JPH0727767A - 被覆担体、その製法、及びその生体分子の固体表面への固定化に対する使用法 - Google Patents
被覆担体、その製法、及びその生体分子の固体表面への固定化に対する使用法Info
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 蛋白質及び他の生体分子の固定化に適当な被
覆された担体とその製造法。 【構成】 不活性な担体を、ラングミュア-ブロジェッ
ト法又は自己集合技術により特別な重合体の単分子層で
被覆して被覆担体を作成する。この重合体は、固定化す
べき蛋白質又は他の生体分子と共有結合する反応性基を
親水性スペーサー基を介して端部に有する共単量体を
０.８〜２０モル％で含有し、そして該担体と該重合体
の単分子層の間には両者の接着を改善するために上述し
た反応性基を含まない重合体の単分子層を０〜２８０層
配置させる。 【効果】 このように製造した被覆担体は効率良く且つ
再現性良く蛋白質及び他の生体分子を固定化することが
できる。
覆された担体とその製造法。 【構成】 不活性な担体を、ラングミュア-ブロジェッ
ト法又は自己集合技術により特別な重合体の単分子層で
被覆して被覆担体を作成する。この重合体は、固定化す
べき蛋白質又は他の生体分子と共有結合する反応性基を
親水性スペーサー基を介して端部に有する共単量体を
０.８〜２０モル％で含有し、そして該担体と該重合体
の単分子層の間には両者の接着を改善するために上述し
た反応性基を含まない重合体の単分子層を０〜２８０層
配置させる。 【効果】 このように製造した被覆担体は効率良く且つ
再現性良く蛋白質及び他の生体分子を固定化することが
できる。
Description
【０００１】本発明は、蛋白質及び他の生体分子、特に
アクセプター蛋白質の固定化に適当である被覆担体及び
その製造法に関する。これは改良されたバイオセンサー
及び生体分析具の製造を可能にする。
アクセプター蛋白質の固定化に適当である被覆担体及び
その製造法に関する。これは改良されたバイオセンサー
及び生体分析具の製造を可能にする。
【０００２】蛋白質及び他の生体分子の固定化は、多く
の分析法及び生物工学プロセスに対して重要である。こ
こで言及する分析法は特に固相の免疫分析並びに固定化
のために免疫グロブリン（抗体）の取扱い性が改善され
たバイオ及び免疫センサーである。現在の技術によれ
ば、蛋白質はイオン性又は疎水性相互作用によって固体
表面に吸着的に結合せしめられ、或いは補助試剤を用い
ることにより共有結合で連結せしめられる。後者の方法
で言及しうる現在では古典的な例としては、ガラスのＡ
ＰＴＳ（３-アミノプロピルトリエトキシシラン）及び
グルタルアルデヒドによる活性化、続く蛋白質の結合、
更に随時続く得られるシッフ塩基の水素化ホウ素ナトリ
ウムによる還元が言及しうる。免疫分析に用いる方法の
総説は、Ｐ．ティジュセン（Ｔijssen）、「酵素免疫分
析の実際と理論」、２９７〜３２８頁［エルセビア（Ｅ
lsevier）、アムステルダム、１９８７年］を参照のこ
と。生物工学プロセスに対しては、酵素の、透過性重合
体又は膜中へのカプセル化法が更に通常である。
の分析法及び生物工学プロセスに対して重要である。こ
こで言及する分析法は特に固相の免疫分析並びに固定化
のために免疫グロブリン（抗体）の取扱い性が改善され
たバイオ及び免疫センサーである。現在の技術によれ
ば、蛋白質はイオン性又は疎水性相互作用によって固体
表面に吸着的に結合せしめられ、或いは補助試剤を用い
ることにより共有結合で連結せしめられる。後者の方法
で言及しうる現在では古典的な例としては、ガラスのＡ
ＰＴＳ（３-アミノプロピルトリエトキシシラン）及び
グルタルアルデヒドによる活性化、続く蛋白質の結合、
更に随時続く得られるシッフ塩基の水素化ホウ素ナトリ
ウムによる還元が言及しうる。免疫分析に用いる方法の
総説は、Ｐ．ティジュセン（Ｔijssen）、「酵素免疫分
析の実際と理論」、２９７〜３２８頁［エルセビア（Ｅ
lsevier）、アムステルダム、１９８７年］を参照のこ
と。生物工学プロセスに対しては、酵素の、透過性重合
体又は膜中へのカプセル化法が更に通常である。
【０００３】吸着による方法は蛋白質の固定化の安定性
に欠けるという欠点を有するが、一方カップリング又は
活性化剤を用いる共有結合はしばしば比較的多い工程
数、高純度で不安定な試剤の使用又はすべての蛋白質に
は適合しない反応条件の適用を必要とする。蛋白質固定
化の効率は、蛋白質の変性のため又は表面の蛋白質によ
る過度に低い被覆のためにしばしば不完全である。更に
いくつかの活性化剤は架橋しうるので、十分に定義でき
ない表面をもたらす。斯くして固定化の再現性も非常に
貧弱である。
に欠けるという欠点を有するが、一方カップリング又は
活性化剤を用いる共有結合はしばしば比較的多い工程
数、高純度で不安定な試剤の使用又はすべての蛋白質に
は適合しない反応条件の適用を必要とする。蛋白質固定
化の効率は、蛋白質の変性のため又は表面の蛋白質によ
る過度に低い被覆のためにしばしば不完全である。更に
いくつかの活性化剤は架橋しうるので、十分に定義でき
ない表面をもたらす。斯くして固定化の再現性も非常に
貧弱である。
【０００４】本発明において、これらの問題は、薄いフ
イルム形成重合体、即ち ａ）不活性な固定表面にしっかり接着する、且つ ｂ）固定化すべき蛋白質と共有結合する反応性基を有す
る 重合体で被覆された新規な被覆担体を製造することによ
って解決される。
イルム形成重合体、即ち ａ）不活性な固定表面にしっかり接着する、且つ ｂ）固定化すべき蛋白質と共有結合する反応性基を有す
る 重合体で被覆された新規な被覆担体を製造することによ
って解決される。
【０００５】本発明の利点は、固定化プロセスを、本質
的に２つの工程、即ち ａ）固定の被覆 ｂ）蛋白質の、被覆固体への共有結合 に減じたことにある。
的に２つの工程、即ち ａ）固定の被覆 ｂ）蛋白質の、被覆固体への共有結合 に減じたことにある。
【０００６】フイルム形成（層形成）工程は、種々の方
法で行うことができる。ラングミュア-ブロジッェト
（ＬＢ）法、自己集合（Ｓelf-Ａssembly）（ＳＡ）技
術、又はこれらの組合せが使用できる。両方法は、Ａ．
ウルマン（Ｕllman）、「有機超薄膜入門」、第２部１
０１〜１３２頁及び第３部２３７〜３０４頁［アカデミ
ック・プレス（Ａcademic Ｐress）、サン・ディエ
ゴ、１９９１年］に記述されている。特に独国公開特許
第４,０２６,９７８号及び第４,２０８,６４５号に記述
されているＳＡ法、即ち官能性にしうるポリイオンの層
を用いるそれは、取り扱いの容易性及び所望の形の固体
及び空洞を被覆しうる可能性のために本発明の目的のた
めに非常に適当である。
法で行うことができる。ラングミュア-ブロジッェト
（ＬＢ）法、自己集合（Ｓelf-Ａssembly）（ＳＡ）技
術、又はこれらの組合せが使用できる。両方法は、Ａ．
ウルマン（Ｕllman）、「有機超薄膜入門」、第２部１
０１〜１３２頁及び第３部２３７〜３０４頁［アカデミ
ック・プレス（Ａcademic Ｐress）、サン・ディエ
ゴ、１９９１年］に記述されている。特に独国公開特許
第４,０２６,９７８号及び第４,２０８,６４５号に記述
されているＳＡ法、即ち官能性にしうるポリイオンの層
を用いるそれは、取り扱いの容易性及び所望の形の固体
及び空洞を被覆しうる可能性のために本発明の目的のた
めに非常に適当である。
【０００７】斯くして本発明は、 ａ）不活性な固体及び ｂ）ラングミュア-ブロジェット（ＬＢ）法又は自己集
合（ＳＡ）技術に適当な重合体の単分子層、からなり、
但し ｃ）該重合体が、生物起源の分子を結合するのに適当な
活性基を親水性スペーサー基の端に位置して有する共単
量体を、すべての共単量体のモル数に対して０.８〜２
０モル％、好ましくは２.５〜１０モル％で含有し、そ
して ｄ）不活性な担体ａ）及び単分子層ｂ）との間に、ｃ）
による活性基を含まない、ＬＢ法又はＳＡ技術に適当な
重合体の単分子層を０〜２００配置させる、被覆固体に
関する。
合（ＳＡ）技術に適当な重合体の単分子層、からなり、
但し ｃ）該重合体が、生物起源の分子を結合するのに適当な
活性基を親水性スペーサー基の端に位置して有する共単
量体を、すべての共単量体のモル数に対して０.８〜２
０モル％、好ましくは２.５〜１０モル％で含有し、そ
して ｄ）不活性な担体ａ）及び単分子層ｂ）との間に、ｃ）
による活性基を含まない、ＬＢ法又はＳＡ技術に適当な
重合体の単分子層を０〜２００配置させる、被覆固体に
関する。
【０００８】更に本発明は、不活性な担体をラングミュ
ア-ブロジェット（ＬＢ）法に従って又は自己集合（Ｓ
Ａ）技術に従って、これらの技術に適当な重合体の単分
子層で被覆する、但し該重合体が、生物起源の分子を結
合するのに適当な活性基を親水性スペーサー基の端に位
置して有する共単量体を、すべての共単量体のモル数に
対して０.８〜２０モル％で含有し、そして該不活性な
担体及び該単分子層の間に、該活性基を有する共単量体
を含まない、ＬＢ法又はＳＡ技術に適当な重合体の単分
子層を０〜２００配置させる、被覆担体の製造法に関す
る。
ア-ブロジェット（ＬＢ）法に従って又は自己集合（Ｓ
Ａ）技術に従って、これらの技術に適当な重合体の単分
子層で被覆する、但し該重合体が、生物起源の分子を結
合するのに適当な活性基を親水性スペーサー基の端に位
置して有する共単量体を、すべての共単量体のモル数に
対して０.８〜２０モル％で含有し、そして該不活性な
担体及び該単分子層の間に、該活性基を有する共単量体
を含まない、ＬＢ法又はＳＡ技術に適当な重合体の単分
子層を０〜２００配置させる、被覆担体の製造法に関す
る。
【０００９】最後に本発明は、被覆担体の、生物起源の
分子を結合させる（固定化する）ための使用法に関す
る。
分子を結合させる（固定化する）ための使用法に関す
る。
【００１０】本方法においては、最上の蛋白質を結合す
る層のより良き接着を保証するために、不活性な固体を
最初にフイルム形成物質の１層又はそれ以上で下被覆す
ることもできる。ＬＢ法を用いる場合、固体は平面構造
とできるだけ均一な表面極性を有すべきである。ＳＡ技
術によりポリイオンで被覆する場合、表面の荷電した物
質は例えば表面の酸化されたプラスチックの場合のよう
に、それ自体が続いて導入されるものを提供する。
る層のより良き接着を保証するために、不活性な固体を
最初にフイルム形成物質の１層又はそれ以上で下被覆す
ることもできる。ＬＢ法を用いる場合、固体は平面構造
とできるだけ均一な表面極性を有すべきである。ＳＡ技
術によりポリイオンで被覆する場合、表面の荷電した物
質は例えば表面の酸化されたプラスチックの場合のよう
に、それ自体が続いて導入されるものを提供する。
【００１１】不活性な固体として特に興味あるものは、
生体分析を行う或いはバイオセンサーの表面を作成する
のに適したすべての材料である。生体分析は例えばスポ
ットプレート、試験細片又はフロー系を用いて行われ
る。典型的な材料はプラスチック、改変バイオポリマー
及びガラスである。バイオセンサーは多くの方法で製造
することができる。検知法（電気化学的、光学的方法な
ど）に依存して、本発明に従って使用しうる表面として
は、金属電極、半導体表面、膜被覆電極、光伝導性又は
光透過性材料（ガラス、プラスチック）、石英レゾネー
ター又は表面レゾネーターが修飾しうる。
生体分析を行う或いはバイオセンサーの表面を作成する
のに適したすべての材料である。生体分析は例えばスポ
ットプレート、試験細片又はフロー系を用いて行われ
る。典型的な材料はプラスチック、改変バイオポリマー
及びガラスである。バイオセンサーは多くの方法で製造
することができる。検知法（電気化学的、光学的方法な
ど）に依存して、本発明に従って使用しうる表面として
は、金属電極、半導体表面、膜被覆電極、光伝導性又は
光透過性材料（ガラス、プラスチック）、石英レゾネー
ター又は表面レゾネーターが修飾しうる。
【００１２】適当な反応性基は、古典的な蛋白質固定化
法から公知の基、例えばＮ-ヒドロキシサクシンイミド
基、イソシアネート、イソチオシアネート又はニトロフ
エニルエステル（ＮＨ2の固定化）、ヨードアセトアミ
ド又はマレイミド基（ＳＨの固定化）、或いはヒドラジ
ド基（過ヨウ素酸塩処理により開裂した糖蛋白質の結
合）である。
法から公知の基、例えばＮ-ヒドロキシサクシンイミド
基、イソシアネート、イソチオシアネート又はニトロフ
エニルエステル（ＮＨ2の固定化）、ヨードアセトアミ
ド又はマレイミド基（ＳＨの固定化）、或いはヒドラジ
ド基（過ヨウ素酸塩処理により開裂した糖蛋白質の結
合）である。
【００１３】重合体主鎖への直接的な結合、例えばＮ-
ヒドロキシサクシンイミジルメタクリレートの導入は、
満足しうる蛋白質の固定化には至らない。これらの基を
十分な長さの親水性スペーサー基を介して重合体主鎖に
連結し、この結果として反応性基が水性媒体中において
結合させるべき蛋白質に近づき易くすることが有利であ
るということが発見された。スペーサー基の場合、原子
数３以上、好ましくは５〜３０、特に好ましくは７〜３
０、非常に特に好ましくは１３〜３０のヘテロ原子を含
む炭化水素鎖、特にオリゴエチレンオキシド鎖は適当で
あることが判明した。この種の基の例は次の単量体
（Ｉ）である： ＣＨ2＝Ｃ(Ｒ1)−Ｒ2 （Ｉ） ［式中、Ｒ1はＨ又はＣＨ3を表わし、そしてＲ2は基
ヒドロキシサクシンイミジルメタクリレートの導入は、
満足しうる蛋白質の固定化には至らない。これらの基を
十分な長さの親水性スペーサー基を介して重合体主鎖に
連結し、この結果として反応性基が水性媒体中において
結合させるべき蛋白質に近づき易くすることが有利であ
るということが発見された。スペーサー基の場合、原子
数３以上、好ましくは５〜３０、特に好ましくは７〜３
０、非常に特に好ましくは１３〜３０のヘテロ原子を含
む炭化水素鎖、特にオリゴエチレンオキシド鎖は適当で
あることが判明した。この種の基の例は次の単量体
（Ｉ）である： ＣＨ2＝Ｃ(Ｒ1)−Ｒ2 （Ｉ） ［式中、Ｒ1はＨ又はＣＨ3を表わし、そしてＲ2は基
【００１４】
【化１】
【００１５】又は−ＣＯ−Ｏ−Ｒ4を表わし、但しＲ3は
−(ＣＨ2−)m−ＳＯ2−(ＣＨ2−)n−Ｎ＝Ｃ＝Ｘを表わ
し、なおＸ＝Ｓ又はＯであり、或いはＲ3は−Ｃ(ＣＨ3)
2−ＮＨ−ＣＯ−Ｙ、を表わしＲ4は−(ＣＨ2)m−ＮＨ−
ＣＯ−Ｙ、−[ＣＨ(Ｒ1)−ＣＨ2−Ｏ−]o−ＳＯ2−Ｒ5
又は−[ＣＨ(Ｒ1)−ＣＨ2−Ｏ−]o−ＣＯ−Ｒ6を表わ
し、但しＹは
−(ＣＨ2−)m−ＳＯ2−(ＣＨ2−)n−Ｎ＝Ｃ＝Ｘを表わ
し、なおＸ＝Ｓ又はＯであり、或いはＲ3は−Ｃ(ＣＨ3)
2−ＮＨ−ＣＯ−Ｙ、を表わしＲ4は−(ＣＨ2)m−ＮＨ−
ＣＯ−Ｙ、−[ＣＨ(Ｒ1)−ＣＨ2−Ｏ−]o−ＳＯ2−Ｒ5
又は−[ＣＨ(Ｒ1)−ＣＨ2−Ｏ−]o−ＣＯ−Ｒ6を表わ
し、但しＹは
【００１６】
【化２】
【００１７】−ＮＨ−ＮＨ2又は−ＮＨ−ＮＨ3 +Ｃｌ-、
【００１８】
【化３】
【００１９】又は−ＮＨ−(ＣＨ2−)p−Ｏ−ＳＯ2−
Ｒ5、を表わし、Ｒ5はＣＨ3、ＣpＦ2p+1、フエニル又は
トリルを示し、Ｒ6は−(ＣＨ2)m−ＣＯ−Ｙ又はＹを示
し、ｍ及びｎは互いに独立に１〜４の整数であり、そし
てｏ及びｐは互いに独立に１〜９の整数である］。
Ｒ5、を表わし、Ｒ5はＣＨ3、ＣpＦ2p+1、フエニル又は
トリルを示し、Ｒ6は−(ＣＨ2)m−ＣＯ−Ｙ又はＹを示
し、ｍ及びｎは互いに独立に１〜４の整数であり、そし
てｏ及びｐは互いに独立に１〜９の整数である］。
【００２０】好適な親水性スペーサー基は単位数５〜９
のオリゴエチレンオキシド又はオリゴプロピレンオキシ
ド基である。
のオリゴエチレンオキシド又はオリゴプロピレンオキシ
ド基である。
【００２１】これらは、例示すると、ＬＢ法に適当な次
の重合体に導入することができる：
の重合体に導入することができる：
【００２２】
【化４】
【００２３】［式中、Ｒ1及びＲ2は言及した意味を有
し、Ｒ7及びＲ8は互いに独立にＨ又はＣＨ3を示し、ｑ
は１２〜２２、好ましくは１６〜１８の整数を表わし、
ｒは０.６〜１.２５、好ましくは０.８〜１.１、特に好
ましくは０.９〜１.０５の値を示し、そしてＳは０.０
２〜０.４、特に０.０５〜０.２の値を示す］。
し、Ｒ7及びＲ8は互いに独立にＨ又はＣＨ3を示し、ｑ
は１２〜２２、好ましくは１６〜１８の整数を表わし、
ｒは０.６〜１.２５、好ましくは０.８〜１.１、特に好
ましくは０.９〜１.０５の値を示し、そしてＳは０.０
２〜０.４、特に０.０５〜０.２の値を示す］。
【００２４】不活性な固体と重合体（II）の単分子層の
間に、０〜２００、好ましくは０〜５０、特に０〜２０
層の、高度に配列した重合体層を介在させてもよい。こ
の重合体は添字Ｓに関わる単量体を含まない式（II）の
重合体に由来してもよい。
間に、０〜２００、好ましくは０〜５０、特に０〜２０
層の、高度に配列した重合体層を介在させてもよい。こ
の重合体は添字Ｓに関わる単量体を含まない式（II）の
重合体に由来してもよい。
【００２５】ＳＡ技術を行うのに適当な重合体は、１よ
り多い電荷を有するもの、従ってポリイオンである。
り多い電荷を有するもの、従ってポリイオンである。
【００２６】適当なポリカチオンは、例えばアミノ官能
基及びスルホニウム官能基を含有する化合物、例えばポ
リリシン、ポリアリルアミン、ポリエチレンイミン、ポ
リビニルピリジン、アミノ官能基で改変した（メト）ア
クリレート（例えばポリ-Ｎ,Ｎ-ジメチルアミノエチル
メタクリレート）、デキストラン（例えばＤＥＡＥ-デ
キストラン）及び更にキトサンである。アミノ化合物
は、簡単なプロトン化により又は四級化によりイオン化
状態に転換することができる。
基及びスルホニウム官能基を含有する化合物、例えばポ
リリシン、ポリアリルアミン、ポリエチレンイミン、ポ
リビニルピリジン、アミノ官能基で改変した（メト）ア
クリレート（例えばポリ-Ｎ,Ｎ-ジメチルアミノエチル
メタクリレート）、デキストラン（例えばＤＥＡＥ-デ
キストラン）及び更にキトサンである。アミノ化合物
は、簡単なプロトン化により又は四級化によりイオン化
状態に転換することができる。
【００２７】適当なポリアニリンは例えばポリカルボン
酸、ポリホスホン酸及びポリスルホン酸である。これら
の例はポリグルタメート、ポリ（メト）アクリル酸、ポ
リスチレンスルホン酸又はデキストランサルフエートで
ある。
酸、ポリホスホン酸及びポリスルホン酸である。これら
の例はポリグルタメート、ポリ（メト）アクリル酸、ポ
リスチレンスルホン酸又はデキストランサルフエートで
ある。
【００２８】ＬＢ法に関して上述したものと同様の方法
により、ＳＡ技術に適当な上述したポリイオンの０〜２
００層を不活性な担体に付着させることができる。この
付着させるべき重合体は、それぞれの場合公知の方法に
従い、反対の意味において交互に荷電せしめられる。被
覆すべき担体も一般に同様に、付着させる第１の重合体
層に対して反対の意味での荷電を有するように予備処理
する。
により、ＳＡ技術に適当な上述したポリイオンの０〜２
００層を不活性な担体に付着させることができる。この
付着させるべき重合体は、それぞれの場合公知の方法に
従い、反対の意味において交互に荷電せしめられる。被
覆すべき担体も一般に同様に、付着させる第１の重合体
層に対して反対の意味での荷電を有するように予備処理
する。
【００２９】最終層としては、ＳＡ技術を用いる時でさ
え、親水性スペーサー基が端に位置する、生物起源の分
子を結合させるための上述した複数の活性基を有する単
量体（式（１））を、すべての共単量体の全数に対して
０.８〜２０、好ましくは２.５〜１０モル％含有するポ
リイオン性重合体を付着させる。
え、親水性スペーサー基が端に位置する、生物起源の分
子を結合させるための上述した複数の活性基を有する単
量体（式（１））を、すべての共単量体の全数に対して
０.８〜２０、好ましくは２.５〜１０モル％含有するポ
リイオン性重合体を付着させる。
【００３０】最終層として、ポリカチオンを付着させ且
つこのカチオン性基がヒドラジン基（−ＮＨ−ＮＨ2又
は−ＮＨ−ＮＨ2ＨＣｌ）である場合、これらのヒドラ
ジン基はその下層にあるポリアニオン層にイオン結合
し、そしてその量がイオン結合数を越えるならば生物起
源の分子をも結合することができる。そのような場合、
活性基は本発明による０.８〜２０モル％の含量以上の
１００モル％までを構成してもよい。
つこのカチオン性基がヒドラジン基（−ＮＨ−ＮＨ2又
は−ＮＨ−ＮＨ2ＨＣｌ）である場合、これらのヒドラ
ジン基はその下層にあるポリアニオン層にイオン結合
し、そしてその量がイオン結合数を越えるならば生物起
源の分子をも結合することができる。そのような場合、
活性基は本発明による０.８〜２０モル％の含量以上の
１００モル％までを構成してもよい。
【００３１】上式（II）と同様に、ＳＡ技術の場合、最
上層に対して使用しうる重合体は下式のものである：
上層に対して使用しうる重合体は下式のものである：
【００３２】
【化５】
【００３３】［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ7及びｓは上に示し
た意味を有し、ｔは１.６〜２.２５、好ましくは１.８
〜２.１、特に好ましくは１.９〜２.０５の値を示し、
そしてＲ9は−ＳＯ3 -、−Ｃ6Ｈ4−ＳＯ3 -、−ＣＯＯ-及
び−Ｏ−ＰＯ3 --からなる群からのアニオン或いは
た意味を有し、ｔは１.６〜２.２５、好ましくは１.８
〜２.１、特に好ましくは１.９〜２.０５の値を示し、
そしてＲ9は−ＳＯ3 -、−Ｃ6Ｈ4−ＳＯ3 -、−ＣＯＯ-及
び−Ｏ−ＰＯ3 --からなる群からのアニオン或いは
【００３４】
【化６】
【００３５】からなる群からのカチオンを示し、但しＲ
10、Ｒ11及びＲ12は互いに独立に水素、Ｃ1〜Ｃ22アル
キル、フエニル又はベンジルを示し、そしてＱはＯ又は
ＮＨを表わし、添字ｏ及びｍは互いに独立に１〜９の整
数を表わす］。
10、Ｒ11及びＲ12は互いに独立に水素、Ｃ1〜Ｃ22アル
キル、フエニル又はベンジルを示し、そしてＱはＯ又は
ＮＨを表わし、添字ｏ及びｍは互いに独立に１〜９の整
数を表わす］。
【００３６】ポリアニオンの場合、反対に荷電されたイ
オンはＨ+、アルカリ金属又はアルカリ土類金属カチオ
ン、ＮＨ4 +、或いは完全に又は部分的にＣ1〜Ｃ8アルキ
ル、フエニル又はベンジルで置換されたアンモニウムで
ある。
オンはＨ+、アルカリ金属又はアルカリ土類金属カチオ
ン、ＮＨ4 +、或いは完全に又は部分的にＣ1〜Ｃ8アルキ
ル、フエニル又はベンジルで置換されたアンモニウムで
ある。
【００３７】ポリカチオンの場合、イオンは-ＯＨ、ハ
ライド、サルファート、Ｃ1〜Ｃ8アルキルスルホネー
ト、又はフエニルスルホネートである。
ライド、サルファート、Ｃ1〜Ｃ8アルキルスルホネー
ト、又はフエニルスルホネートである。
【００３８】カチオンはＳＡ技術を用いる場合、水又は
酸の作用により、例えば−ＮＨ2及び水から生成するこ
ともできる（−+ＮＨ3 -ＯＨ）。
酸の作用により、例えば−ＮＨ2及び水から生成するこ
ともできる（−+ＮＨ3 -ＯＨ）。
【００３９】ポリアニオンの場合、好適なものはビニル
重合しうる酸例えばポリ（メト）アクリル酸又はポリス
チレンスルホン酸である。これらの場合、反応性基の導
入はＬＢ法の重合体の場合と丁度同じように反応性単量
体を介して起こる。ＳＡ技術に対して適当な重合体の合
成には、同一の反応性単量体（式Ｉ）が好適に用いられ
る。
重合しうる酸例えばポリ（メト）アクリル酸又はポリス
チレンスルホン酸である。これらの場合、反応性基の導
入はＬＢ法の重合体の場合と丁度同じように反応性単量
体を介して起こる。ＳＡ技術に対して適当な重合体の合
成には、同一の反応性単量体（式Ｉ）が好適に用いられ
る。
【００４０】ポリカチオンでは、式（III）の関連にお
いてＲ9として言及したピリジニウム、アンモニウム又
は−ＣＯ−Ｏ−アルキレンアンモニウムカチオンを有す
るものが好適である。
いてＲ9として言及したピリジニウム、アンモニウム又
は−ＣＯ−Ｏ−アルキレンアンモニウムカチオンを有す
るものが好適である。
【００４１】反応性基のモル含量は２０〜０.８、好ま
しくは１０〜２.５％である。
しくは１０〜２.５％である。
【００４２】上述したＬＢ法と同様に、式（III）の添
字ｓは最上層の下の０〜２００の層に対しては０の値で
ある。斯くして下の方の層では、ポリアニオン又はポリ
カチオンが活性基を有さない。ヒドラジン基の特別な状
態は、すでに上述した通りである。
字ｓは最上層の下の０〜２００の層に対しては０の値で
ある。斯くして下の方の層では、ポリアニオン又はポリ
カチオンが活性基を有さない。ヒドラジン基の特別な状
態は、すでに上述した通りである。
【００４３】公知の方法において、ＬＢ法に適当な溶媒
は、重合体を溶解するが、表面上に重合体を広げるため
の媒体とは混和しないものである。媒体が水の重要な場
合には、そのような溶媒は例えば塩化メチレン及び他の
ハロゲン化脂肪族炭化水素、芳香族系の（ハロゲノ）炭
化水素、水と混和しないエステル及び同業者には公知の
他のものである。
は、重合体を溶解するが、表面上に重合体を広げるため
の媒体とは混和しないものである。媒体が水の重要な場
合には、そのような溶媒は例えば塩化メチレン及び他の
ハロゲン化脂肪族炭化水素、芳香族系の（ハロゲノ）炭
化水素、水と混和しないエステル及び同業者には公知の
他のものである。
【００４４】ＳＡ技術に対する適当な媒体は、水の場
合、高極性の、随時水と混和しうる溶媒例えば水溶性の
アルコール及びエーテル、ジメチルスルホキシド、パー
アルキル酸アミド及びその他同業者には公知のものであ
る。
合、高極性の、随時水と混和しうる溶媒例えば水溶性の
アルコール及びエーテル、ジメチルスルホキシド、パー
アルキル酸アミド及びその他同業者には公知のものであ
る。
【００４５】生物学的起源の分子は、例えば蛋白質、ス
テロイド、代謝物、ビタミン、核酸、好ましくは生物学
的レセプター分子、例えば免疫グロブリン、レクチン又
は酵素、例えばグルコースオキシダーゼ、ウレアーゼ、
抗体である。
テロイド、代謝物、ビタミン、核酸、好ましくは生物学
的レセプター分子、例えば免疫グロブリン、レクチン又
は酵素、例えばグルコースオキシダーゼ、ウレアーゼ、
抗体である。
【００４６】固定化すべき蛋白質は、免疫グロブリンの
場合、開裂によるＦａｂ断片を得た後、又はグリコシド
基を過ヨウ素酸塩で開裂した後、並びに免疫グロブリン
の場合には補助蛋白質、例えば蛋白質Ａ又は蛋白質Ｇを
介して、予備処理なしに用いることができる。本方法で
固定化された蛋白質を用いると、コンカバリンＡ及びマ
ンノースに対するヨーロッパ特許第４２９,９０７Ａ号
に記述されているものと同一の方法でフエルスター（Ｆ
oerster）エネルギー遷移により抗原の結合が検知でき
る。
場合、開裂によるＦａｂ断片を得た後、又はグリコシド
基を過ヨウ素酸塩で開裂した後、並びに免疫グロブリン
の場合には補助蛋白質、例えば蛋白質Ａ又は蛋白質Ｇを
介して、予備処理なしに用いることができる。本方法で
固定化された蛋白質を用いると、コンカバリンＡ及びマ
ンノースに対するヨーロッパ特許第４２９,９０７Ａ号
に記述されているものと同一の方法でフエルスター（Ｆ
oerster）エネルギー遷移により抗原の結合が検知でき
る。
【００４７】
【実施例】実施例１ 反応性基１を有する反応性重合体１の合成 メタクリル酸ステアリル４ｇ、４-メタクリロイル-２,
２-ジメチルジオキソラン２.３６ｇ、ｍ-イソプロペニ
ル-α,α-ジメチルベンジルイソシアネート［ｍ-ＴＭＩ
R、アメリカン・サイアナミド社（Ａmerican Ｃyanami
de Ｃo.）］０.２４ｇ及びアゾビスイソブチロニトリ
ル１０ｍｇをジオキサン５５ｍｌ中に導入した。装置を
脱気し、純粋な窒素を送入し、このサイクルを２回繰返
し、混合物を７０℃で６時間撹拌した。この粗溶液にｐ
-ニトロフエノール０.２ｇ及びジアザビシクロ［２.２.
２］オクタン１０ｍｇを添加した。次いで溶液を５５℃
で１６時間撹拌した。冷却後、この粗溶液をメタノール
２００ｍｌに滴下し、沈降する白色の沈殿を吸引濾別し
た。
２-ジメチルジオキソラン２.３６ｇ、ｍ-イソプロペニ
ル-α,α-ジメチルベンジルイソシアネート［ｍ-ＴＭＩ
R、アメリカン・サイアナミド社（Ａmerican Ｃyanami
de Ｃo.）］０.２４ｇ及びアゾビスイソブチロニトリ
ル１０ｍｇをジオキサン５５ｍｌ中に導入した。装置を
脱気し、純粋な窒素を送入し、このサイクルを２回繰返
し、混合物を７０℃で６時間撹拌した。この粗溶液にｐ
-ニトロフエノール０.２ｇ及びジアザビシクロ［２.２.
２］オクタン１０ｍｇを添加した。次いで溶液を５５℃
で１６時間撹拌した。冷却後、この粗溶液をメタノール
２００ｍｌに滴下し、沈降する白色の沈殿を吸引濾別し
た。
【００４８】収量：５.２ｇ、理論収量の７６.５％に相
当。
当。
【００４９】この1Ｈ-ＮＭＲは、ｍ-ＴＭＩを含むため
に７〜７.５ppmの範囲にある重合体に典型的なブロード
の共鳴吸収、３.５〜４.５ppmにエステル官能基に隣る
プロトン及びアルキル残基による０.７〜２.２ppmの吸
収を示した。14Ｎの元素分析はＮ０.４％であり、反応
性基４モル％に相当した。
に７〜７.５ppmの範囲にある重合体に典型的なブロード
の共鳴吸収、３.５〜４.５ppmにエステル官能基に隣る
プロトン及びアルキル残基による０.７〜２.２ppmの吸
収を示した。14Ｎの元素分析はＮ０.４％であり、反応
性基４モル％に相当した。
【００５０】実施例２ ａ）反応性基２の製造 ６-アミノヘキサノール５ｇを窒素下に塩化メチレン９
５ｍｌに溶解し、そして塩化メチレン１５ｍｌに溶解し
たイソシアナトエチルメタクリレート６.６ｇを室温で
ゆっくりと添加し、混合物を２時間撹拌した。塩化メチ
レンを直空下に留去し、残渣をジエチルエーテル中で結
晶化させた。収量：９.８ｇ、理論収量の８４.５％に相
当。
５ｍｌに溶解し、そして塩化メチレン１５ｍｌに溶解し
たイソシアナトエチルメタクリレート６.６ｇを室温で
ゆっくりと添加し、混合物を２時間撹拌した。塩化メチ
レンを直空下に留去し、残渣をジエチルエーテル中で結
晶化させた。収量：９.８ｇ、理論収量の８４.５％に相
当。
【００５１】1Ｈ-ＮＭＲは、５.４５及び５.５５ppmに
尿素プロトン、５.６及び６.１ppmにビニルプロトン、
及び１.２〜１.７ppmにアルキル共鳴を示した。
尿素プロトン、５.６及び６.１ppmにビニルプロトン、
及び１.２〜１.７ppmにアルキル共鳴を示した。
【００５２】ｂ）反応性重合体２の合成 メタクリル酸ステアリル４ｇ、メタクリロイルジメチル
ジオキソラン２.３６ｇ、実施例２ａ）からの物質０.３
２ｇ、及びアゾビスイソブチロニトリル１０ｍｇをジオ
キサン５５ｍｌに溶解した。装置を脱気し、純粋な窒素
を仕込み、このサイクルを２回繰返し、混合物を７０℃
で６時間撹拌した。冷却した溶液をメチルスルホニルク
ロライド０.１５ｇ及びピリジン０.１５ｇで処理し、４
０℃で２時間撹拌した。冷却後にこの粗溶液をメタノー
ル２００ｍｌに滴下し、沈降する白色沈殿を水洗し、次
いで吸引濾別した。収量：５.２ｇ、理論収量の７６％
に相当。
ジオキソラン２.３６ｇ、実施例２ａ）からの物質０.３
２ｇ、及びアゾビスイソブチロニトリル１０ｍｇをジオ
キサン５５ｍｌに溶解した。装置を脱気し、純粋な窒素
を仕込み、このサイクルを２回繰返し、混合物を７０℃
で６時間撹拌した。冷却した溶液をメチルスルホニルク
ロライド０.１５ｇ及びピリジン０.１５ｇで処理し、４
０℃で２時間撹拌した。冷却後にこの粗溶液をメタノー
ル２００ｍｌに滴下し、沈降する白色沈殿を水洗し、次
いで吸引濾別した。収量：５.２ｇ、理論収量の７６％
に相当。
【００５３】1Ｈ-ＮＭＲは、０.７〜２.２ppmにアルキ
ル範囲及び３.５〜４.５ppmにエステル官能基に隣るプ
ロトンという重合体に典型的なブロードな共鳴吸収を示
した。32Ｓの元素分析はＳ０.４５％を与え、これは反
応性基４.１モル％に相当した。
ル範囲及び３.５〜４.５ppmにエステル官能基に隣るプ
ロトンという重合体に典型的なブロードな共鳴吸収を示
した。32Ｓの元素分析はＳ０.４５％を与え、これは反
応性基４.１モル％に相当した。
【００５４】実施例３ ａ）反応性重合体３及び４並びに反応性基３の合成 メタクリル酸ステアリル及びメタクリロイルジメチルジ
オキソランのそれぞれ２.４５ｇ及びアゾビスイソブチ
ロニトリル１５０ｍｇをジオキサン１５ｍｌに溶解し
た。この混合物に、反応性基３（式は下式参照、独国公
開特許第４,２０２,０５１号の実施例１の製造法によ
る）を０.２５ｇ（重合体３に対して）又は０.５ｇ（重
合体４に対して）添加し、これを７０℃で１８時間撹拌
した。冷却後にＮ,Ｎ′-ジサクシンイミジルカーボネー
ト０.５ｇ（重合体３に対して）又は１ｇ（重合体４に
対して）を添加し、混合物を５０℃で５時間撹拌した。
この粗溶液をメタノール５００ｍｌに滴下し、得られた
沈殿を濾別し、水洗し、乾燥した。1Ｈ-ＮＭＲは、７〜
７.５ppmに芳香族環、３.５〜４.５ppmにエステル官能
基に隣るプロトン及び０.７〜２.２ppmにアルキル残基
の、重合体に典型的なブロードな共鳴吸引を示した。14
Ｎの元素分析は重合体３に対してＮ０.３％及び重合体
に対してＮ０.５％を示した。これらはそれぞれＮ-ヒド
ロキシサクシンイミド（＝ＮＨＳ）-活性化反応性基２.
１モル％又は３.６モル％に相当した。
オキソランのそれぞれ２.４５ｇ及びアゾビスイソブチ
ロニトリル１５０ｍｇをジオキサン１５ｍｌに溶解し
た。この混合物に、反応性基３（式は下式参照、独国公
開特許第４,２０２,０５１号の実施例１の製造法によ
る）を０.２５ｇ（重合体３に対して）又は０.５ｇ（重
合体４に対して）添加し、これを７０℃で１８時間撹拌
した。冷却後にＮ,Ｎ′-ジサクシンイミジルカーボネー
ト０.５ｇ（重合体３に対して）又は１ｇ（重合体４に
対して）を添加し、混合物を５０℃で５時間撹拌した。
この粗溶液をメタノール５００ｍｌに滴下し、得られた
沈殿を濾別し、水洗し、乾燥した。1Ｈ-ＮＭＲは、７〜
７.５ppmに芳香族環、３.５〜４.５ppmにエステル官能
基に隣るプロトン及び０.７〜２.２ppmにアルキル残基
の、重合体に典型的なブロードな共鳴吸引を示した。14
Ｎの元素分析は重合体３に対してＮ０.３％及び重合体
に対してＮ０.５％を示した。これらはそれぞれＮ-ヒド
ロキシサクシンイミド（＝ＮＨＳ）-活性化反応性基２.
１モル％又は３.６モル％に相当した。
【００５５】
【化７】
【００５６】反応性基３ ｂ）反応性重合体５及び６の合成 ジメチルスルホキシドをジオキサンの代りに溶媒として
用いる以外実施例３ａ）の実験を繰返した。14Ｎの元素
分析は、重合体５に対してＮ０.４％及び重合体６に対
してＮ０.７％を与え、それぞれ実施例３ａ）からのＮ
ＨＳ-活性化反応性基２.８モル％又は５モル％に相当し
た。
用いる以外実施例３ａ）の実験を繰返した。14Ｎの元素
分析は、重合体５に対してＮ０.４％及び重合体６に対
してＮ０.７％を与え、それぞれ実施例３ａ）からのＮ
ＨＳ-活性化反応性基２.８モル％又は５モル％に相当し
た。
【００５７】実施例４ 反応性重合体７の合成 メタクリル酸ステアリル３.３８ｇ、メタクリロイルシ
メチルジオキソラン２ｇ、及び更にアゾビスイソブチロ
ニトリル１００ｍｇをジオキサン２５ｍｌに溶解した。
この混合物に実施例３からの反応性基３を０.５４ｇ添
加し、これを７０℃で２０時間撹拌した。冷却後、ＮＨ
Ｓ０.２ｇ及びジシクロヘキシルカルボジイミド０.４ｇ
を添加し、この混合物を室温で１６時間撹拌した。この
粗溶液をメタノール４００ｍｌに滴下し、得られた沈殿
を濾別し、水洗し、乾燥した。1Ｈ-ＮＭＲは７〜７.５p
pmに芳香族環、３.５〜４.５ppmにエステル官能基に隣
プロトン及び０.７〜２.２ppmにアルキル残基の、重合
体に典型的なブロードな共鳴吸引を示した。14Ｎの元素
分析はＮ０.９％を与え、実施例３からの反応性基３の
６モル％に相当した。
メチルジオキソラン２ｇ、及び更にアゾビスイソブチロ
ニトリル１００ｍｇをジオキサン２５ｍｌに溶解した。
この混合物に実施例３からの反応性基３を０.５４ｇ添
加し、これを７０℃で２０時間撹拌した。冷却後、ＮＨ
Ｓ０.２ｇ及びジシクロヘキシルカルボジイミド０.４ｇ
を添加し、この混合物を室温で１６時間撹拌した。この
粗溶液をメタノール４００ｍｌに滴下し、得られた沈殿
を濾別し、水洗し、乾燥した。1Ｈ-ＮＭＲは７〜７.５p
pmに芳香族環、３.５〜４.５ppmにエステル官能基に隣
プロトン及び０.７〜２.２ppmにアルキル残基の、重合
体に典型的なブロードな共鳴吸引を示した。14Ｎの元素
分析はＮ０.９％を与え、実施例３からの反応性基３の
６モル％に相当した。
【００５８】実施例５ ａ）反応性基４の製造 平均分子量３５０のエチレンオキサイドオリゴマーのメ
タクリル酸エステル（日本油脂、ブレンマー（Ｂlemme
r）ＰＥ-３５０R）５ｇ、無水コハク酸１.１３ｇ及び
２,５-ビス-tert-ブチルフエノール１０ｍｇをジオキサ
ン４０ｍｌに溶解し、濃硫酸５滴を添加し、混合物を還
流下に１２時間沸とうさせた。硫酸をナトリウムメトキ
シドで中和し、溶液を濃縮した。この残渣を塩化メチレ
ン中に入れ、溶液を濾過した。濾液を高真空下に濃縮
し、残渣を乾燥した。1Ｈ-ＮＭＲは、５.５５及び６.１
ppmにビニルプロトン、３.６５ppmにエチレンオキシド
単位、４.２５ppmにエステル官能基に隣るプロトン、及
び２.６５ppmにα-カルボニルプロトンを示した。
タクリル酸エステル（日本油脂、ブレンマー（Ｂlemme
r）ＰＥ-３５０R）５ｇ、無水コハク酸１.１３ｇ及び
２,５-ビス-tert-ブチルフエノール１０ｍｇをジオキサ
ン４０ｍｌに溶解し、濃硫酸５滴を添加し、混合物を還
流下に１２時間沸とうさせた。硫酸をナトリウムメトキ
シドで中和し、溶液を濃縮した。この残渣を塩化メチレ
ン中に入れ、溶液を濾過した。濾液を高真空下に濃縮
し、残渣を乾燥した。1Ｈ-ＮＭＲは、５.５５及び６.１
ppmにビニルプロトン、３.６５ppmにエチレンオキシド
単位、４.２５ppmにエステル官能基に隣るプロトン、及
び２.６５ppmにα-カルボニルプロトンを示した。
【００５９】ｂ）反応性重合体８の合成 ｐ-スチリルスルホン酸ナトリウム１.３ｇ、実施例５
ａ）からの反応性基４の０.２ｇ及びクマリン染料１
（式は下式参照、独国特許公報第４,１１４,４８２Ａ１
号の実施例２も参照）０.５ｇをジメチルスルホキシド
１０ｍｌに溶解し、そしてアゾビスイソブチロニトリル
２０ｍｇの添加後に混合物を６５℃で１５時間撹拌し
た。この粘稠な粗溶液をエタノール１００ｍｌに滴下
し、得られた沈殿を吸引濾別し、ジメチルスルホキシド
１２ｍｌに再び溶解した。この溶液にＮＨＳ０.１ｇ及
びジシクロヘキシルカルボジイミド０.２ｇを添加し、
これを室温で１６時間撹拌した。この溶液をエタノール
１００ｍｌに滴下し、沈殿を吸引濾別し、高真空で乾燥
した。1Ｈ-ＮＭＲは、３.６５にエチレンオキサイド、
６.５〜８.５ppmの芳香族及び０.７〜２ppmに脂肪族の
プロトンの、重合体に典型的なブロードの吸収帯を示し
た。純粋な染料に標準化した３８５ppmにおけるモル吸
光は、重合体中の染料含量２０重量％を示した。
ａ）からの反応性基４の０.２ｇ及びクマリン染料１
（式は下式参照、独国特許公報第４,１１４,４８２Ａ１
号の実施例２も参照）０.５ｇをジメチルスルホキシド
１０ｍｌに溶解し、そしてアゾビスイソブチロニトリル
２０ｍｇの添加後に混合物を６５℃で１５時間撹拌し
た。この粘稠な粗溶液をエタノール１００ｍｌに滴下
し、得られた沈殿を吸引濾別し、ジメチルスルホキシド
１２ｍｌに再び溶解した。この溶液にＮＨＳ０.１ｇ及
びジシクロヘキシルカルボジイミド０.２ｇを添加し、
これを室温で１６時間撹拌した。この溶液をエタノール
１００ｍｌに滴下し、沈殿を吸引濾別し、高真空で乾燥
した。1Ｈ-ＮＭＲは、３.６５にエチレンオキサイド、
６.５〜８.５ppmの芳香族及び０.７〜２ppmに脂肪族の
プロトンの、重合体に典型的なブロードの吸収帯を示し
た。純粋な染料に標準化した３８５ppmにおけるモル吸
光は、重合体中の染料含量２０重量％を示した。
【００６０】14Ｎの元素分析はＮ１.４５％を与え、実
施例５ａ）からのＮＨＳ-活性化の反応性基４モル％に
相当した。
施例５ａ）からのＮＨＳ-活性化の反応性基４モル％に
相当した。
【００６１】
【化８】
【００６２】クマリン染料１実施例６ 反応性重合体９の合成 メタクリル酸ステアリル２.１４ｇ、メタクリロイルジ
メチルジオキソラン１.０６ｇ、クマリン染料２（構造
式は下記参照、独国公開特許第４,２１３,３２３号の実
施例３も参照）０.７５ｇ及びアゾビスイソブチロニト
リル４１ｍｇをジメチルアセトアミド１０ｍｌに溶解
し、この混合物に実施例３ａ）からの反応性基３の０.
１４２ｇを添加し、これを７０℃で２０時間撹拌した。
冷却後、ＮＨＳ４９ｍｇ及びジシクロヘキシルカルボジ
イミド８８ｍｇを添加し、混合物を室温で１６時間撹拌
した。この粗溶液をメタノール４００ｍｌに滴下し、得
られた沈殿を濾別し、水洗し、そして乾燥した。1Ｈ-Ｎ
ＭＲは、６.３〜８.３ppmに芳香族、３.５〜４.５ppmに
エステル基に隣るプロトン、及び０.７〜２.２ppmのア
ルキル残基のプロトンの、重合体に典型的なブロードの
共鳴を示した。純粋な染料に標準化した４８０ppmにお
ける吸光度は、重合体中の染料含量１５重量％を示し
た。1Ｎの元素分析はＮ１.５％を与え、実施例３からの
ＮＨＳ-活性化反応性基３の４モル％に相当した。
メチルジオキソラン１.０６ｇ、クマリン染料２（構造
式は下記参照、独国公開特許第４,２１３,３２３号の実
施例３も参照）０.７５ｇ及びアゾビスイソブチロニト
リル４１ｍｇをジメチルアセトアミド１０ｍｌに溶解
し、この混合物に実施例３ａ）からの反応性基３の０.
１４２ｇを添加し、これを７０℃で２０時間撹拌した。
冷却後、ＮＨＳ４９ｍｇ及びジシクロヘキシルカルボジ
イミド８８ｍｇを添加し、混合物を室温で１６時間撹拌
した。この粗溶液をメタノール４００ｍｌに滴下し、得
られた沈殿を濾別し、水洗し、そして乾燥した。1Ｈ-Ｎ
ＭＲは、６.３〜８.３ppmに芳香族、３.５〜４.５ppmに
エステル基に隣るプロトン、及び０.７〜２.２ppmのア
ルキル残基のプロトンの、重合体に典型的なブロードの
共鳴を示した。純粋な染料に標準化した４８０ppmにお
ける吸光度は、重合体中の染料含量１５重量％を示し
た。1Ｎの元素分析はＮ１.５％を与え、実施例３からの
ＮＨＳ-活性化反応性基３の４モル％に相当した。
【００６３】
【化９】
【００６４】クマリン染料２実施例７ ａ）反応性基５の製造 炭酸ナトリウム１ｇ及び実施例５ａ）からの反応性基４
の２ｇを０℃下にアセトニトリル５ｍｌ中に導入し、そ
してアセトニトル５ｍｌ中クロルぎ酸イソブチル０.５
１ｇを滴下した。この混合物を室温で１時間撹拌し、ア
セトニトリルを更に１０ｍｌ添加し、混合物を窒素雰囲
気下に濾過した。濾液を、アセトニトリル５ｍｌ中ヒド
ラジン水和物０.１８ｇの溶液に０℃で滴下し、この混
合物をこの温度で２時間撹拌した。次いで溶液を濾過
し、１Ｎ酸塩でpＨ４に調節し、高真空下に濃縮した。
黄色の粘稠な油が残った。
の２ｇを０℃下にアセトニトリル５ｍｌ中に導入し、そ
してアセトニトル５ｍｌ中クロルぎ酸イソブチル０.５
１ｇを滴下した。この混合物を室温で１時間撹拌し、ア
セトニトリルを更に１０ｍｌ添加し、混合物を窒素雰囲
気下に濾過した。濾液を、アセトニトリル５ｍｌ中ヒド
ラジン水和物０.１８ｇの溶液に０℃で滴下し、この混
合物をこの温度で２時間撹拌した。次いで溶液を濾過
し、１Ｎ酸塩でpＨ４に調節し、高真空下に濃縮した。
黄色の粘稠な油が残った。
【００６５】1Ｈ-ＮＭＲは、５.５５及び６.１ppmにビ
ニルプロトン、３.６５ppmにエチレンオキサイド単位、
４.３ppmにエステル官能基に隣るプロトン及び２.６５p
pmにα-カルボニルプロトンを示した。14Ｎの元素分析
は４.８重量％であり、反応性基４.８８モル％に相当し
た。
ニルプロトン、３.６５ppmにエチレンオキサイド単位、
４.３ppmにエステル官能基に隣るプロトン及び２.６５p
pmにα-カルボニルプロトンを示した。14Ｎの元素分析
は４.８重量％であり、反応性基４.８８モル％に相当し
た。
【００６６】ｂ）反応性重合体１０の合成 ｐ-スチレンスルホン酸ナトリウム０.６５ｇ、実施例７
ａ）からの反応性基０.１ｇ及び実施例５ｂ）からのク
マリン染料１の０.２５ｇをジメチルスルホキシド４ｍ
ｌに溶解し、そしてアゾビスイソブチロニトリル１０ｍ
ｇの添加後に混合物を６５℃で１５時間撹拌した。粘稠
な粗溶液をエタノール６０ｍｌに滴下し、得られた沈殿
を吸引濾別し、高真空下に乾燥した。1Ｈ-ＮＭＲは、
３.６５にエチレンオキサイド、６.５〜８.５ppmの芳香
族及び０.７〜２ppmに脂肪族のプロトンの、重合体に典
型的なブロードの吸収帯を示した。純粋な染料に標準化
した３８５ppmにおけるモル吸光は、重合体中の染料含
量２０重量％を示した。
ａ）からの反応性基０.１ｇ及び実施例５ｂ）からのク
マリン染料１の０.２５ｇをジメチルスルホキシド４ｍ
ｌに溶解し、そしてアゾビスイソブチロニトリル１０ｍ
ｇの添加後に混合物を６５℃で１５時間撹拌した。粘稠
な粗溶液をエタノール６０ｍｌに滴下し、得られた沈殿
を吸引濾別し、高真空下に乾燥した。1Ｈ-ＮＭＲは、
３.６５にエチレンオキサイド、６.５〜８.５ppmの芳香
族及び０.７〜２ppmに脂肪族のプロトンの、重合体に典
型的なブロードの吸収帯を示した。純粋な染料に標準化
した３８５ppmにおけるモル吸光は、重合体中の染料含
量２０重量％を示した。
【００６７】14Ｎの元素分析はＮ１.６４％を与え、実
施例７ａ）からの反応性基４モル％に相当した。
施例７ａ）からの反応性基４モル％に相当した。
【００６８】実施例８ 対照重合体１１の合成 メタクリル酸ステアリル３.３８ｇ及びメタクリロイル
ジメチルジオキソラン２ｇを、アゾビスイソブチロニト
リル１００ｍｇと共にジオキサン２０ｍｌに溶解し、混
合物を７０℃で２時間撹拌した。冷却後に粗溶液をメタ
ノール２００ｍｌに滴下し、得られた沈殿を濾別し、メ
タノールで洗浄し、乾燥した。1Ｈ-ＮＭＲは３.５〜４.
５ppmにエステル官能基に隣るプロトン及び０.７〜２.
２ppmにアルキル残基のプロトンという高分子に典型的
なブロードの共鳴吸収を示した。
ジメチルジオキソラン２ｇを、アゾビスイソブチロニト
リル１００ｍｇと共にジオキサン２０ｍｌに溶解し、混
合物を７０℃で２時間撹拌した。冷却後に粗溶液をメタ
ノール２００ｍｌに滴下し、得られた沈殿を濾別し、メ
タノールで洗浄し、乾燥した。1Ｈ-ＮＭＲは３.５〜４.
５ppmにエステル官能基に隣るプロトン及び０.７〜２.
２ppmにアルキル残基のプロトンという高分子に典型的
なブロードの共鳴吸収を示した。
【００６９】実施例９ β-ガラクトシダーゼの固定化 ガラス又はプラスチック担体を、ＬＢ層（独国公開特許
第３,９３８,５９８号の方法）又はＳＡ層（独国公開特
許第４,２０８,６４５号の方法）で被覆し、そして２つ
の支持体間に０.１ｍｍの空隙ができるように厚さ０.１
ｍｍのテフロンテープを端に貼りつけた同一種の第２の
担体で覆った。この中間の空間をβ-ガラクトシダーゼ
の溶液（１ｍｇ／ｍｌ、炭酸塩緩衝剤１０ミリモル、p
Ｈ８）１ｍｌで満し、次いで室温で１時間処理した。次
いで試料担体から覆いを除去し、担体をＥＰＰＳ緩衝液
（Ｎ-［２-ヒドロキシエチル］ピペラジン-Ｎ′-［３-
プロパンスルホン酸］（ＥＰＰＳ）０.１モル／ｌ、Ｍ
ｇＣｌ2 １ミリモル／ｌ、ＮaＮ3 ０.０５％、牛の血
清アルブミン０.１ｇ／ｌ、pＨ８）で３回洗浄した。こ
のプレートを、ＥＰＰＳ緩衝液中ジメチルアクリジノン
-ガラクトシド（ＤＭＡＧ）の０.５ミリモル／ｌ溶液２
ｍｌと共に１時間３７℃に保温した。次いでこの溶液を
キュベットに移し、未処理のＤＭＡＧ溶液に対して、６
３４ｎｍにおける分光法で測定した。結果を下表に示
す。
第３,９３８,５９８号の方法）又はＳＡ層（独国公開特
許第４,２０８,６４５号の方法）で被覆し、そして２つ
の支持体間に０.１ｍｍの空隙ができるように厚さ０.１
ｍｍのテフロンテープを端に貼りつけた同一種の第２の
担体で覆った。この中間の空間をβ-ガラクトシダーゼ
の溶液（１ｍｇ／ｍｌ、炭酸塩緩衝剤１０ミリモル、p
Ｈ８）１ｍｌで満し、次いで室温で１時間処理した。次
いで試料担体から覆いを除去し、担体をＥＰＰＳ緩衝液
（Ｎ-［２-ヒドロキシエチル］ピペラジン-Ｎ′-［３-
プロパンスルホン酸］（ＥＰＰＳ）０.１モル／ｌ、Ｍ
ｇＣｌ2 １ミリモル／ｌ、ＮaＮ3 ０.０５％、牛の血
清アルブミン０.１ｇ／ｌ、pＨ８）で３回洗浄した。こ
のプレートを、ＥＰＰＳ緩衝液中ジメチルアクリジノン
-ガラクトシド（ＤＭＡＧ）の０.５ミリモル／ｌ溶液２
ｍｌと共に１時間３７℃に保温した。次いでこの溶液を
キュベットに移し、未処理のＤＭＡＧ溶液に対して、６
３４ｎｍにおける分光法で測定した。結果を下表に示
す。
【００７０】 物質 吸光度(６３４nm) 反応性重合体１ １.４６ 反応性重合体２ ０.６４ 反応性重合体２ １.４４ 反応性重合体３ ０.３１７ 反応性重合体４ ０.４３６ 反応性重合体５ ０.４７１ 反応性重合体６ １.５０３ 反応性重合体７ ０.８６１ 反応性重合体８ １.９１２ 反応性重合体９ ２.１６ 対照重合体１１ ０.０６ （反応性基なし） ＡＰＴＳ／ＧＡ ０.３６３（対照試料、通常の活性化） （下記参照） 反応性基（吸着的結合）を有さない試料と比べて、また
常法によりアミノプロピルシラン及びグルタルアルデヒ
ドで処理した試料（ＡＰＴＳ／ＧＡ）と比べて、向上し
た酵素活性が検知できた。
常法によりアミノプロピルシラン及びグルタルアルデヒ
ドで処理した試料（ＡＰＴＳ／ＧＡ）と比べて、向上し
た酵素活性が検知できた。
【００７１】実施例１０ 免疫グロブリンの、蛋白質Ａを介しての固定化 ＬＢ層（物質：反応性重合体９）で被覆したポリカーボ
ネートフイルム［「マクロフオル（Ｍacrofol）」］の
細片を、２つの担体間に０.１ｍｍの空隙が生ずるよう
に厚さ０.１ｍｍのテフロンテープを端に貼りつけたカ
バーグラスで覆った。この空間に蛋白質Ａの溶液（炭酸
塩緩衝液（０.０１モル／ｌ、pＨ８.０）中０.１ｍｇ／
ｌ）０.２５ｍｌを通し、次いでこれを終夜室温に保温
した。次いでカバーグラスを除去し、フイルムをクエン
酸塩緩衝液（クエン酸塩２５ミリモル／ｌ、燐酸カリウ
ム１５ミリモル／ｌ、ＫＣｌ ０.５モル／ｌ、及びＭ
ｇＣｌ2 １ミリモル／ｌ）でゆすいだ。次いでこれを
抗ジゴキシン-ＩｇＧの溶液（クエン酸塩緩衝液（pＨ
６.４）中０.２ｍｇ／ｌ）０.５ｍｌで湿めらせ、再び
覆いをした。室温で１時間後、カバーグラスを再び除去
し、フイルムをクエン酸塩緩衝液（pＨ６.４）２ｍｌで
再び洗浄し、乾燥させ、比較的小さい試験片に切断し
た。これらの試験片を、テトラメチルローダミンで標識
したジギトキシゲニンの溶液（クエン酸塩緩衝液（pＨ
６.４）中１μｇ／ｍｌ）に浸漬し、蛍光を５１５及び
５７７ｎｍ（励起：４０５ｎｍ）で測定した。５７７と
５１５ｎｍの蛍光の比（独国公開特許第３,９３８,５９
８号に記述されている如きフエルスター（Ｆoerster）
エネルギー遷移）を用いることにより、ジギトキシゲニ
ン誘導体の固定化された免疫グロブリンへの結合及びそ
の、クエン酸塩緩衝液（pＨ６.４）での洗浄に対する安
定性を検知することが可能であった（下表参照）。
ネートフイルム［「マクロフオル（Ｍacrofol）」］の
細片を、２つの担体間に０.１ｍｍの空隙が生ずるよう
に厚さ０.１ｍｍのテフロンテープを端に貼りつけたカ
バーグラスで覆った。この空間に蛋白質Ａの溶液（炭酸
塩緩衝液（０.０１モル／ｌ、pＨ８.０）中０.１ｍｇ／
ｌ）０.２５ｍｌを通し、次いでこれを終夜室温に保温
した。次いでカバーグラスを除去し、フイルムをクエン
酸塩緩衝液（クエン酸塩２５ミリモル／ｌ、燐酸カリウ
ム１５ミリモル／ｌ、ＫＣｌ ０.５モル／ｌ、及びＭ
ｇＣｌ2 １ミリモル／ｌ）でゆすいだ。次いでこれを
抗ジゴキシン-ＩｇＧの溶液（クエン酸塩緩衝液（pＨ
６.４）中０.２ｍｇ／ｌ）０.５ｍｌで湿めらせ、再び
覆いをした。室温で１時間後、カバーグラスを再び除去
し、フイルムをクエン酸塩緩衝液（pＨ６.４）２ｍｌで
再び洗浄し、乾燥させ、比較的小さい試験片に切断し
た。これらの試験片を、テトラメチルローダミンで標識
したジギトキシゲニンの溶液（クエン酸塩緩衝液（pＨ
６.４）中１μｇ／ｍｌ）に浸漬し、蛍光を５１５及び
５７７ｎｍ（励起：４０５ｎｍ）で測定した。５７７と
５１５ｎｍの蛍光の比（独国公開特許第３,９３８,５９
８号に記述されている如きフエルスター（Ｆoerster）
エネルギー遷移）を用いることにより、ジギトキシゲニ
ン誘導体の固定化された免疫グロブリンへの結合及びそ
の、クエン酸塩緩衝液（pＨ６.４）での洗浄に対する安
定性を検知することが可能であった（下表参照）。
【００７２】 典型的なＴＲＩＴＣ-ジギトキシゲニンの結合挙動 蛍光比５７７／５１５ ＴＲＩＴＣ-ジギトキシゲニン前 ０.５１ ＴＲＩＴＣ-ジギトキシゲニン後 １.８０ １回洗浄 １.８２ ２回洗浄 １.５０ ３回洗浄 １.７９ 水で再び洗浄 ２.２６実施例１１ ディック（Ｄｉｇ）Ｂの、ヒドラジド化学を用いる固定
化 ＳＡ層（ポリリシン下被覆物上に反応性重合体１０）で
被覆した表面活性化ＰＥＴフイルム［アグフア（Ａgf
a）、「ゴールド」１７５μｍ）の細片を、２つの担体
間に０.１ｍｍの空隙ができるように厚さ０.１ｍｍのテ
フロンテープを端に貼りつけたカバーグラスで覆った。
次いでこの中間の空間に、予じめ過ヨウ素酸塩酸化に供
した抗ジゴキシン-ＩｇＧの溶液（０.０１Ｍ ＮａＩＯ
4 ０.５ｍｌ中ＩｇＧ ４ｍｇ、０.１Ｍ酢酸塩緩衝液
（pＨ５.５）、室温に４５分間保温し、次いでバイオゲ
ルＰ６Ｇで脱塩したもの）１ｍｌを導入した。８℃に終
夜保温した後、フイルム片をクエン酸塩緩衝液（pＨ６.
４、実施例１０を参照）でゆすぎ、乾燥させ、比較的小
片に切断した。ＴＲＩＴＣで標識したジギトキシゲニン
を含有する溶液（ツウィーン（Ｔween）２０の０.００
１容量％添加したクエン酸緩衝液（pＨ６.４）ｍｌ １
μｇ）に浸漬する前後において、これらの試料フイルム
の蛍光を４９５及び５５７で測定した（励起：４０５ｎ
ｍ）。５７７と４９５ｎｍの蛍光比を用いることによ
り、ジギトキシゲニン誘導体の、固定化免疫グロブリン
への結合及びその、クエン酸塩緩衝液（pＨ６.４）／ツ
ウィーン２０での洗浄に対する安定性を検出することが
できた（下表を参照）。
化 ＳＡ層（ポリリシン下被覆物上に反応性重合体１０）で
被覆した表面活性化ＰＥＴフイルム［アグフア（Ａgf
a）、「ゴールド」１７５μｍ）の細片を、２つの担体
間に０.１ｍｍの空隙ができるように厚さ０.１ｍｍのテ
フロンテープを端に貼りつけたカバーグラスで覆った。
次いでこの中間の空間に、予じめ過ヨウ素酸塩酸化に供
した抗ジゴキシン-ＩｇＧの溶液（０.０１Ｍ ＮａＩＯ
4 ０.５ｍｌ中ＩｇＧ ４ｍｇ、０.１Ｍ酢酸塩緩衝液
（pＨ５.５）、室温に４５分間保温し、次いでバイオゲ
ルＰ６Ｇで脱塩したもの）１ｍｌを導入した。８℃に終
夜保温した後、フイルム片をクエン酸塩緩衝液（pＨ６.
４、実施例１０を参照）でゆすぎ、乾燥させ、比較的小
片に切断した。ＴＲＩＴＣで標識したジギトキシゲニン
を含有する溶液（ツウィーン（Ｔween）２０の０.００
１容量％添加したクエン酸緩衝液（pＨ６.４）ｍｌ １
μｇ）に浸漬する前後において、これらの試料フイルム
の蛍光を４９５及び５５７で測定した（励起：４０５ｎ
ｍ）。５７７と４９５ｎｍの蛍光比を用いることによ
り、ジギトキシゲニン誘導体の、固定化免疫グロブリン
への結合及びその、クエン酸塩緩衝液（pＨ６.４）／ツ
ウィーン２０での洗浄に対する安定性を検出することが
できた（下表を参照）。
【００７３】 典型的なＴＲＩＴＣ-ジギトキシゲニンの結合挙動 蛍光比５７７／４９５ ＴＲＩＴＣ-ジギトキシゲニン前 ０.１２ ＴＲＩＴＣ-ジギトキシゲニン後 ０.６２ １回洗浄 ０.５１ ２回洗浄 ０.４９ ３回洗浄 ０.５２ ４回洗浄 ０.４６ 本発明の特徴及び態様は以下の通りである： １．ａ）不活性な固体及び ｂ）ラングミュア-ブロジェット（ＬＢ）法又は自己集
合（ＳＡ）技術に適当な重合体の単分子層、からなり、
但し ｃ）該重合体が、生物起源の分子を結合するのに適当な
活性基を親水性スペーサー基の端に位置して有する共単
量体を、すべての共単量体のモル数に対して０.８〜２
０モル％、好ましくは２.５〜１０モル％で含有し、そ
して ｄ）不活性な担体ａ）及び単分子層ｂ）との間に、ｃ）
による活性基を含まない、ＬＢ法又はＳＡ技術に適当な
重合体の単分子層を０〜２００配置させる、被覆担体。
合（ＳＡ）技術に適当な重合体の単分子層、からなり、
但し ｃ）該重合体が、生物起源の分子を結合するのに適当な
活性基を親水性スペーサー基の端に位置して有する共単
量体を、すべての共単量体のモル数に対して０.８〜２
０モル％、好ましくは２.５〜１０モル％で含有し、そ
して ｄ）不活性な担体ａ）及び単分子層ｂ）との間に、ｃ）
による活性基を含まない、ＬＢ法又はＳＡ技術に適当な
重合体の単分子層を０〜２００配置させる、被覆担体。
【００７４】２．活性基を親水性スペーサー基の端に位
置して有する上記の１ｃ）の共単量体が、式 ＣＨ2＝Ｃ(Ｒ1)−Ｒ2 ［式中、Ｒ1はＨ又はＣＨ3を表わし、そしてＲ2は基
置して有する上記の１ｃ）の共単量体が、式 ＣＨ2＝Ｃ(Ｒ1)−Ｒ2 ［式中、Ｒ1はＨ又はＣＨ3を表わし、そしてＲ2は基
【００７５】
【化１０】
【００７６】又は−ＣＯ−Ｏ−Ｒ4を表わし、但しＲ3は
−(ＣＨ2−)m−ＳＯ2−(ＣＨ2−)n−Ｎ＝Ｃ＝Ｘを表わ
し、なおＸ＝Ｓ又はＯであり、或いはＲ3は−Ｃ(ＣＨ3)
2−ＮＨ−ＣＯ−Ｙ、を表わし、Ｒ4は−(ＣＨ2)m−ＮＨ
−ＣＯ−Ｙ、−[ＣＨ(Ｒ1)−ＣＨ2−Ｏ−]o−ＳＯ2−Ｒ
5又は−[ＣＨ(Ｒ1)−ＣＨ2−Ｏ−]o−ＣＯ−Ｒ6を表わ
し、但しＹは
−(ＣＨ2−)m−ＳＯ2−(ＣＨ2−)n−Ｎ＝Ｃ＝Ｘを表わ
し、なおＸ＝Ｓ又はＯであり、或いはＲ3は−Ｃ(ＣＨ3)
2−ＮＨ−ＣＯ−Ｙ、を表わし、Ｒ4は−(ＣＨ2)m−ＮＨ
−ＣＯ−Ｙ、−[ＣＨ(Ｒ1)−ＣＨ2−Ｏ−]o−ＳＯ2−Ｒ
5又は−[ＣＨ(Ｒ1)−ＣＨ2−Ｏ−]o−ＣＯ−Ｒ6を表わ
し、但しＹは
【００７７】
【化１１】
【００７８】−ＮＨ−ＮＨ2又は−ＮＨ−ＮＨ3 +Ｃｌ-、
【００７９】
【化１２】
【００８０】又は−ＮＨ−(ＣＨ2−)p−Ｏ−ＳＯ2−
Ｒ5、を表わし、Ｒ5はＣＨ3、ＣpＦ2p+1、フエニル又は
トリルを示し、Ｒ6は−(ＣＨ2)m−ＣＯ−Ｙ又はＹを示
し、ｍ及びｎは互いに独立に１〜４の整数であり、そし
てｏ及びｐは互いに独立に１〜９の整数である］の１つ
を有する上記１の担体。
Ｒ5、を表わし、Ｒ5はＣＨ3、ＣpＦ2p+1、フエニル又は
トリルを示し、Ｒ6は−(ＣＨ2)m−ＣＯ−Ｙ又はＹを示
し、ｍ及びｎは互いに独立に１〜４の整数であり、そし
てｏ及びｐは互いに独立に１〜９の整数である］の１つ
を有する上記１の担体。
【００８１】３．上記１ｂ）の、ＬＢ法に用いる場合の
単分子層の重合体が式
単分子層の重合体が式
【００８２】
【化１３】
【００８３】［式中、Ｒ1及びＲ2は上記２に言及した意
味を有し、Ｒ7及びＲ8は互いに独立にＨ又はＣＨ3を示
し、ｑは１２〜２２、好ましくは１６〜１８の整数を表
わし、ｒは０.６〜１.２５、好ましくは０.８〜１.１、
特に好ましくは０.９〜１.０５の値を示し、そしてＳは
０.０２〜０.４、特に０.０５〜０.２の値を示す］の反
復単位をランダムに有するものである上記１の担体。
味を有し、Ｒ7及びＲ8は互いに独立にＨ又はＣＨ3を示
し、ｑは１２〜２２、好ましくは１６〜１８の整数を表
わし、ｒは０.６〜１.２５、好ましくは０.８〜１.１、
特に好ましくは０.９〜１.０５の値を示し、そしてＳは
０.０２〜０.４、特に０.０５〜０.２の値を示す］の反
復単位をランダムに有するものである上記１の担体。
【００８４】４．上記１ｂ）の、ＳＡ技術に用いる場合
の単分子層の重合体が式
の単分子層の重合体が式
【００８５】
【化１４】
【００８６】［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ7及びｓは上記３に
示した意味を有し、ｔは１.６〜２.２５、好ましくは
１.８〜２.１、特に好ましくは１.９〜２.０５の値を示
し、そしてＲ9は−ＳＯ3 -、−Ｃ6Ｈ4−ＳＯ3 -、−ＣＯ
Ｏ-及び−Ｏ−ＰＯ3 --からなる群からのアニオン或いは
示した意味を有し、ｔは１.６〜２.２５、好ましくは
１.８〜２.１、特に好ましくは１.９〜２.０５の値を示
し、そしてＲ9は−ＳＯ3 -、−Ｃ6Ｈ4−ＳＯ3 -、−ＣＯ
Ｏ-及び−Ｏ−ＰＯ3 --からなる群からのアニオン或いは
【００８７】
【化１５】
【００８８】からなる群からのカチオンを示す］の反復
単位をランダムに有するものである上記１の担体。
単位をランダムに有するものである上記１の担体。
【００８９】５．親水性スペーサー基が、Ｃ原子及びヘ
テロ原子の双方を数えて５〜３０、好ましくは７〜３
０、特に好ましくは１３〜３０の原子数の鎖長を有する
上記１の担体。
テロ原子の双方を数えて５〜３０、好ましくは７〜３
０、特に好ましくは１３〜３０の原子数の鎖長を有する
上記１の担体。
【００９０】６．親水性スペーサー基が５〜９の単位数
を有するオリゴエチレンオキシド基又はオリゴプロピレ
ンオキシド基である上記１の担体。
を有するオリゴエチレンオキシド基又はオリゴプロピレ
ンオキシド基である上記１の担体。
【００９１】７．親水性スペーサー基の端に位置する活
性基がヒドラジド、Ｎ-ヒドロキシサクシンイミド、ニ
トロフエニルエステル、イソチオシアネート、ヨードシ
アネート、ヨードアセトアミド、マレイミド、又はメチ
ルスルホネート、好ましくはヒドラジドである上記２の
担体。
性基がヒドラジド、Ｎ-ヒドロキシサクシンイミド、ニ
トロフエニルエステル、イソチオシアネート、ヨードシ
アネート、ヨードアセトアミド、マレイミド、又はメチ
ルスルホネート、好ましくはヒドラジドである上記２の
担体。
【００９２】８．不活性な担体をラングミュア-ブロジ
ェット（ＬＢ）法に従って又は自己集合（ＳＡ）技術に
従って、これらの技術に適当な重合体の単分子層で被覆
する、但し該重合体が、生物起源の分子を結合するのに
適当な活性基を親水性スペーサー基の端に位置して有す
る共単量体を、すべての共単量体のモル数に対して０.
８〜２０モル％で含有し、そして該不活性な担体及び該
単分子層の間に、該活性基を有する共単量体を含まな
い、ＬＢ法又はＳＡ技術に適当な重合体の単分子層を０
〜２００配置させる、被覆担体の製造法。
ェット（ＬＢ）法に従って又は自己集合（ＳＡ）技術に
従って、これらの技術に適当な重合体の単分子層で被覆
する、但し該重合体が、生物起源の分子を結合するのに
適当な活性基を親水性スペーサー基の端に位置して有す
る共単量体を、すべての共単量体のモル数に対して０.
８〜２０モル％で含有し、そして該不活性な担体及び該
単分子層の間に、該活性基を有する共単量体を含まな
い、ＬＢ法又はＳＡ技術に適当な重合体の単分子層を０
〜２００配置させる、被覆担体の製造法。
【００９３】９．上記１の被覆担体の、生物起源の分子
を結合させる（固定化する）ための使用法。
を結合させる（固定化する）ための使用法。
【００９４】１０．固体の表面に最初に蛋白質Ａ又は蛋
白質Ｇ、次いで関連する免疫グロブリンを結合させる上
記９の使用法。
白質Ｇ、次いで関連する免疫グロブリンを結合させる上
記９の使用法。
Claims (3)
- 【請求項１】 ａ）不活性な固体及び ｂ）ラングミュア-ブロジェット（ＬＢ）法又は自己集
合（ＳＡ）技術に適当な重合体の単分子層、からなり、
但し ｃ）該重合体が、生物起源の分子を結合するのに適当な
活性基を親水性スペーサー基の端に位置して有する共単
量体を、すべての共単量体のモル数に対して０.８〜２
０モル％、好ましくは２.５〜１０モル％で含有し、そ
して ｄ）不活性な担体ａ）及び単分子層ｂ）との間に、ｃ）
による活性基を含まない、ＬＢ法又はＳＡ技術に適当な
重合体の単分子層を０〜２００配置させる、被覆担体。 - 【請求項２】 不活性な担体をラングミュア-ブロジェ
ット（ＬＢ）法に従って又は自己集合（ＳＡ）技術に従
って、これらの技術に適当な重合体の単分子層で被覆す
る、但し該重合体が、生物起源の分子を結合するのに適
当な活性基を親水性スペーサー基の端に位置して有する
共単量体を、すべての共単量体のモル数に対して０.８
〜２０モル％で含有し、そして該不活性な担体及び該単
分子層の間に、該活性基を有する共単量体を含まない、
ＬＢ法又はＳＡ技術に適当な重合体の単分子層を０〜２
００配置させる、被覆担体の製造法。 - 【請求項３】 請求項１の被覆担体の、生物起源の分子
を結合させる（固定化する）ための使用法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4319037.5 | 1993-06-08 | ||
| DE4319037A DE4319037A1 (de) | 1993-06-08 | 1993-06-08 | Beschichtete Träger, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung zur Immobilisierung von Biomolekülen an Oberlfächen von Festkörpern |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0727767A true JPH0727767A (ja) | 1995-01-31 |
Family
ID=6489917
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP6144095A Pending JPH0727767A (ja) | 1993-06-08 | 1994-06-03 | 被覆担体、その製法、及びその生体分子の固体表面への固定化に対する使用法 |
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|---|---|
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| JP (1) | JPH0727767A (ja) |
| DE (1) | DE4319037A1 (ja) |
Cited By (4)
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|---|---|---|---|---|
| WO2004025297A1 (ja) * | 2002-07-30 | 2004-03-25 | Reverse Proteomics Research Institute Co., Ltd. | 固相担体上における分子間の非特異相互作用の抑制方法 |
| WO2005111630A1 (ja) * | 2004-05-14 | 2005-11-24 | Tohoku Techno Arch Co., Ltd. | タンパク質の固定方法とタンパク質チップならびに細胞の固定方法および細胞チップ |
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| DE4121426A1 (de) * | 1991-06-28 | 1993-01-14 | Basf Ag | Chemischer sensor |
-
1993
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-
1994
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- 1994-06-03 JP JP6144095A patent/JPH0727767A/ja active Pending
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004025297A1 (ja) * | 2002-07-30 | 2004-03-25 | Reverse Proteomics Research Institute Co., Ltd. | 固相担体上における分子間の非特異相互作用の抑制方法 |
| JPWO2004025297A1 (ja) * | 2002-07-30 | 2006-01-12 | アステラス製薬株式会社 | 固相担体上における分子間の非特異相互作用の抑制方法 |
| EP2157429A2 (en) * | 2002-07-30 | 2010-02-24 | Reverse Proteomics Research Institute Co., Ltd | Method of inhibiting nonspecific interaction between molecules on solid phase support |
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| US7919653B2 (en) | 2002-07-30 | 2011-04-05 | Reverse Proteomics Research Institute Co., Ltd. | Method of inhibiting nonspecific interaction between molecules on solid phase support |
| EP2157429A3 (en) * | 2002-07-30 | 2011-12-28 | Reverse Proteomics Research Institute Co., Ltd | Method of inhibiting nonspecific interaction between molecules on solid phase support |
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