WO2004025297A1

WO2004025297A1 - 固相担体上における分子間の非特異相互作用の抑制方法

Info

Publication number: WO2004025297A1
Application number: PCT/JP2003/009640
Authority: WO
Inventors: Akito Tanaka; Tomohiro Terada; Turuki Tamura; Takaaki Shiyama; Akira Yamazaki; Minoru Furuya; Masayuki Haramura
Original assignee: Reverse Proteomics Research Institute Co., Ltd.; Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2002-07-30
Filing date: 2003-07-30
Publication date: 2004-03-25
Also published as: JP4560406B2; AU2003254782A1; US7919653B2; EP1553412A1; JPWO2004025297A1; US20060177943A1; EP1553412A4; AU2003254782A8; EP2157429A3; EP1553412A8; EP2157429A2

Abstract

本発明は、分子を固相担体に固定化し、当該固相上で該分子と特異的に相互作用する分子との間での特異相互作用を解析する過程において、固相担体における固相表面の疎水的性質を調節すること、特に固相担体への分子の固定化の際に親水性スペーサーを介在させることを特徴とする、分子間の非特異的な相互作用を抑制する方法を提供し、かかる方法によって、分子間の非特異的な相互作用を抑制することが可能となり、固相上への非特異的な吸着を低減化することができる。

Description

明細書

固相担体上における分子間の非特異相互作用の抑制方法

技術分野

本発明は、固相担体を用いた分子間相互作用における基盤技術に関する。より詳しくは、解析を目的とする分子を固相担体に固定化し、当該固相上での分子間相互作用を活用し、当該相互作用を測定、解析することによって、解析を目的とする分子に特異的な相互作用を有する分子（以下、ターゲット分子ともいう）を選別、精製する、あるいは分子間の特異的な相互作用を解析する技術に関する。

背景技術

近年、分子間相互作用を基盤とした手法を"！い、ある特定の分子に特異的な相互作用を有する分子を探索する試み、あるいは分子間相互作用を詳細に検討する研究が盛んに行われている。これは具体的には、低分子一低分子、低分子一高分子、あるいは高分子一高分子の組み合わせのうちの片方の分子を固相担体に固定し、両分子間の相互作用を測定する研究、あるいはそれに基づいて目的とするタ —ゲット（固相担体に固定化した分子に特異的な相互作用を有する分子）を精製する研究に代表される。分子間相互作用を基盤とした各種手法の例としては、後者の例としての 1 ) ァフィ二ティー樹脂を用いたターゲット研究、前者の例としての 2 ) 表面プラズモン共鳴（Surface Plasmon Resonanse : S P R)を応用した方法が有名である。 1 ) の例としては、 1 9 8 9年のシュライパー教授によるァフィニティー樹脂を用いた免疫抑制剤 F K 5 0 6の結合タンパク質 F K B P (FK506 binding proteins)の発見（F K 5 0 6の細胞内結合タンパク質としての F K B P I 2の発見、 Nature, 341, 758, 1989)、および引き続き行われた F K 5 0 6 — F K B P複合体による F K 5 0 6薬効メカニズムにおけるカルシニューリン阻害作用の発見（Cell, 66, 807-815, 1991) や、抗癌剤 Trapoxinのターゲットタンパク質としての H D A C (Science, 272, 408， 1996) 発見等が有名である。また 2 ) の例としては、固相担体として金薄膜を利用し、化合物あるいはタンパク質等とそれと特異的に相互作用するタンパク質等との相互作用を詳細に検討できる B I A C O R E (商品名）が有名である。

しかし、これまでに上記手法において、 1 ) ァフィユティー樹脂を用いたターゲット探索においてはァフィユティー樹脂に結合したタンパク質を S D Sゲル等で解析する際に特異的タンパク質を覆い隠すような非特異的タンパク質が存在し、特異的タンパク質の検出が困難になる、あるいは 2 ) B I A C O R E等を用いた解析においては、大きな非特異的タンパク吸着に起因するピークの存在による特異的タンパク結合によるピーク判別が困難になる等、特異的な分子間相互作用に基づく選別、精製の障害となる非特異的な分子間相互作用の存在が問題となってきた。これらは、重要な基盤技術である固相担体、詳しくは固相担体の表面の性状が原因と経験上^ λられてきたが、どのような性状が非特異的な相互作用の要因となっているのか、またこのような非特異的な分子間相互作用を効率的に抑制する方法は明確に知られていないのが現状である。例えば TentaGel (Fluka社、 Cat. No=86364) 等一部の樹脂は P E Gスぺーサーを有する化学的 ·物理的に安定でかつァフィユティークロマト用樹脂としても使用されているが（例； Thorpe DS, Walle S. , Combinatorial chemistry defines general properties of linkers for the optimal display of peptide ligands for binding soluble protein targets to TentaGel microscopic beads. , Bioc em Biop ys Res Commun 2000 Mar 16；269 (2) : 591-5)、非特異的な相互作用の抑制にどのような構造がどのように寄与しているのか等の基礎的な技術は知られないできているし、その非特異的な相互作用がどの程度抑制されているかあるいはァフィ-ティ一樹脂として十分機能しているのかについての情報も充分でないのが現状である。そのような P E Gスぺーサ一としては上記した TentaGelや ArgoGel (Argonau t社）が市販されている。これらの構造は下記の通りである。

ArgoGel また、親水的な性質を有する糖誘導体から構成される樹脂（例えば、ル（A f f i G e 1 ； Bio- Rad社、 Cat. No=153- 2401) ゃセファロース誘導体 (フアルマシア社、 ECH Sepharose 4B、 Cat. No=17- 0571- 01) 等が知られている）は、非特異的な分子間相互作用は小さいものの、糖誘導体であるため物理的 ·化学的に不安定でその使用は制限されるものであった。

上記分子間相互作用を基盤とした手法において、非特異的な相互作用を人為的に抑制することが可能となれば、得られた結果が特異的タンパク結合によるものかあるいは非特異的タンパク吸着によるものかの検定をする必要がなくなり、両者の区別が現実的に不可能であるためによる研究の中断の機会が減少するばかりでなく、使用するタンパク等の必要量も大幅削減でき時間的面、労力的面においても大幅なコスト削減が可能となる等、これらの手法の適応は一段と増すと考えられる。

本発明は、固相担体上での分子間相互作用の解析において障害となる非特異的な相互作用を排除、抑制する方法の提供を目的とし、さらに当該方法を利用して、固相担体上に固定化された分子と特異的な相互作用を有する分子を精製 ·解析する方法を提供することを目的とする。

発明の開示

本発明者らは、上記課題を解決すべく、リガンドとして特定の低分子化合物を固相担体における固相表面に固定し、固定化したリガンドと特異的に相互作用する分子（ターゲット分子）あるいは非特異的に相互作用する分子を定量的に観測する研究を行い、固定化する化合物（リガンド）の疎水性パラメーターと非特異的な相互作用に相関性があること、すなわち固相表面の疎水的な性質が分子間の非特異的な相互作用を引き起こす要因の一つとなり得ることを見出した。さらにかかる知見をもとに、固相表面と検討対象分子であるリガンドとの結合に親水性のスぺーサーを導入することにより非特異的な相互作用を抑制することに成功して本発明を完成するに至った。

即ち本発明は下記の通りである。 (1) 固相担体における固相表面の疎水的性質を調節することを特徴とする、分子の固相表面への非特異的な吸着を調節する方法。

(2) 分子 Aを固相担体に固定化し、当該固相上での分子 Aと該分子 Aと特異的に相互作用する分子 Bとの間での特異的な相互作用を解析する過程において、固相担体における固相表面の疎水的性質を低減させる処理を行うことを特徴とする、分子 Aおよぴ Zまたは固相担体と分子 B以外の分子との非特異的な相互作用を抑制する方法。

(3) 分子 Aを固相担体に固定化し、当該固相上での分子 Aと該分子 Aと特異的に相互作用する分子 Bとの間での特異的な相互作用を用いて分子 Bを選別する過程において、固相担体 Ίこおける固相表面の疎水的性質を低減させる処理を行うことを特徴とする、分子 Aおよびまたは固相担体と分子 B以外の分子との非特異的な相互作用を抑制する方法。

(4) 分子 Aおよび分子 Bの組み合わせが、低分子化合物おょぴ低分子化合物、低分子化合物およぴ高分子化合物、ならぴに高分子化合物およぴ高分子化合物のいずれかである上記（2) または（3) 記載の方法。

(5) 分子 Aおよび分子 Bの組み合わせが、低分子化合物おょぴ高分子化合物、または高分子化合物および高分子化合物である上記（2) または（3) 記載の方法。.

(6) 固相担体における固相表面の疎水的性質を低減させる処理が、分子 Aの固相担体への固定化の際にそれらの間に親水性スぺーサーを導入することである、上記（2) または（3) 記載の方法。

(7) 親水性スぺーサ一が、固相担体おょぴ分子 Aと結合した状態で以下の特徴のいずれかを少なくとも有するものである、上記（6) 記載の方法：

(i) 水素結合ァクセプター数が 6以上である、

(ii) 水素結合ドナー数が 5以上である、

(iii) 水素結合ァクセプター数および水素結合ドナー数の総計が 9以上である。

(8) さらに、該親水性スぺーサ一がその分子中にカルボ二ル基を 1以上有するものである、上記（7) 記載の方法。

(9) さらに、該親水性スぺーサ一が水溶液中で電荷的に陽性あるいは陰性になる官能基を有さないことを特徴とする、上記（7) または（8) 記載の方法。

(10) 分子 Aを固相担体に固定化し、当該固相上での分子 Aと該分子 Aと特異的に相互作用する分子 Bとの間での特異的な相互作用を解析する方法であって、固相担体における固相表面の疎水的性質を低減させる処理を行うことにより分子 Aおよぴ Zまたは固相担体と分子 B以外の分子との非特異的な相互作用を抑制することを特徴とする方法。

(1 1) 分子 Aを固相担体に固定化し、当該固相上での分子 Aと該分子 Aと特異的に相互作用する分子 Bとの間での特異的な相互作用を用いて、分子 Bを選別する方法であって、固相担体における固相表面の疎水的性質を低減させる処理を行うことにより分子 Aおよび/または固相担体と分子 B以外の分子との非特異的な相互作用を抑制することを特徴とする方法。

(12) 分子 Aおよび分子 Bの組み合わせが、低分子化合物および低分子化合物、低分子化合物および高分子化合物、ならびに高分子化合物および高分子化合物のいずれかである上記（10) または（1 1) 記載の方法。

(13) 分子 Aおよび分子 Bの組み合わせが、低分子化合物および高分子化合物、または高分子化合物および高分子化合物である上記（10) または（1 1) 記載の方法。

(14) 固相担体における固相表面の疎水的性質を低減させる処理が、分子 Aの固相担体への固定化の際にそれらの間に親水性スぺーサ一を導入することである、上記（10) または（11) 記載の方法。

(15) 親水性スぺーサ一が、固相担体おょぴ分子 Aと結合した状態で以下の特徴のいずれかを少なくとも有するものである、上記（14) 記載の方法：

(i) 水素結合ァクセプター数が 6以上である、

(ii) 水素結合ドナー数が 5以上である、

(iii) 水素結合ァクセプター数およぴ水素結合ドナー数の総計が 9以上である。 (16) さらに、該親水性スぺーサ一がその分子中にカルボ-ル基を 1以上有するものである、上記（15) 記載の方法。

(17) さらに、該親水性スぺーサ一が水溶液中で電荷的に陽性あるいは陰性になる官能基を有さないことを特徴とする、上記（15) または（16) 記載の方法。

(18) 分子 Aに対して特異的な相互作用を有する分子 Bのスクリーニング方法であって、少なくとも以下の工程を含む方法：

(i) 分子 Aを固相担体に親水性スぺーサーを介して固定化する工程、

(ii) 分子 Bを含むかまたは含まない試料を上記（i) で得られた分子 Aが固定化された固相担体に接触させる工程、

(iii) 分子 Aに特異的な相互作用を示したか、または示さなかった分子を同定し、解析する工程、および

(iv) 上記（iii) で得られた解析結果に基づいて分子 Aに対して特異的な相互作用を有する分子を分子 Bと判断する工程。

(19) 分子 Aおよび分子 Bの組み合わせが、低分子化合物および低分子化合物、低分子化合物および高分子化合物、ならびに高分子化合物および高分子化合物のいずれかである上記（18) 記載の方法。

(20) 分子 Aおよび分子 Bの組み合わせが、低分子化合物おょぴ高分子化合物、または高分子化合物および高分子化合物である上記（18) 記載の方法。

(21) 親水性スぺーサ一が、固相担体おょぴ分子 Aと結合した状態で以下の特徴のいずれかを少なくとも有するものである、上記（18) 記載の方法：

(i) 水素結合ァクセプター数が 6以上である、

(ii) 水素結合ドナー数が 5以上である、

(iii) 水素結合ァクセプター数おょぴ水素結合ドナー数の総計が 9以上である。 (22) さらに、該親水性スぺーサ一がその分子中にカルボ二ル基を 1以上有するものである、上記（21) 記載の方法。

(23) さらに、該親水性スぺーサ一が水溶液中で電荷的に陽性あるいは陰性になる官能基を有さないことを特徴とする、上記（21) または（22) 記載の方法。

(24) 固相担体における固相表面の疎水的性質を低減させる為の親水性スぺーサ一であって、固相担体おょぴ分子 Aと結合した状態で以下の特 ί敫のいずれかを少なくとも有するものである親水性スぺーサ一：

(i) 水素結合ァクセプター数が 6以上である、

(ii) 水素結合ドナー数が 5以上である、

(iii) 水素結合ァクセプター数おょぴ水素結合ドナー数の総計が 9以上である。 (25) さらに、該親水性スぺーサ一がその分子中にカルボ-ル基を 1以上有するものである、上記（24) 記載の親水性スぺーサ一。

(26) さらに、該親水性スぺーサ一が水溶液中で電荷的に陽性あるいは陰性になる官能基を有さないことを特徴とする、上記（24) または（25) 記載の親水性スぺーサ一。

(27) 固相担体おょぴ上記（24) 〜（26) のいずれか 1項に記載の親水性スぺーサーを含む複合体。

(28) 上記（24) 〜（26) のいずれか 1項に記載の親水性スぺーサ一および分子 Aを含む複合体。

(29) 固相担体、上記（24) 〜（26) のいずれか 1項に記載の親水性スぺーサ一おょぴ分子 Aを含む複合体。

(30) 下記式（l a) 〜（I e) からなる群より選択されるいずれか 1つの式で表される部分構造を少なくとも 1つ有する、上記（24) 〜（26) のいずれか 1項に記載の親水性スぺーサー：

(式（I a) 中、

Aは適当な連結基であり、

X i〜 X ₃はそれぞれ同一または異なつて単結合あるいは炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基であり、

1^〜1^₇はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、一 CH₂OHあるいは水酸基であり、

mは 0〜2の整数であり、 m' は 0〜 10の整数であり、 m" は 0〜 2の整数であり、

R₃〜R₇が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、 X₃ が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい；式（I b) 中、

nおよび n，はそれぞれ同一または異なって 1〜 1 0 0 0の整数であり；式（I c) 中、，

, ' および！)" はそれぞれ同一または異なって 1〜 1 0 0 0の整数であり；式（I d) 中、

X₄は単結合あるいは炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基であり、

Rs Ri。はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、一 CH₂OHあるいは水酸基であり、

qは 1〜7の整数であり、

R₈が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、 X₄が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい；

式（I e) 中、

Rェェ〜 i ₆はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、一 CH₂OHあるいは水酸基であり、

rは 1〜 1 0の整数であり、 r，は 1〜 5 0の整数であり、

R i ₆がそれぞれ複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい)。

(3 1) 式（I a) 〜（ I e) からなる群より選択されるいずれか 1つの式で表される部分構造を 2つ以上有する上記（3 0) 記載の親水性スぺーサ一。

(3 2) 固相担体および上記（3 0) または（3 1) 記載の親水性スぺーサーを含む複合体。

(3 3) 上記（3 0) または（3 1) 記載の親水性スぺーサ一および分子 Aを含む複合体。

(34) 固相担体、上記（3 0) または（3 1) 記載の親水性スぺーサ一おょぴ分子 Aを含む複合体。

(3 5) 式（l a) 〜（I e) からなる群より選択されるいずれか 1つの式で表される部分構造を少なくとも 1つ有する化合物、

但し以下の化合物は除く。

(36) 式（I a) 〜（I e) からなる群より選択されるいずれか 1つの式で表される部分構造を 2つ以上有する上記（35) 記載の化合物。

(37) 下記式（I I a：) 〜（I I e) からなる群より選択されるいずれか少なくとも 1つの式で表される化合物：

(式（I I a) 中、

Y aは水素原子またはァミノ基の保護基であり、

Z aは水素原子または力ルポキシル基の保護基であり、

Wa、 Wa ' および Wa" はそれぞれ同一または異なって水素原子または水酸基の保護基（これらの保護基は、隣り合う保護基同士で結合してジアルキルメチレン基を形成してもよい）であり、

Bは適当な連結基であり、

X_la〜X_3aはそれぞれ同一または異なって単結合あるいは炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基であり、 R i _a〜R _{7 a}はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、一 CH₂OH (式中、水酸基は保護されていてもよい）あるいは保護されていてもよい水酸基であり、

m_iは 0〜2の整数であり、 in ' は 0〜 10の整数であり、は 0〜2の整数であり、

R_{3 a}〜R _{7 a}が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、 X_{3 a}が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい；式（I I b) 中、

Y bは水素原子またはァミノ基の保護基であり、

Z bは水素原子または力ルポキシル基の保護基であり、

！^ぉょぴ！！はそれぞれ同一または異なって 1〜 1000の整数であり；式（I I c) 中、

Y cおよび Y c ' はそれぞれ同一または異なって水素原子またはァミノ基の保護基であり、

Z cは水素原子またはカルボキシル基の保護基であり、

pい _χ' およびはそれぞれ同一または異なって 1〜 1000の整数であり；

式（I I d) 中、

Y dは水素原子またはァミノ墓の保護基であり、

Z dは水素原子またはカルボキシル基の保護基であり、

Wdは水素原子または水酸基の保護基であり、

X _{4 a}は単結合あるいは炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基であり、

R 8 a〜 R i。 _aはそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、一 CH₂OH (式中、水酸基は保護されていてもよレ、）あるいは保護されていてもよい水酸基であり、

は：！〜 7の整数であり、 ' R_8aが複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、 X_4aが複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい；

式（I I e) 中、

Y eは水素原子またはァミノ基の保護基であり、

Z eは水素原子または力ルポキシル基の保護基であり、

Rェ i a〜 R ί 6 aはそれぞれ同一または異なつて水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、 —CH₂OH (式中、水酸基は保護されていてもよい）および保護されていてもよい水酸基であり、

rェは 1〜 1 0の整数であり、！：は 1〜50の整数であり、

R i i a〜R i 6 aがそれぞれ複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい）、

但し以下の化合物は除く。

(38) 式（I I a) 〜（I I e) からなる群より選択される少なくとも 1つの式で表される化合物を重合してなるポリマー化合物。

(39) 固相担体および上記（35) 〜（38) のいずれか 1項に記載の化合物を含む複合体。

(40) 上記（35) 〜（38) のいずれか 1項に記載の化合物おょぴ分子 Aを含む複合体。

(41) 固相担体、上記（35) 〜（38) のいずれか 1項に記載の化合物およぴ分子 Aを含む複合体。

図面の簡単な説明

図 1は、親水性スぺーサーを導入することによる、固相担体上での非特異的な分子間相互作用の抑制効果を示すグラフである。固相担体として樹脂を用いた。固相担体おょぴ Zまたは固相担体上の FK 506に吸着する分子のうち 10種を選択し、それぞれの吸着量に及ぼす親水性スぺーサ一の導入の影響を示す。 FK 506に特異的な相互作用を示す F KB P 1 2の吸着量は、親水性スぺーサ一の導入およびへキサエチレンダリコールの繰り返し構造の数に関わらずほぼ一定であつたが、特にパンド 1や 2の吸着量は顕著に減少し、これらのパンドが非特異的な相互作用により FK506結合ァフィユティー樹脂に結合していたこと、および親水性スぺーサ一の導入によりこの非特異的な相互作用を抑制することができたことを示している。横軸は SD S— PAGEのレーンの番号を、縦軸は SD S— P A G Eにおけるパンドのピーク量を相対的に表したものである。

図 2は、固相表面の疎水性と非特異的な相互作用との関係を示したグラフである。縦軸は非特異的な結合に基づくと思われる 6種類のタンパク質の固相表面への結合量を、 SD S— PAGEにおけるパンドのピーク量をもとに相対的に表したものである。横軸は疎水性パラメータ一である CLOGPの値を示す。

発明の詳細な説明

本発明は、特異的な分子間相互作用を解析し、それを利用する技術（上記）において問題視されてきた、非特異的な分子間相互作用（例えばタンパク質の固相担体への非特異的な吸着に代表される）力固相担体における固相表面とタンパク質等の分子との疎水相互作用によるものであるという知見に基づく。従って、本発明は固相担体における固相表面の疎水的性質を調節することによって、当該固相への種々の分子の非特異的な吸着を調節する方法を提供する。

本明細書中、疎水的な性質は、一般的に疎水性パラメーターによって表すことができるが、例えば分配係数、具体的には LOGPによって表すことができる。

LOGPの算出には、簡便には、 CLOGP (化合物の疎水性パラメーターを計算機によつて見積もるソフトによって得られる予測値；例えば Corwin/Leo' s program (CLOGP, Daylight Chemical Information System Co. , Ltd)を使用して計算できる）等が利用されるが、疎水性のパラメータ一は CLOGPに限定されるものではない。定性的に疎水性傾向が強まるにつれて、非特異的な相互作用が増加する。例えば C L O G Pについて言えば、 C L O G Pが大きい程、疎水性が高いことを意味し、 C L O G Pの増加は非特異的な相互作用（例えば固相表面へのタンパク質の非特異的な吸着）の増加と相関関係にある。ここで疎水性パラメ一ターの変化は、例えば固相表面上に固定化する分子（分子 A) を様々な値（例えば C L O G P ) の疎水性パラメーターを有するものに変更することによって実施され得るし、また、固相担体と分子 Aとの間に親水性のスぺーサーを導入することによって、固相表面の疎水的な性質を緩和、低減化することもできる。一方、より疎水的な性質を有するスぺーサーを導入すること等によって疎水性が増し、ひいては非特異的な相互作用が増加する。すなわち、本発明における疎水的性質の「調節」とはその増加ならびに低減化の両方を意図する。

当該スぺーサ一の導入は、 C L O G Pが大きいことが予測されるリガンドを固相に固定化する必要がある場合に好ましい態様であり、以下に非特異的な相互作用を抑制する手段として親水性スぺーサーを用いた場合について詳述する。

本発明は、固相担体に固定化された分子（本明細書中、'分子 Aとも定義し、便宜上リガンドとも称する）と当該分子に対して特異的な相互作用を有する分子

(本明細書中、分子 Bとも定義し、便宜上ターゲット分子とも称する）との相互作用を解析する技術、かかる解析をもとに分子 Bを同定、選別するという技術を提供する。本明細書中、リガンドならびにターゲット分子という用語は、互いに特異的な分子間相互作用を有する組み合わせを意図するものであって、当該組み合わせのうち、片方をリガンドとして固相に固定化すれば他方がターゲット分子となり、すなわちどちらを固相に固定化するかによつて、それらの呼称は変更され得る。分子 Aに特異的な相互作用を有する分子 Bは 1種類とは限らず、また同様に分子 Bに特異的な相互作用を有する分子 Aも 1種類とは限らない。本明細書では分子 Aならびに分子 Bという用語は、互いに異なる物質であることを明確にすべく、便宜上、 Aあるいは Bとの符号を付したものである。ある特定の分子を指すものではなく特異的な相互作用を有する分子同士の各々を意図するものである。又、このような分子 Aと特異的な相互作用を有さない分子は「分子 B以外の分子」と同義である。

「特異的な相互作用」とは、特定のリガンド（特定のターゲット分子）のみを特異的に認識して結合するような特性を発揮する作用であり、ァゴニストあるいはアンタゴニストに対する特異的受容体、基質に対する酵素、そして例えば F K 5 0 6 (リガンド）に対する F K 5 0 6結合タンパク質（ターゲット分子）や、ステロイドホルモンに対するステロイドホルモン受容体（例； dexamathasonと glucocorticoid receptor) _s 抗がん剤 trapoxinに対する H D A C等の関係；^

「特異的な相互作用」に該当する。一方、「非特異的な相互作用」とは、それによる結合の対象が広範にわたり且つ特定分子に限定されず、反応条件によって種々変化するような状況を生じる作用をいい、本発明においては、固相上の分子 Aや固相担体表面に、結合 ·吸着するような不特定の分子間の作用を意味する。「非特異的な相互作用」は、「特異的な相互作用」に基づくリガンドとターゲット分子の結合の障害となるか、あるいは混同されることにより「特異的な相互作用」による結合を見落としてしまう危険性がある。

本発明において「特異的な相互作用を解析する」とは、分子 Aと分子 Bとの間の特異的な相互作用の程度を、相互作用情報として得ることであって、例えば K d (解離速度定数）、 K a (結合速度定数）等の数値として得ることができる。本発明において「選別」とは、上記相互作用情報に基づき、分子 Aと特異的な相互作用を有するか否かを判定し、分子 Bを同定することを意図する。

本発明の非特異的な相互作用を抑制する方法、分子 Aと分子 Bとの特異的な相互作用を解析する方法ならぴに分子 Bを選別する方法においては、固相担体における固相表面の疎水的性質を低減させる処理を必須とする。かかる処理としては、例えば、固相担体への分子 Aの固定化の際にそれらの間に親水性スぺーサーを導入する方法が挙げられる。親水性スぺーサーを導入することにより固相担体表面の疎水的な性質が変化し、非特異的な相互作用を抑制することができる。このような固相担体と分子 Aとの間に導入された親水性スぺーサ一という非特異的な相互作用を抑制する手段を用いることによって、分子 Aに特異的な相互作用を有する分子（ターゲット分子：分子 B ) を同定、選別すること、および両者の相互作用を正確に測定することが可能となる。

本発明において用いられる固相担体は、その上で分子 Aと分子 Bの特異的な相互作用が生じるものであれば特に限定されず、当分野で通常使用されるものが利用でき、その後に実施する分子 Bの同定、選別の工程の為に行われる方法に応じて適宜決定される。材質としては、例えば、樹脂（ポリスチレン、メタクリレート系樹脂、ポリアクリルアミド等）、ガラス、金属（金、銀、鉄、シリコン等）等が用いられる。これらの固相は、いかなる形状のものであってもよく、また上記した材質の種類や、その後に実施する分子 Bとの相互作用の解析、分子 Bの同定、選別の工程の為に行われる方法に応じて適宜決定される。例えば板状、ビーズ状、薄膜状、糸状、コイル状等が挙げられるが、樹脂からなるビーズであればカラムに充填することによりその後の操作を簡便にし、また金属の薄膜であれば表面プラズモン共鳴による B I A C O R E等の担体として好適に使用できる。またガラスプレートを用いることも好適である。

本発明において使用する固相は、上述の如く、その材質や形状に特に制限はないが、当然のことながら、分子 Aが固定化されないような、あるいは分子 Aが固定化されるものの分子 Bとの特異的な相互作用を発揮することができないような構造上の障害を有するものは、余分な工程を経る必要があって操作が煩雑になつたり、あるいは使用に耐えなかったりする場合があるので、本発明を実施する上で好ましくない。

本発明において、「親水性スぺーサ一」とは、分子 Aの固相担体への固定化の際に導入されて固相担体と分子 Aとの間に介在する基となる物質であって、親水性である。親水性の程度については後述する。ここで「スぺーサ一が介在する」とは、該スぺーサ一が固相内の官能基からリガンド内の官能基までの間に存在することを意味する。該スぺーサ一は、その一端を固相内の官能基と結合し、他端をリガンド内の官能基と結合する。

また当該親水性スぺーサ一は、結果的に固相担体と分子 Aとの間に介在する基として機能し得るものであれば 2以上の化合物を順次、結合、重合させることによって得られるものであっても構わない。好ましくは単位化合物の重合反応によつて得られる。 2以上の化合物を結合あるいは重合させる過程は好ましくは固相上で行われる。固相担体と親水性スぺーサ一との結合、親水性スぺーサ一と分子 Aとの結合、ならびに親水性スぺーサーを構成する各成分の結合や重合はアミド結合や、シッフ塩基、 C一 C結合、エステル結合、水素結合、疎水相互作用等の共有結合あるいは非共有結合であり、いずれも当分野で公知の材料ならぴに反応により形成される。 .

本発明において、非特異的な相互作用の抑制手段として固相担体と分子 Aとの間に導入させる親水性スぺーサ一としては、固相担体における固相表面の疎水的な性質を変化させ、非特異的な相互作用を排除するかあるいは抑制するようなものであれば特に限定さないが、好ましくは固相担体および分子 Aと結合した状態（以下、この様な状態にある親水性スぺーサーを便宜上「親水性スぺーサ一部分」と称する）で水素結合ァクセプター（H B A ； hydrogen bond acceptor) 数が 6以上であるか、水素結合ドナー（H B D ； hydrogen bond donor) 数が 5以上であるか、あるいは該スぺーサー 1分子あたりの H B A数おょぴ H B D数の総計が 9以上の化合物である。またこれらの条件を 2つもしくは全て満たすような化合物であってもよい。特に好ましくは H B A数は 9以上であり、 H B D数は 6 以上である。

ここで、水素結合ァクセプター数（H B A数）とは、含まれる窒素原子（N) と酸素原子（O) の総数であり、水素結合ドナー数（H B D数）とは、含まれる NHと O Hの'総数である（C. A. Lipinski et al.， Advanced Drug Delivery Reviews 23 (1997) 3 - 25)。本発明においては、固相担体と分子 Aとの間に介在する基であっても、固相担体に由来する（すなわち固相合成時にあらかじめ導入されており固相担体の一部とみなされるもの） NHや O Hはそれぞれ H B A数や H

B D数に含めない。また、分子 Aと親水性スぺーサ一との結合をより容易にする為に分子 Aと親水性スぺーサ一との間に任意の基を親水性スぺーサ一との結合の前にあらかじめ分子 Aに結合あるいは導入することができるが、これらは分子 A に応じて適宜選択されるものであって、固相担体の疎水的な性質の緩和への寄与が少ないと考えられるので、当該基に含まれる Nや 0、あるいは NHや O Hも本発明における H B D数や H B A数には含めない。尚、分子 Aと親水性スぺーサーの間への任意の基の導入も上述したような種々の共有結合あるいは非共有結合が利用され、いずれも当分野で公知の材料ならびに反応により実施される。

本願発明の状況下では H B A数が 6以上（好ましくは 9以上）、 H B D数が 5 以上（好ましくは 6以上）、 113 数と118 0数の総計が9以上、というこれらの条件を少なくとも 1つ、好ましくは 2つ以上満たさなければ、非特異的な相互作用を十分に抑制することができず、固相担体への非特異的な吸着が生じる。従つて、本願発明の親水性スぺーサ一において「親水性」とは上記の性質を満たすことを意味する。本発明において親水性スぺーサ一の H B D数あるいは H B A数の上限としては、親水性であり且つ非特異的な相互作用を抑制することができるものであれば特に限定されるものではなく、適切に重合反応等を繰り返すことにより極めて高い親水性を有するスぺーサーを得ることができる。また、該スぺ一サ一はタンパク質等の高分子であってもよく、そういった観点から、いずれも 5 万程度の値を上限とする。

また、本発明においては、「親水性」の程度は上記定義を満たすものの物理的 ·化学的に不安定な化合物、例えば糖誘導体ゃセファロース誘導体をその基本骨格とする親水性スぺーサ一は、その不安定さ故にリガンドの固定化、続く種々の処理に耐えられない場合があり使用するのに好ましくない。

さらに本発明において使用する親水性スぺーサ一は、それ自体非特異的な相互作用（例えば該スぺーサ一へのタンパク質の吸着等）を生じるものでないことが好ましい。具体的には、該スぺーサ一が水溶液中で電荷的に陽性あるいは陰性になるような官能基を有さないことであり、当該官能基としてはァミノ基（ただし、該ァミノ基に該ァミノ基の塩基性を減弱させる官能基（例えばカルボエル基、スルホニル基）が結合している場合は除く）、カルボキシル基、硫酸基、硝酸基、ヒドロキサム酸基等が挙げられる。ここで水溶液中とは、具体的には、固相上での分子 Aと分子 Bとの相互作用を解析する過程、分子 Bを選別する過程、あるいは分子 Bをスクリーニングする為に実施される分子 Aと分子 Bとの結合反応（特異的な相互作用に基づいた反応）が行われる環境下であって、親水性スぺーサーが電荷的に陽性あるいは陰性になるような官能基を有する場合にはイオン化するような条件下である。かかる条件は、例えば水溶液中、 p H 1〜 1 1、温度 0 °C 〜； 1 0 0 °Cであり、好ましくは p H中性付近（p H 6〜8 )、約 4 °C〜約 4 0 °C 程度である。

さらに、本発明の親水性スぺーサは、後述する好適な親水性スぺーサ一として例示される各種の構造ないしは化合物から理解されるように、その分子内に 1 以上のカルボ二ル基を有していることが好ましい。

例えば、本発明の親水性スぺーサ一は、下記式（I a ) 〜（I e ) からなる群より選択されるいずれか一つの式で表される部分構造を少なくとも 1つ有する化合物である。

(式（I a) 中、

Aは適当な連結基であり、

Xi Xsはそれぞれ同一または異なって単結合あるいは炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基であり、

R ₇はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、一 C H ₂ O Hあるいは水酸基であり、

mは 0〜2の整数であり、 m，は 0〜1 0の整数であり、 m" は 0〜 2の整数であり、

nおよび n，はそれぞれ同一または異なって 1〜 1000の整数であり；式（I c) 中、

, ρ ' および ρ" はそれぞれ同一または異なって 1〜1000の整数であり；式（I d) 中、

R ₈〜 R i 0はそれぞれ同一または異なつて水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、一 C H ₂ O Hあるいは水酸基であり、

qは 1〜 7の整数であり、

式（I e) 中、

R i i〜R i ₆はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、一 CH₂OHあるいは水酸基であり、

rは 1〜 1 0の整数であり、 r，は 1〜 50の整数であり、

R i i ₆がそれぞれ複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい）

本明細書において各基の定義中、「適当な連結基」とは隣接する各々の部位を連結することができる基であれば特に限定されないが、具体的には以下の基が用いられる。

0

-C(R₂₄)=C(R₂₅)- I pI— o- または

0 I

(式中、 R ₇は水素原子または炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基であり、 R₁₈〜R₂₁はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数 1〜3 の直鎖状または分枝状のアルキル基、一 CH₂OHあるいは水酸基であり、 R₂₂ 〜： ₂₆はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基（該アルキル基は水酸基、カルボン酸基、ア o= op—— ミノ基等の親水性置換基で置換されていてもよい）である） N R I一

一 6

本明細書において各基の定義中「炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基」としては、例えば、メチル基、ェチル基、プロピル基、イソプロピル基等が挙げられる。

本明細書において、「炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基」とは無置換のメチレン基ならびに上記した炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基で 1または 2置換されたメチレン基を意図する。

式（I a) 中、好ましい連結基 Aとしては、

(好ましくは ₇は水素原子）であって、好ましい X ;L〜X ₃はそれぞれ単結合であって、好ま

はそれぞれ水素原子であって、好ましい mは 0〜 2の整数であり、好ましい m，は 0〜 2の整数であり、好ましい m" は 0〜 2の整数である。

式（l b ) 中、好ましい nおよび η，はそれぞれ 1〜5 0の整数であり、より好ましくはそれぞれ 1〜 5の整数であり、特に好ましくは等しく 1〜5の整数であり、いっそう好ましくは等しく 5である。

式（I c ) 中、好ましい ρ、 ρ，、 ρ " はそれぞれ 1〜 5 0の整数であり、より好ましくはそれぞれ 1〜5の整数であり、特に好ましくは等しく 1〜5の整数であり、いっそう好ましくは等しく 5である。

式（I d ) 中、好ましい X ₄は単結合であり、好ましい R ₈〜R ₁。はそれぞれ水素原子であって、好ましい qは 1〜4の整数であって、特に好ましくは 4である。

式（I e ) 中、好ましい〜：^は水素原子であって、好ましい rは 1であって、好ましい r，は 1〜5 0の整数であり、より好ましくは 1〜5の整数であって、特に好ましくは 5である。

本発明の親水性スぺーサ一は、上記部分構造を 2つ以上有していてもよく、その場合それらの部分構造は同一の式で表されるものであっても異なる式で表されるものであってもよい。

上記親水性スぺーサーを少なくとも 1種固相担体に固定化する。固相担体上のスぺーサ一の数は特に限定されず、分子 Aの種類や量おょぴ分子 Bの種類や量、ならびに使用するスぺーサ一の種類や特性に応じて当業者は適宜設定することができるし、所望の分子間相互作用が検出できれば特に決める必要はない。通常、固相ならびに分子 Aに対して過剰量の親水性スぺーサーを用いて固定化する。固相担体に結合しなかった親水性スぺーサ一は、固相担体の洗浄等の処理により反応系から容易に排除できる。

本発明において固相担体に固定化する分子 A (リガンド）は特に限定されず、公知の化合物であっても今後開発される新規な化合物であってもよい。また、低分子化合物であっても高分子化合物であってもかまわない。ここで低分子化合物とは分子量 1 0 0 0未満程度の化合物であって、例えば医薬品として通常使用し得る有機化合物およびその誘導体や無機化合物が挙げられ、有機合成法等を駆使して製造される化合物やその誘導体、天然由来の化合物やその誘導体、プロモーター等の小さな核酸分子や各種の金属等であり、望ましくは医薬品として使用し得る有機化合物およびその誘導体、核酸分子をいう。また、高分子化合物としては分子量 1 0 0 0以上程度の化合物であって、タンパク質、ポリ核酸類、多糖類、およびこれらを組み合わせたものなどが挙げられ、望ましくはタンパク質である。これらの低分子化合物あるいは高分子化合物は、公知のものであれば商業的に入手可能であるか、各報告文献に従って採取、製造、精製等の工程を経て得ることができる。これらは、天然由来であっても、また遺伝子工学的に調製されるものであってもよく、また半合成等によっても得ることができる。

本発明では、上記分子 Aを固定化した固相上で該分子 Aとの特異的な相互作用に基づいて分子 Bを選別する過程を要する。従って分子 Bは、分子 Aと特異的に相互作用するものであれば特に限定されるものではなく、公知化合物である場合もあれば新規物質である場合も予想される。分子 Bとしては低分子化合物であつても高分子化合物であってもかまわない。分子 Bが低分子化合物の場合には、低分子化合物である分子 Aとの低分子化合物と低分子化合物との特異的な相互作用に基づき、あるいは高分子化合物である分子 Aとの高分子化合物と低分子化合物との特異的な相互作用に基づき、分子 Bが選別され得る。また分子 Bが高分子化合物の場合には、低分子化合物である分子 Aとの低分子化合物と高分子化合物との特異的な相互作用に基づき、あるいは高分子化合物である分子 Aとの高分子化合物と高分子化合物との特異的な相互作用に基づき、分子 Bが選別され得る。好ましい分子 Aと分子 Bの組み合わせは低分子化合物と高分子化合物、あるいは高分子化合物と高分子化合物という組み合わせである。

分子 Aの分子 Bとの相互作用の解析、ならびに分子 Bの選別は簡便には固相上で行う。分子 Bとして予め候補物質が予測される場合には、候補物質を単独で上記固相に固定化された分子 Aと接触させ両者の相互作用を測定し、候補物質が分子 Bであるか否か、すなわち分子 Aのターゲット分子であるか否かを判断すればよいが、通常、複数の物質（高分子化合物および/または低分子化合物）を含む試料を分子 Aと接触させ、複数の物質（高分子化合物および/または低分子化合物）の各々と分子 Aとの相互作用の有無ならびにその相互作用の程度を測定することにより分子 Bであるか否かを判断し、選別する。ここで複数の物質を含む試料としては、全て公知化合物から構成されるものであっても、一部新規な化合物を含むものであっても、さらには全て新規な化合物から構成されるものであってもよい。しかしながら、リガンドのターゲット分子の探索、あるいは昨今のプロテオーム解析の進歩によれば、全てその構造が公知な化合物の混合物であることが望ましい。全て公知な化合物から構成される試料としては、大腸菌等によって遺伝子工学的に調製されたタンパク質の混合物等であり、一部新規な化合物を含むものとしては、細胞や組織の抽出物（Lysate) であり、また全て新規な化合物から構成されるものとしては、まだその機能や構造が知られていない新規なタンパク質や新しく合成された化合物等の混合物が挙げられる。試料が混合物の場合、特に公知化合物を含む場合には、任意にこれらの化合物の試料中の含有量を所望の値に設定しておくこともできる。リガンドのターゲット分子の探索という見地にたてば、選別すべき分子 Bは、低分子化合物ならびに高分子化合物であるのが好ましく、ヒト等の動物体内でのターゲット分子の探索についていえば高分子化合物であることが好ましい。

本発明は、上記固相に固定化された分子 Aを用いて、当該分子 Aに特異的な相互作用を有する分子 Bをスクリーニングする方法を提供する。該スクリーユング方法は以下の工程を少なくとも含む。尚、本スクリーニング法における、分子 A および分子 Bや固相担体、ならびに親水性スぺーサ一の各々の定義は上記した通りである。

( 1 ) 分子 Aを固相担体に親水性スぺーサーを介して固定化する工程。

当該工程は、分子 Aと親水性スぺーサ一との結合、親水性スぺーサ一と固相担 P T/JP2003/009640 体との結合からなる。分子 Aに親水性スぺーサーを結合させて、その後それらの複合体を固相担体に結合させてもよいし、固相担体に親水性スぺーサーを結合させてから分子 Aを結合させてもよく、分子 Aが固相担体に固定化されたか否かは、分子 A、あるいは分子 Aに予め結合 ·導入された任意の基に含まれるある特定の構造乃至置換基等に基づく呈色反応等を利用して確認することができる。例えばアミノ基を認識する-ンヒドリン反応等が利用できる。個々の結合は、通常当分野で実施される反応を利用して実施される。簡便且つ確実な手段としてアミド結合形成反応を利用する方法が挙げられる。本反応は、例えば「ペプチド合成の基礎と実験」（ISBN 4 - 621 - 02962 - 2、丸善、昭和 60年初版）に従って実施できる。各反応に用いられる試薬や溶媒については当分野で通常用いられるものが利用でき、採用する結合反応によって適宜選択される。

( 2 ) 分子 Bを含むかまたは含まない試料を上記（1 ) で得られた分子 Aが固定化された固相担体に接触させる工程。

本工程において用いる試料は、上記同様、複数の物質を含むものである。その態様は特に限定されず、使用する固相担体や後の工程（3 ) および（4 ) の同定方法あるいは解析方法にどのような原理や手段、方法を用いるかによつて適宜変更し得る。例えば分子 Aが固定化されたビーズ樹脂を充填 Lたカラムを用いる場合には液状とするのが好ましい。分子 Bを含まない試料であれば、工程（3 ) で分子 Aに特異的な相互作用を示さなかった分子（複数種存在する場合あり）の同定ならびに解析を行う。分子 Bを含む試料であれば、工程（3 ) で分子 Aに特異的な相互作用を示した分子 B (複数種存在する場合あり）を同定、解析する。試料と固相担体とを接触させる方法は、試料内の分子 Bが固相担体に固定化された分子 Aと結合することができれば特に限定されず、使用する固相担体や後の工程

( 3 ) および（4 ) の同定方法あるいは解析方法にどのような原理や手段、方法を用いるかによつて適宜変更し得る。例えば分子 Aが固定化されたビーズ樹脂を充填した力ラムを用いる場合には、液状にした試料を力ラムに添加しカラム内を通すことにより簡便に実施される。 ( 3 ) 分子 Aに特異的な相互作用を示したか、まだは示さなかった分子を同定し、解析する工程。

かかる工程は、使用する固相担体や固定化した分子 Aの種類等によつて適宜変更し得るが、通常当分野で実施されている低分子化合物あるいは高分子化合物を同定する為の各種方法により行う。また、今後開発されるであろう方法によっても実施可能であろう。例えば分子 Aが固定化された固相担体として分子 Aが固定化されたビーズ樹脂を充填してなるカラムを用いた場合〔工程（1 )〕、続く試料の添加により〔工程（2 )〕、分子 Aに分子 Bを結合させる。結合した分子 Bを緩衝液の極性を変える、あるいは過剰の分子 Aをさらに加える等の処理によって分子 Aから解離させ、その後同定したり、あるいは固相上の分子 Aと結合した状態でそのまま界面活性剤等によって抽出して同定したりすることもできる。同定方法としては具体的には電気泳動法、免疫学的反応を用いたィムノプロッティングや免疫沈降法、クロマトグラフィー、マススペクトラム、アミノ酸シーケンス、 NMR (低分子のときに特に）等の公知の手法により、またこれらの方法を組み合わせて実施する。分子 Aに結合しない分子を同定する工程も上記分子 Aに結合する分子を同定する方法に準じて行うことができるが、力ラムの素通り画分に含まれる分子を同定の対象とするので、同定工程に入る前に予め濃縮や粗精製等の処理を行うことが好ましい。得られたデータならびに既存の報告をもとに各分子を同定し、分子 Aのターゲット分子であるか否かを判断する。

また、本工程は自動化されていてもよい。例えば 2次元電気泳動で得られた種々の分子のデータを直接読み取り、既存のデータベースに基づいて分子の同定を行うことも可能である。

本発明はさらに上記親水性スぺ一サ一として好適な化合物、当該化合物と固相担体との複合体、当該化合物と分子 Aとの複合体、ならびに当該化合物、固相担体おょぴ分子 Aとの複合体を提供する。当該化合物としては下記の一般式（I I a ) 〜（ I I e ) で表される化合物（以下、本発明のモノマー成分とも称する）およびそれらの重合体（以下、本発明のポリマーあるいはポリマ一化合物とも称する）が挙げられる,

{式（I I a) 中、

Y aは水素原子またはァミノ基の保護基であり、

Z aは水素原子または力ルポキシル基の保護基であり、

Bは適当な連結基であり、 X i _a〜 X _{3 a}はそれぞれ同一または異なって単結合あるいは炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基であり.、

R i _a〜R _{7 a}はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、一 CH₂OH (式中、水酸基は保護されていてもよレ、）あるいは保護されていてもよい水酸基であり、

は 0〜2の整数であり、 1^，は 0〜1 0の整数であり、 m " は 0〜 2の整数であり、

R_3a〜R_7aが複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、

X_3aが複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい；式（ I I b) 中、

Y bは水素原子またはァミノ基の保護基であり、

Z bは水素原子または力ルポキシル基の保護基であり、

11 および n はそれぞれ同一または異なって 1〜1 000の整数であり；式（I I c) 中、

¥ 0ぉょぴ丫（ ' はそれぞれ同一または異なって水素原子またはァミノ基の保護基であり、

Z cは水素原子または力ルポキシル基の保護基であり、

pいおよび r^" はそれぞれ同一または異なって 1〜1000の整数であり

式（ I I d) 中、

Y dは水素原子またはァミノ基の保護基であり、

Z dは水素原子または力ルポキシル基の保護基であり、

W dは水素原子または水酸基の保護基であり、

R _{8 a}〜 R i。 _aはそれぞれ同一または異なつて水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、 _CH₂OH (式中、水酸基は保護されていてもよい）あるいは保護されていてもよい水酸基であり、

q は 1〜 7の整数であり、

R_8aが複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、 X_4aが複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい；

式（ I I e) 中、

Y eは水素原子またはァミノ基の保護基であり、

Z eは水素原子またはカルボキシル基の保護基であり、

R i a〜R i 6 aはそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、一 CH₂OH (式中、水酸基は保護されていてもよい）および保護されていてもよい水酸基であり、

r は 1〜 1 0の整数であり、は 1〜50の整数であり

Rua Ri 6 _aがそれぞれ複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい }'

各式の基の定義中「適当な連結基」、「炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のァルキル基」および「炭素数 1〜3の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基」の意味するところは上述の通りである。

式（I I a) 中、好ましい連結基 Bとしては、

(好ましくは ₇は水素原子）

であって、好ましい X_{l a}〜X_3aはそれぞれ単結合であって、好ましい R_{l a}〜

R_7aはそれぞれ水素原子であって、好ましい miは 0〜2の整数であり、好ましい in は 0〜 2の整数であり、好ましい m ' は 0〜 2の整数である。

式（I I b) 中、好ましいおよびはそれぞれ 1〜50の整数であり、より好ましくはそれぞれ 1〜 5の整数であり、特に好ましくは等しく 1〜 5の整数であり、いっそう好ましくは等しく 5である。式（I I c ) 中、好ましい！）いはそれぞれ 1〜 5 0の整数であり、より好ましくは 1〜 5の整数であり、特に好ましくは等しく 1〜 5の整数であり、いっそう好ましくは等しく 5である。

式（I I d ) 中、好ましい X _{4 a}は単結合であり、好ましい R _{8 a}〜R _{1 0 a}はそれぞれ水素原子であって、好ましい a は 1〜4の整数であって、特に好ましくは 4である。

式（I I e ) 中、好ましい R _{l l a}〜R _{1 6 a}は水素原子であって、好ましい _{Γ ι} は 1であって、好ましい r は 1〜5 0の整数であり、より好ましくは 1〜5 の整数であって、特に好ましくは 5である。

各式の基の定義中の「ァミノ基の保護基」、「力ルポキシル基の保護基」あるいは「水酸基の保護基」は、種々の重合反応や、そめ後に続くリガンド等との結合を実施するのに好適なものが選択される。「ァミノ基の保護基」としては、 t e r tープトキシカルポニル基、メトキシカルポニル基等の低級アルコキシ力ルポニル基；ベンジルォキシカルボニル基等のァラルキルォキシカルボニル基；ベンジル基等のァラルキル基；ベンゼンスルホ-ル基、 p―トルエンスルホニル基、メタンスルホニル基等の置換スルホエル基などが例示される。「力ルポキシル基の保護基」としては、メチル基、ェチル基、プロピル基、プチル基、イソブチル基等の炭素数 1〜 6の直鎖状もしくは分枝状の低級アルキル基；ベンジル基等のァラルキル基などが例示される。「水酸基の保護基」としては、ァセチル基、プ口ピオニル基、ピパロイル基、ベンゾィル基等のァシル基；メトキシカルボュル基、 t e r t—プトキシカルボ-ル基等のアルコキシカルボニル基；ベンジルォキシカルボニル基等のァラルキルォキシ力ルポニル基；ベンジル基、ナフチルメチル基等のァリールメチル基；トリメチルシリル基、トリェチルシリル基、ベンジルジメチルシリル基、 t e r t—プチルジフエニルシリル基等のシリル基；ェトキシメチル基、メトキシメチル基等の低級アルコキシメチル基などを例示することができる。適当な保護基のリストとして、例えば公知文献「有機合成におけ保護 (Protective Groups in Organic Syntnesisノ， Τ· W. Green and P. G. M. Wuts, (John Wiley & Sons, Inc. ) j が挙げられる。

化合物中に複数の「ァミノ基の保護基」、「カルボキシル基の保護基」および Z または「水酸基の保護基」が存在する場合には、それぞれ同〜のものであってもよく、保護の必要な部位に応じて適宜選択される。それ以外の各記号の定義は上述の通りである。

尚、下記の化合物は C A S番号が付された化合物であるが、固相担体における固相表面の疎水性性質を低減させる為の親水性スぺーサ一としての有用性については全く知られていない。

CAS No. 2526-81-3

以下に本発明のモノマー成分あるいはその誘導体の一般的製法について記載するが、記載される以外の通常当分野で実施される方法、あるいはそれらの方法を組み合わせた方法によっても又製造し得ることは当業者には明らかである。尚、本明細書で使用する略語は下記の通りである。

略正式名称

A c ァセチル基

AET アミノエチノレタータリックジアミド

AMT アミノメチルタ一タリックジァミド

B n ベンジノレ基

B u₃P トリプチルフォスフィン

CD I 1， 1，一力ルポ-ルジィミダゾール

D ABT ジハイドロキシァミノプチルタータリックァシッド

DBU 1， 8—ジァザビシクロ [5. 4. 0] ゥンデカー 7—ェン

DMAP ジメチルァミノピリジン

DME 1, 2—ジメトキシェタン

DMF ジメチルホルムアミド

ED C 1ー [3— （ジメチルァミノ）プロピル] 一

3一ェチルカルポジィミド

E t ェチル基

F m o c 9—フノレオレニノレメチルォキシカノレポニル基 F m o c OS u 9ーフノレォレ-ノレメチノレスクシンィミジノレ力ルポネート

Go l d

f o i l

HOB t 1ーヒドロキシベンゾトリァゾーノレ

Hy T ヒドラジノタータリックアミド

Me メチル基

NMP N—メチルー 2—ピロリドン

PEG ポリエチレングリコ一ノレ

P h₃P トリフエ二/レフォスフィン

P y B O P ベンゾトリァゾ一/レー 1一イノレーォキシ一トリス一ピロリジノーホスホニゥムへキサフノレ才ロホスフエ一ト

TB AF フッ化テトラプチルアンモニゥム

TBDMS t一プチ/レジメチルシリル基

TBDMS OT f トリフノレオロメタンス /レホン酸 t一プチノレジメチルシリル基

TBD P S t一プチルジフヱュルシリル基

TB S t一プチルジメチルシリル基

t B u t一プチル基

TF A トリフルォロ酢酸，

THF テトラヒドロフラン TMAD N, N, N' ーテトラメチルァゾジカルポキサミ

TOYO P e a r l

r e s ' n TOYOパ -ル樹

T r トリチル基

T s トシル基（トルエンスルホニル基）

WS C 水溶性カルボジイミド（N—ェチルー N， ―

( 3，ージメチルァミノプロピル）カルポジィミド）製法 1 ：一般式（ I I a ) の製造方法（ 1 )

！ = 1 , χα._χ '— 2 , m _χ " = 1； Nド

w 3ヽ, w

O一 3\,

ルボキシル基の保護

la X カ

2a la 2a

HOOC— C—— C— COOH Z OOC" -C— COOH

R_n l_aa R ^.2a ^Rla ^R2a

(a-3) (a-4)

カルボキシ基の脱保護

式中、 Wi〜W₄は水酸基の保護基であり、 z iは力ルポキシル基の保護基であり、はアミノ基の保護基である。 x_3a,は x_3aと同義であり、また x_3a„も

X_3aと同義である。 R_5a,は R_5aと同義であり、また R_5a "も R_5aと同義である, またそれ以外の各記号の定義は上述の通りである。水酸基の保護基としては、当分野で通常用いられている任意の各基が用いられるが、具体的には、 t e r t—プチル基等のアルキル基；ァセチル基、プロピオニル基、ピパロイル基、ベンゾィル基等のァシル基；メトキシカルボ-ル基、 t e r tープトキシカルボニル基等のアルコキシカルボ-ル基；ベンジルォキシカルポニル基等のァラルキルォキシカルボニル基；ベンジル基、ナフチルメチル基等のァリールメチル基；トリメチルシリル基、トリェチルシリル基、 t e r t— プチルジメチルシリル基、 t e r t—ブチルジフエエルシリル基等のシリル基；ェトキシメチル基、メトキシメチル基等の低級アルコキシメチル基などが例示され、好ましくは、 t e r t—プチノレジメチルシリル基、 t e r t—プチルジフエニルシリル基、メトキシメチル基、 t e r t—プチル基が挙げられる。カルボキシル基の保護基としては、当分野で通常用いられている任意の各基が用いられるが、具体的には、メチル基、ェチル基、プロピル基、 t—プチル基、イソプチル基、ァリル基等の炭素数 1〜 6の直鎖状もしくは分枝状の低級アルキル基；ベンジル基等のァラルキル基； t e r t —プチルジメチルシリル基、 t e r t—プチルジフエエルシリル基等のシリル基などが例示され、好ましくは、ァリル基、 t e r t一プチル基、ベンジル基、 t e r t—プチルジフエニルシリル基が挙げられる。ァミノ基の保護基としては、当分野で通常用いられている任意の各基が用いられるが、具体的には、 t e r t—プトキシカルポュル基、メトキシカルボ- ル基等の低級アルコキシカルボエル基；ベンジルォキシカルボ-ル基等のァラルキルォキシ力ルポニル基；ベンジル基等のァラルキル基；ベンゼンスルホュル基、 -トルエンスルホニル基、メタンスルホニル基等の置換スルホニル基などが例示され、好ましくは、 t e r t—プトキシカルポニル基、ベンジノレオキシカルポニル基が挙げられる。

ァミノ基の保護および脱保護、カルボキシル基の保護および脱保護、および水酸基の脱保護は使用する保護基に応じて適宜公知の方法および試薬によつて実施される。

化合物（a— 4 ) および化合物（a— 2 ) をアミド化によって脱水縮合する反応は、通常、等量のァミノ体とカルボン酸の存在下、 1 · 1当量程度の N—ェチルー N，ージメチルァミノカルポジイミド、 N—ヒドロキシ一べンゾトリァゾール等の縮合剤をN H用いて、 DMFや塩化メチレン等の溶媒中で、室温下 1時間から 1 0時間程度反応させることによって行なわれる。

製法 2 ：—般式（I I a ) の製造方法（2)

、1^= 2， m , ' = 0 , m-i "— 2 j

B = ― c-

式中、 Y₂はアミノ基の保護基である。 R_{3 a},は R_3aと同義であり、また R_3a„も R_{3 a}と同義である。 R_4a,は R_4aと同義であり、また R_4a„も R_4aと同義である。 R_6a,は R_6aと同義であり、また R_{6 a}„も R_6aと同義である。 R_7a, は R_7aと同義であり、また: _7a„も R_7aと同義である。それ以外の各記号の定義は上述の通りである。ァミノ基の保護基としては、上記したものと同様のものが例示される。

ァミノ基の脱保護は使用する保護基によつて適宜公知の方法および試薬によつて実施される。

化合物（a— 9) および化合物（a— 1 0) をアミド化によって脱水縮合する反応は、通常、等量のァミノ体とカルボン酸の存在下、 1. 1当量程度の N—ェチル一 N' —ジメチルァミノカルポジイミド、および N—ヒドロキシ一べンゾトリアゾール等の縮合剤を用いて、 DMFや塩化メチレン等の溶媒中で、室温下 1 時間から 10時間程度反応させることによって行なわれる。

製法 3 ：—般式（I I a) の製造方法（3)

(ni! = 1 , m _x ' = 0 , m -L " = 0 )

H₂N― C- ■NH₂

Υ₃一 Ν一 C' ΝΗ₂

R3a ァミノ基の保護

R_3E (a-14)

(a-13)

式中、 Y₃はアミノ基の保護基であり、それ以外の各記号の定義は上述の通りである。ァミノ基の保護基としては、上記したものと同様のものが例示される。化合物（a— 14) および化合物（a— 1 5)をアミド化によって脱水縮合する反応は、通常、等量のァミノ体とカルボン酸の存在下、 1. 1当量程度の N—ェチルー N' —ジメチルァミノカルポジイミド、および N—ヒドロキシ一べンゾトリアゾール等の縮合剤を用いて、 DMFや塩化メチレン等の溶媒中で、室温下 1 時間から 10時間程度反応させることによって行なわれる。

製法 4 ：一般式（l i b) の製造方法 (n i— 1 n 1 =n ₂)

ゲン置換反応

(b-5)

(b-6) + (b-2)

(b-5)との縮合反応

式中、 W₅〜W₇は水酸基の保護基であり、 Ha 1はハロゲン原子（塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、フッ素原子）を表し、それ以外の各記号の定義は上述の通りである。水酸基の保護基としては、上記したものと同様のものが例示される。尚 n ₂は、 n 1あるいは n '一 1である（nい n 'は上述のとおり）。

水酸基の保護、脱保護は使用する保護基によつて適宜公知の方法およぴ試薬によって実施される。

化合物（b— 4 ) の化合物（b— 5 ) へのハロゲン置換反応は、通常、 1当量のアルコール体に 2〜 3当量の四臭化炭素、および 1〜 2当量のトリフエ-ルフォスフィンを塩化メチレン等の溶媒中、 0 °C〜室温で、 1時間から数時間反応させることによって行なわれる。

化合物（b— 6 ) と化合物（b— 2 ) との脱水縮合反応は、通常、 1当量のァルコール体と 1当量のトリプチルフォスフィンをトルエン溶媒中室温で 1時間程度反応を行い、ここに 1当量のフエノール体おょぴ 1 , 1 ' ーァゾビス（N, N ージメチルホルムアミド）等の縮合剤を加え、 0〜 5 0 °Cで数時間から終夜で反応させることによって行なわれる。

化合物（b— 8 ) と化合物（b— 5 ) との縮合反応は、通常、 0〜1 0 °Cにおいて、 1当量のフエノール体と約 1 0倍当量の過剰の水素化ナトリゥムのような強塩基を T H F等の溶媒中、 1 0〜6 0分程度反応させ、そこに 2当量程度のハロゲン体を加え、室温下 1〜1 0時間程度反応させることによって行なわれる。

(b-9) 水酸基の脱保護 (b-10)

(b-16) カルボキシル基の脱保護 (b-15) ァミノ基の脱保護

(b - 17)

式中、 W₆〜W₇は水酸基の保護基であり、 A 1 kは炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基（上述と同義）、 Y ₄はアミノ基の保護基であり、それ以外の各記号の定義は上述の通りである。水酸基の保護基おょぴァミノ基の保護基としては、上記したものと同様のものが例示される。

水酸基あるいはァミノ基の脱保護、もしくは力ルポキシル基の脱保護は使用する保護基によつて適宜公知の方法およぴ試薬によつて実施される。

化合物（b— 1 0 ) の化合物（b— 1 1 ) へのアルコキシカルボニル化は、通常、 0〜 1 0 °Cにおいて、 1当量のアルコール体と 3〜 5倍当量程度の過剰の水素化ナトリウムのような強塩基を THF等の溶媒中、 10〜60分程度反応させ、そこに 3〜 5倍当量程度の過剰のハロゲン体（プロモ酢酸一 t e r t一プチルェステル）を加え、室温下 1〜10時間程度反応させることによって行なわれる。化合物（b— 12) の化合物（b— 13) へのアジド化は、通常、 1当量のァルコール体と 1. 5当量程度の p—トルエンスルフォユルク口ライドおよび 0. 2当量程度の 4 -ジメチルァミノピリジンのような塩基をピリジン等の溶媒中、 30〜50°Cで、数時間反応させることによって得られる O—トシル体を単離し、それに約 10倍当量程度の過剰のアジ化ナトリゥムを加え、 DMF等の溶媒中、 50〜90°Cで数時間反応させることにより行なわれる。

化合物（b— 13) の化合物（b— 14) へのアミノ化は、通常、 1·当量のァジド体を、 0. 1当量程度の水酸化パラジウムのような触媒を用いてメタノール等の溶媒存在下、 1〜数気圧の水素存在下、室温で数時間反応させることによつて得られる。

製法 5 ：一般式（l i e) の製造方法

各構造式中、特定の基、特定の化合物を記載する場合があるが、それらは一例であって、特に限定されるものではない。同等の働きを有するものであれば適宜変更し得る。

(C-8)

(C-12)

(C-13) アジド化（G-¹⁴)

(C-15)

(C-16) (He)

式中、各記号の定義は上述の通りである。式中の水酸基の保護基、ァミノ基の保護基、力ルポキシル基の保護基はその一例を示したものであって、それ以外にも通常当分野で用いられる任意の各基が用いられる。具体的には上記したものと同様なものが例示される。ァミノ基の保護、カルボキシル基の脱保護、およぴ水酸基の保護ならびに脱保護の方法は、本明細書に記載する以外にも、使用する保護基に応じて適宜公知の方法およぴ試薬によって実施され得ることは当業者には明らかであろう。

化合物（c一 1 ) の化合物（c一 2 ) への水酸基の保護は、例えば保護基として T B Sを使用する場合には、通常、 1当量のフエノール体、 3当量程度の塩基

(例えばイミダゾール）および 2当量程度のシリルクロライドを、 D M F等の溶媒中で、室温で 1 0時間程度反応させることによって行なわれる。

化合物（c一 2 ) と化合物（c一 4 ) との脱水縮合反応は、通常、 1当量のァルコール体と 1当量のトリプチルフォスフィンとをトルエン溶媒中室温で 1時間程度反応を行い、ここに 1 . 3当量のフヱノール体おょぴ 1 . 3当量の 1 ， 1 ，ーァゾビス（N， N—ジメチルホルムアミド）等の縮合剤を加え、室温で数時間から終夜反応させることによって行なわれる。 03009640 化合物（c一 7) の化合物（c一 8) への水酸基の脱保護は、通常、 1当量のフエノールの保護体（例えばシリル保護体）、 1. 2当量程度のテトラプチルァンモ -ゥムフルオラィドを THF等の溶媒中で、室温で 1時間程度反応させることによつて行う。

化合物（c一 8) と化合物（c一 6) との縮合反応は、通常、室温で 1当量のフエノール体と約 5. 2当量の過剰の水素化ナトリゥムのような強塩基を THF や DMF等の溶媒中で、 10〜60分程度反応させ、そこに 4当量程度のハロゲン化物（例えばアルキルプロマイド）を加え、室温で約 4時間程度反応させることによって行われる。この縮合反応によって化合物（c一 9) が得られる。

化合物（c一 9) の化合物（c一 10) への水酸基の脱保護は、通常、 1当量のフエノール保護体（例えばトリチル保護体）を、 TF Aを含む塩化メチレン等の溶媒中で、室温で約 1時間程度反応させることによって行なわれる。

化合物（c一 10) の化合物（c一 1 1) への水酸基の保護は、例えば保護基として t e r t—プトキシカルポ二ル基を使用する場合には、通常、 1当量のァルコール体、約 4当量の水素化ナトリウム等の強塩基、約 4当量のプロモ酢酸 t e r t一プチルエステルを、 THFや DMF等の溶媒中で、室温で約 4時間程度反応させることによって行われる。 '

化合物（c一 1 1) の化合物 (c一 12) への水酸基の脱保護は、通常、 1当量のフエノール保護体（例えばべンジル保護体）、触媒量の水酸化パラジウムを、水素ガス雰囲気下、メタノール等の溶媒中で、室温で約 6時間程度反応させることによって行なわれる。

化合物（c一 12) の化合物（c一 13) への水酸基の保護は、例えば保護基として T sを使用する場合には、通常、 1当量のアルコール体、触媒量の DMA

P等の塩基、約 6当量のトシルク口ライドを、ピリジン等の溶媒中で、室温〜 4 0°Cで約 2時間程度反応させることによって行われる。

化合物（c一 1 3) の化合物（c一 14) へのアジド化は、 1当量のトシル体、約 1 5当量のアジ化ナトリウムを、 DMF等の溶媒中で、約 60°C、約 2時間程度反応させることによって行われる。

化合物（c一 14) の化合物（c一 1 5) へのアミノ化および、化合物（C一 16) へのアミノ基の保護基の導入は、通常、 1当量のフエノール保護体（ベンジル保護体）、触媒量の水酸化パラジウムを水素ガス雰囲気下、メタノール等の溶媒中で、室温で約 1時間程度反応させることによって得られるアミン体（c— 1 5) に、約 0. 84当量の炭酸 9一フルォレ-ルメチルスクシンィミジル、約 1. 5当量のトリェチルァミンのような塩基を加え、 THF等の溶媒中で、室温で約 1時間程度反応させることによって行われる。

化合物（c一 1 6) の化合物（l i e) への力ルポキシル基の脱保護は、通常、 1当量のフエノール保護体（例えば t一プチル保護体）を TFAを含む水溶液中で、室温、約 1 0時間程度反応させることによって行われる。

製法 6 ：一般式（I I d) の製造方法

(1^。₃ = ₉₃=水素原子， R_{8 a}=水素原子， X_4a=単結合）

水酸基の保護水酸基の脱保護

カルボキシル化式中 w₈は水酸基の保護基であり、他の記号の定義は上述の通りである。水酸基の保護基としては上記したものと同様なものが例示される。水酸基の脱保護は JP2003/009640 使用する保護基に応じて適宜公知の方法おょぴ試薬によって実施される。

化合物（d— 4) から目的化合物（I I d) へのカルボキシル化は、通常、 1 当量のアルコール体を、 10当量の過ヨウ素酸ナトリウム、 0. 4当量程度の塩化ルテニウム水和物（I I I) のような酸化剤を水、ァセトニトリル、ジクロロメタン等の溶媒存在下、室温で数時間反応させることによって得られる。

製法 7 ：一般式（l i e) の製造方法（ 1 )

R=TBDMS-

(He)

水酸基の保護基、ァミノ基の保護基としては上記したものと同様なものが例示される。水酸基の脱保護は使用する保護基によって適宜公知の方法および試薬によって実施される。

化合物（e— 2) の化合物（e— 3) へのカルボ-ル基の還元反応は 1. 2当量程度の Na BH₄のような還元剤をメタノール等の溶媒中で反応させ、引き続きアジド基の還元反応（ァミノ化）は、通常、 1当量のアジド体を、 0. 1当量程度の水酸化パラジウムのような触媒をメタノール等の溶媒存在下、 1〜数気圧の水素存在下、室温で数時間反応させることによって行う。

化合物（e— 3) の化合物（e— 4) への水酸基の脱保護は 1 N水酸化ナトリゥム等のアルカリをジォキサン、水等の混合溶媒中で反応させ、引き続きァミノ基の保護は（c一 1 5) から（c一 16) と同様な反応により行うことが出来る。化合物（e— 4) の化合物（e— 5) への水酸基の保護は、例えば、 20当量程度の TBDMS— OT f を 2, 6— Lu t i d i n e等の存在下反応させることにより行うことが出来る。

化合物（e— 5) の化合物（l i e) への水酸基の脱保護は 1 0%ギ酸/ジクロロメタンと反応させ、引き続きアルコールの酸化は化合物（d— 4) ら化合物（I I d) への反応と同様にして行うことが出来る。

製法 8 ：—般式（I I e) の製造方法（2)

(R_{13 a}〜R_{16 a} = H, R_{l l a}二 H， R_12a = H, _{Γ ι}= 1)

水酸基の保護

(e (e-7) アジド化

ァミノ基の保護

(He)

(e-8)

力ルポキシル基の脱保護

(He) 式中、各記号の定義は上述の通りである。式中の水酸基の保護基、ァミノ基の保護基、カルボキシル基の保護基はその一例を示したものであって、それ以外にも通常当分野で用いられる任意の各基が用いられる。具体的には上記したものと同様なものが例示される。ァミノ基の保護、カルボキシル基の脱保護、およぴ水酸基の保護の方法は、本明細書に記載する以外にも、使用する保護基に応じて適宜公知の方法および試薬によって実施され得ることは当業者には明らかであろう化合物（e— 7) から化合物（e— 8) へのアジド化は、 1当量の化合物（e — 7)、触媒量の DMA P等の塩基、約 10当量のトシルク口ライドを、塩化メチレンなどの溶媒中で、室温〜 40°Cで約 2時間〜終夜反応させることによって化合物（e— 7) のトシル誘導体を得、得られたトシル誘導体 1当量に対して約 15当量のアジ化ナトリウムを、 DMSO等の溶媒中で、約 60〜70°Cで約 5 時間程度反応させることによって行われる。

化合物（e— 8) をァミノ化し、続いて当該アミノ基を保護することによって、化合物（l i e) が得られる。通常、 1当量の化合物（e— 8 )、触媒量の水酸化パラジウムを水素雰囲気下、メタノ一ルゃェタノールなどの溶媒中で、室温で約 1〜 2時間程度反応させることによってアミン体を得る。ついで、得られたァミン体に常法に従い、例えば炭酸 9—フルォレニルメチルスクシンィミジル等を用いて、トリエチルァミンのような塩基の存在下、 T H F等の溶媒中で反応させることによってァミノ基の保護基を導入する。

本発明において、モノマー成分を重合してポリマーとするには、当分野で通常実施されている種々の方法を採用する。

具体的には上記一般式（I I a ) 〜（ I I e ) で表される化合物を用いてアミド化、 N—置換アミド化、シッフ塩基形成（シッフ塩基形成後、該当箇所を還元反応に付すこともできる）、エステル化、ァミンあるいは水酸基によるエポキシ開裂反応等の化学反応に付すことによってモノマー成分を重合する。当該重合反応は、もとになるモノマー成分がフリーな状態でも行うことができるが、後の精製工程が容易になるという点から、好ましくはもとになるモノマー成分を固相担体上に固定化し、次いで固相担体上で重合反応を行う。これらの反応に使用する試薬や反応条件は通常当分野で実施されている方法に準じる。

実施例

以下、製造例ならびに実施例、実験例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの例によりなんら限定されるものではない。

製造例 1 ： 1 7—ァリル一 1 4 - ( t e r t—プチルージメチル一シラニルォキシ） — 1ーヒドロキシー 1 2 - { 2一 [ 4一 ( 7 - ( t e r t一プチルージメチノレーシラニルォキシ一カノレボニノレ) ヘプタノィ/レ一ォキシ）一 3—メトキシーシクロへキシル] 一 1一メチル一ビュル } — 2 3 , 2 5ージメトキシー 1 3 , 1 9， 2 1， 2 7ーテトラメチル一 1 1， 2 8—ジォキサー 4一ァザートリシクロ [ 2 2 . 3 . 1 . 0 ⁴'⁹] ォクタコスー 1 8—ェン一 2， 3， 1 0， 1 6ーテトラオンの合成

1 7—ァリル一 14— ( t e r t—プチル一ジメチル—シラニノレオキシ）ー 1 ーヒドロキシ一 1 2— [2— （4—ヒドロキシ一 3—メトキシーシクロへキシル）一 1一メチル一ビュル] 一 23， 25—ジメトキシー 1 3, 1 9, 2 1, 2 7—テトラメチル一 1 1， 28—ジォキサ一 4一ァザートリシクロ [22. 3.

1. 0⁴'⁹] ォクタコスー 1 8—ェン一 2， 3, 1 0, 16—テトラオン（FK

506 ； 1 38mg, 0. 1 5 mm o 1 )、 O—モノ（ t e r t—ブチノレージメチノレ一シラ -ル）オクタン二酸（86. 7mg, 0. 21 8mmo 1 )、ジメチルアミノピリジン（DMAP ; 1 6. 5 m g, 0. 098mmo 1 )、 1— [3 ― (ジメチルァミノ）プロピル] 一 3—ェチルカルポジイミド塩酸塩（EDCZ

HC 1 ; 69. 1 m g, 0. 26 1 mm o 1 ) および塩化メチレン

(CH ₂C 1 ₂； 1 m 1 ) の混合物を室温で 1. 5時間撹拌した。反応物を酢酸ェチルー水混合液に注ぎ、抽出した。得られた有機相を水、食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウム（Mg SO ₄) で乾燥した。 Mg S0₄を濾別後、減圧下濃縮した。こうして得られた残渣をシリカゲルカラムで精製し（20%A c OE t (n 一へキサン中）で溶出）、目的とする 1 7—ァリル一 14一（t e r t—プチル一ジメチルーシラュルォキシ）一 1—ヒドロキシー 1 2— { 2 - [4— (7—

( t e r t一プチルージメチルーシラ -ルォキシーカルボニル) ヘプタノイノレーォキシ）一 3—メトキシ一シクロへキシル] 一 1—メチル一ビニノレ } -23, 2 5—ジメトキシー 1 3, 1 9， 2 1, 27—テトラメチルー 1 1， 28—ジォキサー 4—ァザートリシクロ [22. 3. 1 · 0⁴'⁹] ォクタコスー 1 8—ェンー 2, 3, 1 0， 1 6—テトラオン（44mg， 24. 6%) を得た。

— NMR(CDC1₃) δ :—0.1— 0.1 (12H, m)， 0.7—2.6 (47H, m), 0.85 and 0.86(18H, s), 1.50 (3H， s), 1.63 (3H， s), 2.75 (1H， m), 3.31 (3H, s), 3.35 (3H, s):

3.39 (3H, s)， 4.05 (1H， m), 3.0—4.4 (6H)， 4.5-5.8 (9H, m).

製造例 2 ： 1 7—ァリルー 1， 14一ジ一ヒドロキシ一 1 2— { 2— [4一 (7 一カルボキシーヘプタノィルーォキシ) 一 3—メトキシーシクロへキシル] 一 1 ーメチノレービ-ル } 一 23， 25—ジメトキシー 1 3, 1 9， 2 1, 2 7—テトラメチルー 1 1， 28—ジォキサー 4ーァザ一トリシクロ [22. 3. 1. 0

⁴'⁹Ί ォクタコス一 1 8—ェン _ 2， 3， 10， 16—テトラオンの合成

製造例 1で調製した 1 7—ァリル— 14一（t e r t—プチルージメチル一シラ -ルォキシ）一 1ーヒドロキシー 1 2— {2— [4一（7— （t e r t—プチルージメチルーシラニルォキシーカルボニル) ヘプタノィルーォキシ）一 3—メトキシ一シクロへキシル] _ 1一メチル一ビニル} 一 23, 25—ジメトキシー 1 3， 1 9， 2 1， 27—テトラメチルー 1 1， 28—ジォキサ一 4ーァザートリシクロ [22. 3. 1. 0⁴'⁹] ォクタコス一 1 8—ェンー 2, 3 , 1 0， 1 6—テトラオン（44mg， 0. 037 mm o 1 ) とァセトニトリル（0. 88 m l ) の混合物に 46— 48 %のフッ化水素（HF) 水（0. 1 2m l ) を静かに加え室温にて終夜撹拌した。反応物を酢酸ェチルー水混合液に注ぎ、抽出した。得られた有機相を水、食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウム（Mg S0₄) で乾燥した。 Mg S 0₄を濾別後、減圧下濃縮した。こうして得られた残渣をシリカゲルカラムで精製し（5 %メタノール（クロ口ホルム中））、目的とする 1 7—ァリル一 1 , 1 4一ジーヒドロキシー 1 2— { 2 - [4 ~ ( 7一カルボキシ一ヘプタノィルーォキシ）一 3—メトキシーシクロへキシル] 一 1ーメチルービュル } 一 23， 2 5—ジメトキシー 1 3, 1 9， 2 1， 2 7—テトラメチルー 1 1 , 2 8 ージォキサー 4ーァザートリシクロ [2 2. 3. 1. 0 ⁴'⁹] ォクタコスー 1 8 一ェンー 2， 3， 1 0, 1 6—テトラオン（1 4. 2mg, 4 0%) を得た。 — NMR(CDC1₃) δ： 0.7-2.6 (47Η, m), 1.50 (3H, s)， 1.63 (3H, s), 2.75 (1H, m), 3.31 (3H, s)， 3.35 (3H, s), 3.39 (3H, s), 4.05 (1H， m), 3.0-4.4 (6H), 4.5-5.8 (11H, m). '

MS (m/z)： 960 (M⁺)

製造例 3 ： FK5 0 6付 TOYOパール樹脂（T S K g e 1 AF- am i n o) の合成

製造例 2で調製した 1 7—ァリルー 1， 1 4ージヒドロキシー 1 2— { 2—

[4一 ( 7一力ルポキシ一へプタノィルーォキシ) 一 3—メトキシーシクロへキシル] 一 1ーメチルービエル）一 23， 2 5—ジメトキシー 1 3， 1 9, 2 1，

2 7—テトラメチルー 1 1 , 2 8—ジォキサ一 4—ァザートリシクロ [2 2. 3.

1. 0 '⁹] ォクタコスー 1 8—ェン一 2， 3 , 1 0， 1 6—テトラオン（3 8.

4mg, 0. 04mmo 1 )、 TOYOパール樹脂（T SKg e 1 AF— a m i n o , 1 0 0 μ 1 , 遊離/"ミノ基 (aval丄 able amino group) fま 0. 0 1. mm o l)、 EDC/HC 1 (9. 2mg, 0. 04 8mmo l )、 1ーヒドロキシべンゾトリアゾール（HOB t ； 6. 5mg, 0. 04 8 mm o 1 ) およぴジメチルホルムアミド（DMF ； 1 m l ) の混合物を室温で 6時間撹拌した。反応の終点は-ンヒドリン反応で残存ァミノ基が肉眼で観測できなくなることで確認した _c この時の反応率を換算すると約 82%であった。反応終了確認後、 DMFで樹脂を 5回洗浄した。ここに無水酢酸（100 μ 1 ) および DMF (400 1 ) を加え 1時間室温で撹拌した。その後 DMFで十分洗浄し、得られた FK506付 TOYOパール樹脂は後述する結合実験に用いた。 TOYOパール樹脂と FK 5 06の間に介在する基の HB A数は 4、 HBD数は 3である（但し、 FK506 にあらかじめ導入された基に由来する分は数に入れない）。当該 HB A数おょぴ HBD数は市販の TOYOパール樹脂のリンカーに由来する。

製造例 4 : FK506付 A f f i Ge l樹脂の合成

TOYOパール樹脂の代わりに A f f i G e 1樹脂（B i o—R a d社）を用いる以外は製造例 3と同様な手法により FK506付 A f f i G e 1樹脂を合成した。得られた FK506付 A f f i G e 1樹脂は後述する結合実験に用いた。 A f f i G e l樹脂と FK 506の間に介在する基の H B A数は 3、 HBD数は 2である（但し、 FK506にあらかじめ導入された基に由来する分は数に入れない）。当該 HB A数おょぴ HBD数は市販の A f f i g e 1樹脂のリンカ一に由来する。

製造例 5 ：親水性スぺーサ一分子の合成（1-1)

2— (2 - { 2一 [2 - (2—トリチルォキシーェトキシ) ーェトキシ] 一エトキシ } ーェトキシ) エタノールの合成

2 ペンタエチレングリコール（化合物 1 ； 10 g， 42. Ommo 1 ) をピリジン（1 0 0m l ) に溶解し、トリフエニルメチルクロリド（1 1. 6 g， 4 1. 6 mm o 1 ) 及ぴ 4ージメチルァミノピリジン（0. 9 g， 7. 4mm o l ) を室温で加えた後、 3 5°Cで終夜攪拌した。これを減圧濃縮して得られた残渣をクロロホルムに溶解し、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水、及ぴ飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物を綿ろ過にて除去し、クロ口ホルムで洗浄し、ろ液と洗液を合わせて減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲル力ラムクロマトグラフィー（関東化学 6 O N； 6 0 0 m l ) に供し、溶出液（6

0 ： 1 クロ口ホルム（CHC 1 ₃) 一メタノール（Me OH) にて目的の 2— (2— { 2 - [2— （2—トリチルォキシ—エトキシ）一エトキシ] —ェトキシ} 一エトキシ）エタノール（化合物 2 ; 1 0. 4 g , 5 1. 2 %) を得た。一顧 R(CDC1₃) δ： 2.53 (1H， t)， 3.16 (2H, t), 3.49—3.63 (18H, m), 7.14— 7.41 (15H, m).

製造例 6 ：親水性スぺーサ一分子の合成（1-2)

[2 - (2 - { 2 - [ 2— ( 2—トリチルォキシーェトキシ) 一エトキシ] —ェトキシ} 一エトキシ）一エトキシ] 酢酸の合成

ΤΓθ 。/\_ ^ο^\ )^^。--"·\。。οΗ

2 3

製造例 5で得られた化合物 2 ( 1 0. 2 g , 2 1. 2 mm o 1 ) をテトラヒド口フラン（THF ； 2 0 0 m l ) 及ぴ DMF (5 0 m l ) の混合溶媒に溶解し、 0°Cにて水素化ナトリウム（3. 1 g ；油性， 6 0 w t %) を少しずつ加えた後、室温で 3 0分間攪拌した。これを 0°Cに冷却した後、プロモ酢酸（6. 5 g , 4 6. 8 mmo 1 ) を少しずつ加え、室温で 3 0分間攪拌した。その後更に水素化ナトリウム（1 1. 6 g ;油性， 6 0 w t %) を室温で少しずつ加えて室温で 1 時間攪拌した。反応液を 0°Cに冷却し、水（2 5 m l ) を徐々に加えた後、反応液の量が約 1 0 O m 1になるまで減圧濃縮した。これに酢酸ェチル（2 0 0 m 1 ) 及ぴ、食塩水（1 0 0 m l ) を加え、攪拌しながら 2 M硫酸水素カリウム水を加え、 p Hを 6に調製した。有機相を抽出し、 3 0°Cにて減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（関東化学 6 O N ; 40 0m 1 ) に供し、溶出液（8 5 : 1 5 CHC 1 ₃— Me OH) にて目的の [2— (2 - { 2 - [2- (2—トリチルォキシーエトキシ）一エトキシ] ーェトキシ} 一エトキシ） —エトキシ] 酢酸（化合物 3) の粗精製物（1 2. 4 g) を得た。

NMR(CDC1₃) δ： 3.34 (2Η, t), 3.76-3.84 (20H, m), 4.13 (2H, s), 7.30- 7.83 (15H， m).

製造例 7 ：親水性スぺーサ一分子の合成（1-3)

[2 - (2— { 2- [2 - (2—トリチルォキシーエトキシ）一エトキシ] ーェトキシ} 一エトキシ）一エトキシ] 酢酸ベンジルエステルの合成

1>0

3

4

製造例 6で得られた化合物 3の粗精製物（1 2. 4 g) を塩化メチレン（1 0 Om l ) に溶解し、 4—ジメチルァミノピリジン（0. 2 9 g， 2. 4mmo 1)、ベンジルアルコール (3. l m l , 3 0. Ommo l ) をカ卩えた。これを 0°Cに冷却し、水溶性カルポジィミド (N—ェチルー N，一（3，ージメチルァミノプロピル）カルボジィミド； WS C ； 4. 5 g, 2 3. 5 mmo 1 ) を加え、室温にて終夜攪拌した。反応液をクロ口ホルムで抽出し、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水、及び飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物を綿ろ過にて除去し、クロ口ホルムで洗净し、ろ液と洗液を合わせて減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（関東化学 6 0 N ; 6 00m l ) に供し、溶出液（1 : 1 酢酸ェチルーへキサン）にて目的の [2— (2 - { 2 - [2— （2—トリチルォキシーエトキシ）一エトキシ] ーェトキシ} 一エトキシ）一エトキシ] 酢酸ベンジルエステル（化合物 4 ; 1 2.

0 g , 9 0. 1 %, 2 s t e p s ) を得た。

一 NMR(CDC1₃) δ： 3.16 (2Η, t), 3.55-3.65 (20H, m), 4.11 (2H, s)， 5.11 (2H， s)， 7.15-7.40 (20H, m) . 製造例 8 ：親水性スぺーサ一分子の合成（1-4)

[2— (2 - { 2 - [2— (2—ヒドロキシーエトキシ）一エトキシ] ーェトキシ} 一エトキシ） —エトキシ] 酢酸ベンジルエステルの合成

OOBri

4 5 製造例 7で得られた化合物 4 (12. 0 g) を 5%トリフルォロ酢酸塩化メチレン溶液（1 50m l) に溶解し、 0。Cにて水（10m l) を加えて、 0°Cにて 20分間攪拌した。反応液を飽和炭酸水素ナトリウム水に注いで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物を綿ろ過にて除去し、クロ口ホルムで洗浄し、ろ液と洗液を合わせて減圧濃縮した。得られた残渣をシリ力ゲル力ラムクロマトダラフィー（関東化学 6 ON； 40 Om 1 ) に供し、溶出液（1000 ： 15

CHC 1₃— MeOH) にて目的の [2— （2— { 2 - [2— (2—ヒドロキシ一エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 酢酸ベンジルエステル（化合物 5 ； 7. 0 g, 95%) を得た。

一 NMR(CDC1₃) δ： 2.80 (1H, t)， 3.62-3.76 (20H, m), 4.22 (2H, s)， 5.20 (2H, s)， 7.36-7.41 (5H, m) .

製造例 9 ：親水性スぺーサ一分子の合成（1-5)

[2 - (2 - {2- [2— （2—アジドーエトキシ）ーェトキシ] ーェトキシ} 一エトキシ）一エトキシ] 酢酸ベンジルエステルの合成

5 6

製造例 8で得られた化合物 5 (7. 0 g, 18. 1 mmo 1 ) 及ぴ 4—ジメチルァミノピリジン（0. 4 g， 3. 3mmo 1 ) をピリジン（45m 1 ) に溶解し、 0°Cに冷却した。これに J 一トルエンスルホユルクロリド（5. 2 g, 27.

2mmo 1) を加えて室温で終夜攪拌し、更に p—トルエンスルホユルクロリド (3. 1 g, 16. 2mmo 1) 及ぴ 4ージメチルァミノピリジン（12 Omg， 0. 98mmo 1 ) を加えて 30 °Cで 2時間攪拌した。反応液を 0°Cに冷却し、水（3m l ) を加えて減圧濃縮し、得られた残渣を酢酸ェチルに溶解し、有機相を飽和炭酸水素ナトリゥム水、及ぴ飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物を綿ろ過にて除去し、酢酸ェチルで洗浄し、ろ液と洗液を合わせて減圧濃縮した。得られた残渣を DMF (50ml) に溶解し、アジ化ナトリゥム（11. 8 g， 0. 18mo 1 ) を加えて 60。Cで 1時間攪拌した。反応液を酢酸ェチルで抽出し、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水、及ぴ飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物を綿ろ過にて除去し、酢酸ェチルで洗浄し、ろ液と洗液を合わせて減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲル力ラムクロマトグラフィー（関東化学 6 ON； 250m l) に供し、溶出液

(3 : 1 酢酸ェチルーへキサン）にて目的の [2— (2 - { 2 - [2 - (2— アジドーエトキシ） —エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 酢酸ベンジルエステル（化合物 6 ； 3. 3 g, 44. 3%) を得た。

一 NMR(CDC1₃) δ： 3.31 (2Η, t)， 3.54-3.87 (20H, m), 4.13 (2H， s)， 5.12 (2H, s), 7.20-7.30 (5H, m).

製造例 10 ：親水性スぺーサ一分子の合成（1-6)

[2 - (2— { 2 - [2— （2—アミノーエトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 酢酸の合成 ·

COOH

6 7 製造例 9で得られた化合物 6 (1. 94 g, 4. 72mmo 1 ) をメタノール (50m l ) に溶解し、 10%P d— C (50 Omg) を加えて、室温で 2. 5 時間接触水素添加を行った。固形物をセライトろ過にて除去し、メタノールで洗浄し、ろ液と洗液を合わせて減圧濃縮して目的の [2— （2— {2— [2— (2 一アミノーエトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 酢酸

(化合物 7 ； 1. 4 g, 定量的）を得た。

MS (m/z) ： 296 (M⁺)

製造例 1 1 ：親水性スぺーサ一分子の合成（1-7)

{ 2 - [2— （2— { 2 - [2— （9H—フルオレン一 9—ィル一メトキシカルポニノレアミノ）一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] ーェトキシ} 酢酸の合成

7 8

製造例 10で得られた化合物 7 ( 1. 25 g, 4. 23 mm o 1 ) を 10 °/₀炭酸ナトリウム水（14m 1) に溶解し、ジメトキシェタン（14m l) に懸濁した 9一フルォレエルメチルスクシンィミジルカルボネート (2. 1 5 g , 6. 3 7mm o 1) を室温で滴下した後、室温で終夜攪拌した。固形物をセライトにてろ別後、クロ口ホルムで洗浄した。ろ液と洗液を合わせてクロ口ホルムで抽出し、有機相を 2 M硫酸水素ナトリゥム水、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物を綿ろ過にて除去し、クロ口ホルムで洗浄し、ろ液と洗液を合わせて減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（関東化学 60 N； 150m l) に供し、溶出液（1000 : 7 CHC 1₃— Me OH) にて目的の {2— [2— (2 - {2— [2— （9 H—フルオレン一 9ーィルーメトキシカルボニルァミノ）一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 酢酸（化合物 8 ; 1. 38 g, 63. 0%) を得た。

6： 3.34 (2Η, t)， 3.50-3.71 (18H， m), 4.05 (2H， s)， 4.12 (1H, t), 4.33 (2H, d), 5.57 (1H， s), 7.22-7.95 (8H, m).

製造例 12 ：親水性スぺーサー付樹脂の合成：へキサエチレンダリコール誘導体付 TOY Oパール樹脂（TSKg e l AF— am i n o) の合成

TOYOパール樹脂（TSKg e 1 AF— am i n o ； Ι Ο Ο μ Ι中に 0.

0 lmm o 1のァミンが存在）に塩化メチレン（0. 4m l) と N—メチルー 2

—ピロリドン（NMP ; 0. lm l) の混合溶媒に溶解した {2— [2— （2— { 2 - [2— (9 H—フルオレン一 9—イノレーメトキシカルボニルアミノ）ーェトキシ] —エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 酢酸（製造例 1 1 で得られた化合物 8 ； 21mg, 0. 04mmo 1 ) を加え、更にべンゾトリアゾールー 1一イノレーォキシ一卜リス一ピロリジノ一ホスホニゥムへキサフノレオ口ホスフェート（P yBOP ; 26mg, 0. 05mmo l)、及ぴ N， N—ジイソプロピルェチルァミン（17 μ 1， 0. l Ommo l ) を加え、室温で 4時間振とうした。反応終了後、樹脂を塩化メチレン、及び DMFで十分に洗浄した後、ニンヒドリンテストにより縮合収率を測定した（約 81%)。得られた樹脂に無水酢酸/塩化メチレン ZNMP (1/8/2) の混合溶液（0. 5m l) を加えて室温で 3時間振とうした。樹脂を塩化メチレン、及ぴ DMFで十分に洗浄した後、ピぺリジン/ DMF/塩化メチレン (1/4/4) の混合溶液 (0. 5 m l) を加えて室温で 3時間振とうした。反応終了後、樹脂を塩化メチレン、及ぴ DMFで十分に洗浄した後、ニンヒドリンテストにより樹脂 100 μ 1中に約 7. 9 mo 1のァミンが存在することを確認した。

製造例 13 _: FK506誘導体結合型親水性スぺーサー付樹脂の合成

製造例 12で得られたへキサエチレンダリコール誘導体付 TOY Oパール樹脂を用い、製造例 3で述べた方法に準じて親水性スぺーサーを有する FK 506結合型樹脂 [TOYO+ (PEG) j-FK 506] を合成した。 TOYOパール樹脂と FK506の間に介在する親水性スぺーサ一部分の HB A数は 1 1、 HB D数は 4である。尚、 TOYOパール樹脂のリンカ一に由来する HB A数おょぴ HBD数を考慮しなければ、当該親水性スぺーサ一の HB A数は 7、 HBD数は 1である。

製造例 14 ： FK506誘導体結合型親水性スぺーサー付樹脂の合成

(TOYO+ (PEG) ₂-FK 506)

製造例 12で得られたへキサエチレングリコール誘導体付 TOY Οパール樹脂を用い、製造例 12に従い親水性スぺーサ一の伸長反応を行った後、製造例 3で述べた方法に準じて親水性スぺーサーを有する FK 506結合型樹脂〔TOYO + (PEG) ₂— FK506〕を合成した。 TOYOパール樹脂と FK 506の間に介在する親水性スぺーサ一部分の HB A数は 18、 HBD数は 5である。尚、 TOYOパール樹脂のリンカーに由来する HB A数おょぴ HBD数を考慮しなければ、当該親水性スぺーサ一の HB A数は 14、 HBD数は 2である。

製造例 15 ： FK506誘導体結合型親水性スぺーサー付樹脂の合成

(TOYO+ (PEG) ₃-FK 506)

製造例 12で得られたへキサエチレンダリコール誘導体付 TOY Oパール樹脂を用い、製造例 12に従い親水性スぺーサ一の伸長反応をくり返し行った後、製造例 3で述べた方法に準じて親水性スぺーサーを有する FK 506結合型樹脂

[TOYO+ (PEG) 3-FK 506] を合成した。 TOYOパール樹脂と F

K506の間に介在する親水性スぺーサ一部分の HB A数は 25、 HBD数は 6 である。尚、 TOYOパール樹脂のリンカ一に由来する HBA数および HBD数を考慮しなければ、当該親水性スぺーサ一の HB A数は 2 1、 HBD数は 3である。

製造例 16 ： FK506誘導体結合型親水性スぺーサー付樹脂の合成

(TOYO+ (PEG) ₄一 FK506)

製造例 12で得られたへキサエチレングリコール誘導体付 TOY Oパール樹脂を用い、製造例 1 2に従い親水性スぺーサ一の伸長反応をくり返し行った後、製造例 3に述べた方法に準じ、親水性スぺーサーを有する FK 506結合型樹脂

[TOYO+ (PEG) ₄一 FK506〕を合成した。 TOYOパール樹脂と F K506の間に介在する親水性スぺーサ一部分の HB A数は 32、 HBD数は 7 である。尚、 TOYOパール樹脂のリンカ一に由来する HBA数おょぴ HBD数を考慮しなければ、当該親水性スぺーサ一の HB A数は 28、 HBD数は 4である。

製造例 1 7 ： F K 506誘導体結合型親水性スぺーサー付樹脂の合成

(TOYO+ (PEG) ₅-FK506)

製造例 1 2で得られたへキサエチレンダリコール誘導体付 TOY Oパール樹脂を用い、製造例 1 2に従い親水性スぺーサ一の伸長反応をくり返し行った後、製造例 3に述べた方法に準じ、親水性スぺーサーを有する FK 506結合型樹脂

[TOYO+ (PEG) ₅-FK 506] を合成した。 TOYOパール樹脂と F

K506の間に介在する親水性スぺーサ一部分の HB A数は 3 9、 HBD数は 8 である。尚、 TOYOパール樹脂のリンカ一に由来する HB A数および HBD数を考慮しなければ、当該親水性スぺーサ一の HB A数は 35、 HBD数は 5である。

製造例 1 8 ： FK506誘導体結合型親水性スぺーサー付樹脂の合成

(TOYO+ (PEG) ₆-FK 506)

製造例 1 2で得られたへキサエチレングリコール誘導体付 TOYOパール樹脂を用い、製造例 1 2に従い親水性スぺーサ一の伸長反応をくり返し行った後、製造例 3に述べた方法に準じ、親水性スぺーサーを有する FK506結合型樹脂 [TOYO+ (PEG) ₆— FK506〕を合成した。 TOYOパール樹脂と F K 506の間に介在する親水性スぺーサ一部分の HB A数は 46、 HBD数は 9 である。尚、 TOYOパール樹脂のリンカ一に由来する HB A数おょぴ HBD数を考慮しなければ、当該親水性スぺーサ一の HB A数は 42、 HBD数は 6である。

製造例 1 9 ：親水性スぺーサ一分子の合成（2-1)

(5 S—アミノメチルー 2， 2—ジメチルー [1, 3] ジォキソラン一 4 S—ィルメチル）カルパミン酸 9 H—フルオレン一 9ーィルメチルエステル (化合物 10 ) の合成

9 10 化合物 9 (1. 0 g, 6. 25mmo 1 ) を THF 2 Om 1に溶解し、氷冷下攪拌した。その反応系中に 9一フルォレニルメチルスクシンィミジルカルボネート（Fmo c— O s u ; 2. l g， 6. 25 mmo 1 ) を THF 1 Om 1にて溶解し、ゆっくりと滴下した。引き続きトリェチルァミンを滴下後、氷冷下 30分間攪拌した。反応終了後、水を加え、酢酸ェチルにて水相を抽出し、有機相を飽和食塩水にて洗浄した後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。得られた有機相を減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（BW— 820MH ;富シリシァ化学、展開溶媒（10 ： 1 =酢酸ェチル：エタノール)）に T精製し目的の化合物 10 (1. 22 g) を収率 52. 8%にて得た。

MS (m/z) ： 383 (ΜΗ⁺) , 一 NMR(DMS0 d₆) δ： 1.30 (s, 6H)， 2.68 (d, 2H)， 3.07 (m, 2H)， 3.63-3.6 (m, 1H), 3.69-4.02 (m, 1H), 4.04-4.21 (m, 1H), 4.29 (m, 2H) , 7.33 (m, 2H)， 7.42 (t, 2H), 7.70 (d, 2H), 7.89 (d, 2H) .

製造例 20 ：親水性スぺーサ一分子の合成（2- 2)

5 R- ({ 5 S - [(9 H—フルオレン一 9一ィルメトキシカルボニルァミノ）一メチル] 一 2， 2—ジメチルー [1， 3] ジォキソラン一 4 R—ィルメチル } ― 一 2， 2—ジメチル一 [1， 3] ジォキソラン一 4 S—力ルボンンジルエステル (化合物 1 1) の合成

2， 2—ジメチルー [1， 3] ジォキソラン一 4R， 5 R—ジカルボン酸 (7

40 m g , 3. 89mmo 1 ) をァセトエトリル 50 m 1に、溶かし、 1, 1，一力ルポニルジイミダゾ一ル（CD I ; 1. 26 g, 7. 78mmo 1 ) を添加し室温にて 30分間攪拌した。その反応系中にベンジルアルコール（BnOH ; 4

2 Omg, 3. 89mmo 1 ), 1， 8—ジァザビシクロ [5. 4. 0] ゥンデカー 7—ェン（DBU ; 887mg, 5. 84mmo 1) を加え、室温にて 17 時間攪拌した。反応終了後、反応溶液中に水を加え、さらに 1N—塩酸にて弱酸性とした。反応液を酢酸ェチルにて抽出し、抽出した有機相を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。得られた有機相を減圧濃縮後、目的のモノべンジルエステル体を得た。精製することなく得られたモノべンジルエステル体を DMF 10 Om 1に溶かし、製造例 1 9で得られた化合物 1 0 (1. 2 g , 3. 14mmo 1 ) を DMF 1 Om 1に溶かし反応系中に加えた。ベンゾトリアゾール一 1—ィルーォキシ一トリス一ピロリジノーホスホニゥムへキサフルォロホスフエ一ト（P yBOP ; 3. 3 7 g , 6. 48 mm o 1 )、ジィソプ口ピルェチルァミン（ i一 P r ₂NE t ; l. 25 g , 9. 74mmo 1 ) を力！] え、室温にて 1 7時間攪拌した。反応液中に水 1 O Om lを加え、酢酸ェチル 1 0 Om lにて 3回抽出した。抽出した有機相を飽和食塩水にて洗浄し、得られた有機相を無水硫酸マグネシウムにて乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をシリ力ゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、目的の化合物 1 1 (0. 49 g) を収率 23. 5%にて得た。

MS (m/z) ： 645 (MH+), 一 MR(CDC1₃) δ： 1.33-1.39 (m, 6H), 1.43 (s, 3H), 1.50 (m, 3H), 3.42 (b， 2H), 3.53 (b， 2H)， 3.75 (m, 1H), 4.21 (m, 1H)， 4.37-4.48 (m, 2H)， 4.76-4.82 (m， 2H), 5.25 (s， 2H), 5.29 (m， 1H)， 6.93

(m, 1H)， 7.28-7.41 (m, 9H), 7.59 (d, 2H， ]=7.5Hz) , 7.75 (d， 2H, J=7.5Hz). 製造例 2 1 ：親水性スぺーサ一分子の合成（2- 3)

N— - [4一（9H—フルオレン一 9—イノレメトキシカルポ-ルァミノ）一2 S, 3 S—ジヒドロキシ一プチル] 一 2R， 3 R—ジヒドロキシースクシンアミド酸ベンジルエステル (化合物 1 2 ) の合成

化合物 1 1 (0. 46 g， 0. 7 1 mmo 1 ) を 80%トリフルォロ酢酸（T

FA) 水 10m lに溶かし、室温にて 5時間攪拌した。反応終了後、溶媒を留去し、ジクロロメタンにて 3回共沸した。残渣を酢酸ェチルに溶解し、有機相を飽和食塩水にて洗浄した。無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、減圧濃縮した。 n— へキサン一酢酸ェチルにて再結晶し、目的の化合物 1 2 (22 Omg) を収率 5 5%にて得た。

MS (m/z) ： 565 (MH+), —顧 R(DMS0 d₆) δ： 2.99-3.06 (m, 2H)， 3.09-3.19 (m, 2H), 3.44 (m， 2H), 4.18-4.23 (m， 1H), 4.26-4.27 (m， 3H), 4.47 (d, 1H), 4.63 (dd, 2H), 5.15 (dd, 2H)， 5.40 (d， 1H), 5.88 (t, 1H), 7.14 (m， 1H), 7.28-7.42 (m, 10H), 7.64 (m， 1H), 7.70 (d， 2H), 7.88 (d, 2H).

製造例 22 ：親水性スぺーサ一分子の合成 (2 - 4)

N- [4一（9 H—フルオレン一 9—ィルメトキシカルボ-ルァミノ）一 2 S， 3 S—ジヒドロキシ一ブチル] — 2R, 3 R—ジヒドロキシースクシンアミド酸 (化合物 1 3) の合成

12 13 化合物 1 2 (20 Omg, 0. 35 mm o 1 ) をメタノール一酢酸ェチル (1 : 1) の混合溶媒 100m lに溶かし、 1 0 % P d /C (50 %含水） 50 mgを加え、水素気流下室温にて 2時間攪拌した。反応終了後、 P dZCを濾取し、メタノールにて 3回洗いこみをした。得られた有機相を減圧濃縮し、目的の化合物 1 3 (1 6 5mg) を定量的に得た。

MS (m/z) ： 475 (MH⁺) , ^-NMR (ACET0N d₆) δ： 3.2-3.4 (m， 3H)， 3.49-3.70 (m, 3H)， 4.23 (m， 1H)， 4.33-4.35 (m, 2H), 4.46 (m， 1H), 4.60 (m, 1H), 6.50 (m, 1H), 7.33 (t, 2H), 7.41 (t， 2H)， 7.68 (m, 1H), 7.71 (d, 2H)， 7.86 (d, 2H).

製造例 23 ：親水性スぺ一サー付樹脂の合成：ジハイドロキシァミノプチルタータリックァシッド誘導体付 T O Y Oパール樹脂の合成

トヨパール樹脂（T S K g e 1 AF— am i n o ; 100〃 1中に 0. 0 1 mmo 1のアミンが存在）にジクロロメタン（0. 4 m 1 )、 N—メチルー 2 - ビロリドン（NMP ; 0. lm l ) を加え、さらに、 N— [4— （9H—フルォレン一 9—イノレメトキシカルボ-ルァミノ）一 2 R, 3R—ジヒドロキシープチル] 一 2R， 3 R—ジヒドロキシースクシンアミド酸（4 Omg, 0. 08mm o 1 )、ベンゾトリァゾ一ルー 1ーィルーォキシ一トリス一ピロリジノ一ホスホユウムへキサフノレオ口ホスフェート（P yBOP ; 50mg， 0. 09 6 mm o l)、 N， N—ジイソプロピルェチルァミン（25mg, 0. 1 92 mmo 1) を加え、室温で 2時間振とうした。反応終了後、樹脂を塩化メチレン、及び DMFで十分に洗浄した後、ニンヒドリンテストにより縮合収率 73. 4%を確認した。得られた樹脂に無水酢酸/メタノール/ジクロロメタン (1/1/1 0) の混合溶液（lm l ) を加えて室温で 0. 5時間振とうした。樹脂を塩化メチレン、及び DM Fで十分に洗浄した後、ピぺリジン ZDMF/塩化メチレン (1/4/4) の混合溶液（0. 5m l ) を加えて室温で 3時間振とうした。反応終了後、樹脂を塩化メチレン、及び DMFで十分に洗浄し、目的のジハイド口キシァミノプチルタータリックァシッド誘導体付 TOY Oパール樹脂 [TOYO + (DABT) _x] を得た。

製造例 24 ： FK506誘導体結合型親水性スぺーサー付樹脂の合成

TOYO-Pearl resin 製造例 23で得られたジハイドロキシァミノプチルタータリックァシッド誘導体付 TOY Oパール樹脂 [TOYO+ (DABT) ！] より、製造例 3に述べた方法に準じ、親水性スぺーサーを有する FK 506結合型樹脂〔TOYO+ (D ABT) ！ -FK506) を合成した。 TOYOパール樹脂と FK 506の間に介在する親水性スぺーサ一部分の HB A数は 1 2、 HBD数は 9である。尚、 T OYOパール樹脂のリンカーに由来する HB A数おょぴ HBD数を考慮しなければ、当該親水性スぺーサ一の HB A数は 8、 HBD数は 6である。

製造例 25 ： FK506誘導体結合型親水性スぺーサー付樹脂の合成

(TOYO+ (DABT) ₂— FK506)

製造例 23で得られたジハイドロキシァミノプチルタータリックァシッド誘導体付 TO YOパール樹脂 [TOYO+ (DABT) J より、製造例 23に従い親水性スぺーサ一の伸長反応を行った。ただし、反応溶媒には塩化メチレン（0. 5m l) と N—メチルー 2—ピロリドン（NMP ； 0. 05 m 1 ) の混合溶媒を用いた。次いで、製造例 3に述べた方法に準じ、親水性スぺーサーを有する FK 506結合型樹脂 [： TOYO+ (DABT) ₂—FK506〕を合成した。 TO YOパール樹脂と FK506の間に介在する親水性スぺーサ一部分の HB A数は 20、 HBD数は 1 5である。尚、 TOYOパール樹脂のリンカ一に由来する H B A数おょぴ HBD数を考慮しなければ、当該親水性スぺーサ一の HB A数は 1 6、 HBD数は 1 2である。

製造例 26 ：親水性スぺーサ一分子の合成（³- 1)

N— [2 - (9 H—フルオレン一 9一ィルメトキシカルボニルアミノ）ーェチル] -2, 3—ジヒドロキシースクシンアミド酸 (化合物 1 6 ) の合成

14 15 16

9 H— 9—フルォレニルメチル N- (2—アミノエチル) カルパメート塩酸塩（化合物 14 ; 5. 00 g, 153. 7 mm o 1 ) 及ぴ L一（ + ) —酒石酸 (化合物 15 ; 5. 89 g, 39. 2mmo 1 ) に、 N， N—ジメチルホルムァミド（30 Om 1 ) 及ぴトリエチルァミン（5. 46m l , 39. 2mmo 1 ) を加え、溶解させた。次いで、 1—ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（2. 52 g, 16. 5mmo 1 ) を加え、 1ーェチルー 3— （3—ジメチルーァミノプロピル）カルポジイミド塩酸塩（3. 16 g, 16. 5mmo l) のN， N ージメチルホルムアミド（200m l) 溶液を滴下した後、室温で終夜攪拌した。これを減圧濃縮して得られた残渣を酢酸ェチルに溶解し、有機相を 2 Nクェン酸水溶液で洗浄した。次いで、炭酸水素ナトリウム水を用いて逆抽出を行った後、得られた水相を酢酸ェチルで洗浄した。氷冷下、 2 Nクェン酸水溶液にて水相を酸性とした後、酢酸ェチルで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物をろ過、減圧濃縮した後、メタノールージェチルエーテルより結晶化を行い、目的とする N— [2 - (9H—フルオレン一 9 f ルメトキシカルポニルァミノ）ーェチル] 一 2, 3—ジヒドロキシースクシンァミド酸（ 2 · 72 g， 42%) を得た。

匪 R(d- acetone) δ： 3.29 (2H， t), 3.37 (2H, ΐ), 4.24 (1H， m), 4.30 (2H, m), 4.41 (1H， d), 4.59 (1H， d), 7.29—7.42 (4H, m)， 7.68 (2H， d), 7.85 (2H, d). MS (m/z)： 415.2 (M+).

製造例 27 ：親水性スぺーサー付樹脂の合成：アミノエチルタータリックジアミド誘導体付 T OY Oパール樹脂の合成

TO YOパール樹脂（TSKg e l AF— am i n o ； Ι Ο Ο μ Ι中に 0. 0 1 mmo 1のァミンが存在) に塩化メチレン（0. 5m l ) を加え、更に製造例 26で得られた化合物 1 6 (1 6. 6 m g , 40 ^ mo 1 ), N, N—ジイソプロピルェチルァミン（1 6. 7 μ \ , 96 /imo l )、 P y BOP (25. 0 mg， 48 mo 1 ) を加え、室温で終夜振とうした。反応終了後、樹脂を塩化

'、及び DMFで十分に洗浄した後、得られた樹脂に無水酢酸/メタノー '塩化メチレン (1/1/1 0) の混合溶液 (1. 5m l ) を加えて室温で 2 5分振とうした。反応終了後、樹脂を塩化メチレン、及ぴ DMFで十分に洗浄した後、 20%ピぺリジン ZDMF溶液（0. 5m l ) を加えて室温で 1 0分振とうした。次いで、樹脂を DMFで洗浄した後、再度、 20%ピぺリジン/ DMF 溶液（0. 5m l ) を加えて室温で 20分振とうした。反応終了後、樹脂を塩化メチレン、及び DMFで十分に洗浄し、アミノエチルタータリックジアミド誘導体付 TOY Oパール樹脂〔： ΓΟΥΟ+ (AET) を得た。

製造例 28 ： FK506誘導体結合型親水性スぺーサー付樹脂の合成 '

(TOYO+ (AET) ！ -FK 506)

製造例 27で得られたアミノエチルタータリックジアミド誘導体付 TOY Oパール樹脂〔TOYO+ (AET) J より、製造例 3に述べた方法に準じ、親水性スぺーサーを有する FK 50 6結合型樹脂〔TOYO+ (AET)

06〕を合成した。 TOY Οパール樹脂と FK506の間に介在する親水性スぺ —サ一部分の HBA数は 1 ◦、 HBD数は 7である。尚、 TOYOパール樹脂のリンカーに由来する HB A数おょぴ HBD数を考慮しなければ、当該親水性スぺーサ一の HB A数は 6、 HB D数は 4である。

製造例 2 9 ： F K 5 0 6誘導体結合型親水性スぺーサー付樹脂の合成

(TOYO+ (AET) ₂- F K 5 0 6 )

製造例 2 7で得られたアミノエチルタータリックジアミド誘導体付 TO YOパール樹脂〔TOYO+ (AE T) ,] より、製造例 2 7に従い親水性スぺーサーの伸長反応を行った。ただし、反応溶媒には塩化メチレン（0. 5 m l ) と N— メチルー 2—ピロリドン（NMP ; 0. 0 5 m l ) の混合溶媒を用いた。次いで、製造例 3に述べた方法に準じ、親水性スぺーサーを有する FK 5 0 6結合型樹脂 [TOYO+ (AE T) ₂— F K 5 0 6〕を合成した。 TOYOパール樹脂と F K 5 0 6の間に介在する親水性スぺーサ一部分の HB A数は 1 6、 1180数は1 1である。尚、 TOYOパール樹脂のリンカ一に由来する HB A数おょぴ HBD 数を考慮しなければ、当該親水性スぺーサ一の HB A数は 1 2、 HBD数は 8である。

製造例 3 0 ：親水性スぺーサ一分子の合成（4-1)

4一 t e r t一プチルジメチルシリルォキシフエノール (化合物 1 8) の合成

17 18 氷冷したハイドロキノン（化合物 1 7 ； 3. 3 g , 3 O mm o 1 ) の DMF (6 0 m l ) 溶液へ、ィミダゾール（ 3. 1 g , 4 5 mm o 1 ) 及び t e r t— 口ライド（4. 5 g, 3 O mmo 1 ) の; DMF (3 0 m 1 ) 溶液を加え、氷浴を取り除き室温にて終夜攪拌した。これを水へ注ぎ、反応を停止させた後、エーテルから抽出した。合わせた有機相を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過、減圧濃縮後、得られた残渣をシリカゲノレカラムクロマトグラフィー〔： B i o t a g e、溶出液（9 : 1 n—へキサン：酢酸ェチル)〕にて精製し、化合物 1 8 (白色固体 3. 6 g, 5 3%) を得た。

MS (m/z)： 225 (MH+), - MR(CDC1₃) δ： 0.16 (6H， s)， 0.97 (9H， s), 4.43 (1H, s)， 6.70 (4H, d, J=2Hz) .

製造例 3 1 ：親水性スぺーサ一分子の合成 (4-2)

[2— (2 - { 2 - [2— （2—ベンジルォキシ一エトキシ）一トキシ] —ェトキシ} ーェトキシ）] エタノール（化合物 1 9) の合成

1 19

ィ匕合物 1 (5. 2 g, 21. 8mmo 1 ) へ水酸化力リウム（1. 2 g, 2 1. 4mmo 1 ) を加え、オイルバス上 1 30。Cで 1 5分攪拌した後、オイルパスから外し、ベンジノレクロライド（2. 7 g, 21. 3 mm o 1 ) をゆっくりと加えた。これを再ぴ 1 30°Cに昇温し、 2時間攪拌した。室温まで放冷した後、水を注ぎ、.反応を停止させ、塩化メチレンから抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過、減圧濃縮後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善 YFLC G e 1、溶出液（酢酸ェチル〜 5 %メタノール一酢酸ェチル溶液）にて精製し、化合物 1 9 (淡黄色オイル 2. 3 g, 32%) を得た。

MS (m/z)： 329 (MH+), - NMR(CDC1₃) δ： 3.34 (2Η, t), 3.76-3.84 (20H, m)，

4.13 (2H, s), 7.26-7.35 (5H, m).

製造例 32 ：親水性スぺーサ一分子の合成 (4 - 3)

[2— (2— { 2 - [2 - (2—プロモーエトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } ーェトキシ) ーェトキシメチル] ベンゼン (化合物 20 ) の合成 19 20

化合物 1 9 (2. 04 g， 6. 2 1 mmo 1 ) の塩化メチレン（20m l ) 溶液へ、四臭化炭素（4. 12 g, 1 2. 4 mmo 1 ) の塩化メチレン（1 Om 1 ) 溶液を室温にて加え、氷冷した後トリフエ-ルフォスフィン（2. 5 1 g, 1 2. 4mmo 1 ) を加えた。氷浴を外し、室温にて 1時間攪拌した。減圧濃縮後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善 YFLC G e 1、溶出液（n—へキサン：酢酸ェチル 2 ： 1〜1 ： 1)) にて精製し、ィ匕合物 20 (淡黄色オイル 2. 14 g, 88%) を得た。

MS (m/z)： 391 (MH⁺)， ¾ - NMR(CDC1₃) δ： 3.46 (2Η, t, J=6.4Hz) , 3.62-3.69 (m, 16H)， 3.62-3.72 (20H, m)， 3.80 (2H， t, J=6.4Hz) , 4.57 (2H, s), 7.26-7.35 (5H, ).

製造例 33 ：親水性スぺーサ一分子の合成（4 - 4)

t e r t一プチルージメチル一 { 4一 [2 - (2— { 2 - [2— (2—トリチルォキシ一エトキシ）一エトキシ] —エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 一フエノキシ } シラン (化合物 21 ) の合成 - _n TBSO^-s

Tro^₀^( ^₀^o^_0H リ , つ、つ _Tr

2 21 化合物 2 (2. 8 g， 5. 8 mm o 1 ) のトルェン（10m l ) 溶液へ、トリプチノレフォスフィン（ 1. 1 7 g , 5. 8 mm o 1 ) のトルエン（2m l ) 溶液を室温で加え、 1時間攪拌した。これを化合物 1 8 (1. 1 g, 4. 9 mmo

1 ) と、 1, 1，一ァゾビス（N, N—ジメチルホルムアミド）（1 , 0 g， 5.

8 mmo 1 ) のトルエン（10m l ) 溶液へゆっくりと加え、室温にて終夜攪拌した。酢酸ェチルを加え、生じた不溶物をセライトろ過によって取り除き、酢酸ェチルにより洗浄を行った。合わせた有機相を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善 YFLC Ge l、溶出液（n—へキサン：酢酸ェチル 2 ： 1)) にて精製し、化合物 2 1 (無色オイル 2. 0 3 g， 60 %) を得た。

— NMR(CDC1₃) δ： 0.16 (6Η, s), 0.97(9H, s)， 3.23 (2H, t, J=5Hz) , 3.64- 3.69(14H, m), 3.80 (2H, t, J=5Hz) , 4.04 (2H, t， J=5Hz) , 6.69-6.75 (5H, m), 7.23-7.30 (13H， m)， 7.45-7.47 (6H, m).

製造例 34 ：親水性スぺーサ一分子の合成（4- 5)

4- [2— （2— { 2 - [2— (2—トリチルォキシ一エトキシ）一エトキシ] ーェトキシ} 一エトキシ）一エトキシ] フエノール（化合物 22) の合成

21 22

氷冷した化合物 21 (1. 88 g, 2. 74mmo 1 ) の THF (20m l ) 溶液へ 1Mテトラプチルアンモニゥムフルオラィド THF溶液 (4m l ) を加えた。添加終了後、氷浴を外し室温にて 10分間攪拌した。これを水へ注ぎ、反応を停止させた後、酢酸ェチルから抽出した。有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過減圧濃縮後、得られた残渣をシリ力ゲルカラムクロマトグラフィー（山善 YFLC G e 1、溶出液（ίΐ一へキサン：酢酸ェチル 2 ： 1〜1 ： 1)) にて精製し、化合物 22 (淡黄色オイル

1. 45 g, 92%) を得た。

- NMR(CDC1₃) δ :3.23 (2Η, t, J-5Hz) , 3.64-3.69 (m, 14H), 3.79 (2H, t, J=5Hz) , 4.04 (2H， t, J=5Hz) , 4.68 (1H， s), 6.71-6.79 (4H， m), 7.20-7.30 (9H， m)， 7.45-7.47 (6H, m).

製造例 35 ：親水性スぺーサ一分子の合成（4- 6)

1 - [2 - (2- { 2一 [2- (2—べンジルォキシーェトキシ) ーェトキシ] —エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 一 4一 [2— （2— { 2 - [2 - (2 - トリチルォキシーエトキシ) 一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）ーェトキシ] ベンゼン (化合物 23 ) の合成

23 氷冷した水素化ナトリウム（ 800 m g， 20 mm o 1 ； 60% in mineral oil) の THF (1 5m 1 ) 懸濁溶液へ、化合物 22 (1. 2 g, 2. 1 mm o 1) の THF (20m l ) 溶液をゆっくりと加え、 20分間攪拌した。ここへ化合物 20 (1. 7 g, 4. 3mmo 1 ) の THF (1 2m l ) 溶液を加え 20分間攪拌した。氷浴を外した後、更に 2時間室温にて攪拌した。注意深く水を加えて反応を停止させた後、減圧下濃縮した。塩化メチレンから抽出し、合わせた有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過減圧濃縮後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善 YFLC G e l , 溶出液（n—へキサン：酢酸ェチル 2 ： 1〜1 ： 1)) にて精製し、化合物 2 3 (淡黄色オイル 1. 56 g, 84%) を得た。

-腿（CDC1₃) δ： 3.23 (2H， t, J=5Hz)， 3.61-3.72 (30H, m)， 3.78-3.82 (4H， m), 4.03-4.07 (4H, m), 4.56 (2H, s)， 6.82 (4H, s), 4.12 (1H, t), 7.09— 7.34 (14H, m), 7.44—7.47 (6H, m).

製造例 36 ：親水性スぺーサ一分子の合成（4 - 7)

2— (2 - { 2 - [2— (2 - {4一 [2 - (2 - { 2 - [2— (2—べンジノレォキシ一エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } ーェトキシ) ーェトキシ] 一フエノキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）エタノール (化合物 24) の合成、

24

氷冷した化合物 23 (1. 43 g, 1. 62mmo 1 ) の塩化メチレン（20 m 1 ) 溶液へ、 10 %トリフルォロ酢酸を含む塩化メチレン溶液（10m l ) を加え、さらにここへ水（1m l ) を加えた後、氷浴を外し室温にて 2時間 30分間攪拌した。反応液を飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液へ注ぎ反応を停止させた後、塩化メチレン、クロ口ホルムから抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過減圧濃縮後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー

(山善 YFLC Ge l , 溶出液（ 1 0 %メタノールを含む酢酸ェチル））に供し、化合物 24 (淡黄色オイル 875mg， 85%) を得た。

MS (ra/z)： 641 (ΜΗ⁺) , — NMR(CDC1₃) δ： 3.59-3.74 (32Η, m)， 3.80-3.84 (4H, m), 4.05-4.08 (4H, m), 4.56 (2H, s)， 6.83 (4H, s)， 7.26-7.34 (5H， m). 製造例 37 ：親水性スぺーサ一分子の合成（4- 8)

[2- (2— { 2 - [2 - (2 - {4一 [2 - (2— { 2一 [2— (2—べンジルォキシ一エトキシ）ーェトキシ] ーェトキシ} —エトキシ）一エトキシ] —フエノキシ } ーェトキシ) —エトキシ] ーェトキシ} ーェトキシ) 一エトキシ] 酢酸 t e r t—プチルエステル（化合物 25) の合成

24

25 氷冷した水素化ナトリウム（ 1 80 m g， 4. 5 mm o 1 ； 60% in mineral oil) の THF/DMF ( 5 / 1混液 7 m 1 ) 懸濁溶液へ、化合物 24 (8 1 7 mg, 1. 28mmo 1 ) の THF (6m l ) 溶液をゆつくりと加え、 30分間攪拌した。ここへプロモ酢酸 t e r t—ブチルエステル（ 1. 0 g， 5. 1 mm o 1 ) の THF (7m l ) 溶液を加えた。氷浴を外した後、更に 2時間室温にて攪拌した。注意深く水を加えて反応を停止させた後、酢酸ェチルから抽出し、合わせた有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過減圧濃縮後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善 YFLC G e 1、溶出液（酢酸ェチル〜 5%メタノールを含む酢酸ェチル溶液））にて精製し、化合物 25 (淡黄色オイル 655mg， 68%) を得た。

-麗 R(CDC1₃) δ： 1.47 (9Η, s), 3.61-3.73 (30H, m), 3.81-3.84 (4H， m), 4.02 (2H, s)， 4.05-4.08 (4H, ra), 4.56 (2H, s), 6.83 (4H, s)， 7.26-7.24 (5H, m) .

製造例 38 ：親水性スぺーサ一分子の合成 (4-9)

[2— （2— { 2 - [2— （2— { 4 - [2 - (2— { 2 - [2 - (2—ヒドロキシ一エトキシ) 一エトキシ] ーェトキシ} 一エトキシ）ーェトキシ] —フエノキシ } —エトキシ）一エトキシ] —エトキシ } —エトキシ）一エトキシ] 酢酸 t e r t一プチルエステル（化合物 26) の合成

25

、0一 OO¾u

26

窒素雰囲気下、水酸化パラジウム（20重量％； 145mg) のメタノール

(4m l) 懸濁溶液へ化合物 25 (655mg, 0. 868 mm o 1 ) のメタノール（6m l ) 溶液を加え、水素雰囲気に置換した後、室温で 4時間攪拌した。再ぴ窒素雰囲気とした後、酢酸ェチル（約 1 0m l ) を加え、シリカゲル上でろ過し、 1 0 %メタノールを含む酢酸ェチル溶液で洗浄した。減圧濃縮後、化合物 2 6の粗精製物を得た。

一 NMR(CDC1₃) δ： 1.47 (9H， s), 3.59-3.84 (36H, m), 3.81-3.84 (4H, m), 4.02 (2H， s)， 4.07-4.09 (4H, m)， 6.84 (4H, s).

製造例 39 ：親水性スぺーサ一分子の合成 (4 - 10)

[ 2— (2— { 2— [ 2 - (2— { 4一 [ 2— (2— { 2 - [ 2 - (2—アジド —エトキシ）一エトキシ] —エトキシ } —エトキシ）一エトキシ] 一フエノキシ} —エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 酢酸 _t e r t一ブチルエステノレ (化合物 2 7) の合成

27

化合物 2 6 (2 5 4 m g， 0. 4 5 1 mm o 1 ) のピリジン（ 1. 5 m l ) 液へ、 4一ジメチルァミノピリジン（l l m g, 0. 0 9 mm o 1 ) を加え氷冷した後、 ρ— トノレエンスノレホュノレクロライド（ 1 3 0 m g , 0. 6 7 7 mm o 1 ) を加え、 3 0°C〜 4 0でに加温しつつ 2時間攪拌した。ここへ氷を加えて反応を停止させた後、酢酸ェチル、水を加えた。酢酸ェチルから抽出し、合わせた有機相を飽和硫酸水素力リゥム水溶液、飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過減圧下濃縮し、粗精製物を得た得られた粗精製物を DMF (lm l ) に溶解し、ここへアジ化ナトリウム（26

4m g , 4. l mm o 1 ) を加えた。約 6 0°Cに加温し、 9 0分間攪拌した。室温まで放冷した後、酢酸ェチルで希釈した。更に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた後、酢酸ェチルから抽出した。合わせた有機相を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過減圧下濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善 YF L C G e 1、溶出液； 1 0 %メタノールを含む酢酸ェチル溶液）にて精製し、化合物 27 (無色オイル 1 96mg， 73%、 2 s t e p s ) を得た。

- MR(CDC1₃) δ： 1.47 (9Η, s), 3.38 (2H, t， J=5Hz) , 3.66-3.72 (30H， m), 3.81-3.84 (4H, m)， 4.02 (2H, s), 4.06-4.08 (4H, m), 6.84 (4H, s) .

製造例 40 ：親水性スぺーサ一分子の合成 (4- 11)

[2- (2— {2- [2 - (2- {4- [2— （2 - {2— [2— （2—ァミノ一エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } —エトキシ）一エトキシ] —フエノキシ} 一エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } —エトキシ）一エトキシ] 酢酸 t e r t一プチルエステル (化合物 28) の合成 1 - - _ ,COO¾u

27

28

窒素雰囲気下、水酸化パラジウム（20重量％； 18mg) のメタノール（1 m 1 ) 懸濁溶液へ化合物 27 (1 9 Omg, 0. 323 mm o 1 ) のメタノール

(1. 5m l ) 溶液を加え、水素雰囲気に置換した後、室温で 1時間攪拌した。再び窒素雰囲気とした後、セライト上で不溶物をろ別し、メタノールで洗浄した。減圧下濃縮し化合物 28の粗精製物を得た。

MS (m/z)： 664 (MH+) .

製造例 4 1 ：親水性スぺ一サー分子の合成（4- 12)

{ 2 - [2 - (2 - {2— [2— （4一 { 2 - [2— （2— {2— [2— (9H 一フルオレン一 9—ィルーメトキシカルボニルァミノ）ーェトキシ] ーェトキシ} —エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } ーフエノキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 酢酸 _t e r t—ブチルエステル

(化合物 29 ) の合成 'Bu

28

29

製造例 40で得られた化合物 28の粗精製物（1 75mg, 0. 3 1 1 mm o

1 ) の THF (1. 2m l) 溶液を氷冷し、ここへ炭酸 9一フルォレニルメチルスクシンィミジル（1 1 5mg, 0. 34 mm o 1 ) の THF (0. 5m l ) 溶液を力 Elえ、更にトリェチノレアミン（62mg， 0. 62 mm o 1， 85 ^ 1 ) を加え 45分間攪拌した。ここへ水を加えて反応を停止させた後、酢酸ェチルから抽出し、合わせた有機相を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過減圧下濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善 YFLC G e

1、溶出液；酢酸ェチル〜 10 %メタノールを含む酢酸ェチル溶液）にて精製し、化合物 29 (無色オイル 1 96mg， 84%) を得た。

¹H-NMR(CDC1₃) δ： 1.47 (9Η, s)， 3.37-3.41 (1H, m), - 3.55-3.84 (36H, m),

3.66-3.72 (30H, m), 4.01 (2H, s)， 4.01-4.07 (4H, m), 4.20-4.23 (1H, m)，

4.40 (2H, d， J=7Hz) , 6.81 (4H, s), 7.29-7.33 (2H, m), 7.39-7.41 (2H, m) ,

7.60 (2H, d, J=7Hz) , 7.76 (2H, d, J=7Hz) .

製造例 42 ：親水性スぺーサ一分子の合成（4- 13)

{ 2 - [2 - (2— {2— [2— （4一 { 2 - [2— （2— { 2 - [2— (9 H 一フルオレン一 9—ィル一メトキシカルポニノレアミノ）ーェトキシ] —ェトキシ} —エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } —フエノキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 酢酸（化合物 30) の合成

化合物 2 9 ( 1 9 6 m g, 0. 2 5 mm o 1 ) へ 5 %含水トリフルォロ酢酸 (1. 5m l ) を室温で加え、 5分間攪拌した。トルエン（約 l m l ) を加え、減圧下濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善 YF LC G e 1、溶出液； 3 %メタノールを含むク口口ホルム〜 1 0 %メタノールを含む酢酸ェチル溶液）にて精製し、化合物 3 0 (無色オイル 1 7 5mg， 9 6%) を得た。

MS (m/z)： 830 (MH⁺)， —丽 R(CDC1₃) δ ： 1.47 (9H， s), 3.37—3.39 (1H, m), 3.56-3.84 (36H, m), 4.02-4.07 (4H, m), 4.12 (2H, s), 4.22-4.23 (1H， m), 4.40 (2H, d, J=7Hz) , 6.81 (4H, s)， 7.29-7.33 (2H， m), 7.38-7.41 (2H，m), 7.60 (2H， d, J=7Hz) , 7.76 (2H, d, J二 7Hz).

製造例 4 3 ：親水性スぺーサー付樹脂の合成：化合物 3 0誘導体付 TOYOパール樹脂（TS Kg e l AF- a m i n o) の合成

T Ο Υ Οパール樹脂（TSKg e 1 AF— am i n o ； 1 0 0 μ 1中に 0. 0 1 mm o 1のァミンが存在）に塩化メチレン（0. 4m l ) と { 2— [2 -

(2— { 2— [2— （4— { 2- [2 - (2— { 2- [2— (9H—フルオレン一 9ーィルーメトキシカルボニルァミノ）一エトキシ] 一エトキシ } —ェトキシ）ーェトキシ] ーェトキシ} ーフエノキシ) 一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 酢酸（6 6 m g, 0. 0 8mmo l ) を加え、更にべンゾトリァゾールー 1一イノレー才キシ一トリスーピロリジノ一ホスホニゥムへキサフルォロホスフェート（P y BOP ; 5 2mg， 0. 1 0mmo l )、及び N， N—ジイソプロピルェチルァミン (3 4 1， 0. 2 Ommo 1 ) をカロえ、室温で 4時間振とうした。反応終了後、樹脂を塩化メチレン、及ぴ DMFで十分に洗浄した後、ニンヒドリンテストにより縮合を確認した。得られた樹脂に無水酢酸/塩化メチレン ZNMP (1/8/2) の混合溶液（1. Om l) を加えて室温で 3時間振とうした。樹脂を塩化メチレン、及び DMFで十分に洗浄した後、ピぺリジン ZDMF/塩化メチレン (1/4/4) の混合溶液 (0. 5 m 1) を加えて室温で 3時間振とうした。反応終了後、樹脂を塩化メチレン、及ぴ DM Fで十分に洗浄した後、ニンヒドリンテストによりァミンの存在を確認し、親水性スぺーサ一が樹脂に付いたことが確認できた。

製造例 44 ：親水性スぺーサー付樹脂の合成：化合物 30誘導体ダイマー付 TO YOパール樹脂（T S K g e 1 AF— am i n o) の合成

製造例 43で得られた樹脂（100 1 ) を製造例 43の手法に従って反応し目的物を得た。これを製造例 43の手法に従ってァセチル化、脱 Fmo cィ匕して、化合物 30誘導体ダイマー付 TOY Oパール樹脂を得た。ニンヒドリンテストょりァミンの存在を確認し、親水性スぺーサ一が樹脂に付いたことが確認できた。製造例 45 ：親水性スぺーサ一分子の合成（5-1)

2 - [[(9 H—フルオレン一 9—ィルメトキシ) 力ルポニル] ァミノ] —ァセトアミド (化合物 32) の合成

2—アミノーアセトアミド塩酸塩（化合物 31， 10. 0 g， 90. 5mm o 1 ) に、 10 %炭酸ナトリゥム水溶液（600m l ) 及びァセトン（250m 1 ) を加え、次いで氷冷下、 N— (9—フルォレニルメトキシカルボ二ルォキシ）スクシンィミド（30. 5mg， 90. 5 mm o 1 ) のァセトン溶液（ 25

0m l) を滴下した。室温で 1時間攪拌後、減圧濃縮して得られた残渣を酢酸ェチルに溶解し、有機相を 2 Nクェン酸水溶液、炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥した。固形物をろ過、減圧濃縮した後、メタノールより結晶化を行い、目的とする 2— [[(9 H—フルオレン一 9 一ィルメトキシ) カルボニル] ァミノ] 一ァセトアミド（化合物 32 ; 27. 7 g , q u a n t) を得た。

δ： 3.87 (2H， bd)， 4.23 (1H， t)， 4.46 (2H， d), 7.30 (2H, t)_: 7.39 (2H， t), 7.57 (2H, d), 7.75 (2H, d) ; MS (m/z) ; 297.2 (M⁺).

製造例 46 ：親水性スぺーサ一分子の合成（5- 2)

N— [(9H—フルオレン一 9ーィル一メトキシカルボ-ルァミノ）ーメチル] — 2， 3ージヒドロキシースクシンアミド酸（化合物 3 3)の合成

32 33

化合物 32 (1. 50 g, 5. 06 mm o 1 ) に、酢酸ェチル（15 m 1 )、アセトニトリル（1 5m l )、 H₂O ( 1 5m l ) 及ぴ [ビス（トリフルオローァセトキシ）ョード] ベンゼン（2. 83 g, 6. 58mmo 1 ) を加え、室温で 1. 5時間攪拌した。 0. 2 N塩酸水溶液で逆抽出を行った後、得られた水相をジェチルエーテル：へキサン混合溶媒で洗浄した。氷冷下、飽和炭酸水素ナトリウム水にて水相をアルカリ性とした後、クロ口ホルムで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥し、固形物をろ過、減圧濃縮した。得られた残渣に、 L一（ + ) —酒石酸（1. 42 g， 9. 45mmo l ) 及ぴ N， N—ジメチルホルムアミド .（100m 1 ) を加え溶解させた。次いで、 1 ーェチルー 3— (3—ジメチルーアミノプロピル）一カルポジイミド塩酸塩

(795mg, 4. 1 5mmo 1 ) を加えた後、室温で終夜攪拌した。これを減圧濃縮して得られた残渣を酢酸ェチルに溶解し、有機相を 2 Nクェン酸水溶液で洗浄した。次いで、炭酸水素ナトリウム水を用いて逆抽出を行った後、得られた水相を酢酸ェチルで洗浄した。氷冷下、 2 Nクェン酸水溶液にて水相を酸性とした後、酢酸ェチルで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物をろ過、減圧濃縮した後、メタノールより結晶化を行い、目的とする N— [(9 H—フルオレン一 9ーィルーメトキシカルボ-ルァミノ）ーメチル] — 2， 3—ジヒドロキシースクシンアミド酸（化合物 3 3 ； 58 8m g, 2 9%) を得た。

NMR (d— acetone) δ： 4.24 (1Η, t)， 4.23 (2H, d) , 4.44 (1H, d) , 4.58 - 4.71 (3H, m), 7.33 (2H, t), 7.41 (2H， t)， 7.71 (2H， d), 7.86 (2H, d) ； MS (m/z)； 401.2 (M+).

製造例 4 7 ：親水性スぺ一サー付樹脂の合成：アミノメチルタータリックジアミド誘導体付 TOY Oパール樹脂の合成

製造例 2 7の手法に従って、 TOYOパール樹脂（T SKg e l AF— a m ί η ο ; 1 0 0 μ 1中に 0. 0 1 mm o 1のアミンが存在）に化合物 3 3を反応させ、アミノメチルタータリックジアミド誘導体付 TOYOパール樹脂〔TOY 0+ (AMT) J を得た。

製造例 48 ： F K 5 0 6誘導体結合型親水性スぺーサー付樹脂の合成

(TOYO+ (AMT) !-FK 5 0 6)

製造例 4 7で得られたアミノメチルタータリックジアミド誘導体付 TOYOパール樹脂〔TOYO+ (AMT) J より、製造例 3に述べた方法に準じ、親水性スぺーサーを有する FK 5 0 6結合型樹脂〔TOYO+ (AMT) ,-FK 5

0 6〕を合成した。 TOYOパール樹脂と FK5 0 6の間に介在する親水性スぺーサ一部分の HB A数は 1 0、 HBD数は 7である。尚、 TOYOパール樹脂のリンカーに由来する HBA数おょぴ HBD数を考慮しなければ、当該親水性スぺーサ一の HBA数は 6、 HBD数は 4である。

製造例 49 ： FK506誘導体結合型親水性スぺーサー付樹脂の合成

(TOYO+ (AMT) ₂— FK506)

製造例 47にて得られたアミノメチルタータリックジアミド誘導体付 TOYO パール樹脂〔TOYO+ (AMT) より、製造例 47に従い親水性スぺーサ一の伸長反応を行った。次いで、製造例 3に述べた方法に準じ、親水性スぺーサ一を有する FK 506結合型樹脂〔TOYO+ (AMT) ₂— F K 506〕を合成した。 TOYOパール樹脂と FK 506の間に介在する親水性スぺーサ一部分の HB A数は 16、 HBD数は 1 1である。尚、 T O Y Oパール樹脂のリンカ一に由来する HBA数おょぴ HBD数を考慮しなければ、当該親水性スぺーサ一の HBA数は 1 2、 HBD数は 8である。

製造例 50 ：親水性スぺーサ一分子の合成（6-1)

(2, 3， 4， 5 , 6—ペンタヒドロキシ一へキシル）一力ルパミン酸 9H— フルオレン一 9ーィルメチルエステル (化合物 35 ) の合成

Fmoc-OSu

34 35

D一グルカミン（化合物 34 : 9. 0 g， 49. 7 mm o 1 ) を 1 0 %炭酸ナトリゥム水溶液 200m l と混ぜ、氷冷下攪拌した。 9一フルォレニルメチルスクシンィミジルカルボナート（16. 7 g, 49. 7mmo 1 ) を DME (1， 2—ジメトキシェタン） 200m lに溶かし、反応系中に加え、氷冷下 30分間攪拌した。析出した結晶をろ取し、結晶を H₂Ox3、 Me ΟΗχ 3にて洗浄した。減圧下乾燥し、目的の化合物（2, 3， 4, 5, 6—ペンタヒドロキシ一へキシル）一力ルバミン酸 9 H—フルオレン一 9ーィルメチルエステル（化合物 3 5 ： 20 g) を定量的に得た。

一雇 R(DMS0 - d6) δ ： 2.99-3.05 (m， 1H), 3.17—3.20 (m, 1H)， 3.37—3,48 (m， 3H), 3.56-3.63 (m， 3H)， 4.19-4.27 (m, 4H), 4.30—4.33 (m, 1H)， 4.39-4.40 (m, 1H), 4. 8-4.49 (m, 1H), 4.73 (m, 1H), 7.09-7.13 (m, 1H)， 7.35 (t, J=7.2Hz, 2H)， 7.41 (t， J=7.2Hz, 2H), 7.71 (d, J二 7.2Hz)， 7.88 (d， J=7.2Hz, 2H) ； MS (m/z) 404 (MH⁺) .

製造例 5 1 ：親水性スぺーサ一分子の合成（6- 2)

{ 6_ [ビス一（4—メトキシ一フエ-ル）一フエ二ルーメトキシ]一 2， 3， 4， 5—テトラヒドロキシ一へキシル } 一力ルバミン酸 9 H—フルオレン一 9 ( ノレメチルエステル（化合物 36) の合成

化合物 35 (5. 0 g， 1 2. 4mmo 1 ) をピリジン 1 00 m 1に溶かし共沸した。この操作を 2回行った後、乾燥ピリジ 10 Om 1に溶かし、窒素気^ 下氷冷した。 4, 4，ージメトキシトリチルクロライド（5. 0 g, 14. 9m m o 1 )、ジメチルァミノピリジン（1. 5 g, 1 2. 4mmo 1 ) を加え、氷冷下から室温にゆっくりと昇温し、室温にて 1 7時間攪拌した。ピリジンを減圧留去した後、酢酸ェチル 500m lにて希釈した。水を加えた後、有機相を分離後、再び水相を酢酸ェチルにて抽出した。酢酸ェチル相は飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。減圧濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（CHC l ₃ : Me OH= 10 : 1) にて精製し、目的の化合物（化合物 36 : 5. 06 g) を収率 5 7. 9%にて得た。

一 NMR(d - acetone) δ： 3.23-3.38 (m, 4H), 3.67—3.95 (m, 6H), 3.77 (s， 6H), 4.05 (d, 1H), 4.18-4.24 (m, 2H), 4.31-4.33 (m, 2H), 6.51 (m, 1H), 6.86 (d, 4H)， 7.17-7.42 (m, 1H)， 7.51 (d, 2H), 7.70 (d, 2H), 7.86 (d, 2H). 製造例 52 ：親水性スぺーサ一分子の合成（6 - 3)

[6— [ビス一（4—メトキシ一フエュル）一フエエルーメトキシ]一 2, 3， 4, 5ーテトラキスー (tert -ブチルジメチルーシラニルォキシ) 一へキシノレ]一カルパミン酸 9 H—フルオレン一 9ーィルメチルエステル（化合物 37)

化合物 36 (2. 46 g, 3. 49 mm o 1 ) を 2, 6—ルチジン（1 5 g，

140 mm o 1 ) に溶かし、氷冷下攪拌した。トリフルォロメタンスルホン酸 t e r tーブチノレジメチノレシリル (1 8. 4 g , 69. 8 mm o 1 ) をゆつくりと加えた。氷冷下から室温へゆっくり戻し、一昼夜攪拌した。ジクロロメタン 2 00m l , 水 20 Om 1を加え、室温にて 2時間攪拌した。有機相を分離後、水相をさらにジクロロメタン 200m lにて抽出した。ジクロロメタン相を無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィ一 (n-h e X a n e ： Ac OE t = 5 ： 1) にて精製し、目的の化合物（化合物 3 7 : 3. 5 g) を収率 86. 4%にて得た。

- NMR(CDC1₃) δ： - 0.1 - 0.2 (m， 24H), 0.72 (s, 9H), 0.75 (s, 9H)， 0.91-0.96 (m， 18H), 3.25 (d, 1H), 3.35-3.50 (m， 3H), 3.59 (m， 1H)， 3.75 (s, 6H)， 3.80 (m, 1H)， 4.03-4.19 (m, 3H), 4.29—4.41 (m， 2H)， 5.18 (m， 1H), 6.76 (d， J=8. Hz, 4H), 7.15-7.21 (m, 9H)， 7.27—7.34 (m, 4H), 7.47 (t, J=7.2Hz, 2H)， 7.65 (d， J=7.2Hz, 2H).

製造例 53 ：親水性スぺーサ一分子の合成（6- 4)

[2, 3 , 4， 5—テトラキスー ( t e r t一プチルジメチルーシラニルォキシ）一 6—ヒドロキシへキシル] —カルパミン酸 9 H—フルオレン一 9ーィルメチルエステル（化合物 38) の合成

ィ匕合物 37 ( 1. 16 g， 1 mm o 1 ) を（ギ酸：ジクロロメタン = 1 ： 1

0) 溶液 1 0m lに溶かし、室温にて 2時間攪拌した。飽和重曹水に反応液を注ぎ込み、ジクロロメタン 100m 1にて抽出した。ジクロロメタン相を無水硫酸マグネシゥムにて乾燥し、シリカゲノレカラムクロマトグラフィー (n - h e X a n e ： Ac OE t = 10 ： 1〜5 ： 1) にて精製し、目的のアルコール体（化合物 38 ： 60 Omg) を収率 69. 8%にて得た。

—腿 R(CDC1₃). δ :— 0.50— 0· 10 (m, 24H), 0.77-0.87 (m, 36H), 2.10 (m, 1H), 3.29-3.36 (m, 1H), 3.43-3.56 (m, 2H), 3.57-3.61 (m, 1H), 3.65-3.71 (m， 1H), 3.75 (m, 1H), 4.03 (m， 1H), 4.09 (m, 1H), 4.27-4.32 (m, 2H), 4.90 (m， 1H), 7.17-7.21 (m， 2H)， 7.29 (t, J=7.6Hz, 2H), 7.49 (t, J=7.6Hz， 2H), 7.66 (d, J=7.6Hz, 2H) ； MS (m/z) 860 (MH+) .

製造例 54 ：親水性スぺーサ一分子の合成（6 - 5)

2， 3, 4， 5ーテトラキスー ( t e r t—プチノレ一ジメチノレ一シラニノレオキシ） - 6 - (9H—フルオレン一 9一ィルメトキシカルボニルァミノ）一へキサン酸（化合物 39 ) の合成 T

38 39 ィ匕合物 3 8 (5 Omg , 5 8. l m o l ) に、水（1. 5 m l )、ァセト二トリル（4. 5 m l ) 及ぴジクロロメタン（0. 7 5 m l ) を加え、溶解させた。次いで、過ヨウ素酸ナトリゥム（1 2 1 m g， 5 8 1 μ m o 1 ), 次いで塩化ルテユウム（I I I ) 水和物（5 m g， 2 3 β ΐα ο 1 ) を加えた後、室温で 3 時間攪拌した。これに酢酸ェチルを加え、得—られた有機相を 2 Ν硫酸水素力ゥム水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物をろ過、減圧濃縮した後、分取 T L C (へキサン：酢酸ェチル = 4 ： 1 ) にて精製し、目的とする 2， 3 , 4, 5—テトラキスー（tert—プチルージメチルーシラニルォキシ） - 6 - (9 H—フノレオレン一 9一イノレメトキシカノレポ二ノレアミノ）一へキサン酸（化合物 3 9 ： 9. 1 m g , 1 8 %) を得た。

丽 R(CDC1₃) δ： 0.07-0.20 (24Η, ) , 0.91 (36H, m), 3.43 (1H, m), 3.52 (1H， m)， 4.00 (III, m), 4.05 (2H， t， J=5.1Hz), 4.20 (2H, m), 4.41 (2H， d)， 4, 53 (1H, s), 7.30 (2H， t, J=7.4Hz) , 7.39 (2H, t, J=7.4Hz) , 7.59 (211, m)， 7.76 (2H, d, J=7.4Hz) ； MS (m/z)； 874.4 (MH+) .

製造例 5 5 ：親水性スぺーサ一分子の合成（7-1)

4 - [N，一 ( 9 H—フルオレン一 9一イノレメトキシカルボ二ノレ) —ヒドラジノ] 一 2， 3—ジヒドロキシ一4—ォキソープタン酸（化合物 4 1 ) の合成

FmocHN- H -HCI +

40 ₁₅ 41

N - ( 9 H— 9—フルォレュノレメトキシカルボニル）ヒドラジン塩酸塩（ィ匕合物 4 0 ； 5 0 O m g, 1. 7 2 mmo 1 ) 及ぴ L— ( + ) —酒石酸（化合物 1 5 ； 634mg, 4. 22 mm o 1 ) に、 N， N—ジメチルホルムアミド（10 m 1 ) 及ぴジィソプロピルェチルァミン（300 1， 1. 72 mm o 1 ) を加え、溶解させた。次いで、 1ーェチルー 3— (3—ジメチルーァミノプロピル） —カルポジイミド塩酸塩（485m g, 2. 53mmo 1 ) を加えた後、室温で終夜攪拌した。これを減圧濃縮して得られた残渣に、炭酸水素ナトリウム水、及ぴジェチルエーテルを加え、二相を分液した。得られた水相を、氷冷下、 2N硫酸水素カリウム水溶液にて酸性とした後、酢酸ェチルで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物をろ過、減圧濃縮した後、メタノール一ジェチルエーテルより結晶化を行い、目的とする 4一 [Ν' - (9 Η—フルオレン一 9—ィルメトキシカルポニル）ーヒドラジノ] - 2 , 3一ジヒドロキシー4一ォキソ一ブタン酸（化合物 41 : 413mg, 63 %) を得た。

^-NMRCd-acetone) δ： 4.29 (2Η, t, J=7.1Hz) , 4.35 (1H， m), 4.60 (1H, s)， 4.63 (1H， s), 7.33 (2H， t， J=7.4Hz) , 7.42 (2H, t, J二 7.4Hz)， 7.76 (2H， d， J=7.4Hz)， 7.85 (2H， d, J=7.4Hz) ； MS (m/z)； 387.2 (M+) .

製造例 56 ：親水性スぺーサー付樹脂の合成：ヒドラジノタータリックアミド誘導体付 T O Y Oパール樹脂の合成

TO YOパール樹脂（TSKg e 1 AF— am i n o ； 100 /z 1中に 0. 01 mmo 1のァミンが存在）に塩化メチレン（0. 5m l) を加え、更に製造例 55で得られた化合物 41 (15. 5mg, 40 mo 1 )、 N， N—ジイソプロピルェチルァミン（16. 7 1， 96 /imo l)、 P y BOP (25. 0 mg, 48 ^ mo 1 ) を加え、室温で終夜振とうした。樹脂を DMF、及ぴ塩化メチレンで十分に洗浄した後、塩化メチレン（0. 5m l) を加え、再度、化合物 41 (1 5. 5mg, 40 mo 1 )、 N， N—ジイソプロピルェチルァミン (1 6. 7 μ 1 , 9 6 μ πιο 1)、 P y BOP (2 5. 0 m g , 48 /ί m o 1 ) を加え、室温で 5時間振とうした。反応終了後、樹脂を塩化メチレン、及び DM Fで十分に洗浄した後、得られた樹脂に無水酢酸/メタノール/塩化メチレン (1/1/1 0) の混合溶液（1. 5m l ) を加えて室温で 2 5分振とうした。反応終了後、樹脂を塩化メチレン、及び DMFで十分に洗浄した後、 2 0%ピぺリジン/ DMF溶液（0. 5m l ) を加えて室温で 1 0分振とうした。次いで、樹脂を DMFで洗浄した後、再度、 20%ピぺリジン/ DMF溶液（0. 5 m 1 ) を加えて室温で 2 0分振とうした。反応終了後、樹脂を塩化メチレン、及ぴ DMFで十分に洗浄し、ヒドラジノタータリックアミド誘導体付 TOYOパール樹脂〔TOYO+ (Hy T) を得た。

製造例 5 7 ： FK 5 0 6誘導体結合型親水性スぺーサー付樹脂の合成

(TOYO+ (Hy T) !-FK 50 6)

製造例 5 6で得られたヒドラジノタータリックアミド誘導体付 TOYOパール樹脂〔TOYO+ (Hy T) J より、製造例 3に述べた方法に準じ、親水性スぺーサ一を有する FK 5 0 6結合型樹脂〔TOYO+ (Hy T) _X-FK 5 0 6] を合成した。 TOYOパール樹脂と FK 5 0 6の間に介在する親水性スぺーサ一部分の HB A数は 1 0、 HBD数は 7である。尚、 TOYOパール樹脂のリンカーに由来する HB A数おょぴ HBD数を考慮しなければ、当該親水性スぺーサ一の HBA数は 6、 HBD数は 4である。

製造例 5 8 ： FK 5 0 6誘導体結合型親水性スぺーサー付樹脂の合成：

(TOYO+ (Hy T) 一 FK506) TOYO-Pearl resin

製造例 56で得られたヒドラジノタータリックアミド誘導体付 T O Y Oパール樹脂〔TOYO+ (Hy T) J より、製造例 27に従い親水性スぺーサ一の伸張反応を行った。次いで、製造例 3に述べた方法に準じ、親水性スぺーサーを有する FK 506結合型樹脂 [： TOYO+ (Hy T) ₂— FK506〕を合成した。 T O Y Oパール樹脂と F K 5 0 6の間に介在する親水性スぺーサ一部分の H B A数は 1 6、 H B D数は 1 1である。尚、 TOYOパール樹脂のリンカーに由来する HB A数および HBD数を考慮しなければ、当該親水性スぺーサ一の HB A数は 1 2、 HBD数は 8である。

製造例 5 9 ：親水性スぺーサ一分子の合成（8-1)

3， 5一ビス一 ( t e r t—プチルージメチル一シラ -ルォキシ）一フエノーノレ (化合物 43) の合成

42 43

氷冷したベンゼン一 1 , 3, 5—トリオール（化合物 42 ； 1 0 g , 79. 3 mm o 1 ) の DMF (1 50m l ) 溶液へ、ィミダゾール（1 6. 2 g, 238 mm o 1 ) 及ぴ t e r t一プチルジメチルシリルクロリド（23. 8 g, 1 58 mmo 1) の DMF (1 50m l ) 溶液を加え、氷浴を取り除き室温にて終夜攪拌した。これを水へ注ぎ、反応を停止させた後、エーテルから抽出した。合わせた有機相を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過、減圧濃縮後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（B i o t a g e、溶出液（n—へキサン：酢酸ェチル 19 ： 1〜9 ： 1)) にて精製し、化合物 43 (白色固体 9. 8 g, 35%) を得た。

MS (m/ z )： 355.2 MH+, — NMR(CDC1₃) δ： 0.18 (12H, s), 0.96 (18H, s), 4.58 (1H， s), 5.94—5.97 (1H， m)， 5.97-5.98 (2H, m).

製造例 6 0 ：親水性スぺーサ一分子の合成（8 - 2)

1， 3—ビス一（ t e r t—プチルージメチル一シラニルォキシ）一5— [2— (2 - { 2 - [2- (2—トリチルォキシ一エトキシ）一エトキシ] ーェトキシ} 一エトキシ）ーェトキシ] 一ベンゼン (化合物 44 ) の合成

4³

OTBS 44

化合物 2 (4. 3 g , 8. 9 mm ο 1 ) のトルエン（20m l) 溶液へ、トリプチルフォスフィン（2. 35 g , 8. 92mmo 1 ) を室温で加え、 1時間攪拌した。これを化合物 43 (3. 3 g， 1 1. 6mmo 1 ) と、 1 , 1， —ァゾビス（N， N—ジメチノレホノレムアミド）（2. 0 g， 1 1. 6 mm o 1 ) のトノレェン（20m l) 溶液へゆつくりと加え、室温にて終夜攪拌した。酢酸ェチル (100m l) を加え、生じた不溶物をセライトろ過によって取り除き、酢酸ェチルにより洗浄を行った。合わせた有機相を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリ力ゲルカラムクロマトグラフィー（山善 YFLC Ge l、溶出液（n—へキサン：酢酸ェチル 3 ： 1〜2 ： 1)) にて精製し、化合物 44 (無色オイル 2. 8 g, 39%) を得た。

δ： 0.18 (12H, S), 0.96 (18H， S)， 3.23 (2H, t, J=5Hz)， 3.65-3.69 (m, 14H)， 3.79 (2H, t, J=5Hz) , 4.04 (2H, t, J=5Hz) , 5.95-5.965 (1H， m)， 6.04-6.05 (2H, m), 7.22-7.31 (9H， m), 7.45-7. 7 (6H， m).

製造例 6 1 ：親水性スぺーサ一分子の合成（8- 3)

5— [2 - (2— {2— [2— （2—トリチルォキシーエトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 一ベンゼン一 ₃ージオール（化合物 45) の合成

44

OH 4b 氷冷した化合物 44 (2. 8 1 g, 3. 44mmo 1 ) の THF (30m l ) 溶液へ 1Mテトラプチルアンモェゥムフルオラィド THF溶液 (4m l ) を加えた。添加終了後、氷浴を外し室温にて；！時間攪拌した。これを水へ注ぎ、反応を停止させた後、酢酸ェチルから抽出した。有機相を合わせて飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過減圧濃縮後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善 YFLC G e l、溶出液（n—^ >キサン：酢酸ェチル 1 ： 1〜1 ： 2〜1 ： 3)) にて精製し、化合物 45 (淡黄色オイル 1. 95 g, 96%) を得た。

NMR(CDC1₃) δ： 3.25 (2Η, t, J=5Hz) , 3.62-3.76 (16H, m)， 4.02-4.04 (2Η, m), 5.80 (2H, s)， 5.95 (1H, t， J=2Hz)， 6.03 (2H, d， J=2Hz) , 7.19-7.30 (9H, m)， 7.43-7.46 (6H， m).

製造例 6 2 ：親水性スぺーサ一分子の合成（8-4)

1， 3—ビス一 [2— (2 - { 2 - [2 - (2—ペンジノレオキシ一エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] — 5— [2— （2— { 2- [2— （2—トリチルォキシ一エトキシ）一エトキシ] —エトキシ } ーェトキシ）一エトキシ] 一ベンゼン (化合物 46 ) の合成 ^0H 45 20

BnO〜O o〜O o〜0 46

氷冷した水素化ナトリウム（350mg， 8. 8 mm o 1 ; 60% i n m i n e r a l o i l) の THF (4. 5m l)、 DMF ( 1. 5m l ) 懸濁混合溶液へ、化合物 45 (1. 0 g, 1. 7mmo 1 ) の THF (4. 5m l )、 DMF (1. 5 m 1 ) 混合溶液をゆっくりと加え、 30分間攪拌した。ここへ化合物 20 (2. 7 g, 6. 8 mm o 1 ) .の THF. (4m 1 ) 溶液を加え 20分間攪拌した。氷浴を外した後、更に 4時間室温にて攪拌した。再ぴ氷浴に浸した後、注意深く水を加えて反応を停止させ、減圧下濃縮した。酢酸ェチルから抽出し、合わせた有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過減圧濃縮後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善 YFL C G e 1、溶出液（酢酸ェチル〜酢酸ェチル：メタノール 1 9 : 1)) にて精製し、化合物 46 (淡黄色オイル 1. 22 g, 59%) を得た。

— NMR(CDC1₃) δ： 3.23 (2Η, t, J=5Hz)， 3.61-3.71 (46H, m), 3.78-3.82 (6H， m), 4.02-4.05 (6H, m), 4.56 (4H, s), 6.09 (3H, s), 7.20-7.34 (m, 19H)， 7.44-7.47 (6H, m).

製造例 6 3 ：親水性スぺーサ一分子の合成（8- 5)

2— (2 - {2_ [2— （2— {3, 5—ビス一 [2— （2— { 2 - [2 - (2 一ベンジルォキシーエトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } —エトキシ）一ェトキシ] 一フエノキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）一エタノール（化合物 47) の合成

氷冷した化合物 46 (1. 22 g, 1. 01 mmo 1 ) の塩化メチレン（1 5 m 1 ) 溶液へ、 10 %トリフルォロ酢酸を含む塩化メチレン溶液（7m l) を加え、さらにここへ水（650 μ 1 ) を加えた後、氷浴を外し室温にて 30分間攪拌した。反応液へトリェチルァミンを注ぎ、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善 YFLC Ge l、溶出液（酢酸ェチル〜酢酸ェチル：メタノール 9 : 1)) に供し、化合物 47 (淡黄色オイル 977 m g , Y. qu a n t.) を得た。

-雇 R(CDC1₃) δ： 3.56-3.73 (48Η, ra), 3.80—3.84 (6H, m), 4.04—4.09 (6H, m)， 4.56 (4H， s), 6.10 (3H, s), 7.28-7.32 (10H, m).

製造例 6 4 ：親水性スぺーサ一分子の合成（8 - 6)

[2— (2 - {2- [2- (2— {3， 5—ビス一 [2— （2— { 2 - [2 - (2—ペンジノレオキシーエトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ） —ェトキシ] 一フエノキシ } 一エトキシ）一エトキシ] —エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 一酢酸 t e r t—プチルエステル（化合物 48) の合成 .

BnO〜^O O〜^O O〜^O ^y^O o〜^O^O〜^O oへ COOtBu BnO〜^C^0〜^C> O〜^C)

48 氷冷した水素化ナトリウム（1 75mg, 4. 4mmo l ; 60% i n m i n e r a 1 o i l ) の THF/DMF (4ノ 1混液 5 m 1 ) 懸濁溶液へ、ィ匕合物 47 (1. 05 g, 1. 09mmo 1 ) の THF (5m l) 溶液をゆつくりと加え、 30分間攪拌した。ここへプロモ酢酸 t e r t—プチルエステル（84 7mg, 4. 3mmo 1 ) の THF (6m l ) 溶液を加えた。氷浴を外した後、更に 2時間室温にて攪拌した。注意深く水を加えて反応を停止させて後、酢酸ェチルから抽出し、合わせた有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過減圧濃縮後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ一（山善 YFLC Ge 1、溶出液（酢酸ェチル〜 5 %メタノールを含む酢酸ェチル溶液））にて精製し、化合物 48 (淡黄色オイル 530mg， 45%) を得た。

¾一雇 R(CDC1₃) δ： 1.47 (9Η, s), 3.63-3.71 (48H, ώ), 3.80-3.83 (6Η, m)， 4.02 (2H， s)， 4.04-4.06 (6H， m), 4.56 (2H, s), 6.09 (3H, s)， 7.27-7.34 (10H, m).

製造例 6 5 ：親水性スぺーサ一分子の合成（8- 7)

[2— (2 - { 2 - [2- (2— { 3, 5—ビス一 [2— (2— { 2 - [2— (2—ヒドロキシ一エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）ーェトキシ] 一フエノキシ } 一エトキシ) ーェトキシ] ーェトキシ} —エトキシ）一エトキシ] 一酢酸 t e r t—プチルエステル（化合物 49) の合成

ΒηΟ〜^Ο Ο〜^Ο^Ό〜^Ο ^^Ο Ο〜^Ο θ〜^Ο Ο ( )ΟίΒυ

窒素雰囲気下、水酸化/ ( 20重量⁰ /₀； 90mg) のメタノール ( 2 7 m 1 ) 懸濁溶液へ化合物 48 (50 Omg, 0. 46 2 mm o 1 ) のメタノール（3. 6m l ) 溶液を加え、水素雰囲気に置換した後、室温で約 6時間攪拌した。再ぴ窒素雰囲気とした後、酢酸ェチル（約 2 Om l ) を加え、シリカゲル上でろ過し、 1 0%メタノールを含む酢酸ェチル溶液で洗浄した。減圧濃縮後、化合物 49の粗精製物を得た。

—應 R(CDC1₃) δ： 1.47 (9Η, s), 3.59-3.73 (48H, m), 3.81-3.84 (6H, m), 4.02 (2H， s)， 4.05-4.08 (6H， m)， 6.10 (3H, s) ·

製造例 6 6 ：親水性スぺーサ一分子の合成（8- 8)

(2— { 2 - [2 - (2 - { 2 - [3， 5—ビス一（2— { 2 - [2— （トノレエンー 4ースノレホニノレォキシ) 一エトキシ」一エトキシ } —エトキシ）一フエノキシ] 一エトキシ } 一エトキシ） —エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）一酢酸 t e r t一ブチルエステル（化合物 50) の合成

_HO〜^Q ^o〜^Q 0〜^C)^Y^C^O〜^Q-^O〜^C)^ 0へ COOtBu

_ΗΟ〜θ·^₀〜θ ₀〜ο _Αο

化合物 49 (1 46mg, 0. 1 3 8 mm o 1 ) のピリジン（ 0. 8 m 1 ) 溶液へ、 4ージメチルァミノピリジン（5. lmg, 0. 041 mmo 1 ) を加え氷冷した後、一トルエンスルホユルク口ライド ( 1 58 m g , 0. 828 mm o 1 ) を加え、 30°C〜40°Cに加温しつつ約 2時間攪拌した。ここへ氷を加えて反応を停止させた後、酢酸ェチル、水を加えた。酢酸ェチルから抽出し、合わせた有機相を飽和硫酸水素力リゥム水溶液、飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液、飽和食塩水の順で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過減圧下濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善 YFLC Ge 1、溶出液； 1 0%メタノールを含む酢酸ェチル溶液）にて精製し、化合物 50 (無色オイル 1 33m g , 80%、 2 s t e p s ) を得た。 ·

—丽 R(CDC1₃) δ： 1.47 (9Η, s)， 3.58-3.83 (54H， m), 4.02 (2H, s), 4.04- 4.06 (6H, m)， 6.09 (3H, s), 7.33 (4H, d, J=8Hz) , 7.79 (4H, d, J=8Hz) .

製造例 6 7 ：親水性スぺーサ一分子の合成（8- 9)

[2— （2— { 2 - [2- (2- {3， 5—ビス一 [2— （2— {2— [2 - (2—アジドーエトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 一フエノキシ } 一エトキシ）一エトキシ] —エトキシ } 一エトキシ）ーェトキシ] —酢酸 t e r t一プチルエステル（化合物 5 1) の合成

化合物 50 ( 1 55 m g , 0. 1 28 mm o 1 ) を DMF (0. 5m l ) に溶解し、ここへアジ化ナトリウム（1 25 mg， 1. 9mmo 1 ) を加えた。約 6 0°Cに加温し、 90分間攪拌した。オイルパスを外し室温まで放冷した後、酢酸ェチル（1 0m l ) で希釈した。更に飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液を加えた後、酢酸ェチルから抽出した。合わせた有機相を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過減圧下濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー

(山善 Y F L C G e 1、溶出液； 5 %メタノールを含む酢酸ェチル溶液）にて精製し、化合物 5 1 (無色オイル 1 27m_g， Y. q u a n t) を得た。一 NMR(CDC1₃) δ： 1.47 (9Η, s), 3.38 (4H, t, J=5Hz) , 3.66-3.73 (44H, m),

3.82 (6H, t， J=5Hz) , 4.02 (2H， s), 4.06 (6H, t， J=5Hz) , 6.10 (3H， s). 製造例 6 8 ：親水性スぺーサ一分子の合成（8- 10)

(2— { 2 - [2— （2— {2- [3， 5—ビス一 { 2— [2— （2— { 2 [2 - (9H—フルオレン一 9一ィルメトキシカルボニルアミノ）ーェトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } ーフエノキシ] ーェトキシ} 一エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ） —酢酸 t e r t—プチルエステル (化合物 52) の合成

FmocHN〜^Q 〜^Q 0〜0 〜G 〜^Q 0へ COOtBu FmocHN,^^ CT 0, 窒素雰囲気下、水酸化パラジウム（20重量％； 1 5mg) のメタノール（0. 5 m 1 ) 懸濁溶液へ化合物 5 1 (122mg 0. 323 mm o 1 ) のメタノール（0. 7m l ) 溶液を加え、水素雰囲気に置換した後、室温で 1時間攪拌した。再び窒素雰囲気とした後、セライト上で不溶物をろ別し、メタノールで洗浄した。減圧下濃縮し中間体の粗精製物を得た。

得られた中間体の粗精製物 THF (0. 75m l ) 溶液を氷冷し、ここへ炭酸 9—フルォレ-ルメチルスクシンィミジル（9 lmg, 0 · 27 mm o 1 ) の T HF (0. 5m l ) 溶液を加え、更にトリェチルァミン（49mg， 0. 49m mo l、 68 ^ 1 ) を加え 55分間攪拌した。ここへ水を加えて反応を停止させた後、酢酸ェチルから抽出し、合わせた有機相を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過減圧下濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー (山善 Y F L C G e 1、溶出液；酢酸ェチル〜 1 0 %メタノールを含む酢酸ェチル溶液）にて精製し、化合物 52 (無色オイル l l lmg, 67%、 2 s t e p s ) を得た。

^- MRCCDC^) δ 1.47 (9H, s 3.38-3.39 (4H, m), 3.55-3.83 (50H, m),

4.01 (2H, s), 4.01-4.06 (6H m 4.21 (2H, t, J=7Hz) , 4.40 (4H, d,

J=7Hz) , 5.43 (2H brs), 6.08—6.10 (3H, m)， 7.29—7.33 (4H, m), 7.39 (2H m， t, J=7Hz)， 7.60 (2H, d， J=7Hz) , 7.75 (2H, d， J=7Hz) .

製造例 6 9 ：親水性スぺーサ一分子の合成（8- 11)

(2— {2- [2— （2— { 2 - [3， 5—ビス一 { 2— [2— (2— { 2- [2— (9H—フルオレン一 9一ィルメトキシカルボエルァミノ）一エトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ） —エトキシ] —エトキシ } ーフエノキシ] ーェトキシ} 一エトキシ）一ヱトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ） —酢酸（化合物 53) の合成

ΡΓΐΐ∞ΗΝ〜^Ο Ο〜^Ο θ〜^Ο ^^Ο θ〜^Ο θ〜^Ο·^Οへ COOtBu

,0

FmocHN ^ O

52

FmocH ^'⁰^0'^'⁰-^0'^⁰ 53

ィ匕合物 52 (1 06mg, 0. 079 mm o 1 ) へ 5 %含水トリフルォロ酢酸 (0. 54m l ) を室温で加え、 5分間攪拌した。トルエン（約 lm l ) を加え、減圧下濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善 YFLC G e 1、溶出液； 2 %メタノールを含むク口口ホルム溶液〜 3 %メタノールを含むクロ口ホルム溶液〜 5%メタノールを含むクロ口ホルム溶液）にて精製し、化合物 5 3 (淡黄色オイル 79mg， 78%) を得た。

MS (m/ z )： 1287.4 MH+，一 NMR(CDC1₃) δ： 3.38-3.39 (4Η, m)， 3.55-3.83 (50H, m), 4.01-4.06 (6H, m), 4.02-4.07 (4H, m)， 4.12 (2H， s), 4.21 (2H, d, J=7Hz), 4.40 (4H， d, J=7Hz)， 5.46 (2H, brs), 6.08 (3H, m), 7.29-7.33 (4H, m), 7.39 (4H, m, t, J=7Hz), 7,60 (4H, d, J二 7Hz), 7,75 (4H, d， J=7Hz) . 製造例 70 ：親水性スぺーサ一分子の合成（9-1)

n=平均 45 n=平均 45

54 55 ポリエチレンダリコール（化合物 5 4 ：平均分子量 2 0 0 0 ； 1 5 g, 7. 5 mm o 1 ) をピリジン（7 5 m l ) に溶解し、トリフエニルメチルクロリド（2. 1 g、 7. 5 mm o 1 ) 及ぴ 4ージメチルァミノピリジン（0. 2 g、 1. 6 m m o 1 ) を室温で加えた後、 4 0°Cで終夜攪拌した。これを減圧濃縮して得られた残渣をベンゼン（6 0 0 m l ) に溶解し、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水、及ぴ飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物を綿ろ過にて除去し、ベンゼンで洗浄し、ろ液と洗液は合わせて減圧濃縮し、モノトリチル誘導体、及ぴジトリチル誘導体の混合物（ 7. 6 g) を得た。このうち 5. 8 gを採り、テトラヒドロフラン ZN， N—ジメチルホルムアミド混合液 (4/ 1 ； 4 O m l ) に溶解し、水素化ナトリウム（60% oil suspension ;210m g) を室温で加えて 30分間攪拌した。これにプロモ酢酸 t e r t—プチル（3. 9 m l、 1 5. 1 m o 1 ) を室温で加えて 2時間攪拌した。これを 0°Cに冷却し、水（1一 2m l ) を少しずつ加えた後、反応液にベンゼン ( 3 5 0 m l ) を加えてから有機相を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物を綿ろ過にて除去し、ベンゼンで洗浄し、ろ液と洗液は合わせて減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（関東化学 6 O N ; 2 0 0 m l ) に供し、溶出液（1 0 : 1 CHC 1 ₃— Me OH) にてモノトリチルーモノ酢酸 t e r t一プチルエステル誘導体、及ぴジトリチル誘導体の混合物を 5. 2 g得た。これをエタノール（ S 0 m 1 ) に溶解し、 1 0 %水酸化パラジウムを加えて接触水素添加 (0. 3MP a ) を 5時間行った。固形物をセライトろ過にて除去し、ェタノールで洗浄し、ろ液と洗液は合わせて減圧濃縮した。得られた残渣をべンゼン（2 5 0m l ) に溶解し、有機相を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物を綿ろ過にて除去し、ベンゼンで洗浄し、ろ液と洗液は合わせて減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（関東化学 6 0 N ; 2 0 0 m l ) に供し、溶出液（1 0 : 1 CHC 1 ₃— Me OH) にて化合物 5 5 (2. 7 g、 2 4 %、 3 s t e p s ) を得た。

NMR(CDC1₃) δ： 1.48 (9Η, s), 3.46-3.83 (m), 4.02 (2H, s). 製造例 7 1 ：親水性スぺーサ一分子の合成（9-2)

化合物 55 (2. 4 g、 1. 2mmo 1 ) を塩化メチレン（30m l ) に溶解し、モレキュラーシプス 4A (2 g) を加えて終夜攪拌し、これに！）一トルエンスルホニルクロリド（2 · 1 6 g、 1 1. 3mmo 1 ) 及ぴ、 4ージメチルアミノピリジン（0. 72 g、 5. 9mmo 1 ) を室温で加えて終夜攪拌した。この反応液をそのままシリカゲルカラムクロマトグラフィー（関東化学 6 ON ; 2

50m l ) に供し、溶出液（20 CHC 1₃-Me OH) にてトシル誘導体を得た。溶媒を留去後に得られた残渣を DMSO (24m l ) に溶解し、アジ化ナトリゥム (2. 5 g、 38 · 5 mmo 1 ) 、及びヨウ化ナトリゥム (0. 4 g、 2. 7 mmo 1 ) を加えて、 70 °Cで 5時間攪拌した。反応液にベンゼン (350m l) を加え、有機相を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物を綿ろ過にて除去し、ベンゼンで洗浄し、ろ液と洗液は合わせて減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（関東化学 6 ON； 1 50m l) に供し、溶出液（10 : 1 CHC 1₃— Me OH) にて化合物 56 (1. 85 g、 75%、 2 s t e p s ) を得た。

-丽 R(CDC1₃) δ： 1.47 (9Η, s), 3.39 (2H, t)， 3.45-3.83 (m), 4.02 (2H， s).

製造例 72 ：親水性スぺーサ一分子の合成（9-3)

化合物 56 (1. 23 g、 0. 62 mmo 1 ) をエタノーノレ (45m l ) に溶解し、 1 0%水酸化パラジウム（250mg) を加えて、水浴中 35 °Cで 2時間接触水素添加を行った。固形物をセライトろ過にて除去し、エタノールで洗浄し、ろ液と洗液は合わせて減圧濃縮してアミン体を得た。これを 1 0%炭酸ナトリウム水（1 5m l ) 、及びァセトン（1 5m l ) の混合溶媒に溶解し、 9一フルォレニノレメチノレスクシンィミジノレカーボネート (2 g、 5. 9 mm o 1 ) をカロえて、室温で 1時間攪拌した。反応液にベンゼン (1 50m l ) を加え、有機相を飽和硫酸水素カリウム溶液、及ぴ飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物を綿ろ過にて除去し、ベンゼンで洗浄し、ろ液と洗液は合わせて減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（関東化学 6 ON； 60m l ) に供し、溶出液（酢酸ェチル→ 1 0 : 1 CHC 1₃— Me OH) にて化合物 5 7 (852mg 63%、 2 s t e p s ) を得た。

一 NMR(CDC1₃) δ :1.47 (9H, s)， 3,39 (2H, t), 3.45—3.83 (m)， 4.02 (2H, s)， 4.23 (1H, m), 4.39 (2H, d)， 7.28-7.77 (8H, m).

製造例 73 ：親水性スぺーサ一分子の合成（⁹- 4)

化合物 57 (840mg、 0. 3 8 mm o 1 ) を 9 5 %トリフルォロ酢酸溶液 (8m l ) に溶解し、室温で 1時間攪拌した。反応溶媒を減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（関東化学 60 N ； 60m l ) に供し、溶出液（酢酸ェチル→4 ： 1 CHC 1₃-Me OH) にて化合物 58 (689mg、 82%) を得た。

¾— NMR(CDC1₃) δ： 3.39 (2Η, t)， 3.41-3.83 (m), 4.16 (2H， s) ， 4.22 (1H, m), 4.40 (2H, d), 7.26—7.77 (8H， m).

製造例 74 ：親水性スぺーサー付金膜の合成

へキサエチレングリコール誘導体付金膜（高純度化学研究所社；純金、純度 99.

9 % u p _N 形状 10 mmx 1 0 mmx 0. 0 1 mm ( t )) の合成

P i r a n h a溶液（30 %過酸化水素：濃硫酸二 1 ： 4混合溶液）に数時間浸した金膜（約 l cm²) をミリ Q水（ミリポアの純水製造装置で濾過した水）、エタノールで洗浄した。これを (6—メルカプト一へキシル) 一力ルパミックァシッド 9 H—フノレオレン一 9—イノレーメチノレエステルの 1. 5 mMエタノーノレ溶液（0. 5m l ) に終夜浸した。反応終了後、金膜をエタノール、ァセトニトリルで十分に洗浄した後、ピぺリジン/ァセトニトリル（1Z4) の混合溶液 (lm l ) を加えて室温で 30分間振とうした。金膜をァセトニトリル（約 lm 1 ) で洗浄し、この洗浄液と回収した反応液を合わせ、この溶液中のフルオレン誘導体を定量することにより金膜上にァミンが約 250 pmo 1存在することを確認した。 - この金膜にァセトュトリル（0. 25m l ) に溶解した { 2— [2 - (2— { 2一 [2 - (9H—フルオレンー9 fルーメトキシカルボ-ルァミノ）ーェトキシ] 一エトキシ } 一エトキシ）一エトキシ] 一エトキシ } 酢酸（製造例 1 1 で得られた化合物 8 ； 12. 5mg, 0. 024mmo 1 ) を加え、更にァセト二トリル（0. 25m l) に溶解したベンゾトリアゾールー 1ーィルーォキシ一トリスーピロリジノ一ホスホニゥムへキサフノレオ口ホスフェート (P y B O

P ; 1 3mg， 0. 025mmo 1 )、及ぴ N, N—ジイソプロピルェチルアミン（8. 9 ^ 1 , 0. 5 Ommo 1 ) を加え、室温で終夜振とうした。反応液を除き、金膜をァセトニトリルで洗浄後、同様の条件で終夜反応を行なった。反応終了後、金膜をァセトニトリルで十分に洗浄した後、ァセトニトリル（0. 25 m 1 ) に溶解した酢酸（0. 3 μ 1， 0. 005 mm ο 1 ) を力 Βえ、更にァセト二トリル（0. 25m l) に溶解したベンゾトリァゾールー 1ーィルーォキシ一トリス一ピロリジノーホスホ-ゥムへキサフノレオ口ホスフェート (P y B O

P ； 2. 6mg, 0. 005mmo 1 )、及ぴ N， N—ジイソプロピルェチルァミン（1. 7 1， 0. 0 1 Ommo 1 ) を加え、室温で 3時間振とうした。金膜をァセトニトリルで十分に洗浄した後、上述のようにピペリジン/ァセトニトリル（1Z4) の混合溶液（lm l ) で処理し、フルオレン誘導体を定量することにより縮合率を定量した（約 9 0%)。

製造例 7 5 ： FK 5 0 6誘導体結合型親水性スぺーサー付金膜の合成

(金膜 + (P EG) J- FK 5 0 6)

製造例 7 4で得られたへキサエチレンダリコール誘導体付金膜を用い、製造例 2で調製した 1 7ーァリルー 1 4 - ( t e r t -プチルージメチル一シラニルォキシ) 一 1—ヒドロキシ一 1 2— { 2一 [4 - ( 7一力ルポキシ一へプタノィルーォキシ）一 3—メトキシーシクロへキシル] 一 1ーメチルービエル } - 2 3 , 2 5—ジメトキシー 1 3， 1 9 , 2 1， 2 7ーテトラメチルー 1 1， 2 8—ジォキサ一 4ーァザートリシクロ [2 2. 3. 1. 0 ⁴'⁹] ォクタコスー 1 8—ェン - 2, 3 , 1 0， 1 6—テトラオン（4. 8 m g , 0. 0 0 5 mm o l )、 ED C/HC 1 ( 1. O m g, 0. 0 0 5 mm o l )、 1—ヒドロキシベンゾトリアゾーノレ（HOB t ; 0. 7m g, 0. 0 0 5 mm o 1 ) およぴジメチノレホルムァミド（DMF ; 0. 5 m l ) の混合物を室温で終夜撹拌した。反応終了後、ジメチルホルムアミド（DMF)、ァセトニトリルで十分に洗浄し、親水性スぺーサ一を有する F K 5 0 6結合型金膜〔金膜 + (P EG) !-FK 5 0 6) を合成した。金膜と F K 5 0 6の間に介在する親水性スぺーサ一部分の HBA数は 7、 H BD数は 1である。

実施例 1 ：結合実験（樹脂）

( 1 ) 1 y s a t eの調製

ラットの脳（2. 2 g) を混合液 A (0. 2 5 Mシュクロース， 2 5 mM T r i sバッファー（p H 7. 4)， 2 2 m l ) に混ぜ、ホモジネートを作成後、 9 5 0 0 r p mで 1 0分間遠心分離した。遠心分離上清を取り、 5 0 0 0 0 r p mでさらに 3 0分間遠心分離した。こうして得られた上清を 1 y s a t eとして使用した。なお、実験はすべて 4 °Cあるいは氷上で行った。

(2) 結合実験

上記した FK506を結合させた各種ァフィユティー樹脂を用いて以下の手順で 1 y s a t eとの結合実験を行った。なお、 1 y s a t eは混合液 Aで 1/2 に希釈して使用した。 FK506を結合させた各種ァフィ二ティー樹脂をそれぞれ 10 1を使用した。

尚、 FK506を結合させた各種ァフィユティー樹脂としては、へキサェチレングリコール誘導体の繰り返し構造の数をそれぞれ変えて調製した製造例 1 3〜 18までの FK 506誘導体結合型親水性スぺーサー付樹脂を用いた。また、比較例として製造例 3の FK 506付 TOY Oパール樹脂を用いた。

FK 506結合ァフイエティ一樹脂と l y s a t e (lm l) を 4 °Cで終夜、静かに振とうした。その後、上清を除き、残った FK 506結合ァフイエティー樹脂を混合液 Aで 4回十分に洗浄して F K 506結合ァブイ-ティ一樹脂表面を十分に洗浄した。

こうして得られた FK 506結合ァフィユティー樹脂に 20 μ 1の SD S用 1 o a d i n g b u f f e r (nakalai cat. N0=30566- 22、電気泳動用 sample buffer solution with 2 - ME (2 - mercaptoethanol) (2x) for SDS PAGE) をカロえ、 25°Cで 1 0分間加熱した。こうして得られたサンプル液を市販の SDSゲル (B i o R a d r e a d y G e 1 J , 1 5% SDS， c a t. NO= 1 6 1 一 J 34 1) で分離し、その SD Sゲルを解析した。比較例である製造例 3の F K506付 TOY Oパール樹脂に結合（吸着）した分子の内、代表的な 1 0種類のパンドを選択し、そのピークの量を各製造例おょぴ比較例の樹脂について測定し、定量化した（図 1)。別に行ったウェスタンプロットによりパンド 1 0が F K 506のターゲット分子、 FKB P 1 2であることを確認した。

結果、親水性スぺーサーを導入したものに非特異的な相互作用に基づくと思われるバンドの減少あるいは消失が認められた。これらの傾向は、へキサエチレングリコールの繰り返し構造の数が多くなるにつれて顕著であった。一方で、特異的な相互作用に基づいて FK 506結合ァフィユティー樹脂に結合した F KB P 1 2のパンド（パンド 1 0) については、親水性スぺーサ一の導入によるパンドの減少や消失は認められなかった。

同様な実験を他の親水性スぺーサ一についても行ったところ、パンドによって程度の違いはあったが非特異的な吸着を抑制することができた。

実験例 1 ：固相表面の疎水的性質と非特異的な相互作用の相関性

CLOGPの異なる種々の化合物を固相表面に固定化することによって固相表面の疎水的性質を変え、非特異的な相互作用との関係を調べた。使用した化合物を以下に示す。

NH₂

(-0.07) (0.85)

イン卜'メタシン（3.09) 括弧内の数字は LOGP値（CLOGP値）を示している。

また、種々の化合物の TO YOパール樹脂への固定化は以下のようにして行つた。

(1) 酢酸固定化樹脂〔TOYO+酢酸〕の合成

TO YO-Pearl resin) ^

H

TOYOパール樹脂（TSKg e l AF— am i n o) に酢酸を固定化した _c TOYOパール樹脂 100 1に 20%無水酢酸一 DMF溶液を 0. 5 m 1カロえ、室温で 4時間撹拌した。反応終了後、樹脂を DMFで十分に洗浄した。ニンヒドリンテストにより縮合収率を測定した（約 1 00 %)。

(2) 酪酸固定化樹脂〔TOYO+酪酸〕の合成

ΤΟΥΟパール樹脂（Τ S Κ g e 1 A F— a m i n o ) に酪酸を固定化した _c TOYOパール樹脂 1 00 1に、 DMF, (0. 25m l ) とジクロロメタン ( 0. 25m l ) の混合溶媒に溶解した酪酸（3. 40 ^ 1 , 0. 04mmo 1 ) を加え、更にべンゾトリァゾールー 1一^ fル一ォキシートリス一ピロリジノ一ホスホユウムへキサフノレオ口ホスフェート（P yBOP ; 26mg, 0. 0 5 mmo 1 )、及ぴ N， N—ジィソプロピルェチルアミン（ 1 7〃 1， 0. 10 mmo 1 ) を加え、室温で 4時間振とうした。反応終了後、樹脂を DMFで十分に洗浄した後、ニンヒドリンテストにより縮合収率を測定した（約 98%)。

(3) オクタン酸固定化樹脂〔TOYO +オクタン酸〕の合成 TOYO-Pearl resin

TO YOパール樹脂（TSKg e l AF- a m i n o) にオクタン酸を固定化した。 TOYOパール樹脂 1 0 0 1相当に、 DMF (0. 2 5m l ) とジクロロメタン（0. 2 5m l ) の混合溶媒に溶解したォクタン酸（ 6. 34 μ I , 0. 04 mmo 1 ) を力 [Iえ、 P y BOP (2 6mg, 0. 0 5 mm o 1 )、及ぴ N， N—ジイソプロピノレエチノレアミン（ 1 7 1 , 0. l Ommo l ) を加え、室温で 4時間振とうした。反応終了後、樹脂を DMFで十分に洗浄した後、ニンヒドリンテストにより縮合収率を測定した（約 9 7%)。

(4) ミリスチン酸固定化樹脂〔TOYO+ミリスチン酸〕の合成

TOYOパール樹脂（T SK g e l AF— a m i n o) にミリスチン酸を固定化した。 TOYOパール樹脂 1 0 0 μ 1に、 DMF (0. 2 5m l ) とジクロロメタン（0. 2 5m 1 ) の混合溶媒に溶解したミリスチン酸（9. 1 3mg, 0. 04 mmo 1 ) をカ卩え、更に P y B O P (2 6 m g , 0. 0 5 mm o 1 )、及び N， N—ジイソプロピルェチルァミン (1 7 μ 1 , 0. l Ommo l ) をカロえ、室温で 4時間振とうした。反応終了後、樹脂を DMFで十分に洗浄した後、ニンヒドリンテストにより縮合収率を測定した（約 9 5%)o

(5) ステアリン酸固定化樹脂〔TOYO +ステアリン酸〕の合成

TOYOパール樹脂（T SK g e 1 A F— a m i n o ) にステアリン酸を固定化した。 TOYOパール樹脂 1 0 0 μ 1に、 DMF (0. 2 5m l ) とジクロロメタン（0. 25m 1 ) の混合溶媒に溶解したステアリン酸（1 1. 38mg， 0. 04 mm o 1) を加え、更に P y BOP ( 26 m g , 0. 05 mm o 1 )、及ぴ N， N—ジイソプロピルェチルァミン（1 7 μ 1 , 0. l Ommo l) を加え、室温で 4時間振とうした。反応終了後、樹脂を DMFで十分に洗浄した後、ニンヒドリンテストにより縮合収率を測定した（約 9 1%)。

(6) フエ-ルプロピオン酸固定化樹脂〔TOYO +フエニルプロピオン酸〕の合成

TO YOパール樹脂（TSKg e l AF- am i n o) にフエ-ノレプロピオン酸を固定化した。 TOYOパール樹脂 100 1に、 DMF (0. 25m l) とジクロロメタン（0. 25m l ) の混合溶媒に溶解したフエニルプロピオン酸 (6. Omg, 0. 04mmo 1 ) を加え、更に P yBOP (26mg, 0. 0 5mmo 1 )、及ぴ N, N—ジイソプロピルェチルァミン（1 7 1， 0. 1 0 mmo 1 ) を加え、室温で 4時間振とうした。反応終了後、樹脂を DMFで十分に洗浄した後、ユンヒドリンテストにより縮合収率を測定した（約 9 7%)。

(7) ダルタラ二リック酸固定化樹脂〔TOYO +ダルタラ二リック酸〕の合成

TOYOパール樹脂（T S K g e 1 AF— am i n o) にグルタラ-リック酸を固定化した。 TOYOパール樹脂 100 μ 1に、 DMF (0. 25m l ) とジクロロメタン（0. 25m l ) の混合溶媒に溶解したグルタラ二リック酸（8,

3 m g , 0. 04 mmo 1 ) をカ卩え、更に P y BO P (26mg， 0. 05 mm ₀ 1)、及ぴ1^， N—ジイソプロピルェチルァミン（1 7 μ 1 , 0. 1 Ommo 1 ) を加え、室温で 4時間振とうした。反応終了後、樹脂を DMFで十分に洗浄した後、ニンヒドリンテストにより縮合収率を測定した（約 9 7%)。

(8) 3—ピリジル酢酸固定化樹脂〔TOYO+ 3—ピリジル酢酸〕の合成

Τ Ο Υ Οパール樹脂（TSKg e l AF— am i n o) に 3—ピリジル酢酸を固定化した。 TOYOパール樹脂 100 μ 1に、 DMF (0. 25m l ) とジクロロメタン（0. 25m l) の混合溶媒に溶解した 3—ピリジル酢酸（ 6. 9 m g , 0. 04 mm o 1 ) を力 tlえ、更に P yBOP (26 m g , 0. 05 mm o 1 )、及ぴ N, N—ジイソプロピルェチルァミン（1 7 μ 1 , 0. 1 Ommo 1 ) を加え、室温で 4時間振とうした。反応終了後、樹脂を DMFで十分に洗浄した後、ニンヒドリンテストにより縮合収率を測定した（約 96%)。

(9) サクシニルサルファチアゾール固定化樹脂〔TOYO +サクシニルサルファチアゾール〕の合成

TOYOパール樹脂（TSKg e l AF— am i n o) にサクシ-ルサルファチアゾールを固定化した。 TOYOパール樹脂 100 1に、 DMF (0. 2

5m l ) とジクロロメタン（0. 25m l ) の混合溶媒に溶解したサクシニルサノレファチアゾール（ 14. 2mg, 0. 04mmo 1 ) を加え、更に P y BOP

(26mg, 0. 05mmo 1 )、及ぴ N， N—ジイソプロピルェチルァミン

{Π μ 1 , 0. l Ommo l ) を加え、室温で 4時間振とうした。反応終了後、樹脂を DMFで十分に洗浄した後、ユンヒドリンテストにより縮合収率を測定した（約 75%)₀

(10) インドメタシン固定化樹脂〔TOYO +インドメタシン〕の合成

TO YOパール樹脂（T S K g e 1 AF— a m i n o) にインドメタシンを固定化した。 TOYOパール樹脂 1 00 1に、 DMF (0. 25m l ) とジクロロメタン（0. 25m l) の混合溶媒に溶解したィンドメタシン（14. 3 m g, 0. 04 mm o 1 ) を力 Bえ、更に P yBOP (26mg, 0. 05 mm o 1 )、及ぴ N, N—ジィソプロピルェチルァミン（ 1 7 μ 1 , 0. 1 Ommo 1 ) を加え、室温で 4時間振とうした。反応終了後、樹脂を DMFで十分に洗浄した後、ニンヒドリンテストにより縮合収率を測定した（約 93%)。

(1 1) N—ァセチルトリプトファン固定化樹脂〔TOYO + N—ァセチルトリの合成

TOYOパール樹脂（T S K g e 1 A F— a m i n o ) に N—ァセチルトリプトファンを固定化した。 TOYOパール樹脂 100 1に、 DMF (0. 25 m l ) とジクロロメタン（0. 25m l ) の混合溶媒に溶解した N—ァセチルトリプトフアン（9. 9 m g , 0. 04mm o 1 ) を加え、更に P y BOP (26 mg， 0. 05»11110 1)、及ぴ^^ N—ジイソプロピルェチルァミン（ 1 7 μ 1， 0. 1 Ommo 1 ) を加え、室温で 4時間振とうした。反応終了後、樹脂を DMFで十分に洗浄した後、ニンヒドリンテストにより縮合収率を測定した（約 90%)₀

尚、 FK506固定化樹脂〔TOYO + FK506〕は製造例 3で調製したものを用いた。

それぞれの化合物付 TO YOパール樹脂を用いて 1 y s a t eとの結合実験を行った。 l y s a t eは実施例 1 (1) で調製し.たものを用いた。

結合実験についても、固相担体を、各種化合物が固定化された T.OYOパール樹脂を用いること以外は実施例 1 (2) に準じて行った。

非特異的な相互作用による非特異的な吸着に基づくと思われるパンドを 6種類選択し、そのピークの量を各化合物付樹脂について測定し、定量化した。各化合物の疎水性パラメータ一として CLOG Pを用い、非特異的な結合に基づくパンドのピーク量との関係を調べ、定量化した（図 2)。 CLOGPが大きくなるにつれ非特異的な結合が増した。この結果は固相表面の疎水的な性質が強まるにつれ、非特異的な相互作用による吸着が増加することを示している。

産業上の利用可能性

疎水的な性質を有する固相表面と検討対象のリガンドとの結合に親水性のスぺ一サーを導入することにより、非特異的な相互作用を抑制することが出来る。親水性スぺーサ一の導入は僅かな導入でも効果がある。また、この効果は親水性スぺーサ一の導入の量に比例して増大させることが出来る。

低分子一低分子、低分子一高分子、高分子一高分子の相互作用を、片方の分子を固相担体に固定し、相互作用を測定、あるいは相互作用をベースとして目的とするターゲットを精製する研究において、本願発明の技術により非特異的な相互作用を人為的に抑制することが可能である。すなわち、本技術は低分子一高分子、低分子一低分子、高分子一高分子相互作用を片方の分子を固相担体に固定し、相互作用を測定、あるいは相互作用をベースとして目的とするターゲットを精製する研究を容易にするものである。これらの成果は生命科学全般、特に創薬研究、ポストゲノム研究、プロテオミクス、ケミカルジエノミクス、ケミカルプロテオミクス等に広く応用できるものである。本出願は、日本で出願された特願 2002- 222226を基礎としておりそれらの内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims

請求の範囲

1 . 固相担体における固相表面の疎水的性質を調節することを特徴とする、分子の固相表面への非特異的な吸着を調節する方法。

2 . 分子 Aを固相担体に阖定化し、当該固相上での分子 Aと該分子 Aと特異的に相互作用する分子 Bとの間での特異的な相互作用を解析する過程において、固相担体における固相表面の疎水的性質を低減させる処理を行うことを特徴とする、分子 Aおよぴ Zまたは固相担体と分子 B以外の分子との非特異的な相互作用を抑制する方法。

3 . 分子 Aを固相担体に固定化し、当該固相上での分子 Aと該分子 Aと特異的に相互作用する分子 Bとの間での特異的な相互作用を用いて分子 Bを選別する過程において、固相担体における固相表面の疎水的性質を低減させる処理を行うことを特徴とする、分子 Aおよび/または固相担体と分子 B以外の分子との非特異的な相互作用を抑制する方法。

4 . 分子 Aおよび分子 Bの組み合わせが、低分子化合物おょぴ低分子化合物、低分子化合物おょぴ高分子化合物、ならびに高分子化合物および高分子化合物のいずれかである請求の範囲 2または 3記載の方法。

5 . 分子 Aおよび分子 Bの組み合わせが、低分子化合物および高分子化合物、または高.分子化合物および高分子化合物である請求の範囲 2または 3記載の方法。

6 . 固相担体における固相表面の疎水的性質を低減させる処理が、分子 Aの固相担体への固定化の際にそれらの間に親水性スぺーサーを導入することである、請求の範囲 2または 3記載の方法。

7 . 親水性スぺーサ一が、固相担体および分子 Aと結合した状態で以下の特徴のいずれかを少なくとも有するものである、請求の範囲 6記載の方法：

(i) 水素結合ァクセプター数が 6以上である、

(ii) 水素結合ドナー数が 5以上である、

(iii) 水素結合ァクセプター数おょぴ水素結合ドナー数の総計が 9以上である。

8 . さらに、該親水性スぺーサ一がその分子中にカルボ二ル基を 1以上有するものである、請求の範囲 7記載の方法。

9 . さらに、該親水性スぺーサ一が水溶液中で電荷的に陽性あるいは陰性になる官能基を有さないことを特徴とする、請求の範囲 7または 8記載の方法。

1 0 . 分子 Aを固相担体に固定化し、当該固相上での分子 Aと該分子 Aと特異的に相互作用する分子 Bとの間での特異的な相互作用を解析する方法であって、固相担体における固相表面の疎水的性質を低減させる処理を行うことにより分子 A および Zまたは固相担体と分子 B以外の分子との非特異的な相互作用を抑制することを特徴とする方法。

1 1 . 分子 Aを固相担体に固定化し、当該固相上での分子 Aと該分子 Aと特異的に相互作用する分子 Bとの間での特異的な相互作用を用いて、分子 Bを選別する方法であって、固相担体における固相表面の疎水的性質を低減させる処理を行うことにより分子 Aおよぴノまたは固相担体と分子 B以外の分子との非特異的な相互作用を抑制することを特徴とする方法。

1 2 . 分子 Aおよび分子 Bの組み合わせが、低分子化合物および低分子化合物、低分子化合物おょぴ高分子化合物、ならびに高分子化合物および高分子化合物のいずれかである請求の範囲 1 0または 1 1記載の方法。

1 3 . 分子 Aおよび分子 Bの組み合わせが、低分子化合物おょぴ高分子化合物、または高分子化合物および高分子化合物である請求の範囲 1 0または 1 1記載の方法。

1 4 . 固相担体における固相表面の疎水的性質を低減させる処理が、分子 Aの固相担体への固定化の際にそれらの間に親水性スぺーサ一を導入することである、請求の範囲 1 0または 1 1記載の方法。

1 5 . 親水性スぺーサ一が、固相担体おょぴ分子 Aと結合した状態で以下の特徴のいずれかを少なくとも有するものである、請求の範囲 1 4記載の方法：

(i) 水素結合ァクセプター数が 6以上である、

(ii) 水素結合ドナー数が 5以上である、

1 6 . さらに、該親水性スぺーサ一がその分子中に力ルポ二ル基を 1以上有するものである、請求の範囲 1 5記載の方法。

1 7 . さらに、該親水性スぺーサ一が水溶液中で電荷的に陽性あるいは陰性になる官能基を有さないことを特徴とする、請求の範囲 1 5または 1 6記載の方法。

1 8 . 分子 Aに対して特異的な相互作用を有する分子 Bのスクリーニング方法であって、少なくとも以下の工程を含む方法： '

1 9 . 分子 Aおよび分子 Bの組み合わせが、低分子化合物および低分子化合物、低分子化合物および高分子化合物、ならびに高分子化合物および高分子化合物のいずれかである請求の範囲 1 8記載の方法。

2 0 . 分子 Aおよび分子 Bの組み合わせが、低分子化合物および高分子化合物、または高分子化合物および高分子化合物である請求の範囲 1 8記載の方法。

2 1 . 親水性スぺーサ一が、固相担体および分子 Aと結合した状態で以下の特徴のいずれかを少なくとも有するものである、請求の範囲 1 8記載の方法：

(i) 水素結合ァクセプター数が 6以上である、

(ii) 水素結合ドナー数が 5以上である、

2 2 . さらに、該親水性スぺーサ一がその分子中にカルボ二ル基を 1以上有するものである、請求の範囲 2 1記載の方法。

2 3 . さらに、該親水性スぺーサ一が水溶液中で電荷的に陽性あるいは陰性になる官能基を有さないことを特徴とする、請求の範囲 2 1または 2 2記載の方法。

2 4 . 固相担体における固相表面の疎水的性質を低減させる為の親水性スぺーサ一であって、固相担体および分子 Aと結合した状態で以下の特徴のいずれかを少なくとも有するものである親水性スぺーサー：

(i) 水素結合ァクセプター数が 6以上である、

(ii) 水素結合ドナー数が 5以上である、

2 5 . さらに、該親水性スぺーサ一がその分子中にカルボ-ル基を 1以上有するものである、請求の範囲 2 4記載の親水性スぺーサ一。

2 6 . さらに、該親水性スぺーサ一が水溶液中で電荷的に陽性あるいは陰性になる官能基を有さないことを特徴とする、請求の範囲 2 4または 2 5記載の親水性スぺ、サー。

2 7 . 固相担体おょぴ請求の範囲 2 4〜 2 6のいずれか 1項に記載の親水性スぺ一サーを含む複合体。

2 8 . 請求の範囲 2 4〜2 6のいずれか 1項に記載の親水性スぺーサ一おょぴ分子 Aを含む複合体。

2 9 . 固相担体、請求の範囲 2 4〜 2 6のいずれか 1項に記載の親水性スぺーサ一および分子 Aを含む複合体。

3 0 . 下記式（l a ) 〜（I e ) からなる群より選択されるいずれか 1つの式で表される部分構造を少なくとも 1つ有する、請求の範囲 2 4〜2 6のいずれか 1 項に記載の親水性スぺーサー：

(式（ I a) 中、

Aは適当な連結基で'あり、

Xi Xgはそれぞれ同一または異なって単結合あるいは炭素数 1〜3の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基であり、

1^〜1 ₇はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、 — C H ₂ O Hあるいは水酸基であり、

mは 0〜2の整数であり、 m，は 0〜 10の整数であり、 m" は 0〜 2の整数であり、

R₃〜； ₇が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、 X₃ が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい；式（I b) 中、

ρ、 ρ，および p" はそれぞれ同一または異なって 1〜1000の整数であり；式（I d) 中、

R ₈ 。はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、 _CH₂OHあるいは水酸基であり、

qは 1〜7の整数であり、

式（I e) 中、

R_{1 :L}〜R₁₆はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、一 CH₂OHあるいは水酸基であり、

rは 1〜 1 0の整数であり、 r ' は 1〜 50の整数であり、

Ru Ri ₆がそれぞれ複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい）。

3 1. 式（ l a) 〜（I e) からなる群より選択されるいずれか 1つの式で表される部分構造を 2つ以上有する請求の範囲 30記載の親水性スぺーサ一。

32. 固相担体および請求の範囲 30または 3 1記載の親水性スぺーサーを含む複合体。

33. 請求の範囲 30または 3 1記載の親水性スぺーサ一おょぴ分子 Aを含む複合体。

34. 固相担体、請求の範囲 30または 3 1記載の親水性スぺーサ一おょぴ分子 Aを含む複合体。

35. 式（l a) 〜（I e) からなる群より選択されるいずれか 1つの式で表される部分構造を少なくとも 1つ有する化合物、

但し以下の化合物は除く。

36. 式（l a) 〜（I e) からなる群より選択されるいずれか 1つの式で表される部分構造を 2つ以上有する請求の範囲 35記載の化合物。

3 7. 下記式（I I a) 〜（I I e) からなる群より選択されるいずれか少なくとも 1つの式で表される化合物：

(式（I I a) 中、

Y aは水素原子またはァミノ基の保護基であり、

Z aは水素原子またはカルボキシル基の保護基であり、

Wa, Wa ' および Wa" はそれぞれ同一または異なって水素原子または水酸基の保護基（これらの保護基は、隣り合う保護基同士で結合してジアルキルメチレン基を形成してもよい）であり、

Bは適当な連結基であり、

X_la〜X _{3 a}はそれぞれ同一または異なって単結合あるいは炭素数 1~ 3の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基であり、 R i _a〜R 7 _aはそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、一 CH₂OH (式中、水酸基は保護されていてもよい）あるいは保護されていてもよい水酸基であり、

rn^は 0〜2の整数であり、は 0〜1 0の整数であり、 π^" は 0〜 2の整数であり、

R_{3 a}〜R_7aが複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、 X_3aが複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい；式（I I b) 中、

Y bは水素原子またはァミノ基の保護基であり、

Z bは水素原子またはカルボキシル基の保護基であり、

11 ₁ぉょぴ₁1 ₁ ' はそれぞれ同一または異なって 1〜1 000の整数であり；式（I I c) 中、

Y cおよび Y c，はそれぞれ同一または異なって水素原子またはァミノ基の保護基であり、

Z cは水素原子または力ルポキシル基の保護基であり、

pい _χ' および!），はそれぞれ同一または異なって 1〜 1 000の整数であり

式（I I d) 中、

Y dは水素原子またはァミノ基の保護基であり、

Z dは水素原子またはカルボキシル基の保護基であり、

W d.は水素原子または水酸基の保護基であり、

R _{8 a}〜 R 。 _aはそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、一 CH₂OH (式中、水酸基は保護されていてもよい）あるいは保護されていてもよい水酸基であり、

q は 1〜7の整数であり、 R_{8 a}が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、 _4£1が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい；

式（I I e) 中、

Y eは水素原子またはァミノ基の保護基であり、

Z eは水素原子またはカルボキシル基の保護基であり、

R i 11 a〜 R i 6 aはそれぞれ同一または異なつて水素原子、炭素数 1〜 3の直鎖状または分枝状のアルキル基、一 CH₂OH (式中、水酸基は保護されていてもよい）および保護されていてもよい水酸基であり、

rェは 1〜 10の整数であり、は 1〜50の整数であり、

R_{l l a}〜R_{16 a}がそれぞれ複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい）、

但し以下の化合物は除く。

38. 式（ I I a) 〜（ I I e) からなる群より選択される少なくとも 1つの式で表される化合物を重合してなるポリマー化合物。

39. 固相担体おょぴ請求の範囲 35〜 38のいずれか 1項に記載の化合物を含む複合体。

40. 請求の範囲 3 5〜 38のいずれか 1項に記載の化合物および分子 Aを含む複合体。

41. 固相担体、請求の範囲 35〜38のいずれか 1項に記載の化合物おょぴ分子 Aを含む複合体。