 5ml 染液中含 4 % TTC1. 5ml , 1M K₂HPO₄0. lml )， 37°C避光温孵 30分钟，再取出，置于 10 %曱醛液中避光保存。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占总脑重量的百分比作为脑梗塞范围。对结果进行组间比较， t检验，结果见表 4。表 4 各化合物对 MCAT大鼠脑梗塞范围的影响

注：与模型组比较， ··· P<0. 001， " P<0. 01 , · Ρ<0. 05。结果显示，术后 24h除假手术组无梗塞灶外，模型组和给药组大鼠均有不同程度的梗塞灶。与模型组相比，化合物 L- 2-（ α-羟基戊基）苯曱酸钾盐、钙盐和 Ν， Ν，-二苄基乙二胺盐 50-200mg/kg组大鼠脑梗塞程度均明显改善（P<0. 05 , P<0. 01或 P<0. 001 )，并有明显的量效关系。其中， L- 2- ( α-羟基戊基 )苯甲酸钾盐对 MCAT大鼠脑梗塞的改善作用强于 Ν, Ν，-二苄基乙二胺盐和钙盐。此外，从作用抑制百分比的数值来看，相同剂量下， L- 2- ( α-羟基戊基）苯曱酸钾盐、钙盐对 MCAT大鼠脑组织梗塞的改善作用均分别强于 DL- 2- ( α-羟基戊基）苯曱酸钟盐和钙盐。

L-2- ( α-羟基戊基）苯曱酸钟盐、钙盐，与 DL~3 -正丁基苯酞及 L~3 - 正丁基苯 S 目比，对 MCAT大鼠脑组织梗塞的改善作用更强。

结果提示， L-2- ( α-羟基戊基）苯甲酸盐系列化合物对缺血性脑损伤引起的脑组织梗塞有明显改善作用，与已公开的 DL~3 -正丁基苯酞及 DL- 2- ( α-羟基戊基）苯曱酸盐相比，本发明的化合物具有更小的显著性疗效剂量，即在较低剂量（50mg/kg )下，本发明的化合物即可表现出显著性效果。

实施例 22 : 对大鼠动 -静脉旁路血栓形成的影响

本实施例选用：

一、动物

SD大鼠，雌雄兼用，体重 220 ~ 260g, 由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号： SCXK (京） 2002-0003。

二、药物与试剂

受试药： L-3-正丁基苯酞、 L- 2- ( α-羟基戊基）苯曱酸钾盐、钙盐、 Ν, Ν，-二苄基乙二胺盐，由北京天衡药物研究院提供，试验前用食用色拉油混悬，配制成不同浓度。

天保宁：批号： 031002，浙江康恩贝制药股份有限公司生产。

三、仪器

AEG-220型电子分析天平，日本岛津仪器公司产品； Df- 206型鼓风干燥箱，北京西城医疗器械厂产品。

四、试验方法与结果

试验方法参考陈奇主编，《中药药理研究方法学》，人民卫生出版社，

1993. 9 , 第 1版， 510 1、分组与给药

将大鼠随机分成以下各组，即血栓模型组， L- 3-正丁基苯酞、 L-2- ( α -羟基戊基）苯曱酸钾盐、钙盐、 Ν， Ν，-二苄基乙二胺盐 50mg/kg、 100mg/kg, 200mg/kg组，天保宁 24mg/kg组。每天灌胃给药 1次，连续给药 3天，血栓模型组给予等量溶媒。末次给药后即进行手术。

2、造模方法

将大鼠腹腔注射 10%7j合氯酪 0. 35ml/100g麻醉，仰卧位固定，手术，分离右颈总动脉和左颈外静脉。在 10cm长的聚乙烯管中段^ A—根事先称重的长 8cm的 0号手术线，以生理盐水溶液充满，两端联结长约 3cm充满生理盐水的插管。该管的一端插入左颈外静脉后，另一端插入右颈总动脉。血液从右侧颈总动脉流至聚乙烯管内，再返流入左颈外静脉，构成环路血流。 l Omin后中断血流，迅速取出血栓称重，该重量减去丝线重、纸重即血栓湿重；放入烘箱中 60°C干燥 24h, 取出血栓称重，该重量减去丝线重、纸重即血栓干重。各组间采用 t-检验进行比较。按下列公式计算抑制率：模型组血栓重量―给药组血栓重量 ^， _mn/ 抑制率 = 模型组血栓重量 ^{X l 00 /o}

3、试验结果

结果见表 5。表 5 各化合物对大鼠动一静脉环路血栓的抑制作用（ ±SD )

注：与血栓模型组相比， '··Ρ<0.001, ' Ρ<0.01, Ρ<0.05。

结果显示， L- 2- (α-羟基戊基）苯甲酸钾盐、钙盐和 Ν， Ν，-二苄基乙二胺盐在 50-200mg/kg剂量范围内均有抑制血栓形成的作用。与血栓模型组相比，各组大鼠的血栓湿重和干重均显著减少（P<0.05, P<0.01 或 P<0.001)。

结果提示，上述 L- 2- (α-羟基戊基）苯曱酸钾盐、钙盐和 Ν， Ν，-二苄基乙二胺盐对大脑中动脉血栓模型大鼠神经症状及脑梗塞范围的明显改善作用可能与其对血栓形成的抑制作用有关。

Claims

权利要求

1、 L-2- ( α-羟基戊基）苯曱酸盐，其结构通式如下:

其中， η=1或 2， Μ选自一价金属离子、二价金属离子、或有^ tt。

2、如权利要求 1中所述的 L- 2- ( α-羟基戊基）苯甲酸盐，其特征是 Μ为选自锂、钠、钾的一价金属离子，或选自镁、钙、锌的二价金属离子，或选自苄胺、叔丁胺、 N， N' -二苄基乙二胺的有机碱基。

3、如权利要求 1中所述的 L-2- ( α-羟基戊基）苯曱酸盐，其特征是 Μ选自钾离子、钙离子、 Ν, N' -二苄基乙二胺。

4、权利要求 1的 L- 2- ( α-羟基戊基）苯甲酸盐的制备方法，其中 Μ 为有机碱基，其方法包括：

a) L-3-正丁基苯狀在碱性条件下水解，

b) 酸化步驟 a)所得产物，得到 L- 2 - ( α-羟基戊基）苯曱酸， c) L-2 - ( α-羟基戊基）苯曱酸溶于低极性溶剂后与有机碱的溶液反应，

d) 分离步骤 c)所得产物，得到权利要求 1的 L- 2- ( α-羟基戊基 ) 苯曱酸盐，其中 Μ为有机碱基，

其中所述低极性溶剂包括苯类、乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯。

5、权利要求 1的 L-2- ( α-羟基戊基）苯曱酸盐的制备方法，其中 Μ 为一价金属离子，其方法包括：

a) L- 3-正丁基苯酞在碱性条件下水解，

b) 酸化步骤 a)所得产物，得到 L-2 - ( α-羟基戊基）苯曱酸， c) L-2 - ( α-羟基戊基）苯曱酸与溶于强极性溶剂的金属离子的碱反应，然后搅拌下加入低极性溶剂，

d) 分离步骤 c)所得产物，得到权利要求 1的 L- 2- ( α-羟基戊基 ) 苯曱酸盐，其中 Μ为一价金属离子，

其中所述强极性溶剂包括 C1-C4低级醇类，所述低极性溶剂包括苯类、乙醚、二氯曱烷、乙酸乙酯。

6、权利要求 4或 5中所述的制备方法，其特征是低极性溶剂为乙醚，强极性溶剂为甲醇。

7、权利要求 1的 L-2- ( α-羟基戊基）苯曱酸盐的制备方法，其中 Μ 为二价金属离子，其特征是，用已制备好的一价金属离子的 L- 2 - ( α- 羟基戊基）苯甲酸盐的溶液，与二价金属离子盐的溶液混合，进行盐交换反应，制得二价金属离子的 L- 2 - ( α -羟基戊基）苯甲酸盐。

8、权利要求 1 中所述的 L-2- ( α-羟基戊基）苯甲酸盐在制备用于治疗和预防心、脑缺血性疾病及改善心脑循环障碍、抗血栓的药物中的应用。

9、一种用于治疗和预防心脑缺血性疾病及改善心脑循环障碍、抗血栓的药物组合物，其特征是含有治疗有效量的权利要求 1的化合物和药学上可接受的载体。

10、如权利要求 9中所述的药物组合物，其特征是可以制成片剂、胶袭剂、颗粒剂、静脉注射剂和静脉注射冻干剂。