WO2005118613A2 - Antibakterielle amid-makrozyklen - Google Patents

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WO2005118613A2
WO2005118613A2 PCT/EP2005/005223 EP2005005223W WO2005118613A2 WO 2005118613 A2 WO2005118613 A2 WO 2005118613A2 EP 2005005223 W EP2005005223 W EP 2005005223W WO 2005118613 A2 WO2005118613 A2 WO 2005118613A2
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WO
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hydrogen
methyl
amino
independently
formula
Prior art date
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PCT/EP2005/005223
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English (en)
French (fr)
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WO2005118613A3 (de
Inventor
Rainer Endermann
Kerstin Ehlert
Siegfried Raddatz
Yolanda Cancho-Grande
Martin Michels
Christoph Freiberg
Joachim Schuhmacher
Stefan Weigand
Original Assignee
Aicuris Gmbh & Co.Kg
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Aicuris Gmbh & Co.Kg filed Critical Aicuris Gmbh & Co.Kg
Publication of WO2005118613A2 publication Critical patent/WO2005118613A2/de
Publication of WO2005118613A3 publication Critical patent/WO2005118613A3/de

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents

Definitions

  • the invention relates to antibacterial amide macrocycles and processes for their preparation, their use for the treatment and / or prophylaxis of diseases, and their use for the production of medicaments for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular bacterial infections.
  • WO 03/106480 and WO 04/012816 describe antibacterial macrocycles of the biphenomycin B type with amide or ester substituents.
  • An object of the present invention is therefore to provide new and alternative compounds with the same or improved antibacterial activity for the treatment of bacterial diseases in humans and animals.
  • the invention relates to compounds of the formula
  • R 1 is a group of the formula
  • R 7 is hydrogen or hydroxy, which is the point of attachment to the carbon atom
  • R is hydrogen, methyl or ethyl
  • R is a group of the formula
  • R 8 is hydrogen, amino or hydroxy
  • R 9 is hydrogen, methyl or a group of the formula
  • R 20 is hydrogen or * - ⁇ CH 2 ) r NHR 22 , wherein
  • R 22 is hydrogen or methyl and f is a number 1, 2 or 3,
  • R 21 is hydrogen or methyl, d is a number 0, 1, 2 or 3 and e is a number 1, 2 or 3,
  • R 10 is hydrogen or aminoethyl
  • R ⁇ and R 15 independently of one another * - (CH 2 ) Z ⁇ -OH, * - (CH 2 ) Z2 -NHR 16 , hydroxycarbonyl, aminocarbonyl, hydroxycarbonylmethyl, aminocarbonylmethyl, * -CONHR 17 or * -CH 2 CONHR 18 , wherein
  • ZI and Z2 are independently a number 1, 2 or 3, R 16 is hydrogen or methyl and
  • R 8a is hydrogen, amino or hydroxy
  • R 9a is hydrogen, methyl or aminoethyl
  • R 10a is hydrogen or aminoethyl, or
  • R 9a and R 10a together with the nitrogen atom to which they are attached form a piperazine ring
  • R 11a and R 15a are independently of one another * - (CH 2 ) Z ⁇ a -OH, * - (CH 2 ) Z2a - NHR I6 , hydroxycarbonyl, aminocarbonyl, hydroxycarbonylmethyl or aminocarbonylmethyl, in which the point of attachment to the carbon atom is
  • R, 16a a is hydrogen or methyl
  • Zla and Z2a are independently a number 1, 2 or 3,
  • R a and R a are independently hydrogen or methyl
  • R13a a is amino or hydroxy
  • ka is a number 0 or 1
  • la, wa, xa and ya are independently a number 1, 2, 3 or 4,
  • R 12 and R 14 independently of one another are hydrogen, methyl or a group of the formula
  • R 20a is hydrogen or * - (CH 2 ) fa -NHR 22a , in which R 2 a is hydrogen or methyl and fa is a number 1, 2 or 3,
  • R 21a is hydrogen or methyl, since a number is 0, 1, 2 or 3 and ea is a number 1, 2 or 3,
  • R 13 is amino or hydroxy
  • R 19 is a group of the formula
  • R, 8b is hydrogen, amino or hydroxy
  • R is hydrogen, methyl or aminoethyl
  • R is hydrogen or aminoethyl
  • R 9b and R 10b together with the nitrogen atom to which they are attached form a piperazine ring
  • R nb and R 15b are independently of one another * - (CH 2 ) zlb -OH, * - (CH 2 ) Z2b -NHR 16b , hydroxycarbonyl, aminocarbonyl, hydroxycarbonylmethyl or aminocarbonylmethyl, in which the point of attachment to the carbon atom is
  • R is hydrogen or methyl
  • Zlb and Z2b are independently a number 1, 2 or 3,
  • R »12b and R, 14b are independently hydrogen or methyl
  • R, 13b is amino or hydroxy
  • kb is a number 0 or 1
  • lb, wb, xb and yb are independently a number 1
  • k and t are independently a number 0 or 1
  • 1, w, x and y are each independently Are 1, 2, 3 or 4
  • m, r, s and v are independently a number 1 or 2
  • n, o, p and q are independently a number 0, 1 or 2
  • u is a number 0, 1 , 2 or 3
  • Group can carry
  • R 4 is hydrogen, halogen, amino, hydroxy, aminocarbonyl, hydroxycarbonyl, nitro, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, (Ci-G-alkyl, (CC 4 ) -alkoxy or (CC 6 ) -alkylamino),
  • R 5 is hydrogen, halogen, amino, hydroxy, aminocarbonyl, hydroxycarbonyl, nitro, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, (C 1 -C 4 ) -alkyl, (-G -alkoxy or (C r C 6 ) -alkylamino),
  • R 6 is hydrogen, methyl or ethyl
  • Compounds according to the invention are the compounds of the formula (I) and their salts, solvates and solvates of the salts, the compounds of the formula (Ia) mentioned below and their salts, solvates and solvates of the salts as well as those of the formula (I ) and / or (la), hereinafter referred to as exemplary embodiment (s) and their salts, solvates and solvates of the salts, insofar as the compounds mentioned by formula (I) and / or (la) are not already included are salts, solvates and solvates of the salts.
  • the compounds according to the invention can exist in stereoisomeric forms (enantiomers, diastereomers).
  • the invention therefore encompasses the enantiomers or diastereomers and their respective mixtures. From such mixtures of enantiomers and / or diastereomers, the stereoisomerically uniform constituents can be isolated in a known manner.
  • the present invention encompasses all tautomeric forms.
  • preferred salts are physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention.
  • salts are also included which are not themselves suitable for pharmaceutical applications but can be used for example for the isolation or purification of the compounds according to the invention.
  • Physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention include acid addition salts of mineral acids, carboxylic acids and sulfonic acids, e.g. Salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalenedisulfonic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid, lactic acid, tartaric acid, malic acid, citric acid, fumaric acid, maleic acid and benzoic acid.
  • salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalenedisulfonic acid acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic
  • Physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention also include salts of conventional bases, such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (for example sodium and potassium salts), alkaline earth metal salts (for example calcium and magnesium salts) and ammonium salts derived from ammonia or organic amines with 1 to 16 carbon atoms, such as, for example and preferably, ethylamine, diethylamine, triethylamine, ethyldiisopropylamine, monoethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, dicyclohexylamine, dimethylaminoethanol, procain, dibenzylamine, N-methylmorpholine, arginine, lysine, ethylenediamine and N-methylpiperidine.
  • alkali metal salts for example sodium and potassium salts
  • alkaline earth metal salts for example calcium and magnesium salts
  • solvates are those forms of the compounds according to the invention which form a complex in the solid or liquid state by coordination with solvent molecules. Hydrates are a special form of solvate, in which coordination takes place with water.
  • Alkyl per se and "alk” and "alkyl” in alkoxy and alkylamino stand for a linear or branched alkyl radical with generally 1 to 6, preferably 1 to 4, particularly preferably 1 to 3 carbon atoms, for example and preferably for methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, tert-butyl, n-pentyl and n-hexyl.
  • Alkoxy is exemplary and preferably methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, tert-butoxy, n-pentoxy and n-hexoxy.
  • Alkylamino stands for an alkylamino radical with one or two (independently selected) alkyl substituents.
  • (CC 3 ) - Alkylamino is, for example, a monoalkylamino radical having 1 to 3 carbon atoms or a dialkylamino radical each having 1 to 3 carbon atoms per alkyl substituent.
  • Halogen stands for fluorine, chlorine, bromine and iodine.
  • a symbol * in the formula of a group indicates the connection point of the group.
  • the end point of the line, next to which there is a * does not stand for a carbon atom or a CH 2 group but is part of the bond to the atom to which the group is attached.
  • R 1 is a group of the formula
  • R 7 is hydrogen or hydroxy
  • * is the point of attachment to the carbon atom
  • R 2 is hydrogen or methyl
  • R 3 is a group of the formula
  • R 8 is hydrogen, amino or hydroxy
  • R 9 is hydrogen, methyl or a group of the formula is where the link to the nitrogen atom is,
  • R is hydrogen and is a number 1, 2 or 3,
  • R 21 is hydrogen, a number is 0 and a number is 1, 2 or 3,
  • R, 10 is hydrogen or aminoethyl
  • R n is * - (CH 2 ) z OH, * - (CH 2 ) Z2 -NHR 16 , hydroxycarbonyl, aminocarbonyl, hydroxycarbonylmethyl, aminocarbonyl-methyl, * -CONHR 17 or * -CH 2 CONHR 18 , in which the point of attachment is the carbon atom is
  • ZI and Z2 are independently a number 1, 2 or 3,
  • R is hydrogen or methyl and R and R independently of one another a group of the formula
  • R 8a is hydrogen, amino or hydroxy
  • R 9a is hydrogen, methyl or aminoethyl
  • R 10a is hydrogen or aminoethyl, or
  • R 9a and R 10a together with the nitrogen atom to which they are attached form a piperazine ring
  • R lla and R 15a are independently * - (CH 2 ) Z ⁇ a -OH, * _ (CH 2 ) Z2a NNHHRR 1166aa ,, HHyyddrrooxxyyccaarrbboonnyyll ,, AAmmiinnooccaarbonyl, Hydroxycarbonylmethyl or Aminocarbonylmethyl. where the connection point to the carbon atom is
  • R is hydrogen or methyl
  • Zla and Z2a are independently a number 1, 2 or 3,
  • R and R are independently hydrogen or methyl, R 13a is amino or hydroxy, ka is a number 0 or 1, la, wa, xa and ya are independently a number 1, 2, 3 or 4, R 12 is hydrogen or methyl, k is a number 0 or 1 is
  • 1 and w are independently a number 1, 2, 3 or 4,
  • L j l or w can independently of one another carry a hydroxyl group when 1 or w is 3,
  • R 4 is hydroxy
  • R 5 is hydrogen
  • R 6 is hydrogen
  • the invention furthermore relates to a process for the preparation of the compounds of the formula (I) or their salts, their solvates or the solvates of their salts, using processes
  • R 1 , R 2 , R 4 , R 5 and R 6 have the meaning given above and boc is tert-butoxycarbonyl, in a two-stage process, first in the presence of one or more dehydrating reagents with compounds of the formula
  • R 1 , R 2 , R 4 , R 5 and R 6 have the meaning given above and Z is benzyloxycarbonyl
  • R 1 , R 2 , R 4 , R 5 and R 6 have the meaning given above and Z is benzyloxycarbonyl
  • R 23 is benzyl, methyl or ethyl
  • the free base of the salts can be obtained, for example, by chromatography on a reversed phase column using an acetonitrile-water gradient with the addition of a base, in particular by using an RP18 Phenomenex Luna Cl 8 (2) column and diethylamine as the base.
  • the invention further relates to a process for the preparation of the compounds of the formula (I) or their solvates according to Claim 1, in which salts of the compounds or solvates of the salts of the compounds are converted into the compounds or their solvates by chromatography with the addition of a base.
  • the hydroxyl group on R 7 is optionally protected during the reaction of the compounds of the formulas (K) and (XI) with a tert-butyldimethylsilyl group and is split off in one of the subsequent reaction steps under desilylation conditions.
  • Reactive functionalities in the radicals R 1 and R 3 of compounds of the formulas (II), (Tu), (TV) and (VI) are already incorporated into the synthesis in a protected manner; acid-labile protective groups (for example boc or z) are preferred.
  • acid-labile protective groups for example boc or z
  • the protective groups can be removed by deprotection reaction. This happens after Standard procedures in protecting group chemistry. Deprotection reactions under acidic conditions or by hydrogenolysis are preferred.
  • Reactive functionalities in the radical R 1 of compounds of the formulas (VII), (VHT), (IX) and (XI) are already included in the synthesis in a protected manner; acid-labile protective groups (for example boc or z) are preferred. These protective groups are split off in a subsequent reaction step by means of a deprotection reaction. This is done according to standard protective group chemistry. Deprotection reactions under acidic conditions or by hydrogenolysis are preferred.
  • the implementation of the first stage of processes [A] and [B] is generally carried out in inert solvents, if appropriate in the presence of a base, preferably in a temperature range from 0 ° C. to 40 ° C. at atmospheric pressure.
  • Suitable dehydration reagents are, for example, carbodiimides such as N, N-diethyl, N, N'-dipropyl, N, N'-diisopropyl, N, N'-dicyclohexylcarbodiimide, N- (3-dimethylamino-isopropyl) -N-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC), N -Cyclohexylcarbodiimide-N'-propyloxy-methyl-polystyrene (PS-carbodiimide) or carbonyl compounds such as carbonyldiimidazole, or 1,2-oxazolium compounds such as 2-ethyl-5-phenyl-l, 2-oxazolium-3-sulfate or 2-tert- Butyl-5-methyl-isoxazolium perchlorate, or acylamino compounds such as 2-ethoxy-1-ethoxycarbonyl 1-1,2-d
  • Bases are, for example, alkali carbonates, e.g. Sodium or potassium carbonate, or bicarbonate, or organic bases such as trialkylamines e.g. Triethylamine, N-methylmorpholine, N-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine.
  • alkali carbonates e.g. Sodium or potassium carbonate, or bicarbonate
  • organic bases such as trialkylamines e.g. Triethylamine, N-methylmorpholine, N-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine.
  • the condensation with HATU is preferably carried out in the presence of a base, in particular diisopropylethylamine.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane or trichloromethane, hydrocarbons such as benzene, or nitromethane, dioxane, dimethylformamide or acetonitrile. It is also possible to use mixtures of the solvents. Dimethylformamide is particularly preferred.
  • the reaction in the first stage of process [C] is generally carried out using the compound of the formula (HI) as solvent, preferably in a temperature range from 0 ° C. to 40 ° C. at normal pressure.
  • the reaction with an acid in the second stage of processes [A], [B] and [C] is preferably carried out in a temperature range from 0 ° C. to 40 ° C. at normal pressure.
  • Suitable acids are hydrogen chloride in dioxane, hydrogen bromide in acetic acid or trifluoroacetic acid in methylene chloride.
  • the hydrogenolysis in the second stage of processes [B] and [C] is generally carried out in a solvent in the presence of hydrogen and palladium on activated carbon, preferably in a temperature range from 0 ° C. to 40 ° C. at normal pressure.
  • Solvents are, for example, alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol or iso-propanol, in a mixture with water and glacial acetic acid, a mixture of ethanol, water and glacial acetic acid is preferred.
  • reaction is generally carried out in a solvent, preferably in a temperature range from 0 ° C. to 40 ° C. at normal pressure.
  • Bases are, for example, alkali metal hydroxides such as sodium or potassium hydroxide, or alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate, or other bases such as DBU, triethylamine or diisopropylethylamine, sodium hydroxide or sodium carbonate is preferred.
  • alkali metal hydroxides such as sodium or potassium hydroxide
  • alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate
  • other bases such as DBU, triethylamine or diisopropylethylamine, sodium hydroxide or sodium carbonate is preferred.
  • Solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride or 1,2-dichloroethane, alcohols such as methanol, ethanol or isopropanol, or water.
  • the reaction is preferably carried out with sodium hydroxide in water or sodium carbonate in methanol.
  • R 1 , R 2 , R 4 , R 5 and R 6 have the meaning given above, and
  • R 23 is benzyl, methyl or ethyl
  • the saponification can be carried out, for example, as described in the reaction of compounds of the formula (VI) to compounds of the formula (rV).
  • the compounds of formula (IV) are known or can be prepared by saponifying the benzyl, methyl or ethyl ester in compounds of formula (VI).
  • the reaction is generally carried out in a solvent, in the presence of a base, preferably in a temperature range from 0 ° C. to 40 ° C. at normal pressure.
  • Bases are, for example, alkali metal hydroxides such as lithium, sodium or potassium hydroxide, lithium hydroxide is preferred.
  • Solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane or trichloroethane, ethers such as tetrahydrofuran or dioxane, or alcohols such as methanol, ethanol or isopropanol, or dimethylformamide. It is also possible to use mixtures of the solvents or mixtures of the solvents with water. Tetrahydrofuran or a mixture of methanol and water are particularly preferred.
  • R 1 , R 2 , R 4 , R 5 , R 6 and R 23 have the meaning given above,
  • the reaction with bases generally takes place in a solvent, preferably in a temperature range from 0 ° C. to 40 ° C. at normal pressure.
  • Bases are, for example, alkali metal hydroxides such as sodium or potassium hydroxide, or alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate, or other bases such as DBU, triethylamine or diisopropylethylamine, with triethylamine being preferred.
  • Solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as chloroform, methylene chloride or 1,2-dichloroethane, or tetrahydrofuran, or mixtures of the solvents, methylene chloride or tetrahydrofuran is preferred.
  • the reaction is preferably carried out with DMAP and EDC in dichloromethane in a temperature range from -40 ° C to 40 ° C at normal pressure.
  • reaction is generally carried out in a solvent, preferably in a temperature range from -10 ° C to 30 ° C at normal pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, or hydrocarbons such as benzene or toluene, or ethers such as tetrahydrofuran or dioxane, or dimethylformamide. It is also possible to use mixtures of the solvents. Preferred solvents are tetrahydrofuran and dimethylformamide.
  • the compounds of the formula (XI) are known or can be prepared analogously to known processes.
  • the preparation of the compounds according to the invention can be illustrated by the following synthesis scheme: Synthesis of biphenomycin A derivatives using the example of (7R, 8S, 11S, 14S) -14- amino-N- (2-aminoethyl) - 11 - [(2R) - 3-amino-2-hydroxypropy 1] -5,7, 17-trihydroxy-10, 13 -dioxo-9, 12-diazatricyclofl 4.3.1. l 2 ' 6 ] henicosa-1 (20), 2 (21), 3, 5, 16, 18-hexaen-8-carboxamide trihydrochloride
  • the compounds according to the invention show an unforeseeable, valuable pharmacological and pharmacokinetic spectrum of action.
  • the compounds according to the invention can be used alone or in combination with other active compounds for the treatment and / or prophylaxis of infectious diseases, in particular bacterial infections.
  • local and / or systemic diseases that are caused by the following pathogens or by mixtures of the following pathogens can be treated and / or prevented:
  • Gram-positive cocci e.g. Staphylococci (Staph. Aureus, Staph. Epidermidis) and streptococci (Strept. Agalactiae, Strept. Faecalis, Strept. Pneumoniae, Strept. Pyogenes); gram-negative cocci (neisseria gonorrhoeae) as well as gram-negative rods such as enterobacteria, e.g. Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Citrobacter (Citrob. Freundii, Citrob. Divernis), Salmonella and Shigella; further Klebsielles (Klebs. pneumoniae, Klebs.
  • the antibacterial spectrum includes the genus Pseudomonas (Ps. Aeruginosa, Ps. Maltophilia) and strictly anaerobic bacteria such as e.g.
  • Bacteroides fragilis representatives of the genus Peptococcus, Peptostreptococcus and the genus Clostridium; also mycoplasmas (M. pneumoniae, M. hominis, M. urealyticum) and mycobacteria, e.g. Mycobacterium tuberculosis.
  • pathogens are only an example and is in no way to be interpreted as limiting.
  • diseases which can be caused by the pathogens mentioned or mixed infections and which can be prevented, improved or cured by the topically applicable preparations according to the invention are:
  • Infectious diseases in humans such as B. septic infections, bone and joint infections, skin infections, postoperative wound infections, abscesses, phlegmon, wound infections, infected burns, burns, infections in the mouth area, infections after dental operations, septic arthritis, mastitis, tonsillitis, genital infections and eye infections.
  • bacterial infections can also be treated in other species. Examples include:
  • Pig coli diarrhea, enterotoxemia, sepsis, dysentery, salmonellosis, metritis-mastitis-agalactiae syndrome, mastitis;
  • Ruminants (cattle, sheep, goats): diarrhea, sepsis, bronchopneumonia, salmonellosis, pasteurellosis, mycoplasmosis, genital infections;
  • Horse bronchopneumonia, foal paralysis, puerperal and postpuerperal infections, salmonellosis;
  • Dog and cat bronchopneumonia, diarrhea, dermatitis, otitis, urinary tract infections, prostatitis;
  • Poultry (chicken, turkey, quail, pigeon, ornamental birds and others): mycoplasmosis, E. coli infections, chronic respiratory diseases, salmonellosis, pasteurellosis, psittacosis.
  • Bacterial diseases in the rearing and keeping of farmed and ornamental fish can also be treated, the antibacterial spectrum extending beyond the previously mentioned pathogens to other pathogens such as e.g. Pasteurella, Brucella, Campylobacter, Listeria, Erysipelothris, Corynebacteria, Borellia, Treponema, Nocardia, Rikettsie, Yersinia.
  • Pasteurella Brucella, Campylobacter, Listeria, Erysipelothris, Corynebacteria, Borellia, Treponema, Nocardia, Rikettsie, Yersinia.
  • the present invention furthermore relates to the use of the compounds according to the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, preferably bacterial diseases, in particular bacterial infections.
  • the present invention furthermore relates to the use of the compounds according to the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • the present invention furthermore relates to the use of the compounds according to the invention for the manufacture of a medicament for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is a method for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases, using an antibacterially effective amount of the compounds according to the invention.
  • the compounds according to the invention can act systemically and / or locally.
  • they can be applied in a suitable manner, such as, for example, orally, parenterally, pulmonally, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctival, otic or as an implant or stent.
  • the compounds according to the invention can be administered in suitable administration forms.
  • state-of-the-art, fast and / or modified application forms which release the compounds according to the invention and contain the compounds according to the invention in crystalline and / or amorphized and / or dissolved form, such as e.g. Tablets (non-coated or coated tablets, for example with gastric juice-resistant or delayed dissolving or insoluble coatings which control the release of the compound according to the invention), rapidly disintegrating tablets or films / wafers, films / lyophilisates, capsules (for example hard or soft gelatin capsules) in the oral cavity , Coated tablets, granules, pellets, powders, emulsions, suspensions, aerosols or solutions.
  • Tablets non-coated or coated tablets, for example with gastric juice-resistant or delayed dissolving or insoluble coatings which control the release of the compound according to the invention
  • rapidly disintegrating tablets or films / wafers, films / lyophilisates, capsules (for example hard or soft gelatin capsules) in the oral cavity Coated
  • Parenteral administration can be done by bypassing an absorption step (e.g. intravenous, intraarterial, intracardiac, intraspinal or intralumbal) or by switching on absorption (e.g. intramuscular, subcutaneous, intracutaneous, percutaneous or intraperitoneal).
  • absorption step e.g. intravenous, intraarterial, intracardiac, intraspinal or intralumbal
  • absorption e.g. intramuscular, subcutaneous, intracutaneous, percutaneous or intraperitoneal.
  • Suitable forms of application for parenteral administration include: Injection and infusion preparations in the form of solutions, suspensions, emulsions, lyophilisates or sterile powders.
  • Inhaled drug forms including powder inhalers, nebulizers
  • nasal drops, solutions, sprays including tablets, films / wafers or capsules to be applied lingually, sublingually or buccally, suppositories, ear or eye preparations, vaginal capsules, aqueous suspensions (lotions, shaking mixes), lipophilic suspensions, ointments, creams, transdermal therapeutic systems (such as plasters), milk, Pastes, foams, scattering powder, implants or stents.
  • inhaled drug forms including powder inhalers, nebulizers
  • nasal drops, solutions, sprays including tablets, films / wafers or capsules to be applied lingually, sublingually or buccally, suppositories, ear or eye preparations, vaginal capsules, aqueous suspensions (lotions, shaking mixes), lipophilic suspensions, ointments, creams, transdermal therapeutic systems (such as plasters), milk, Pastes, foams
  • the compounds according to the invention can be converted into the administration forms mentioned. This can be done in a manner known per se by mixing with inert, non-toxic, pharmaceutically suitable auxiliaries.
  • auxiliaries include, inter alia, carriers (for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol), solvents (for example liquid polyethylene glycols), emulsifiers and dispersing or wetting agents (for example sodium dodecyl sulfate, polyoxysorbitan oleate), binders (for example polyvinylpyrrolidone), synthetic and natural polymers (for example Albumin), stabilizers (for example antioxidants such as ascorbic acid), dyes (for example inorganic pigments such as iron oxides) and taste and / or odor correctors.
  • the present invention further relates to medicaments which contain at least one compound according to the invention, usually together with one or more inert, non-toxic, pharmaceutically suitable auxiliaries, and to their use for the purposes mentioned above.
  • HATU (7-azabenzotriazole-1-y ⁇ ) -N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate
  • Method 1 Instrument: HP 1100 with DAD detection; Column: Kromasil RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 ⁇ m; Eluent A: 5 ml perchloric acid / 1 water, eluent B: acetonitrile; Gradient: 0 min 2% B, 0.5 min 2% B, 4.5 min 90% B, 9 min 90% B, 9.2 min 2% B, 10 min 2% B; Flow: 0.75 ml / min; Oven: 30 ° C; UV detection: 210 nm.
  • Method 2 Instrument: Micromass GCT, GC6890; Column: Restek RTX-35MS, 30 mx 250 ⁇ m x 0.25 ⁇ m; constant flow with helium: 0.88 ml / min; Oven: 60 ° C; Inlet: 250 ° C; Gradient: 60 ° C (hold 0.30 min), 50 ° C / min ⁇ 120 ° C, 16 ° C / min ⁇ 250 ° C, 30 ° C / min -> 300 ° C (hold 1.7 min).
  • Method 3 Instrument: HP 1100 with DAD detection; Column: Kromasil RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 ⁇ m; Eluent A: 5 ml perchloric acid / 1 water, eluent B: acetonitrile; Gradient: 0 min 2% B, 0.5 min 2% B, 4.5 min 90% B, 6.5 min 90% B, 6.7 min 2% B, 7.5 min 2% B; Flow: 0.75 ml / min; Oven: 30 ° C; UV detection: 210 nm.
  • Method 4 Device type MS: Micromass ZQ; Device type HPLC: Waters Alliance 2795; Column: Phenomenex Synergi 2 ⁇ Hydro-RP Mercury 20mm x 4mm; Eluent A: 1 1 water + 0.5 ml 50% formic acid, eluent B: 1 1 acetonitrile + 0.5 ml 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A -> 2.5 min 30% A -> 3.0 min 5% A -> 4.5 min 5% A; Flow: 0.0 min 1 ml / min, 2.5 min / 3.0 min / 4.5 min 2 ml / min; Oven: 50 ° C; UV detection: 210 nm.
  • Method 5 Device type MS: Micromass ZQ; Device type HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Column: Phenomenex Synergi 2 ⁇ Hydro-RP Mercury 20mm x 4mm; Eluent A: 1 1 water + 0.5 ml 50% formic acid, eluent B: 1 1 acetonitrile + 0.5 ml 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A - »2.5 min 30% A -> 3.0 min 5% A -» 4.5 min 5% A; Flow: 0.0 min 1 ml / min, 2.5 min 3.0 min / 4.5 min. 2 ml min; Oven: 50 ° C; UV detection: 210 nm.
  • Method 6 Instrument: Micromass Quattro LCZ with HPLC Agilent Series 1100; Column: Phenomenex Synergi 2 ⁇ Hydro-RP Mercury 20mm x 4mm; Eluent A: 1 1 water + 0.5 ml 50% formic acid, eluent B: 1 1 acetonitrile + 0.5 ml 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A ⁇ »2.5 min 30% A -> 3.0 min 5% A ⁇ » 4.5 min 5% A; Flow: 0.0 min 1 ml / min, 2.5 min 3.0 min / 4.5 min 2 ml / min; Oven: 50 ° C; UV detection: 208-400 nm.
  • Method 8 HPLC with chiral phase: Column: packing material Chiral silica gel selector KBD 5287 (250 mm x 4.6 mm) based on the selector poly (N-methacryloyl-L-leucine dicyclopropylmethylamide); Eluent: methyl tert-butyl ether; Temperature: 24 ° C; Flow: 1 ml / min.
  • Method 9 HPLC with chiral phase: Column: packing material Chiral silica gel selector KBD 5326 (600 mm x 40 mm) based on the selector poly (N-methacryloyl-L-leucine dicyclopropylmethylamide); Eluent A: methyl tert-butyl ether, eluent B: tetrahydrofuran; Gradient: 0.0 min 100% A ⁇ 45 min 100% A - 55 min 100% B; Temperature: 24 ° C; Flow: 50 ml / min.
  • Method 10 Device type MS: Micromass ZQ; Device type HPLC: Waters Alliance 2790; Column: Grom-Sil 120 ODS-4 HE 50 mm x 2 mm, 3.0 ⁇ m; Eluent A: water + 500 ⁇ l 50% formic acid / 1, eluent B: acetonitrile + 500 ⁇ l 50% formic acid / 1; Gradient: 0.0 min 70% B - 4.5 min 90% B; Oven: 45 ° C; Flow: 0.8 ml / min; UV detection: 210 nm.
  • Flasks are 26.6 g (0.114 mmol) of methyl N- (tert-butoxycarbonyl) -3-oxoserinate under argon
  • Example 4A The compound from Example 4A is separated as an isomer mixture by chromatography on a chiral stationary phase (Method 9) into the four diastereomers.
  • the target compound is eluted as the third fraction.
  • the reaction mixture is mixed with dichloromethane and washed successively with IN sodium bicarbonate solution and water.
  • the combined organic phases are dried over magnesium sulfate, filtered, concentrated and dried in vacuo.
  • the crude product is purified by chromatography (RP-HPLC, mobile phase gradient from acetonitrile / water).
  • Example 9A The preparation is carried out analogously to Example 10A from 0.352 g (0.37 mmol) of methyl- (2S, 3R) -2-amino-3- (4,4'-bis (benzyloxy) -3 '- ⁇ (2S) -2 - ⁇ [ (benzyloxy) carbonyl] amino ⁇ -3-oxo-3- [2- (trimethylsilyl) ethoxy] propyl ⁇ biphenyl-3-yl) -3 - ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ propanoate hydrochloride (example 9A) and 142 mg (0.41 mmol) (2S) -4 - ⁇ [(Benzyloxy) carbonyl] amino ⁇ -2 - [(tert-butoxycarbonyl) amino] - butane carboxylic acid with 154 mg (0.41 mmol) HATU and a total of 167 mg ( 1.29 mmol) Hünig base
  • Example 9A The preparation is carried out analogously to Example 10A from 0.98 g (1.02 mmol) of methyl- (2S, 3R) -2-amino-3- (4,4'-bis (benzyloxy) -3 '- ⁇ (2S) -2- ⁇ [(benzyloxy) carbonyl] amino ⁇ -3-oxo-3 - [2- (trimethylsilyl) ethoxy] - propyl ⁇ biphenyl-3-yl) -3 - ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ propanoate Hydrochloride (Example 9A) and 0.45 g (1.23 mmol) N 5 - [(benzyloxy) carbonyl] -N 2 - (tert-butoxycarbonyl) -L-ornithine with 0.486 g (1.28 mmol) HATU and a total of 0.463 g (3.58 mmol) Hünig base in 16
  • Example 9A The preparation is carried out analogously to Example 10A from 0.38 g (0.40 mmol) of methyl- (2S, 3R) -2-amino-3- (4,4'-bis (benzyloxy) -3 '- ⁇ (2S) -2 - ⁇ [ (benzyloxy) carbonyl] amino ⁇ -3-oxo-3- [2- (trimethylsilyl) ethoxy] propyl ⁇ biphenyl-3-yl) -3 - ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ propanoate hydrochloride (example 9A) and 0.18 g (0.48 mmol) N s - [(benzyloxy) carbonyl] -N 2 - (tert-butoxycarbonyl) -L-lysine with 0.188 g (0.50 mmol) HATU and a total of 0.180 g (1.39 mmol) Hünig base in 5 ml of absolute
  • Examples 15A to 17A listed in the following table are prepared analogously to the instructions in Example 14A.
  • Examples 19A to 21A listed in the following table are prepared analogously to the instructions in Example 18A.
  • Examples 23A to 25A listed in the following table are prepared analogously to the instructions in Example 22A.
  • Example 27A to 29A listed in the following table are prepared analogously to the instructions in Example 26A.
  • Example 30A is prepared analogously to the instructions in Example 26A.
  • Examples 32A and 33A listed in the following table are prepared analogously to the instructions in Example 31A.
  • Examples 35A to 37A listed in the following table are prepared analogously to the instructions in Example 34A.
  • Example 27A The preparation is carried out analogously to Example 34A from 15 mg (0.02 mmol) of methyl- (7R, 8S, 11S, 14S, 5, 17-bis (benzyloxy) - 14- ⁇ [(benzyloxy) carbonyl] amino ⁇ - 11 - (2 - ⁇ [(benzyloxy) carbony 1] amino ⁇ - ethyl) -7-hydroxy-l 0, 13-dioxo-9, 12-diazatricyclo [l 4.3.1.1 2,6 ] henicosa-l (20), 2 (21 ), 3,5, 16, 18-hexaen-8-carboxylate (Example 27A) in 0.5 ml of N, N-bis (2-aminoethyl) ethane-l, 2-diamine and with 0.11 mg (0.0016 mmol) of potassium cyanide.
  • Examples 40A to 46A listed in the following table are prepared analogously to the instructions in Example 39A.
  • Example 47 A The preparation is carried out analogously to Example 47 A from 50 mg (0.088 mmol) of methyl- (7R, 8S, 11S, 14S 14-amino-l l- (3-aminopropyl) -5,7,17-trihydroxy-10,13-dioxo -9,12-diazatricyclo [14.3.1.1 2,6 ] - henicosa-l (20), 2 (21), 3,5,16,18-hexaen-8-carboxylate dihydrochloride (Example 41 A) with 58 mg ( 0.26 mmol) di-tert-butyl dicarbonate in 0.44 ml (0.44 mmol) IN sodium hydroxide solution and 0.5 ml methanol.
  • Example 49A The preparation is carried out analogously to Example 49A from 300 mg (0.60 mmol) of dicyclohexylamino (2S) -2,4-bis [(tert-butoxycarbonyl) amino] butanate in 10 ml of tetrahydrofuran with 61 mg (0.60 mmol) of 4-methylmorpholine, 65 mg (0.60 mmol) ethyl chloroformate and 1.2 ml (1.20 mmol) of an IM solution of lithium aluminum hydride in tetrahydrofuran. The product is implemented without further cleaning.
  • Example 53A The preparation is carried out analogously to Example 50A from 250 mg (0.81 mmol) of tert-butyl - ⁇ (3S) -3 - [(tert-butoxycarbonyl) amino] -4-hydroxybutyl ⁇ carbamate (Example 53A) in 20 ml of dichloromethane with 110 mg ( 0.97 mmol) methanesulfonic acid chloride and 0.23 ml (1.6 mmol) triethylamine. The product is implemented without further cleaning.
  • Example 54A The preparation is carried out analogously to Example 51A from 200 mg (0.52 mmol) of (2S) -2,4-bis [(tert-butoxycarbonyl) amino] butyl methanesulfonate (Example 54A) in 15 ml of dimethylformamide with 34 mg (0.52 mmol) of sodium azide. The product is implemented without further cleaning.
  • Example 55A The preparation is carried out analogously to Example 52A from 171 mg (0.52 mmol) of tert-butyl - ⁇ (3S) -4-azido-3- [(tert-butoxycarbonyl) ammo] butyl ⁇ carbamate (Example 55A) in 10 ml of ethanol with the addition of 20 mg palladium on activated carbon (10%). The product is implemented without further cleaning.
  • Example 57A The preparation is carried out analogously to Example 52A from 390 mg (0.77 mmol) of benzyl- ⁇ (IS) -4 - [(tert-butoxycarbonyl) amino] - 1 - [( ⁇ 2 - [(tert-butoxycarbonyl) amino] ethyl ⁇ amino) carbonyl] butyl ⁇ carbamate (Example 57A) in 50 ml of ethanol with the addition of 40 mg of palladium on activated carbon (10%). The product is implemented without further cleaning.
  • Example 58A The preparation is carried out analogously to Example 52A from 412 mg (0.76 mmol) of benzyl- ⁇ (IS) -4 - [(tert-butoxycarbonyl) amino] -l - [( ⁇ 3 - [(tert-butoxycarbonyl) amino] -2-hydroxypropyl ⁇ amino) carbonyl] - butyl ⁇ carbamate (Example 58A) in 50 ml of ethanol with the addition of 41 mg of palladium on activated carbon (10%). The product is implemented without further cleaning.
  • Example 68A The preparation is carried out analogously to Example 52A from 620 mg (1.69 mmol) of benzyl - [(IS) -4 - [(tert-butoxycarbonyl) amino] -1- (2-hydroxyethyl) butyl] carbamate (Example 68A) in 60 ml of ethanol Add 100 mg palladium on activated carbon (10%). The product is implemented without further cleaning.
  • the trihydrochloride (Example 1) is converted into the tri (hydrotrifluoroacetate) by preparative HPLC (Reprosil ODS-A, mobile phase acetonitrile / 0.2% aqueous trifluoroacetic acid 5:95 ⁇ 95: 5).
  • Examples 3 to 6 listed in the following table are prepared analogously to the procedure of Example 1 and, if appropriate, converted into the corresponding tri (hydrotrifluoroacetate) analogously to Example 2.
  • the trihydrochloride (Example 5) is converted into the tri (hydrotrifluoroacetate) by preparative HPLC (Reprosil ODS-A, mobile solvent acetonitrile / 0.2% aqueous trifluoroacetic acid 5:95 ⁇ 95: 5).
  • luciferin solution 20 mM Tricine, 2.67 mM MgSO 4 , 0.1 mM EDTA, 33.3 mM DTT pH 7.8, 270 ⁇ M CoA, 470 ⁇ M luciferin, 530 ⁇ M ATP
  • the IC 50 is the concentration of an inhibitor which leads to a 50% inhibition of the translation of Firefly luciferase.
  • the plasmid pBESTluc (Promega Corporation, USA) is used to construct a reporter plasmid which can be used in an in vitro S. aureus transcription-translation assay.
  • the primers CAPFor 5'-CGGCC-AAGCTTACTCGGATCCAGAGTTTGCAAAATATACAGGGGATTATATATAATGGAAAAC AAGAAAGGAAAATAGGAGGTTTATATGGAAGACGCCA-3 'and CAPRev 5'-GTCATCGTCGGGAAGACCTG-3' are used.
  • the primer CAPFor contains the capAl promoter, the ribosome binding site and the 5 'region of the luciferase gene.
  • a PCR product can be isolated which contains the Firefly Luciferase gene with the fused capAl promoter.
  • BHI medium Six liters of BHI medium are inoculated with a 250 ml overnight culture of a S. aureus strain and grown at 37 ° C to an OD600nm of 2-4.
  • the cells are harvested by centrifugation and washed in 500 ml of cold buffer A (10 mM Tris-acetate, pH 8.0, 14 mM magnesium acetate, 1 mM DTT, IM KCl). After centrifuging again, the cells are washed in 250 ml of cold buffer A with 50 mM KCl and the pellets obtained are frozen at -20 ° C. for 60 min.
  • the pellets are thawed on ice in 30 to 60 min and up to a total volume of 99 ml in buffer B (10 mM Tris-acetate, pH 8.0, 20 mM magnesium acetate, 1mM DTT, 50mM KCl) added.
  • buffer B 10 mM Tris-acetate, pH 8.0, 20 mM magnesium acetate, 1mM DTT, 50mM KCl
  • 1.5 ml of lysostaphin (0.8 mg / ml) in buffer B are placed in 3 pre-cooled centrifuge beakers and mixed with 33 ml of the cell suspension.
  • the samples are incubated for 45 to 60 min at 37 ° C with occasional shaking before adding 150 ⁇ l of a 0.5 M DTT solution.
  • the lysed cells are centrifuged at 30,000 xg for 30 min at 4 ° C.
  • the cell pellet After being taken up in buffer B, the cell pellet is centrifuged again under the same conditions and the collected supernatants are combined. The supernatants are centrifuged again under the same conditions and 0.25 volume of buffer C (670 mM tris-acetate, pH 8.0, 20 mM magnesium acetate, 7 mM Na 3 -phosphoenolpyruvate, 7 mM DTT, 5.5 mM ATP ) are added to the upper 2/3 of the supernatant , 70 ⁇ M amino acids (complete from Promega), 75 ⁇ g pyruvate kinase (Sigma, Germany)) / ml. The samples are incubated for 30 min at 37 ° C.
  • the supernatants are dialyzed overnight at 4 ° C. against 2 l dialysis buffer (10 mM Tris-acetate, pH 8.0, 14 mM magnesium acetate, 1 mM DTT, 60 mM potassium acetate) with a buffer change in a dialysis tube with 3500 Da exclusion.
  • the dialysate is concentrated to a protein concentration of about 10 mg / ml by covering the dialysis tube with cold PEG 8000 powder (Sigma, Germany) at 4 ° C.
  • the S30 extracts can be stored aliquoted at -70 ° C.
  • the inhibition of the protein biosynthesis of the compounds can be demonstrated in an in vitro transcription-translation assay.
  • the assay is based on cell-free transcription and translation of Firefly Luciferase using the reporter plasmid pla as a template and cell-free S30 extracts obtained from S. aureus.
  • the activity of the resulting luciferase can be demonstrated by luminescence measurement.
  • the amount of S30 extract or plasmid pla to be used must be re-tested for each preparation in order to ensure an optimal concentration in the test. 3 ⁇ l of the substance to be tested dissolved in 5% DMSO are placed in an MTP. 10 ⁇ l of a suitably concentrated plasmid solution p1a are then added.
  • luciferin solution (20 mM Tricine, 2.67 mM MgSO, 0.1 mM EDTA, 33.3 mM DTT pH 7.8, 270 ⁇ M CoA, 470 ⁇ M luciferin, 530 ⁇ M ATP) and the resulting bioluminescence measured for 1 min in a luminometer.
  • IC 50 the Concentration of an inhibitor indicated which leads to a 50% inhibition of the translation of Firefly luciferase.
  • the minimum inhibitory concentration is the minimum concentration of an antibiotic with which a test germ is inhibited in its growth over 18-24 h.
  • the inhibitor concentration can be determined using microbiological standard methods with modified medium as part of an agar dilution test (see e.g. The National Committee for Clinical Laboratory Standards. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically; approved standard-fifth edition. NCCLS document M7-A5 [ISBN 1-56238- 394-9]. NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2000). The bacterial germs are cultivated on 1.5% agar plates, which contain 20% defibrinated horse blood.
  • test germs which are incubated overnight on Columbia blood agar plates (Becton-Dickinson), are diluted in PBS, adjusted to a bacterial count of approximately 5 ⁇ 10 5 germs / ml and dripped onto test plates (1-3 ⁇ l).
  • the test substances contain different dilutions of the test substances (dilution levels 1: 2).
  • the cultures are incubated at 37 ° C for 18-24 hours in the presence of 5% CO 2 .
  • the lowest substance concentration at which no visible bacterial growth occurs is defined as the MIC.
  • the MIC values in ⁇ g / ml of some compounds according to the invention against a number of test germs are listed as examples in the table below. The compounds show a graded antibacterial effect against most of the test germs.
  • the suitability of the compounds according to the invention for the treatment of bacterial infections can be shown in various animal models.
  • the animals are generally infected with a suitable virulent germ and then treated with the compound to be tested, which is present in a formulation adapted to the respective therapy model.
  • the suitability of the compounds according to the invention for the treatment of bacterial infections in a sepsis model in mice after infection with S. aureus can be demonstrated.
  • S. aureus 133 cells are grown overnight in BH broth (Oxoid, Germany). The overnight culture was diluted 1: 100 in fresh bra broth and turned up for 3 hours. The bacteria in the logarithmic growth phase are centrifuged off and washed twice with buffered, physiological saline solution. Then a cell suspension in saline solution with an absorbance of 50 units is set on the photometer (Dr. Lange LP 2W). After a dilution step (1:15), this suspension is mixed 1: 1 with a 10% mucin suspension. 0.2 ml / 20 g mouse ip is applied from this infection solution. This corresponds to a cell count of approximately 1-2 x 10 6 germs / mouse.
  • the spontaneous resistance rates of the compounds according to the invention are determined as follows: the bacterial germs are cultivated on blood agar plates or Müller-Hinton agar plates at 37 ° C. overnight, resuspended in 2 ml PBS (approx. 2x10 9 germs / ml). 100 ⁇ l of this cell suspension or 1:10 and 1: 100 dilutions are diluted on predried agar plates (1.5% agar, 20% defibrinated horse blood or 1.5% agar, 20% bovine serum in 1/10 Müller-Hinton medium with PBS), which contain the compound to be tested according to the invention in a concentration corresponding to 5xMHK or IOXMHK, plated out and incubated at 37 ° C. for 48 h. The resulting colonies (cfu) are counted. Isolation of the biphenomycin-resistant S. aureus strains RN4220Bi R and T17
  • the S. aureus strain RN4220Bi R is isolated in vitro.
  • 100 ⁇ l of a S. aureus RN4220 cell suspension (approx.1.2xl0 8 cfu / ml) are placed on an antibiotic-free agar plate (18.5 mM Na 2 HPO 4 , 5.7 mM KH 2 PO 4 , 9.3 mM NH 4 CI, 2.8 mM MgSO 4 , 17.1 mM NaCl, 0.033 ⁇ g / ml thiamine hydrochloride, 1.2 ⁇ g / ml nicotinic acid, 0.003 ⁇ g / ml biotin, 1% glucose, 25 ⁇ g / ml of each proteinogenic amino acid with the addition of 0.4% BH broth and 1% agarose) and one Agar plate, which contains 2 ⁇ g / ml biphenomycin B (lOxMHK), plated out and incubated at 37 ° C.
  • the S. aureus strain T17 is isolated in vivo.
  • CFWl mice come with 4x10 ⁇ £. aureus 133 - cells intraperitoneally infected per mouse. 0.5 hours after infection, the animals are treated with 50 mg / kg biphenomycin B intravenously. The kidneys are removed from the surviving animals on day 3 after the infection. After the organs have been homogenized, the homogenates are plated out on antibiotic-free and antibiotic-containing agar plates as described for RN4220Bi R and incubated at 37 ° C. overnight. About half of the colonies isolated from the kidney show growth on the antibiotic-containing plates (2.2x10 ⁇ colonies), which demonstrates the accumulation of biphenomycin B-resistant S. aureus cells in the kidney of the treated animals. Approximately 20 of these colonies are tested for MIC against biphenomycin B and one colony with an MIC> 50 ⁇ M is selected for further cultivation and the strain is designated T17.
  • the compounds according to the invention can be converted into pharmaceutical preparations as follows:
  • the compound according to the invention is dissolved together with polyethylene glycol 400 in the water with stirring.
  • the solution is sterile filtered (pore diameter 0.22 ⁇ m) and filled into heat-sterilized infusion bottles under aseptic conditions. These are closed with infusion stoppers and crimp caps.

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Abstract

Die Erfindung betrifft antibakterielle Amid-Makrozyklen und Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von bakteriellen Infektionen.

Description

Antibakterielle Amid-Makrozylden III
Die Erfindung betrifft antibakterielle Amid-Makrozyklen und Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbeson- dere von bakteriellen Infektionen.
In WO 03/106480 und WO 04/012816 werden antibakteriell wirkende Makrozyklen vom Biphenomycin B Typ mit Amid- bzw. Estersubstituenten beschrieben.
In US 3,452,136, Dissertation R. U. Meyer, Universität Stuttgart, Deutschland 1991, Dissertation V. eitenberger, Universität Stuttgart, Deutschland 1991, Synthesis (1992), (10), 1025-30, J. Chem. Soc, Perkin Trans. 1 (1992), (1), 123-30, J. Chem. Soc, Chem. Commun. (1991), (10), 744, Synthesis (1991), (5), 409-13, J. Chem. Soc, Chem. Commun. (1991), (5), 275-7, J. Antibiot. (1985), 38(11), 1462-8, J. Antibiot. (1985), 38(11), 1453-61, wird der Naturstoff Biphenomycin B als antibakteriell wirksam beschrieben. Teilschritte der Synthese von Biphenomycin B werden in Synlett (2003), 4, 522-526 beschrieben.
Chirality (1995), 7(4), 181-92, J. Antibiot. (1991), 44(6), 674-7, J. Am. Chem. Soc (1989), 111(19), 7323-7, J. Am. Chem. Soc. (1989), 111(19), 7328-33, J. Org. Chem. (1987), 52(24), 5435-7, Anal. Biochem. (1987), 165(1), 108-13, J. Org. Chem. (1985), 50(8), 1341-2, J. Antibiot. (1993), 46(3), C-2, J. Antibiot. (1993), 46(1), 135-40, Synthesis (1992), (12), 1248-54, Appl. Environ. Microbiol. (1992), 58(12), 3879-82, J. Chem. Soc, Chem. Commun. (1992), (13), 951-3 beschreiben einen strukturell verwandten Naturstoff, Biphenomycin A, der am Makrozyklus eine weitere Substitution mit einer Hydroxygruppe aufweist. .
Die Naturstoffe entsprechen hinsichtlich ihrer Eigenschaften nicht den Anforderungen, die an antibakterielle Arzneimittel gestellt werden. Auf dem Markt sind zwar strukturell andersartige antibakteriell wirkende Mittel vorhanden, es kann aber regelmäßig zu einer Resistenzentwicklung kommen. Neue Mittel für eine gute und wirksamere Therapie sind daher wünschenswert.
Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es daher, neue und alternative Verbindungen mit gleicher oder verbesserter antibakterieller Wirkung zur Behandlung von bakteriellen Erkrankungen bei Menschen und Tieren zur Verfügung zu stellen.
Überraschenderweise wurde gefunden, dass bestimmte Derivate dieser Naturstoffe, worin die Carboxylgruppe des Naturstoffs gegen eine Amidgruppe ausgetauscht wird, die eine basische Gruppe enthält, gegen Biphenomycin resistente S. aureus Stämme (RN4220BiR und T17) antibakteriell wirksam sind. Weiterin zeigen die Derivate gegen S. aureus Wildtyp-Stämme und Biphenomycin resistente S. aureus Stämme eine verbesserte Spontanresistenz-Frequenz.
Gegenstand der Erfindung sind Verbindungen der Formel
Figure imgf000003_0001
bei denen
R1 gleich eine Gruppe der Formel
' ^NH2 ''/,. NH„
Figure imgf000003_0002
wobei
R7 gleich Wasserstoff oder Hydroxy ist, die Anknüpfstelle an das Kohlenstoffatom ist,
R gleich Wasserstoff, Methyl oder Ethyl ist,
R gleich eine Gruppe der Formel
Figure imgf000004_0001
Figure imgf000004_0002
Figure imgf000004_0003
Figure imgf000004_0004
ist,
wobei die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
R8 gleich Wasserstoff, Amino oder Hydroxy ist,
R9 gleich Wasserstoff, Methyl oder eine Gruppe der Formel
Figure imgf000004_0005
ist, worin die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist, R20 gleich Wasserstoff oder *-<CH2)rNHR22 ist, worin
R22 gleich Wasserstoff oder Methyl ist und f eine Zahl 1, 2 oder 3 ist,
R21 gleich Wasserstoff oder Methyl ist, d eine Zahl 0, 1, 2 oder 3 ist und e eine Zahl 1, 2 oder 3 ist,
R10 gleich Wasserstoff oder Aminoethyl ist,
oder
R9 und R10 bilden zusammen mit dem Stickstoffatom an das sie gebunden sind einen Piperazin-Ring,
Rπ und R15 unabhängig voneinander *-(CH2)Zι-OH, *-(CH2)Z2-NHR16, Hydroxy- carbonyl, Aminocarbonyl, Hydroxycarbonylmethyl, Aminocarbonyl- methyl, *-CONHR17 oder *-CH2CONHR18 sind, worin
* die Anknüpfstelle an das Kohlenstoffatom ist,
ZI und Z2 unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2 oder 3 sind, R16 gleich Wasserstoff oder Methyl ist und
R17 und R18 unabhängig voneinander eine Gruppe der Formel
Figure imgf000006_0001
sind, worin die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
R8a gleich Wasserstoff, Amino oder Hydroxy ist,
R9a gleich Wasserstoff, Methyl oder Aminoethyl ist,
R10a gleich Wasserstoff oder Aminoethyl ist, oder
R9a und R10a bilden zusammen mit dem Stickstoffatom an das sie gebunden sind einen Piperazin-Ring,
Rlla und R15a unabhängig voneinander *-(CH2)Zιa-OH, *-(CH2)Z2a- NHRI6 , Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Hydroxycarbonylmethyl oder Aminocarbonylmethyl sind, worin die Anknüpfstelle an das Kohlenstoffatom ist,
R , 16aa gleich Wasserstoff oder Methyl ist und
Zla und Z2a unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2 oder 3 sind,
R a und R a unabhängig voneinander Wasserstoff oder Methyl sind,
R13aa gleich Amino oder Hydroxy ist, ka eine Zahl 0 oder 1 ist, la, wa, xa und ya unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2, 3 oder 4 sind,
R12 und R14 unabhängig voneinander Wasserstoff, Methyl oder eine Gruppe der Formel
Figure imgf000007_0001
sind, worin
* die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
R20a gleich Wasserstoff oder *-(CH2)fa-NHR22a ist, worin R2 a gleich Wasserstoff oder Methyl ist und fa eine Zahl 1, 2 oder 3 ist,
R21a gleich Wasserstoff oder Methyl ist, da eine Zahl 0, 1, 2 oder 3 ist und ea eine Zahl 1, 2 oder 3 ist,
R13 gleich Amino oder Hydroxy ist,
R19 eine Gruppe der Formel
Figure imgf000008_0001
worin die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
R ,8b gleich Wasserstoff, Amino oder Hydroxy ist,
R gleich Wasserstoff, Methyl oder Aminoethyl ist,
R gleich Wasserstoff oder Aminoethyl ist,
oder
R9b und R10b bilden zusammen mit dem Stickstoffatom an das sie gebunden sind einen Piperazin-Ring,
Rnb und R15b unabhängig voneinander *-(CH2)zlb-OH, *-(CH2)Z2b-NHR16b, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Hydroxycarbonylmethyl oder Amino- carbonylmethyl sind, worin die Anknüpfstelle an das Kohlenstoffatom ist,
R gleich Wasserstoff oder Methyl ist und
Zlb und Z2b unabhängig voneinander eine Zahl 1 , 2 oder 3 sind,
R » 12b , und R , 14b unabhängig voneinander Wasserstoff oder Methyl sind,
R , 13b gleich Amino oder Hydroxy ist, kb eine Zahl 0 oder 1 ist, lb, wb, xb und yb unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2, 3 oder 4 sind, k und t unabhängig voneinander eine Zahl 0 oder 1 sind, 1, w, x und y unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2, 3 oder 4 sind, m, r, s und v unabhängig voneinander eine Zahl 1 oder 2 sind, n, o, p und q unabhängig voneinander eine Zahl 0, 1 oder 2 sind, u eine Zahl 0, 1, 2 oder 3 ist,
L JI,w,x oder y unabhängig voneinander bei 1, w, x oder y gleich 3 eine Hydroxy
Gruppe tragen kann,
R4 gleich Wasserstoff, Halogen, Amino, Hydroxy, Aminocarbonyl, Hydroxycarbonyl, Nitro, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, (Ci-G -Alkyl, (C C4)-Alkoxy oder (C C6)-Alkylamino ist,
R5 gleich Wasserstoff, Halogen, Amino, Hydroxy, Aminocarbonyl, Hydroxycarbonyl, Nitro, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, (Cι-C4)-Alkyl, ( -G -Alkoxy oder (CrC6)-Alkylamino ist,
R6 gleich Wasserstoff, Methyl oder Ethyl ist,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Erfindungsgemäße Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I) und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, die von Formel (I) umfassten Verbindungen der nachfolgend genannten Formel (la) und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze sowie die von Formel (I) und/oder (la) umfassten, nachfolgend als Ausführungsbeispiel(e) genannten Verbindungen und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, soweit es sich bei den von Formel (I) und/oder (la) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen nicht bereits um Salze, Solvate und Solvate der Salze handelt.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Abhängigkeit von ihrer Struktur in stereoisomeren Formen (Enantiomere, Diastereomere) existieren. Die Erfindung umfasst deshalb die Enantiomeren oder Diastereomeren und ihre jeweiligen Mischungen. Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/oder Diastereomeren lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter Weise isolieren.
Sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegenden Erfindung sämtliche tautomere Formen.
Als Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Umfasst sind aber auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen selbst nicht geeignet sind aber beispielsweise für die Isolierung oder Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden können.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen Säure- additionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Essigsäure, Trifluoressigsäure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Benzoesäure.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen auch Salze üblicher Basen, wie beispielhaft und vorzugsweise Alkalimetallsalze (z.B. Natrium- und Kaliumsalze), Erdalkalisalze (z.B. Calcium- und Magnesiumsalze) und Ammoniumsalze, abgeleitet von Ammoniak oder organischen Aminen mit 1 bis 16 C-Atomen, wie beispielhaft und vorzugsweise Ethylamin, Diethylamin, Triethylamin, Ethyldiisopropylamin, Monoethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Dicyclohexylamin, Dimethylaminoethanol, Prokain, Dibenzylamin, N- Methylmorpholin, Arginin, Lysin, Ethylendiamin und N-Methylpiperidin.
Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung haben die Substituenten, soweit nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung:
Alkyl per se und "Alk" und "Alkyl" in Alkoxy und Alkylamino stehen für einen linearen oder verzweigten Alkylrest mit in der Regel 1 bis 6, vorzugsweise 1 bis 4, besonders bevorzugt 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, tert-Butyl, n-Pentyl und n-Hexyl. Alkoxy steht beispielhaft und vorzugsweise für Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, Isopropoxy, tert- Butoxy, n-Pentoxy und n-Hexoxy.
Alkylamino steht für einen Alkylaminorest mit einem oder zwei (unabhängig voneinander gewählten) Alkylsubstituenten. (C C3)- Alkylamino steht beispielsweise für einen Monoalkyl- aminorest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylaminorest mit jeweils 1 bis 3 Kohlenstoffatomen pro Alkylsubstituent. Beispielhaft und vorzugsweise seien genannt: Methylamino, Ethylamino, n-Propylamino, Isopropylamino, tert-Butylamino, n-Pentylamino, n- Hexylamino, NN-Dimethylamino, NN-Diethylamino, N-Ethyl-N-methylamino, N-Methyl-N-n- propylamino, N-Isopropyl-N-n-propylamino, N-tert-Butyl-N-methylamino, N-Ethyl-N-n-pentylamino undN-n-Hexyl-N-methylamino.
Halogen steht für Fluor, Chlor, Brom und Iod.
Ein Symbol * in der Formel einer Gruppe kennzeichnet die Anknüpfstelle der Gruppe. Der Endpunkt der Linie, neben der jeweils ein * steht, steht dabei nicht für ein Kohlenstoffatom beziehungsweise eine CH2-Gruppe sondern ist Bestandteil der Bindung zu dem Atom, an das die Gruppe gebunden ist.
In den Formeln der Gruppen, für die R1 stehen kann, steht der Endpunkt der Linie, neben der jeweils ein * steht, nicht für ein Kohlenstoffatom beziehungsweise eine CH2-Gruppe sondern ist Bestandteil der Bindung zu dem Kohlenstoffatom, an das R1 gebunden ist.
In den Formeln der Gruppen, für die R3 stehen kann, steht der Endpunkt der Linie, neben der jeweils ein * steht, nicht für ein Kohlenstoffatom beziehungsweise eine CH2-Gruppe sondern ist Bestandteil der Bindung zu dem Stickstoffatom, an das R3 gebunden ist. R3 ist also beispielsweise 2-Aminoethyl im Falle von k = 0, 1 = 1, R9 = H und R10 = H, 3-Amino-2-hydroxypropyl im Falle von k = 1, R8 = OH, 1 = 1, R9 = H und R10 = H, Piperidin-4-yl-methyl im Falle von q = 1 und r = 1 oder Piperidin-4-yl im Falle von q = 0 und r = 1.
Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind Verbindungen, welche der Formel
Figure imgf000011_0001
entsprechen, worin R1 bis R6 die gleiche Bedeutung wie in Formel (I) haben,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind erfϊndungsgemäße Verbindungen, bei denen
R1 gleich eine Gruppe der Formel
Figure imgf000012_0001
oder . ' H„ wobei
R7 gleich Wasserstoff oder Hydroxy ist, * die Anknüpfstelle an das Kohlenstoffatom ist,
R2 gleich Wasserstoff oder Methyl ist,
R3 gleich eine Gruppe der Formel
Figure imgf000012_0002
ist, wobei * die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
R8 gleich Wasserstoff, Amino oder Hydroxy ist, R9 gleich Wasserstoff, Methyl oder eine Gruppe der Formel
Figure imgf000013_0001
ist, worin die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
R )2"ou gleich Wasserstoff oder *-(CH2)rNHR" ist worin
R gleich Wasserstoff ist und eine Zahl 1, 2 oder 3 ist,
R21 gleich Wasserstoff ist, eine Zahl 0 ist und eine Zahl 1, 2 oder 3 ist,
R ,10 gleich Wasserstoff oder Aminoethyl ist,
Rn gleich *-(CH2)z OH, *-(CH2)Z2-NHR16, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Hydroxycarbonylmethyl, Aminocarbonyl-methyl, *-CONHR17 oder *-CH2CONHR18ist, worin die Anknüpfstelle an das Kohlenstoffatom ist,
ZI und Z2 unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2 oder 3 sind,
R gleich Wasserstoff oder Methyl ist und R und R unabhängig voneinander eine Gruppe der Formel
Figure imgf000014_0001
sind, worin
* die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
R8a gleich Wasserstoff, Amino oder Hydroxy ist, R9a gleich Wasserstoff, Methyl oder Aminoethyl ist,
R10a gleich Wasserstoff oder Aminoethyl ist, oder
R9a und R10a bilden zusammen mit dem Stickstoffatom an das sie gebunden sind einen Piperazin-Ring,
Rlla und R15a unabhängig voneinander *-(CH2)Zιa-OH, *_(CH2)Z2a NNHHRR1166aa,, HHyyddrrooxxyyccaarrbboonnyyll,, AAmmiinnooccaarbonyl, Hydroxycarbonyl- methyl oder Aminocarbonylmethyl sind. woπn die Anknüpfstelle an das Kohlenstoffatom ist,
R gleich Wasserstoff oder Methyl ist und
Zla und Z2a unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2 oder 3 sind,
R und R unabhängig voneinander Wasserstoff oder Methyl sind, R13a gleich Amino oder Hydroxy ist, ka eine Zahl 0 oder 1 ist, la, wa, xa und ya unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2, 3 oder 4 sind, R12 gleich Wasserstoff oder Methyl ist, k gleich eine Zahl 0 oder 1 ist,
1 und w unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2, 3 oder 4 sind,
L j l oder w unabhängig voneinander bei 1 oder w gleich 3 eine Hydroxy-Gruppe tragen kann,
R4 gleich Hydroxy ist,
R5 gleich Wasserstoff ist,
R6 gleich Wasserstoff ist,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Gegenstand der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I) oder ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze, wobei nach Verfahren
[A] Verbindungen der Formel
Figure imgf000015_0001
worin R1, R2, R4, R5 und R6 die oben angegebene Bedeutung haben und boc gleich tert-Butoxy- carbonyl ist, in einem zweistufigen Verfahren zunächst in Gegenwart von einem oder mehreren De- hydratisierungsreagenzien mit Verbindungen der Formel
H2NR3 (HI),
worin R3 die oben angegebene Bedeutung hat,
und anschließend mit einer Säure umgesetzt werden,
oder
[B] Verbindungen der Formel
Figure imgf000016_0001
worin R1, R2, R4, R5 und R6 die oben angegebene Bedeutung haben und Z gleich Benzyloxy- carbonyl ist,
in einem zweistufigen Verfahren zunächst in Gegenwart von einem oder mehreren De- hydratisierungsreagenzien mit Verbindungen der Formel
H2NR3 (HI),
worin R3 die oben angegebene Bedeutung hat,
und anschließend mit einer Säure oder durch Hydrogenolyse umgesetzt werden,
oder
[C] Verbindungen der Formel
Figure imgf000017_0001
worin R1, R2, R4, R5 und R6 die oben angegebene Bedeutung haben und Z gleich Benzyloxy- carbonyl ist, und
R23 gleich Benzyl, Methyl oder Ethyl ist,
in einem zweistufigen Verfahren zunächst in Gegenwart von Kaliumcyanid mit Verbindungen der Formel
H2NR3 (ffl),
worin R3 die oben angegebene Bedeutung hat,
und anschließend mit einer Säure oder durch Hydrogenolyse umgesetzt werden.
Die freie Base der Salze kann zum Beispiel durch Chromatographie an einer Reversed Phase Säule mit einem Acetonitril-Wasser-Gradienten unter Zusatz einer Base erhalten werden, insbesondere durch Verwendung einer RP18 Phenomenex Luna Cl 8(2) Säule und Diethylamin als Base.
Weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I) oder ihrer Solvate nach Anspruch 1, bei dem Salze der Verbindungen oder Solvate der Salze der Verbindungen durch Chromatographie unter Zusatz einer Base in die Verbindungen oder ihre Solvate überführt werden.
Die Hydroxygruppe an R7 ist gegebenenfalls während der Umsetzung der Verbindungen der Formeln (K) und (XI) mit einer tert-Butyldimethylsilyl-Gruppe geschützt und wird in einem der darauffolgenden Reaktionsschritte unter Desilylierungsbedingungen mit abgespalten.
Reaktive Funktionalitäten in den Resten R1 und R3 von Verbindungen der Formeln (II), (Tu), (TV) und (VI) werden bereits geschützt mit in die Synthese eingebracht, bevorzugt sind säurelabile Schutzgruppen (z.B. boc oder z). Nach erfolgter Umsetzung zu Verbindungen der Formel (I) können die Schutzgruppen durch Entschützungsreaktion abgespalten werden. Dies geschieht nach Standardverfahren der Schutzgruppenchemie. Bevorzugt sind Entschützungsreaktionen unter sauren Bedingungen oder durch Hydrogenolyse.
Reaktive Funktionalitäten in dem Rest R1 von Verbindungen der Formeln (VII), (VHT), (IX) und (XI) werden bereits geschützt mit in die Synthese eingebracht, bevorzugt sind säurelabile Schutzgruppen (z.B. boc oder z). Diese Schutzgruppen werden in einem der darauf folgenden Reaktionsschritte durch Entschützungsreaktion abgespalten. Dies geschieht nach Standardverfahren der Schutzgruppenchemie. Bevorzugt sind Entschützungsreaktionen unter sauren Bedingungen oder durch Hydrogenolyse.
Die Umsetzung der ersten Stufe der Verfahren [A] und [B] erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0°C bis 40°C bei Normaldruck.
Als Dehydratisierungsreagenzien eignen sich hierbei beispielsweise Carbodiimide wie z.B. N,N- Diethyl-, N,N'-Dipropyl-, N,N'-Diisopropyl-, N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid, N-(3-Dimethylamino- isopropyl)-N -ethylcarbodiimid-Hydrochlorid (EDC), N-Cyclohexylcarbodiimid-N '-propyloxy- methyl-Polystyrol (PS-Carbodiimid) oder Carbonylverbindungen wie Carbonyldiimidazol, oder 1,2-Oxazoliumverbindungen wie 2-Ethyl-5-phenyl-l,2-oxazolium-3-sulfat oder 2-tert-ButyI-5- methyl-isoxazolium-perchlorat, oder Acylaminoverbindungen wie 2-Ethoxy-l-ethoxycarbony 1-1,2- dihydrochinolin, oder Propanphosphonsäureanhydrid, oder Isobutylchloroformat, oder Bis-(2-oxo- 3-oxazolidinyl)-phosphorylchlorid oder Benzotriazolyloxy-tri(dimethylamino)ρhosphoniumhexa- fluorophosphat, oder O-(Benzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetra-methyluroniumhexafluorophosphat (HBTU), 2-(2-Oxo-l-(2H)-pyridyl)-l,l,3,3-tetramethyluroniumtetrafluoroborat (TPTU) oder O-(7-Azabenzotriazol-l -yl)-N,N,N' N'-tetramethyluroniumhexafluorophosphat (HATU), oder 1-Hydroxybenztriazol (HOBt), oder Benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)-phosphonium- hexafluoro-phosphat (BOP), oder Mischungen aus diesen, oder Mischung aus diesen zusammen mit Basen.
Basen sind beispielsweise Alkalicarbonate, wie z.B. Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder -hydrogencarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine z.B. Triethylamin, N-Methylmorpholin, N-Methylpiperidin, 4-Dimethylaminopyridin oder Diisopropylethylamin.
Vorzugsweise wird die Kondensation mit HATU in Gegenwart einer Base, insbesondere Diisopropylethylamin, durchgeführt.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan oder Trichlormethan, Kohlenwasserstoff wie Benzol, oder Nitromethan, Dioxan, Dimethylformamid oder Acetonitril. Ebenso ist es möglich, Gemische der Lösemittel einzusetzen. Besonders bevorzugt ist Dimethylformamid.
Die Umsetzung der ersten Stufe des Verfahrens [C] erfolgt im Allgemeinen mit der Verbindung der Formel (HI) als Lösungsmittel, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0°C bis 40°C bei Normaldruck.
Die Umsetzung mit einer Säure in der zweiten Stufe der Verfahren [A], [B] und [C] erfolgt bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0°C bis 40°C bei Normaldruck.
Als Säuren eignen sich hierbei Chlorwasserstoff in Dioxan, Bromwasserstoff in Essigsäure oder Trifluoressigsäure in Methylenchlorid.
Die Hydrogenolyse in der zweiten Stufe der Verfahren [B] und [C] erfolgt im Allgemeinen in einem Lösungsmittel in Gegenwart von Wasserstoff und Palladium auf Aktivkohle, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0°C bis 40°C bei Normaldruck.
Lösungsmittel sind beispielsweise Alkohole wie Methanol, Ethanol, n-Propanol oder iso-Propanol, in einem Gemisch mit Wasser und Eisessig, bevorzugt ist ein Gemisch aus Ethanol, Wasser und Eisessig.
Die Verbindungen der Formel (111) sind bekannt oder können analog bekannten Verfahren hergestellt werden.
Die Verbindungen der Formel (II) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000019_0001
worin R , R , R , R und R die oben angegebene Bedeutung haben,
mit Di-(tert-butyl)-dicarbonat in Gegenwart einer Base umgesetzt werden. Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in einem Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0°C bis 40°C bei Normaldruck.
Basen sind beispielsweise Alkalihydroxide wie Natrium- oder Kaliumhydroxid, oder Alkalicarbonate wie Cäsiumcarbonat, Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder andere Basen wie DBU, Triethylamin oder Diisopropylethylamin, bevorzugt ist Natriumhydroxid oder Natrium- carbonat.
Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid oder 1,2-Di- chlorethan, Alkohole wie Methanol, Ethanol oder iso-Propanol, oder Wasser.
Vorzugsweise wird die Umsetzung mit Natriumhydroxid in Wasser oder Natriumcarbonat in Methanol durchgeführt.
Die Verbindungen der Formel (V) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000020_0001
worin R1, R2, R4, R5 und R6 die oben angegebene Bedeutung haben, und
R23 gleich Benzyl, Methyl oder Ethyl ist,
mit einer Säure oder durch Hydrogenolyse, wie für die zweite Stufe des Verfahrens [B] beschrieben, gegebenenfalls durch anschließende Umsetzung mit einer Base zur Verseifung des Methyl- oder Ethylesters, umgesetzt werden.
Die Verseifung kann zum Beispiel erfolgen, wie bei der Umsetzung von Verbindungen der Formel (VI) zu Verbindungen der Formel (rV) beschrieben.
Die Verbindungen der Formel (IV) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem in Verbindungen der Formel (VI) der Benzyl-, Methyl- oder Ethylester verseift wird. Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in einem Lösungsmitteln, in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0°C bis 40°C bei Normaldruck.
Basen sind beispielsweise Alkalihydroxide wie Lithium-, Natrium- oder Kaliumhydroxid, bevorzugt ist Lithiumhydroxid.
Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan oder Trichlor- ethan, Ether wie Tetrahydrofuran oder Dioxan, oder Alkohole wie Methanol, Ethanol oder Iso- propanol, oder Dimethylformamid. Ebenso ist es möglich, Gemische der Lösungsmittel oder Gemische der Lösungsmittel mit Wasser einzusetzen. Besonders bevorzugt sind Tetrahydrofuran oder ein Gemisch aus Methanol und Wasser.
Die Verbindungen der Formel (VI) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000021_0001
worin R1, R2, R4, R5, R6 und R23 die oben angegebene Bedeutung haben,
in der ersten Stufe mit Säuren, wie für die zweite Stufe der Verfahren [A] und [B] beschrieben, und in der zweiten Stufe mit Basen umgesetzt werden.
In der zweiten Stufe erfolgt die Umsetzung mit Basen im Allgemeinen in einem Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0°C bis 40°C bei Normaldruck.
Basen sind beispielsweise Alkalihydroxide wie Natrium- oder Kaliumhydroxid, oder Alkalicarbonate wie Cäsiumcarbonat, Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder andere Basen wie DBU, Triethyl- amin oder Diisopropylethylamin, bevorzugt ist Triethylamin. Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Chloroform, Methylenchlorid oder 1,2-Dichlorethan, oder Tetrahydrofuran, oder Gemische der Lösungsmittel, bevorzugt ist Methylenchlorid oder Tetrahydrofuran.
Die Verbindungen der Formel (VII) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbin- düngen der Formel
Figure imgf000022_0001
worin R , R , R , R , R und R die oben angegebene Bedeutung haben,
mit Pentafluorphenol in Gegenwart von Dehydratisierungsreagenzien, wie für die erste Stufe der Verfahren [A] und [B] beschrieben, umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt bevorzugt mit DMAP und EDC in Dichlormethan in einem Temperaturbereich von -40°C bis 40°C bei Normaldruck.
Die Verbindungen der Formel (VIII) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000022_0002
worin R , R , R , R , R und R >23 die oben angegebene Bedeutung haben,
mit Fluorid, insbesondere mit Tetrabutylammoniumfluorid, umgesetzt werden. Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in einem Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von -10°C bis 30°C bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, oder Kohlenwasserstoffe wie Benzol oder Toluol, oder Ether wie Tetrahydrofuran oder Dioxan, oder Dimethylformamid. Ebenso ist es möglich, Gemische der Lösemittel einzusetzen. Bevorzugte Lösungsmittel sind Tetrahydrofuran und Dimethylformamid.
Die Verbindungen der Formel (TX) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000023_0001
worin R2, R4, R5 und R23 die oben angegebene Bedeutung haben,
mit Verbindungen der Formel
Figure imgf000023_0002
worin R1 und R6 die oben angegebene Bedeutung haben,
in Gegenwart von Dehydratisierungsreagenzien, wie für die erste Stufe der Verfahren [A] und [B] beschrieben, umgesetzt werden.
Die Verbindungen der Formel (X) sind bekannt oder können analog den im Beispielteil beschriebenen Verfahren hergestellt werden.
Die Verbindungen der Formel (XI) sind bekannt oder können analog bekannten Verfahren hergestellt werden. Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen kann durch folgendes Syntheseschema verdeutlicht werden: Synthese von Biphenomycin A-Derivaten am Beispiel von (7R,8S,11S,14S)-14- Amino-N-(2-aminoethyl)- 11 -[(2R)-3 -amino-2-hydroxypropy 1] -5,7, 17-trihydroxy- 10, 13 -dioxo-9, 12- diazatricyclofl 4.3.1. l2'6]henicosa- 1 (20),2(21 ),3 ,5, 16, 18-hexaen-8-carboxamid-Trihydrochlorid
Figure imgf000024_0001
Figure imgf000024_0002
Die erfmdungsgemäßen Verbindungen zeigen ein nicht vorhersehbares, wertvolles pharmakologi- sches und pharmakokinetisches Wirkspektrum.
Sie eignen sich daher zur Verwendung als Arzneimittel zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten bei Menschen und Tieren.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können aufgrund ihrer pharmakologischen Eigenschaften allein oder in Kombination mit anderen Wirkstoffen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Infektionskrankheiten, insbesondere von bakteriellen Infektionen, eingesetzt werden.
Beispielsweise können lokale und/oder systemische Erkrankungen behandelt und/oder verhindert werden, die durch die folgenden Erreger oder durch Mischungen der folgenden Erreger verursacht werden:
Gram-positive Kokken, z.B. Staphylokokken (Staph. aureus, Staph. epidermidis) und Streptokokken (Strept. agalactiae, Strept. faecalis, Strept. pneumoniae, Strept. pyogenes); gram-negative Kokken (neisseria gonorrhoeae) sowie gram-negative Stäbchen wie Enterobakteriaceen, z.B. Escherichia coli, Hämophilus influenzae, Citrobacter (Citrob. freundii, Citrob. divernis), Salmonella und Shigella; ferner Klebsiellen (Klebs. pneumoniae, Klebs. oxytocy), Enterobacter (Ent. aerogenes, Ent. agglomerans), Hafnia, Serratia (Serr. marcescens), Proteus (Pr. mirabilis, Pr. rettgeri, Pr. vulgaris), Providencia, Yersinia, sowie die Gattung Acinetobacter. Darüber hinaus umfaßt das antibakterielle Spektrum die Gattung Pseudomonas (Ps. aeruginosa, Ps. maltophilia) sowie strikt anaerobe Bakterien wie z.B. Bacteroides fragilis, Vertre- ter der Gattung Peptococcus, Peptostreptococcus sowie die Gattung Clostridium; ferner My- koplasmen (M. pneumoniae, M. hominis, M. urealyticum) sowie Mykobakterien, z.B. Mycobacte- rium tuberculosis.
Die obige Aufzählung von Erregern ist lediglich beispielhaft und keineswegs beschränkend aufzufassen. Als Krankheiten, die durch die genannten Erreger oder Mischinfektionen verursacht und durch die erfindungsgemäßen topisch anwendbaren Zubereitungen verhindert, gebessert oder geheilt werden können, seien beispielsweise genannt:
Infektionskrankheiten beim Menschen wie z. B. septische Infektionen, Knochen- und Gelenkinfektionen, Hautinfektionen, postoperative Wundinfektionen, Abszesse, Phlegmone, Wundinfektionen, infizierte Verbrennungen, Brandwunden, Infektionen im Mundbereich, Infektionen nach Zahnoperationen, septische Arthritis, Mastitis, Tonsillitis, Genital-Infektionen und Augeninfektionen. Außer beim Menschen können bakterielle Infektionen auch bei anderen Spezies behandelt werden. Beispielhaft seien genannt:
Schwein: Coli-diarrhoe, Enterotoxamie, Sepsis, Dysenterie, Salmonellose, Metritis-Mastitis-Aga- laktiae-Syndrom, Mastitis;
Wiederkäuer (Rind, Schaf, Ziege): Diarrhöe, Sepsis, Bronchopneumonie, Salmonellose, Pasteurellose, Mykoplasmose, Genitalinfektionen;
Pferd: Bronchopneumonien, Fohlenlähme, puerperale und postpuerperale Infektionen, Salmonellose;
Hund und Katze: Bronchopneumonie, Diarrhöe, Dermatitis, Otitis, Harnwegsinfekte, Prostatitis;
Geflügel (Huhn, Pute, Wachtel, Taube, Ziervögel und andere): Mycoplasmose, E. coli-Infektionen, chronische Luftwegserkrankungen, Salmonellose, Pasteurellose, Psittakose.
Ebenso können bakterielle Erkrankungen bei der Aufzucht und Haltung von Nutz- und Zierfischen behandelt werden, wobei sich das antibakterielle Spektrum über die vorher genannten Erreger hinaus auf weitere Erreger wie z.B. Pasteurella, Brucella, Campylobacter, Listeria, Erysipelothris, Corynebakterien, Borellia, Treponema, Nocardia, Rikettsie, Yersinia, erweitert.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist der Einsatz der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, vorzugsweise von bakteriellen Krankheiten, insbesondere von bakteriellen Infektionen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer antibakteriell wirksamen Menge der erfindungsgemäßen Verbindungen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können systemisch und/oder lokal wirken. Zu diesem Zweck können sie auf geeignete Weise appliziert werden, wie z.B. oral, parenteral, pulmonal, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctival, otisch oder als Implantat bzw. Stent.
Für diese Applikationswege können die erfindungsgemäßen Verbindungen in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden.
Für die orale Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende schnell und/oder modifiziert die erfindungsgemäßen Verbindungen abgebende Applikationsformen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen in kristalliner und/ oder amorphisierter und/oder gelöster Form enthalten, wie z.B. Tabletten (nichtüberzogene oder überzogene Tabletten, beispielsweise mit magensaftresistenten oder sich verzögert auflösenden oder unlöslichen Überzügen, die die Freisetzung der erfindungsgemäßen Verbindung kontrollieren), in der Mundhöhle schnell zerfallende Tabletten oder Filme/Oblaten, Filme/Lyophylisate, Kapseln (beispielsweise Hart- oder Weichgelatinekapseln), Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole oder Lösungen.
Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes geschehen (z.B. intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer Resorption (z.B. intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikationsformen u.a. Injektions- und Infusionszubereitungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten oder sterilen Pulvern.
Für die sonstigen Applikationswege eignen sich z.B. Inhalationsarzneiformen (u.a. Pulverinhalato- ren, Nebulizer), Nasentropfen, -lösungen, -spray s; lingual, sublingual oder buccal zu applizierende Tabletten, Filme/Oblaten oder Kapseln, Suppositorien, Ohren- oder Augenpräparationen, Vaginalkapseln, wässrige Suspensionen (Lotionen, Schüttelmixturen), lipophile Suspensionen, Salben, Cremes, transdermale therapeutische Systeme (wie beispielsweise Pflaster), Milch, Pasten, Schäume, Streupuder, Implantate oder Stents.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in die angeführten Applikationsformen überführt werden. Dies kann in an sich bekannter Weise durch Mischen mit inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen geschehen. Zu diesen Hilfsstoffen zählen u.a. Trägerstoffe (beispielsweise mikrokristalline Cellulose, Laktose, Mannitol), Lösungsmittel (z.B. flüssige Polyethylenglycole), Emulgatoren und Dispergier- oder Netzmittel (beispielsweise Natriumdode- cylsulfat, Polyoxysorbitanoleat), Bindemittel (beispielsweise Polyvinylpyrrolidon), synthetische und natürliche Polymere (beispielsweise Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidantien wie beispielsweise Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie beispielsweise Eisenoxide) und Geschmacks- und / oder Geruchskorrigentien. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens eine erfindungsgemäße Verbindung, üblicherweise zusammen mit einem oder mehreren inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor genannten Zwecken.
Im Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei parenteraler Applikation Mengen von etwa 5 bis 250 mg/kg Körpergewicht je 24 h zur Erzielung wirksamer Ergebnisse zu verabreichen. Bei oraler Applikation beträgt die Menge etwa 5 bis 100 mg/kg Körpergewicht je 24 h.
Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht, Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem Wirkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt bzw. Intervall, zu welchem die Applikation erfolgt. So kann es in einigen Fällen ausreichend sein, mit weniger als der vorgenannten Mindestmenge auszukommen, während in anderen Fällen die genannte obere Grenze überschritten werden muss. Im Falle der Applikation größerer Mengen kann es empfehlenswert sein, diese in mehreren Einzelgaben über den Tag zu verteilen.
Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen.
Beispiele
Verwendete Abkürzungen:
Aloe Allyloxycarbonyl aq. wässrig
Äquiv. Äquivalent
Bn Benzyl
Boc tert-Butoxycarbonyl
CDCI3 Chloroform
CH Cyclohexan d Dublett (im 1H-NMR) dd Dublett von Dublett
DCM Dichlormethan
DCC Dicyclohexylcarbodiimid
DIC Diisopropylcarbodiimid
DIPEA Diisopropylethylamin
DMSO Dimethylsulfoxid
DMAP 4-NN-Dimethylaminopyridin
DMF Dimethylformamid d. Th. der Theorie
EDC N'-(3-Dimethylaminopropyl)-N-ethylcarbodiimid x HCl
EE Ethylacetat (Essigsäureethylester)
ESI Elektrospray-Ionisation (bei MS) ges. gesättigt
HATU (9-(7-Azabenzotriazol- 1 -yϊ)-N,N,N', N'-tetramethyluronium- hexafluorophosphat
HBTU O-(Benzotriazol-l-yl)-N,N,N'N'-tetramethyluronium- hexafluorophosphat
HOBt 1 -Hydroxy- lH-benzotriazol x H2O h Stunde(n)
HPLC Hochdruck-, Hochleistungsflüssigchromatographie konz. konzentriert
LC-MS Flüssigchromatographie-gekoppelte Massenspektroskopie m Multiplett (im Η-ΝMR) min Minuten
MS Massenspektroskopie MeOH Methanol
NMR Kernresonanzspektroskopie
MTBE Methyl-tgrt-butylether
Pd C Palladium/Kohle proz. Prozent q Quartett (im Η-NMR)
Rf Retentionsindex (bei DC)
RT Raumtemperatur
Rt Retentionszeit (bei HPLC) s Singulett (im 'H-NMR) t Triplett (im Η-NMR)
TBS tert-Butyldimethylsilyl
THF Tetrahydrofuran
TMSE 2-(Trimethylsilyl)-ethyl
TPTU 2-(2-Oxo- 1 (2H)-pyridy 1)- 1 , 1 ,3,3 -tetramethy luroniumtetrafluoroborat
Z Benzyloxycarbonyl
LC-MS- und HPLC-Methoden:
Methode 1 (HPLC): Instrument: HP 1100 mit DAD-Detektion; Säule: Kromasil RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm; Eluent A: 5 ml Perchlorsäure/1 Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0 min 2%B, 0.5 min 2%B, 4.5 min 90%B, 9 min 90%B, 9.2 min 2%B, 10 min 2%B; Fluss: 0.75 ml/min; Ofen: 30°C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 2 (GC-MS): Instrument: Micromass GCT, GC6890; Säule: Restek RTX-35MS, 30 m x 250 μm x 0.25 μm; konstanter Fluss mit Helium: 0.88 ml/min; Ofen: 60°C; Inlet: 250°C; Gradient: 60°C (0.30 min halten), 50°C/min → 120°C, 16°C/min → 250°C, 30°C/min -> 300°C (1.7 min halten).
Methode 3 (HPLC): Instrument: HP 1100 mit DAD-Detektion; Säule: Kromasil RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm; Eluent A: 5 ml Perchlorsäure/1 Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0 min 2%B, 0.5 min 2%B, 4.5 min 90%B, 6.5 min 90%B, 6.7 min 2%B, 7.5 min 2%B; Fluss: 0.75 ml/min; Ofen: 30°C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 4 (LC-MS): Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A -> 2.5 min 30%A -> 3.0 min 5%A -> 4.5 min 5%A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 50°C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 5 (LC-MS): Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Säule: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A -» 2.5 min 30%A -> 3.0 min 5%A -» 4.5 min 5%A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min 3.0 min/4.5 min. 2 ml min; Ofen: 50°C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 6 (LC-MS): Instrument: Micromass Quattro LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A ■» 2.5 min 30%A -> 3.0 min 5%A ■» 4.5 min 5%A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min 3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 50°C; UV-Detektion: 208- 400 nm.
Methode 7 (LC-MS): Instrument: Micromass Platform LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Thermo HyPURITY Aquastar 3μ 50 mm x 2.1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 100%A -=> 0.2 min 100%A ■» 2.9 min 30%A ■» 3.1 min 10%A -» 5.5 min 10%A; Ofen: 50°C; Fluss: 0.8 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 8 (HPLC mit chiraler Phase): Säule: Packungsmaterial Chiraler Kieselgelselektor KBD 5287 (250 mm x 4.6 mm) basierend auf dem Selektor Poly(N-methacryloyl-L-leucin- dicyclopropylmethylamid); Eluent: Methyl-tert-butylether; Temperatur: 24°C; Fluß: 1 ml/min.
Methode 9 (HPLC mit chiraler Phase): Säule: Packungsmaterial Chiraler Kieselgelselektor KBD 5326 (600 mm x 40 mm) basierend auf dem Selektor Poly(N-methacryloyl-L-leucin- dicyclopropylmethylamid); Eluent A: Methyl-tert-butylether, Eluent B: Tetrahydrofuran; Gradient: 0.0 min 100%A ■ 45 min 100%A - 55 min 100%B; Temperatur: 24°C; Fluß: 50 ml/min.
Methode 10 (LC-MS): Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2790; Säule: Grom-Sil 120 ODS-4 HE 50 mm x 2 mm, 3.0 μm; Eluent A: Wasser + 500 μl 50%ige Ameisensäure / 1, Eluent B: Acetonitril + 500 μl 50%ige Ameisensäure / 1; Gradient: 0.0 min 70%B - 4.5 min 90%B; Ofen: 45°C; Fluss: 0.8 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
Präparative RP-HPLC: Säule: YMC Gel ODS-AQ S-5 / 15 μM, 250 mm x 30 mm, Eluent A: Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0.00 min 5%B -_ 3.00 min 5%B -> 35.0 min 95%B - 46.0 min 95%B; Temp.: Raumtemperatur; Fluss: 50 ml/min; UV-Detektion. Chemische Synthese der Beispiele
Synthese der Ausgangsverbindungen:
Synthese von substituierten beta-Hydroxyphenylalaninderivaten am Beispiel von Methyl-(betaR)- 2-(benzy loxy)-5-brom-N-(tert-butoxycarbonyl)-beta- { [tert-butyl(dimethyl)silyl] oxy } -L- phenylalaninat
Figure imgf000032_0001
Synthese von geschützten Biphenyl-bisaminosäuren am Beispiel von Methyl-(2S,3R)-3-(4,4'- bis(benzyloxy)-3'-{(2S)-2-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-3-oxo-3-[2-(trimethylsilyl)ethoxy]- propyl}biphenyl-3-yl)-2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-3-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}propan
Figure imgf000032_0002
Ausgangsverbindungen
Beispiel 1A
Benzyl-2-(benzyloxy)-5-brombenzoat
Figure imgf000033_0001
Zu einer Lösung von 40 g (0.184 mol) 5-Brom-2-hydroxybenzoesäure in 500 ml wasserfreiem Dimethylformamid werden 62 ml (0.46 mol) Benzylbromid und 76 g (0.553 mol) Kaliumcarbonat gegeben. Nach 16 h Rühren bei 85°C wird die abgekühlte Mischung filtriert und das Filtrat wird im Vakuum zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wird in Essigsäureethylester aufgenommen und mehrmals mit Wasser gewaschen. Die organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet, das Lösungsmittel im Vakuum eingedampft und der Rückstand aus Petrolether umkristallisiert.
Ausbeute: 58 g (79% d. Th.), Feststoff
HPLC (Methode 1): Rt = 5.81 min.
MS (DCI(NH3)): m/z = 414 (M+NH4)+.
Η-NMR (300 MHz, d6-DMSO): δ = 5.2 (s, 2H), 5.3 (s, 2H), 7.23 (d, 1H), 7.25-7.45 (m, 10H), 7.70 (dd, 1H), 7.8 (d, 1H).
Beispiel 2A
2-(Benzyloxy)-5-brombenzoesäure
Figure imgf000033_0002
Darstellung siehe Collect. Czech. Chem. Commun., 1976, 41, 3384-3387. 30.6 g (77 mmol) Benzyl-2-(benzyloxy)-5-brombenzoat (Beispiel 1A) werden in 450 ml THF / Wasser (1 :1) gelöst und mit 77 ml IN Natriumhydroxid-Lösung versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 24 h bei 80°C gerührt. Im Vakuum wird auf ein Volumen von 100 ml eingeengt und mit Diethylether extrahiert. Die wässrige Phase wird abgetrennt, mit IN Salzsäure auf pH 1 gestellt und mehrmals mit Essigsäureethylester extrahiert. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trockne eingeengt.
Ausbeute: 21 g (89% d. Th.), Feststoff
GC-MS (Methode 2): Rt = 12.90 min,
MS (EI+): m/z = 306 (M)+.
!H-NMR (400 MHz, d6-DMSO): δ = 5.21 (s, 2H), 7.17 (d, 1H), 7.31 (mc, 1H), 7.38 (mc, 2H), 7.47 (mc, 2H), 7.64 (dd, 1H), 7.73 (d, 1H), 13.05 (br. s, 1H).
Beispiel 3A
Methyl-2-(benzyloxy)-5-brom-N-(tert-butoxycarbonyl)-beta-oxophenylalaninat
Figure imgf000034_0001
Zu einer auf 0°C gekühlten Lösung 1 von 17.5 g (57 mmol) 2-(Benzyloxy)-5-brombenzoesäure (Beispiel 2A) in 80 ml absolutem Dichlormethan werden unter Argon 18.8 ml (0.143 mmol) l-Chlor-N,N,2-trimethylpropenylamin zugegeben. Es wird 1 h bei 0°C gerührt. In einem zweiten
Kolben werden unter Argon 26.6 g (0.114 mmol) Methyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-3-oxoserinat
(Darstellung siehe Synthesis, 1992, 1248-1254) in 770 ml absolutem THF bei -70°C mit 143 ml
(228 mmol) einer 1.6M Lösung von n-Butyllithium in Hexan versetzt und für 20 min gerührt. Anschließend wird bei -70°C das in Lösung 1 erzeugte Säurechlorid langsam zugetropft. Nach beendeter Zugabe wird langsam auf RT erwärmt und weitere 24 h intensiv gerührt. Die
Lösungsmittel werden im Vakuum eingedampft, der Rückstand wird in Essigsäureethylester aufgenommen und nacheinander mit eisgekühlter 0.5%iger Schwefelsäure und IN Kalium- hydrogencarbonat-Lösung gewaschen. Die organische Phase wird über Magensiumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel wird im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird säulen- chromatographisch an Kieselgel 60 gereinigt (Cyclohexa Essigsäureethylester 20:1). Ausbeute: 19 g (70% d. Th.), Feststoff
HPLC (Methode 3): R = 5.26 min.
MS (DCI(NH3)): m z = 495 (M+NH^.
Η-NMR (400 MHz, d6-DMSO): δ = 1.35 (s, 9H), 3.54 (s, 3H), 5.25 (s, 2H), 5.68 (d, 1H), 7.2 (d, 1H), 7.3-7.5 (m, 5H), 7.65-7.78 (m, 3H).
Beispiel 4A
Methyl-2-(benzyloxy)-5-brom-N-(tert-butoxycarbonyl)-beta-hydroxyphenylalaninat
Figure imgf000035_0001
Unter Argon werden 2.1 ml einer IM Lösung (S)-2-Methyl-CBS-oxazaborolidin in 25 ml Tetrahydrofuran vorgelegt und mit 4.8 ml (27 mmol) Boran-N,N-diethylanilin-Komplex versetzt. Nach 30 min Rühren bei RT werden bei 0°C 10 g (20.9 mmol) Methyl-2-(benzyloxy)-5-brom-N- (tert-butoxycarbonyl)-beta-oxophenylalaninat (Beispiel 3A) gelöst in 25 ml THF zugetropft. Nach beendeter Zugabe wird die Lösung unter langsamem Erwärmen auf RT 16 h gerührt. Anschließend tropft man 15 ml Methanol langsam hinzu und engt im Vakuum ein. Der Rückstand wird chromatographisch an einer präparativen RP-HPLC gereinigt. Das Produkt liegt als threo / erythro Gemisch (1:5) vor. Der Enantiomerenüberschuss (ee) beträgt jeweils 55%, ermittelt durch analytische HPLC an chiraler Phase (Methode 8).
Ausbeute: 5.1 g (51% d. Th.).
threo-Isomer:
LC-MS (Methode 4): Rt = 2.59 min
MS (ESI): m/z = 480 (M+H)+.
Η-NMR (300 MHz, CDC13): δ = 1.3 (s, 9H), 2.66 (br, s, 1H), 3.75 (s, 3H), 4.77 (br. d, 1H), 5.14 (mc, 2H), 5.25 (br. s, 1H), 5.58 (br. s, 1H), 6.8 (d, 1 H), 7.28-7.50 (m, 6 H), 7.55 (d, 1H). erythro-Isomer:
LC-MS (Methode 4): Rt = 2.57 min
MS (ESI): m z = 480 (M+H)+.
'H-NMR (400 MHz, CDC13): δ = 1.43 (s, 9H), 3.40 (s, 3H), 4.49 (br. d, 1H), 4.71 (br. m, 1H), 5.05 (mc, 2H), 5.34 (br. m, 1H), 5.40 (br. m, 1H), 6.77 (d, 1 H), 7.28-7.45 (m, 6 H), 7.47 (d, 1H).
Beispiel 5A
Methyl-(betaR)-2-(benzyloxy)-5-brom-N-(tert-butoxycarbonyl)-beta-hydroxy-L-phenylalaninat
Figure imgf000036_0001
Die Verbindung aus Beispiel 4A wird als Isomerengemisch durch Chromatographie an einer chiralen stationären Phase (Methode 9) in die vier Diastereomere getrennt. Die Zielverbindung wird als dritte Fraktion eluiert.
LC-MS (Methode 6): Rt = 2.75 min
MS (ESI): m/z = 480 (M+H)+.
Beispiel 6A
Methy l-(betaR)-2-(benzyloxy)-5-brom-N-(tert-butoxycarbonyl)-beta- { [tert-butyl(dimethyl)silyl]- oxy}-L-phenylalaninat
Figure imgf000036_0002
Eine Lösung von 200 mg (0.416 mmol) Methyl-(betaR)-2-(benzyloxy)-5-brom-N-(tert- butoxycarbonyl)-beta-hydroxy-L-phenylalaninat (Beispiel 5A) in 2.5 ml DMF wird bei 0°C mit 220 mg (0.832 mmol) Trifluormethansulfonsäure-tert-butyldimethylsilylester, 0.084 mg (0.832 mmol) Triethylamin und 1 mg (0.42 mmol) 4-Dimethylaminopyridin versetzt und nach Aufwärmen auf RT für 24 Stunden gerührt. Die Reaktionsmischung wird mit Dichlormethan versetzt und nacheinander mit IN Νatriumhydrogencarbonatlösung und Wasser gewaschen. Die vereinigten organischen Phasen werden über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert, eingeengt und im Vakuum getrocknet. Das Rohprodukt wird chromatographisch gereinigt (RP-HPLC, Laufmittel Gradient aus Acetonitril / Wasser).
Ausbeute: 140 mg (57% d. Th.)
LC-MS (Methode 5): Rt = 3.51 min
MS (ESI): m/z = 595 (M+H)+.
1H-ΝMR (300 MHz, CDC13): δ = -0.15 (s, 3H), -0.7 (s, 3H), 0.87 (s, 9H), 1.29 (s, 9H), 3.72 (s, 3H), 4.7 (dd, 1H), 5.0-5.3 (m, 3H), 5.68 (d, 1H), 6.76 (d, 1 H), 7.25-7.50 (m, 7 H).
Beispiel 7A
2-(Trimethylsilyl)ethyl-2-(benzyloxy)-N-[(benzyloxy)carbonyl]-5-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2- dioxaborolan-2-yl)-L-phenylalaninat
Figure imgf000037_0001
Zu einer Lösung aus 2.0 g (3.17 mmol) 2(S)-Benzyloxycarbonylamino-3-(2-benzyloxy-5-iod- phenyl)-propionsäure-(2-trimethylsilyl)-ethylester (Beispiel HA aus WO03/106480) in 30 ml DMSO werden 0.923 g (9.5 mmol) Kaliumacetat zugegeben. Die Mischung wird deoxygeniert, indem durch die kräftig gerührte Lösung 15 min lang Argon durchgeleitet wird. Dann werden 0.924 g (3.64 mmol) 4,4,4',4',5,5,5',5'-Octamethyl-2,2'-bi-l,3,2-dioxaborolan und 0.116 g (0.160 mmol, 0.05 Äquivalente) Bis-(diphenylphosphino)ferrocenpalladium(II)chlorid zugegeben. Unter leichtem Argonstrom wird auf 80°C erhitzt und nach 6 h wieder abgekühlt. Die Mischung wird über Silicagel (Laufmittel: Dichlormethan) filtriert. Der Rückstand wird säulen- chromatographisch an Silicagel (Laufmittel: Cyclohexan:Ethylacetat 4:1) gereinigt.
Ausbeute: 1.12 g (56% d. Th.)
LC-MS (Methode 10): Rt = 3.02 min.
MS (EI): m/z = 632 (M+H)+
*H-NMR (200 MHz, CDC13): δ = 0.92 (dd, 2H), 1.31 (s, 12H), 2.95-3.95 (m, 2H), 4.11 (mc, 2H), 4.55 (11 (mc, 1H), 4.99 (s, 2H), 5.08 (s, 2H), 5.53 (d, 1H), 6.90 (d, 1H), 7.15-7.47 (m, 10H), 7.58 (d, 1H), 7.67 (dd, 1H).
Beispiel 8A
Methyl-(2S,3R)-3-(4,4'-bis(benzyloxy)-3,-{(2S)-2-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-3-oxo-3-[2- (trimethylsilyl)ethoxy]propyl}biphenyl-3-yl)-2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-3-{[tert-butyl- (dimethyl)sily 1] oxy } propanoat
Figure imgf000038_0001
Eine Lösung von 2.0 g (3.36 mmol) Methyl-(betaR)-2-(benzyloxy)-5-brom-N-(tert-butoxy- carbonyl)-beta-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}-L-phenylalaninat (Beispiel 6A) und 2.92 g (3.70 mmol) 2-(Trimethylsilyl)ethyl-2-(benzyloxy)-N-[(benzyloxy)carbonyl]-5-(4,4,5,5-tetra- methyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)-L-phenylalaninat (Beispiel 7A) in 16 ml l-Methyl-2-pyrrolidon wird inertisiert und mit Argon gesättigt (ca. 30 min Argon durchleiten). Anschließend gibt man 250 mg (0.34 mmol) Bis(diphenylphosphino)ferrocen-palladium(II)chlorid (PdCl2(dppf)), 2.19 g (6.73 mmol) Cäsiumcarbonat und 0.8 ml Wasser hinzu. Das Reaktionsgemisch wird mit Argon leicht überströmt und für 3 h bei 50°C gerührt. Die Mischung wird abgekühlt, in Essigsäureethylester aufgenommen und nacheinander mit gesättigter Νatriumchlorid-Lösung und Wasser gewaschen. Die organische Phase wird über Magensiumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel wird im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird säulenchromatographisch an Kieselgel gereinigt (Cyclohexa Essigsäureethylester Gradient: 15:1— »10:1) und anschließend in Methanol ausgerührt. Der entstandene Feststoff wird abfiltriert und im Hochvakuum getrocknet.
Ausbeute: 2.77 g (77% d. Th.).
LC-MS (Methode 5): R, = 3.75 min
MS (EI): m z = 1019 (M+H)+.
1H-NMR (300 MHz, CDC13): δ = -0.11 (s, 3H), 0.00 (m, 12H), 0.8-0.95 (m, 11H), 1.17 (s, 9H), 3.0-3.3 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 4.0-4.25 (m, 2H), 4.52-4.65 (m, 1H), 4.77 (mc, 1H), 4.92-5.3 (m, 7H), 5.52-5.65 (m, 1H), 5.77 (d, 1H), 6.85-6.97 (m, 2H), 7.19-7.46 (m, 16H), 7.48-7.65 (m, 3H).
Beispiel 9A
Methyl-(2S,3R)-2-amino-3-(4,4'-bis(benzyloxy)-3,-{(2S)-2-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-3-oxo- 3-[2-(trimethylsilyl)ethoxy]propyl}biρhenyl-3-yl)-3-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}propanoat Hydrochlorid
Figure imgf000039_0001
Zu einer auf 0°C gekühlten Lösung von 1.64 g (1.61 mmol) Methyl-(2S,3R)-3-(4,4'- bis(benzyloxy)-3'-{(2S)-2-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-3-oxo-3-[2-(trimethylsilyl)ethoxy]- propyl}biphenyl-3-yl)-2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-3-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}propanoat (Beispiel 8A) in 5 ml wasserfreiem Dioxan werden 30 ml einer 4M Chlorwasserstoff-Dioxan- Lösung über ca. 20 min hinzugegeben. Nach 3 h Rühren wird das Lösungsmittel im Vakuum eingedampft, das Rohprodukt im Hochvakuum getrocknet und ohne weitere Reinigung für nachfolgende Synthesen eingesetzt.
Ausbeute: quant.
LC-MS (Methode 4): R. = 3.24 min.
MS (EI): m/z = 919 (M-HC1+H)+. Beispiel 10A
Methyl-(2S,3R)-2-[((2S,4R)-5-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-4- {[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}pentanoyl)amino]-3-(4,4'-bis(benzyloxy)-3'-{(2S)-2-{[(benzyl- oxy)carbonyl]amino}-3-oxo-3-[2-(tτimethylsilyl)ethoxy]propyl}biphenyl-3-yl)-3-{[tert-butyl(di- methyl)silyl]oxy}propanoat
Figure imgf000040_0001
Zu einer auf 0°C gekühlten Lösung von 1.54 g (1.61 mmol) Methyl-(2S,3R)-2-amino-3-(4,4'- bis(benzyloxy)-3 '- {(2S)-2- { [(benzyloxy)carbony 1] amino } -3 -oxo-3 -[2-(trimethylsilyl)ethoxy]-pro- pyl}biphenyl-3-yl)-3-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}propanoat Hydrochlorid (Beispiel 9A) und 0.88 g (1.77 mmol) 5-Benzyloxycarbonylamino-2(S)-tert-butoxycarbonylamino-4(R)-(tert- butyldimethylsilyloxy)-pentansäure (Beispiel 14A aus WO03/106480) in 25 ml wasserfreiem DMF werden 0.76 g (2.01 mmol) HATU und 0.58 g (4.5 mmol) N,N-Diisopropylethylamin hinzugegeben. Nach 30 min Rühren bei 0°C werden zusätzliche 0.15 g (1.13 mmol) N,N- Diisopropylethylamin hinzugegeben. Das Reaktionsgemisch wird 15 h bei RT gerührt. Das Lösungsmittel wird dann eingedampft und der Rückstand in Dichlormethan aufgenommen. Die organische Phase wird nacheinander mit Wasser, 0.2Ν Salzsäure und gesättigter wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Das Rohprodukt wird säulenchromatographisch. an Kieselgel mit Dichlormethan/Essigsäureethylester (Gradient 30/l→20/l→2/l) gereinigt.
Ausbeute: 1.94 g (86% d. Th.)
LC-MS (Methode 4): R, = 3.98 min.
MS (EI): m/z = 1397 (M+H)+. Beispiel 11A
Methyl-(2S,3R)-2-({(2S)-3-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]- butanoyl}amino)-3-(4,4'-bis(benzyloxy)-3'-{(2S)-2-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-3-oxo-3-[2-
(trimethylsilyl)ethoxy]propyl}biphenyl-3-yl)-3-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}propanoat
Figure imgf000041_0001
Die Herstellung erfolgt analog Beispiel 10A aus 0.352 g (0.37 mmol) Methyl-(2S,3R)-2-amino-3- (4,4'-bis(benzyloxy)-3'-{(2S)-2-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-3-oxo-3-[2-(trimethylsilyl)ethoxy]- propyl}biphenyl-3-yl)-3-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}propanoat Hydrochlorid (Beispiel 9A) und 142 mg (0.41 mmol) (2S)-4-{[(Benzyloxy)carbonyl]amino}-2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]- butancarbonsäure mit 154 mg (0.41 mmol) HATU und insgesamt 167 mg (1.29 mmol) Hünig-Base in 5 ml absolutem DMF.
Ausbeute: 412 mg (72% d. Th.)
LC-MS (Methode 4): Rt = 3.55 min.
MS (EI): m/z = 1253 (M+H)+.
Beispiel 12A
Methyl-(2S,3R)-2-({(2S)-5-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]- pentanoyl}ammo)-3-(4,4'-bis(benzyloxy)-3'-{(2S)-2-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-3-oxo-3-[2-
(trimethylsilyl)ethoxy]propyl}biphenyl-3-yl)-3-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}propanoat
Figure imgf000042_0001
Die Herstellung erfolgt analog Beispiel 10A aus 0.98 g (1.02 mmol) Methyl-(2S,3R)-2-amino-3- (4,4'-bis(benzy loxy)-3 '- {(2S)-2- { [(benzy loxy)carbonyl] amino } -3 -oxo-3 -[2-(trimethylsily l)ethoxy]- propyl}biphenyl-3-yl)-3-{[tert-buτyl(dimethyl)silyl]oxy}propanoat Hydrochlorid (Beispiel 9A) und 0.45 g (1.23 mmol) N5-[(Benzyloxy)carbonyl]-N2-(tert-butoxycarbonyl)-L-ornithin mit 0.486 g (1.28 mmol) HATU und insgesamt 0.463 g (3.58 mmol) Hünig-Base in 16 ml absolutem DMF.
Ausbeute: 1.06 g (68% d. Th.)
LC-MS (Methode 4): Rt = 3.56 min.
MS (El): m/z = 1267 (M+H)+.
Beispiel 13A
Methyl-(2S,3R)-2-({(2S)-3-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]- hexanoyl}amino)-3-(4,4'-bis(benzyloxy)-3'-{(2S)-2-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-3-oxo-3-[2- (trimethylsilyl)ethoxy]propy 1 } biphenyl-3-yl)-3 - { [tert-butyl(dimethyl)sily 1] oxy } propanoat
Figure imgf000042_0002
Die Herstellung erfolgt analog Beispiel 10A aus 0.38g (0.40 mmol) Methyl-(2S,3R)-2-amino-3- (4,4'-bis(benzyloxy)-3'-{(2S)-2-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-3-oxo-3-[2-(trimethylsilyl)ethoxy]- propyl}biphenyl-3-yl)-3-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}propanoat Hydrochlorid (Beispiel 9A) und 0.18 g (0.48 mmol) Ns-[(Benzyloxy)carbonyl]-N2-(tert-butoxycarbonyl)-L-lysin mit 0.188 g (0.50 mmol) HATU und insgesamt 0.180 g (1.39 mmol) Hünig-Base in 5 ml absolutem DMF.
Ausbeute: 0.63 g (78% d. Th.)
LC-MS (Methode 4): R, = 3.57 min.
MS (EI): m z = 1281 (M+H)+.
Beispiel 14A
(2S)-2-{[(Benzyloxy)carbonyl]amino}-3-{4,4'-bis(benzyloxy)-3'-[(lR,2S)-2-({(2S,4R)-5-
{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-4-hydroxypentanoyl}amino)-l- hy droxy-3 -methoxy-3 -oxopropy 1] bipheny 1-3 -y 1 } pr opionsäure
Zu einer Lösung von 183 mg (0.13 mmol) Methyl-(2S,3R)-2-[((2S,4R)-5-{[(benzyloxy)carbonyl]- amino}-2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-4-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}pentanoyl)amino]-3- (4,4'-bis(benzyloxy)-3'-{(2S)-2-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-3-oxo-3-[2-(trimethylsilyl)ethoxy]- propyl}biphenyl-3-yl)-3-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}propanoat (Beispiel 10A) in 2.65 ml absolutem DMF werden bei RT tropfenweise 0.52 ml IN Tetrabutylammoniumfluorid-Lösung in THF hinzugegeben. Nach 60 min bei RT wird auf 0°C abgekühlt und mit Eiswasser versetzt. Es wird sofort mit Essigsäureethylester und etwas IN Salzsäure-Lösung versetzt. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet, im Vakuum eingeengt und 1 h im Hochvakuum getrocknet. Das Rohprodukt wird ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Ausbeute: quant. LC-MS (Methode 4): R, = 2.82 min.
MS (EI): m z = 1069 (M+H)+.
Analog zur Vorschrift des Beispiels 14A werden die in der folgenden Tabelle aufgeführten Beispiele 15A bis 17A hergestellt.
Figure imgf000044_0001
Beispiel 18A
Methyl-(2S,3R)-2-({(2S,4R)-5-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-4- hydroxypentanoyl}amino)-3-{4,4'-bis(benzyloxy)-3'-[(2S)-2-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-3-oxo-
3-(ρentafluorphenoxy)propyl]biphenyl-3-yl}-3-hydroxypropanoat
Figure imgf000045_0001
141 mg (Rohprodukt, ca. 0.13 mmol) (2S)-2-{[(Benzyloxy)carbonyl]amino}-3-{4,4'-bis- (benzyloxy)-3'-[(lR,2S)-2-({(2S,4R)-5-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-2-[(tert-butoxycarbonyl)- amino]-4-hydroxypentanoyl}amino)-l-hydroxy-3-methoxy-3-oxopropyl]biphenyl-3-yl}- propionsäure (Beispiel 14A) werden in 5 ml Dichlormethan vorgelegt und mit 121 mg (0.66 mmol) Pentafluorphenol, gelöst in 1 ml Dichlormethan, versetzt. Man fügt 2 mg (0.01 mmol) DMAP hinzu und kühlt auf -25°C (Ethanol/Kohlendioxid-Bad). Bei -25°C werden 39 mg (0.172 mmol) EDC hinzugefügt. Die Mischung erwärmt sich über Nacht langsam auf RT. Die Reaktionsmischung wird im Vakuum eingeengt und im Hochvakuum kurz getrocknet. Das Rohprodukt wird ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Ausbeute: quant.
LC-MS (Methode 5): Rt = 3.34 min.
MS (EI): m/z = 1235 (M+H)+.
Analog zur Vorschrift des Beispiels 18A werden die in der folgenden Tabelle aufgeführten Beispiele 19A bis 21 A hergestellt.
Figure imgf000046_0001
Beispiel 22A
Methyl-(2S,3R)-2-[((2S,4R)-2-amino-5-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-4-hydroxypentanoyl)- amino]-3-{4,4'-bis(benzyloxy)-3'-[(2S)-2-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-3-oxo-3-(pentafluor- phenoxy)propyl]biphenyl-3-yl}-3-hydroxypropanoat Hydrochlorid
Figure imgf000047_0001
0.163 g (Rohprodukt, ca. 0.132 mmol) Methyl-(2S,3R)-2-({(2S,4R)-5-{[(benzyloxy)carbonyl]- amino}-2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-4-hydroxypentanoyl}amino)-3-{4,4'-bis(benzyloxy)-3'- [(2S)-2- { [(benzy loxy)carbony 1] amino} -3 -oxo-3 -(pentafluorphenoxy)propy l]bipheny 1-3 -y 1} -3- hydroxypropanoat (Beispiel 18A) werden bei 0°C in 4 ml einer 4M Chlorwasserstoff-Dioxan- Lösung gelöst. Nach 2.5 h bei 0°C wird die Reaktionslösung bei im Vakuum eingeengt, mehrmals mit Dichlormethan coevaporiert und im Hochvakuum getrocknet. Das Rohprodukt wird ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Ausbeute: quant.
LC-MS (Methode 5): Rt = 2.71 min.
MS (EI): m/z = 1135 (M-HC1+H)+.
Analog zur Vorschrift des Beispiels 22A werden die in der folgenden Tabelle aufgeführten Beispiele 23A bis 25A hergestellt.
Figure imgf000048_0001
Beispiel 26A
Methyl-(7R,8S,l lS,14S)-5,17-bis(benzyloxy)-14-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-l l-((2R)-3- { [(benzyloxy)carbonyl] amino} -2-hydroxypropyl)-7-hy droxy- 10,13-dioxo-9, 12-diazatri- cyclo[14.3.1.12'6]henicosa-l(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8-carboxylat
Figure imgf000049_0001
150 mg (Rohprodukt, ca. 0.13 mmol) Methyl-(2S,3R)-2-[((2S,4R)-2-amino-5-{[(benzyloxy)- carbonyl] amino } -4-hydroxypentanoyl)amino] -3 - {4,4'-bis(benzyloxy)-3 '-[(2S)-2- { [(benzy loxy)- carbonyl]amino}-3-oxo-3-(pentafluorphenoxy)propyl]biphenyl-3-yl}-3-hydroxypropanoat Hydrochlorid werden in 150 ml Dichlormethan gelöst und tropfenweise mit einer Lösung von 0.37 ml Triethylamin in 30 ml Dichlormethan versetzt. Es wird über Nacht bei RT gerührt. Zur Aufarbeitung wird das Gemisch schonend im Vakuum einrotiert und der Rückstand in Acetonitril verrührt. Der Feststoff wird abfiltriert, mit Acetonitril gewaschen und im Hochvakuum getrocknet.
Ausbeute: 73 mg (58% d. Th., über vier Stufen ausgehend von Beispiel 10A).
LC-MS (Methode 5): Rt = 3.02 min.
MS (EI): m/z = 951 (M+H)+.
JH-NMR (300 MHz, d6-DMSO): δ = 1.42-1.61 (m, 1H), 1.7-1.95 (m, 1H), 2.92 (mc, 1H), 3.02-3.13 (m, 2H), 3.3 (m, 1H unter D2O), 3.68 (s, 3H), 4.45 (mc, 1H), 4.68 (mc, 1H), 4.83-5.25 (m, 9H), 5.77 (d, 1H), 5.86 (d, 1H), 6.53 (d, 1H), 6.95-7.2 (m, 4H), 7.21-7.60 (m, 23H), 8.54 (d, 1H), 8.64 (d, 1H).
Analog zur Vorschrift des Beispiels 26A werden die in der folgenden Tabelle aufgeführten Beispiele 27A bis 29A hergestellt.
Figure imgf000050_0001
Beispiel 30A
(7R,8S,11 S,14S)-5,17-Bis(benzyloxy)-14-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-l l-((2R)-3-{[(benzyl- oxy)carbonyl] amino} -2-hydroxypropy l)-7-hydroxy- 10, 13 -dioxo-9, 12-diazatricy clo [14.3.1.12'6]- henicosa-l(20),2(21),3,5,16,l 8-hexaen-8-carbonsäure
Figure imgf000051_0001
Eine Suspension aus 25 mg (0.026 mmol) Methyl-(7R,8S,llS,14S)-5,17-bis(benzyloxy)-14- {[(benzyloxy)carbonyl]amino}-l l-((2R)-3-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-2-hydroxypropyl)-7- hydroxy-10,13-dioxo-9,12-diazatricyclo[14.3.1.12'6]henicosa-l(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8- carboxylat (Beispiel 26A) in 10 ml Dioxan /Wasser (4:1) wird nach Zugabe von 0.53 ml (0.053 mmol) einer 0.1N wässrigen Lithiumhydroxid-Lösung für 3 h bei 10°C gerührt. Durch Zugabe von 0.1N Salzsäure wird auf pH 2 gestellt, der ausgefallene Feststoff wird abfiltriert und im Hochvakuum getrocknet.
Ausbeute: 24 mg (98% d. Th.)
LC-MS (Methode 6): Rt = 2.85 min.
MS (EI): m/z = 937 (M+H)+.
Beispiel 31 A
(7R,8S,l lS,14S)-5,17-Bis(benzyloxy)-14-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-l l-(3-{[(benzyloxy)- carbonyl]amino}propyl)-7-hydroxy-l 0, 13-dioxo-9, 12-diazatricyclo[ 14.3.1.12'6]henicosa- 1 (20),2(21 ),3 ,5 , 16, 18-hexaen-8-carbonsäure
Figure imgf000052_0001
Eine Suspension aus 30 mg (0.032 mmol) Methyl-(7R,8S,l lS,14S)-5,17-bis(benzyloxy)-14- {[(benzyloxy)carbonyl]amino}-l l-(3-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}propyl)-7-hydroxy-10,13- dioxo-9, 12-diazatricyclo [14.3.1.12'6]henicosa- 1 (20),2(21 ),3 ,5 , 16, 18-hexaen-8-carboxy lat (Beispiel 28A) in 25 ml Tetrahydrofuran / Wasser (4:1) wird nach Zugabe von 0.64 ml (0.054 mmol) einer 0.1N wässrigen Lithiumhydroxid-Lösung für 12 h bei RT gerührt. Durch Zugabe von 0.1N Salzsäure wird auf pH 2 gestellt, der ausgefallene Feststoff wird abfiltriert und im Hochvakuum getrocknet.
Ausbeute: 25 mg (85% d. Th.)
LC-MS (Methode 5): Rt = 2.95 min.
MS (EI): m/z = 921 (M+H)+.
Analog zur Vorschrift des Beispiels 31A werden die in der folgenden Tabelle aufgeführten Beispiele 32A und 33A hergestellt.
Figure imgf000052_0002
Figure imgf000053_0002
Beispiel 34A
Benzyl-{(2R)-3-[(7R,8S,llS,14S)-8-{[(2-aminoethyl)amino]carbonyl}-5,17-bis(benzyloxy)-14- { [(benzyloxy)carbonyl]amino}-7-hydroxy-l 0, 13-dioxo-9,l 2-diazatricyclo[ 14.3.1.12'6]henicosa- 1(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-l l-yl]-2-hydroxypropyl}carbamat
Figure imgf000053_0001
Eine Lösung aus 40 mg (0.042 mmol) Methyl-(7R,8S,l lS,14S)-5,17-bis(benzyloxy)-14- {[(benzyloxy)carbonyl]amino}-l l-((2R)-3-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-2-hydroxypropyl)-7- hydroxy-10,13-dioxo-9,12-diazatricyclo[14.3.1.12,6]henicosa-l(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8- carboxylat (Beispiel 26A) in 1.5 ml 1,2-Diaminoethan wird nach Zugabe von 0.55 mg (0.008 mmol) Kaliumcyanid 16 h bei RT gerührt. Nach Zugabe von Wasser wird der ausgefallene Feststoff abfiltriert und im Hochvakuum getrocknet.
Ausbeute: 27 mg (65% d. Th.) LC-MS (Methode 5): Rt = 2.39 min.
MS (EI): m/z = 979 (M+H)+.
Analog zur Vorschrift des Beispiels 34A werden die in der folgenden Tabelle aufgeführten Beispiele 35A bis 37A hergestellt.
min.
Figure imgf000054_0001
Beispiel 38A
Benzyl- {2-[(7R,8S, 11 S, 14S)-5, 17-bis(benzyloxy)-l 4-{ [(benzyloxy)carbonyl]amino } -8-[( {2-[bis(2- aminoethyl)amino]ethyl}amino)carbonyl]-7-hydroxy-10,13-dioxo-9,12-diazatricyclo[14.3.1.12,6]- henicosa-l(20),2(21),3,5,l 6,18-hexaen-l l-yl]ethyl}carbamat
Figure imgf000055_0001
Die Herstellung erfolgt analog zu Beispiel 34A aus 15 mg (0.02 mmol) Methyl-(7R,8S,11S,14S 5 , 17-bis(benzyloxy)- 14- { [(benzy loxy)carbonyl] amino } - 11 -(2- { [(benzyloxy)carbony 1] amino } - ethyl)-7-hydroxy-l 0, 13-dioxo-9, 12-diazatricyclo[l 4.3.1.12,6]henicosa-l (20),2(21 ),3,5 , 16, 18- hexaen-8-carboxylat (Beispiel 27A) in 0.5 ml N,N-Bis(2-aminoethyl)ethan-l,2-diamin und mit 0.11 mg (0.0016 mmol) Kaliumcyanid.
Ausbeute: 14.4 mg (85% d. Th.)
LC-MS (Methode 5): Rt = 1.99 min.
MS (EI): m/z = 1035 (M+H)+.
Beispiel 39A
Methyl-(7R,8S,l lS,14S)-14-amino-ll-[(2R)-3-amino-2-hydroxypropyl]-5,7,17-trihydroxy-10,13- dioxo-9, 12-diazatricy clo [14.3.1.12,6]henicosa- 1 (20),2(21 ),3 , 5, 16, 18-hexaen-8-carboxy lat Dihydrochlorid
Figure imgf000055_0002
Es werden 30 mg (0.32 mmol) Methyl-(7R,8S,l lS,14S)-5,17-bis(benzyloxy)-14-{[(benzyIoxy)- carbonyl]amino}-ll-((2R)-3-{[(benzyloxy)carbonyl]amino}-2-hydroxypropyl)-7-hydroxy-10,13- dioxo-9, 12-diazatricyclo[l 4.3.1.12'6]henicosa-l (20),2(21 ),3,5, 16, 18-hexaen-8-carboxylat (Beispiel 26A) in ein Gemisch aus 10 ml Essigsäure/Wasser/Ethanol 4:1:1 gegeben. Dazu gibt man 10 mg Palladium auf Aktivkohle (10%ig) und hydriert anschließend 15 h bei Normaldruck. Das Reaktionsgemisch wird über vorgewaschenem Kieselgur filtriert und das Filtrat im Vakuum emrotiert. Der Rückstand wird mit 0.95 ml 0.1N wässriger Salzsäure versetzt und eingeengt. Man verrührt den Rückstand mit 10 ml Diethylether und dekantiert ab. Der zurückgebliebene Feststoff wird im Hochvakuum getrocknet.
Ausbeute: 18 mg (97% d. Th.).
LC-MS (Methode 7): Rt = 2.29 min
MS (EI): m/z = 503 (M-2HC1+H)+.
!H-NMR (400 MHz, D2O): δ = 1.8-1.93 (m, 1H), 1.96-2.1 (m, 1H), 2.83-2.93 (m, 1H), 2.97-3.12 (m, 2H), 3.5 (m0, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.95-4.05 (m, 1H), 4.37-4.42 (m, 1H), 4.9 (mc, 1H), 4.94-4.49 (m, 1H), 5.78 (mc, 1H), 6.84-6.95 (m, 3H), 7.27-7.42 (m, 3H).
Analog zur Vorschrift des Beispiels 39A werden die in der folgenden Tabelle aufgeführten Beispiele 40A bis 46A hergestellt.
Figure imgf000056_0001
Figure imgf000057_0001
Figure imgf000058_0002
Beispiel 47A
(7R,8S,11 S,14S)-14-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]-l l-{(2R)-3-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-2- hydroxypropyl}-5,7,17-trihydroxy-10,13-dioxo-9,12-diazatricyclo[14.3.1.12'6]henicosa-
1 (20),2(21 ),3 ,5 , 16, 18-hexaen-8-carbonsäure
Figure imgf000058_0001
50 mg (0.087 mmol) Methyl-(7R,8S,l lS,14S)-14-amino-l l-[(2R)-3-amino-2-hydroxypropyl]- 5,7,17-trihydroxy-10,13-dioxo-9,12-diazatricyclo[14.3.1.12>6]henicosa-l(20),2(21),3,5,16,18- hexaen-8-carboxylat Dihydrochlorid (Beispiel 39A) werden in 0.43 ml (0.43 mmol) IN Natronlauge gelöst und bei Raumtemperatur unter Rühren mit 56.9 mg (0.26 mmol) Di-tert-butyl- dicarbonat, gelöst in 0.5 ml Methanol, versetzt. Nach 2 h Rühren bei RT wird durch Zutropfen von 0.1N Salzsäure auf pH 3 gestellt. Man extrahiert dreimal mit Essigsäureethylester, trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat und dampft im Vakuum bis zur Gewichtskonstanz ein.
Ausbeute: 37 mg (62% d. Th.).
LC-MS (Methode 6): Rt = 1.83 min.
MS (EI): m z = 703 (M+H)+.
Beispiel 48A
(7R,8S, 11 S, 14S)-14-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]- 11 - {3-[(tert-butoxycarbonyl)amino]propyl} -
5,7,17-trihydroxy-10,13-dioxo-9,12-diazatricyclo[14.3.1.12'6]henicosa-l(20),2(21),3,5,16,18- hexaen-8-carbonsäure
Figure imgf000059_0001
Die Herstellung erfolgt analog Beispiel 47 A aus 50 mg (0.088 mmol) Methyl-(7R,8S,11S,14S 14-amino-l l-(3-aminopropyl)-5,7,17-trihydroxy-10,13-dioxo-9,12-diazatricyclo[14.3.1.12,6]- henicosa-l(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8-carboxylat Dihydrochlorid (Beispiel 41 A) mit 58 mg (0.26 mmol) Di-tert-butyl-dicarbonat in 0.44 ml (0.44 mmol) IN Natronlauge und 0.5 ml Methanol.
Ausbeute: 4.6 mg (77% d. Th.).
LC-MS (Methode 6): R, = 1.93 min. MS (EI): m/z = 687 (M+H)+.
Beispiel 49A
tert-Butyl-[(lS)-4-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-l-(hydroxymethyl)butyl]carbamat
Figure imgf000060_0001
Eine Lösung von 300 mg (0.90 mmol) N2,N5-Bis(tert-butoxycarbonyl)-L-ornithin in 10 ml Tetrahydrofuran wird bei -10°C mit 91 mg (0.90 mmol) 4-Methylmorpholin und 98 mg (0.90 mmol) Chlorameisensäureethylester versetzt und 30 min gerührt. Bei dieser Temperatur werden 1.81 ml (1.81 mmol) einer IM Lösung von Lithiumaluminiumhydrid in Tetrahydrofuran langsam zugetropft. Es wird langsam auf RT erwärmt und für 12 h bei RT gerührt. Unter Eiskühlung gibt man vorsichtig 0.1 ml Wasser und 0.15 ml 4.5%ige Natriumhydroxid-Lösung hinzu und rührt weitere 3 h bei RT. Der Ansatz wird filtriert und das Filtrat wird im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird in Essigsäureethylester gelöst, mit Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und erneut im Vakuum zur Trockne eingeengt. Das Produkt wird ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Ausbeute: 239 mg (83% d. Th.)
MS (ESI): m/z = 319 (M+H)+; 341 (M+Na)+.
Beispiel 50A
(2S)-2,5-Bis[(tert-butoxycarbonyl)amino]pentyl-methansulfonat
Figure imgf000060_0002
Eine Lösung von 240 mg (0.75 mmol) tert-Butyl-[(lS)-4-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-l- (hydroxymethyl)butyl]carbamat (Beispiel 49 A) in 20 ml Dichlormethan wird mit 103 mg (0.90 mmol) Methansulfonsäurechlorid und 0.21 ml (1.5 mmol) Triethylamin versetzt und für 16 h bei RT gerührt. Es wird mit Dichlormethan verdünnt und zweimal mit 0.1N Salzsäure gewaschen. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum bis zur Trockne eingeengt. Das Produkt wird ohne weitere Reinigung umgesetzt. Ausbeute: 218 mg (73% d. Th.)
MS (ESI): m z = 419 (M+Na)+.
Beispiel 51A
tert-Butyl-{(4S)-5-azido-4-[(tert-butoxycarbonyl)amino]pentyl}carbamat
Figure imgf000061_0001
Eine Lösung von 218 mg (0.55 mmol) (2S)-2,5-Bis[(tert-butoxycarbonyl)amino]pentyl- methansulfonat (Beispiel 50A) in 15 ml Dimethylformamid wird mit 36 mg (0.55 mmol) Natriumazid versetzt und 12 h bei 70°C gerührt. Ein Großteil des Lösungsmittel wird im Vakuum abdestilliert und der Rückstand wird mit Essigsäureethylester verdünnt. Es wird mehrmals mit gesättigter Natriumhydrogencarbonat-Lösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trockne eingeengt. Das Produkt wird ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Ausbeute: 188 mg (99% d. Th.)
MS (ESI): m/z = 344 (M+H)+.
Beispiel 52A
tert-Butyl-{(4S)-5-amino-4-[(tert-butoxycarbonyl)amino]pentyl}carbamat
Figure imgf000061_0002
Eine Lösung von 188 mg (0.55 mmol) tert-Butyl-{(4S)-5-azido-4-[(tert-butoxycarbonyl)amino]- pentyl}carbamat (Beispiel 51 A) in Ethanol wird nach Zugabe von 20 mg Palladium auf Aktivkohle (10%ig) 12 h bei RT und Normaldruck hydriert. Es wird über Kieselgur filtriert und der Rückstand mit Ethanol gewaschen. Das Filtrat wird im Vakuum zur Trockne eingeengt. Das Produkt wird ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Ausbeute: 102 mg (59% d. Th.)
MS (ESI): m/z = 318 (M+H)+; 340 (M+Na)+. Beispiel 53A
tert-Butyl-{(3S)-3-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-4-hydroxybutyl}carbamat
Figure imgf000062_0001
Die Herstellung erfolgt analog Beispiel 49A aus 300 mg (0.60 mmol) Dicyclohexylamino-(2S)- 2,4-bis[(tert-butoxycarbonyl)amino]butanat in 10 ml Tetrahydrofuran mit 61 mg (0.60 mmol) 4- Methylmorpholin, 65 mg (0.60 mmol) Chlorameisensäureethylester und 1.2 ml (1.20 mmol) einer IM Lösung von Lithiumaluminiumhydrid in Tetrahydrofuran. Das Produkt wird ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Ausbeute: 174 mg (95% d. Th.)
MS (ESI) : m z = 305 (M+H)+.
Beispiel 54A
(2S)-2,4-Bis[(tert-butoxycarbonyl)amino]butyl-methansulfonat
Figure imgf000062_0002
Die Herstellung erfolgt analog Beispiel 50A aus 250 mg (0.81 mmol) tert-Butyl-{(3S)-3-[(tert- butoxycarbonyl)amino]-4-hydroxybutyl}carbamat (Beispiel 53A) in 20 ml Dichlormethan mit 110 mg (0.97 mmol) Methansulfonsäurechlorid und 0.23 ml (1.6 mmol) Triethylamin. Das Produkt wird ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Ausbeute: 200 mg (64% d. Th.)
MS (ESI): m/z = 383 (M+H)+; 400 (M+Na)+. Beispiel 55A
tert-Butyl-{(3S)-4-azido-3-[(tert-butoxycarbonyl)amino]butyl}carbamat
Figure imgf000063_0001
Die Herstellung erfolgt analog Beispiel 51A aus 200 mg (0.52 mmol) (2S)-2,4-Bis[(tert- butoxycarbonyl)amino]butyl-methansulfonat (Beispiel 54A) in 15 ml Dimethylformamid mit 34 mg (0.52 mmol) Natriumazid. Das Produkt wird ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Ausbeute: 171 mg (99% d. Th.)
Beispiel 56A
tert-Butyl-{(3S)-4-amino-3-[(tert-butoxycarbonyl)amino]butyl}carbamat
Figure imgf000063_0002
Die Herstellung erfolgt analog Beispiel 52A aus 171 mg (0.52 mmol) tert-Butyl-{(3S)-4-azido-3- [(tert-butoxycarbonyl)ammo]butyl}carbamat (Beispiel 55A) in 10 ml Ethanol unter Zusatz von 20 mg Palladium auf Aktivkohle (10%ig). Das Produkt wird ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Ausbeute: 117 mg (75% d. Th.)
MS (ESI): m/z = 304 (M+H)+; 326 (M+Na)+.
Beispiel 57 A
Benzyl-{(lS)-4-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-l-[({2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]ethyl}amino)- carbonyl]butyl} carbamat
Figure imgf000063_0003
Unter Argon werden 300 mg (0.82 mmol) N2-[(Benzyloxy)carbonyl]-NJ-(tert-butoxycarbonyl)-L- ornithin und 171 mg (1.06 mmol) tert-Butyl-(2-aminoethyl)carbamat in 6 ml Dimethylformamid gelöst. Bei 0°C (Eisbad) werden dann 204 mg (1.06 mmol) EDC und 33 mg (0.25 mmol) HOBt zugegeben. Es wird langsam auf RT erwärmt und für 12 h bei RT gerührt. Die Lösung wird im Vakuum eingeengt und der Rückstand wird mit Essigsäureethylester aufgenommen. Die organische Phase wird nacheinander mit gesättigter Νatriumhydrogencarbonat- und Νatrium- chlorid-Lösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft. Der verbleibende Feststoff wird im Hochvakuum getrocknet.
Ausbeute: 392 mg (94% d. Th.)
LC-MS (Methode 5): Rt = 2.36 min.
MS (EI): m/z = 509 (M+H)+
Beispiel 58A
Benzyl- { ( 1 S)-4-[(tert-butoxycarbony l)amino]- 1 -[( { 3 -[(tert-butoxycarbonyl)amino]-2-hydroxy- propyl} amino)carbonyl]butyl} carbamat
Figure imgf000064_0001
Die Herstellung erfolgt analog zu Beispiel 57A aus 300 mg (0.82 mmol) N2- [(Benzyloxy)carbonyl]-N -(tert-butoxycarbonyl)-L-ornithin und 202 mg (1.06 mmol) tert-Butyl-(3- amino-2-hydroxypropyl)carbamat in 6 ml Dimethylformamid unter Zusatz von 204 mg (1.06 mmol) EDC und 33 mg (0.25 mmol) HOBt.
Ausbeute: 412 mg (93% d. Th.)
LC-MS (Methode 6): R, = 2.23 min.
MS (EI): m z = 539 (M+H)+ Beispiel 59A
NJ-(tert-Butoxycarbonyl)-N-{2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]ethyl}-L-ornithinamid
Figure imgf000065_0001
Die Herstellung erfolgt analog Beispiel 52A aus 390 mg (0.77 mmol) Benzyl- {(lS)-4-[(tert- butoxycarbonyl)amino]- 1 -[( {2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]ethyl} amino)carbonyl]butyl}-carba- mat (Beispiel 57A) in 50 ml Ethanol unter Zusatz von 40 mg Palladium auf Aktivkohle (10%ig). Das Produkt wird ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Ausbeute: 263 mg (91% d. Th.)
MS (ESI): m/z = 375 (M+H)+; 397 (M+Νa)+.
Beispiel 60A
N5-(te7-t-Butoxycarbonyl)-N-{3-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-2-hydroxypropyl}-L-ornithinamid
Figure imgf000065_0002
Die Herstellung erfolgt analog Beispiel 52A aus 412 mg (0.76 mmol) Benzyl- {(lS)-4-[(tert- butoxycarbonyl)amino]-l-[({3-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-2-hydroxypropyl}amino)-carbonyl]- butyl}carbamat (Beispiel 58A) in 50 ml Ethanol unter Zusatz von 41 mg Palladium auf Aktivkohle (10%ig). Das Produkt wird ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Ausbeute: 306 mg (99% d. Th.)
MS (ESI): m z = 405 (M+H)+. Beispiel 61A
tert-Butyl-[(7R,8S,llS,14S)-8-[({(2S)-2,5-bis[(tert-butoxycarbonyl)amino]pentyl}amino)- carbonyl]-ll-{3-[(tert-butoxycarbonyl)amino]proρyl}-5,7,17-trihydroxy-10,13-dioxo-9,12- diazatricyclo[14.3.1.12'6]henicosa-l(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-14-yl]carbamat
Figure imgf000066_0001
Unter Argon werden 23 mg (0.034 mmol) (7R,8S,llS,14S)-14-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]-ll- {3-[(tert-butoxycarbonyl)amino]propyl}-5,7,17-trihydroxy-10,13-dioxo-9,12-diazatricyclo- [14.3.1.12'6]henicosa-l(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8-carbonsäure (Beispiel 48A) und 11.9 mg (0.07 mmol) tert-Butyl-{(4S)-5-amino-4-[(tert-butoxycarbonyl)ammo]pentyl}carbamat (Beispiel 52A) in 0.75 ml Dimethylformamid gelöst. Bei 0°C (Eisbad) werden dann 8.5 mg (0.051 mmol) EDC und 1.4 mg (0.01 mmol) HOBt zugegeben. Es wird langsam auf RT erwärmt und für 12 h bei RT gerührt. Die Lösung wird im Vakuum eingeengt und der Rückstand wird mit Wasser verrührt. Der verbleibende Feststoff wird abgesaugt und durch präparative RP-HPLC gereinigt (Reprosil ODS-A, Laufmittel Acetonitril / 0.2% wässrige Trifluoressigsäure 5:95 -> 95:5).
Ausbeute: 15 mg (45% d. Th.)
LC-MS (Methode 6): Rt = 2.48 min.
MS (EI): m/z = 972 (M+H)+
Analog zur Vorschrift des Beispiels 61 A werden die in der folgenden Tabelle aufgeführten Beispiele 62A bis 66A hergestellt.
Figure imgf000067_0001
Beispiel 67A
(3S)-3-{[(Benzyloxy)carbonyl]amino}-6-[(tert-butoxycarbonyl)amino]hexanoylmethylcarbonat
Figure imgf000068_0001
Unter Argon werden 2 g (5.26 mmol) (3S)-3-{[(Benzyloxy)carbonyl]amino}-6-[(tert-butoxy- carbonyι)aminojhexansäure und 0.56 g (5.73 mmol) Triethylamin in 30 ml THF gelöst und auf 0°C abgekühlt. Dazu gibt man 0.59 g (5.73 mmol) Methylchloroformiat und lässt 3 Stunden bei 0°C nachrühren. Die Reaktionsmischung wird über Kieselgur filtriert. Das Filtrat wird direkt umgesetzt.
Beispiel 68A
Benzyl-[(lS)-4-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-l-(2-hydroxyethyl)butyl]carbamat
Figure imgf000068_0002
Das Filtrat von (3S)-3-{[(Benzyloxy)carbonyl]amino}-6-[(tert-butoxycarbonyl)amino]hexanoyl- methylcarbonat (Beispiel 67A) wird zu einer Suspension von 0.49 g (13.14 mmol) Natrium- borhydrid in 0.6 ml Wasser bei 0°C tropfenweise hinzugegeben. Die Mischung erwärmt sich langsam auf Raumtemperatur und wird über Nacht gerührt. Die Reaktionslösung wird in Vakuum eingeengt, und der Rückstand wird zur Aufarbeitung mit Essigsäureethylester und Wasser versetzt. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet, im Vakuum eingeengt und im Hochvakuum getrocknet. Das Rohprodukt wird ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Ausbeute: 570 mg (30% d. Th.)
LC-MS (Methode 6): Rt = 2.09 min.
MS (EI): m/z = 367 (M+H)+. Beispiel 69A
tert-Butyl-[(4S)-4-amino-6-hydroxyhexyl]carbamat
Figure imgf000069_0001
Die Herstellung erfolgt analog Beispiel 52A aus 620 mg (1.69 mmol) Benzyl-[(lS)-4-[(tert- butoxycarbonyl)amino]-l-(2-hydroxyethyl)butyl]carbamat (Beispiel 68A) in 60 ml Ethanol unter Zusatz von 100 mg Palladium auf Aktivkohle (10%ig). Das Produkt wird ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Ausbeute: 370 mg (95% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, D2O): δ = 1.2-1.6 (m, 6H), 1.4 (s, 9H), 2.6-3.0 (m, IH), 3.0-3.2 (m, 2H), 3.7- 3.9 (m, 2H), 4.6 (br.s, IH).
Beispiel 70A
Benzyl-{3-[(2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-l-{[(tert-butoxycarbonyl)amino]methyl}ethyl)- aminojpropyl} carbamat
Figure imgf000069_0002
310 mg (1.07 mmol) Di-tert-butyl-(2-aminopropan-l,3-diyl)biscarbamat und 222 mg (1.07 mmol) Benzyl-(3-oxopropyl)carbamat werden in 15 ml Dichloromethan gelöst. 334 mg (1.5 mmol) Natriumtriacetoxyborhydrid werden hinzugegeben und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Gemisch wird eingedampft und der Rückstand mittels präparative HPLC gereinigt.
Ausbeute: 168 mg (38% d. Th.)
LC-MS (Methode 4) : R, = 1.76 min.
MS (EI): m/z = 481 (M+H)+. Beispiel 71A
Benzyl- {3 -[(tert-butoxycarbony l)(2-[(tert-butoxycarbonyl)amino] - 1 - { [(tert-butoxycarbonyl)- amino]methyl} ethyl)amino]propyl} carbamat
Figure imgf000070_0001
Zu einer Lösung von 168 mg (0.35 mmol) Benzyl-{3-[(2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-l-{[(tert- butoxycarbonyl)amino]methyl}ethyl)amino]propyl} carbamat (Beispiel 70A) in 2 ml Acetonitril werden 0.55 ml einer 10%igen Triethylamin-Lösung in Acetonitril und 154 mg ( 0.70 mmol) Di- tert-butyl-dicarbonat hinzugegeben. Die Reaktionsmischung wird 6 Stunden bei 60°C gerührt. Die Lösung wird eingeengt und das Rohprodukt wird ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Ausbeute: quant.
LC-MS (Methode 5): Rt = 2.87 min. MS (EI): m/z = 580 (M+H)+. Beispiel 72A Di-tert-butyl-{2-[(3-aminopropyl)(tert-butoxycarbonyl)amino]propan-l,3-diyl}biscarbamat
Figure imgf000070_0002
Eine Lösung von 190 mg (0.327 mmol) Benzyl-{3-[(tert-butoxycarbonyl)(2-[(tert-butoxy- carbonyl)amino]-l-{[(tert-butoxycarbonyl)amino]methyl}ethyl)amino]propyl}carbamat (Beispiel 71A) in 50 ml Eisessig/Wasser/Ethanol 4/1/1 wird nach Zugabe von 20 mg Palladium auf Aktivkohle (10%ig) 12 h bei Raumtemperatur und Normaldruck hydriert. Es wird über Kieselgur filtriert und der Rückstand mit Ethanol gewaschen. Das Filtrat wird im Vakuum zur Trockne eingeengt. Das Produkt wird ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Ausbeute: quant.
LC-MS (Methode 5): R, = 1.71 min.
MS (ET): m/z = 447 (M+H)+. Ausführungsbeispiele
Beispiel 1
(7R,8S,l lS,14S)-14-Amino-N-(2-aminoethyl)-l l-[(2R)-3-amino-2-hydroxypropyl]-5,7,17- trihydroxy-10,13-dioxo-9,12-diazatricyclo[14.3.1.12-6]henicosa-l(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8- carboxamid Trihydrochlorid
Figure imgf000071_0001
Es werden 30 mg (0.32 mmol) Benzyl-{(2R)-3-[(7R,8S,l lS,14S)-8-{[(2-aminoethyl)amino]- carbonyl} -5 , 17-bis(benzy loxy)- 14- { [(benzyloxy)carbonyl] amino } -7-hydroxy- 10,13-dioxo-9, 12- diazatricyclo[14.3.1.12'6]henicosa-l(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-l l-yl]-2-hydroxypropyl}carbamat (Beispiel 34A) in ein Gemisch aus 10 ml Essigsäure/Wasser/Ethanol 4:1:1 gegeben. Dazu gibt man 10 mg Palladium auf Aktivkohle (10%ig) und hydriert anschließend 15 h bei RT und Normaldruck. Das Reaktionsgemisch wird über vorgewaschenem Kieselgur filtriert, mit Ethanol gewaschen und das Filtrat im Vakuum einrotiert. Der Rückstand wird mit 0.96 ml 0.1N wässriger Salzsäure versetzt und eingeengt. Man verrührt den Rückstand mit 10 ml Diethylether und dekantiert ab. Der zurückgebliebene Feststoff wird im Hochvakuum getrocknet.
Ausbeute: 18 mg (97% d. Th.).
LC-MS (Methode 7): R, = 1.92 min
MS (EI): m/z = 531 (M-3HC1+H)+.
JH-NMR (400 MHz, D2O): δ = 1.83-1.93 (m, IH), 1.94-2.08 (m, IH), 2.88 (mc, IH), 2.97-3.18 (m, 4H), 3.42-3.64 (m, 3H), 3.91 (mc, IH), 4.39 (mc, IH), 4.82 (m0, IH), 5.0 (mc, IH), 5.56 (m0, IH), 6.85-6.97 (m, 3H), 7.27-7.46 (m, 3H). Beispiel 2
(7R,8S,l lS,14S)-14-Amino-N-(2-aminoethyl)-l l-[(2R)-3-amino-2-hydroxypropyl]-5,7,17- ttrriihhyy ddrrooxxyy-- 1100,,1133 --ddiiooxxoo--99,, 1122--ddiiaazzaattrriicyclo[14.3.1.12,6]henicosa-l(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8- carboxamid Tri(hydrotrifluoracetat)
Figure imgf000072_0001
Das Trihydrochlorid (Beispiel 1) wird durch präparative HPLC (Reprosil ODS-A, Laufmittel Acetonitril / 0.2% wässrige Trifluoressigsäure 5:95 — » 95:5) in das Tri(hydrotrifluoracetat) überfuhrt.
Ausbeute: quant.
'H-NMR (400 MHz, D2O): δ = 1.83-1.93 (m, IH), 1.94-2.08 (m, IH), 2.88 (mc, IH), 2.97-3.18 (m, 4H), 3.42-3.64 (m, 3H), 3.91 (mc, IH), 4.39 (mc, IH), 4.82 (m0, IH), 5.0 (mc, IH), 5.56 (mc, IH), 6.85-6.97 (m, 3H), 7.27-7.46 (m, 3H).
Analog zur Vorschrift des Beispiels 1 werden die in der folgenden Tabelle aufgeführten Beispiele 3 bis 6 hergestellt und gegebenenfalls analog Beispiel 2 in das entsprechende Tri(hydrotrifluoracetat) überführt.
Figure imgf000072_0002
Figure imgf000073_0001
Beispiel 7
(7R,8S,11 S,14S)-14-Amino-N-(2-aminoethyl)-l l-(3-aminopropyl)-5,7,17-trihydroxy-10,13-dioxo-
99,,1122--ddiiaazzaattrriiccyycclloo[[1144..33..]1.12'6]henicosa-l (20),2(21 ),3 ,5, 16, 18-hexaen-8-carboxamid
Tri(hydrotrifluoracetat)
Figure imgf000074_0001
Das Trihydrochlorid (Beispiel 5) wird durch präparative HPLC (Reprosil ODS-A, Laufmittel Acetonitril / 0.2% wässrige Trifluoressigsäure 5:95 -» 95:5) in das Tri(hydrotrifluoracetat) überführt.
Ausbeute: quant.
'H-NMR (400 MHz, D2O): δ = 1.6-1.95 (m, 4H), 2.97-3.02 (m, 3H), 3.07-3.17 (m, 2H), 3.45-3.56 (m, 3H), 4.41 (m0, IH), 4.78 (mc, IH), 4.85 (mc, IH), 5.5 (m0, IH), 6.85-6.95 (m, 3H), 7.28-7.39 (m, 3H).
Beispiel 8
(7R,8S,l lS,14S)-14-Amino-l l-(3-aminopropyl)-N-[(2S)-2,5-diaminopentyl]-5,7,17-trihydroxy- 10,13-dioxo-9,12-diazatricyclo[14.3.1.12,6]henicosa-l(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8-carboxamid Tetrahydrochlorid
Figure imgf000075_0001
In 1 ml einer eisgekühlten 4N Chlorwasserstoff-Dioxan-Lösung gibt man 5.5 mg (5.7 μmol) tert- Butyl-[(7R,8S, 11 S, 14S)-8-[({(2S)-2,5-bis[(tert-butoxycarbonyl)amino]pentyl} amino)-carbonyl]- 11 - {3-[(tert-butoxycarbonyl)amino]propyl} -5,7, 17-trihydroxy-l 0, 13-dioxo-9, 12-diazatricyclo- [14.3.1.12,6]henicosa-l(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-14-yl]carbamat (Beispiel 61A) und rührt eine Stunde bei RT. Anschließend engt man im Vakuum zur Trockne ein und trocknet bis zur Gewichtskonstanz.
Ausbeute: 4 mg (98% d. Th.)
LC-MS (Methode 7): R, = 0.25 min.
MS (EI): m z = 513 (M-4HC1+H)+
Analog zur Vorschrift des Beispiels 8 werden die in der folgenden Tabelle aufgeführten Beispiele 9 bis 13 hergestellt.
Figure imgf000075_0002
Figure imgf000076_0001
16 -
B. Bewertung der physiologischen Wirksamkeit
Verwendete Abkürzungen:
AMP Adenosinmonophosphat
ATP Adenosintriphosphat
BHI Medium Brain heart infusion medium
CoA Coenzym A
DMSO Dimethylsulfoxid
DTT Dithiothreitol
EDTA Ethylendiamintetraessigsäure
KC1 Kaliumchlorid
KH2PO Kaliumdihydrogenphosphat
MgSO4 Magnesiumsulfat
MHK Minimale Hemmkonzentration
MTP Mikrotiterplatte
NaCl Natriumchlorid
Na2HPO4 Dinatriumhydrogenphosphat
NH4CI Ammoniumchlorid
NTP Nukleotidtriphosphat
PBS Phosphat Buffered Saline
PCR Polymerase Chain Reaction
PEG Polyethylenglykol
PEP Phosphoenolpyruvat
Tris Tris[hydroxymethyl]aminomethan
Die in vftro-Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen kann in folgenden Assays gezeigt werden:
In vitro Transkription-Translation mit E. coli Extrakten
Zur Herstellung eines S30-Extraktes werden logarithmisch wachsende Escherichia coli MRE 600 (M. Müller; University Freiburg) geerntet, gewaschen und wie beschrieben für den in vitro Transkriptions-Translations-Test eingesetzt (Müller, M. and Blobel, G. Proc Natl Acad Sei U S A (1984) 81, pp.7421-7425). Dem Reaktionsmix des in vitro Transkriptions-Translations-Tests werden zusätzlich 1 μl cAMP (11.25 mg/ml) je 50 μl Reaktionsmix zugegeben. Der Testansatz beträgt 105 μl, wobei 5 μl der zu testenden Substanz in 5%igem DMSO vorgelegt werden. Als Transkriptionsmatrize werden 1 μg/lOOμl Ansatz des Plasmides pBESTLuc (Promega, Deutschland) verwendet. Nach Inkubation für 60 min bei 30°C werden 50 μl Luziferin-Lösung (20 mM Tricine, 2.67 mM MgSO4, 0.1 mM EDTA, 33.3 mM DTT pH 7.8, 270 μM CoA, 470 μM Luziferin, 530 μM ATP) zugegeben und die entstehende Biolumineszenz für 1 Minute in einem Luminometer gemessen. Als IC50 wird die Konzentration eines Inhibitors angegeben, die zu einer 50% igen Inhibition der Translation von Firefly Luziferase führt.
In vitro Transkription-Translation mit S. aureus Extrakten
Konstruktion eines S. aureus Luziferase Reporterplasmids
Zur Konstruktion eines Reporterplasmids, welches in einem in vitro Transkriptions-Translations- Assay aus S. aureus verwendet werden kann, wird das Plasmid pBESTluc (Promega Corporation, USA) verwendet. Der in diesem Plasmid vor der Firefly Luziferase vorhandene E. coli tac Promoter wird gegen den capAl Promoter mit entsprechender Shine-Dalgarno Sequence aus S. aureus ausgetauscht. Dazu werden die Primer CAPFor 5'-CGGCC- AAGCTTACTCGGATCCAGAGTTTGCAAAATATACAGGGGATTATATATAATGGAAAAC AAGAAAGGAAAATAGGAGGTTTATATGGAAGACGCCA-3' und CAPRev 5'- GTCATCGTCGGGAAGACCTG-3' verwendet. Der Primer CAPFor enthält den capAl Promotor, die Ribosomenbindestelle und die 5'-Region des Luziferase Gens. Nach PCR unter Verwendung von pBESTluc als Template kann ein PCR-Produkt isoliert werden, welches das Firefly Luziferase Gen mit dem fusionierten capAl Promotor enthält. Dieses wird nach einer Restriktion mit Clal und HindDI in den ebenfalls mit Clal und HindDI verdauten Vektor pBESTluc ligiert. Das entstandene Plasmid pla kann in E. coli repliziert werden und als Template im S. aureus in vitro Transkriptions-Translations-Test verwendet werden.
Herstellung von S30 Extrakten aus S. aureus
Sechs Liter BHI Medium werden mit einer 250 ml Übernachtkultur eines S. aureus Stammes inokuliert und bei 37°C bis zu einer OD600nm von 2-4 wachsen gelassen. Die Zellen werden durch Zentrifugation geerntet und in 500 ml kaltem Puffer A (10 mM Tris-acetat, pH 8.0, 14 mM Magnesiumacetat, 1 mM DTT, IM KCl) gewaschen. Nach erneutem Abzentrifügieren werden die Zellen in 250 ml kaltem Puffer A mit 50 mM KCl gewaschen und die erhaltenen Pellets bei -20°C für 60 min eingefroren. Die Pellets werden in 30 bis 60 min auf Eis aufgetaut und bis zu einem Gesamtvolumen von 99 ml in Puffer B (10 mM Tris-acetat, pH 8.0, 20 mM Magnesiumacetat, 1 mM DTT, 50 mM KCl) aufgenommen. Je 1.5 ml Lysostaphin (0.8 mg/ml) in Puffer B werden in 3 vorgekühlte Zentrifugenbecher vorgelegt und mit je 33 ml der Zellsuspension vermischt. Die Proben werden für 45 bis 60 min bei 37°C unter gelegentlichem Schütteln inkubiert, bevor 150 μl einer 0.5 M DTT Lösung zugesetzt werden. Die lysierten Zellen werden bei 30.000 x g 30 min bei 4°C abzentrifugiert. Das Zellpellet wird nach Aufnahme in Puffer B unter den gleichen Bedingungen nochmals zentrifugiert und die gesammelten Überstände werden vereinigt. Die Überstände werden nochmals unter gleichen Bedingungen zentrifugiert und zu den oberen 2/3 des Überstandes werden 0.25 Volumen Puffer C (670 mM Tris-acetat, pH 8.0, 20 mM Magnesiumacetat, 7 mM Na3-Phosphoenolpyruvat, 7 mM DTT, 5.5 mM ATP, 70 μM Aminosäuren (complete von Promega), 75 μg Pyruvatkinase (Sigma, Deutschland))/ml gegeben. Die Proben werden für 30 min bei 37°C inkubiert. Die Überstände werden über Nacht bei 4°C gegen 2 1 Dialysepuffer (10 mM Tris-acetat, pH 8.0, 14 mM Magnesiumacetat, 1 mM DTT, 60 mM Kaliumacetat) mit einem Pufferwechsel in einem Dialyseschlauch mit 3500 Da Ausschluss dialysiert. Das Dialysat wird auf eine Proteinkonzentration von etwa 10 mg/ml konzentriert, indem der Dialyseschlauch mit kaltem PEG 8000 Pulver (Sigma, Deutschland) bei 4°C bedeckt wird. Die S30 Extrakte können aliquotiert bei -70°C gelagert werden.
Bestimmung der ICgn im S. aureus in vitro Transcriptions-Translations-Assay
Die Inhibition der Proteinbiosynthese der Verbindungen kann in einem in vitro Transkriptions- Translations-Assay gezeigt werden. Der Assay beruht auf der zellfreien Transkription und Translation von Firefly Luziferase unter Verwendung des Reporterplasmids pla als Template und aus S. aureus gewonnenen zellfreien S30 Extrakten. Die Aktivität der entstandenen Luziferase kann durch Lumineszenzmessung nachgewiesen werden.
Die Menge an einzusetzenden S30 Extrakt bzw. Plasmid pla muss für jede Präparation erneut ausgetestet werden, um eine optimale Konzentration im Test zu gewährleisten. 3 μl der zu testenden Substanz gelöst in 5% DMSO werden in eine MTP vorgelegt. Anschließend werden 10 μl einer geeignet konzentrierten Plasmid-Lösung pla zugegeben. Anschließend werden 46 μl eines Gemisches aus 23 μl Premix (500 mM Kaliumacetat, 87.5 mM Tris-acetat, pH 8.0, 67.5 mM Ammoniumacetat, 5 mM DTT, 50 μg Folsäure/ml, 87.5 mg PEG 8000/ml, 5 mM ATP, 1.25 mM je NTP, 20 μM je Aminosäure, 50 mM PEP (Na3-Salz), 2.5 mM cAMP, 250 μg je E. coli tRNA/ml) und 23 μl einer geeigneten Menge S. aureus S30 Extrakt zugegeben und vermischt. Nach Inkubation für 60 min bei 30°C werden 50 μl Luziferin-Lösung (20 mM Tricine, 2.67 mM MgSO , 0.1 mM EDTA, 33.3 mM DTT pH 7.8, 270 μM CoA, 470 μM Luziferin, 530 μM ATP) und die entstehende Biolumineszenz für 1 min in einem Luminometer gemessen. Als IC50 wird die Konzentration eines Inhibitors angegeben, die zu einer 50%igen Inhibition der Translation von Firefly Luziferase führt.
Bestimmung der Minimalen Hemmkonzentration (MHK)
Die minimale Hemmkonzentration (MHK) ist die minimale Konzentration eines Antibiotikums, mit der ein Testkeim in seinem Wachstum über 18-24 h inhibiert wird. Die Hemmstoffkonzentration kann dabei nach mikrobiologischen Standardverfahren mit modifiziertem Medium im Rahmen eines Agardilutionstests bestimmt werden (siehe z.B. The National Committee for Clinical Laboratory Standards. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically; approved standard-fifth edition. NCCLS document M7-A5 [ISBN 1-56238- 394-9]. NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2000). Die Bakterienkeime werden auf 1.5%igen Agarplatten kultiviert, die 20% defibriniertes Pferdeblut enthalten. Die Testkeime, die über Nacht auf Columbia-Blutagarplatten (Becton- Dickinson) inkubiert werden, werden in PBS verdünnt, auf eine Keimzahl von ca. 5x105 Keime/ml eingestellt und auf Testplatten getropft (1-3 μl). Die Testsubstanzen enthalten unterschiedliche Verdünnungen der Testsubstanzen (Verdünnungsstufen 1:2). Die Kulturen werden bei 37°C für 18-24 Stunden in Gegenwart von 5% CO2 inkubiert.
Die jeweils niedrigste Substanzkonzentration, bei der kein sichtbares Bakterienwachstum mehr auftritt, wird als MHK definiert. Die MHK-Werte in μg/ml einiger erfindungsgemäßer Verbindungen gegenüber einer Reihe von Testkeimen sind in der nachstehenden Tabelle beispielhaft aufgeführt. Die Verbindungen zeigen eine abgestufte antibakterielle Wirkung gegen die meisten der Testkeime.
Tabelle A (mit Vergleichsbeispiel 43A (Biphenomycin A))
Figure imgf000080_0001
Systemische Infektion mit S. aureus 133
Die Eignung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung von bakteriellen Infektionen kann in verschiedenen Tiermodellen gezeigt werden. Dazu werden die Tiere im allgemeinen mit einem geeigneten virulenten Keim infiziert und anschließend mit der zu testenden Verbindung, die in einer an das jeweilige Therapiemodell angepassten Formulierung vorliegt, behandelt. Speziell kann die Eignung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung von bakteriellen Infektionen in einem Sepsismodell an Mäusen nach Infektion mit S. aureus demonstriert werden.
Dazu werden S. aureus 133 Zellen über Nacht in BH-Bouillon (Oxoid, Deutschland) angezüchtet. Die Übernachtkultur wurde 1 : 100 in frische BH-Bouillon verdünnt und für 3 Stunden hochgedreht. Die in der logarithmischen Wachstumsphase befindlichen Bakterien werden abzentrifugiert und zweimal mit gepufferter, physiologischer Kochsalz-Lösung gewaschen. Danach wird am Photometer (Dr. Lange LP 2W) eine Zellsuspension in Kochsalz-Lösung mit einer Extinktion von 50 Einheiten eingestellt. Nach einem Verdünnungsschritt (1:15) wird diese Suspension 1:1 mit einer 10%-igen Mucinsuspension gemischt. Von dieser Infektionslösung wird 0.2 ml/20 g Maus i.p. appliziert. Dies entspricht einer Zellzahl von etwa 1-2 x 106 Keimen/Maus. Die i.v.-Therapie erfolgt 30 Minuten nach der Infektion. Für den Infektionsversuch werden weibliche CFW1 -Mäuse verwendet. Das Überleben der Tiere wird über 6 Tage protokolliert. Das Tiermodell ist so eingestellt, daß unbehandelte Tiere innerhalb von 24 h nach der Infektion versterben. Für die Beispielverbindung 2 konnte in diesem Modell eine therapeutische Wirkung von EDioo = 1.25 mg/kg demonstriert werden.
Bestimmung der Spontanresistenzfrequenzen gegen S. aureus
Die Spontanresistenzraten der erfindungsgemäßen Verbindungen werden wie folgt bestimmt: die Bakterienkeime werden auf Blutagarplatten oder Müller-Hinton-Agarplatten bei 37°C über Nacht kultiviert, in 2 ml PBS resuspendiert (ca. 2x109 Keime/ml). 100 μl dieser Zellsuspension bzw. 1:10 und 1:100 Verdünnungen werden auf vorgetrockneten Agarplatten (1.5% Agar, 20% defibriniertes Pferdeblut bzw. 1.5% Agar, 20% Rinderserum in 1/10 Müller-Hinton-Medium verdünnt mit PBS), welche die zu testende erfindungsgemäße Verbindung in einer Konzentration entsprechend 5xMHK bzw. IOXMHK enthalten, ausplattiert und 48 h bei 37°C bebrütet. Die entstehenden Kolonien (cfu) werden ausgezählt. Isolierung der Biphenomycin-resistenten S. aureus Stämme RN4220BiR und T17
Der S. aureus Stamm RN4220BiR wird in vitro isoliert. Dazu werden jeweils 100 μl einer S. aureus RN4220 Zellsuspension (ca. 1.2xl08 cfu/ml) auf einer antibiotikafreien Agarplatte (18.5 mM Na2HPO4, 5.7 mM KH2PO4, 9.3 mM NH4CI, 2.8 mM MgSO4, 17.1 mM NaCl, 0.033 μg/ml Thiaminhydrochlorid, 1.2 μg/ml Nicotinsäure, 0.003 μg/ml Biotin, 1% Glucose, 25 μg/ml von jeder proteinogenen Aminosäure unter Zusatz von 0.4% BH-Bouillon und 1% Agarose) und einer Agarplatte, die 2 μg/ml Biphenomycin B (lOxMHK) enthält, ausplattiert und über Nacht bei 37°C bebrütet. Während auf der antibiotikafreien Platte ca. lxlO7 Zellen wachsen, wachsen auf der antibiotikahaltigen Platte ca. 100 Kolonien, entsprechend einer Resistenzfrequenz von lxlO'5. Einige der auf der antibiotikahaltigen Platte gewachsenen Kolonien werden auf MHK gegen Biphenomycin B getestet. Eine Kolonie mit einer MHK > 50 μM wird zur weiteren Verwendung ausgewählt und der Stamm mit RN4220BiR bezeichnet.
Der S. aureus Stamm T17 wird in vivo isoliert. CFWl-Mäuse werden mit 4x10^ £. aureus 133 - Zellen pro Maus intraperitoneal infiziert. 0.5 Std. nach der Infektion werden die Tiere mit 50 mg/kg Biphenomycin B intravenös behandelt. Den überlebenden Tieren werden am Tag 3 nach der Infektion die Nieren entnommen. Nach dem Homogenisieren der Organe werden die Homogenate, wie bei RN4220BiR beschrieben, auf antibiotikafreien und antibiotikahaltigen Agarplatten, ausplattiert und über Nacht bei 37°C bebrütet. Etwa die Hälfte der aus der Niere isolierten Kolonien zeigen ein Wachstum auf den antibiotikahaltigen Platten (2.2x10δ Kolonien), was die Anreicherung von Biphenomycin B resistenten S. aureus Zellen in der Niere der behandelten Tiere belegt. Ca. 20 dieser Kolonien werden auf MHK gegen Biphenomycin B getestet und eine Kolonie mit einer MHK > 50 μM wird zur Weiterkultivierung ausgewählt und der Stamm mit T17 bezeichnet.
C. Ausführungsbeispiele für pharmazeutische Zusammensetzungen
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können folgendermaßen in pharmazeutische Zubereitungen überführt werden:
Intravenös applizierbare Lösung;
Zusammensetzung:
1 mg der Verbindung von Beispiel 1, 15 g Polyethylenglykol 400 und 250 g Wasser für Injektionszwecke. Herstellung:
Die erfindungsgemäße Verbindung wird zusammen mit Polyethylenglykol 400 in dem Wasser unter Rühren gelöst. Die Lösung wird sterilfiltriert (Porendurchmesser 0.22 μm) und unter aseptischen Bedingungen in hitzesterilisierte Infusionsflaschen abgefüllt. Diese werden mit Infusionsstopfen und Bördelkappen verschlossen.

Claims

Patentansprüche
1. Verbindung der Formel
Figure imgf000084_0001
bei der
R1 gleich eine Gruppe der Formel
"*v N NHH,„ "> , *NH„
Figure imgf000084_0002
wobei
R7 gleich Wasserstoff oder Hydroxy ist, die Anknüpfstelle an das Kohlenstoffatom ist,
R2 gleich Wasserstoff, Methyl oder Ethyl ist,
R gleich eine Gruppe der Formel
Figure imgf000085_0001
Figure imgf000085_0002
Figure imgf000085_0003
ist,
wobei die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
R8 gleich Wasserstoff, Amino oder Hydroxy ist,
Ry gleich Wasserstoff, Methyl oder eine Gruppe der Formel
Figure imgf000085_0004
ist, worin die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
RM gleich Wasserstoff oder *-(CH2)rNHR 2^2 ist, worm
R gleich Wasserstoff oder Methyl ist und f eine Zahl 1, 2 oder 3 ist, R21 gleich Wasserstoff oder Methyl ist, d eine Zahl 0, 1, 2 oder 3 ist und e eine Zahl 1, 2 oder 3 ist,
R10 gleich Wasserstoff oder Aminoethyl ist,
oder
R9 und R10 bilden zusammen mit dem Stickstoffatom an das sie gebunden sind einen Piperazin-Ring,
Rπ und R15 unabhängig voneinander *-(CH2)zl-OH, *-{CH2)Z2-NHR16, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Hydroxycarbonylmethyl, Aminocarbonyl-methyl, *-CONHR17 oder *-CH2CONHR18 sind, worin
* die Anknüpfstelle an das Kohlenstoffatom ist,
ZI und Z2 unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2 oder 3 sind,
R16 gleich Wasserstoff oder Methyl ist und
R17 und R18 unabhängig voneinander eine Gruppe der Formel
Figure imgf000087_0001
sind, worin die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
R a gleich Wasserstoff, Amino oder Hydroxy ist,
R gleich Wasserstoff, Methyl oder Aminoethyl ist,
R a gleich Wasserstoff oder Aminoethyl ist, oder
10 R9aundR10a bilden zusammen mit dem Stickstoffatom an das sie gebunden sind einen Piperazin-Ring,
Rlla und R15a unabhängig voneinander *-(CH2)Zιa-OH, *-(CH2)z2a-NHRI6a, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Hydroxycarbonyl-methyl oder Aminocarbonylmethyl sind,
15 worin
* die Anknüpfstelle an das Kohlenstoffatom ist,
R16a gleich Wasserstoff oder Methyl ist und
Zla und Z2a unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2
20 oder 3 sind,
R12a und R14a unabhängig voneinander Wasserstoff oder Methyl sind, R13a gleich Amino oder Hydroxy ist, ka eine Zahl 0 oder 1 ist, la, wa, xa und ya unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2, 3 oder 4 sind,
R12 und R14 unabhängig voneinander Wasserstoff, Methyl oder eine Gruppe der Formel
Figure imgf000088_0001
sind, worin * die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
R20a gleich Wasserstoff oder *-(CH2)fa-NHR22a ist, worin
R22a gleich Wasserstoff oder Methyl ist und fa eine Zahl 1, 2 oder 3 ist,
R21a gleich Wasserstoff oder Methyl ist, da eine Zahl 0, 1, 2 oder 3 ist und ea eine Zahl 1, 2 oder 3 ist,
R13 gleich Amino oder Hydroxy ist,
R19 eine Gruppe der Formel
Figure imgf000089_0001
worin die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
R gleich Wasserstoff, Amino oder Hydroxy ist,
R gleich Wasserstoff, Methyl oder Aminoethyl ist,
R > 10b gleich Wasserstoff oder Aminoethyl ist, oder
R9b und R10b bilden zusammen mit dem Stickstoffatom an das sie
10 gebunden sind einen Piperazin-Ring,
Rllb und R15b unabhängig voneinander *-(CH2)Zιb-OH, *-(CH2)Z2b- NHR,6b, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Hydroxycarbonylmethyl oder Aminocarbonylmethyl sind, worin
15 die Anknüpfstelle an das Kohlenstoffatom ist,
R > 16b gleich Wasserstoff oder Methyl ist und
Zlb und Z2b unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2 oder 3 sind,
R und R unabhängig voneinander Wasserstoff oder Methyl sind,
20 R gleich Amino oder Hydroxy ist, kb eine Zahl 0 oder 1 ist, lb, wb, xb und yb unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2, 3 oder 4 sind, k und t unabhängig voneinander eine Zahl 0 oder 1 sind, 1, w, x und y unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2, 3 oder 4 sind, m, r, s und v unabhängig voneinander eine Zahl 1 oder 2 sind, n, o, p und q unabhängig voneinander eine Zahl 0, 1 oder 2 sind, u eine Zahl 0, 1, 2 oder 3 ist,
L jl,w,x oder y unabhängig voneinander bei 1, w, x oder y gleich 3 eine Hydroxy-Gruppe tragen kann, R4 gleich Wasserstoff, Halogen, Amino, Hydroxy, Aminocarbonyl, Hydroxycarbonyl, Nitro, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, (CrC4)-Alkyl, (CrC )-Alkoxy oder ( - C6)-Alkylamino ist,
R5 gleich Wasserstoff, Halogen, Amino, Hydroxy, Aminocarbonyl, Hydroxycarbonyl, Nitro, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, (C C4)-Alkyl, (C C4)-Alkoxy oder (C C6)-Alkylamino ist,
R6 gleich Wasserstoff, Methyl oder Ethyl ist, oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
2. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass sie der Formel
Figure imgf000090_0001
entsprechen, worin R1 bis R6 die gleiche Bedeutung wie in Formel (I) haben, oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass
R gleich eine Gruppe der Formel
Figure imgf000091_0001
Figure imgf000091_0002
wobei
R7 gleich Wasserstoff oder Hydroxy ist, die Anknüpfstelle an das Kohlenstoffatom ist,
R gleich Wasserstoff oder Methyl ist,
R gleich eine Gruppe der Formel
Figure imgf000091_0003
ist, wobei die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
R gleich Wasserstoff, Amino oder Hydroxy ist,
R gleich Wasserstoff, Methyl oder eine Gruppe der Formel
Figure imgf000091_0004
ist, worin
* die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
R20 gleich Wasserstoff oder *-(CH2)rNHR22 ist, worin R22 gleich Wasserstoff ist und f eine Zahl 1, 2 oder 3 ist,
R21 gleich Wasserstoff ist, d eine Zahl 0 ist und e eine Zahl 1, 2 oder 3 ist,
R10 gleich Wasserstoff oder Aminoethyl ist,
R11 gleich *-(CH2)z OH, *-(CH2)z2-NHR16, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Hydroxycarbonylmethyl, Aminocarbonyl-methyl, *-CONHR17 oder *-CH2CONHR18 ist, worin
* die Anknüpfstelle an das Kohlenstoffatom ist,
ZI und Z2 unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2 oder 3 sind,
R16 gleich Wasserstoff oder Methyl ist und
R17 und R18 unabhängig voneinander eine Gruppe der Formel
Figure imgf000093_0001
sind, worin
* die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
R8a gleich Wasserstoff, Amino oder Hydroxy ist,
R9a gleich Wasserstoff, Methyl oder Aminoethyl ist,
R10a gleich Wasserstoff oder Aminoethyl ist, oder
10 R9a und R10a bilden zusammen mit dem Stickstoffatom an das sie gebunden sind einen Piperazin-Ring,
Rlla und R15a unabhängig voneinander *-(CH2)Zιa-OH, *-(CH2)Z2a-NHR16a, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Hydroxycarbonyl-methyl oder Aminocarbonylmethyl sind,
15 worin die Anknüpfstelle an das Kohlenstoffatom ist,
R gleich Wasserstoff oder Methyl ist und
Zla und Z2a unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2
20 oder 3 sind,
R12a und R14a unabhängig voneinander Wasserstoff oder Methyl sind, R13a gleich Amino oder Hydroxy ist, ka eine Zahl 0 oder 1 ist, la, wa, xa und ya unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2, 3 oder 4 sind, R12 gleich Wasserstoff oder Methyl ist, k gleich eine Zahl 0 oder 1 ist,
1 und w unabhängig voneinander eine Zahl 1, 2,
3 oder 4 sind, l i oder w unabhängig voneinander bei 1 oder w gleich 3 eine Hydroxy- Gruppe tragen kann, R4 gleich Hydroxy ist,
R5 gleich Wasserstoff ist, R6 gleich Wasserstoff ist.
4. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1 oder eines ihrer Salze, Solvate oder der Solvate ihrer Salze, dadurch gekennzeichnet, dass [A] eine Verbindung der Formel
Figure imgf000094_0001
worin R1, R2, R4, R5 und R6 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben und boc gleich tert-Butoxycarbonyl ist, in einem zweistufigen Verfahren zunächst in Gegenwart von einem oder mehreren De- hydratisierungsreagenzien mit einer Verbindung der Formel H2NR (D3),
worin R3 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat,
und anschließend mit einer Säure umgesetzt wird,
oder
[B] eine Verbindung der Formel
Figure imgf000095_0001
worin R1, R2, R4, Rs und R6 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben und Z gleich Benzyloxycarbonyl ist,
in einem zweistufigen Verfahren zunächst in Gegenwart von einem oder mehreren Dehydratisierungsreagenzien mit einer Verbindung der Formel
H2NR3 (HI),
worin R3 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat,
und anschließend mit einer Säure oder durch Hydrogenolyse umgesetzt wird,
oder
[C] eine Verbindung der Formel
Figure imgf000096_0001
worin R1, R2, R4, R5 und R6 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben und Z gleich Benzyloxycarbonyl ist, und
R23 gleich Benzyl, Methyl oder Ethyl ist, in einem zweistufigen Verfahren zunächst in Gegenwart von Kaliumcyanid mit einer Verbindung der Formel
H2NR3 (DT), worin R3 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat, und anschließend mit einer Säure oder durch Hydrogenolyse umgesetzt wird.
5. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1 oder eines ihrer Solvate, dadurch gekennzeichnet, dass ein Salz der Verbindung oder ein Solvat eines Salzes der Verbindung durch Chromatographie unter Zusatz einer Base in die Verbindung oder eines ihrer Solvate überführt wird.
6. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.
7. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.
8. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von bakteriellen Erkrankungen.
9. Arzneimittel enthaltend mindestens eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 in Kombination mit mindestens einem inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff.
10. Arzneimittel nach Anspruch 9 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von bakteriellen Infektionen.
11. Verfahren zur Bekämpfung von bakteriellen Infektionen in Menschen und Tieren durch Verabreichung einer antibakteriell wirksamen Menge mindestens einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 oder eines Arzneimittels nach Anspruch 9.
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