WO2005103276A1

WO2005103276A1 - ラクトスクロース高含有糖質とその製造方法並びに用途

Info

Publication number: WO2005103276A1
Application number: PCT/JP2005/007528
Authority: WO
Inventors: Hiroyuki Okabe; Hajime Aga; Michio Kubota; Toshio Miyake
Original assignee: Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo
Priority date: 2004-04-22
Filing date: 2005-04-20
Publication date: 2005-11-03
Also published as: TW200538462A; US20080027027A1; EP1746164A1; JPWO2005103276A1; AU2005235857A1; KR20070010062A

Description

ラタトスクロース高含有糖質とその製造方法並びに用途

技術分野

[0001] 本発明は、ラタトスクロース高含有糖質とその製造方法並びに用途、より詳細には、糖組成として、ラタトスクロースを 70%以上、 1—ケストースとフラタトシルラクトスクロースを合計 3%未満含有するラタトスクロース高含有糖質とその製造方法、さら〖こは、このラタトスクロース高含有糖質を、榭脂を用いたクロマトグラフィーにかけ、糖組成としてラタトスクロースを 90%以上含有する画分を採取することを特徴とする高純度ラクトスクロースの製造方法、更には結晶ラタトスクロースの製造方法に関するものである。背景技術

[0002] 近年、オリゴ糖をはじめとする諸種の糖質が有する機能が続々と明らかになりつつある。機能性オリゴ糖の内、ラタトスクロース [ j8—D—ガラクトシル一 (1, 4) - α - Ό —ダルコシル—（1, ₂) - β—D—フラクトシド]は、難消化性、ビフィズス菌増殖促進性、難う蝕性、保湿性など優れた機能を有しており、食品、化粧品、医薬品など広範な用途に有用なオリゴ糖である。ラタトスクロースは、スクロースとラタトースとを含有する水溶液に、ァルスロパクター属に属する微生物由来の βーフラタトフラノシダーゼを作用させ、この j8—フラタトフラノシダーゼが触媒する糖転移反応によって工業的に製造されている（特開平 3— 27285号公報を参照)。しかしながら、 β—フラタトフラノシダーゼの転移反応のみでは、得られる反応物のラタトスクロース含量は、糖組成として約 30%程度と低ぐまた、その反応物は、未反応のラタトース、スクロース、反応残渣のグルコース、フラクトース、副生成物の 1—ケストース、フラクトシルラクトスクロースなどを比較的多量に含むため、ラタトスクロース本来の機能を十分に発揮できる糖組成物とはいい難い。そこで、ラタトスクロースの純度を上げるため、酵素反応後、未反応のラタトースを部分的に結晶化させて濾過 ·除去したり、酵素反応の際、インベルターゼ欠損酵母を添加してグルコースなど単糖を資化させたりする方法が実施され、ラ外スクロース含有糖質 (登録商標「乳果オリゴ」 )が製造されて、る (藤田孝輝、「バイオセパレーシヨンプロセス便覧」、 196— 201頁、共立出版発行、 1996年を参照)。とりわけ、 13ーフラタトフラノシダーゼの転移反応にインベルターゼ欠損酵母を併用する方法には、単に反応液力グルコースなど単糖を除去するだけでなぐ単糖が除去されることにより転移反応がラタトスクロースの生成に傾くため、ラタトスクロースの生成量も向上するという利点があり、生成するラタトスクロースは反応物の糖組成として約 65%に達する（特開平 4— 293494号公報を参照)。さらに、このラタトスクロース含量が高まった反応物を原料に、イオン交換榭脂を用いたクロマトグラフィーを行い、ラタトスクロース純度を約 80%に高め、続いて、ォクタデシルシリカ榭脂（OD S)を用いたクロマトグラフィーで純度約 99%の精製ラタトスクロースを得ることができる (藤田孝輝、「バイオセパレーシヨンプロセス便覧」、 196— 201頁、共立出版発行、 1996年を参照）。

[0003] しかしながら、ァルスロパクター属微生物由来 j8—フラタトフラノシダーゼは、スクロ一スのフラタトシル基をラタトースに転移してラタトスクロースを生成する反応以外にも、副反応として、フラクトシル基をスクロース自体に転移して 1ーケストースを生成する反応や、生成したラタトスクロースにさらにフラクトシル基を転移してフラクトシルラタトスクロースを生成する反応をも触媒する。副生成物として 1ーケスト一スゃフラタトシルラタトスクロースなどが生成することは、ラタトスクロースの製造と、う観点からは好ましくなぐラタトスクロース生成量を低下させている一因となっている。また、上記の副生成物は、インベルターゼ欠損酵母では資化されないため、 j8—フラタトフラノシダーゼとインベルターゼ欠損酵母を同時に作用させ得られる反応物中に蓄積し、それらの含量は 5乃至 10%にも及ぶ。さらに、副生成物として 1ーケスト一スゃフラタトシルラタトスクロースを比較的多量含有する反応物を原料として高純度ラタトスクロースを製造する場合、上記のイオン交換榭脂及びォクタデシルシリカ榭脂 (ODS)を用いるクロマトグラフィーなどの複数の精製手段を必要とする上、精製して得られる高純度ラタトスクロースの収率が低いという問題があり、高純度ラタトスクロースの工業的製造には適して!/ヽな、と考えられる。

[0004] 一方、ラタトスクロース含有粉末は、その純度を高めることによって吸湿性を低減し、比較的安定性の高い粉末が得られることが知られている（特開平 4— 281795号公報)。し力しながら、その後の研究において、この粉末も夏場の高温高湿度の環境下、例えば、温度 27°C、相対湿度 75%では、きわめて吸湿し易ぐ不安定で取り扱い困難であることが判明し、より安定なラタトスクロース固状物の提供が望まれる。

[0005] 一方、ラタトスクロースの結晶としては、 90% (v/v)エタノール水溶液から得られたラタトスクロース 5含水結晶がガド 'アビガド（Gad Avigad)、『ジャーナル 'バイオロジカル'ケミストリイ (Journal Biological Chemistry)』、 1957年、第 229卷、 121乃至 129頁に開示されている。しかしながら、この結晶は吸湿性が強ぐまた、結晶化が困難であることもあり、結晶ラタトスクロースは工業規模での生産に至っていな力つた発明の開示

[0006] 斯かる状況に鑑み、本発明の課題は、副生成物としての 1ーケスト一スゃフラタトシルラクトスクロース含量が低ぐ且つ、糖組成としてラタトスクロースを 70%以上含有するラタトスクロース高含有糖質を提供し、また、工業的製造に適したラタトスクロース高含有糖質及び糖組成としてラタトスクロースを 90%以上含有する高純度ラタトスクロースの製造方法を提供し、更には、結晶ラタトスクロースの製造方法と吸湿性の低い結晶ラタトスクロースを含有せしめた固状組成物を提供することにある。

[0007] 上記の課題を解決するために、本発明者等は、 β—フラタトフラノシダーゼを用いたラタトスクロース製造において、スクロース非資化性酵母を併用するのみならず、 β —フラタトフラノシダーゼの由来及び反応条件にも着目し、ラタトスクロースの製造方法を検討した。その結果、従来、 β—フラタトフラノシダーゼとインベルターゼ欠損酵母を併用しても該反応による反応物中のラタトスクロース含量は、糖組成として最大約 65%までにしか達さないと考えられてきたにもかかわらず、全く意外なことに、スクロースとラタトースとを含有する水溶液に、同じ特許出願人による特開平 9— 224665 号公報に記載のバチルス属に属する微生物由来の j8—フラタトフラノシダーゼとスクロース非資化性酵母を併用して反応させ、反応液の pHを 4. 0乃至 5. 5に制御することによって、得られる反応物中のラタトスクロース含量力糖組成として 70%以上に達することが判明した。さらに、得られた反応物を調べたところ、副生成物である 1 ケストース及びフラクトシルラクトスクロース力糖組成として合計 3%未満と極めて低いことも判明した。そして、該反応物を原料としてクロマトグラフィー法で精製すると、さらに高純度のラタトスクロースを容易に高収率で調製できることが判明した。また、上記の、副生成物である 1ーケストース及びフラクトシルラクトスクロースの含量が低いラタトスクロースの過飽和水溶液からは、意外にも、容易に結晶ラタトスクロース（5含水結晶）が晶出することを見出し、採取した結晶ラタトスクロースは、夏場の高温高湿度の環境下、例えば、温度 27°C、相対湿度 75%においても吸湿性が低ぐ取り扱い容易なラタトスクロースの固状製品であることが判明し、カロえて、結晶ラタトスクロースを含有せしめた各種固状物の製造に有利に利用しうることが判明した。

[0008] すなわち、本発明は、糖組成として、ラタトスクロースを 70%以上、 1—ケストースとフラクトシルラクトスクロースを合計 3%未満含有するラタトスクロース高含有糖質を提供し、さらに、スクロースとラタトースとを含有する水溶液に、バチルス属に属する微生物由来の —フラタトフラノシダーゼとスクロース非資化性酵母とを作用させ、ラタトスクロースを糖組成として 70%以上、 1—ケストースとフラタトシルラクトスクロースを合計 3%未満含有する反応物とし、これを採取することを特徴とするラタトスクロース高含有糖質の製造方法、及びこのラタトスクロース高含有糖質を、榭脂を用いたクロマトグラフィ一にかけて糖糸且成としてラタトスクロースを 90%以上含有する画分を採取することを特徴とする高純度ラタトスクロースの製造方法を提供し、更には、上記方法で得られるラタトスクロース高含有糖質又は高純度ラタトスクロースを用いた結晶ラタトスクロースの製造方法並びにこれを含有せしめた各種固状組成物を提供することにより上記課題を解決するものである。

[0009] 本発明によれば、カラムクロマトグラフィーなどの精製手段を使用せずとも、スクロースとラタトースとから、 β—フラタトフラノシダーゼとスクロース非資化性酵母を併用した生成反応のみで、ラタトスクロースを糖組成として 70%以上含有し、且つ、副生成物である 1ーケストース及びフラクトシルラクトスクロースの含量が糖組成として合計 3% 未満と低いラタトスクロース高含有糖質を製造することができる。さらに、このラタトスクロース高含有糖質を、榭脂を用いたクロマトグラフィーにかけることにより糖組成としてラタトスクロースを 90%以上含有する高純度ラタトスクロースを容易に製造することができる。また、本発明によれば、従来、結晶化が難しかったラタトスクロースをラタトスクロースの過飽和水溶液力も容易に晶出させることが可能となり、また、得られる結晶ラタトスクロースは夏場の高温高湿度の環境下においても吸湿性が低く取り扱いが容易であって、この結晶ラタトスクロースを含有せしめることにより、吸湿性の低い安定な各種固状組成物を提供することができる。

発明を実施するための最良の形態

[0010] 本発明のラタトスクロース高含有糖質は、糖組成として、ラタトスクロースを 70%以上、 1 ケストースとフラタトシルラクトスクロースを合計 3%未満含有するラタトスクロース高含有糖質であって、 βーフラタトフラノシダーゼの副反応により生成する 1ーケスト一スとフラタトシルラクトスクロースの含量力従来のラタトスクロース含有糖質に比べ、極めて低いことを特徴とする。

[0011] 本発明のラタトスクロース高含有糖質が含有するラタトスクロース、 1ーケストース及びフラクトシルラクトスクロース以外の糖質としては、未反応のスクロース及びラタトース、ラタトースのァノレカリ異'性ィ匕物であるラクチュロース、 13ーフラタトフラノシダーゼの作用によるスクロースの分解物であるグルコース及びフラクトース、及び、スクロース非資化性酵母によるグルコース及びフラクトースの発酵産物であるグリセロールなどが挙げられる。後述する実施例にも示すように、これらの糖質の大部分は、 β—フラタトフラノシダーゼによって分解されず、スクロース非資化性酵母によって資化 '分解されな、ラタトースが占めて!/、る。

[0012] 本発明のラタトスクロース高含有糖質の製造方法 (以下、単に「本発明の製造方法」又は「当該製造方法」という場合がある。）は、バチルス属に属する微生物由来の j8 —フラタトフラノシダーゼとスクロース非資化性酵母を利用することを特徴とする。本発明でいう βーフラタトフラノシダーゼとは、少なくともスクロース、ラフイノース及びェルロースの —フラタトフラノシド結合を加水分解して、フラクトースを遊離する反応並びにこれら ι8—フラ外フラノシド結合を有する糖質を糖供与体として、糖供与体以外の他の糖質、糖アルコール及びアルコール類カゝら選ばれる受容体に j8—フラタトフラノシル基を転移する反応を触媒する酵素を意味する。本発明で利用できる β フラタトフラノシダーゼは、このように定義され、起源がバチルス属に属する微生物であり、且つ、下記に詳述する本発明で用いるスクロース非資化性酵母と併用して作用させた場合、ラタトスクロースを糖組成として 70%以上含有し、且つ、副生成物である 1ーケストース及びフラクトシルラクトスクロースの含量が糖組成として合計 3%未満と低いラタトスクロース高含有糖質を製造できるものである限り調製方法などは特に限定されない。例えば、本出願と同じ特許出願人による特開平 9— 224665号公報に開示された、バチルス'スピーシーズ V230 (FERM BP— 5054)起源の天然型 j8 —フラタトフラノシダーゼ、及び本出願と同じ特許出願人による特開平 10— 66586 号公報に開示された、上記 j8—フラタトフラノシダーゼをコードする DNAを用いて遺伝子組換え技術で調製された組換え型の βーフラタトフラノシダーゼはいずれも本発明に有利に利用できる。組換え型酵素の場合、バチルス属に属する微生物以外の宿主細胞より得られた βーフラタトフラノシダーゼも本発明にお、て利用できることは言うまでもない。さらに、同公報に開示された j8—フラタトフラノシダーゼをコードする DNAに蛋白質工学的手法を適用して得られる変異酵素も、所期の転移作用を実質的に消失していないものである限り本発明に利用できる。

[0013] 本発明でいうスクロース非資化性酵母とは、単糖類を資化するものの、二糖以上のオリゴ糖類を資化及び Z又は分解できなヽ酵母を意味する。本発明で利用するスクロース非資化性酵母は、グルコース及びフラクトースを資化し、スクロース、ラタトース及びラタトスクロースのいずれも資化及び Z又は分解できない酵母である限りその種類は特に限定されない。例えば、天然より分離した酵母を各種変異剤で突然変異させてインベルターゼを欠損させる力又はスクロース資化能を喪失させ、目的に合わせて育種したものを用いることもできる。また、インベルターゼ欠損酵母として知られている公知菌であるサッカロミセス'セレビシァェ ATCC56741ゃサッカロミセス'セレビシァェ ATCC56742なども本発明に有利に利用できる。

[0014] 本発明の製造方法における原料となるスクロース及びラタトースは、それらの調製方法や形態は特に限定されず、例えば、市販品を含む、天然より単離された調製品、酵素的又は化学的に調製ないしは合成された調製品、さらには、本発明の製造方法における酵素反応やスクロース非資化性酵母による単糖の資化の進行や、当該製造方法による生成物の利用に支障をきたさな、範囲で、斯かる糖質以外の夾雑物質を含んで!/、る調製品や、以上のような調製品を組み合わせてなる組成物であってもよい。 [0015] バチルス属に属する微生物由来の j8—フラタトフラノシダーゼとスクロース非資化性酵母とを併用して、スクロース及びラタトース（以下、スクロース及びラタトースのいずれか又は両者を指して「基質」という場合がある。）を含む水溶液に、反応液の pH を 4. 0乃至 5. 5に制御する以外は、用いる j8—フラタトフラノシダーゼの酵素学的性質及びスクロース非資化性酵母の生理学的性質に応じて適宜選ばれる条件下で作用させれば、ラタトスクロースを糖組成として 70%以上含有し、且つ、副生成物である 1ーケストース及びフラクトシルラクトスクロース含量が糖組成として合計 3%未満と低 V、反応物を得ることができる。このラタトスクロース生成反応のみで得られる反応物のラタトスクロース含量は、通常、糖糸且成として 70%以上 80%未満であって、 80%以上となることはない。ラタトスクロース生成反応の条件としては、例えば、同じ特許出願人による特開平 9— 224665号公報に開示されたバチルス属に属する微生物由来の |8 ーフラタトフラノシダーゼ及びスクロース非資化性サッカロミセス'セレビシァェ ATC C56741を利用する場合、該酵素が完全には失活せず、且つ、該酵母がグルコース及びフラクトースを資化できる条件、すなわち、温度は、通常、約 0乃至 40°Cの範囲、望ましくは、約 15乃至 35°Cの範囲が好適であり、 pHは、通常、 4. 0乃至 5. 5の範囲に制御するのが好ましい。反応混合物中の基質の濃度は所期の反応が進行し、得られる反応物がラタトスクロースを糖組成として 70%以上、且つ、副生成物である 1 ーケストース及びフラクトシルラクトスクロースの含量が糖組成として合計 3%未満である限り特に限定されないものの、例えば、スクロースとラタトースとを、それぞれ、通常、 0. 1乃至 40質量％の範囲、望ましくは、 1乃至 30質量％の範囲が好ましぐ両者の量比は 1 : 0. 65乃至 1. 3とするのが好ましい。

[0016] βーフラタトフラノシダーゼの使用量に関しては、反応原料 (基質）中のスクロースの乾燥質量 lg当たり、通常、 0. 1乃至 50単位の範囲、望ましくは、 0. 5乃至 10単位の範囲とするのが好適である。なお、本明細書でいう j8—フラタトフラノシダーゼ活性の 1単位とは、同じ特許出願人による特開平 9— 224665号公報に記載の方法に従つて、 pH6. 0、 40°Cでスクロースを基質として反応させたとき、 1分間当たり 2 /z molの D—グルコースに相当する還元力を増カロさせる酵素量を意味する。

[0017] スクロース非資化性酵母の使用量に関しては、反応原料 (基質）中のスクロースの乾燥質量 lg当たり、通常、湿質量として 0. 01乃至 lgの範囲、望ましくは、 0. 05乃至 0. 2gの範囲とするのが好適である。

[0018] βーフラタトフラノシダーゼとスクロース非資化性酵母とを併用する方法は、得られる反応物がラタトスクロースを糖組成として 70%以上含有し、且つ、副生成物である 1 ーケストース及びフラクトシルラクトスクロースの含量が糖組成として合計 3%未満である限り特に限定されず、例えば、スクロースとラタトースとを含有する水溶液に j8—フラクトフラノシダーゼと酵母とを同時に或いは異なる時点で添加し作用させてもよいし、 βーフラタトフラノシダーゼと酵母のいずれか又は両者を反応中、適宜追加して作用させてもよい。さらに、 j8—フラタトフラノシダーゼ反応とスクロース非資化性酵母による処理とを別々の反応容器で行!ヽ、それぞれの反応液を互いに循環させることで連続的に反応させてもよぐこのような場合、固定ィ匕 |8—フラタトフラノシダーゼゃ固定化スクロース非資化性酵母を用いたバイオリアクターは有利に利用することができる。

[0019] βーフラタトフラノシダーゼとスクロース非資化性酵母とを併用して反応させる時間は、それらを併用する方法や反応の進行の度合いに応じて適宜選択することができ、通常、 2乃至 200時間の範囲、望ましくは、 10乃至 80時間の範囲が好適である。

[0020] 反応に用いた j8—フラタトフラノシダーゼ及び Z又はスクロース非資化性酵母は、必要に応じて、遠心分離、膜濾過などの手法により反応物と分離 ·回収して、再度、該反応に用いることも有利に実施できる。

[0021] 以上のような本発明のラタトスクロース高含有糖質の製造方法によると、ラタトスクロ一スを糖組成として 70%以上含有し、且つ、副生成物である 1—ケストース及びフラクトシルラクトスクロースの含量が糖組成として合計 3%未満と低い反応物をラタトスクロース高含有糖質として得ることができる。斯カるラタトスクロース高含有糖質は、そのままの状態で用いてもよぐまた、アルカリ処理により残存するラタトースを部分的にラクチュロースに異性ィ匕してラタトース含量を低減させ、含まれるラタトースの結晶が析出するのを抑えたラタトスクロース高含有糖質とした後、用いることも随意である。さらには、本発明のラタトスクロース高含有糖質を、慣用の方法、例えば、活性炭処理などによる脱色、イオン交換榭脂処理などによる脱塩、炭酸飽充による不純物の不溶ィ匕、結晶化によるラタトースの除去、珪藻土などの助剤を用いる濾過、エバポレータ一などを用いる濃縮、必要に応じて、さらに噴霧乾燥など力も選ばれる適宜の工程により所望のレベルにまで精製した製品として、諸種の用途に利用することができる。

[0022] また、本発明のラ外スクロース高含有糖質を原料として、イオン交換榭脂などを用いるクロマトグラフィーによりさらに精製し、糖組成としてラタトスクロースを 90%以上含有する画分を回収し、濃縮してシラップ状高純度ラタトスクロースとすることも、また、これを噴霧乾燥、真空乾燥、凍結乾燥など力選ばれる適宜の乾燥工程により粉末ィ匕した粉末又は顆粒製品として、諸種の用途に利用することもできる。

[0023] また、以上述べてきたラタトスクロース高含有糖質又は高純度ラタトスクロースを用いて、ラタトスクロースの過飽和水溶液とし、次いで、結晶ラタトスクロースを晶出させ、これを採取することも有利に実施できる。晶出条件としては、ラタトスクロースの過飽和溶液であって、結晶ラタトスクロースが析出すればよぐ通常、ラタトスクロース濃度 75質量％以上の水溶液が適している。具体的に述べれば、例えば、純度約 75%以上、望ましくは、約 80乃至 95%のラタトスクロースを、濃度約 75乃至 95質量％又はこれ以上の濃度とし、その溶液の温度は、溶液が凍結せず、また結晶の融点以下でラタトスクロースの褐変、分解の懸念の少ない温度、例えば、水分約 5乃至 25質量％の溶液を 20乃至 60°Cで晶出させればよい。また、晶出させるに際して、溶液の過飽和度、粘度などを調整するために、例えば、メタノール、エタノール、アセトンなどを共存させることち随意である。

[0024] 晶出方法は、通常、比較的高温の過飽和ラタトスクロース含有溶液を助晶缶にとり、これに種晶を、望ましくは、 0. 1乃至 20質量％共存せしめて、ゆっくり攪拌しつつ、徐冷し、晶出を促してマスキットにすればよい。

[0025] 晶出したマスキットから結晶ラタトスクロースを製造する方法は、結晶ラタトスクロースが採取できればよぐ例えば、分蜜方法、ブロック粉砕方法、流動造粒方法、噴霧乾燥方法などの公知の方法を利用すればょ、。

[0026] 例えば、分蜜方法は、通常、ノスケット型遠心分離機にかけ、結晶ラタトスクロースと蜜とを分離する方法で、必要により、該結晶に少量の冷水をスプレーして洗浄することも容易であり、より高純度の結晶ラタトスクロースを製造するのに好適である。他の三つの方法は、蜜を分離しないので、得られる結晶製品に純度の上昇は見られないものの製品収量の多い特徴を有している。従って、本製品の場合には、通常、結晶製品に、ラタトスクロース以外に原料又は製造工程由来の糖質、例えば、スクロース、ラタトースなどが含まれる。

[0027] 噴霧乾燥方法の場合には、通常、晶出率約 20乃至 50%のマスキットを高圧ポンプでノズル力も噴霧し、結晶粉末が溶融しない温度、例えば、約 40乃至 65°Cの温風で乾燥し、次いで、温風で乾燥熟成すれば、非吸湿性又は難吸湿性の結晶含有粉末が容易に製造できる。

[0028] また、ブロック粉砕法は、通常、晶出率約 10乃至 60%のマスキットを約 0. 5乃至 5 日間静置して全体をブロック状に晶出固化させ、これを粉砕又は切削などの方法によって破砕し、乾燥すれば、非吸湿性、難吸湿性の結晶含有粉末が容易に製造できる。

[0029] また、ラタトスクロース含有水溶液を、常法に従!、、水分 5質量％未満に加熱濃縮して、溶融状態としたラタトスクロースの過飽和水溶液とし、この溶液に種晶を結晶の融点以下の温度で混捏し、これを各種形状、例えば、粉体、顆粒、棒状、板状、立方体などに直接成形して、非吸湿性又は難吸湿性の結晶含有固体を製造することも随意である。

[0030] 本発明の製造方法により得られるラタトスクロース高含有糖質及び高純度ラタトスクロース、さらには、結晶ラタトスクロースは、従来公知のラタトスクロース及びラタトスクロース含有糖質と同様の用途に、例えば、甘味料、難消化性甘味料、低う蝕性甘味料、保湿剤、澱粉老化防止剤、整腸剤、ミネラル吸収促進剤などとして健康食品，飲料を含む飲食品分野、化粧品分野、医薬品分野、飼料分野などの諸種の分野で有利に利用することができる。とりわけ、結晶ラタトスクロースは、前記の各種機能に加えて、実質的に非吸湿性であり、流動性であり、粘着、固着の懸念も少なく取り扱い容易であり、その包装、輸送、貯蔵などの管理に要する物的、人的経費が大幅に削減できる特徴を有する。

[0031] また、本発明の結晶ラタトスクロースは、実質的に非吸湿性乃至難吸湿性の粉末で、耐熱性が高ぐ安定性もよいので、従来、極めて困難とされていた各種固状組成物、例えば、粉末状混合甘味料、チョコレート、チューインガム、即席ジュース、即席スープ、顆粒、錠剤などの固着抑制剤、賦形剤、増量剤、粉末基剤などとして結晶ラタトスクロースを、望ましくは 1質量％以上含有せしめて、例えば、飲食物、化粧品、医薬品、成形物などの各種固状組成物を製造することも、更には、試薬、化学工業原料などとして利用することも有利に利用できる。

[0032] また、本発明のラタトスクロースは、他の結晶糖質、例えば、マルトース、ラタトース、マルチトール、トレハロース、パラチノース、スクロースなどと、望ましくは、結晶ラタトスクロースの質量に対して 0. 01乃至 100倍量の配合割合で併用して、吸湿性が低く取り扱いの容易な各種固状組成物を製造することも有利に実施できる。

[0033] さらには、前述のようにして得た高純度ラタトスクロース粉末品又は結晶品を、適宜の水溶性高分子、例えば、プルラン、水溶性プルランエーテル、水溶性プルランエステル、ゼラチン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、海藻多糖類などを結合剤として常法により造粒し、流動性に優れ、取り扱いが容易な造粒品として各種用途に利用することも有利に実施できる。

[0034] 以下、実施例に基づいて本発明をより詳細に説明する。

実施例 1

[0035] <ラタトスクロース高含有糖質の製造 >

[0036] <実施例 1— 1： |8—フラタトフラノシダーゼの調製 >

同じ特許出願人による特開平 9— 224665号公報に記載された方法に従ってバチルス'スピーシーズ V230 (FERM BP— 5054)を、スクロースを炭素源として含む培地中で 40Lの培養規模で培養した。引き続き上記公報に記載の方法に従って、培養物を遠心分離して、その上清を約 38L採取し、 β—フラタトフラノシダーゼの活性測定を行い、この培養上清が β—フラタトフラノシダーゼ活性を示すことを確認した。

[0037] 上記の培養上清を UF膜濃縮し、 1ml当り約 360単位の β—フラタトフラノシダーゼ活性を有する粗酵素液 360mlを得た。これを、引き続き上記公報に記載の方法に従つて、『DEAE—トヨパール』ゲル (東ソ一株式会社製)を用いたイオン交換クロマトグラフィー、『ブチル—トヨパール 650』ゲル (東ソ一株式会社製）を用いた疎水クロマトグラフィー、及び、再度、『DEAE—トヨパール』ゲルを用いたイオン交換クロマトダラフィ一に供し、 7. 5% (wZv)ポリアクリルアミドゲル電気泳動において単一のバンドを示す ι8—フラ外フラノシダーゼの精製標品を得た。得られた精製標品の比活性は蛋白質 lmg当り約 205単位であった。

[0038] <実施例 1 2：スクロース非資化性酵母の調製 >

グルコース 2. 0% (wZv)、酵母エキス 2. 0% (wZv)及び水からなる液体培地を 5 00ml容三角フラスコに 200ml入れ、オートクレーブで 121°C、 20分間滅菌し、冷却して、サッカロマイセス 'セレビシァェ ATCC56741を接種し、 27°C、 230rpmで 24 時間回転振盪培養したものを種培養とした。容量 30Lのフアーメンターに種培養と同じ組成の培地を入れて、加熱滅菌、冷却して温度 27°Cとした後、種培養液 1% (νΖ V)を接種し、温度 27°C、 pH4. 0乃至 7. 0に保ちつつ、 48時間通気攪拌培養した。培養後、培養液を遠心分離 (8, OOOrpm, 20分間）して該酵母の菌体を湿質量として約 680g回収した。

[0039] く実施例 1— 3 :ラタトスクロース生成反応〉

スクロース及びラタトースをそれぞれ 20質量％含有する水溶液を pH6. 0に調整し、これに実施例 1—1で調製した一フラタトフラノシダーゼ精製標品をスクロース 1グラム当り 1単位、及び実施例 1 2で調製した酵母を固形物質量当り湿質量で 6. 9% になるように加えて、 1Nの水酸ィ匕ナトリウム溶液を用いて該反応液を pH4. 0乃至 5. 5に制御しながら、 30°Cで 24時間及び 42時間反応させた。反応後、反応液の糖組成を高速液体クロマトグラフィー法 (HPLC)で測定した。 HPLCは、『TSK— GEL AMIDE— 80』カラム (東ソ一株式会社製)を用い、カラム温度 35°C、溶離液としてァセトニトリル:水（71 : 29)を用いて、流速 1. OmlZminの条件で行い、検出は示差屈折計『RI— 8012』 (東ソ一株式会社製)を用いて行った。糖組成分析の結果を表 1示す。なお、対照実験として、ァルスロパクター 'スピーシーズ K—1由来の β フラクトフラノシダーゼを、藤田孝輝ら、『ァグリカルチュラル'バイオロジカル 'ケミストリー (Α gric. Biol. Chem. )』、 54卷、 913— 919頁（1990)に記載の方法で精製し、それをスクロース 1グラム当り 10単位カ卩え、反応液を pH5. 5乃至 6. 5に制御した以外は、全く同じ操作を行った。得られた結果を表 1示す。

[0040] [表 1]

表 1に示すとおり、本発明で用いるバチルス 'スピーシーズ V230の jS —フラクトフラノシダーゼは、糖糸且成としてラタトスクロースを 71. 0% (反応時間 24時間）乃至 73 . 6% (反応時間 42時間）と 70%以上生成し、且つ、副生成物である 1ーケストースとフラクトシルラクトスクロースを合計 0. 1% (反応時間 24時間）乃至 0. 3% (反応時間 42時間）と 1%未満しか生成しないことが判明した。一方、対照であるアルスロバクタ一'スピーシーズ K—1の 13ーフラタトフラノシダーゼは、糖糸且成としてラタトスクロースを 63. 3% (反応時間 24時間）乃至 63. 0% (反応時間 42時間）と 65%未満しか生成せず、また、副生成物である 1ーケスト一スとフラタトシルラクトスクロースを合計 5. 9% (反応時間 24時間)乃至 12. 4% (反応時間 42時間）と著量生成することも判明した。

実施例 2

[0042] <ラタトスクロース高含有糖質粉末の製造 >

スクロースを 24質量％及びラタトースを 16質量％含有する水溶液を pH6. 0に調整し、これに実施例 1—1で調製した一フラタトフラノシダーゼ粗酵素液をスクロース 1 グラム当り 1単位、及び実施例 1 2で調製したスクロース非資化性酵母を原料固形物当り湿質量で 7. 5%になるように加えて、 1Nの水酸ィ匕ナトリウム溶液を用いて該反応液を PH4. 0乃至 5. 5に制御しながら、 30°Cで 45時間反応させた。反応後、反応液の糖組成を HPLCで測定したところ、グリセリンを 2. 0%、グルコース及びフラタトースを合計 2. 1%、スクロースを 5. 4%、ラタトースを 14. 7%、 1—ケストースを 1. 4 %、ラタトスクロースを 73. 0%、フラクトシルラクトスクロースを 0. 1%及び他の未知糖質を 1. 3%含有していた。得られた反応液を 90°Cで 30分間加熱して酵素を失活させた後、常法に従って活性炭で濾過した。得られた濾過液を 60°Cに調整した後、消石灰を固形物質量当り 1. 5%加えて pHを 11に調整して 15分間保持した後に、二酸化炭素を吹き込み、 pHを 8にして炭酸飽充を行った。これを常法に従って濾過し、ィオン交換榭脂を用いて脱塩し、濃縮した後、噴霧乾燥して、糖組成としてグリセリンを 1. 9%、グルコース及びフラクトースを合計 2. 2%、スクロースを 5. 5%、ラタトースを 10. 8%、ラタチュロースを 3. 3%、 1—ケストースを 1. 3%、ラタトスクロースを 73. 5 %、フラクトシルラクトスクロースを 0. 1%及び他の未知糖質を 1. 4%含有するラタトスクロース高含有糖質粉末を製造した。

[0043] 本品は、甘味料、難消化性甘味料、低う蝕性甘味料、保湿剤、澱粉老化防止剤、整腸剤などとして、健康食品 ·飲料を含む飲食品分野、化粧品分野、医薬品分野、飼料分野などの諸種の分野で有利に利用できる。実施例 3

[0044] <ラタトスクロース高含有糖質シラップの製造 >

スクロースを 18質量％及びラタトースを 22質量％含有する水溶液を pH6. 0に調整し、これに実施例 1—1で調製した一フラタトフラノシダーゼ粗酵素液をスクロース 1 グラム当り 1単位、及び実施例 1 2で調製したスクロース非資化性酵母を固形物質量当り湿質量で 5. 0%になるように加えて、 1Nの水酸ィ匕ナトリウム溶液を用いて該反応液を PH4. 0乃至 5. 5に制御しながら、 32°Cで 42時間反応させた。反応後、反応液の糖組成を HPLCで測定したところ、グリセロールを 1. 9%、グルコース及びフラク卜ースを合計 0. 1%、スクロースを 1. 2%、ラタ卜ースを 22. 6%、 1—ケス卜ースを 0. 3 %、ラタトスクロースを 72. 4%、フラクトシルラクトスクロースを 0. 1%、及び他の未知糖質を 1. 4%含有していた。得られた反応液を、常法に従って SF膜で濾過して酵母を除き、更に常法に従って UF膜で濾過して —フラタトフラノシダーゼなど高分子成分を除き、続いて活性炭で濾過した後、減圧乾燥して固形物約 80質量％の濃縮液を得た。この濃縮液を温度約 25°Cに調整した後、仕込みラタトースの約 3質量％の結晶ラクトース粉末を加えラタトースを部分的に結晶化した。晶出したラタトースを常法に従って濾過により除去した後、イオン交換榭脂を用いて脱塩し、濃縮して、糖組成としてグリセロールを 2. 2%、グルコース及びフラクトースを合計 0. 1%、スクロースを 1. 4%、ラタトースを 10. 1%、 1ーケストースを 0. 4%、ラタトスクロースを 84. 1%、フラタトシルラクトスクロースを 0. 1%、及び他の未知糖質を 1. 6%含有するラタトスクロース高含有糖質シラップを製造した。

[0045] 本品は、甘味料、難消化性甘味料、低う蝕性甘味料、保湿剤、澱粉老化防止剤、整腸剤などとして、健康食品 ·飲料を含む飲食品分野、化粧品分野、医薬品分野、飼料分野などの諸種の分野で有利に利用できる。

実施例 4

[0046] <高純度ラタトスクロース粉末の製造 >

スクロースを 20質量％及びラタトースを 20質量％含有する水溶液を pH6. 0に調整し、これに実施例 1—1で調製した一フラタトフラノシダーゼ粗酵素液をスクロース 1 グラム当り 1単位、及び実施例 1 2で調製したスクロース非資化性酵母を固形物質量当り湿質量で 5. 0%になるように加えて、 1Nの水酸ィ匕ナトリウム溶液を用いて該反応液を PH4. 0乃至 5. 5に制御しながら、 30°Cで 30時間反応させた。反応後、反応液の糖組成を HPLCで測定したところ、グリセロールを 2. 0%、グルコース及びフラク卜ースを合計 0. 2%、スクロースを 1. 6%、ラタ卜ースを 19. 2%、 1—ケス卜ースを 0. 6 %、ラタトスクロースを 74. 7%、フラクトシルラクトスクロースを 0. 1%、及び他の未知糖質を 1. 7%含有していた。得られた反応液を常法に従って SF膜で濾過して酵母を除き、更に常法に従って UF膜で濾過して —フラタトフラノシダーゼなど高分子成分を除き、続いて活性炭で濾過した後、減圧乾燥して固形物約 60質量％の濃縮液を得た。このラタトスクロース高含有糖質シラップを原糖液とし、ラタトスクロースの純度を高めるため、強酸性カチオン交換榭脂（商品名『アンバーライト CR— 1310』 (N a+型）、オルガノ株式会社)を用いてカラムクロマトグラフィーを行った。即ち、前記榭脂を内径 12. 5cmのジャケット付きステンレス製カラム 10本に充填し、これらカラムを直列に接続して榭脂層全長を 16mとした。カラム内温度を 40°Cに維持しつつ、前記シラップを榭脂量に対して 1. 5% (vZv)カロえ、これ〖こ 40°Cの温水を SV0. 2で流して分画し、溶出液の糖組成を HPLC法でモニターしながら、ラタトスクロース高含有画分を採取し、これを常法に従って、濾過し、イオン交換榭脂、活性炭を用いて脱塩、脱色精製し、濃縮した後、噴霧乾燥して、糖組成としてスクロースを 0. 1%、ラ外ースを 2. 3%、 1ーケストースを 1. 1%、ラタトスクロースを 96. 0%、フラクトシルラクトスクロースを 0. 2%、及び他の未知糖質を 0. 3%含有する高純度ラタトスクロース粉末を製造した。

[0047] 本品は、甘味料、難消化性甘味料、低う蝕性甘味料、保湿剤、澱粉老化防止剤、整腸剤などとして、健康食品 ·飲料を含む飲食品分野、化粧品分野、医薬品分野、飼料分野などの諸種の分野で有利に利用できる。

実施例 5

[0048] <高純度ラタトスクロース造粒品の製造 >

実施例 4で得た高純度ラタトスクロース粉末 100質量部に対し、予めプルラン (商品名『プルラン PF— 20』、株式会社林原商事販売）を脱イオン水に終濃度約 3% (wZ V)になるよう溶解して得たプルラン水溶液約 6質量部を常法に従、噴霧することにより造粒を行った。得られた造粒品を篩目開き 1. 7mmの篩で分級し、高純度ラタトスクロース造粒品を得た。この造粒品の粒度分布を測定し、原料である高純度ラタトスクロース粉末の粒度分布と比較したところ、原料の高純度ラタトスクロース粉末では粒子径 106 μ m以下の粒子が 85%以上を占めていたのに対して、高純度ラタトスクロ一ス造粒品では粒子径 150 μ m以上の粒子が 70%以上を占めていた。

[0049] 本品は、造粒品であることから流動性に優れ、取り扱いが容易であり、また、溶解時にまま粉を起こし難い特徴を有している。本品は、甘味料、難消化性甘味料、低う蝕性甘味料、保湿剤、澱粉老化防止剤、整腸剤などとして、健康食品 ·飲料を含む飲食品分野、化粧品分野、医薬品分野、飼料分野などの諸種の分野で有利に利用できる。

実施例 6

[0050] <結晶ラタトスクロース >

実施例 4の方法で得たラタトスクロース高含有画分を、常法に従って、濾過し、ィォン交換樹脂、活性炭を用いて、脱塩、脱色精製し、水分約 25質量％に減圧濃縮して、助晶缶にとり、種結晶を 1質量％加えてゆっくり攪拌しつつ 24時間かけて約 30°Cに徐冷した。これを遠心分離機にかけてラタトスクロース 5含水結晶を収率約 40%で得た。本品は、純度約 98%以上の結晶ラタトスクロースで、夏場の高温多湿環境下においても実質的に吸湿性を示さず取り扱い容易で、甘味料、難消化性甘味料、整腸剤などとして、飲食物、化粧品、医薬品などの諸種の分野、とりわけ、結晶ラタトスクロースを含有せしめた固状組成物への用途に有利に利用できる。

実施例 7

[0051] <甘味料 >

実施例 6の方法で得た結晶ラタトスクロース 1質量部に、 a—ダルコシルステビオシド (東洋精糖株式会社販売、商品名「《G—スイート」） 0. 05質量部を均一に混合し、顆粒成形機にカゝけて、顆粒状甘味料を得た。本品は、甘味の質が優れ、砂糖の約 2倍の甘味を有し、甘味度当たりのカロリーは、砂糖の約 1Z2に低下している。本甘味料は、低カロリー甘味料として、カロリー摂取を制限している肥満者、糖尿病者などのための低カロリー飲食物などに対する甘味付けに好適である。また、本甘味料は、虫歯誘発菌による酸の生成が少なぐ不溶性グルカンの生成も少ないことより、虫歯を抑制する飲食物などに対する甘味付けに好適である。さらに、本甘味料は腸内の菌叢を整える整腸剤としても好適である。

実施例 8

[0052] <成形甘味料 >

実施例 6の方法で得た結晶ラタトスクロース 1質量部と粉砂糖 2質量部とを均一に混合し、これに適量の水を噴霧し、常法に従って成形して成形甘味料を得た。本品は腸内の菌叢を整える整腸機能を有する成形甘味料として、コーヒー、紅茶などへの甘味付けに有効に利用できる。

実施例 9

[0053] <チョコレート >

カカオペースト 40質量部、カカオバター 10質量部、砂糖 20質量部、実施例 6の方法で得た結晶ラタトスクロース 30質量部を混合してレフアイナ一に通して粒度を下げた後、コンチェに入れて 50°Cで 2昼夜練り上げた。この間に、レシチン 0. 5質量部を加え充分に混和分散させた。次いで、温度調節機で 31°Cに調節し、バターの固まる直前に型に流し込み、振動機でァヮ抜きを行い、 10°Cの冷却トンネルを 20分間くぐらせて固化させた。これを型抜きして包装し製品を得た。本品は吸湿性がなぐ色、光沢共によぐ内部組織も良好で、口中でなめらかに溶け、上品な甘味とまろやかな風味を有する。また、本品は整腸作用を有するチョコレートとしても好適である。実施例 10

[0054] <チューインガム >

ガムベース 3質量部を柔ら力べなる程度に加熱溶融し、これに無水結晶マルチトール (株式会社林原商事販売、登録商標「マビット」 ) 4質量部及び実施例 6の方法で得た結晶ラ外スクロース 3質量部を加え、さらに適量の香料と着色料とを混合し、常法に従って、ロールにより練り合わせ、成形、包装して製品を得た。本品は、テクスチャ一、風味とも良好なチューインガムである。また、本品は、整腸作用を有するチューィンガムとしても好適である。実施例 11

[0055] <飲料 >

ヨーグルト 100質量部、実施例 4の方法で得た高純度ラタトスクロース粉末 50質量部、トレハロース 10質量部、ヨーグルトフレーバー 0. 25質量部及びレモンエッセンス 0. 1質量部に水をカ卩えて全体を 1000質量部とする配合で、常法に従って、ョーダルト飲料を製造した。本品は、風味が豊かで、且つ、腸内の菌叢を整える整腸機能を有している。

実施例 12

[0056] <経管栄養剤 >

実施例 6の方法で得た結晶ラタトスクロース 10質量部、トレハロース 10質量部、ダリシン 1. 1質量部、グルタミン酸ナトリウム 1質量部、乳酸カルシウム 0. 4質量部、炭酸マグネシウム 0. 1質量部、チアミン 0. 01質量部及びリボフラビン 0. 01質量部からなる配合物を調製した。この配合物 24gずつをラミネートアルミ製小包に充填し、ヒートシールして製品を得た。本品は、 1袋分を約 33乃至 500mlの水に溶解して栄養補給液とし、経管方法により、鼻腔、胃腸などへ投与して使用する。本品はヒトのみならず、家畜などへの非経口的栄養補給液としても有利に利用できる。また、本品は、腸内菌叢を整える整腸作用を有している。

実施例 13

[0057] <糖衣錠 >

質量 150mgの素錠を芯剤とし、これに実施例 6の方法で得た結晶ラタトスクロース 4 5質量部、プルラン (平均分子量 20万） 2質量部、水 30質量部、タルク 25質量部及び酸ィ匕チタン 3質量部力もなる下掛け液を用いて錠剤質量が約 230mgになるまで糖衣し、次いで、同じ結晶ラタトスクロース 65質量部、プルラン 1質量部及び水 34質量部からなる上掛け液を用いて糖衣し、さらに、ロウ液で艷出しして光沢のある外観の優れた糖衣錠を得た。本品は、糖衣掛け時の作業性が優れているだけでなぐ耐衝撃性にも優れており、高品質を長時間維持する。また、本品は、腸内の菌叢を整える整腸機能を有している。産業上の利用可能性

[0058] 以上述べたように、本発明のラタトスクロース高含有糖質の製造方法によれば、カラムクロマトグラフィーなどの精製手段を使用せずとも、スクロースとラタトースとから — フラタトフラノシダーゼとスクロース非資化性酵母とを併用した反応のみで、糖組成として 70%以上のラタトスクロースを含有するラタトスクロース高含有糖質を製造することができる。また、本発明の製造方法で得られるラタトスクロース高含有糖質は、副生成物である 1ーケストース及びフラクトシルラクトスクロースの含量が糖組成として合計 3%未満と低いことから、これを原料としてクロマトグラフィー法で精製すると、さらに高純度のラタトスクロースを容易に高収率で調製することができる。

[0059] さらに、本発明により得られるラタトスクロース高含有糖質又は高純度ラタトスクロースは、機能を発揮するに有効なラタトスクロースを糖組成として 70%以上又は 90%以上含有することから、ラタトスクロース含量が低、従来のラタトスクロース含有糖質に比べ、ラタトスクロースが本来有する難消化性、ビフィズス菌増殖促進性、難う蝕性、保湿性などの優れた機能を比較的少量で発揮することができる。そのため、本発明で得られるラタトスクロース高含有糖質又は高純度ラタトスクロースは、これを配合して飲食品、化粧品、医薬品、飼料などの各種組成物を製造する場合、他の原材料と配合する上で、より幅広、配合組成を選択することができる。

[0060] さらには、ラタトスクロース高含有糖質又は高純度ラタトスクロースを含むラタトスクロースの過飽和水溶液から晶出し、採取して製造されるラタトスクロース 5含水結晶は、実質的に非吸湿性であり、流動性良好で、粘着、固着の懸念も少なく取り扱い容易であることから、各種固状組成物に有利に利用できる。

[0061] 本発明は、斯くも顕著な作用効果を奏する発明であり、斯界に貢献すること誠に多大な意義のある発明である。

Claims

請求の範囲

[1] 糖組成として、ラタトスクロースを 70%以上、 1—ケストースとフラタトシルラクトスクロースを合計 3%未満含有するラタトスクロース高含有糖質。

[2] さらに、他の糖質としてグリセリン、グルコース、フラクトース、スクロース、ラタトース、及びラクチュロース力選ばれる 1種又は 2種以上を含有する請求の範囲第 1項記載のラタトスクロース高含有糖質。

[3] スクロースとラタトースとを含有する水溶液に、バチルス属に属する微生物由来の β ーフラタトフラノシダーゼとスクロース非資化性酵母とを作用させ、糖組成としてラクトスクロースを 70%以上、 1—ケストースとフラタトシルラクトスクロースを合計 3%未満含有する反応物とし、必要に応じて、更に、混在するラタトースを異性化させてラタトースとラクチュロースとの混合物にした後、これを採取することを特徴とする請求の範囲第 1項又は第 2項記載のラタトスクロース高含有糖質の製造方法。

[4] バチルス属に属する微生物由来の j8—フラタトフラノシダーゼ力組換え型酵素である請求の範囲第 3項記載のラタトスクロース高含有糖質の製造方法。

[5] バチルス属に属する微生物力バチルス 'スピーシーズ V230 (FERM BP— 50

54)である請求の範囲第 3項又は第 4項記載のラタトスクロース高含有糖質の製造方法。

[6] スクロース非資化性酵母力サッカロミセス'セレビシァェ ATCC56741又はサッカロミセス'セレビシァェ ATCC56742である請求の範囲第 3項乃至第 5項のいずれかに記載のラタトスクロース高含有糖質の製造方法。

[7] ラタトスクロース生成反応における反応原料としてのスクロースとラタトースとの比率力 1 : 0. 65乃至 1. 3である請求の範囲第 3項乃至第 6項のいずれかに記載のラクトスクロース高含有糖質の製造方法。

[8] ラタトスクロース生成反応における反応液 pHを、 4. 0乃至 5. 5に制御することを特徴とする請求の範囲第 3項乃至第 7項のいずれかに記載のラタトスクロース高含有糖質の製造方法。

[9] 請求の範囲第 1項又は第 2項記載のラタトスクロース高含有糖質を、榭脂を用いたクロマトグラフィーにかけ、糖糸且成としてラタトスクロースを 90%以上含有する画分を採取することを特徴とする高純度ラタトスクロースの製造方法。

[10] 請求の範囲第 1項又は第 2項記載のラタトスクロース高含有糖質を、榭脂を用いたクロマトグラフィーにかけ、糖糸且成としてラタトスクロースを 90%以上含有する画分を採取し、これを濃縮し、噴霧乾燥することを特徴とする高純度ラタトスクロース粉末の製造方法。

[11] さらに、造粒する工程を含む請求の範囲第 9項又は第 10項記載の高純度ラタトスクロース粉末の製造方法。

[12] 請求の範囲第 1項又は第 2項記載のラタトスクロース高含有糖質又は請求の範囲第

9項記載の高純度ラタトスクロースの製造方法によって得られる高純度ラタトスクロースを用い、ラタトスクロースの過飽和溶液力も結晶ラタトスクロースを晶出させ、これを採取することを特徴とする結晶ラタトスクロースの製造方法。

[13] 結晶ラタトスクロース力ラタトスクロース 5含水結晶である請求の範囲第 12項記載の結晶ラタトスクロースの製造方法。

[14] 請求の範囲第 12項又は第 13項記載の結晶ラタトスクロースの製造方法によって得られる結晶ラタトスクロースを含有せしめてなる固状組成物。

[15] 結晶ラタトスクロースとともに、他の結晶糖質を結晶ラタトスクロースの質量に対して

0. 01乃至 100倍量の範囲で含有せしめることを特徴とする請求の範囲第 14項記載の固状組成物。

[16] 飲食物、化粧品又は医薬品のいずれかの形態にある請求の範囲第 14項又は第 1 5項記載の固状組成物。