KR20150100302A - 테트라셀미스 테트라셀레의 추출물을 유효 성분으로 함유하는 두피 개선 및 탈모 방지용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 두피 개선 및 탈모 방지용 신규 조성물로서, 더욱 자세하게는 해양 미세조류에 해당하는 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물을 유효성분으로 포함하는 두피개선 및 탈모 방지를 위한 약학적 조성물, 건강기능성 식품 및 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 해양 미세조류인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물을 사용해 탈모 예방 및 두피개선제에 활용할 수 있는 가능성을 제시하였다. 또한, 탈모 예방 및 두피개선의 기능이 있는 해양 미세조류 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물은 주로 굴이나 해삼 양식과 같은 패류의 주요 먹이생물로 사용되는 미세조류로써 연구소와 학교, 기업 등에서 다량으로 배양되고 있기 때문에 원료의 수급에 유리하다. 또한, 본 발명의 해양 미세조류 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물은 기존의 탈모 예방 및 두피개선 효과를 보이는 천연물 보다 저렴하게 확보할 수 있기 때문에 원가 절감에 기여할 수 있다.
Description
본 발명은 두피 개선 및 탈모 방지용 신규 조성물로서, 더욱 자세하게는 해양 미세조류에 해당하는 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물을 유효성분으로 포함하는 두피개선 및 탈모 방지를 위한 약학적 조성물, 건강기능성 식품 및 화장료 조성물에 관한 것이다.
최근 들어 탈모 증상은 외형적 이미지에 대한 관심 증가로 인해 생긴 가장 큰 고민거리 중 하나이다. 탈모는 보통 40~50대 남성의 고민거리로만 여겨 왔지만 현재는 20~30대 탈모 환자가 급등하고 있으며, 여성 탈모도 증가하고 있는 추세다. 이러한 탈모증상은 현대인들의 식생활을 불균형, 유해한 공기, 오염된 식수, 산성비 및 스트레스 등 많은 환경적인 요인에 의해 탈모 증상이 심해지고 있다. 이에 따라 탈모 현상을 예방 및 치료하기 위해 많은 연구가 진행 중이다.
탈모는 정상적으로 모발이 존재해야 하는 부위에 모발이 없는 상태를 말하거나 성장을 멈춘 모발이 자연스럽게 빠지는 현상을 의미한다. 모발은 보통 하루에 50~100개 이상 정도가 빠지며, 머리가 빠지는 숫자가 많을수록 탈모증이라고 정의한다 (Lee, 2005). 탈모의 원인은 매우 다양하며, 대머리의 발생에는 유전적 원인과 남성 호르몬인 안드로겐(androgen)이 중요한 인자로 생각되고 있다. 여성형 탈모의 경우의 일부는 남성형 탈모와 같은 경로로 일어나는 것으로 추정되고 있고, 원형 탈모증은 자가 면역 질환으로 생각되고 있다. 또한, 휴지기 탈모증의 경우 내분비 질환, 영양 결핍, 약물 사용, 출산, 발열, 수술 등의 심한 신체적, 정신적 스트레스로 인해 발생 되며, 이는 일시적인 탈모로 모발의 일부가 생장기간을 다 채우지 못하고 휴지기 상태가 되어 탈모가 발생한다.
이러한 탈모 증상의 예방 및 치료를 위해서 다양한 시도가 이루어져 왔는데, 두피피판술, 탈모부위축소술, 조직확장술 및 자가모발 이식술 등의 외과적 방법이 있으며, 천연물 등의 한방 추출물을 이용한 탈모 방지 및 발모 촉진제 등을 이용하고 있다. 상기의 외과적인 방법은 단기간에 우수한 효과를 볼 수 있지만, 수술에 대한 환자의 경제적, 정신적 부담이 큰 문제점이 존재한다. 이에 따라 외과적인 방법이외에 다양한 외용제를 통해서 탈모 방지 및 예방을 하고 있는데, 보통 합성 제제를 사용할 경우 부작용이 생길 수 있다. 상기의 부작용으로는 성욕감퇴, 발기부전 등의 성기능 감퇴 등을 들 수 있으며 여성은 기형아 출산 위험이 있다.
최근 들어 부작용이 없는 천연물을 이용한 한방 추출물을 탈모 방지 및 발모 촉진제로써 이용을 하는 연구가 증가 되고 있다. 기존에 탈모 방지나 발모 촉진제로 사용하는 천연물은 황련, 황백, 황금, 황정, 황기, 백지, 야국화, 감초 및 생강 등의 다양한 천연물의 추출물을 사용하고 있다. 특히, 천연물을 이용하여 탈모 방지 및 발모 촉진제로써 사용할 경우, 합성 제제에 사용시 나타나는 부작용이 없고, 불쾌한 냄새가 나지 않으며 동시에 항산화 효과와 천연방부효과까지 제공하는 장점이 있다.
하지만, 천연물을 이용한 탈모 예방 및 두피개선제는 원료가 비싸고, 추출 공정 시 많은 비용이 들기 때문에 경제적이지 못하는 단점이 존재한다.
따라서 천연물에서 얻을 수 있는 탈모 예방 및 두피개선용 추출물을 대체하고자 원료의 수급이 비교적 쉽고, 대량 생산이 용이한 주로 굴이나 해삼 양식에 사용되는 미세조류로 해양생물 먹이로 사용하기 위해 연구소와 학교, 기업 등에서 다량으로 배양되고 있는 해양 미세조류를 이용하여, 기존에 사용된 합성 소재나 값비싼 천연물 유래 탈모 예방 및 두피개선제를 대체하는 제제의 개발이 필요하다.
이에 본 발명자들은 주로 굴이나 해삼 양식에서와 같이, 패류의 주요 먹이생물로 사용되고 있는 미세조류인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)가 탈모를 예방하고 발모를 촉진시킬 수 있는 활성이 있다는 것을 규명함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 목적은 미세조류인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물을 유효 성분으로 함유하는 두피 개선 및 탈모 방지용 조성물을 제공하는 것이다.
또한 본 발명의 다른 목적은 미세조류인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물을 유효 성분으로 함유하는 두피 개선 및 탈모 방지를 위한 건강기능성 식품을 제공하는 것이다.
또한 본 발명의 다른 목적은 미세조류인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물을 유효 성분으로 함유하는 두피 개선 및 탈모 방지를 위한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은, 미세조류인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물을 유효 성분으로 함유하는 두피 개선 및 탈모 방지용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 추출물은 물 또는 유기용매를 이용하여 수득한 추출물일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 추출물은 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 미세조류 세포 추출물, 상기 미세조류의 배양물, 상기 배양물의 농축물 또는 상기 배양물의 건조물을 포함할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 추출물은 상기 추출물은 항염 활성, 인간 모유두 세포의 증식 활성 및 5 알파-리덕타제 효소 활성 억제능을 통해 두피 개선 및 탈모 방지의 효과를 가질 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 약학적 용도의 피부외용제로서 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 및 카타플라스마제로 이루어진 군 중에서 선택되는 제형일 수 있다.
또한, 본 발명은 미세조류인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물을 유효 성분으로 함유하는 두피 개선 및 탈모 방지를 위한 건강기능성 식품을 제공한다.
또한, 본 발명은 미세조류인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물을 유효 성분으로 함유하는 두피 개선 및 탈모 방지를 위한 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 헤어토닉, 모발 영양화장수, 스칼프트리트먼트, 헤어트리트먼트, 헤어린스, 헤어샴푸 및 헤어로션으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형일 수 있다.
본 발명은 해양 미세조류인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물을 사용해 탈모 예방 및 두피개선제에 활용할 수 있는 가능성을 제시하였다.
또한, 탈모 예방 및 두피개선의 기능이 있는 해양 미세조류 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물은 주로 굴이나 해삼 양식과 같은 패류의 주요 먹이생물로 사용되는 미세조류로써 연구소와 학교, 기업 등에서 다량으로 배양되고 있기 때문에 원료의 수급에 유리하다.
또한, 본 발명의 해양 미세조류 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물은 기존의 탈모 예방 및 두피개선 효과를 보이는 천연물보다 저렴하게 확보할 수 있기 때문에 원가 절감에 기여할 수 있다.
도 1은 Tetrathelmis tetrathele의 현미경 사진을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 Tetrathelmis tetrathele 추출물의 RAW 264.7 대식세포에 대한 NO생성량을 확인한 결과이다.
도 3은 본 발명의 Tetrathelmis tetrathele 추출물의 HaCaT 세포에 대한 재생 효능을 측정하여 그래프로 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 Tetrathelmis tetrathele 추출물의 모유두세포에 대한 재생 효능을 측정하여 그래프로 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 Tetrathelmis tetrathele 추출물의 RAW 264.7 대식세포에 대한 NO생성량을 확인한 결과이다.
도 3은 본 발명의 Tetrathelmis tetrathele 추출물의 HaCaT 세포에 대한 재생 효능을 측정하여 그래프로 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 Tetrathelmis tetrathele 추출물의 모유두세포에 대한 재생 효능을 측정하여 그래프로 나타낸 것이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다. 본 명세서에 참고문헌으로 기재되는 모든 간행물의 내용은 본 발명에 도입된다.
본 발명은 두피 개선, 탈모 방지 및 발모 촉진을 위한 새로운 소재로서 해양 미세조류인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 추출물의 신규 용도를 제공함에 그 특징이 있다.
보다 구체적으로 본 발명은 미세조류인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물을 유효 성분으로 함유하는 두피 개선 및 탈모 방지용 조성물을 제공한다.
본 발명에서 제공하는 두피 개선 및 탈모 방지용 조성물에 함유된 유효성분인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)는 녹조류에 속하는 미세조류로서 패류의 먹이로 주로 사용되고 있다.
상기 미세조류의 세포 크기는 major axis가 14.4±0.8이고, minor axis가 9.3±1.1인 특징을 갖는다.
본 발명자들은 새로운 두피 개선 및 탈모 방지제로서 종래 합성 화합물이 아닌 천연 유래의 새로운 소재를 발굴하기 위해 연구하던 중, 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 미세조류가 탈모 방지 및 발모 촉진 효능을 가지고 있음을 발견하였다.
즉, 본 발명의 일실시예에 의하면, 본 발명의 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 에탄올 추출물에 대한 항산화 및 항염 활성 분석을 수행한 결과, 종래 항산화제로 사용되고 있는 아스코르브산에 비해 매우 낮은 항산화 활성을 나타낸 반면, 염증 유발 인자인 산화질소의 생성을 효과적으로 저해하여 항염 활성을 갖는 것으로 나타났다(도 2 및 표 6 참조).
또한 본 발명의 다른 일실시예에 의하면, 본 발명의 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 에탄올 추출물의 경우 인간 모유두 세포에 처리에 따른 세포증식능이 우수한 것을 확인할 수 있었다(도 4 및 표 11 참조).
또한 본 발명의 다른 일실시예에 의하면, 본 발명의 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 에탄올 추출물의 경우 탈모의 원인이 되는 5 알파(α)-리덕타제의 활성을 효과적으로 억제하는 것을 확인할 수 있었다(표 12 참조).
한편, 탈모는 질병에 의한 탈모, 호르몬적 원인에 의한 탈모, 영양 불균형에 의한 탈모 또는 스트레스에 의한 탈모가 원인이 될 수 있는데, 상기 질병에 의한 탈모는 유전, 자가 면역질환, 화상, 화학요법, 건선, 진균 감염, 방사선 노출 또는 종양이 원인일 수 있고, 상기 호르몬적 원인에 의한 탈모는 약물, 임신 출산 전 후, 갱년기, 당뇨병, 뇌하수체 기능 이상, 부갑상선 또는 갑상선 기능 이상이 원인일 수 있다.
또한, 5α-리덕타제는 테스토스테론을 5α디하이드록시테스토스테론(DHT)로 전환시켜 AR 에 대한 시그널링을 가속화시키는 중요한 효소로서, 5α-리덕타제의 활성을 억제하는 억제제인 finasteride는 남성형 탈모 치료제(상명; Propecia)와 전립선비대증(benign prostatic hyperplasia, BPH) 치료제(상명;Proscar)로 쓰이고 있다.
그러므로 탈모의 원인이 되는 5 알파(α)-리덕타제의 활성을 억제하고, 염증 반응을 억제할 수 있으며, 항산화 활성을 갖는 물질의 경우, 탈모를 예방하고 발모를 촉진시킬 수 있다.
따라서 이러한 활성을 모두 갖는 본 발명의 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 미세조류는 탈모 예방 및 발모 촉진용 새로운 소재로 활용할 수 있다.
본 발명에서 제공하는 상기 탈모 방지 및 발모 촉진용 조성물은 유효성분으로서 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 미세조류 자체 추출물, 상기 미세조류의 배양물, 상기 배양물의 농축물 또는 상기 배양물의 건조물을 포함할 수 있다.
또한, 상기 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 추출물은 상기 미세조류를 배지를 이용하여 배양시킨 후, 배양된 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 균주를 원심분리 등의 방법으로 모은 후, 상기 균주에 유기용매를 첨가하여 추출한 추출물일 수 있으며, 정제수를 포함한 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매를 사용하여 추출물을 수득할 수 있고, 바람직하게는 물 및 에탄올 혼합용매, 더 바람직하게는 50~100% 에탄올, 더욱더 바람직하게는 70% 에탄올을 사용하여 추출물을 수득할 수 있다.
이러한 본 발명의 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 탈모 방지, 두피 개선 및 발모 촉진을 위한 약학적 조성물, 화장료 조성물의 용도로 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 유효성분이 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 추출물뿐만 아니라, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 상술한 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 추출물 이외에, 발모(탈모)방지 및 모발 개선의 작용을 손상시키지 않는 한도에서 종래부터 사용되어오던 양모제 또는 육모제를 혼합하여 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 당 업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 머릿기름, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 및 헤어스프레이 등 다양한 형태로 제조될 수 있으며 특히 헤어토닉, 모발 영양화장수, 스칼프트리트먼트, 헤어트리트먼트, 헤어린스, 헤어샴푸 및 헤어로션으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 추출물의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.00001-30중량%이며, 바람직하게는 0.5-20%이며, 보다 바람직하게는 1.0-10중량%이다. 상기 추출물의 함량이 0.00001중량% 미만이면, 상기 추출물에 의한 탈모방지 및 발모개선 효과가 크게 감소되고, 30중량%를 초과하는 경우에는 오히려 피부 자극을 초래할 수 있고, 제형상의 문제점이 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 추출물을 유효성분으로 포함하는 약제학적 조성물일 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 상기 유효성분 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.
상기 약제학적 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.
상기 약제학적 조성물의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화 할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 본 발명의 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.00001 ~ 30 중량%로 포함될 수 있다.
본 발명의 피부외용 약제학적 조성물은 탈모 방지, 발모 촉진 및 두피 개선 효과를 갖는 피부 외용제로서 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 약학조성물로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 또한 식품 조성물일 수 있는데, 이러한 식품 조성물은 유효성분인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 추출물을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 향미제는 천연 향미제 (타우마틴), 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 상기 약제학적 조성물과 동일한 방식으로 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.
또한 상기 식품 조성물은 유효성분인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 추출물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
본 발명의 유효성분인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 추출물은 천연물질로서 독성 및 부작용은 거의 없으므로 탈모 방지, 발모 촉진 및 두피 개선을 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있다.
본 발명은 또한 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 방지, 두피 개선 및 탈모 방지용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 건강기능식품은 탈모 방지, 발모 촉진 및 두피 개선을 목적으로, 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공할 수 있다.
본 발명에서 건강기능식품이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명의 건강기능식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전청에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.
상기 식품 첨가물 공전에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다.
예를 들어, 정제 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분인 상기 추출물을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다.
캅셀 형태의 건강기능식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분인 상기 추출물을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 추출물을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.
환 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분인 상기 추출물과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다.
과립 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분인 상기 추출물과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.
상기 건강기능식품은 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등일 수 있다.
또한 본 발명은 포유동물에게 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 추출물을 투여하는 것을 포함하는 탈모 예방 또는 치료방법을 제공한다.
여기에서 사용된 용어 "포유동물"은 치료, 관찰 또는 실험의 대상인 포유동물을 말하며, 바람직하게는 인간을 말한다.
여기에서 사용된 용어 "치료상 유효량"은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분 또는 약학적 조성물의 양을 의미하는 것으로, 이는 치료되는 질환 또는 장애의 증상의 완화를 유도하는 양을 포함한다. 본 발명의 유효 성분에 대한 치료상 유효 투여량 및 투여횟수는 원하는 효과에 따라 변화될 것임은 당업자에게 자명하다. 그러므로 투여될 최적의 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 함량, 제형의 종류, 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 본 발명의 치료방법에 있어서, 성인의 경우, 본 발명의 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 추출물을 1일 1회 내지 수회 투여시, 1㎎/kg~250㎎/kg의 용량으로 투여하는 것이 바람직하다.
본 발명의 치료방법에서 본 발명의 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 경구, 직장, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 흉골내, 경피, 국소, 안구내 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<
실시예
1>
해양 미세조류
Tetrathelmis
tetrathele
의 특성 및 배양
<1-1> 미세조류
Tetrathelmis
tetrathele
의 특성
본 발명의 미세조류 Tetrathelmis tetrathele의 특성은 하기 표 1에서 나타내었으며, 도 1에서는 상기 미세조류의 현미경 사진을 나타내었다.
| Species | Source of strain | Cell size(mean±sd,um) | |||
| Major axis | Minor axis | 특성 | |||
| Tetrathelmis tetrathele | TT | KMCC P-2 | 14.4±0.8 | 9.3±1.1 | 굴먹이, 녹조류 |
<1-2> 배지의 조성
본 발명의 미세조류 Tetrathelmis tetrathele의 배양은 정치배양으로 다음의 조건(하기 표 1 참조)으로 배양하였고 배지는 Conwy 배지로 사용하였으며 그 조성은 하기 표 3에서 나타내었다.
| 배양조건 |
| 정치배양 온도 23±1℃ 조도 400 Watt metal halide lamp 배양조 원형 아크릴 수조 |
| f/2 medium | |||
| Solution A- Chemicals | |||
| Stock solution | Quantity | Molar concentration in final medium | |
| Sodium nitrate (NaNO3) |
1.76M | 5 mL | 8.83×10-4 M |
| Sodium phosphate monobasic(NaH2PO4) | 0.06M | 5 mL | 3.63×10-5 M |
| Sodium silicate (Na2SiO39H2O) |
0.49M | 5 mL | 1.07×10-4 M |
| f/2 trace metal solution | see recipe below | 2.5 mL | - |
| f/2 vitamin solution | see recipe below | 1.25 mL | - |
| Solution B- Trace metal solution | |||
| Stock solution | Quantity | ||
| Iron(III) chloride hexahydrate (FeCl36H2O) | 10mM | 3.15 g | 1×10-5 M |
| Na2EDTA2H2O | 10mM | 4.36 g | 1×10-5 M |
| Copper(II) sulfate pentahydrate (CuSO45H2O) | 40mM | 1 mL | 4×10-8 M |
| Sodium molybdate dihydrate(Na2MoO42H2O) | 30mM | 1 mL | 3×10-8 M |
| Zinc sulfate heptahydrate(ZnSO47H2O | 80mM | 1 mL | 8×10-8 M |
| Cobalt(II) chloride hexahydrate(CoCl26H2O | 40mM | 1 mL | 5×10-8 M |
| Manganese(II) chloride tetrahydrate(MnCl24H2O | 0.9M | 1 mL | 9×10-7 M |
| Make final volume up to 1 L with DW and autoclave | |||
| Solution C-Vitamin solution | |||
| Stock solution | Quantity | ||
| Vitamin B1 (Thiamin) | 0.3mM | 1 mL | 1×10-10 M |
| Vitamin B12 (cyanocobalamine) | 0.73μM | 10 mL | 2×10-9 M |
| Biotin | 0.82mM | 200 mg | 3×10-7 M |
| 100 ml. distilled water에 녹여 냉장고에 보관 | |||
각각의 용액을 혼합하여 1L로 정용하여 autoclave로 멸균한 뒤, 냉장보관하며 사용한다.
<1-3> 미세조류
Tetrathelmis
tetrathele
의 회수 및 추출물 수득
위에 제시한 배양액으로 배양한 Tetrathelmis tetrathele 추출물을 제조하기 위해 3,000 rpm에서 15분간 원심 분리하여 가라앉는 것은 미세조류로 분리하여 회수하였고, 상등액은 농축하여 미세조류 배양액으로 분리하여 사용하였다. 미세조류의 유효성분을 추출하기 위하여 회수한 미세조류 및 농축한 미세조류 배양액에 70% 에탄올 용액을 wet basis 기준으로 5배에 해당하는 양을 가하여 추출하였다. 추출은 40 ℃에서 3시간 동안 shaking하면서 추출하였고, 여과한 후 그 여액을 농축하여 시료로 사용하였다.
<
실험예
1>
해양 미세조류
Tetrathelmis
tetrathele
의 두피개선, 탈모예방 및 치료효과를 위한 항산화 활성 측정
두피와 모발의 질환을 유도하는 라디칼 형성은 탈모의 원인인 것으로 알려져 있다. 따라서 라디칼 생성을 억제하고 산화를 유발시키는 효소의 활성을 억제할 경우, 탈모를 예방 및 치료할 수 있다.
이에 본 발명자들은 상기 실시예 1에서 수득한 Tetrathelmis tetrathele 추출물이 항산화 활성이 있는지 확인하기 우해 DPPH 라디칼 소거 활성을 Park 등의 방법(2005, Park, E.Y., Murakami, H., Mori, O. and Matsumura, Y. 2005. Effects of protein and peptide addition on lipid oxidation in powder model system. J. Agric. Food Chem. 53, 137-144.)에 따라 측정하였다.
자세하게는, 시험관에 시료 용액 500 μL를 넣고, 500 μL의 ethanol과 250 μL의 0.5 mM 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)/ethanol 용액을 첨가하여 25℃의 실온에서 30분 동안 방치한 후, 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조구는 시료 대신 500 μL의 시료 용매인 DMSO를 사용하였으며, Blank 시험은 DPPH와 증류수 대신 750 μL의 ethanol을 사용하였다. Antiradical 활성은 다음의 식에 따라 DPPH 탈색의 %로 계산하였다.
Tetrathelmis tetrathele 추출물은 강력한 항산화제로 알려진 아스코르브산과 같이 실험하여 비교해 보았다. 아스코르브산의 DPPH 라디칼 소거활성은 0.04 mg/mL에서 약 50%의 소거능을 보여주었다. 이에 비해 본 소재인 Tetrathelmis tetrathele 추출물의 라디칼 소거활성은 7.8 mg/mL으로 아스토르브산의 약 1/200의 효능에 불과하였고, 측정한 농도 범위에서 배양액은 거의 활성이 나타나지 않았다(표 4 참조).
| 시료 | EC50, mg/mL |
| 아스코르브산(양성대조군) | 0.04 |
| Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물 | 7.8 |
| Tetrathelmis tetrathele 배양 배지 추출물 | - |
<
실험예
2>
해양 미세조류
Tetrathelmis
tetrathele
의 두피개선, 탈모예방 및 치료효과를 위한 항염증 활성 측정
두피와 모발의 질환을 유도하는 원인은 라디칼 형성 이외에도 염증이 그 원인이 되는 것으로 알려져 있다. 따라서 염증을 억제할 경우, 탈모를 예방 및 치료할 수 있으므로 본 발명자들은 본 발명의 미세조류 추출물이 항염 활성이 있는지 하기와 같은 실험을 통해 확인하였다.
<2-1>
RAW
264.7 세포에 대한 세포독성 측정
본 발명자들은 Tetrathelmis tetrathele 추출물의 항염증 효과를 측정하기에 앞서, 먼저 한국세포주은행(KCLB, Seoul, Korea)에서 분양받은 RAW 264.7세포에 대해 미세조류 추출물의 세포독성을 확인하였다.
즉, 세포 배양용 플라스크에 RAW 264.7 세포를 10% FBS가 함유된 Dulbecco's modified Eagle's Medium(DMEM) 배지를 이용하여 배양한 후, 1×105 cells/well의 농도로 96 웰 플레이트에 분주하고, 24시간 동안 37℃의 온도, 95%의 습도 및 CO2, 5%로 조절된 CO2 배양기에서 세포를 배양한 다음, 새로운 배지로 교체 시, 본 발명의 미세조류 추출물을 최종 농도가 0.1, 1, 10, 100 및 200μg/mL이 되도록 세포에 각각 처리한 다음, 24시간 동안 배양하였다. 세포주의 생존률을 측정하기 위해 MTS〔3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-5-carboxy-methoxyphenyl2-(4-sulfophenyl)-2H- tetrazolium〕시약을 이용하였으며, 이 시약을 1시간동안 처리한 후 microplate reader(Molecular Devices, VersaMax ELISA Microplate Reader, USA)로 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포의 생존율은 시료를 처리하지 않은 대조군에 대비한 시료 처리군의 흡광도로 표시하였다.
분석 결과, 하기 표 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 Tetrathelmis tetrathele 추출물에 대한 독성은 100 ug/mL의 농도구간까지는 독성이 나타나지 않았으나, 200ug/mL의 농도에서 다소 높은 독성을 보였다. 따라서 상기 결과를 통해 본 발명자들은 본 발명의 추출물이 세포에 대해 100ug/mL의 농도구간까지는 세포 독성을 유발시키지 않는 것을 알 수 있었으며, 이에 추출물의 항염증 효능은 200 ug/mL의 농도를 제외한 구간에서 측정하였다.
| Sample concentration(ug/mL) | Cell viability, % | |
| Control | 100.0±5.5 | |
| Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물 | 0.1 | 101.2±2.2 |
| 1 | 98.8±3.4 | |
| 10 | 109.9±6.6 | |
| 100 | 133.2±1.7* | |
| 200 | 34.0±8.2* | |
*p<0.5, compared with control
<2-2> 산화질소 생성 억제 활성 분석
본 발명자들은 Tetrathelmis tetrathele 추출물의 항염 효과 측정을 위해, RAW 264.7 세포주를 96 웰에 분주한 후 세포가 바닥의 약 80% 정도가 될 때까지 배양한 다음, 염증 유발 인자인 lipopolysaccharide (LPS)를 1μg/mL의 농도가 되도록 처리하였다. 이후 본 발명의 Tetrathelmis tetrathele 추출물을 농도가 0.1, 1, 10 및 100 μg/mL가 되도록 각각 처리하였고, 24시간 동안 배양 후 산화질소(NO)의 생성량을 Griess 시약으로 분석하였다. 이때 대조군으로는 lipopolysaccharide (LPS)만을 처리한 군과 아무것도 처리하지 않은 군을 사용하였다.
Griess 시약을 이용한 분석은 먼저 5%의 질산용액에 1% sulfanilamide를 첨가하고, 0.1% naphthylethylene-diamine di-hydrochloride를 첨가하여 혼합한 후, 상기 배양한 세포의 상등액 50 μL를 96 웰 플레이트에서 취한 후, 상기 혼합액에 Griess 시약 50 μL를 첨가하고 15분 동안 실온에서 반응시켰다. 이후 microplate reader(Molecular Devices, VersaMax ELISA Microplate Reader, USA)를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 산화질소의 생성량 변화는 시료를 처리하지 않은 대조군의 산화질소 생성량을 기준으로 시료 처리군의 산화질소 생성량으로 표시하였다.
분석 결과, 도 2 및 표 6에 나타낸 바와 같이, 그 결과 LPS 1 ug/mL만을 처리한 군과 비교하였을 때, Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물의 경우에는 0.1 ug/ml 의 농도에서 8.5%의 생성 효과가 있었고, 100 ug/ml의 농도에서는 59.8%의 높은 NO 생성이 억제 효과가 인지되었다. 또한 농도가 증가함에 따라 NO의 생성은 농도 의존적으로 감소하여 Tetrathelmis tetrathele 추출물이 NO 생성억제 효능을 확인할 수 있었다. 그러나 배양액의 경우는 NO의 생성을 억제하는 효능이 없는 것을 확인할 수 있었다.
| Sample concentration(ug/mL) | NO production, % | ||
| Control | 19.6±4.8 | ||
| LPS ** | 100.0±1.4 | ||
| Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물 | + LPS | 0.1 | 91.5±3.2* |
| 1 | 89.2±9.7 | ||
| 10 | 88.9±8.8* | ||
| 100 | 40.2±5.9* | ||
| Tetrathelmis tetrathele 배양 배지 추출물 | 0.1 | 101.6±2.5 | |
| 1 | 107.2±1.9 | ||
| 10 | 126.4±3.1* | ||
| 100 | 122.3±4.8* | ||
*p<0.5, compared with control, ** LPS: lipopolysaccharide
<2-3>
PGE2
생성 저해활성 분석
프로스타글란딘(PGE)은 면역조절 물질로 염증반응을 유도하는 활성을 갖는 것으로 알려져 있다. 따라서 이러한 프로스타글란딘의 생성 또는 활성을 억제할 경우 염증 반응을 억제할 수 있어 염증으로 인한 탈모 현상을 예방할 수 있는 효과가 있다. 이에 본 발명자들은 Tetrathelmis tetrathele 추출물의 PGE2생성 억제 효과 여부를 확인하기 위해 Prostaglandin E2 EIA Kit(Cayman Chemical Company; Ann Arbor, Michigan, USA)를 이용하여 본 발명의 추출물에 의한 PGE2 생성 억제효과를 분석하였다. 이때 측정 방법은 제조회사의 분석방법에 따라 정량하였는데, 먼저 RAW 264.7 세포에 Tetrathelmis tetrathele 추출물을 0.1% LPS와 함께 0.01, 0.1, 1, 10, 100, 200 ug/mL 농도로 각각 24시간 처리한 후, 세포 배양 상층액을 goat anti-mouse로 코팅된 96웰 플레이트에 50 uL씩 로딩하고 여기에 1차 항체 용액50 uL와 PGE2 conjugate 50 uL씩 첨가한 후 4℃에서 18시간 동안 반응시킨 후, 세척용액으로 5회 세척한 후 Ellman's reagent을 200 uL씩 처리하여 60분간 교반하면서 반응 시킨 후, 405-420nm에서 흡광도를 측정하였다.
측정 결과, 하기 표 7에 나타낸 바와 같이, LPS 1 ug/mL 만을 처리된 군과 비교하였을 때, Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물은 유의적인 생성 억제는 없는 것을 확인할 수 있었다.
| Sample concentration(ug/mL) | NO production, % | ||
| Control | 13.2±64.64.8 | ||
| LPS** | 100.0±2.7 | ||
| Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물 | + LPS | 0.1 | - |
| 1 | 97.6±0.6 | ||
| 10 | 94.1±0.5 | ||
| 100 | 94.1±0.2 | ||
*LPS: lipopolysaccharide
<
실험예
3>
해양 미세조류
Tetrathelmis
tetrathele
의 두피개선, 탈모예방 및 치료효과를 위한 인간 표피 세포에 대한
증식능
측정
모발의 탈락을 막기 위해서는 모발을 지탱하고 있는 두피의 건강이 무엇보다도 중요하다. 두피를 이루고 있는 두피세포의 재생효능을 측정하여 두피의 건강에 미치는 영향을 확인해 보고자 하였다.
<3-1>
HaCaT
세포에 대한 세포독성 측정
본 발명자들은 Tetrathelmis tetrathele 추출물의 세포의 재생효능을 확인하기 전에 표피세포에 대한 시료의 세포 독성을 확인하였다.
인간 피부 표피세포에 해당하는 HaCaT cell은 10% 송아지 혈청(FBS; Gibco)를 포함한 DMEM(Gibco) 배지로 배양하였으며, 배양하는 동안 2-3일에 한번씩 배지를 교환해 주었다. HaCaT 세포를 5×104 cells/well이 되도록 96 웰 플레이트에 분주하고, 24시간 동안 37℃, 습도 95%, CO2 5%로 조절된 CO2 배양기에서 배양하여 안정화하였다. 새로운 배지에 시료를 최종 농도가 0.01, 0.1, 1, 10 및 50 μg/mL이 되도록 조제하여 세포에 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 세포주의 생존률은 MTS 시약을 이용하여 microplate reader(Molecular Devices, VersaMax ELISA Microplate Reader, USA)로 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포의 생존율은 시료를 처리하지 않은 대조군에 대비한 시료 처리군의 흡광도로 표시하였다.
그 결과 하기 표 8에서 나타낸 바와 같이, 모든 농도구간에서 세포독성을 보이지 않는 것을 확인할 수 있었다.
| Sample concentration(ug/mL) | Cell viability, % | |
| Control | 100.0± 4.5 | |
| Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물 | 0.01 | 122.4± 4.8 |
| 0.1 | 112.8± 1.5 | |
| 1 | 110.7± 4.9 | |
| 10 | 105.7± 6.2 | |
| 50 | 105.1±11.7 | |
| Tetrathelmis tetrathele 배양 배지 추출물 | 0.01 | 116.8±11.5 |
| 0.1 | 115.4± 2.8 | |
| 1 | 115.7± 1.7 | |
| 10 | 111.4± 3.4 | |
| 50 | 104.0± 3.9 | |
<3-2>
HaCaT
세포에 대한 재생 효능
인간 피부 표피세포인 HaCaT cell을 이용하여 시료의 세포 재생효능을 확인하였다. HaCaT 세포를 1×104 cells/well로 96 well plate에 분주하고, 24시간 동안 37℃, 습도 95%, CO2 5%로 조절된 CO2 배양기에서 배양하였다. 새로운 배지에 시료를 최종 농도가 0.01, 0.1, 1, 10 및 50μg/mL이 되도록 조제하여 세포주에 처리한 후 1일, 3일, 5일 동안 배양하여 세포의 증식능을 측정하였다. 세포의 증식능은 세포독성 시험과 같은 방법으로 하였으며, MTS 시약을 이용하여 microplate reader(Molecular Devices, VersaMax ELISA Microplate Reader, USA)로 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포의 생존율은 시료를 처리하지 않은 대조군에 대비한 시료 처리군의 흡광도로 표시하였다.
그 결과 하기 표 9 및 도 3에서 나타낸 바와 같이, Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물의 경우 10 ug/mL의 농도까지 3일 동안 증식을 하였으나, 6일째는 증식능이 오히려 감소하였으며, 50 ug/ml의 농도에서는 장기간 배양 시 오히려 세포가 사멸하였다. 그러나 Tetrathelmis tetrathele 배양액의 경우 6일간의 모든 배양 기간 동안 모든 농도 구간에서 증식하는 것을 확인 할 수 있었다. 1일, 3일, 6일 배양한 모든 시험군에서 탁월한 증식 효능을 보여주었고, 특히 10ug/ml에서 3일 배양이후부터 2배가 넘는 높은 증식활성을 보여주어 배양액의 특정 성분이 HaCa 세포의 증식을 촉진시키는 것으로 판단된다.
| Sample concentration(ug/mL) | Cell growth, % | |||
| 1 day | 3 day | 6 day | ||
| Control | 100.0±7.1 | 100.0±9.3 | 100.0±8.9 | |
| Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물 | 0.01 | 113.6±11.3 | 120.7±2.7* | 101.6±9.8 |
| 0.1 | 138.9±7.7* | 122.5±5.2* | 101.0±4.0 | |
| 1 | 128.4±18.2 | 123.3±3.8* | 111.0±8.0 | |
| 10 | 129.2±15.9* | 130.4±8.2* | 118.1±7.7* | |
| 50 | 110.5±5.9 | 99.2±9.0 | 2.4±18.7 | |
| Tetrathelmis tetrathele 배양 배지 추출물 | 0.01 | 125.5±0.6* | 129.9±12.2* | 129.5±5.8* |
| 0.1 | 121.6±2.1* | 135.6±12.8* | 147.1±2.6* | |
| 1 | 115.7±8.1* | 155.6±9.5* | 172.4±3.8* | |
| 10 | 123.5±8.9* | 211.0±13.5* | 202.0±6.0* | |
| 50 | 122.4±7.8* | 161.6±8.0* | 212.9±8.3* | |
*p<0.5, compared with control
<
실험예
4>
해양 미세조류
Tetrathelmis
tetrathele
의 두피개선, 탈모예방 및 치료효과를 위한 인간
모유두
세포에 대한
증식능
측정
모발의 성장은 모유두에서 영양공급을 받아 모유두세포(HDFPC, human follicle dermal papilla cell)에서 이루어진다.
모유두세포의 증식능을 측정하여 시료의 모성장 유도능을 확인하였다.
<4-1> 인간
모유두
세포에 대한 세포독성 측정
본 발명자들은 Tetrathelmis tetrathele 추출물의 인간 모유두 세포에 대한 재생효능을 확인하기 전에 상기 세포에 대한 시료의 세포 독성을 확인하였다.
모유두 세포는 Promocell GmbH(Heidelberg, Germany)에서 human follicle dermal papilla유래의 primary cell(C-12071)을 구입하여 시험하였다. 세포배양을 위한 배지는 follical dermal papilla cell growth medium(C-26501)을 세포를 구입한 회사와 동일한 회사에서 구입하여 사용하였으며, 10% 송아지 혈청(FBS; Gibco)을 포함한 배지로 배양하였다. 이 세포를 96well plate에 2000 cells/well로 분주하고, 24시간 후 각 농도별 시료를 처리하여 배양하였다. 세포의 생존률은 위의 방법과 동일한 방법으로 Promega 사의 MTS 시약을 1시간동안 처리한 후 마이크로플레이트 리더기(Perkin Elmer 1420 Multilabel Counter VICTORTM, USA)로 490nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포의 생존률은 대조군에 대비한 시료 처리군의 흡광도로 표시하였다.
그 결과 하기 표 10에서 나타낸 바와 같이, Tetrathelmis tetrathele 균체와 배양액은 모든 농도 구간에서 독성은 나타나지 않았다.
| Sample concentration(ug/mL) | Cell viability, % | |
| Control | 100.0±10.5 | |
| Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물 | 0.01 | 124.6±13.4 |
| 0.1 | 110.9±15.4 | |
| 1 | 110.1± 9.7 | |
| 10 | 101.2± 9.6 | |
| 50 | 107.8± 9.3 | |
| Tetrathelmis tetrathele 배양 배지 추출물 | 0.01 | 105.6± 8.2 |
| 0.1 | 123.6± 7.5 | |
| 1 | 101.4± 8.5 | |
| 10 | 106.6± 2.0 | |
| 50 | 117.1±12.6 | |
*p<0.5, compared with control
<3-2>
모유두세포에
대한 재생 효능
인간 모유두세포를 세포 배양용 플라스크에 10% FBS가 함유된 folicle dermal papilla cell growth medium 배지로 배양하였다. HDFPC 세포를 0.5×104 cells/well의 농도로 96 well plate에 분주하고, 24시간 동안 37℃, 습도 95%, CO2 5%로 조절된 CO2 배양기에서 배양하였다. 새로운 배지에 시료를 최종 농도가 1, 10, 100 및 200 μg/mL이 되도록 조제하여 세포에 처리한 후 1일, 3일 및 5일 동안 배양하였다. 세포주의 생존률은 모두 동일한 방법으로 측정하였다.
그 결과 하기 표 11 및 도 4에서 나타낸 바와 같이, 모든 농도 구간에서 증식능을 확인할 수 있었다. Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물은 1일 배양시 10ug/ml 농도이상의 온도에서 세포 증식능을 확인할 수 있었고, 배양일 증가함에 따라 세포의 증식능도 크게 증가하였다. 특히 200ug/ml의 고농도에서 5일간 배양하였을 때 41.5%의 큰 증식능을 보여주었다. 그러나 Tetrathelmis tetrathele의 배양액의 경우 세포의 증식능의 유의적인 증가율을 확인할 수는 없었다.
| Sample concentration(ug/mL) | Cell proliferation, % | |||
| 1 day | 3 day | 5 day | ||
| Control | 100.0±2.3 | 100.0±3.9 | 100.0±2.8 | |
| Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물 | 0.1 | 104.0±4.4 | 110.4±2.0* | 122.2±9.2* |
| 1 | 103.4±3.0 | 107.1±2.3* | 132.9±12.6* | |
| 10 | 106.6±1.6* | 108.5±4.9* | 132.9±4.6* | |
| 100 | 117.6±2.1* | 125.3±4.8* | 129.5±3.6* | |
| 200 | 135.7±7.3* | 141.9±2.8* | 141.5±3.3* | |
<
실험예
5>
Tetrathelmis
tetrathele
의 두피개선 및 탈모예방 효과를 위한 5 알파
리덕
타제 활성
저해능
분석
탈모의 원인 중 하나로 5α-dihydrotestosterone(디하이드로테스토스테론)을 들고 있다. 5α-디하이드로테스토스테론은 남성호르몬인 테스토스테론이 모포에서 5α-reductase라는 효소에 의해 생성되는 물질이다. 현재 이 물질의 과량 생성이 탈모를 유발한다고 알려져 있다. 본 연구에서는 5α-reductase가 다량 함유되어 있는 흰쥐의 간조직을 이용하여 5α-reductase의 활성 저해능을 알아보았다.
즉, 5 알파 리덕테이즈의 활성 저해능은 디하이드로테스트스테론의 생성을 저해하므로 이 효소가 다량 함유되어 있는 간조직 균질액에 기질로 테스토스테론 과 NADPH 를 가해 NADPH의 제거율을 흡광도로 측정하여 5 알파 리덕테이즈의 활성 저해능을 측정하는 방법으로 활성 저해능을 측정하였다. 이를 위해 먼저, SD rat liver를 4배량의 48 uM EDTA2Na-5.02 mM MgCl26H2O-131.5 mM Surose-2.57 mM 2-Mercaptoethanol-50 mM NaCl-1mM Tris-HCl(pH 7.0)을 넣고 균질화하여 1차 원심분리한다(10,000×g at 0℃ for 10 min). 그 상층액을 취한 다음, 다시 한번 더 2차 원심분리하여 한다(30,000×g at 0℃ for 1 hr). 위의 지방층을 제거한 상등액을 BCA법으로 단백질을 측정하고 단백질의 농도를 5.0 mg/mL로 조절하여 70℃에 보관하면서 본 연구에 사용하였다.
5α-reductase 활성 저해능은 Wu JH 등(2013)의 방법을 변형하여 측정하였다. 즉, rat microsomal suspension 20 uL에 시료 1 uL, 33 uM Testosterone 20 uL 1 mM Tris HCl (pH 7.0) 139 uL, 33 uM NADPH 20 uL을 넣고 혼합한 뒤, NADPH 측정 파장인 340nm의 파장에서 0에서 10분간의 흡광도를 1분마다 측정하여, NADPH의 감소 속도를 계산하였다. 시료 대신 용매를 넣은 시료의 NADPH 감소 속도에 대한 비로써 미세조류 추출물의 5 알파 리덕테이즈의 활성 저해능을 측정하였다.
그 결과 하기 표 12에서 나타낸 바와 같이, Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물은 농도가 증가할수록 모든 농도 구간에서 저해활성을 보였다. 특히, Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물의 경우 10 ug/mL의 농도에서 57.0%의 높은 저해활성을 확인할 수 있었다. 탈모예방 의약품으로 사용되고 있는 피나스테리드와 활성을 비교해 보면 92.4 ng/ml의 농도에서 50%의 활성 저해능을 보여주었다. Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물은 100 ng/ml의 농도에서 약 23%의 활성 저해능을 나타내 피나스테리드의 절반 정도의 활성 저해능을 보여주었다. 또한 Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물은 10000 ng/ml의 농도에서 57%의 저해능을 보여 단일 성분의 finasteride에 비교하였을 때 매우 높은 활성 저해능을 보여주었다.
| Sample(ng/mL) | Inhibition, % | |
| Finasteride IC50 | 92.4 ng/mL | |
| Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물 | 1 | 6.6±14.7 |
| 10 | 18.4±13.0 | |
| 100 | 23.0± 6.2 | |
| 500 | 35.3±18.2 | |
| 1000 | 45.3±14.8 | |
| 10000 | 57.0±45.9 | |
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예 및 실험예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.
TT ethanol ext: Tetrathelmis tetrathele 에탄올 추출물
TT culture media ext: Tetrathelmis tetrathele 배양 배지 추출물
TT culture media ext: Tetrathelmis tetrathele 배양 배지 추출물
Claims (8)
- 미세조류인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물을 유효 성분으로 함유하는 두피 개선 및 탈모 방지용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 추출물은 물 또는 유기용매를 이용하여 추출한 추출물인 것을 특징으로 하는 두피 개선 및 탈모 방지용 약학적 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 추출물은 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele) 미세조류 세포 추출물, 상기 미세조류의 배양물, 상기 배양물의 농축물 또는 상기 배양물의 건조물을 포함하는 것을 특징으로 하는 두피 개선 및 탈모 방지용 약학적 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 추출물은 항염 활성, 인간 모유두 세포의 증식 활성 및 5 알파-리덕타제 효소 활성 억제능을 갖는 것을 특징으로 하는 두피 개선 및 탈모 방지용 약학적 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 약학적 조성물은 피부외용제로서 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 및 카타플라스마제로 이루어진 군 중에서 선택되는 제형인 것을 특징으로 하는 두피 개선 및 탈모 방지용 약학적 조성물. - 미세조류인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물을 유효 성분으로 함유하는 두피 개선 및 탈모 방지를 위한 건강기능성 식품.
- 미세조류인 테트라셀미스 테트라셀레(Tetrathelmis tetrathele)의 추출물을 유효 성분으로 함유하는 두피 개선 및 탈모 방지를 위한 화장료 조성물.
- 제7항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 헤어토닉, 모발 영양화장수, 스칼프트리트먼트, 헤어트리트먼트, 헤어린스, 헤어샴푸 및 헤어로션으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 두피 개선 및 탈모 방지를 위한 화장료 조성물.
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| KR1020140021938A KR102122614B1 (ko) | 2014-02-25 | 2014-02-25 | 테트라셀미스 테트라셀레의 추출물을 유효 성분으로 함유하는 두피 개선 및 탈모 방지용 조성물 |
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| WO2018117725A1 (ko) * | 2016-12-22 | 2018-06-28 | 제주대학교 산학협력단 | 수산동물 발효물을 포함하는 탈모 방지 및 육모 촉진을 위한 조성물 |
| KR20190090978A (ko) * | 2018-01-26 | 2019-08-05 | 한국과학기술연구원 | 테트라셀미스를 포함하는 눈 건강 개선용 조성물 |
| KR20200045850A (ko) * | 2018-10-23 | 2020-05-06 | 순천대학교 산학협력단 | 지의류 추출물을 함유하는 발모 촉진 또는 탈모 방지용 조성물 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100950437B1 (ko) | 2007-11-19 | 2010-04-02 | 게놈앤메디신(주) | 발모, 양모 촉진 및 탈모 방지를 위한 생약 조성물 및 이의제조방법 |
| US20100143267A1 (en) * | 2008-12-05 | 2010-06-10 | Symrise Gmbh & Co. Kg | Extracts of tetraselmis sp. |
-
2014
- 2014-02-25 KR KR1020140021938A patent/KR102122614B1/ko active IP Right Grant
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