JP7180854B2 - 亜鉛トランスポーター発現促進剤 - Google Patents
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(1)ジュンサイの抽出物及び/又はハスの抽出物を有効成分として含有する、亜鉛トランスポーターZIPの発現促進剤。
(2)ジュンサイの抽出物及び/又はハスの抽出物を有効成分として含有する、細胞内への亜鉛取り込み促進剤。
(3)ジュンサイの抽出物及び/又はハスの抽出物を含有する、細胞内への亜鉛取り込み促進用組成物。
(4)前記組成物が、医薬品、医薬部外品、又は化粧品である、(3)に記載の細胞内への亜鉛取り込み促進用組成物。
(5)前記組成物が、飲食品である、(3)に記載の細胞内への亜鉛取り込み促進用組成物。
(6)亜鉛の欠乏に関連する疾患又は症状の治療又は予防のために用いられる、(3)~(5)のいずれかに記載の細胞内への亜鉛取り込み促進用組成物。
本発明に係る亜鉛トランスポーターZIPの発現促進剤は、ジュンサイの抽出物及び/又はハスの抽出物を有効成分として含有する。
ジュンサイ、ハスの抽出物を以下のとおり製造した。
ジュンサイの芽100gに水を2L加え、90~100℃で2時間抽出した。得られた抽出液を濾過した後、その濾液を減圧濃縮し、凍結乾燥することによりジュンサイの芽の熱水抽出物を1.8g得た。
ジュンサイの芽100gに50%(v/v)エタノール水溶液を2L加え、常温で1週間抽出した。得られた抽出液を濾過した後、その濾液を減圧濃縮し、凍結乾燥することによりジュンサイの芽の50%エタノール抽出物を1.6g得た。
ジュンサイの芽100gにエタノールを2L加え、常温で1週間抽出した。得られた抽出液を濾過した後、その濾液を減圧濃縮し、凍結乾燥することによりジュンサイの芽のエタノール抽出物を1.4g得た。
ハスの雄しべ100gに水を2L加え、90~100℃で2時間抽出した。得られた抽出液を濾過した後、その濾液を減圧濃縮し、凍結乾燥することによりハスの雄しべの熱水抽出物を12.5g得た。
ハスの雄しべ100gに50%(v/v)エタノール水溶液を2L加え、常温で1週間抽出した。得られた抽出液を濾過した後、その濾液を減圧濃縮し、凍結乾燥することによりハスの雄しべの50%エタノール抽出物を8.3g得た。
ハスの雄しべ100gにエタノールを2L加え、常温で1週間抽出した。得られた抽出液を濾過した後、その濾液を減圧濃縮し、凍結乾燥することによりハスの雄しべのエタノール抽出物を7.0g得た。
ハスの胚芽100gに水を2L加え、90~100℃で2時間抽出した。得られた抽出液を濾過した後、その濾液を減圧濃縮し、凍結乾燥することによりハスの胚芽の熱水抽出物を25.0g得た。
実施例1で調製したジュンサイ、ハスの1種の抽出物、又は2種の抽出物の混合物を用いてZIP遺伝子発現促進効果及び細胞内への亜鉛取り込み促進効果の試験を次のとおり行った。なお、2種の抽出物の混合物を用いる場合、その比率は1:1(重量比)とした。
市販の正常ヒト表皮角化細胞(クラボウ社製)を12well plateに1x104個ずつ播種し、Keratinocyte-SFM(Thermo Fisher Scientific社製)を用いて4日間培養した。その際、実施例1で調製した各種抽出物(製造例1~7の抽出物、製造例1と製造例4の抽出物の等量混合物)を最終濃度が0.01%になるように添加した。培養後、細胞を回収し、PBS(-)にて2回洗浄し、Trizol Reagent(Invitrogen)によって細胞からRNAを抽出した。2-STEPリアルタイムPCRキット(Applied Biosystems社製)を用いて、抽出したRNAをcDNAに逆転写した後、ABI7300(Applied Biosystems)により、下記のプライマーセットを用いてリアルタイムPCR(95℃:15秒間、60℃:30秒間、40cycles)を実施し、ZIP1、ZIP2、ZIP3の遺伝子発現を確認した。その他の操作は定められた方法に従った。
フォワードプライマー:5'- GCGCCTACCCTCATACCTAT-3'(配列番号1)
リバースプライマー:5'- GAGGCCAGAGAAGATACCAAA -3'(配列番号2)
[ZIP2遺伝子用プライマーセット]
フォワードプライマー:5'- GGTCATCACCGGCGAGTC -3'(配列番号3)
リバースプライマー:5'- TCCAGGGCTTCAGCAGTCATA-3'(配列番号4)
[ZIP3遺伝子用プライマーセット]
フォワードプライマー:5'- CGGGAGTTGCTGGACTGAGA -3'(配列番号5)
リバースプライマー:5'- CCAAGTCCCACGATGTGCTAC -3'(配列番号6)
[内部標準グリセルアルデヒド3リン酸デヒドロゲナーゼ(GAPDH)遺伝子用プライマーセット]
フォワードプライマー:5'-CCGTGTTCCTACCCCCAAT-3'(配列番号7)
リバースプライマー:5'-TGCCTGCTTCACCACCTTCT-3'(配列番号8)
市販の正常ヒト表皮角化細胞(クラボウ社製)を6cmディッシュに5x104個ずつ播種し、Keratinocyte-SFM(Thermo Fisher Scientific社製)を用いて4日間培養した。その際、実施例1で調製した各種抽出物(製造例1~7の抽出物、製造例1と製造例4の抽出物の等量混合物)を最終濃度が0.01%になるように添加した。培養後、トリプシン処理により細胞を回収し、PBS(-)中で亜鉛検出用蛍光指示薬FluoZin-3(最大励起波長λex:494nm、最大蛍光波長λem:516nm、Molecular Probes社製)で1時間反応させた(125nM濃度)。反応後、細胞をPBS(-)で洗浄し、未反応の指示薬を除去し、最終的にPBS(-)に懸濁した。次に、細胞懸濁液をフローサイトメーター(FACS Aria:BD社製)を用いて解析し、FluoZin-3陽性細胞の割合を求めた。ここで、「FluoZin-3陽性細胞」とは、蛍光指示薬FluoZin-3で細胞を染色した結果、当該指示薬で未染色の細胞の示す自家蛍光の強度を指標に設定した基準値よりも高い蛍光強度を示す細胞をいう。これらの試験結果を以下の表2に示す。
Claims (5)
- (i)ジュンサイの芽の熱水抽出物、エタノール水溶液抽出物、またはエタノール抽出物、又は、(ii)ジュンサイの芽の熱水抽出物と、ハスの雄しべの熱水抽出物との混合物を有効成分として含有する、亜鉛トランスポーターZIPの発現促進剤。
- (i)ジュンサイの芽の熱水抽出物、エタノール水溶液抽出物、またはエタノール抽出物、又は、(ii)ジュンサイの芽の熱水抽出物と、ハスの雄しべの熱水抽出物との混合物を有効成分として含有する、細胞内への亜鉛取り込み促進剤。
- (i)ジュンサイの芽の熱水抽出物、エタノール水溶液抽出物、またはエタノール抽出物、又は、(ii)ジュンサイの芽の熱水抽出物と、ハスの雄しべの熱水抽出物との混合物を含有する、細胞内への亜鉛取り込み促進用組成物。
- 前記組成物が、医薬品、医薬部外品、又は化粧品である、請求項3に記載の細胞内への亜鉛取り込み促進用組成物。
- 前記組成物が、飲食品である、請求項3に記載の細胞内への亜鉛取り込み促進用組成物。
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