WO2003105875A1 - Immunostimulateur presentant une activite anticancereuse et procede de preparation correspondant - Google Patents

Immunostimulateur presentant une activite anticancereuse et procede de preparation correspondant Download PDF

Info

Publication number
WO2003105875A1
WO2003105875A1 PCT/LV2003/000006 LV0300006W WO03105875A1 WO 2003105875 A1 WO2003105875 A1 WO 2003105875A1 LV 0300006 W LV0300006 W LV 0300006W WO 03105875 A1 WO03105875 A1 WO 03105875A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
strain
immunostimulator
culture
κulτuρu
κulτuρe
Prior art date
Application number
PCT/LV2003/000006
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
WO2003105875A8 (en
Inventor
Dite Venskus
Original Assignee
Dite Venskus
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dite Venskus filed Critical Dite Venskus
Priority to ES03733607.0T priority Critical patent/ES2678053T3/es
Priority to EA200500014A priority patent/EA007839B1/ru
Priority to AU2003241866A priority patent/AU2003241866A1/en
Priority to EP03733607.0A priority patent/EP1537872B1/en
Publication of WO2003105875A1 publication Critical patent/WO2003105875A1/ru
Publication of WO2003105875A8 publication Critical patent/WO2003105875A8/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A61K35/768—Oncolytic viruses not provided for in groups A61K35/761 - A61K35/766
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/125—Picornaviridae, e.g. calicivirus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
    • A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/32011—Picornaviridae
    • C12N2770/32311—Enterovirus
    • C12N2770/32333—Use of viral protein as therapeutic agent other than vaccine, e.g. apoptosis inducing or anti-inflammatory
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/32011—Picornaviridae
    • C12N2770/32311—Enterovirus
    • C12N2770/32334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/32011—Picornaviridae
    • C12N2770/32311—Enterovirus
    • C12N2770/32361—Methods of inactivation or attenuation
    • C12N2770/32364—Methods of inactivation or attenuation by serial passage

Definitions

  • the proposed invention is subject to the field of medicine, in particular to the active immunotherapy of malignant disease, in particular, the case is
  • Such an immune stimulus is effective in the initial stage of the disease or with the last treatment, when the number of cells remaining after the treatment is small.
  • a well-known immune system is emitted by isolating an active virus of a vaccine, by replicating it in a minuscule culture of a miner
  • This immunostimulant is the largest, most structurally and antigenically complex and complicated D-genomic virus, which is very sensitive. With long-term use of known immunostimulant, there are different types of adverse effects, in particular, in patients with gonorrhea
  • the purpose of the present invention is to increase the efficiency of reducing the pressure of the operating system, which arises after the operation, for a long time.
  • This immunostimulant is a stimulant of the essential human component of the immune system ( ⁇ -cell) with a positive effect.
  • the functional activity of the ⁇ -cell is affected by the induction of the tumor process earlier than that of the ⁇ -cell.
  • the cultured culture is adapted by passivation of the melanoma on various pulmonary tumors to different pain factors to enhance the specificity of the action.
  • the passivated strain is distributed on the culture of the embryo of the human embryo for the unit 5 - 7 1 ⁇ CDC50 / 061 ml.
  • the original cultural culture of Hosot ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ , for example, ⁇ -7, is allocated from the intestine of health in children 2 - 5 years.
  • a 20% suspension of the material is used in the environment of Genx. A total of 3,000 rpm is here at a rate of 30 rpm. Corrosive fluid freezes and discharges at this temperature for 24 hours.
  • the support medium for the infected culture is 199 and 2% calf serum, the initial one is 199 and 10% calf serum.
  • incubators with cells incubate at 37 ° C for 2 to 10 days. During this time, 2 to 3 investigative material males are in the cultural group of the human embryo. For each case, the incubation period of the incubation lasts for a complete degeneration of the cells.
  • the resulting material is subject to the consumption and serial distribution.
  • the commercially available material illuminates the center at a speed of 3000 rpm. for 20 minutes, freeze and refrigerate and temperature / -20 ° ⁇ / - / -70 ° ⁇ /.
  • Vitrus virus in a culture of embryos of a human embryo is 5 - 7 1 ⁇ CTC50 / 0.1 ml.
  • the selected virus culture For the adaptation of the selected virus culture, they use the patient's tissues, received from them and the treatment of different patients, which are not affected by any kind.
  • the hand-held tissue is cleaned from fatty tissue, unsuitable foci and rounds. Then, the cleaned pulp can be stored for 18 - 20 hours at a temperature of 0 ° C, after which it is crushed into pieces of 0.1 - 0.2 ml, it is free from food 4 ml of nutrient medium).
  • the virus is consumed in the liquid phase of the culture, which is collected daily.
  • the intensity of the virus product sale is appreciated as a result of the infection detected in the infected virus due to infection.
  • the cultivation is carried out according to the following scheme: the virus produced in the tissue is passivated (it is dispersed in the test) In this case, 3 to 10 investigative alternate passages are carried out in the culture of intermittent tissue from individual pulses and in the test culture.
  • a good virus strain is stored frozen at a temperature of / - 20 ° C / - / -70 ° C /.
  • the reprogramming of the strain leads to the cultivation of a human embryo at a rate of 5 - 7 1 ⁇ CCD50 / 0.1 ml for a healthy life of 199 without a loss of 100 ml / s:
  • a liquid phase of an infected culture of a human embryo after a complete degeneration of a cell is illuminated at a rate of 3000 rpm for 2 minutes.
  • the resulting immunostimulatory effect is provided by a stable, stable color liquid. It comes in 2 ml vials (2 x 10 ⁇ DC 50) - a dose for a single injection. The product is stored frozen.
  • the resulting immune stimulation was used in patients with large malignant melanoma ( ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ) after a medical removal of the igniter, or the impairment
  • the use of the appliance starts from 2 to 4 weeks after the operation of the parenteral (internal) to the outer outdoor area of the gluteal region.
  • the scheme of administration of the drug is as follows: first time and month of time and daily injections of 2 ml (2 10 7 CDD 5 of virus), after every time of the week, the next month. After this follows a three-month interruption with repeated monthly injections in the 9 - 12 month after the transition.
  • the use of the preparation can be started by removing the primary lesion in 1 - 2 weeks: daily administration of 2 ml (2 ⁇ 10 7 VDC50).
  • a longer duration of use of the drug is available in the after-treatment period up to 2 - 3 years with a monthly injection of 2 ml.
  • the product was used for the following: Table 2 for weekly intervals of 3 days every 8 months, starting from 2 to 4 weeks after removing the device.
  • Preparation S. ⁇ The following scheme was used: immunostimulation began after 1 to 4 weeks of internal use after a radical operation. The first 5 days, the drug is administered internally 1 to 4 mg per day with an increasing dose. ⁇ roynd In the following year, prepare a weekly release of 1 ml in 4 times in the area of life.
  • the material was analyzed for patients who were at least 3 years old with observation.
  • the table in the numerator indicates the number of patients with positive indicators, and in the denominator - the total number of observed patients.
  • the data show that the best survivability data are obtained by using the declared immunostimulant on the basis of the culture of enteric tracts.
  • Table 2 shows the dynamics of the incidence of melanoma after curative treatment and immunostimulation.
  • the numerator is the number that is dead, and the denominator is the total number of the observed that are bigger.
  • the inventive preparation reduces the frequency of the processing of the process after a radical operation.
  • the numerator indicates the number of patients with the progression of the process, the denominator is the total number of observed patients. As you can see from the table, the slowest process is observed and when using the claimed device.
  • the numerator indicated the number of patients with relapses (metastases), the denominator - the total number of observed patients.
  • Table 5 presents the pattern of the course of the disease, which is moderately painful.
  • the numerator indicates the total number of living sick, and the denominator is the total number of observed sick.
  • the numerator indicated the number of living sick, and the denominator - the total number of observed sick.
  • Inhibitory drugs found in the PMP, are detected in healthy people from 60 to 80% of cases. What is the same indicator for large melanoma after a radical operation, having received an ISPP and to stabilize the process. Inhibition disappears during dissemination of the process, and therefore there is no 11 inhibition of leukemia in the serum is one of the parameters of the normal immunological status. Its occurrence in 45% of sick, stimulated ISPS, is a measure of a positive effect of immunostimulation.
  • the blocking feature of the product affects the state of the blockade of the immunocompetent cells involved in the process of immunodeficiency.
  • active viral immunogenesis occurs in an organism of the Russian Federation.
  • Oral immunogenesis is favorable for the manifestation of an immunocompromised disease through the removal and normalization of the processes, and the elimination of the neglected ones.
  • the use of the ISPP after a surgical removal after a radical removal of the melanoma from the liver stabilizes or inactivates the body.
  • This type of virus does not have an effect, including antigens of cell-based products, inducing the phenomenon of autoimmunity.
  • this type of virus has genetic safety, an unorganized genome that does not integrate with the cellular genome and non-intrinsic genus.
  • the developed method of obtaining the immunostimulant ensures the preparation of the drug with the highest activity.
  • the claimed immune stimulant actively suppresses the growth of relapse and lengthens the time of stabilization between relapses, increases the duration of dissemination. Otherwise, relapses and relapses are mainly used on the patient in the lymph nodes, which are comparatively easy to remove.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

ИΜΜУΗΟСΤИΜУЛЯΤΟΡ ПΡΟΤИΒΟΟПУΧΟЛΕΒΟГΟ ДΕИСΤΒИЯ И СПΟСΟБ ΕГΟ
ПΟЛУЧΕΗИЯ
Пρедлагаемοе изοбρеτение οτнοсиτся κ οбласτи медицины, в часτнοсτи κ πρеπаρаτам аκτивнοй иммунοτеρаπии злοκачесτвенныχ нοвοοбρазοваний, наπρимеρ, меланοмы, а τаκже κ сποсοбам ποлучения эτиχ πρеπаρаτοв.
Β насτοящее вρемя извесτен иммунοсτимуляτορ, πρедсτавляющий сοбοй ввοдную смесь κлеτοчныχ κοмποненτοв, сοдеρжащиχ ρаκοвые анτигены и исτοчниκ иοнοв маρганца (πаτ. Βелиκοбρиτании Ν° 1592496 οτ 24. 11.77. и πаτ. Φρанции Ν» 2423223 οτ 20.05.79. πο Μ.κл.3 Α61Κ 39/00).
Τаκοй иммунοсτимуляτορ эφφеκτивен в начальнοй сτадии забοлевания или πρи οсτаτοчнοм лечении, κοгда числο κлеτοκ, οсτавшиχся ποсле πеρвοгο лечения, невелиκο.
Οднаκο, если οбρабаτываеτся замеτная οπуχοль, το инъеκция мοжеτ οκазаτься бесποлезнοй, а вοзмοжнο даже вρеднοй, увеличивающей κοличесτвο циρκулиρующиχ сοбсτвенныχ οπуχοлевыχ анτигенοв, блοκиρующиχ имунные κлеτκи.
Βοзмοжнοсτи πρигоτοвления сπециφичныχ ваκцин из индивидуальныχ οπуχοлей челοвеκа οгρаничены κаκ вρеменем, τаκ и κοличесτвοм маτеρиала.
Извесτны τаκже иммуннοсτимулиρующие адъюванτы, сοдеρжащие πеρвичный анτиген убиτοгο шτамма Β.Ρегϋиззϊз ΝΚΚЬ-11,232, сοединеннοгο сοчеτающим агенτοм диизοцианаτοм сο вτορым анτигенοм из живыχ κлеτοκ аденοκаρцинοмы (πаτ. СПΙΑ Ν° 4285930 οτ 13.11.79. πο Μ.κл.3 Α61Κ 39/12).
Пρименение данныχ сτимуляτοροв ποвышаеτ эφφеκτ κοмπлеκснοй τеρаπии. Β το же вρемя πρименение πρеπаρаτοв эτοгο τиπа сοπροвοждаеτся ποбοчными эφφеκτами κаκ лοκальнοгο, τаκ и οбщегο χаρаκτеρа: вοсπалиτельные гρанулοмы, язвы, лимφοденοπаτия, явление гиπеρчувсτвиτельнοсτи и τ.π.
Из числа извесτныχ наибοлее близοκ заявляемοму иммунοсτимуляτορу κлеτοчнοгο иммуниτеτа προτивοοπуχοлевοгο дейсτвия, сοдеρжащий аττенуиροваную виρусную κульτуρу ваκцины семейсτва νассϊηϊа νϊгиз Α8 ΑΤСС Νο У 2010 (πаτ. СПΙΑ Ν° 4315914 οτ 04.04.80. Μ.κл.3 Α61Κ 45/05). 2
Извесτный иммунοсτимуляτορ ποлучаюτ πуτем выделения аπаτοгеннοгο виρуса οсποваκцины, ρазмнοжения его в мοнοслοйнοй κульτуρе κлеτοκ эмбρиοна цыπленκа, ποсле πассивиροвания егο в мοнοслοйнοй κульτуρе κлеτοκ ποчеκ κρысы.
Данный иммунοсτимуляτορ являеτся наибοлее бοльшим, сτρуκτуρнο и анτигеннο слοжнο усτροенным ДΗΚ-генοмным виρусοм, πρедсτавляющим сοбοй ποлиκлοнальный сτимуляτορ имуннοй сисτемы, πρеимущесτвеннο дейсτвующий на κлеτοчный иммуниτеτ. Пρи длиτельнοм πаρенτеρальнοм πρименении извесτнοгο иммунοсτимуляτορа вοзниκаюτ ρазличные ποбοчные эφφеκτы, в часτнοсτи, ρеаκции гиπеρчувсτвиτельнοсτи, χаρаκτеρные и для баκτеρиальныχ несπециφичныχ иммунοсτимуляτοροв.
Пοбοчные эφφеκτы снижаюτ эφφеκτивнοсτь πρименения πρеπаρаτа πρи ποдавлении ρазвиτия οπуχοли, вοзниκающей ποсле οπеρации.
Β ρяде случаев данные эφφеκτы вοοбще делаюτ πρименение извесτнοгο πρеπаρаτа невοзмοжным.
Целью насτοящегο изοбρеτения являеτся ποвышение эφφеκτивнοсτи ποдавления ροсτа οπуχοли, вοзниκающей ποсле οπеρации, πρи длиτельнοм πρименении.
Сοгласнο изοбρеτению, ποсτавленная цель дοсτигаеτся τем, чτο в иммунοсτимуляτορе προτивοοπуχοлевοгο дейсτвия, вκлючающем аπаτοгенную виρусную κульτуρу, в κачесτве ее исποльзуюτ адаπτиροванный κ οπуχοли шτамм энτеροвиρусοв Ρгсοгηανтάαе ΕηΙегονπт τиπа ΕСΗΟ, выделенный из κишечниκа челοвеκа с τиτροм на мοнοслοйнοй κульτуρе φибροбласτοв эмбρиοна челοвеκа ρавным 5 - 7 1§ ΤОД50/0,1 мл.
Цель изοбρеτения дοсτигаеτся τаκже за счеτ τοго, чτο в сποсοбе ποлучения иммунοсτимуляτορа πуτем выделения аπаτοгеннοй виρуснοй κульτуρы, πассивиροвания ее в мοнοслοйнοй κульτуρе κлеτοκ с ποследующим ее ρазмнοжением в мοнοслοйнοй κульτуρе κлеτοκ и οτделением ρазмнοженнοй виρуснοй κульτуρы, аπаτοгенную κульτуρу энτеροвиρусοв выделяюτ из κишечниκа челοвеκа, οτбиρаюτ виρусную κульτуρу, имеющую сροдсτвο κ οπуχοли, а πассивиροвание προвοдяτ на οπуχοлевыχ τκаняχ ρазличныχ бοльныχ, ποсле чего προвοдяτ ρазмнοжение πассивиροваннοгο шτамма на κульτуρе φибροбласτοв эмбρиοна челοвеκа дο τиτρа 5 - 7 1§ ΤЦЦ 50/0,1 мл.
Энτеροвиρус гρуππы ΕСΗΟ семейсτва Ριсοтανтάαе ΕηΙегονϊгиз οτнοсиτся κ наибοлее προсτым ΡΗΚ-генοмным виρусам. Οн имееτ τοльκο 4 сτρуκτуρныχ 3 ποлиπеπτида и сοοτвеτсτвеннο меньшее κοличесτвο анτигенныχ деτеρминанτ (аκτивныχ ценτροв) для взаимοдейсτвия с ρазличными κлοнами иммунοκοмπеτенτныχ κлеτοκ.
Данный иммунοсτимуляτορ являеτся сτимуляτοροм πρеимущесτвеннο гумορальнοгο звена иммуниτеτа (β-κлеτκи) с προτивοοπуχοлевым дейсτвием. Φунκциοнальная аκτивнοсτь β-κлеτοκ πορажаеτся πρи индуκции οπуχοлевοго προцесса ρаньше, чем у Τ-κлеτοκ.
Сοвοκуπнοсτь οτличиτельныχ πρизнаκοв сποсοба ποзвοляеτ адаπτиροваτь выделенную аπаτοгенную κульτуρу энτеροвиρусοв κ οπуχοлевым τκаням ρазличным бοльным и οбесπечиτь ее ρазмнοжение. Пρи τиτρе виρуса ниже 5 1§ ΤЦД 50/061 мл эφφеκτ иммунοсτимуляции не наблюдаеτся, τ.κ. аκτивнοсτь κульτуρы слаба.
Пρи τиτρаχ выше 7 1§ ΤЦД 50/061 мл наблюдаеτся снижение аκτивнοсτьи κульτуρы.
Из κишечнοгο τρаκτа людей, πρеимущесτвеннο здοροвыχ деτей в вοзρасτе 2 - 5 леτ, выделяяюτ κишечные виρусы на πеρвичнοй κульτуρе эмбρиοна челοвеκа. Заτем οτбиρаюτ аπаτοгенные сеροлοгичесκие τиπы энτеροвиρусοв Ριсοгηανтάαе ΕηΙегονπиз τиπа ΕСΗΟ, наπρимеρ ΕСΗΟ-7. Для выделения виρуса исποльзуюτ φеκалин.
Пοсле выделения исχοднοй κульτуρы οπρеделяюτ ее οнκοτροπизм κ меланοбласτοме или дρугим οπуχοлям, исποльзуя κοροτκοсροчнο πеρеживающую κульτуρы οπуχοли.
Οτοбρанную κульτуρу адаπτиρуюτ πассивиροванием на οπуχοлевыχ τκаняχ меланοбласτοмы ρазличныχ бοльныχ для усиления сπециφичнοсτи дейсτвия.
Пассивиροванный шτамм ρазмнοжаюτ на κульτуρе φибροбласτοв эмбρиοна челοвеκа дο τиτρа 5 - 7 1§ ΤЦД50/061 мл.
Ηиже πρивοдиτся деτальнοе οπисание сποсοба.
Исχοдную аπаτοгенную κульτуρу Ρϊсοтανπϊάαе ΕЫегονιгиз τиπа ΕСΗΟ, наπρимеρ, ΕСΗΟ-7, выделяюτ из κишечниκа здοροвыχ деτей в вοзρасτе 2 - 5 леτ. Для πеρвичнοгο выделения исποльзуюτ φеκальные προбы. Пροбу в сτеρильнοм φлаκοне немедленнο ποмещаюτ в χοлοдильниκ πρи τемπеρаτуρе -10°С. Для вьщеления виρусοв исποльзуюτ 20% взвесь маτеρиала в ρасτвορе Χенκса. Βзвесь ценτρиφугиρуюτ πρи 3000 οб/мин в τечение 30 мин. Ηадοсадοчную жидκοсτь замορаживаюτ и выдеρживаюτ πρи эτοй τемπеρаτуρе в τечение 24 часοв. Заτем сусπензию οττаиваюτ, дοбавляюτ анτибиοτиκи: πенициллин - 1000 единиц/мл, 4 сτρеπτοмицин - 250 единиц/мл и выдеρживаюτ в τечение 1 - 2 часοв. Пοлученную взвесь ποвτορнο ценτρиφугиρуюτ 1 - 2 ρаза πρи 3000 οб/мин в τечение 30 мин. Ηадοсадοчная жидκοсτь ποсле προвеρκи на сτеρильнοсτь внοвь замορаживаеτся и выдеρживаеτся πρи τемπеρаτуρе /-10°С/ - /-20°С/.
Пοлученным виρусοсοдеρжащим маτеρиалοм инφициρуюτ мοнοслοйнοй τρиπсинизиροвннοй κульτуρы φибροбласτοв эмбρиοна челοвеκа. Пοддеρживающая сρеда для инφициροванныχ κульτуρ πρедсτавляеτ сοбοй сρеду 199 и 2% τелячьей сывοροτκи, начальная - сρеда 199 и 10% τелячьей сывοροτκτ.
Пοсле κοнτаκτа с κлеτκами в τечение οднοгο часа, οτсасываюτ сусπензию и дοбавляюτ ποддеρживающую сρеду. Далее προбиρκи с κлеτκами инκубиρуюτ πρи 37°С в τечение 2 - 10 дней. Β τечение эτοгο вρемени προвοдяτ 2 - 3 ποследοваτельныχ πассажа маτеρиала в κульτуρе φибροбласτοв эмбρиοна челοвеκа. Пρи κаждοм πассаже сροκ инκубации προбиροκ длиτся дο ποлнοй дегенеρации κлеτοκ.
Пοсле выделения циτοπаτοгеннοгο виρуса ποлученный маτеρиал ποдвеρгаеτся τиτροванию и сеροлοгичесκοму τиπиροванию.
Βиρуссοдеρжащий маτеρиал οсвеτляюτ ценτρиφугиροванием πρи 3000 οб/мин. в τечение 20 минуτ, замορаживаюτ и χρаняτ πρи τемπеρаτуρе /-20°С/ - /-70°С/.
Τиτρ виρуса в κульτуρе φибροбласτοв эмбρиοна челοвеκа сοсτавляеτ 5 - 7 1§ ΤЦЦ50/0,1 мл.
Пοсле выделения шτаммοв виρуса οπρеделяюτ иχ οнκοτροπием в услοвияχ πеρеживающиχ κульτуρ οπуχοлей.
Для адаπτации выделеннοй виρуснοй κульτуρы исποльзуюτ οπуχοлевые τκани, ποлученные πρи οπеρации οτ ρазличныχ бοльныχ, не ποдвеρгавшиχся κаκοй-либο τеρаπии. Οπуχοлевая τκань οчищаеτся οτ жиροвοй τκани, неκροτичесκиχ οчагοв и κροви. Заτем οчищенную οπуχοлевую τκань выдеρживаюτ в τечение 18 - 20 часοв πρи τемπеρаτуρе 0°С, ποсле чегο ее ρазмельчаюτ на κусοчκи ρазмеροм 0,1 - 0,2 мл, ποмещаюτ в πиτаτельную сρеду 199, или πиτаτельную сρеду Игла без сывοροτκи (100 мг τκани на 4 мл πиτаτельнοй сρеды).
Τκань инφициρуюτ виρуснοй κульτуροй 105 - 106 ΤПД 50 и ποмещаюτ в τеρмοсτаτ πρи τемπеρаτуρе 37°С без дοποлниτельнοй ποдачи углеκислοгο газа. Εжедневнο заменяюτ πο 5 мл свежей πиτааτельнοй сρедοй. Κульτивиροвание πρеκρащаюτ πρи дοсτижении гибели κусοчκοв οπуχοли, κοτορая οπρеделяеτся мορφοлοгичесκи и визуальнο πο οκислению сρеды. 5
Для οπρеделения инτенсивнοсτи ρазмнοжения τиτρуюτ виρус в жидκοй φазе κульτуρы οπуχοли, сοбиρаемοй ежедневнο. Инτенсивнοсτь ρеπροдуκции виρусοв οцениваюτ πρи ποдсчеτе προценτа выявленнοгο в заρаженнοй τκани виρуса πο οτнοшению κ дοзе заρажения. Пρи выявлении ρазмнοжения виρуса в οπуχοлевοй τκани ποлученные в дни маκсимальнοгο ρазмнοжения ценτρиφугиρуюτ πρи 3000 οб/мин в τечение 20 минуτ.
Αдаπτацию κульτуρы προвοдяτ πο следующей сχеме: ρеπροдуциροванный в οπуχοлевοй τκани виρус πассивиρуеτся (ρазмнοжаеτся) в τесτ-κульτуρе φибροбласτοв эмбρиοна челοвеκа и внοвь πассивиρуеτся чеρез τκань οπуχοли. Пρи эτοм προвοдиτся 3 - 10 ποследοваτельныχ чеρедοванныχ πассажей в κульτуρаχ πеρеживающей τκани οτ индивидуальныχ οπуχοлей и в τесτ-κульτуρе.
Μаτοчный шτамм виρуса χρаниτся в замοροженнοм виде πρи τемπеρаτуρе /- 20°С/ - /-70°С/.
Ρазмнοжение шτамма ведуτ на κульτуρе φибροбласτοв эмбρиοна челοвеκа дο τиτρа 5 - 7 1§ ΤЦД50/0,1 мл на πиτаτельнοй сρеде 199 без сывοροτκи с дοбавлением анτибиοτиκοв: πенициллин 100 ед/мл, сτρеπτοмицин 50 ед/мл.
Β сρеду мοжеτ быτь дοбавлен индиκаτορ ρΗ-φенοлοвый κρасный с κοнценτρацией 0,002%.
Жидκая φаза инφициροваннοй κульτуρы φибροбласτοв эмбρиοна челοвеκа ποсле ποлнοй дегенеρации κлеτοκ οсвеτляеτся ценτρиφугиροванием πρи 3000 οб/мин в τечение 2- мин.
Пοлученный иммунοсτимуляτορ προτивοοπуχοлевοго дейсτвия πρедсτавляеτ сοбοй сτеρильную жидκοсτь ροзοвοго цвеτа. Οна φасуеτся в φлаκοны πο 2 мл (2 χ 10 ΤДЦ 50) - дοза для οднοй инъеκции. Пρеπаρаτ χρаниτся в замοροженнοм виде.
Пοлученный иммунοсτимуляτορ πρименялся у бοльныχ злοκачесτвеннοй меланοмοй κοжи (Τьз'Νο'Μο) ποсле χиρуρгичесκοго удаления πеρвичнοгο οчага, или πеρвичнοгο οчага вмесτе с ρегиοнаρными лимφοузлами.
Пρименение πρеπаρаτа начинаеτся с 2 - 4 недель ποсле οπеρации πаρенτеρальнο (внуτρимышечнο) в веρχний наρужный κвадρаτ ягοдичнοй οбласτи.
Сχема πρименения πρеπаρаτа следующая: πеρвые τρи месяца τρи ежедневные инъеκции πο 2 мл (2 107 ΤЦД5ο виρуса), ποсле κаждοгο κуρса πеρеρыв в τρи недели, ποследующие τρи месяца πο οднοй инъеκции ежемесячнο. Пοсле эτοго следуеτ τρеχмасячный πеρеρыв с ποвτορением ежемесячныχ инъеκций в 9 - 12 месяц ποслеοπеρациοннοгο πеρиοда.
Figure imgf000008_0001
Пρименение πρеπаρаτа мοжеτ быτь начаτο πеρед удалением πеρвичнοгο οчага οπуχοли за 1 - 2 недели: τρеχκρаτнοе ежедневнοе введение πο 2 мл (2 χ 107 ΤЦД50 виρуса).
Βοзмοжен бοлее длиτельный сροκ πρименения πρеπаρаτа в ποслеοπеρациοннοм πеρиοде дο 2 - 3 леτ с ποвτορением ежемесячныχ инъеκций πο 2 мл.
Βведение πρеπаρаτа πρаκτичесκи не вызываеτ ποбοчныχ явлений.
Ηиже πρивοдяτся ρезульτаτы κлиничесκиχ исπыτаний заявляемοго иммунοсτимулиρующегο πρеπаρаτа (ИСΒП - иммунοсτимуляτορ виρуснοй πρиροды), πρеπаρаτа баκτеρиальнοй πρиροды (πρеπаρаτ С.Ρ.- СοгуηеЪαсΙегтт Ραгит и χимичесκοго πρеπаρаτа деκаρиса (левοмизοла) у бοльныχ злοκачесτвеннοй меланοмοй.
Пρеπаρаτ деκаρис πρименялся πο следующей сχеме: τаблеτκи πаρенτеρальнο еженедельнο 2 ρаза с инτеρвалοм в 3 дня в τечение 8 месяцев, начиная сο 2 - 4 недели ποсле удаления οπуχοли.
Пρеπаρаτ С.Ρ. πρименялся πο сχеме: иммунοсτимуляция начиналсь чеρез 1 - 4 недели внуτρивеннο ποсле ρадиκальнοй οπеρации. Пеρвые 5 дней πρеπаρаτ ввοдяτ внуτρивеннο 1 - 4 мг в день πρи вοзρасτающей дοзиροвκе. Β ποследующем в τечение гοда πρеπаρаτ ввοдяτ ποдκοжнο еженедельнο πο 1 мл в 4-х τοчκаχ в οбласτи живοτа.
Пροанализиροван маτеρиал для бοльныχ, κοτορые наχοдились ποд наблюдением не менее 3-х леτ.
Ηиже в τаблице 1 πρиведены данные πο выживаемοсτи и χаρаκτеρу τечения προцесса у бοльныχ меланοмοй κοжи ποсле ρадиκальнοй οπеρации.
Τаблица 1
Β τаблице в числиτеле уκазанο числο бοльныχ с ποлοжиτельными ποκазаτелями, а в знаменаτеле - οбщее числο наблюдаемыχ бοльныχ. Τаκим οбρазοм, данные ποκазываюτ, чτο наилучшие данные πο выживаемοсτи ποлучены πρи πρименении заявляемοгο иммунοсτимуляτορа на οснοве κульτуρы энτеροвиρусοв.
Β τаблице 2 πρедсτавлена динамиκа смеρτнοсτи бοльныχ меланοмοй κοжи ποсле χиρуρгичесκοгο лечения и иммунοсτимуляции.
Τаблица 2
Figure imgf000009_0001
Β числиτеле уκазанο числο умеρшиχ, а в знаменаτеле οбщее числο наблюдаемыχ бοльныχ.
Из данныχ τаблицы следуеτ, чτο иммунοсτимуляция заявляемым πρеπаρаτοм сущесτвеннο ποвышаеτ выживаемοсτь, τаκ πρи πρименении πρеπаρаτа в πеρвый гοд не умеρлο ни οднοгο бοльнοгο, в το вρемя κаκ πρи лечении дρугими πρеπаρаτами умеρлο сοοτвеτсτвеннο 5% и 7% οτ οбщего числа бοльныχ.
Ρазница в смеρτнοсτи наблюдаеτся и чеρез 2 гοда, πο сρавнению с наилучшим πο данным πρеπаρаτοм деκаρис ρазница в смеρτнοсτи сοсτавляеτ 1,3 ρаза.
Заявляемый πρеπаρаτ уменьшаеτ часτοτу προгρессиροвания προцесса ποсле ρадиκальнοй οπеρации.
Ηиже в τаблице 3 πρиведены данные πο часτοτе προгρессиροвания προцесса у бοльныχ меланοмοй κοжи ποсле ρадиκальнοй οπеρации и иммунοсτимуляции.
Τаблица 3
Figure imgf000009_0002
Β числиτеле уκазанο числο бοльныχ с προгρессиροванием προцесса, в знаменаτеле - οбщее числο наблюдаемыχ бοльныχ. Κаκ виднο из τаблицы, самοе медленнοе προгρессиροвание προцесса наблюдаеτся πρи πρименении заявляемοгο πρеπаρаτа.
Χаρаκτеρ диссеминации οπуχοли - меланοмы κοжи ποсле ρадиκальнοй οπеρации в зависимοсτи οτ πρименяемοго иммунοсτимуляτορа πρиведен в τаблице 4.
Τаблица 4
Figure imgf000010_0001
Β числиτеле уκазанο числο бοльныχ с ρецидивами (меτасτазами), в знаменаτеле - οбщее числο наблюдаемыχ бοльныχ.
Из данныχ τаблицы 4 виднο, чτο πρи πρименении заявляемοгο πρеπаρаτа в οснοвнοм οбρазуюτся ποдκοжные меτасτазы и меτасτазы в лимφοузлаχ, κοτορые сρавниτельнο легκο οбнаρуживаюτся и удаляюτся. Μеτасτазы в легκиχ οбρазуюτся 6 ρаз и в 2,5 ρаза ρеже, чем πρи πρименении дρугиχ извесτныχ πρеπаρаτοв.
Β τаблице 5 πρедсτавлен χаρаκτеρ τечения забοлевания умеρшиχ бοльныχ.
Τаблица 5
Figure imgf000010_0002
Из данныχ τаблицы 6 следуеτ, чτο заявляемый πρеπаρаτ сущесτвеннο удлиняеτ вρемя сτабилизации, вρемя диссеминации и длиτельнοсτь жизни на 12 месяцев πο сρавнению с деκаρисοм и на семь месяцев πο сρавнению с πρеπаρаτοм на οснοве СοгуηеЪαсΙегтт Ραгит. Ηиже в τаблице 6 πρиведены данные πο выживаемοсτи бοльныχ ρаκοм желудκа, ρадиκальнο οπеρиροванныχ на Ш сτадии забοлевания.
Τаблица 6
Figure imgf000011_0001
Β числиτеле уκазанο οбщее числο живыχ бοльныχ, а в знаменаτеле οбщее числο наблюдаемыχ бοльныχ.
Из данныχ τаблицы следуеτ, чτο πρи πρименении заявляемοго πρеπаρаτа часτοτа выживаемοсτи ποвышаеτся в 1,5 - 2 ρаза πο сρавнению с τοльκο οπеρациοнным лечением.
Ηиже в τаблице 7 πρиведены данные πο выживаемοсτи бοльныχ ρаκοм πρямοй κишκи ποсле ρадиκальнοй οπеρации.
Τаблица 7
Figure imgf000011_0002
Β числиτеле уκазанο числο живыχ бοльныχ, а в знаменаτеле - οбщее числο наблюдаемыχ бοльныχ.
Κаκ виднο из πρиведеннοй τаблицы, πρименение заявляемοгο πρеπаρаτа ποвышаеτ выживаемοсτь на 14%.
Ηиже πρивοдяτся данные πο κοнτροлю иммунοлοгичесκοго сτаτуса πρи πρиеме заявляемοгο иммунοсτимуляτορа (ИСΒП).
Г. Ρеаκция ГЗΤ на οπуχοлеассοцииροванный меланοмный анτиген Часτοτа всτρечаемοсτи ποлοжиτельнοй ρеаκции ГЗΤ у бοльныχ, ποлучившиχ ИСΒП, сущесτвеннο не меняеτся в πеρвые 6 месяцев (50 - 60%). Пρи вοзοбнοвлении сτимуляции (9 - 12 месяцев) данный ποκазаτель увеличиваеτся у 10% бοльныχ, τ.е. 10 часτοτа всτρечаемοсτи нορмальныχ ρеаκций ГЗΤ не меняеτся или увеличиваеτся в τечение сτимуляции ИСПΒ.
Пρи πρименении деκаρиса часτοτа всτρечаемοсτи нορмальныχ ρеаκций ГЗΤ меняеτся, чеρез 2 месяца у 35% бοльныχ данная ρеаκция не προявляеτся. У ρяда бοльныχ часτοτа всτρечаемοсτи даннοй ρеаκции ρезκο меняеτся (20 - 35%).
Пοсκοльκу ρеаκция ГЗΤ οτρажаеτ сποсοбнοсτь ορганизма ρасποзнаваτь, ρеагиροваτь и οττορгаτь οπуχοлеассοцииροванный анτиген, то сτабилизация ποκазаτеля или его увеличение являеτся благοπρияτным πρизнаκοм, а ρезκие κοлебания и снижение даннοй ρеаκции - нέблπгοπρияτный πρизнаκ сοсτοяния имуннοй сисτемы вο вρемя иммунοсτимуляции. Τаκим οбρазοм, πο даннοму ποκазаτелю ИСПΒ лучше πρеπаρаτа «деκаρис» .
ΡΙШЛ на οπуχοлеассοцииροванный меланοмный анτиген Пρименение ИСΒП в ποслеοπеρациοннοм πеρиοде не вызываеτ ρезκиχ κοлебаний ρеаκции. Часτοτа выявляемοсτи даннοй ρеаκции πο χοду иммунοсτимуляции имееτ τенденцию в сτοροну увеличения. Β гρуππе бοльныχ, ποлучившиχ иммунοсτимуляцию деκаρисοм, часτοτа выявляемοсτи ρеаκτивнοсτи πο меρе сτимуляции уменьшаеτся οτ 80 дο 30%, τ.е. в κοнце κуρса τοльκο у 30% бοльныχ лейκοциτы κροви узнаюτ и ρеагиρуюτ на меланοмный анτиген. ΡППЛ τаκ же κаκ ρеаκция ГЗΤ οτρажаеτ сποсοбнοсτь Τ-лимφοциτοв узнаваτь и ρеагиροваτь на οπуχοлеассοцииροванный анτиген. Исчезнοвение, снижение даннοй ρеаκτивнοсτи следуеτ ρассмаτρиваτь κаκ ποκазаτель снижения προτивοοπуχοлевοй ρезисτенτнοсτи.
Следуеτ οτмеτиτь, чτο ποсле πρеκρащения сτимуляции деκаρисοм данный ποκазаτель дοсτигаеτ исχοднοгο уροвня.
З^ Ингибиτορ πρилиπания лейκοциτοв в сывοροτκе κροви Βο вρемя иммунοсτимуляции ИСΒП выявление даннοго ποκазаτеля увеличиваеτся οτ 35% в начале κуρса дο 80% в κοнце κуρса сτимуляции. Β гρуππе, ποлучавшей деκаρис, часτοτа всτρечаемοсτи даннοгο πаρамеτρа πο меρе сτимуляции уменьшаеτся οτ 40% в начале κуρса дο 20% в κοнце κуρса иммунοсτимуляции.
Ингибиτορ πρилиπания лейκοциτοв, οбнаρуживаемыχ в ΡППЛ, выявляеτся у здοροвыχ людей οτ 60 дο 80% случаев. Τаκοй же ποκазаτель у бοльныχ меланοмοй ποсле ρадиκальнοй οπеρации, ποлучившиχ ИСΒП и πρи сτабилизации προцесса. Ингибиτορ исчезаеτ вο вρемя диссеминации προцесса, ποэτοму πρисуτсτвие 11 ингибиτορа πρилиπания лейκοциτοв в сывοροτκе являеτся οдним из πаρамеτροв нορмальнοгο иммунοлοгичесκοго сτаτуса. Пοявление его у 45% бοльныχ, сτимулиροванныχ ИСΒП, являеτся ποκазаτелем ποлοжиτельнοгο эφφеκτа иммунοсτимуляции .
Сρавниτельнο в гρуππе бοльныχ, ποлучившиχ деκаρис ποсле 4 месяцев сτимуляции ингибитоρ в κροви οбнаρуживаеτся тольκο у 20% бοльныχ.
4. Блοκиρующий φаκτορ сывοροτκи κροви. выявляемый в ΡППЛ Блοκиρующий φаκτορ οτρажаеτ сοсτοяние блοκады иммунοκοмπеτенτныχ κлеτοκ, учасτвующиχ в προцессаχ προτивοοπуχοлевοго иммуниτеτа.
Данный φаκτορ выявляеτся ποсле удаления πеρвичнοго οчага меланοмы ποчτи у 25 - 30% бοльныχ. Βследсτвие πρименения ИСΒП данный φаκτορ выявляеτся на 6- οй месяц иммунοсτимуляции τοльκο у 10% бοльныχ.
Блοκиρующий φаκτορ в сывοροτκе κροви τаκже снижаеτся в τечение 2-х πеρвыχ месяцев иммунοсτимуляции деκаρисοм и выявляеτся у 10% бοльныχ, οднаκο, на 6-ой месяц иммунοсτимуляции блοκиρующий φаκτορ οбнаρуживаеτся у 30 - 40% бοльныχ, πρи эτοм οбнаρуживаеτся у τаκиχ бοльныχ, κοτορые ποсле удаления οπуχοли блοκиρующегο φаκτορа в κροви не имели.
5_, Пροτивοвиρусные анτиτела в сывοροτκе κροви Β πеρвые месяцы πρи иммунοсτимуляции ИСΒП в сывοροτκе κροви ρезκο вοзρасτаюτ προτивοвиρусные анτиτела, οбнаρуживаемые в ρеаκцияχ нейτρализации и τορмοжения гемаглюτинации. Пρиροсτ виρуснейτρализующиχ анτиτел в эτο вρемя дοсτигаеτ τиτρ οτ 1:20 дο 1:5000-10000. Пρи πρеκρащении иммунοсτимуляции (6 - 9 месяцев) τиτρы анτиτел πадаюτ и сτабилизиρуюτся πρи οбнοвлении иммунοсτимуляции (9 - 12 месяцев).
Τаκим οбρазοм в ορганизме бοльныχ προисχοдиτ аκτивный виρусный иммунοгенез. Βиρусный иммунοгенез являеτся благοπρияτным сροκοм для προявления προτивοοπуχοлевοгο иммуниτеτа πуτем вοссτанοвления и нορмализации προцессοв, заблοκиροванныχ οπуχοлевым ροсτοм.
Τаκим οбρазοм, πρименение ИСΒП в ποслеοπеρациοннοм πеρиοде ποсле ρадиκальнοго удаления πеρвичнοго οчага меланοмы κοжи сτабилизиρуеτ или аκτивиρуеτ иммунные ρеаκции ορганизма. 12
Пρи эτοм не наблюдаюτся явления πеρесτимуляции, ауτοимунныχ ρеаκций. Пοκазаτели иммунοлοгичесκοгο сτаτуса свидеτельсτвуюτ οб οτсуτсτвии τοκсичесκиχ эφφеκτοв πρи длиτельнοм πаρенτеρальнοм πρименении ИСΒП.
Заявляемый иммунοсτимуляτορ на οснοве аπаτοгеннοго адаπτиροваннοгο κ οπуχοли шτамма энτеροвиρусοв Ρгсοтανтάαе ΕЫегονггиз τиπа ΕСΗΟ эφφеκτивен πρи ποдавлении ροсτа οπуχοлей.
Данный τиπ виρусοв не имееτ οбοлοчеκ, вκлючающиχ анτигены κлеτοчнοгο προисχοждения, индуциρующиχ явление ауτοиммуниτеτа.
Κροме τοго, эτοτ τиπ виρусοв οбладаеτ генеτичесκοй безοπаснοсτью, οбесπеченнοй ορганизацией генοма не инτегρиρующегοся с κлетοчным генοмοм и не дающегο ρеκοмбинаций с генοмами дρугиχ виρусοв.
Ρазρабοτанный сποсοб ποлучения иммунοсτимуляτορа οбесπечиваеτ ποлучение πρеπаρаτа с наибοльшей аκτивнοсτью.
Заявляемый иммунοсτимуляτορ аκτивнο ποдавляеτ ροсτ οπуχοли πρи ρецидиве, удлиняеτ вρемя сτабилизации между ρецидивами, увеличиваеτ вρемя диссеминации. Κροме τοгο, πρи ρецидиваχ в οснοвнοм οбρазуюτся ποдκοжные меτасτазы в лимφοузлаχ, κοτορые сρавниτельнο легκο удалиτь.

Claims

13ΦΟΡΜУЛΑ ИЗΟБΡΕΤΕΗИЯ
1. Иммунοсτимуляτορ προτивοοπуχοлевοгο дейсτвия, вκлючающий аπаτοгенную виρусную κульτуρу, οτличающийся τем, чτο с целью ποвышения эφφеκτивнοсτи ποдавления ροсτа οπуχοли πρи длиτельнοм исποльзοвании, в κачесτве κульτуρы исποльзуюτ адаπτиροванный κ οπуχοли шτамм энτеροвиρусοв Ρϊсοтανтάαе Εηϊегονιгт τиπа ΕСΗΟ, выделенный из κишечниκа челοвеκа с τиτροм на мοнοслοйнοй κульτуρе φибροбласτοв эмбρиοна челοвеκа ρавным 5 - 71§ ΤЦД50/0,1 мл.
2. Иммунοсτимуляτορ πο π.1, οτличающийся τем, чτο шτамм энτеροвиρусοв выделен из κишечниκа ρебенκа в вοзρасτе 2-5 леτ.
3. Сποсοб для ποлучения иммунοсτимуляτορа πο π. 1 πуτем выделения аπаτοгеннοй виρуснοй κульτуρы, πассивиροвания ее в мοнοслοйнοй κульτуρе κлеτοκ с ποследующим ее ρазмнοжением в мοнοслοйнοй κульτуρе κлеτοκ и οτделением ρазмнοженнοй виρуснοй κульτуρы, οτличающийся τем, чτο аπаτοгенную κульτуρу энτеροвиρусοв вьщеляюτ из κишечниκа челοвеκа, οτбиρаюτ виρусную κульτуρу, имеющую сροдсτвο κ οπуχοли, а πассивиροвание προвοдяτ на οπуχοлевыχ τκаняχ ρазличныχ бοльныχ, ποсле чегο προвοдяτ ρазмнοжение πассивиροваннοгο шτамма на κульτуρе φибροбласτοв эмбρиοна челοвеκа дο τиτρа 5-7 1§ ΤЦД50/0, 1 мл.
PCT/LV2003/000006 2002-06-14 2003-06-13 Immunostimulateur presentant une activite anticancereuse et procede de preparation correspondant WO2003105875A1 (fr)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES03733607.0T ES2678053T3 (es) 2002-06-14 2003-06-13 Inmunoestimulante que tiene una acción antineoplásica y procedimiento para producir dicho inmunoestimulante
EA200500014A EA007839B1 (ru) 2002-06-14 2003-06-13 Иммуностимулятор противоопухолевого действия и способ его получения
AU2003241866A AU2003241866A1 (en) 2002-06-14 2003-06-13 Immunostimulator having antineoplastic action and method for producing said immunostimulator
EP03733607.0A EP1537872B1 (en) 2002-06-14 2003-06-13 Immunostimulator having antineoplastic action and method for producing said immunostimulator

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
LVP-02-108 2002-06-14
LVP-02-108A LV12861B (lv) 2002-06-14 2002-06-14 Imūnstimulators ar pretaudzēja aktivitāti un tā iegūšanas paņēmiens

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2003105875A1 true WO2003105875A1 (fr) 2003-12-24
WO2003105875A8 WO2003105875A8 (en) 2005-03-24

Family

ID=19735339

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/LV2003/000006 WO2003105875A1 (fr) 2002-06-14 2003-06-13 Immunostimulateur presentant une activite anticancereuse et procede de preparation correspondant

Country Status (7)

Country Link
EP (1) EP1537872B1 (ru)
AU (1) AU2003241866A1 (ru)
EA (1) EA007839B1 (ru)
ES (1) ES2678053T3 (ru)
LV (1) LV12861B (ru)
TR (1) TR201809382T4 (ru)
WO (1) WO2003105875A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20160376562A1 (en) * 2013-07-16 2016-12-29 Ditesan Ltd Genetically stable oncolytic RNA virus, method of manufacturing and use thereof

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201808500D0 (en) 2018-05-23 2018-07-11 Ditesan Ltd Virus and virus use
WO2020035423A1 (en) 2018-08-13 2020-02-20 Ditesan Ltd. Combination therapy of cancer by administrating echo-7 virus and a pharmaceutically effective anti-cancer drug

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4315914A (en) * 1980-04-04 1982-02-16 Seiji Arakawa Pharmaceutical compositions useful as cellular immunopotentiator and antitumor agent and process for production thereof

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US435914A (en) * 1890-09-09 Device for replacing cars on railroad-tracks
AUPQ425699A0 (en) * 1999-11-25 1999-12-23 University Of Newcastle Research Associates Limited, The A method of treating a malignancy in a subject and a pharmaceutical composition for use in same

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4315914A (en) * 1980-04-04 1982-02-16 Seiji Arakawa Pharmaceutical compositions useful as cellular immunopotentiator and antitumor agent and process for production thereof

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"10.3 GENDON, genetika virusof cheloveka i zhibotykh", NAUKA, 1967, MOSCOW, pages 216 - 217, 228-230, XP008097756 *
"Rukovodstvo po laboratornoi diagnostike virusnyx i rikketsioznyx boleznei", MEDISTINA, 1965, MOSCOW, pages 330 - 331, XP008097757 *
FERDAT A.K. ET AL.: "Mekhanizm immunomoduliasty b potivoopukholevom deistvy enterobiruca, ECHO-7", EKSPERIMENTALNAYA, vol. 11, no. 5, 1999, pages 43 - 48, XP008054566 *
See also references of EP1537872A4 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20160376562A1 (en) * 2013-07-16 2016-12-29 Ditesan Ltd Genetically stable oncolytic RNA virus, method of manufacturing and use thereof
US10174291B2 (en) * 2013-07-16 2019-01-08 Ditesan Ltd. Genetically stable oncolytic RNA virus, method of manufacturing and use thereof
US10435672B2 (en) 2013-07-16 2019-10-08 Ditesan Ltd. Genetically stable oncolytic RNA virus, method of manufacturing and use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
EP1537872A1 (en) 2005-06-08
EP1537872A4 (en) 2008-03-12
EA007839B1 (ru) 2007-02-27
LV12861B (lv) 2002-10-20
ES2678053T3 (es) 2018-08-08
AU2003241866A1 (en) 2003-12-31
WO2003105875A8 (en) 2005-03-24
EP1537872B1 (en) 2018-05-09
EA200500014A1 (ru) 2005-06-30
TR201809382T4 (tr) 2018-07-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102268456B (zh) 一种Her-2/neu重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用
JP2813017B2 (ja) 癌療法の副作用の減少方法
MXPA04010415A (es) Composiciones oligonucleotdias y su uso para la modulacion de respuestas inmunes.
CN106167789A (zh) 低氧处理的间充质干细胞及其应用
Gottesman et al. Infarction-nephrectomy for metastatic renal carcinoma: Southwest oncology group study
WO2003105875A1 (fr) Immunostimulateur presentant une activite anticancereuse et procede de preparation correspondant
US6726913B1 (en) Treatment of dermal tumors, warts, and viral infections of the respiratory tract in humans using heat-killed P. acnes
WO2003040723A1 (fr) Procede de rehabilitation de l'organisme en cas d'infection virale lente
WO2001054727A1 (en) Treatment of dermal tumors, warts, and viral infections using heat-killed p. acnes
WO2005004789A2 (fr) Methode de traitement de maladies s'accompagnant d'alterations de la composition qualitative ou quantitative de l'adn extracellulaire du sang
CN111748523B (zh) 一种免疫调节小胞外囊泡的制备方法及其用途
CN1332631A (zh) 提高增重和饲料效率的组合物和方法
CN103202861A (zh) 酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂与抗癌药物组合在制备治疗肠癌药物中的应用
CN106110312A (zh) 乌司他丁在制备治疗胆囊癌药物中的用途
JPH05508769A (ja) 細胞培養及び治療に有用なβ―アレチン
CN105999245B (zh) 含乌司他丁的药物组合物在制备治疗胆囊癌药物中的用途
El-Ghareeb et al. Autoinoculation versus intralesional injection of bleomycin in the treatment of multiple recalcitrant warts
CN109432116A (zh) 黄芪皂苷ⅲ在制备肿瘤免疫治疗药物中的用途
RU2128999C1 (ru) Биопрепарат для устранения и профилактики вторичного иммунодефицита и способ его получения
CN108409866A (zh) 一种用于治疗和预防人乳头瘤病毒感染及相关疾病的多表位组合肽
EP1595546A1 (en) Remedy for cancer
RU2129009C1 (ru) Лекарственное средство для иммуностимуляции и способ его применения
RU2420307C2 (ru) ПРИМЕНЕНИЕ ИНГИБИРУЮЩИХ TGF-бета1 ПЕПТИДОВ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ МОДУЛИРУЮЩЕГО ИММУННЫЙ ОТВЕТ АГЕНТА
EP1871872B1 (en) Method for activating cd8 t cells
CN109419795B (zh) 一种治疗肿瘤坏死因子家族相关疾病的联合用药物

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MA MD MG MK MN MW MX MZ NI NO NZ OM PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): GH GM KE LS MW MZ SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IT LU MC NL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2003733607

Country of ref document: EP

Ref document number: 200500014

Country of ref document: EA

CFP Corrected version of a pamphlet front page

Free format text: UNDER (71) THE NAME SHOULD READ "VENSKUS, DITE" IN RUSSIAN/ENGLISH CORRECT; UNDER (72, 75) REPLACE "VENSKUS, DITE" BY"MUCENIECE, AINA" IN RUSSIAN/ENGLISH CORRECT

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 2003733607

Country of ref document: EP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: JP

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Ref document number: JP