WO2005041995A1 - α-グルコシダーゼ活性阻害剤 - Google Patents

α-グルコシダーゼ活性阻害剤 Download PDF

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lotus leaf
lotus
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Hiroshi Tsuboi
Shuji Ikegami
Zai-Si Ji
Hiroyuki Itou
Munehiro Oda
Kazuo Shin
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Meiji Dairies Corporation
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    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Definitions

  • the present invention relates to the use of an ⁇ -dalcosidase activity inhibitor comprising a plant preparation.
  • Diabetes patients called lifestyle-related diseases are on an increasing trend.
  • the estimated number of people who are strongly suspected of diabetes is 6.9 million, including about 13.7 million including those who cannot deny the possibility of diabetes (Ministry of Health, Labor and Welfare's 1997 Diabetes Survey).
  • Options are widely sought.
  • Diabetes is a group of diseases characterized by chronic hyperglycemia due to reduced insulin supply or insufficient action and associated with various metabolic abnormalities.
  • subclinical illness may also indicate a wide range of conditions leading to ketoacidosis and coma.
  • Prolonged metabolic abnormalities can lead to complications specific to the retina, kidneys, and nerves, and may also prompt atherosclerosis.
  • Treatment of diabetes is controlled by controlling blood sugar levels with diet, exercise, and pharmacotherapy.
  • Oral agents for diabetes include sulfo-lurea (SU) agents, biguanide (BG) agents, insulin resistance agents, ⁇ -darcosidase inhibitors and the like.
  • the darcosidase inhibitor is a drug that competitively inhibits carbohydrate hydrolases such as maltase-sucrase existing in the small intestinal mucosal microvilli and delays the absorption of carbohydrates in the intestinal tract.
  • carbohydrate hydrolases such as maltase-sucrase existing in the small intestinal mucosal microvilli and delays the absorption of carbohydrates in the intestinal tract.
  • I.a.-darcosidase inhibitors have been used clinically.
  • a-Dalcosidase inhibitors have the effect of suppressing a significant postprandial rise in blood glucose, reducing the circadian glycemic variability, and are also considered applicable to patients with insulin-dependent diabetes mellitus (JP Medical Journal 1999, Vol. 66, No. 3).
  • Carbobose is found in the culture of Actinoplanes strain SE 50; voglibose is
  • Patent Document 1 JP-A-2003-81858
  • Patent Document 2 JP-A-2000-229875
  • Patent Document 3 JP-A-8-198769
  • Non-Patent Document 1 Nichi-Ii University 1999 Vol. 66 No. 3 p.195-198
  • the present invention has been made in view of such a situation, and an object of the present invention is to use a novel plant-derived a-dalcosidase inhibitor and a-darcosidase inhibitor V, and to treat diabetes. Or to provide a preventive drug.
  • the present inventors have conducted intensive studies to find substances having an ⁇ -darcosidase inhibitory activity from plants that solve the above-mentioned problems.
  • the present inventors prepared a lotus extract, reacted it with ⁇ -darcosidase and sucrose, a substrate thereof, and measured the amount of glucose produced.
  • the effect of the kasul with the Lotus extract on the enzymatic reaction was calculated using glucose measurements, and it was revealed that the extract from the Lotus and Lotus extracts had ⁇ -glucosidase inhibitory activity.
  • the present inventors administered the lotus extract and sucrose to mice and measured the blood glucose level, it was found that the blood glucose level was suppressed by the lotus extract.
  • the present inventors performed a glucose tolerance test on humans to which the lotus extract was administered, and confirmed that the increase in blood glucose level was suppressed by the lotus extract. That is, the present inventors have clarified that the extract of Spodoptera litura has an ⁇ -dalcosidase inhibitory action, and also found that the extract of Lotus Scotch can be used for controlling blood sugar levels.
  • a therapeutic or prophylactic treatment for diabetes comprising a darcosidase activity inhibitor according to (1) above.
  • Pharmaceutical composition for prevention comprising a darcosidase activity inhibitor according to (1) above.
  • a food composition for treating or preventing diabetes comprising the ex-dalcosidase activity inhibitor according to (1) above
  • FIG. 2 is a graph showing the results of a glucose tolerance test of a lotus leaf extract-administered group (human) and a control group (human).
  • the blood glucose level after each elapsed time with respect to the blood glucose level before glucose load was defined as a relative glucose value ( 0/0 ).
  • the present invention provides an a-darcosidase activity inhibitor that also increases the preparation ability of a Lotus plant. As shown in the examples, it was revealed that the lotus preparation had ⁇ -dalcosidase inhibitory activity. INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention can be used for any application as long as it is expected to inhibit the action of ⁇ -darcosidase (maltase, sucrase, etc.) that decomposes disaccharides into monosaccharides.
  • ⁇ -darcosidase maltase, sucrase, etc.
  • ⁇ -dalcosidase activity inhibitor administered to animals inhibits the degradation of disaccharides such as maltase in the small intestine into monosaccharides, thereby delaying the absorption of carbohydrates in the intestinal tract and consequently increasing blood glucose levels. It can be expected to bring about a suppression effect.
  • the effect of the ⁇ -dalcosidase activity inhibitor of the present invention on suppressing an increase in blood glucose level has been demonstrated in animal experiments as described in Examples.
  • Examples of the plants of the family Rosaceae include lotus (Nelumbo nucifera) and yellow birch. It is considered that the ⁇ -dalcosidase activity inhibitory activity is present not only in lotus but also in other lotus plants and in preparations of closely related genus Sirens, genus Ovas, genus Coxone, and juniper genus. Therefore, an ⁇ -dalcosidase activity inhibitory substance can also be obtained from these plants.
  • a plant preparation refers to a plant obtained by subjecting the whole or part of a plant to some processing.
  • plant extracts, plant juices, plant extracts, dried plants, and shredded plants are included in the plant preparations of the present invention.
  • Production of preparations The site of the plant to be used is not limited as long as the resulting preparation has an inhibitory action on ⁇ -darcosidase activity. In the case of lotus, leaves are an example of a site that can be suitably used.
  • the method for producing the plant preparation is not particularly limited, and any method may be used as long as it can exert an ⁇ -dalcosidase activity inhibitory action. Extraction with a solvent or a method of pulverizing a plant may be used.
  • Solvents used for extraction include water (which may contain acids, bases, salts, and surfactants), alcohols such as methanol, ethanol, isopropanol, and butanol, ethyl acetate, acetone, tetrahydrofuran, and the like.
  • Organic solvents generally used in the extraction operation such as chloroform, dichloromethane, and acetonitrile, can be selected, and these can be used alone or as a mixture of a plurality of solvents. It may be a supercritical fluid. Water is one of the preferred examples of the solvent. If a specific example is shown, it can be manufactured by the method of the embodiment.
  • Confirmation as an ⁇ -dalcosidase activity inhibitor is made by adding a test substance to ⁇ -dalcosidase and its disaccharide, and conducting an enzyme reaction test to determine the inhibition rate of the enzyme reaction. be able to.
  • the inhibition rate basically, the amount of the product generated by the substrate reaction due to the enzymatic reaction is measured in the presence and absence of the test substance, and the difference between the two results is the measured value in the absence of the test substance.
  • the amount of the enzymatic reaction product generated from the substrate can be measured by various methods which are common in the art. For example, in the case of glucose, it is possible to measure by appropriately selecting the method power such as absorbance measurement, electrode method, glucose oxidase method, HK / G-6-PD method, liquid chromatography and the like.
  • the present invention provides a medicament for treating or preventing diabetes, comprising the above-mentioned inhibitor of ⁇ -dalcosidase activity.
  • the inhibitory effect of the above-mentioned ⁇ -dalcosidase activity inhibitor on blood glucose elevation has been demonstrated in humans and mice as described above, and the above-mentioned ⁇ -dalcosidase activity inhibitor is used as a medicament for treating or preventing diabetes in mammals including humans and rodents. It is clear that it can be used as The treatment or prevention of diabetes in the present invention includes treatment of patients with diabetes, prevention of the onset of so-called borderline patients with the possibility of developing diabetes, and suppression of postprandial blood glucose elevation regardless of their ability to be diabetic patients.
  • the pharmaceutical composition for treating or preventing diabetes of the present invention is prepared as a general pharmaceutical preparation.
  • a pharmaceutical composition obtained by mixing the above-mentioned ⁇ -darcosidase activity inhibitor with a pharmaceutically acceptable carrier (excipient, binder, disintegrant, flavoring agent, flavoring agent, emulsifier, diluent, solubilizing agent, etc.)
  • a pharmaceutically acceptable carrier excipient, binder, disintegrant, flavoring agent, flavoring agent, emulsifier, diluent, solubilizing agent, etc.
  • Excipients include, for example, lactose, corn starch, sucrose, glucose, sorbitol, plasma cellulose and the like.
  • binder examples include polybulbia gum, tragacanth, gelatin, shrub, hydroxypropyl, cellulose, hydroxypropyl starch, and polybutylpyrrolidone.
  • Whether or not a drug is effective for diabetes is determined by, for example, administering a drug to a test animal at the same time as feeding, measuring blood glucose levels over time after feeding, and suppressing the increase in the blood glucose level as in the Examples. It can be confirmed by seeing the effect. Alternatively, it can be confirmed by administering a drug to an animal that has developed diabetes and measuring the blood glucose level of the test animal. The blood glucose level before and after drug administration is compared between the test substance-administered group and the control group, and if the blood glucose level of the drug-administered group is lower than that of the control group, the drug is effective for diabetes.
  • the present invention also provides a food composition for treating or preventing diabetes, comprising the above-mentioned preparation of a plant belonging to the genus Lotus family, Capella a darcosidase activity inhibitor.
  • Lotus family plants have been ingested as foods and can be processed into highly safe food compositions. Lotus preparations have the effect of slowing sugar absorption and suppressing blood sugar levels.
  • Not only useful for the treatment of diabetic patients, but also those who can be called diabetic reserves who are concerned about the borderline area and blood sugar as well as those who are concerned about the blood sugar in the foods according to the present invention can be used in a method other than pharmaceuticals. It is particularly useful in that it can effectively control the value and prevent diabetes.
  • the food composition of the present invention includes, for example, a food product for diabetes, a food product for special use, a food product for specified health use, a blood glucose elevation suppressing effect, a postprandial blood glucose elevation suppressing effect, and a blood glucose lowering effect.
  • Foods, nutritional functional foods, health foods, dietary supplements, enteral nutritional foods, etc. can be mentioned, but if they are used for the purpose of preventing or treating diabetes or suppressing the increase in blood glucose level, these foods can be used. Not limited.
  • Daily dose or intake The amount is not particularly limited as long as it can be safely and effectively taken. For example, in the case of a human, an intake of 0.01 gZday-100 gZday, preferably O.lgZday-lOg Zday can be shown.
  • the method for producing the composition is a conventional technique well known to those skilled in the art. That is, a food for diabetes, a food for special use, a food for specific health use, and a functional food capable of claiming a blood sugar lowering action by mixing the ⁇ -darcosidase activity inhibitor of the present invention with a food-hygienically acceptable compound. It can be processed into nutritional functional foods, health foods, dietary supplements, enteral nutrition foods and the like.
  • the ⁇ -darcosidase activity inhibitor of the present invention may be added to existing foods. For example, a mixture of stabilizers, preservatives, coloring agents, fragrances, vitamins, and the like can be made into a form suitable for compositions such as granules, powders, capsules, liquids, creams, and beverages.
  • the frozen rat small intestinal tissue pieces are further solidified with liquid nitrogen and crushed.
  • 50 mM mannitol Z2mM Tris-HCl buffer was added at a weight ratio of 5 times, and homogenized under ice-cooling for 2 minutes. The mixture was further stirred at 4 ° C for 20 minutes. This is centrifuged at 3000 rpm for 30 minutes to collect the supernatant, and the supernatant is further centrifuged at 4 ° C and 15000 rpm for 30 minutes to collect the precipitate. This precipitate was washed twice with 10 mM maleic acid sodium hydroxide buffer (PH5.8), and finally washed with 10 mM maleic acid. The suspension in 10 mL of sodium hydroxide buffer was used as an ⁇ -dalcosidase enzyme solution.
  • ⁇ -Darcosidase enzyme solution 10 L test sample (lotus leaf extract of various concentrations) 10 substrate solution (20 mg ZmL sucrose, 2 ( ⁇ ⁇ 1 phosphate buffer) 20 ⁇ 20 mM phosphate buffer saline 10
  • substrate solution 20 mg ZmL sucrose, 2 ( ⁇ ⁇ 1 phosphate buffer) 20 ⁇ 20 mM phosphate buffer saline 10
  • the mixture was mixed and incubated for 40 minutes at 37 ° C. After the reaction was completed, the amount of produced glucose was measured using Glucose CII Test Co. (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). Since there is a possibility of affecting the absorbance at this time, a blank (to which the test substance was added after the enzymatic reaction) was taken, the glucose value was corrected with the value, and the inhibition rate was calculated by the following equation.
  • Inhibition rate (%) (concentration of glucose added to test substance after enzyme reaction-concentration of glucose added to test substance) Z concentration of glucose added to test substance after enzyme reaction X 100
  • Table 1 shows the results. At a final concentration of 4 mg ZmL of the dried lotus leaf extract, ⁇ -darcosidase activity using sucrose as a substrate was inhibited by about 50%. From these results, it has been proved that the active ingredient of the present invention inhibits the activity of the present invention, which is essential for the digestion and absorption of sugar, thereby suppressing an increase in blood glucose after ingestion of sugar.
  • mice Male ICR mice, 5 weeks old, were received and pre-bred for 1 week. After preliminary breeding, the mice were divided into 4 groups of 6 mice per group based on body weight. For two of them, lotus leaf extract was Oral administration was performed simultaneously with the sugar. The concentration of the administered lotus leaf extract was lgZkg or 2 gZkg, and the concentration of sucrose was 2 gZkg. As a control, 3 mg Zkg of acarbose was orally administered simultaneously with sucrose. The other group received only sucrose. The blood glucose level was measured for each group of mice.
  • the blood glucose level was measured immediately before the oral administration of the test substance and at 30, 60, 90, 120, 180, and 240 minutes after the administration.
  • Figure 1 shows the measurement results. Compared with the group receiving only sucrose, it was clarified that the increase in blood sugar level was suppressed in the group receiving the leaf extract of Ganoderma oleracea. In particular, the effect of suppressing blood sugar rise 30 minutes after administration of sucrose is great.
  • Dried lotus leaf extract was administered as a test substance to high-fat diet-loaded mice, and the effect was examined.
  • quarantine ⁇ 40 animals that gained weight during the habituation period and showed no abnormalities in the general condition were used for the study, and were grouped according to the stratified random sampling method according to body weight.
  • the test group consisted of group A: basic feed intake group, group B: high fat diet intake group, group C: high fat diet intake group containing 2% lotus leaf extract dry matter, Group D: lotus leaf extract dry matter 5 % High-fat diet intake group, 4 groups, 10 animals per group.
  • mice in the same group were divided into 5 cages, each group being housed in 2 cages.
  • Powder feed CE-2 (CLEA Japan) was used as the basic feed.
  • Other feeds high fat diet, lotus leaf extract
  • Table 2 shows the high fat diet containing dry matter. The numerical values in the table indicate the amount of each mixture when the total amount of the feed mixture is 1 kg.
  • Lotus leaf extract dry matter 0g 20g 50g In all groups, the feeding method was that the feed was placed in a powder feeder and the animals were allowed free access. For water supply, tap water was placed in a water bottle and fed freely through a nozzle. Under the above conditions, the administration of the test substance to the mice was continued for 10 weeks, and the mice were observed for general condition, measured for body weight, measured for food consumption, and examined anatomically, and the following results were obtained. In the data shown below, body weight, food consumption and organ weight were expressed as mean standard deviation (mean SD).
  • the significant difference test between the basic feed intake group and the high fat diet intake group and the significant difference test between the high fat diet intake group and the test substance intake group were performed using Student's t-test or multiple comparison test (Dunnett's test). .
  • Body weight was measured using an electronic precision balance immediately before and once a week after administration of the test substance. The results are shown in Table 3 for each group.
  • group A basic feed intake group
  • group B high-fat diet intake group
  • the group gained more weight than the group A.
  • a significant difference was observed in the body weight values between the two groups from 2 weeks after the start of the study to the end of the study, and there was an average difference of 6.9 g between the two groups at the end of the study (Group A: 39.3 ⁇ 3.0 g, B Group: 46.2 ⁇ 5.6 g: p ⁇ 0.01).
  • Food consumption was measured twice a week after administration of the test substance, ie, every 3 or 4 days. Each cage was measured as a weight including the feeder using an electronic precision balance, and calculated by subtracting the amount of remaining food from the serving amount.
  • Average daily consumption per group A 5.2-7.9 g / day
  • average daily consumption per group B 3.0-6.8 g / day
  • group C daily The average food consumption was 2.7-6.1 g / day
  • the average daily food consumption per group D was 3.1-5.6 g / day.
  • Group A clearly showed higher food consumption than the other groups.
  • the B-D group there was a tendency that the amount of food consumed in the first half of the test (per 2 weeks) was large and the amount of food consumed in the second half (after 6 weeks) was small, There was no noticeable change.
  • the 2% lotus leaf extract dry matter intake group showed a tendency to suppress weight gain, but no significant effect was observed.
  • the 5% lotus leaf extract dry matter intake group significantly inhibited weight gain. Admitted.
  • weight loss is the effect of food consumption and the effect of dried lotus leaf extract. Therefore, the amount of food required to increase body weight lg from the weight gain at the end of the test and the total food consumption during the test was calculated for each group.
  • Leaf extract dry matter intake group (high fat diet + 2% lotus leaf extract dry matter) 20.2g
  • 5% lotus leaf extract dry matter intake group high fat diet + 5% lotus leaf extract dry matter
  • the fat weight at the time of dissection tended to decrease in the 2% lotus leaf extract dry matter intake group, and a significant fat weight decrease was confirmed in the 5% lotus leaf extract dry matter intake group, confirming the above conclusions. Can be.
  • the purpose of this example was to examine the effects of dried lotus leaf extract on human glucose and lipid metabolism.
  • human subjects were limited to those meeting certain conditions.
  • the conditions to be satisfied as a subject in this example were as follows.
  • border type that is, a fasting blood glucose level of 110-126 mg / dl or a 2-hour blood glucose level of 140-200 mg / dl in a 75 g glucose tolerance test (OGTT).
  • OGTT 75 g glucose tolerance test
  • a fasting blood glucose level of 126 mg / dl or more or 75 g OGTT 2 hour value of 200 mg / dl or more is a diabetic type.
  • the subject power in the examples was excluded.
  • BMI Body Mass Index
  • questionnaires were conducted to select subjects.
  • questions were asked about A. daily calorie intake, B. dietary preferences, C. medical history, family history, work and living environment, exercise habits, smoking and drinking.
  • a dry lotus leaf extract group (T group, R group) and a placebo group (S group), with no difference in age, gender, and fasting blood glucose level.
  • a control group a group consuming a base tea beverage (200 ml Z bottles) containing no lotus leaf extract was designated as group S, and as a test substance intake group, a tea beverage containing 0.5 g Z200 ml of dry powder of lotus leaf extract was designated as a test substance intake group.
  • the group that ingested was group T
  • the group that ingested a tea drink containing 1.0 g Z200 ml of dry powder of lotus leaf extract was group R.
  • Anthropometric measurements were performed on each subject before, 6 weeks after, and 12 weeks after ingestion.
  • the measurement items were height, weight, waist circumference, BMI, hip circumference, body fat percentage, and visceral fat level.
  • the measurement of the body fat percentage and the visceral fat level was performed using an OMRON body composition analyzer HBF-352.
  • a visceral fat level of 10 corresponds to a visceral fat area of 100 cm 2 .
  • a glucose tolerance test (75 g glucose / body) was performed twice before and 12 weeks after ingestion. Subjects were asked to avoid eating and drinking after 21:00 on the night before blood collection. On the test day, blood was first collected on an empty stomach and used as blood before glucose loading. Subsequently, 75 g of glucose was loaded, and blood samples 30, 60 and 90 minutes after loading were collected with time. The trial was completed by 11am. The blood glucose level in plasma was measured using Hitachi automatic analyzer 7075.
  • FIG. 2 the blood glucose level after each elapsed time with respect to the blood glucose level before the glucose load was represented as a relative glucose value (%).
  • the AUC (Area Under Curve) for 0-120 minutes was calculated based on the relative value of glucose at each elapsed time.
  • Ingestion of dried leaves of lotus leaves for 12 weeks showed suppression of blood glucose elevation 30 minutes and 60 minutes after glucose load.
  • the body fat reducing effect of the dried lotus leaf extract was observed in humans as in the animal test.
  • the reduction in body fat by ingesting 2 g / day of lotus leaf dry extract for 6 weeks as a daily intake is considered to be reflected in the weight loss.
  • a similar effect was observed after ingestion for 12 weeks. Based on these effects and the results of the glucose tolerance test, it is considered that there is a reduction effect S on insulin resistance as well as a decrease in body fat mass.
  • a darcosidase activity inhibitor comprising a preparation of a plant of the family Solanaceae makes it possible to suppress an increase in blood glucose. For diabetes with an increasing number of patients, a new treatment or prophylaxis option can be offered.

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Abstract

［解決手段］　植物の中からハスに注目し、ハス抽出物を作製した。α−グルコシダーゼおよびその基質であるスクロースと反応させ、ハス抽出物添加による酵素反応への影響を算出したところ、ハス抽出物にα−グルコシダーゼ阻害活性があることが明らかになった。さらに、ハス抽出物およびショ糖をマウスに投与し血糖値を測定したところ、ハス抽出物により血糖値が抑制されていることが明らかになった。すなわち、ハスの抽出物がα−グルコシダーゼ阻害作用を有することを明らかにするとともに、該ハスの抽出物が血糖値のコントロールに使用できることを見出した。

Description

明 細 書
a一ダルコシダーゼ活性阻害剤
技術分野
[0001] 本発明は、植物調製物からなる α ダルコシダーゼ活性阻害剤の利用に関する。
背景技術
[0002] 生活習慣病と呼ばれる糖尿病患者は増加傾向にある。わが国の「糖尿病が強く疑 われる人」は推計 690万人、「糖尿病の可能性を否定できない人」を含めると約 1370 万人にものぼり（厚生労働省平成 9年糖尿病実態調査）、糖尿病改善の選択肢が広 く求められている。糖尿病は、インスリン供給低下または作用不足による慢性高血糖 を特徴とし、種々の代謝異常を伴う疾病群である。代謝異常の程度によって，無症状 力もケトアシドーシスや昏睡に至る幅広い病態を示す。代謝異常が長期間持続する と、網膜、腎、神経に特有の合併症を来たしやすぐまた、動脈硬化も促進される。糖 尿病の治療は、食事療法、運動療法、薬物療法によって血糖値をコントロールするこ とにより行われる。
[0003] 糖尿病の経口剤には、スルホ -ルゥレア（SU)剤、ビグアナイド (BG)剤、インスリン 抵抗剤、 α -ダルコシダーゼ阻害剤などがある。このうちひ ダルコシダーゼ阻害剤 は、小腸粘膜微絨毛に存在するマルターゼゃスクラーゼ等の糖質水解酵素を競合 的に阻害し、腸管内における糖質の吸収を遅延させる薬剤である。既にァカルボ一 スゃボダリボースと!/、つた a—ダルコシダーゼ阻害剤が、臨床で使用されて 、る。 a - ダルコシダーゼ阻害剤には、食後の著しい血糖上昇を抑制するとともに、血糖日内 変動幅を小さくする効果があり、さらには、インスリン依存型糖尿病患者にも適応可能 であると考えられている（日医大誌 1999第 66卷第 3号)。ァカルボースは、放線菌 Actinoplanes strain SE 50の培養液から見出され、ボグリボースは、放線菌
Streptomyces nygroscopicus sub sp.limoneusの; ¾· 揿； 0ら発見され 7こ。
[0004] 一方これまでに、植物中に存在する α ダルコシダーゼ阻害作用を有する物質の 報告力 sある（特開 2003— 81858、特開 2000— 229875)。
特許文献 1：特開 2003 - 81858 特許文献 2：特開 2000—229875
特許文献 3：特開平 8-198769
非特許文献 1：日医大誌 1999第 66卷第 3号 p.195-198
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0005] 本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、その目的は植物由来の新 規な a -ダルコシダーゼ阻害作用物質および a -ダルコシダーゼ阻害作用物質を用 V、た糖尿病の治療または予防薬を提供することにある。
課題を解決するための手段
[0006] 本発明者らは、上記課題を解決すベぐ植物から α ダルコシダーゼ阻害作用を有 する物質を見出すベぐ鋭意研究を行った。
[0007] そこで、本発明者らはハス科の多年草であるノ、スに注目した。ハスは、その根が食 用として利用される以外にも、種子や葉などは漢方薬の処方や健康食品などに広く 用 ヽられて 、る。ハスの葉には肥満改善効果があることは公知であるが（特開平 8-198769)、血糖値上昇抑制効果につ!、ては知られて!/、な！/、。
[0008] 本発明者らは、ハス抽出物を作製し、 α ダルコシダーゼおよびその基質であるス クロースと反応させ、生成されるグルコース量を測定した。ハス抽出物添カ卩による酵 素反応への影響を、グルコース測定値を用いて算出したところ、ノ、ス抽出物に α—グ ルコシダーゼ阻害活性があることが明らかになった。本発明者らがハス抽出物および ショ糖をマウスに投与し血糖値を測定したところ、ハス抽出物により血糖値が抑制さ れていることが明らかになった。さらに本発明者らは、ハス抽出物を投与したヒトに対 しグルコース負荷試験を実施し、ハスの抽出物により血糖値上昇が抑制されることを 確認した。すなわち、本発明者らはノ、スの抽出物が α ダルコシダーゼ阻害作用を 有することを明らかにするとともに、該ハスの抽出物が血糖値のコントロールに使用で きることを見出した。
[0009] 本発明は、具体的には、
( 1)ハス科植物の調製物力 なる a ダルコシダーゼ活性阻害剤
(2)上記（1)に記載の a ダルコシダーゼ活性阻害剤を含む糖尿病治療用または予 防用医薬組成物
(3)上記（1)に記載の ex ダルコシダーゼ活性阻害剤を含む糖尿病治療用または予 防用食品組成物
を提供するものである。
図面の簡単な説明
[0010] [図 1]ショ糖負荷マウスにおけるハスの葉抽出物の血糖抑制作用を示す図である。平 均値士 S.D. (n=4)
[図 2]ハスの葉抽出物投与群 (ヒト）とコントロール群 (ヒト）のグルコース負荷試験の結 果を示す図である。グルコース負荷前の血糖値に対する各経過時間後の血糖値を グルコース相対値（0/0)とした。平均値 ± S.D. S群 (プラセボ）： n=30, T群 (ノヽスの葉 抽出乾燥物 lg/day):n=34, R群 (ハスの葉抽出乾燥物 2g/day):n=31
発明を実施するための最良の形態
[0011] 本発明は、ハス科植物の調製物力もなる a -ダルコシダーゼ活性阻害剤を提供す る。実施例のとおり、ハス調製物に α ダルコシダーゼ阻害活性があることが明らかに なった。本発明は、二糖類を単糖類に分解する α ダルコシダーゼ (マルターゼ、ス クラーゼ等)の作用阻害を期待する用途であれば、いかなる用途にも使用し得る。特 に、 α ダルコシダーゼ活性阻害剤の動物への投与は、小腸内マルターゼ等による 二糖類カゝら単糖類への分解を阻害し、腸管内における糖質の吸収を遅延させ、結果 として血糖値上昇抑制効果をもたらすことが期待できる。本発明 α ダルコシダーゼ 活性阻害剤による血糖値上昇抑制効果は、実施例のとおり動物実験において実証 されている。
[0012] ノ、ス科植物には、ハス（Nelumbo nucifera)、キバナバスなどがある。 α ダルコシダ ーゼ活性阻害作用は、ハスのみならず、他のハス科植物や、近縁のスィレン属、ォ- バス属、コゥホネ属、ジユンサイ属の調製物にも存在すると考えられる。したがって、 α—ダルコシダーゼ活性阻害作用物質は、これら植物カゝら得ることもできる。本発明 において、植物の調製物とは、植物の全体または部分について何らかの加工を施し たものをいう。例えば、植物抽出物、植物の搾汁、植物エキス、乾燥させた植物、植 物を細断したものは、本発明における植物の調製物に含まれる。また調製物の製造 に用いる植物の部位は、その部位力 得られた調製物に α—ダルコシダーゼ活性阻 害作用がある限り、限定されない。ハスの場合、葉は好適に用いることのできる部位 の一例である。植物の調製物の製造方法は、特に限定されず、 α -ダルコシダーゼ 活性阻害作用を引き出せる方法であればよい。溶媒による抽出や、植物を粉末状に する方法でもよい。抽出に使用する溶媒は、水 (酸類、塩基類、塩類、界面活性剤類 を含んでもよい）や、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノール等のアルコ ール類の他、酢酸ェチル、アセトン、テトラヒドロフラン、クロ口ホルム、ジクロロメタン、 ァセトニトリル等の、抽出操作において一般的に用いられる有機溶媒を選択すること ができ、これらを単独あるいは複数の混合溶媒として用いることができる。また超臨界 流体であってもよい。水は、溶媒として好適な例の一つである。具体的な例を示せば 、実施例の方法により製造することができる。
[0013] α—ダルコシダーゼ活性阻害剤であることの確認は、 α—ダルコシダーゼおよびそ の基質である二糖類に被験物質を添加して酵素反応試験を行い酵素反応の阻害率 を求めることで評価することができる。阻害率を求めるには、基本的には、酵素反応 によって基質力 生じた生成物の量を被験物質存在下および非存在下で測定し、両 測定結果の差を被験物質非存在下の測定値で除すればよ!、。基質から生じた酵素 反応生成物の量は、当業者の技術常識である様々な方法によって測定可能である。 例えば、グルコースであれば、吸光度測定、電極法、グルコース酸化酵素法、 HK/G-6-PD法、液体クロマトグラフィー、等の方法力も適宜選択して測定することが 可能である。
[0014] 本発明は、上記 α—ダルコシダーゼ活性阻害剤を含む糖尿病治療用または予防用 医薬品を提供する。上記 α -ダルコシダーゼ活性阻害剤の血糖値上昇抑制効果は 上述のとおりヒトおよびマウスにおいて実証されており、上記 α—ダルコシダーゼ活性 阻害剤をヒト、げっ歯類を含む哺乳類の糖尿病治療用または予防用医薬品として使 用しうることは明白である。本発明における糖尿病の治療または予防には、糖尿病患 者の治療、糖尿病発症の可能性がある者いわゆる境界群の発症予防のほか、糖尿 病患者である力を問わず、食後血糖上昇を抑制する目的で使用することが含まれる [0015] 本発明の糖尿病治療または予防用医薬組成物は、一般的な医薬製剤として調製 される。例えば、上記 α ダルコシダーゼ活性阻害剤を製剤上許容しうる担体 (賦形 剤、結合剤、崩壊剤、矯味剤、矯臭剤、乳化剤、希釈剤、溶解補助剤等)と混合して 得られる医薬組成物または錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、トローチ剤、シ ロップ剤、液剤、乳剤、懸濁剤、注射剤等の製剤として経口投与または非経口投与 に適した形態で処方される。賦形剤としては、例えば、乳糖、コーンスターチ、白糖、 ブドウ糖、ソルビット、血漿セルロース等が挙げられる。結合剤としては、例えば、ポリ ビュルビアゴム、トラガント、ゼラチン、シュラック、ヒドロキシポロピル、セルロース、シ ドロキシプロピルスターチ、ポリビュルピロリドン等が挙げられる。
[0016] 薬剤が糖尿病に有効であるか否かは、例えば実施例のように、被験動物に給餌と 同時に薬剤を投与し、給餌後経時的に血糖値を測定し、その血糖値の上昇抑制効 果をみることで確認することができる。または、糖尿病を発症した動物に薬剤を投与し 、該被験動物の血糖値を測定することにより確認することもできる。薬剤投与前後の 随時血糖値を被験物質投与群と対照群の間で比較し、薬剤投与群の血糖値が対照 群と比較して低下すれば、該薬剤は糖尿病に有効である。
[0017] また本発明は、上記のハス科植物の調製物カゝらなる a ダルコシダーゼ活性阻害 剤を含む糖尿病治療用または予防用食品組成物を提供する。ハス科植物は従来か ら食品として摂取されており、安全性が高ぐ食品組成物に加工することが可能であ る。ハス科植物調製物には糖の吸収を穏やかにし血糖値の上昇を押さえる効果があ る。糖尿病患者の治療に有用なことは勿論、糖尿病患者のみならず、いわゆる境界 域や血糖が気になる糖尿病予備軍ともいえる人たちが本発明による食品を摂取する ことにより、医薬品以外の方法で血糖値を効果的にコントロールし、糖尿病の予防が 可能となる点で、特に有用である。
[0018] 本発明の食品組成物として、例えば、糖尿病用食品、特別用途食品、特定保健用 食品、血糖値上昇抑制作用、食後血糖値上昇抑制作用、血糖値降下作用を標榜可 能な機能性食品、栄養機能食品、健康食品、栄養補助食品、経腸栄養食品、等を 挙げることができるが、糖尿病の予防若しくは治療目的または血糖値上昇抑制目的 で使用されるものであればこれらの食品に限定されない。一日の投与量または摂取 量は、安全にかつ有効に摂取できる範囲であれば、特に制限はない。あえて摂取量 の例を挙げるならば、ヒトの場合、 0.01gZday- 100gZday、好ましくは O. lgZday- lOg Zdayの摂取量を示すことができる。
[0019] 該組成物の製造方法は、当業者にとって周知慣用技術である。すなわち、本発明 の α—ダルコシダーゼ活性阻害剤と食品衛生上許容される配合物を混合して、糖尿 病用食品、特別用途食品、特定保健用食品、血糖値降下作用を標榜可能な機能性 食品、栄養機能食品、健康食品、栄養補助食品、経腸栄養食品等に加工することが できる。既存の食品に本発明の α—ダルコシダーゼ活性阻害剤を添加してもよい。例 えば安定化剤、保存剤、着色料、香料、ビタミン等の配合物顆粒状、粉末状、カプセ ル状、液状、クリーム状、飲料等の組成物に適した形態とすることができる。
なお本明細書において引用された全ての先行技術文献は、参照として本明細書に 組み入れられる。
実施例
[0020] 以下、実施例によりさらに本発明を詳細に説明するが、本発明は、これら実施例に 制限されるものではない。
[実施例 1]ハス科植物の抽出物の調製
乾燥したノヽスの葉 lkgに対し、水 10Lをカ卩える。 pHを 6. 0に調整し、 30分間室温 にて静置する。その後、減圧下 90°Cで 1時間沸騰抽出する。ろ液 (i)残查に分別し、 残查には 10倍量の水を加え、減圧下 90°Cで 1時間沸騰抽出する。ろ液 (ii)と残查に 分別し、ろ液 (i)とろ液 (ii)をあわせる。減圧下、加熱濃縮により、比重 1.ほで濃縮後 、スプレードライヤーで乾燥粉体約 lOOgを得た。
[0021] [実施例 2] α—ダルコシダーゼ酵素液の調製
凍結したラットの小腸組織片を液体窒素でさらに固化し、細力べ粉砕する。これに対 し、重量比で 5倍量の 50mMマン-トール Z2mMトリス塩酸緩衝液をカ卩え、氷冷下で 2 分間ホモジナイズ後、 1M塩ィ匕カルシウム溶液をカロえて、最終濃度を 10mMとし、さら に 4°Cで 20分間攪拌した。これを 3000rpm、 30分間遠心分離して上清をとり、この上清 をさらに 4°C、 15000rpm、 30分間遠心して沈殿物を回収する。この沈殿物を 10mMマ レイン酸水酸ィ匕ナトリウム緩衝液 (PH5.8)で 2回洗浄し、最終的に、 10mMマレイン酸 水酸ィ匕ナトリウム緩衝液 10mLで懸濁したものを α ダルコシダーゼ酵素溶液とした。
[0022] [実施例 3] α ダルコシダーゼ阻害反応試験
α—ダルコシダーゼ酵素溶液 10 L、被験サンプル (種々の濃度のハスの葉抽出液 ) 10 レ基質溶液（20mgZmLスクロース、 2(^\1リン酸緩衝液）20 レ 20mMリン酸 緩衝液生理食塩水 10 Lを混合し、 37°Cで 40分間インキュベートした。反応終了後、 生成されたグルコース量をグルコース CII テストヮコー（和光純薬工業 (株)）を用いて 測定した。試料溶液の色がグルコース測定の際の吸光度に影響を与える可能性があ るので、ブランク (酵素反応後被験物を添加したもの）をとり、その値でグルコース値を 補正し、次式により阻害率を算出した。
阻害率 (％) = (酵素反応後被験物添加グルコース濃度 -被験物添加グルコース濃 度) Z酵素反応後被験物添加グルコース濃度 X 100
[0023] 結果を表 1に示す。ハスの葉抽出乾固物の最終濃度 4mgZmLでスクロースを基質と する α ダルコシダーゼ活性を約 50%阻害した。この結果より、糖の消化吸収に必須 である α ダルコシダーゼ活性を本発明の有効成分が阻害することにより、糖摂取後 の血糖上昇を抑制することが証明された。
[0024] [表 1]
Figure imgf000008_0001
A： 酵素反応後被験物添加グルコース濃度 （mg/dL)
B： 被験物添加グルコース濃度 （mg/dL)
[実施例 4] ショ糖負荷マウスにおけるハスの葉抽出物の血糖抑制作用の検討 ICRマウス雄性 5週齢を入荷し、 1週間の予備飼育を行った。予備飼育後、マウスを 体重により 1群 6匹ずつ 4群に分けた。そのうちの 2群について、ハスの葉抽出物をショ 糖と同時に経口投与した。投与したハスの葉抽出物の濃度は lgZkgまたは 2gZkg、 ショ糖の濃度は 2gZkgとした。また、対照群としてァカルボース 3mgZkgを同様にショ 糖と同時に経口投与した。残りの 1群には、ショ糖のみを投与した。各群マウスについ て、血糖値を測定した。血糖値測定は、被験物質経口投与直前および投与後 30、 60 、 90、 120、 180、 240分に行った。測定結果を図 1に示す。ショ糖のみを投与した群と 比較して、ノ、スの葉抽出物投与群の血糖値上昇が抑制されていることが明らかにな つた。特に、ショ糖投与後 30分の血糖上昇抑制効果が大きい。
[実施例 5]高脂肪食負荷肥満マウスに対するハスの葉抽出乾燥物による肥満改善 効果の検討
5-(1)実験材料および実験方法
高脂肪食負荷マウスに被験物質としてハスの葉抽出乾燥物を投与し、その影響を 検討した。 ICRマウス雌性 6週齢を日本クレア株式会社から入手し、試験と同様の飼 育環境下で 14日間検疫 '馴化飼育した。投与開始日に検疫 '馴化期間中の体重増 加が順調で一般状態にも異常を認めない動物 40匹を試験に用いることとし、体重別 層化無作為抽出法に準じた方法で群わけした。試験群構成は、 A群:基本飼料摂取 群、 B群:高脂肪食摂取群、 C群:ハスの葉抽出乾燥物 2%含有高脂肪食摂取群、 D 群:ハスの葉抽出乾燥物 5%含有高脂肪食摂取群の 4群とし、 1群あたり 10匹とした。 同じ群のマウスを 5匹ずつ 1ケージとし、各群 2ケージで飼育した。基本飼料は、粉末 飼料 CE-2 (日本クレア株式会社)を用いた。その他の飼料:高脂肪食、ハスの葉抽出 乾燥物含有高脂肪食については、表 2に示す。表中の数値は、混餌飼料を全量 lkg 調製する場合の各混合量を示す。
[表 2]
高脂肪食の調製と被験物質の秤取 j
ハスの葉抽出乾燥物 2% ハスの葉抽出乾燥物 5% 咼月旨肪食
含有高脂肪食 含有高脂肪食
CE-2 460g 460g 460g
牛脂 400g 400g 400g
グラニュー糖 90g 90g 90g
コ一ンスタ一チ 50g 30g 0g
ハスの葉抽出乾燥物 0g 20g 50g 全ての群において、給餌方法は、飼料を粉末給餌器に入れ、自由摂取とした。給水 は、水道水を給水瓶に入れ、ノズルを介して自由摂取させた。上記条件でマウスへ の被験物質投与を 10週間継続し、該マウスに対し、一般状態観察、体重測定、摂餌 量測定、解剖学的検査を行い、以下の結果を得た。なお、以下の結果に示すデータ において、体重、摂餌量および器官重量は平均士標準偏差 (mean士 S.D.)で表した
。基本飼料摂取群と高脂肪食摂取群との有意差検定および高脂肪食摂取群と被験 物質摂取群との有意差検定は、 Student's t-testまたは多重比較検定（Dunnett's test)〖こよって行つた。
[0027] 5- (2)一般状態観察
一般状態観察は、一日 1回、ケージ毎に行った。試験期間中にわたり、各個体の一 般症状に、何ら異常は認められな力 た。
[0028] 5—（3)体重
体重は、被験物質の投与直前および投与後 1週間に 1回、電子上皿天秤を用いて 測定した。結果を各群別に表 3に示す。
[表 3]
マウスの高脂肪食負荷試験における体重（g) 群 試験開始前 試験開始後（週)
1 2 3 4 5
A:基本飼料 30.4 ±1.3 31J 土 1.9 32.6 土 1.9 33.6 士 1.フ 33.8 土 1.8 34.8 ± 2.1
B：高脂肪食 30.5 土 1.3 32J 土 1.4 34J ± 1.2** 35.6 ±2.1* 37.5 士 2.6** 39.2 ± 3.4**
C:高脂肪食 +抽出乾燥物 30.5 ±1.3 32.2 ±2.2 34.9 ±2J 36.1 ±3.0 36.9 ±3.0 37.7 ±3.2 。ハスの葉
D. S日肪食 +抽出乾燥物 30.5 ±1.3 31.0 ±1.4 33.4 ±1.7 34.5 ±2.3 35.8 ±2.7 35.5 土 1.9#
試験開始後 (週）
群 6 7 8 9 10
A:基本飼料 35.2 ±2.4 35.6 土 2.9 36.6 ±2.8 3B.9 士 3.5 39.3 ± 3.0
B：高脂肪食 40.2 士 2.8** 41.5 ± 4.3** 43.3 ± 4.2** 45.9 土 5.4** 46.2 ± 5.6** , 2%/ヽスの葉
C:^>fl曰肪 +抽出乾燥物 38.6 .±4.0 38.7 ±4.0 40.8 ±3.8 41.4 ±5.3 43.0 ±5—7
Π D-. 日日肪^食 S + +抽 5¾ハ出乾スの燥葉物 38.0 ± 2.9 36.6 土 1 38.1 ±3蕭 39.3 土 3.爾 42.2 ±3.2 各値は平均土標準擔差 (n=10)を表す。
*:Pく 0.05 **:Pく 0.01 (基本飼料群 vs高脂肪食群： Student's t-test)
#:Pく 0.05 ##:P<0.01 (高脂肪食群 vs高脂肪食 +ハスの葉抽出乾燥物投与群： Dunnett's test)
[0029] 高脂肪食による影響を検討するため A群 (基本飼料摂取群)と B群 (高脂肪食摂取 群)を比較すると、両群とも試験開始後順調に体重が増力 tlしたが、 B群の体重は A群 と比較してより大きく増カロした。試験開始 2週間後より終了時までに両群の体重値に 有意差が認められ、試験終了時では両群の間に平均で 6.9gの差が生じた (A群： 39.3±3.0g、 B群： 46.2±5.6g :p< 0.01)。
[0030] ハスの葉抽出乾燥物による影響を検討するため B群と C群 (ハスの葉抽出乾燥物 2 %含有高脂肪食摂取群)、 D群 (ハスの葉抽出乾燥物 5%含有高脂肪食摂取群)を比 較すると、いずれの群も試験開始後順調に体重増加が認められた力 C群および D 群の体重増加量は B群よりも少ない傾向を示した。特に D群では、試験開始 5、 7、 8、 及び 9週後の時点で B群との間に有意差が認められ、ハスの葉抽出乾燥物の体重増 加抑制作用が確認された。
[0031] 5- (4)摂餌量
摂餌量は、被験物質投与後 1週間に 2回、すなわち 3日または 4日毎に測定した。ケ ージ毎に電子上皿天秤を用いて給餌器を含めた重量として測定し、給仕量から残餌 量を差し引くことにより算出した。
[0032] ケージ別に算出した 1匹当りの一日平均摂餌量を表 4に示す。各ケージ: n=5、各群 ： n=10である。
[表 4]
Figure imgf000013_0001
A群 1匹あたりの一日平均摂餌量は、 5.2— 7.9g/日、 B群 1匹あたりの一日平均摂餌 量は、 3.0— 6.8g/日、 C群 1匹あたりの一日平均摂餌量は、 2.7— 6.1g/日、 D群 1匹あ たりの一日平均摂餌量は、 3.1— 5.6g/日であった。 A群では明らかに他群と比較して 多い摂餌量が確認された。 B— D群では、試験開始前半 (2週目当り）の摂餌量が多く 、後半 (6週目以降）の摂餌量が少ない傾向が見られるものの、 B— D各群による特異 的な変化は認められな力つた。
5- (5)器官重量
試験開始から 10週間後の観察期間終了時に、マウスを解剖し、器官重量 (肝、腎、 脂肪湿重量)を測定した。結果を表 5に示す。各群は n=10である。
[表 5]
Figure imgf000015_0001
食こよる影響を検討するため A群と B群を比較すると、肝臓重量については 有意な差は認められなかったが、腎臓重量は B群で有意に軽ぐ脂肪重量は B群で 有意に重 、結果が認められた。
[0035] ハスの葉抽出乾燥物による影響を検討するため B群と C群、 D群を比較すると、肝 臓及び腎臓重量については有意な差は認められな力つたが、脂肪重量は C群及び D群のいずれも低値を示した。特に D群においては B群との間で有意差が認められ、 脂肪減少作用が認められた。
[0036] 5—（6)まとめ
上記のとおり、 2%ハスの葉抽出乾燥物摂取群では体重増加抑制傾向をみられる ものの有意な作用ではな力つた力 一方の 5%ハスの葉抽出乾燥物摂取群では有意 な体重増加抑制が認められた。しかし、摂餌量に若干の違いがあることから、体重減 少が摂餌量によるもの力、ハスの葉抽出乾燥物による効果であるかを検討する必要 がある。そこで、各群で試験終了時の体重増加量と試験中の総摂餌量から体重 lgを 増加させるのに必要な餌の量を算出すると、高脂肪食摂取群で 19.1g、 2%ハスの葉 抽出乾燥物摂取群 (高脂肪食 + 2%ハスの葉抽出乾燥物)で 20.2g、 5%ハスの葉抽 出乾燥物摂取群 (高脂肪食 + 5%ハスの葉抽出乾燥物)で 22,7gとなり、用量依存的 増加傾向が確認された。したがって、本実施例で観察された体重増加抑制はハスの 葉抽出乾燥物による効果であると結論することができる。また解剖時の脂肪重量は 2 %ハスの葉抽出乾燥物摂取群で減少傾向、 5%ハスの葉抽出乾燥物摂取群で有意 な脂肪重量減少が確認され、上記結論を裏付ける結果と 、うことができる。
[0037] [実施例 6]ハスの葉抽出乾燥物のヒトに対する糖代謝と脂質代謝への作用
6 -（1)実験材料および実験方法
本実施例では、ハスの葉抽出乾燥物によるヒトの糖代謝および脂質代謝に対する 影響の検討を目的とした。上記目的の検討を行うにあたり、ヒト被験者は一定の条件 を満たすものに限定した。本実施例の被験者として満たすべき条件は以下のとおりと した。
1)いわゆる境界型であること、すなわち、空腹時血糖値 110— 126mg/dlまたは 75gグ ルコース負荷テスト (OGTT)の 2時間血糖値が 140— 200mg/dlであること。空腹時血糖 値 126mg/dl以上または 75gOGTT 2時間値 200mg/dl以上は糖尿病型となるため、本 実施例の被験者力 は除外した。
2) BMI (Body Mass Index)が 22以上であること。 BMIとは、体格指数とも呼ばれ、体重 (kg)を身長 (m)の 2乗で除した数値である。 BMI =体重 (kg)÷身長 (m) 2。
3)糖尿病に対する薬物治療経験がな!、こと。
4)重篤な肝障害、腎障害、心血管障害、食物アレルギー疾患に罹患していないこと
5)年齢が男性 40-58歳，女性 40-55歳で健康な者と同様の日常生活を営んでいるこ と
6)—日の茶飲料が 2L以下のもの
以上の 6条件を満たした者の中から、アンケート等を実施して被験者を選抜した。ァ ンケート及び問診表では、 A. 1日カロリー摂取量、 B.食事の嗜好、 C.既病歴，家 族歴，仕事及び生活環境，運動習慣，喫煙及び飲酒について、質問した。
上記の被験者条件に適合する 95名の被験者を選抜した。選抜した被験者を、年齢 、性別、空腹時血糖値において差のないようにして、ハスの葉抽出乾燥物摂取群 2 群 (T群、 R群）、プラセボ摂取群 (S群）の計 3グループに群分けした。コントロール群と して、蓮の葉抽出物を含まないベースの茶飲料 (200mlZ本)を摂取する群を S群、被 験物質摂取群として、蓮の葉抽出乾燥粉末を 0.5gZ200ml含む茶飲料を摂取する群 を T群、蓮の葉抽出乾燥粉末を 1.0gZ200ml含む茶飲料を摂取する群を R群とした。 各群の構成および平均年齢を表 6に示す。 S群 (プラセボ）： n=30, T群 (ハスの葉抽 出乾燥物 lg/day):n=34, R群 (ハスの葉抽出乾燥物 2g/day) :n=31である。
[表 6] ヒト試験群構成及び平均年齢 祥構成 平均年齢 ± S.D. (被霜者数)
S (プラセボ） 48.3 ±4.7(n= :30)
Τ (ハスの葉抽出乾燥物 lg/日 ) 50.6± 5.0(n: =34)
R (ノヽスの葉抽出乾燥物 2g/日 ) 48.9±4.6(n: =31) 試験は、プラセボを対照とした二重盲検法で行った。被験者には、被験食品摂取 前に 2週間の観察期間後、 12週間にわたり、上記茶飲料を午前と午後に分けて 1日 2 本 (200mk2/日）摂取させた。被験者に対し、身体測定および糖負荷試験を実施し、 ハスの葉抽出乾燥物による影響を検討した。
6- (2)身体測定
各被験者について、摂取前、摂取 6週間後、摂取 12週間後の各時点で身体測定を 実施した。測定項目は、身長，体重，ウェスト周囲長， BMI,ヒップ周囲長，体脂肪率 ,内臓脂肪レベルを測定した。体脂肪率および内臓脂肪レベルの測定は、オムロン 体重体組成計 HBF-352を用いて実施した。内臓脂肪レベル 10は内蔵脂肪面積 100cm2に相当する。結果を表 7及び表 8に示す。表 7、表 8ともに、 S群（プラセボ）： n=30, T群 (ハスの葉抽出乾燥物 lg/day):n=34, R群 (ハスの葉抽出乾燥物 2g/day): n=31である。。
[表 7] ヒト試験 (体格指数 1)平均値土 S.D. 項目グルー -プ Pre値 6週値 12週値 増減 (6週） 増減（12週）
S 71.7±10.0 71.0±9.9 70.5±10.1 -0.7±0.9 _1.2±1·5 体重 T 71.5±11.3 70.2±11.0 69.2±10.9 -1.3±1·1 -2.3±1.6# (kg) *
R 71.5±9.7 69.7±9.9 68.9±10.1 - 1.8±1·1 — 2.7±1.4*
S 25.6±2.4 25.3±2.4 25.1±2.4 - 0.3±0.3 - 0.5±0.5
BMI T 25.7±2.8 25.3±2.8 24.9±2.7 -0.4±0.4 - 0.8±0.5#
R 25.6±2.5 24.9±2.6 24.6±2.6 -0.7±0.5 一 1.0±0.6*
S 28.6±5.2 28.1±5.5 27.0±5.7 -0·6±1.1 -1·6±1.3 体脂肪率 T 29.3±4.7 27.7±4.5 26.7±4.4 - 1.5±1.3# _2.6±1.9# (%)
R 28.8±4.6 27.0±4.5 25.7±5.1 一 1.7±1.0* -3.0±1.6*
[S vs Τ ]ρく 0.05： # [S vs R] ρく 0.05: * (Dunnett's test)
[表 8] ヒト試験（体格指数 2)平均値 .!).
項目 グループ Pre値 6週値 12週値 増減 (6週） 増減（12週）
S 10.4±3.3 10.1±3.3 9.8±3.3 - 0.3±0.7 -0·6±0.7 内臓脂肪 T 11.4±4.0 10.9±4.0 10.3±3.9 - 0.5±0.7 _1.1±1.2# レベル
11.3±3·9 10.3±4.0 9.8±3.9 —0.9 ±0.6* - 1.4±0.7*
S 86.9±7.3 86.5±7.3 86.3±7.2 -0·4±0·6 -0.6±1.1 ウェスト
周囲長 T 87.1±8.6 85.9±8.5 84·9±8.2 -1.2±1 -2.2±1.7#
、cm)
R 87·2±8·0 85.3±7.9 84.8±7.9 - 1.9±1.2 一 2.4±1.7*
S 97.9±6.3 97.5±6.1 97.3±6.0 - 0.3±1.1 - 0.5±1.4 ヒップ
周囲長 T 96.7±6.9 96.4±6.7 95.7±6.6 -0.3±0.8 一 1.0±2.0# (cm)
R 97.9±6.4 96.5±5.7 96.3±5.8 -1.4±1.8 - 1.6±2.1*
[S vs Τ」 ρく 0.05： # [S vs R] ρく 0.05: * (Dunnett's test)
6及び 12週間のハスの葉抽出乾燥物 2g/day摂取により、体重， BMI,体脂肪率， 内 臓脂肪レベル，ウェスト周囲長，ヒップ周囲長が対照群と比較して有意に低下し、ハ スの葉抽出乾燥物による低減作用が認められた。また、ハスの葉抽出乾燥物 lg/day の 6週間の摂取により、対照群と比較して、体重，体脂肪率が有意に低下した。 12週 間の摂取では、体重， BMI,体脂肪率，内臓脂肪レベル，ウェスト周囲長が対照群と 比較して、有意に低下していた。
6— (3)糖負荷試験
各被験者について、糖負荷試験（75gグルコース/ body)を摂取前、摂取 12週間後 2 回実施した。被験者には採血前夜 21時以降の飲食を避けさせた。試験当日は、最初 に空腹状態で採血し、グルコース負荷前の血液とした。続いて 75gのグルコースを負 荷し、経時的に負荷 30,60,90分後の血液を採取した。試験は午前 11時までに終了し た。血漿中の血糖値を、 日立自動分析装置 7075を用いて測定した。
結果を図 2に示す。図 2において、グルコース負荷前の血糖値に対する各経過時 間後の血糖値をグルコース相対値（％)として表した。また、各経過時間のグルコース 相対値を基に 0-120分の AUC (Area Under Curve)を算出した。 S群（プラセボ）： n=30, T群 (ハスの葉抽出乾燥物 lg/day):n=34, R群 (ハスの葉抽出乾燥物 2g/day) : n=31 である。ハスの葉乾燥週出物を 12週間摂取することにより、グルコース負荷 30分後及 び 60分後の血糖上昇抑制が認められた。
[0040] 6— (4)まとめ
上記の通り、動物試験と同様に、ヒトにおいてもハスの葉抽出乾燥物による体脂肪 低減作用が認められた。ヒトでは、 1日摂取量として蓮の葉乾燥抽出物 2g/dayを 6週 間摂取することにより体脂肪量が低下したことが、体重の低下に反映したと考えられ る。また、 lg/dayにおいては、 12週間摂取により同様の効果が認められた。これらの 効果とグルコース負荷試験の結果より、体脂肪量の低下と共にインスリン抵抗性の軽 減作用力 Sあることが考えられる。
産業上の利用可能性
[0041] ノ、ス科植物調製物からなる a ダルコシダーゼ活性阻害剤により、血糖上昇を抑制 することが可能となった。患者増加傾向にある糖尿病について、治療または予防薬 の選択肢の一つを新たに提供することができる。

Claims

請求の範囲
[1] ハス科植物の調製物力 なる α -ダルコシダーゼ活性阻害剤。
[2] 請求項 1に記載の α -ダルコシダーゼ活性阻害剤を含む糖尿病治療用または予防 用医薬組成物。
[3] 請求項 1に記載の α -ダルコシダーゼ活性阻害剤を含む糖尿病治療用または予防 用食品組成物。
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