WO2005086594A2 - 免疫測定法用測定値低下抑制剤及びそれを用いた免疫測定法 - Google Patents

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Michie Saito
Hiroshi Matsui
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Denka Seiken Co., Ltd.
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    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding

Definitions

  • the present invention relates to a measurement value lowering inhibitor for an immunoassay for suppressing a decrease in a measured value due to an interfering substance, an immunoassay using the same, and an immunoassay reagent.
  • test items that use biological samples as test samples.
  • immunoassays it is known that interfering substances that affect the immune response of the target substance are present in the biological sample. This effect affects the accuracy of the measurements, and several reports have been made.
  • JP-A-9-304384 describes the use of a conjugated gen-based polymer containing a sulfonic acid group or a salt thereof to avoid false positives in an immunoassay. It is necessary to improve accuracy to avoid interfering substances that may be present in all biological samples rather than false-positive substances present in simple samples.
  • Patent Document 1 Japanese Patent Laid-Open No. 9-304384
  • An object of the present invention is to provide a measurement value decrease inhibitor for an immunoassay that can suppress the influence of an interfering substance in a test sample and improve the accuracy of the immunoassay, and to use the same.
  • Another object of the present invention is to provide an immunoassay method and an immunoassay reagent in which a decrease in measured value due to an interfering substance is suppressed.
  • the inventors of the present application have immunopolymerized an ionic surfactant having a molecular weight of 1000 to 100,000, which is a polymer obtained by polymerizing a hydrophobic cyclic monomer having an ionic functional group.
  • the present inventors have found that by coexisting in a reaction solution for performing the method, the influence of interfering substances in the test sample can be suppressed and the accuracy of the immunoassay can be improved.
  • the present invention provides a polymer obtained by polymerizing a hydrophobic cyclic monomer having an ionic functional group, and also has an ionic surfactant force having a molecular weight of 1000 to 100,000, and is measured by an interfering substance.
  • the present invention also provides an immunoassay method carried out in the presence of the measured value decrease inhibitor of the present invention.
  • the present invention provides an immunoassay comprising the above-described measurement value decrease inhibitor of the present invention in a reagent for an immunoassay containing at least a buffer solution and sensitizing particles or antiserum. Providing forensic reagents.
  • the present invention provides the use of the above-described ionic surfactant as a measurement value decrease inhibitor for immunoassay. Furthermore, the present invention provides a method for suppressing a decrease in measurement value in an immunoassay method, which comprises coexisting the above-described ionic surfactant in a reaction solution of the immunoassay method.
  • immunoagglutination is the detection of an antigen or antibody in a test sample based on a change in optical properties such as turbidity or absorbance of a reaction solution caused by an antigen-antibody reaction, or This is a method of quantification, and includes immunoturbidimetry and immunotrophic method (nephrometry).
  • the antibody or antigen that reacts with the target antigen or target antibody in the test sample is usually immobilized on particles such as latex particles ( Sensitized particles), the detection or quantification of the test substance is performed based on the change in optical properties resulting from the aggregation of the sensitized particles due to the antigen-antibody reaction. Called).
  • Sensitized particles latex particles
  • the detection or quantification of the test substance is performed based on the change in optical properties resulting from the aggregation of the sensitized particles due to the antigen-antibody reaction. Called).
  • it is often used for antiserum without using sensitizing particles.
  • the measured value reduction inhibitor of the immunoassay of the present invention is a polymer obtained by polymerizing a hydrophobic cyclic monomer having an ionic functional group, and has a molecular weight of 1000 to 100,000. Consists of.
  • the ionic functional group is preferably a sulfone group or a salt thereof, a carboxylic acid or a salt thereof, or an amine (such as a quaternary amine that is ionized in an aqueous solution), particularly a sulfone group or a salt thereof.
  • the ionic surfactant may be an anionic surfactant or a cationic surfactant.
  • examples of the hydrophobic ring include an aromatic ring and a cycloalkyl ring, which may be a heterocyclic ring containing an oxygen atom, a nitrogen atom, a thio atom, or the like! It may be.
  • Preferred examples of the aromatic ring as the hydrophobic ring include a benzene ring, a naphthalene ring, and an anthracene ring, and a benzene ring or a naphthalene ring is preferable, and a benzene ring is more preferable.
  • Preferable polymers used as a measured value reduction inhibitor include polyanetene sulfonic acid sodium salt, polystyrene sulfonic acid sodium salt, sodium salt of naphthalene sulfonic acid formalin condensate, sodium salt of aromatic sulfonic acid formalin condensate (specifically Include Disroll (trade name, manufactured by Nippon Emulsifier Co., Ltd.), Demol (trade name, manufactured by Kao Corporation), Politi PS-1900 (Lion), Politi N-100K (trade name, manufactured by Lion Corporation), etc. Is possible.
  • examples of preferred U and polymer used as a measured value decrease inhibitor include those having a repeating unit represented by the following general formula [I]. [0015] [Chemical 1]
  • Ar is a hydrophobic ring
  • X is an ionic functional group
  • R 1 to R 3 are each independently a hydrogen atom or an alkyl group
  • n is an integer of 0 to 10
  • each carbon atom constituting Ar The hydrogen atom bonded to is substituted with a substituent without impairing the effect of the present invention, and may be! /,
  • X and Ar are the above-described ionic functional group and hydrophobic ring, respectively.
  • R 1 to R 3 are an alkyl group
  • a lower alkyl group in the present specification and claims, “lower” means a carbon number of 14
  • N is preferably 0 to 3.
  • the hydrogen atom bonded to each carbon atom constituting Ar may be substituted with a substituent that does not impair the effects of the present invention. Examples of such a substituent include a lower alkyl group and a lower alkoxyl. The group can be mentioned.
  • ⁇ is an atom or group that becomes a monovalent cation in an aqueous solution, preferably an alkali metal such as sodium or potassium, and R 1 to R 3 are each independently a hydrogen atom or a lower group.
  • the ruxoxyl groups R 4 to R 6 each independently represent a hydrogen atom or a lower alkyl group.
  • repeating units represented by the general formula [I] particularly preferred ones include an guanetole sulfonate represented by the following formula [III] and a styrene sulfone represented by the following formula [IV]. And an acid salt and a naphthalene sulfonic acid formalin condensate salt represented by the following formula [V].
  • ⁇ is synonymous with the formula [I], and is preferably an alkali metal such as sodium or rhodium.
  • the molecular weight of the polymer is from 1,000 to 100,000, preferably from 1,000 to 60,000.
  • the above repeating units may be used alone or in combination of two or more. It is preferable that the polymer used as the measurement value lowering inhibitor is composed of only the above repeating units, but may contain other units within a range without adversely affecting the effects of the present invention! Usually, the content of the polymer in such other units, 20 mole 0/0 or less, preferably 10 mol% or less, more preferably not more than 5 mol%.
  • the immunoassay method of the present invention is an immunoassay method in the presence of the above-described measured value decrease inhibitor of the present invention.
  • the amount of the measured value decrease inhibitor used is not particularly limited.
  • the final concentration in the reaction solution is 0.01% to 5% (weight to volume), preferably about 0.1 to 1%.
  • test sample to be subjected to the immunoassay method of the present invention is not particularly limited, but a biological sample capable of greatly exerting the effect of the present invention for suppressing the influence of interfering substances is preferred.
  • Body fluids such as serum, plasma, urine, stool, saliva, tissue fluid, cerebrospinal fluid, wiping fluid, and the like are preferable, and blood, serum, plasma, and dilutions thereof are more preferable.
  • the antibody or antigen sensitized to the sensitized particles used when the immunoassay is an immunoagglutination method is not particularly limited.
  • CRP C-reactive protein
  • RF Rheumatoid factor
  • FER ferritin
  • Mb myoglobin
  • the immunoassay method of the present invention can be carried out in the same manner as in the prior art, except that the immunoassay method is performed in the presence of the above-mentioned measured value decrease inhibitor. That is, when the immunoassay is an immunoaggregation method, the concentration of the sensitizing particles in the reaction solution is not particularly limited, but is usually about 0.0 1-0. 5%, and the reaction is usually It is carried out at 1 ° C to 56 ° C, preferably 37 ° C for 1 minute to 10 minutes. However, the reaction conditions are not limited to these. As the reaction medium, various buffer solutions such as a glycine buffer solution are usually used.
  • the turbidity or absorbance of the reaction solution is measured before the start of the reaction and after a certain period of time after the start of the reaction, or measured over time before and after the start of the reaction, and the magnitude of the change in turbidity or absorbance (endpoint method). ) Or the rate of change (rate method) to detect or quantify the analyte.
  • the immunoagglutination method can be performed manually or using an automatic analyzer.
  • the measured value decrease inhibitor and sensitized particles or antiserum may be mixed with the test sample at the same time.
  • the effect of the present invention includes the first step of contacting the measured value decrease inhibitor and the second step of causing the test sample after the first step to react with sensitized particles or antiserum with an antigen antibody. It is preferable for obtaining the maximum.
  • both the first step and the second step are not particularly limited, but the reaction time is usually 1 minute to 10 minutes, preferably 1 minute to 15 minutes, and the reaction temperature is usually 1 ° C to 56 ° C. Preferably it is performed at 37 ° C.
  • the concentration of the measured value decrease inhibitor is preferably 0.01% to 5% (weight Z volume) in the reaction solution of the first step, and more preferably 0.05— About 1%.
  • the immunoassay method of the present invention is not limited to the immunoagglutination method.
  • each immunoassay may be performed by including the measured value decrease inhibitor of the present invention in an immune reaction medium.
  • the concentration of the measured value decrease inhibitor may be the same as described above.
  • the present invention also provides an immunoassay reagent comprising a buffer solution, sensitized particles, and the above-described measurement value decrease inhibitor.
  • the immunoassay reagent contains at least a buffer solution and is mixed with the test sample in the first test.
  • a two-component reagent consisting of a drug, at least a buffer solution and sensitized particles, and a second reagent added to the mixture of the test sample and the first reagent.
  • the measured value reduction inhibitor is contained in the first reagent.
  • the concentration of the measured value decrease inhibitor in the first reagent is not particularly limited, but is usually 0.01% to 5% (w / v), preferably 0.01 to l% (w / v ) Degree.
  • the test sample may be diluted with a diluent.
  • a latex turbidimetric reagent for measuring myoglobin having the following compositional power was prepared.
  • a latex turbidimetric reagent for measuring myoglobin having the following compositional power was prepared.
  • a latex turbidimetric reagent for measuring myoglobin having the following compositional power was prepared, in which the first reagent did not contain sodium sodium polysulfonate and polysodium sodium P-sulfonate.
  • the buffer solution used in the first reagent and the second reagent of Example Example 2 and Comparative Example 1 can be a phosphate buffer solution, a Good buffer solution, and the like. A reasonable pH can be used.
  • Measurement method Sample preparation Dilute the test sample at a dilution concentration of 1/10 (diluted 10 times) to 1/10 (not diluted) using physiological saline as diluent.
  • Example 2 Measurement was carried out using the reagents of Example 2 and Comparative Example 1. Add 200 L of the first reagent to 20 L of the sample prepared above, stir and mix at 37 ° C, leave it for 5 minutes, add the second reagent 100 / z L, and stir and mix at 37 ° C. The aggregation reaction for about 2 minutes was measured as the amount of change in absorbance at 570 nm. A sample with a known concentration was measured in advance under the same conditions, and a calibration curve representing the relationship between the concentration and the amount of change in absorbance was prepared. The obtained measured values (ng / mL) were compared depending on the presence or absence of a measured value lowering inhibitor in the first reagent.
  • Table 1 The results are shown in Table 1 below.
  • the “theoretical value” is based on the measured value of a dilution concentration of 1/10 (diluted 10 times) that can ignore the measured value reduction effect caused by coexisting interfering substances in each example. This means the value obtained by multiplying this by the numerator of the dilution concentration (10 times for dilution concentration 10/10, 2 times for 2/10).
  • the difference (%) means (theoretical value ⁇ measured value) Z theoretical value X 100 (%), and the smaller the difference (%), the smaller the deviation from the theoretical value.
  • the measured value drop inhibitor was not included.
  • Comparative Example 1 the difference between the theoretical value and the measured value reached 33% in the undiluted sample (diluted concentration 10/10).
  • the difference was 5% or 4% even without dilution.

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Abstract

被検試料中の妨害物質による影響を抑制して免疫測定法の正確性を向上させることができる、免疫測定法用測定値低下抑制剤並びにそれを用いた、妨害物質による測定値低下が抑制された免疫測定法及び免疫測定法用試薬が開示されている。妨害物質による測定値低下を抑制するための免疫測定法用測定値低下抑制剤は、イオン性官能基を有する疎水性環式モノマーが重合されたポリマーであって、分子量が１０００ないし１０万であるイオン性界面活性剤から成る。

Description

明 細 書
免疫測定法用測定値低下抑制剤及びそれを用いた免疫測定法 技術分野
[0001] 本発明は、妨害物質による測定値低下を抑制するための免疫測定法用測定値低 下抑制剤並びにそれを用いた免疫測定法及び免疫測定法用試薬に関する。 背景技術
[0002] 臨床検査において、生体試料を被検試料とする検査項目は多数存在する。その中 の免疫学的測定法においては、目的物質の免疫反応に影響を与える妨害物質が生 体試料中に存在することが知られて 、る。この影響とは測定値の正確性に影響する ものであり、いくつかの報告もなされている。
[0003] これら妨害物質による影響の確認及び低減の最も一般的な方法として、被検試料 を前希釈することにより妨害物質の濃度を低下させる方法がある。しかしこの方法の 場合、希釈操作により妨害物質と共に目的物質濃度も低下するため、試料中の低濃 度物質を検出する測定系では利用が困難となる。更に、希釈操作が加わることにより 測定時間も延長し、迅速性に欠けるものとなる。一方で、妨害物質が既知の場合は 妨害活性を抑制又は抑止する機能を持つ化合物の添加や加温などの前処理方法 力 Sとられるが、既知の特定物質だけに有効であり、測定項目によっては未知の物質 が測定に悪影響を与える可能性も考えられる。
[0004] また、特開平 9— 304384号公報では免疫測定法における偽陽性回避のため、スル ホン酸基やその塩を含有する共役ジェン系重合体を用いることが記載されて ヽるが 、特殊な試料中に存在する偽陽性物質よりも、全ての生体試料中に存在しうる妨害 物質の回避が正確性向上に必要である。
特許文献 1：特開平 9— 304384号公報
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0005] 本発明の目的は、被検試料中の妨害物質による影響を抑制して免疫測定法の正 確性を向上させることができる、免疫測定法用測定値低下抑制剤並びにそれを用い た、妨害物質による測定値低下が抑制された免疫測定法及び免疫測定法用試薬を 提供することである。
課題を解決するための手段
[0006] 本願発明者らは、鋭意研究の結果、イオン性官能基を有する疎水性環式モノマー が重合されたポリマーであって、分子量が 1000ないし 10万であるイオン性界面活性 剤を免疫測定法を行なう反応溶液に共存させることにより、被検試料中の妨害物質 による影響を抑制して免疫測定法の正確性を向上させることができることを見出し、 本発明を完成した。
[0007] すなわち、本発明は、イオン性官能基を有する疎水性環式モノマーが重合された ポリマーであって、分子量が 1000ないし 10万であるイオン性界面活性剤力も成る、 妨害物質による測定値低下を抑制するための免疫測定法用測定値低下抑制剤を提 供する。また、本発明は、上記本発明の測定値低下抑制剤の存在下において行なう 免疫測定法を提供する。さら〖こ、本発明は、緩衝液と、感作粒子又は抗血清とを少な くとも含む免疫測定法用試薬において、上記本発明の測定値低下抑制剤を含むこと を特徴とする、免疫測定法用試薬を提供する。さらに、本発明は、上記したイオン性 界面活性剤の、免疫測定法用測定値低下抑制剤としての使用を提供する。さらに、 本発明は、上記したイオン性界面活性剤を、免疫測定法の反応液中に共存させるこ とを含む、免疫測定法における測定値の低下を抑制する方法を提供する。
発明の効果
[0008] 本発明の免疫測定法の測定値低下抑制剤の存在下において免疫測定法を行なう ことにより、被検試料中の妨害物質の影響が低減され、測定値低下抑制剤の非存在 下において行なう場合よりも免疫測定法の正確性が向上する。
発明を実施するための最良の形態
[0009] 免疫測定法のうち、免疫凝集法は、抗原抗体反応により生じる、反応液の濁度や 吸光度のような光学的性質の変化に基づいて、被検試料中の抗原又は抗体を検出 又は定量する方法であり、免疫比濁法及び免疫比ろう法 (ネフ ロメトリー）が包含さ れる。測定の感度を高めるため、通常、被検試料中の目的抗原又は目的抗体と抗原 抗体反応する抗体又は抗原が、ラテックス粒子のような粒子上に不動化されており（ 感作粒子)、抗原抗体反応により該感作粒子が凝集することに起因する光学的性質 の変化に基づいて被検物質の検出又は定量が行なわれる（ラテックス粒子を用いる 場合は特にラテックス凝集法とも呼ばれる)。もっとも、感作粒子を用いることなく抗血 清ちしばしば用いられる。
[0010] 本発明の免疫測定法の測定値低下抑制剤は、イオン性官能基を有する疎水性環 式モノマーが重合されたポリマーであって、分子量が 1000ないし 10万であるイオン 性界面活性剤から成る。
[0011] イオン性官能基としては、スルホン基若しくはその塩、カルボン酸若しくはその塩又 はァミン (水溶液中でイオンィ匕される第 4級ァミン等）が好ましぐ特にスルホン基又は その塩が好ましい。このように、イオン性界面活性剤は、陰イオン界面活性剤でも陽 イオン界面活性剤でもよい。
[0012] また、疎水性環としては、芳香環ゃシクロアルキル環が挙げられ、酸素原子、窒素 原子又はィォゥ原子等を含む複素環であってもよ!/、し、それらが縮合した縮合環で あってもよい。疎水性環としては芳香環が好ましぐ芳香環としては、ベンゼン環、ナ フタレン環、アントラセン環等が例示され、好ましくはベンゼン環又はナフタレン環、さ らに好ましくはベンゼン環である。
[0013] 測定値低下抑制剤として用いられる好ましいポリマーとして、ポリアネト ルスルホン 酸ナトリウム塩、ポリスチレンスルホン酸ナトリウム塩、ナフタレンスルホン酸ホルマリン 縮合物のナトリウム塩、芳香族スルホン酸ホルマリン縮合物のナトリウム塩 (具体的に は、ディスロール (商品名、 日本乳化剤社製)、デモール (商品名、花王社製)、ポリティ PS-1900 (ライオン）、ポリティ N-100K (商品名、ライオン社製)等）を挙げることが できる。
[0014] また、測定値低下抑制剤として用いられる好ま U、ポリマーとして、繰返し単位が、 下記一般式 [I]で表されるものを挙げることができる。 [0015] [化 1]
Figure imgf000005_0001
[ I ]
(ただし、 Arは疎水性環、 Xはイオン性官能基、 R1ないし R3は互いに独立に水素原子 又はアルキル基を示し、 nは 0ないし 10の整数を示し、 Arを構成する各炭素原子に結 合して 、る水素原子は、本発明の効果を阻害しな 、置換基で置換されて 、てもよ!/、)
[0017] 上記一般式 [I]にお!/ヽて、 X及び Arは、それぞれ上記したイオン性官能基及び疎水 性環である。 R1ないし R3がアルキル基の場合、低級 (本明細書及び請求の範囲にお いて、「低級」は炭素数 1一 4を意味する）アルキル基が好ましい。また、 nは 0ないし 3 が好ましい。また、 Arを構成する各炭素原子に結合している水素原子は、本発明の 効果を阻害しない置換基で置換されていてもよぐこのような置換基の例として、低級 アルキル基及び低級アルコキシル基を挙げることができる。
[0018] 一般式 [I]で表される繰返し単位のうち、下記一般式 [II]で表されるものが好ましい。
[0019] [化 2]
Figure imgf000005_0002
[ π ]
式 [II]中、 Μは、水溶液中で 1価の陽イオンとなる原子又は基、好ましくはナトリウム やカリウムのようなアルカリ金属、 R1ないし R3は、互いに独立に水素原子又は低級ァ ルコキシル基、 R4ないし R6は、互いに独立に水素原子又は低級アルキル基を示す。
[0021] 上記一般式 [I]で表される繰返し単位のうち、特に好ましいものとして、下記式 [III]で 表されるァネトールスルホン酸塩、下記式 [IV]で表されるスチレンスルホン酸塩及び 下記式 [V]で示されるナフタレン酸スルホン酸ホルマリン縮合物塩を挙げることができ る。
[0022] [化 3]
Figure imgf000006_0001
[0023] [化 4]
Figure imgf000006_0002
[IV]
[0024] [化 5]
Figure imgf000007_0001
[0025] ただし、式 [ΠΙ]、 [IV]及び [V]中、 Μは式 [I]と同義であり、好ましくはナトリウムや力リウ ムのようなアルカリ金属である。
[0026] 上記ポリマーの分子量は、 1000— 10万であり、好ましくは、 1000— 6万である。
[0027] 上記繰返し単位は、 1種のみでも 2種以上を組み合わせて採用することもできる。測 定値低下抑制剤として用いられるポリマーは、上記繰返し単位のみ力 成ることが好 ま 、が、本発明の効果に悪影響を与えな 、範囲で他の単位を含んで 、てもよ!/、。 通常、このような他の単位のポリマー中の含量は、 20モル0 /0以下、好ましくは 10モル %以下、さらに好ましくは 5モル％以下である。
[0028] 本発明の免疫測定法は、上記した本発明の測定値低下抑制剤の存在下において 免疫測定法を行なうものである。測定値低下抑制剤の使用量は、特に限定されない 力 通常、反応溶液中の最終濃度が 0.01%ないし 5% (重量 Ζ容量)であり、好ましく は 0.1— 1%程度である。もっとも、使用する高分子イオン性界面活性剤の種類、被検 試料と緩衝液および抗血清液または、感作ラテックス粒子の混合比などにより効果が 得られる最適な濃度を選択することが好まし 、。
[0029] 本発明の免疫測定法に付される被検試料は、特に限定されないが、妨害物質の影 響を抑制するという本発明の効果を大いに発揮できる生体試料が好ましぐ特に、血 液、血清、血漿、尿、便、唾液、組織液、髄液、ぬぐい液等の体液等又はその希釈物 が好ましぐさらには血液、血清及び血漿又はこれらの希釈物が好ましい。
[0030] 免疫測定法が免疫凝集法である場合に用いられる感作粒子に感作される抗体又 は抗原は特に限定されるものではなぐ従来と同様、例えば、 C-反応性蛋白（CRP)、 リウマトイド因子（RF)、フェリチン（FER)及びミオグロビン (Mb)並びにこれらに対する 抗体を例示することができる力 S、もちろんこれらに限定されるものではない。
[0031] 上記測定値低下抑制剤の存在下において免疫測定法を行なうことを除き、本発明 の免疫測定法は従来と同様に行なうことができる。すなわち、免疫測定法が免疫凝 集法である場合、反応液中の感作粒子の濃度は、特に限定されないが、通常、 0. 0 1-0. 5%程度であり、反応は、通常、 1°C一 56°C、好ましくは 37°Cで 1分間一 10分 間程度行なわれる。もっとも、反応条件はこれらに限定されるものではない。また、反 応媒体としては、通常、グリシン緩衝液等の各種緩衝液が用いられる。反応溶液の濁 度又は吸光度を反応の開始前と開始後一定時間後測定し、又は、反応の開始前及 び開始後経時的に測定し、濁度若しくは吸光度の変化の大きさ（エンドポイント法)又 は変化の速度 (レート法）に基づき、被検物質の検出又は定量を行なう。なお、免疫 凝集法は、手動により行なうこともできるし、自動分析装置を用いて行うこともできる。
[0032] 免疫測定法が免疫凝集法である場合、本発明の方法では、測定値低下抑制剤と、 感作粒子又は抗血清を同時に被検試料と混合しても良いが、被検試料を測定値低 下抑制剤と接触させる第 1工程と、次いで、第 1工程後の被検試料を感作粒子又は 抗血清と抗原抗体反応させる第 2工程とを含むことが、本発明の効果を最大限に得 る上で好ましい。この場合、第 1工程、第 2工程とも、特に限定されないが、反応時間 はそれぞれ、通常 1分間一 10分間、好ましくは 1分間一 5分間、反応温度は通常、 1 °C一 56°C、好ましくは 37°Cで行なわれる。また、 2段階で反応を行なう場合、測定値 低下抑制剤の濃度は、第 1工程の反応液中、好ましくは 0.01%ないし 5% (重量 Z容 量)であり、さらに好ましくは 0. 05— 1%程度である。
[0033] 本発明の免疫測定法は、免疫凝集法に限定されるものではなぐサンドイッチ
ELISA等のサンドイッチ法、ィムノクロマト法、競合法等も含まれる。これらの免疫測定 法の場合にも、本発明の測定値低下抑制剤を免疫反応の媒体中に含ませてそれぞ れの免疫測定法を行なえばよい。その際の測定値低下抑制剤の濃度は上記と同様 でよい。
[0034] 本発明は、また、緩衝液と、感作粒子と、上記測定値低下抑制剤を含む免疫測定 法用試薬をも提供する。上記のように、免疫凝集法を 2段階で反応を行なう場合には 、免疫測定法用試薬は、緩衝液を少なくとも含み、被検試料と先に混合される第 1試 薬と、緩衝液及び感作粒子を少なくとも含み、被検試料と第 1試薬の混合物に添加さ れる第 2試薬とから成る 2液系試薬であることが操作性及び試薬の安定性の観点力 好ましぐこの場合、前記測定値低下抑制剤は、前記第 1試薬中に含まれる。この場 合、第 1試薬中の測定値低下抑制剤の濃度は、特に限定されないが、通常、 0. 01 一 5%(w/v)、好ましくは、 0. 01— l%(w/v)程度である。なお、これらの試薬の他に、 希釈液を用いて被検試料を希釈してもよ 、。
[0035] 以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実 施例に限定されるものではない。
実施例 1
[0036] 試薬
以下の組成力もなるミオグロビン測定用ラテックス比濁用試薬を調製した。
第 1試薬
170mM グリシン緩衝液 pH7.0
50mM EDTA
lOOmM 塩化ナトリウム
0.3% ポリアネト ルスルホン酸ナトリウム塩（分子量 4万）
第 2試薬
Mb-ラテックス「生研」 /ラテックス浮遊液 (デン力生研社製）
実施例 2
[0037] 試薬
以下の組成力もなるミオグロビン測定用ラテックス比濁用試薬を調製した。 第 1試薬
170mM グリシン緩衝液 pH7.0
50mM EDTA
lOOmM 塩化ナトリウム
0.3% ポリスチレン p-スルホン酸ナトリウム塩（分子量 1万 4千）
第 2試薬
Mb-ラテックス「生研」 /ラテックス浮遊液 (デン力生研社製） [0038] (比較例 1)
試薬
比較用試薬として第 1試薬中にポリアネト ルスルホン酸ナトリウム塩及びポリスチレ ン P-スルホン酸ナトリウム塩を含まな 、、以下の組成力もなるミオグロビン測定用ラテ ックス比濁用試薬を調製した。
第 1試薬
170mM グリシン緩衝液 pH7.0
50mM EDTA
lOOmM 塩化ナトリウム
第 2試薬
Mb-ラテックス「生研」 /ラテックス浮遊液 (デン力生研社製）
[0039] なお、実施例 実施例 2及び比較例 1の第 1試薬、第 2試薬で用いる緩衝液はリン 酸緩衝液、グッド緩衝液等を使用することができ、 pHについても緩衝液の好適な pH を使用できる。
[0040] 測定例
被検試料 無作為に抽出した臨床検体 1例 (血清）
測定方法 試料調製 被検試料を、生理食塩液を希釈液として希釈濃度 1/10 (10 倍希釈)一 10/10 (希釈せず)の段階に希釈する。
測定方法 東芝 TBA-30R型自動分析装置による測定
[0041] 自動分析装置による測定
実施例 実施例 2及び比較例 1の各試薬を用いて測定を行った。前述の調製した 試料 20 Lに第 1試薬 200 Lを添加し、 37°Cで攪拌混合し、 5分放置後、第 2試薬 100 /z Lを添加し、更に 37°Cで攪拌混合した後、約 2分間の凝集反応を 570nmの吸光 度変化量として測定した。またあらかじめ既知濃度の試料を同一条件で測定し、濃 度と吸光度変化量の関係を表す検量線を作成しておいた。第一試薬中の測定値低 下抑制剤の有無により、求めたそれぞれの測定値 (ng/mL)を比較した。
[0042] 結果を下記表 1に示す。表 1中、「理論値」は、各例における共存する妨害物質が 引き起こす測定値低下作用を無視し得る希釈濃度 1/10 (10倍希釈)の測定値を基 準とし、これに希釈濃度の分子を乗じた値 (希釈濃度 10/10なら 10倍、 2/10なら 2倍） を意味する。また、差 (％)は、（理論値-測定値) Z理論値 X 100 (%)を意味し、差 (%)が小さいほど、理論値との乖離が小さいことを示す。
表 1
Figure imgf000011_0001
(測定値、理論値単位： ng/ml)
表 1に示されるように、測定値低下抑制剤を含まな ヽ比較例 1では、無希釈の試料 ( 希釈濃度 10/10)で、理論値と測定値の差が 33%にも達するのに対し、本発明の実 施例 1及び 2では、無希釈の場合でも差は 5%又は 4%であった。これらの結果は、 本発明の測定値低下抑制剤の添カ卩により理論値と測定値の差力 S小さくなることを示 しており、妨害物質の影響が低減されることによって測定値の正確性が大幅に向上 していることがわ力る。

Claims

請求の範囲
[1] イオン性官能基を有する疎水性環式モノマーが重合されたポリマーであって、分子 量が 1000ないし 10万であるイオン性界面活性剤力も成る、妨害物質による測定値 低下を抑制するための免疫測定法用測定値低下抑制剤。
[2] 前記繰返し単位が、下記一般式 [I]で表される請求項 1記載の測定値低下抑制剤。
[化 1]
Figure imgf000012_0001
(ただし、 Arは疎水性環、 Xはイオン性官能基、 R1ないし R3は互いに独立に水素原子 又はアルキル基を示し、 nは 0ないし 10の整数を示し、 Arを構成する各炭素原子に結 合して 、る水素原子は、本発明の効果を阻害しな 、置換基で置換されて 、てもよ!/、)
[3] 前記疎水性環式モノマー力 芳香族モノマーである請求項 1又は 2記載の測定値 低下抑制剤。
[4] 前記芳香族モノマーがベンゼン環を含有する請求項 3記載の測定値低下抑制剤。
[5] 前記イオン性官能基がスルホン基若しくはその塩、カルボン酸若しくはその塩又は ァミンである請求項 1な 、し 4の 、ずれ力 1項に記載の測定値低下抑制剤。
[6] 前記イオン性官能基がスルホン基又はその塩である請求項 5記載の測定値低下抑 制剤。
[7] 前記繰返し単位が、下記一般式 [II]で表される請求項 2記載の測定値低下抑制剤 [化 2]
Figure imgf000013_0001
(ただし、 Mは水溶液中で 1価の陽イオンとなる原子又は基、 R1ないし R3は、上記一般 式 [I]における R1ないし R3と同義、 R4ないし R6は互いに独立に、水素原子、低級アルコ キシル基又は低級アルキル基を示す）
[8] 前記繰返し単位が、ァネトールスルホン酸塩又はスチレンスルホン酸塩である請求 項 5記載の測定値低下抑制剤。
[9] 前記免疫測定法が免疫凝集法である請求項 1な!、し 8の 、ずれか 1項に記載の測 定値低下抑制剤。
[10] 請求項 1な!、し 9の 、ずれか 1項に記載の測定値低下抑制剤の存在下にお 、て行 なう免疫測定法。
[11] 被検試料を前記測定値低下抑制剤と接触させる第 1工程と、次いで、第 1工程後の 被検試料を感作粒子又は抗血清と抗原抗体反応させる第 2工程とを含む請求項 10 記載の免疫測定法。
[12] 被検試料が、生体試料である請求項 10又は 11記載の免疫測定法。
[13] 被検試料が、血液、血清又は血漿である請求項 12記載の免疫測定法。
[14] 反応溶液中の前記測定値低下抑制剤の濃度が 0.01%ないし 5% (重量 Z容量)であ る請求項 10な 、し 13の 、ずれか 1項に記載の免疫測定法。
[15] 免疫凝集法である請求項 10ないし 14のいずれか 1項に記載の免疫測定法。
[16] 緩衝液と、感作粒子又は抗血清を少なくとも含む免疫測定法用試薬において、請 求項 1ないし 9のいずれ力 1項に記載の測定値低下抑制剤を含むことを特徴とする、 免疫測定法用試薬。
[17] 前記免疫測定法用試薬は、緩衝液を少なくとも含み、被検試料と先に混合される 第 1試薬と、緩衝液及び感作粒子を少なくとも含み、被検試料と第 1試薬の混合物に 添加される第 2試薬とから成る 2液系試薬であり、前記測定値低下抑制剤は、前記第
1試薬中に含まれる請求項 14記載の試薬。
[18] 前記免疫測定法が免疫凝集法である請求項 16又は 17記載の試薬。
[19] 請求項 1な!、し 9の 、ずれか 1項に記載のイオン性界面活性剤の、免疫測定法用 測定値低下抑制剤としての使用。
[20] 請求項 1ないし 9のいずれか 1項に記載のイオン性界面活性剤を、免疫測定法の反 応液中に共存させることを含む、免疫測定法における測定値の低下を抑制する方法
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