WO2003005811A1

WO2003005811A1 - Il-18 transgenic animal

Info

Publication number: WO2003005811A1
Application number: PCT/JP2002/007047
Authority: WO
Inventors: Hitoshi Mizutani
Original assignee: Nakanishi, Kenji; Taiho Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2001-07-12
Filing date: 2002-07-11
Publication date: 2003-01-23
Also published as: US7098373B2; EP1405560B1; ES2372030T3; JP4381138B2; EP1405560A4; EP1405560A1; US20040187171A1; JPWO2003005811A1; ATE528987T1

Description

明細書

I L一 1 8遺伝子導入動物技術分野

本発明は、アトピー性皮膚炎、特に慢性アトピー性皮膚炎のモデル動物として有用なトランスジエニック動物に関する。背景技術

アトピー性皮膚炎、喘息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎等のアトピ一性疾患は正常人が反応しない環境抗原等に対して過敏に反応を示し、自己の免疫系による各臓器の破壌、障害を生ずる疾患である。これらの疾患の発生機序にはアレルギ一反応を増強する T h 2型サイトカインの関与が想定されている。その誘導機序、調節機序の解明は生理学及び薬学上重要な意味を持つが、詳細なメ力二ズムは明らかにされていない。

現在、アトピ一性疾患の治療には主として、抗原からの回避、ヒスタミン等のメデイエ一ターの受容体の結合に拮抗する抗ヒスタミン剤、抗炎症ステロイド剤等によるものが知られているが、より特異的な作用機序をターゲットとした治療方法の開発は、適切な実験動物がないことにより妨げられている。

従来、実験動物にアレルギー反応を誘発させるためには、予め抗原又はアレルゲンを繰り返し免疫することにより動物を感作しておいてから当該抗原又はァレルゲンを投与する必要があった。この場合、同時に多数の動物を感作するのは多大な労力を要するばかりでなく、個々の動物間に反応性のばらつきが生じることがあり、実験の再現性の上で問題となることがあった。

近年、 N C/N g aマウスがアトピー性皮膚炎のモデル動物として注目されているが、このマウスに起こる皮膚炎はダニ存在下で初めて発症するもので、その発症率も不安定であり、症状も一定しない。

ァトピー性疾患の治療薬の開発には動物実験が不可欠で、特にァトピ一性皮膚炎のモデル動物が希求されているが、遺伝的背景が確立され、免疫学的にも明らかで、特異的病原微生物を排除した条件下で各種治療法及び薬剤の開発研究に利用可能なァトピー性皮膚炎モデル動物は現在のところ存在せず、実用に供されていない。

従って、本発明の目的は、アトピー性皮膚炎モデルとして有用な動物を作製することにある。 ' 発明の開示

そこで本発明者らはインターロイキン 18 (I L-18) に着目した。 I L— 18は、カスパーゼ 1 (11^ー1 変換酵素）と呼ばれるプロテアーゼによってプロセシングを受けて前駆型から成熟型に変換される。成熟型の I L一 18の機能としては、（1) I FN—ァ産生の誘導、（2) Fa sリガンド発現の増強による F a s介在性アポトーシスの増強、（3) GM—CSFの誘導、（4) I L - 12との共存による I gE産生抑制等が知られている。また、 I L— 18は免疫組織以外の骨芽細胞様間質細胞、ケラチノサイト、小腸上皮細胞、副腎皮質細胞、下垂体細胞といったさまざまな組織でも発現されており、その生理学的な役割について活発な研究が行われている（免疫 1997— 98, 中山書店， 62- 72 ；臨床免疫， 30 (2) , 191— 198， 1998等参照）。近年、発明者等は I L一 18単独で過剰発現した場合は、 I L— 4及び I L一 13の産生を増強し、 I gE産生を誘導する知見を得た。このことは、 I L— 18がアトピー性疾患の発症に関係する Th 2型サイトカインに深く関与していることを意味する。従って、 I L一 18を成熟型に変換するカスパーゼ 1の分泌が促進されたモデル動物が作製されれば、アトピー性疾患の発症メカニズムの解明、治療法の開発に有用であると考えた。しかし、カスパーゼ 1はアポトーシス誘導酵素であるため、この遺伝子を導入して生体内で発現させると I L一 1 8分泌のみでなく細胞死効果も発生するという問題があつた。

かかる観点から本発明者らはカスパーゼ 1遺伝子を皮膚特異的に発現するように組み込んだ D NAを導入したトランスジエニック非ヒト哺乳動物を作製し、先に特許出願した（国際公開 WO O 1 / 9 5 7 1 0号）。このトランスジエニック動物はアトピー性皮膚炎の症状を呈し、モデル動物として有用である。しかし、このトランスジエニック動物も表皮細胞壊死症状が生じ急性期皮膚炎の症状が見られ、また細菌感染により全身性の肝障害を生じることがあつ.た。

そこで本発明者らは、さらに検討した結果、直接、成熟型 I L— 1 8を皮膚特異的に発現するように組み換えた D NAを動物細胞に導入すれば、血中に持続的に成熟型 I L— 1 8を分泌し、ダニ、カビ類等の特異的病原微生物を排除した条件下において飼育してもアトピ一性皮膚炎の症状を呈するトランスジエニック動物が作製できること、さらに意外にも当該トランスジエニック動物が表皮細胞壊死症状や肝障害がなく、よりヒトのアトピー性皮膚炎に近いモデル動物として有用であることを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、外来性の I L一 1 8遺伝子を皮膚特異的に発現するように組み込んだ D NAを有するトランスジエニック非ヒト哺乳動物又はその子孫、及びその作製方法を提供するものである。

また本発明は、上記トランスジエニック動物に被験物質を投与し、アトピー性皮膚炎の改善効果を検定することを特徴とするァトピー性皮膚炎の予防又は治療用物質のスクリ一二ング方法、及び当該スクリ一二ングによりアトピー性皮膚炎の改善効果を有すると判定される物質を含有するァトピー性皮膚炎の予防又は治療用医薬を提供するものである。図面の簡単な説明

図 1は、導入に用いた組み換え D N Aの結合状態を示す図である。図 2は、 KI L— 18 Tgの耳表皮組織中における ml L— 18の mRNAの発現を、ノーザンプロット解析した結果を示す図である。

図 3は、 K I L— 18 Tgの耳表皮組織中における m I L— 18の同 mRNA の発現を、 RT— PC Rで解析した図である。

図 4は、 KI L_18Tg、 KCAS P 1 Tg及びワイルドタイプ（WT) における誕生後 12週及び 36週の血清中 I L_ 18濃度の変ィヒを示す図である。図 5は、 KI L— 18Tg、 KCAS P 1 Tg及びワイルドタイプ（WT) における皮膚搔破回数の測定結果を示す図である。

図 6·は、 KI L— 18Tg、 KCAS P 1 Tg及びワイルドタイプ（WT) の血中の I gE濃度（36週）を示す図である。発明を実施するための最良の形態

本発明のトランスジエニック動物は、体細胞及び生殖細胞に外来性の I L— 18遺伝子を皮膚特異的に発現するように組み込んだ DNAを有する。ここで外来性 I L _ 18遺伝子としては、ヒト又はマウスの I L— 18遺伝子が好ましく、例えばヒト成熟型 I L一 18 (h I L- 18) 、マウス成熟型 I L— 18

(ml L— 18) 、ヒト前駆型 I L— 18 (hp r o I L— 18) 、マウス前駆型 I L一 18 (mp r o IL— 18) 等の遺伝子が挙げられるが、 h I L— 18 又は m I L—18が好ましく、 m I L— 18の完全なコ一ド領域の 0. 63 k b c DNAが特に好ましい。

外来性の I L一 18遺伝子を皮膚特異的に発現するように組み込んだ DNAとしては、外来性 I L— 18遺伝子と皮膚特異的蛋白のプロモータとを含む組み換え DN Aが好ましい。ここで、皮膚特異的蛋白のプロモータとしては、皮膚に特異的に存在する蛋白のプロモータが挙げられ、例えばケラチン 14、ケラチン 5、ケラチン 1、ケラチン 10等のケラチンプロモー夕、インポルクリン等のプ口モータが挙げられるが、ケラチンプロモータが特に好ましい。また、 I L— 18の分泌を促進させるため、副甲状腺ホルモン遺伝子、例えば p r e p r o副甲状腺ホルモン (； r e p r o P a r a t hy r o i d, ho rmon e ： PTH) 遺伝子のリーダーシークェンスを I L一 18遺伝子に結合するのが好ましい。成熟型 I L—18を皮膚特異的に発現させ、かつ良好に分泌させるにはケラチンプロモー夕の下流に副甲状腺ホルモン遺伝子及び I L一 18遺伝子を結合させるのがより好ましい。さらに、遺伝子の発現効率を上げるため i3— g 1 0 b i nイントロン等のイントロンも結合するのが好ましい。

上記 DNAは、遺伝子導入哺乳動物において、目的とするメッセンジャー RN Aの転写を終結する配列（ポリ A、一般にターミネータ一と呼ばれる）を有していることが好ましく、例えば、ウィルス由来、各種哺乳動物由来の各遺伝子の配列を用いて遺伝子発現を操作することができる。好ましくは、前記皮膚特異的蛋白のポリ A、特に好ましくはケラチンのポリ A等が用いられる。その他、目的の遺伝子をさらに高発現させる目的で、各遺伝子のスプライシングシグナル、ェンハンサー領域、真核遺伝子のィントロンの一部を、プロモーター領域の 5 ' 上流、プロモーター領域と翻訳領域間あるいは翻訳領域の 3' 下流に連結することも可能である。

かくして得られる組み換え DN Aを導入するための非ヒト哺乳動物としては、ゥシ、ブ夕、ヒッジ、ャギ、ゥサギ、ィヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウス等が挙げられる。好ましくは、ゥサギ、ィヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、マウス又はラットであり、なかでもモルモット、ハムスター、マウス、ラット等の齧歯目（Roden t i a) が好ましく、とりわけマウスが好ましい。

本発明のトランスジエニック動物は、例えば非ヒト哺乳動物の受精卵に、前記外来性の I L— 18遺伝子を皮膚特異的に発現するように組み込んだ DNAを導入し、当該受精卵を当該動物の雌に着床させることにより作製される。ここで、受精卵としては、雄精前核時期（受精後約 12時間位）のものが好ましい。また組み換え D N Aの導入方法としては、リン酸カルシウム法、電気パルス法、リポフエクシヨン法、凝集法、マイクロインジェクション法、パ一ティクルガン法、 D E A E—デキストラン法等が挙げられるが、マイクロインジェクション法が特に好ましい。

組み換え D NAを導入した受精卵は、当該受精卵と同種の動物の雌に着床させる。着床の手段は、偽妊娠雌性動物の卵管に人工的に移植、着床させる手段が好ましい。かくして、受精卵を着床させた動物から生まれた仔の中から、目的とする遺伝子を発現している個体を選別し、当該個体を継代すればよい。

得られたトランスジエニック動物に目的遺伝子が含まれているか否かの確認は、皮膚から D NAを採取し、ポリメラーゼ連鎖反応（P C R) 及びサザンプロッティング法による導入遺伝子の解析によって行うことができる。

かくして得られる本発明のトランスジエニック動物は、皮膚において外来性 I L - 1 8遺伝子が発現されるため、特異的病原微生物の非存在下でもアトピー性皮膚炎の症状を呈し、かつ長期間生存するという特徴を有する。

すなわち、本発明のトランスジエニック動物は、外来性の I L一 1 8遺伝子を皮膚のみに有し、他の組織、例えば肝臓、腎臓、肺、脳、脾臓では有さない。その結果、本発明のトランスジエニック動物の皮膚には、成熟型 I L一 1 8が多量に分泌されている。さらに本発明のトランスジエニック動物の血中には成熟型 I L - 1 8が正常動物に比べて大量に含まれている。

本発明のトランスジエニック動物は、 2 4週齢ぐらいからアトピー性皮膚炎の症状を、例えば苔癬化皮膚炎、びらん性皮膚炎等を呈する。このうち、苔癬化皮膚炎の症状は、前記のカスパーゼ 1遺伝子導入動物の場合に比べてはつきり特徴的に生じており、本発明のトランスジエニック動物がヒトの慢性皮膚炎により近いものであることを示している。

また、皮膚組織の光学顕微鏡観察では、本発明トランスジエニック動物は 2 4 週齢ぐらいから、潰瘍の周辺の厚い表皮には、過角化を伴った炎症又は表皮肥厚といった変化が生じ、病変の真皮には、単核細胞及び肥満細胞の浸潤が生じる。しかし、表皮細胞壊死はほとんど生じない。また、本発明トランスジエニック動物では肝障害がほとんどみられない。ヒトのアトピー性皮膚炎には表皮細胞壌死や肝障害は通常みられないことから、本発明のトランスジエニック動物は、ヒトのアトピー性皮膚炎に極めて近い症状を呈するものであることがわかる。

また、本発明のトランスジエニック動物は、正常動物及び前記のカスパーゼ 1 遺伝子導入動物に比べて極めて多くの皮膚搔破行動をくり返し、アトピー性皮膚炎特有の強い搔痒を伴うことがわかる。さらに、本発明のトランスジエニック動物は、血中のヒスタミンレベル及び I g Eが極めて高いという、アトピー性皮膚炎特有の症状を示す。

このように本発明のトランスジエニック動物は、特異的病原微生物非存在下で、アトピー性皮膚炎の症状を呈するので、アトピー性皮膚炎の症状モデルとして有用である。すなわち、本発明のトランスジエニック動物又はその子孫に被験物質を投与し、アトピー性皮膚炎の改善効果を検定すれば、アトピー性皮膚炎の予防又は治療用物質のスクリーニングが可能となる。ここで、アトピー性皮膚炎の改善効果は、前記血中成熟型 I L - 1 8レベルの測定、皮膚中の成熟型 I L - 1 8の検出、肉眼観察、皮膚組織の顕微鏡観察、血中ヒスタミンレベルの測定等を単独で又は適宜組み合せて検定すればよい。また当該スクリ一二ングによりァトピー性皮膚炎改善効果があると判定された被験物質はァトピー性皮膚炎の予防又は治療用の医薬として有用である。実施例

次に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は何らこれに限定されるものではない。

まず、実施例に用いた各種試験方法及び材料について説明する。

( 1 ) ノーザンブロット法 ml L— 18の cDNAは、兵庫医大（岡村博士）より入手した（Nature, 378, P88-91, 1995) 。全 RNAは、後記実施例 1により得られた m I L— 18 トランスジエニックマウス（KI L— 18Tg) 及びコントロールマウスの組織から I s 0 g e n試薬（二ツボンジーン社製）を使用して抽出した。ノーザンブロット解析では、 10 gの全 RNAを 2重量％ホルムアルデヒド Zァガロースゲル電気泳動により、サイズを分画した。 RN Aをナイロン膜（I匪 obi Ion— N、ミリポア社製）に移し、マウスの I L一 18に対応する³² Pでラベルした c DNAをプローブに使用した。ハイブリダィゼーシヨンの後、プロットを 42°C、 1 XSSCZ0. 1重量％SDSで 2回、 2 XS SC/0. 1重量％ SDSで 2回洗浄した。その後、プロットを一 70°Cで X線フィルムに露光した。

(2) サイト力イン、サイト力インアツセィ及び抗体

I L- 18の生物学的活性は、 I L— 18反応性マウス NK細胞を使用して I FN—ァ誘導活性で測定した。リコンビナントマウス I L— 18 (rmI L— 18) 、ゥサギ抗マウス I L— 18中和抗体及びマウス I L—18EL I SAキットは林原研究所より入手した。マウス I L一 18EL I SAキットでは 10〜 100 OpgZmLの I L— 18を検出可能であった。

(3) 免疫組織化学

トランスジエニックとワイルドタイプマウスからのバイオプシー標本は、リン酸緩衝ホルマリンで 2時間固定した。次いで、パラフィン切片にカットした。サンプルは、直ちに、冷凍組織用包埋剤である O C T c omp o u n d (Mi l e s社製）中で、凍結し、一 70°Cで保存した。クリオスタツトの部分 (5 m) は、アセトンで 5分間、 4°Cで固定し、適度に希釈した一次抗体で 1 時間インキュベートした。洗浄後、結合した一次抗体を基質として AEC (ダコジャパン社製）を使用して Ve c t a s t e i n E l i t eキット（Vector Laboratories社製）で視覚化した。 (4) ィムノブロット

ィムノブロットは J. Clin. Invest. 87： 1066 (1991)に従って行った。 I s o g e nキットを使用して、 DNAと RNAを除去した後、トランスジェニックとコントロールマウスからの表皮の細胞ライセートを還元条件下、 S D S— サンプルバッファーで懸濁した。電気泳動した蛋白質を、セミドライブロッター ( B i 'o _ R a d 社製）を使用してニトロセルロース膜 (S c e i che r & S chue l l社製）に転写した。膜を一次抗体で 1時間インキュベートした後、アルカリホスファターゼ標識抗マウス I gG又は抗ゥサギ I gG抗体で二次インキュベートし、最後に、ウェスタンブルー基質

(P r ome g a社製）で発色させた。 ' 実施例 1

(1) DNA構成及びトランスジエニックマウスの作製

P r e p r o副甲状腺ホルモン遺伝子リーダ一シークェンス（PTH) と結合した m I L— 18の完全なコード領域の 0. 63 kb cDNA (東大医科研、田原博士より入手。 Genetherapy, 6, 808-815 (1999)参照）を、ケラチン 14プ口モータ（シカゴ大学、 E. Fu c h s博士より入手。 Nature, 374, pl59 (1995)参照）及びゥサギ ;3 g l ob i nイントロン（京都大学、田中博士より入手。 Nature, 374, P159Q995)参照）に平滑末端ライゲーシヨンによって結合させた（図 1 :図 1中、 K14 p r omo t e rはケラチン 14プロモータを、 i3 g 1 o b i n I n t r o nはゥサギ ]3 g 1 o b i nイントロンを、 PTH— ml L— 1 8は、 PTHと m I L_ 18の完全なコード領域 0. 63 k b cDNAを、 Kl 4 p o 1 y Aはヒトケラチン 14ポリ Aを示す）。得られた DNAフラグメントを C 57 BL/L 6マウス (日本チヤ一ルスリバ一社) の受精卵へ Dev. Growth Differ., 39： 257 (1997)記載の方法に準じてマイクロインジェクション法により注入した。

(2) トランスジエニックマウスにおける皮膚での ml L- 18過剰発現の確認尾部皮膚からの DNAを使用した PCR及びサザンブロッテイング法による導入遺伝子の取り込みによって仔をスクリーニングした。トータル 50匹誕生したマウスのうち 2匹（ 2) が ml L— 18のトランスジエニックであった（以下、 KI L— 18Tgと略す）。 KI L—18Tgは、誕生時より健康で、正常に成長した。 24週齢前においては同腹児のワイルドタイプよりやや小さかつた。この時点の後、 K'l L一 18 Tgは慢性活動性皮膚炎の症状が明確に発現した。 2匹の^ KI L—18Tgは、ワイルドタイプ早と交配させた結果、：早 = 1 ： 1で KI L_ l 8Tgとワイルドタイプの仔が誕生した。すべての実験は、非トランスジエニックやワイルドタイプ同腹児と導入遺伝子のライン化されたへテロ接合体との比較で行った。

(3) 皮膚の症状

1 ー 18丁8は、特別な病原体の検出されない条件のもとで 24週から、目の周りの中程度の皮膚炎が著明となり、急速に広範囲の皮膚炎に進展した。これらの症状は、その後数週内に顔、耳、首、胴体、足に広がった。皮膚炎症の慢性化が起こり、皮膚炎は持続した。顔、体幹、四肢の毛は、多数の搔破痕を伴い消失した。

光学顕微鏡レベルでは、 K I L _ 18 T gの表皮は、 24週まで特に組織学的変化は認められなかった。 24週齢の K I L- 18 Tgの病変部の厚い表皮は、萏癬ィ匕を伴った慢性湿疹様の変化が認められた。病変の真皮には、多くの単核細胞と肥満細胞が浸潤していた。表皮細胞の壊死は認められなかった。

高レベルの I L— 18が、 KI L—18 Tgの厚い表皮組織中で検出された。一方、コントロールのマウスではそれは極小量検出されただけであった。

(4) 皮膚における成熟型 I L—18の検出

ノ一ザンブロット解析及び R T— PCRにより、 KI L一 18Tgの耳表皮、表皮、肝臓、腎臓、結腸、肺、脳及び脾臓における ml L— 18の mRNA

J定した。その結果、 0. 63 k b m I L— 18の mRNAは、 K I L 18 Tgの耳及び背部表面にのみ認められたが、他の組織（肝臓、腎臓、結腸、肺、脳及び脾臓）では認められなかった（図 2及び 3参照）。なお、図 2中、レーン 1は K I L— 18Tgの、レーン 2は非トランスジエニック（ワイルドタイプ）の耳表皮組織の mRN Aの検出結果を示す。図 3中、レーン 1は AH i nd を、レーン 2は K I L— 18Tgを、レーン 3は正常マウス、レーン 4は陽性コントロールを示す。

(5) 血中における I L— 18レベル

外因性 I L— 1 8による局所での I L一 18の活性化が、成熟型のサイトカインの全身性の蓄積をもたらすのかどうかを検討した。図 4に示すように、高レべルの I L _ 18が有意に誕生後 12週及び 36週の KI L_ 18Tgの血清中で認められた。対照的に、ワイルドタイプ（WT) の同腹児では、生存期間中を通じて、血清中での I L— 1 8のレベルは、低かった（0. lng/mL以下）。 K I L一 1 8 T gの血清 I L— 1 8濃度は、高値を維持した。また図 4にはカスパーゼ 1遺伝子を皮膚特異的に発現するように組み込んだ D N Aを有するトランスジエニックマウス（国際公開 WO 0 1 / 9 5 7 1 0号参照、 KCASP lTg) の血清中の I L一 18濃度も示した。 KI L_18Tgの血清中 I L一 18濃度は、 KCASP l Tgのそれよりも極めて高かつた。

K I L- 18丁の血清中1し_ 18が成熟型 I L- 18であることを確かめるために、 K I L一 18 T gの血清中 I L— 18の生物学的活性を検討した。その結果、 K I L一 18Tgからの血清は、 I L一 1 8反応性のクロ一ン化されたナチュラルキラ一細胞による I FN—了産生を誘導する能力があることがわかつた。さらに、この I FN—ァ誘導能力は、抗 I L一 18抗体（中和抗体）により完全に阻害された。これは、 K I L— 18Tgの血清中に活性型 I L_ 18を含んでいることを意味する。しかしながら、 I FN—ァは定常状態では、 K I L一 18 Tgの血清中には検出されなかった。このように、 KI L— 18Tgは循環血中に持続的に成熟型 I L— 18を分泌していた。 (6) トランスジエニックマウスの皮膚搔破行動

目視法に従って K I L一 18 Tg及びワイルドタイプ（C 57 BLZL 6マウス）における皮膚搔破回数を 60分間測定した。

その結果、図 5に示すように、ワイルドタイプの搔破回数は 10分間あたり 50回以下であるのに対し、 K I L一 18丁8のそれは10分間あたり 300回以上であり、本発明のトランスジエニックマウスには痒みを伴う強い皮疹が生じていることがわかった。また I L- 18丁8の接破回数は1 〇八3？ lTgのそれよりも多かった。

(7) 血中における I gEレベル

K I L- 18 Tg及びワイルドタイプの血中 I gE濃度（EL I S A法）を 36週齢に測定した。その結果を図 6に示す。この結果より、本発明のトランスジエニックマウスは、血中 I gEレベルが 36週齢で 120 PL gZmm以上と極めて高値となることがわかる。また、 K I L一 18 T gの血中 I g Eレベルは KCAS P 1 Tgのそれよりも極めて高かった。産業上の利用可能性

本発明のトランスジエニック非ヒト哺乳動物は、特異的病原微生物の非存在下で自然発症的にァトピー性皮膚炎を発症するので疾患モデル動物として有用である。本発明のトランスジエニック動物を用いれば、自然免疫によるアトピー性皮膚炎の予防治療用医薬の開発、さらにはアトピー性疾患の発症メカニズムの解明が可能となる。

Claims

請求の範囲

1 . 外来性の I L _ 1 8遺伝子を皮膚特異的に発現するように組み込んだ D NAを有するトランスジエニック非ヒト哺乳動物又はその子孫。

2 . 外来性の I L一 1 8遺伝子を皮膚特異的に発現するように組み込んだ D N Aが、外来性 I L _ 1 8遺伝子と皮膚特異的蛋白のプロモー夕とを含む D N Aである請求項 1記載の動物又はその子孫。

3 . 皮膚特異的蛋白のプロモータが、ケラチンプロモー夕である請求項 2記載の動物又はその子孫。

4. 外来性の I L—1 8遺伝子を皮膚特異的に組み込んだ D N Aが、ケラチンプロモータの下流に副甲状腺ホルモン遺伝子及び I L _ 1 8遺伝子を結合した D N Aである請求項 1記載の動物又はその子孫。

5 . 持続的にァトピー性皮膚炎を生ずるものである請求項 1〜4のいずれか 1 項記載の動物又はその子孫。

6 . 表皮細胞壊死及び肝障害をほとんど生じないものである請求項 1〜 5のいずれか 1項記載の動物又はその子孫。

7 . 血中に持続的に成熟型 I L—1 8を分泌するものである請求項 1〜 6のいずれかに記載の動物又はその子孫。

8 . 請求項 1〜 7のいずれか 1項記載の動物又はその子孫に被験物質を投与し、アトピー性皮膚炎の改善効果を検定することを特徴とするァトピー性皮膚炎の予防又は治療用物質のスクリーニング方法。

9 . 請求項 8記載のスクリ一ニング方法によりアトピー性皮膚炎の改善効果を有すると判定される物質を含有するァトピー性皮膚炎の予防又は治療用医薬。 '

1 0 . 非ヒト哺乳動物の受精卵に、外来性の I L一 1 8遺伝子を皮膚特異的に発現するように組み込んだ D NAを導入し、当該受精卵を当該動物の雌に着床させることを特徴とする請求項 1〜 7記載の動物又はその子孫の作製方法。