JP2002058388A - 痩身のトランスジェニック動物 - Google Patents
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Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 肥満を導く機構をより理解し、そして特定の
型の肥満を制御するストラテジーを開発するために、脂
肪細胞の分化および脂肪の貯蔵を調節する分子の事象の
より優れた知識を、生物レベルで得るための動物モデル
を提供すること。 【解決手段】 ゲノムＤＮＡが、Ｃ／ＥＢＰβポリペプ
チドをコードするＤＮＡ配列に作動可能に連結されたＣ
／ＥＢＰαプロモーターを含む遺伝子を含む、トランス
ジェニック動物であって、ここで、該トランスジェニッ
ク動物は、ゲノムＤＮＡが該遺伝子を含まない対照動物
と比較して、該トランスジェニック動物の白色脂肪組織
において低減した脂肪蓄積を示す、トランスジェニック
動物。
型の肥満を制御するストラテジーを開発するために、脂
肪細胞の分化および脂肪の貯蔵を調節する分子の事象の
より優れた知識を、生物レベルで得るための動物モデル
を提供すること。 【解決手段】 ゲノムＤＮＡが、Ｃ／ＥＢＰβポリペプ
チドをコードするＤＮＡ配列に作動可能に連結されたＣ
／ＥＢＰαプロモーターを含む遺伝子を含む、トランス
ジェニック動物であって、ここで、該トランスジェニッ
ク動物は、ゲノムＤＮＡが該遺伝子を含まない対照動物
と比較して、該トランスジェニック動物の白色脂肪組織
において低減した脂肪蓄積を示す、トランスジェニック
動物。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、概して、遺伝子工
学の分野に関する。より詳細には、トランスジェニック
動物およびそれを作製するための方法および組成物に関
する。
学の分野に関する。より詳細には、トランスジェニック
動物およびそれを作製するための方法および組成物に関
する。
【０００２】
【従来の技術】（発明の背景）肥満は、多数の重篤な疾
病（例えば、心疾患、関節炎、および糖尿病）の有意な
危険因子である。
病（例えば、心疾患、関節炎、および糖尿病）の有意な
危険因子である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】肥満を導く機構をより
理解し、そして特定の型の肥満を制御するストラテジー
を開発するために、脂肪細胞の分化および脂肪の貯蔵を
調節する分子の事象のより優れた知識が、生物レベルで
必要とされる。変化した脂肪代謝を有するトランスジェ
ニック動物は、遺伝子発現と脂肪代謝との間の関係を精
査するための独特の機会を提供する。
理解し、そして特定の型の肥満を制御するストラテジー
を開発するために、脂肪細胞の分化および脂肪の貯蔵を
調節する分子の事象のより優れた知識が、生物レベルで
必要とされる。変化した脂肪代謝を有するトランスジェ
ニック動物は、遺伝子発現と脂肪代謝との間の関係を精
査するための独特の機会を提供する。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、１つの局面に
おいて、そのゲノムＤＮＡがＣ／ＥＢＰβポリペプチド
をコードするＤＮＡ配列に作動可能に連結されたＣ／Ｅ
ＢＰαプロモーターを含む遺伝子を含む、トランスジェ
ニック動物を提供する。ここで、該トランスジェニック
動物は、ゲノムＤＮＡが該遺伝子を含まない対照動物と
比較して、該トランスジェニック動物の白色脂肪組織に
おいて低減した脂肪蓄積を示す。１つの実施態様におい
て、前記トランスジェニック動物は、マウスである。別
の実施態様において、上記トランスジェニック動物は、
そのゲノムＤＮＡが、２コピーの前記遺伝子を含む。他
の実施態様において、前記トランスジェニック動物の白
色脂肪組織における脂肪細胞の大きさは、前記対照動物
の白色脂肪組織における脂肪細胞の大きさよりも小さ
い。他の実施態様において、前記トランスジェニック動
物における血清グルコースおよびトリアシルグリセリド
のレベルは、前記対照動物における血清グルコースおよ
びトリアシルグリセリドのレベルと実質的に同じであ
る。他の実施態様において、利用可能な食物の量が制限
されず、そして同じ種類の食物が前記トランスジェニッ
ク動物および前記対照動物に提示されるならば、該トラ
ンスジェニック動物が、該対照動物よりも多量の食物を
消費する。他の実施態様において、前記低減した脂肪蓄
積は、前記トランスジェニック動物および前記対照動物
に約３０重量％の脂肪を含む餌が与えられた場合に観察
される。他の実施態様において、前記トランスジェニッ
ク動物の白色脂肪組織におけるアジプシンの発現レベル
が、前記対照動物の白色脂肪組織におけるアジプシンの
発現レベルと比較して低減している。他の実施態様にお
いて、前記トランスジェニック動物の白色脂肪組織にお
けるレプチン（ｌｅｐｔｉｎ）の発現レベルは、前記対
照動物の白色脂肪組織におけるレプチンの発現レベルと
比較して低減している。他の実施態様において、前記ト
ランスジェニック動物における褐色脂肪組織の総質量
が、前記対照動物における褐色脂肪組織の総質量よりも
多い。
おいて、そのゲノムＤＮＡがＣ／ＥＢＰβポリペプチド
をコードするＤＮＡ配列に作動可能に連結されたＣ／Ｅ
ＢＰαプロモーターを含む遺伝子を含む、トランスジェ
ニック動物を提供する。ここで、該トランスジェニック
動物は、ゲノムＤＮＡが該遺伝子を含まない対照動物と
比較して、該トランスジェニック動物の白色脂肪組織に
おいて低減した脂肪蓄積を示す。１つの実施態様におい
て、前記トランスジェニック動物は、マウスである。別
の実施態様において、上記トランスジェニック動物は、
そのゲノムＤＮＡが、２コピーの前記遺伝子を含む。他
の実施態様において、前記トランスジェニック動物の白
色脂肪組織における脂肪細胞の大きさは、前記対照動物
の白色脂肪組織における脂肪細胞の大きさよりも小さ
い。他の実施態様において、前記トランスジェニック動
物における血清グルコースおよびトリアシルグリセリド
のレベルは、前記対照動物における血清グルコースおよ
びトリアシルグリセリドのレベルと実質的に同じであ
る。他の実施態様において、利用可能な食物の量が制限
されず、そして同じ種類の食物が前記トランスジェニッ
ク動物および前記対照動物に提示されるならば、該トラ
ンスジェニック動物が、該対照動物よりも多量の食物を
消費する。他の実施態様において、前記低減した脂肪蓄
積は、前記トランスジェニック動物および前記対照動物
に約３０重量％の脂肪を含む餌が与えられた場合に観察
される。他の実施態様において、前記トランスジェニッ
ク動物の白色脂肪組織におけるアジプシンの発現レベル
が、前記対照動物の白色脂肪組織におけるアジプシンの
発現レベルと比較して低減している。他の実施態様にお
いて、前記トランスジェニック動物の白色脂肪組織にお
けるレプチン（ｌｅｐｔｉｎ）の発現レベルは、前記対
照動物の白色脂肪組織におけるレプチンの発現レベルと
比較して低減している。他の実施態様において、前記ト
ランスジェニック動物における褐色脂肪組織の総質量
が、前記対照動物における褐色脂肪組織の総質量よりも
多い。
【０００５】他の実施態様において、前記トランスジェ
ニック動物の白色脂肪組織における脂肪細胞の大きさ
は、前記対照動物の白色脂肪組織における脂肪細胞の大
きさよりも小さく；該トランスジェニック動物における
血清グルコースおよびトリアシルグリセリドのレベル
が、該対照動物における血清グルコースおよびトリアシ
ルグリセリドのレベルと実質的に同じであり；利用可能
な食物の量が制限されず、そして同じ種類の食物が該ト
ランスジェニック動物および該対照動物に提示されるな
らば、該トランスジェニック動物が、該対照動物よりも
多量の食物を消費し；前記低減した脂肪蓄積が、該トラ
ンスジェニック動物および該対照動物に約３０重量％の
脂肪を含む餌が与えられた場合に観察され；該トランス
ジェニック動物の白色脂肪組織におけるアジプシンの発
現レベルが、該対照動物の白色脂肪組織におけるアジプ
シンの発現レベルと比較して低減しており；該トランス
ジェニック動物の白色脂肪組織におけるレプチンの発現
レベルが、該対照動物の白色脂肪組織におけるレプチン
の発現レベルと比較して低減しており；該トランスジェ
ニック動物における褐色脂肪組織の総質量が、該対照動
物における褐色脂肪組織の総質量よりも多く；そして該
トランスジェニック動物の白色脂肪組織におけるミトコ
ンドリア含量が、該対照動物の白色脂肪組織におけるミ
トコンドリア含量よりも高い。
ニック動物の白色脂肪組織における脂肪細胞の大きさ
は、前記対照動物の白色脂肪組織における脂肪細胞の大
きさよりも小さく；該トランスジェニック動物における
血清グルコースおよびトリアシルグリセリドのレベル
が、該対照動物における血清グルコースおよびトリアシ
ルグリセリドのレベルと実質的に同じであり；利用可能
な食物の量が制限されず、そして同じ種類の食物が該ト
ランスジェニック動物および該対照動物に提示されるな
らば、該トランスジェニック動物が、該対照動物よりも
多量の食物を消費し；前記低減した脂肪蓄積が、該トラ
ンスジェニック動物および該対照動物に約３０重量％の
脂肪を含む餌が与えられた場合に観察され；該トランス
ジェニック動物の白色脂肪組織におけるアジプシンの発
現レベルが、該対照動物の白色脂肪組織におけるアジプ
シンの発現レベルと比較して低減しており；該トランス
ジェニック動物の白色脂肪組織におけるレプチンの発現
レベルが、該対照動物の白色脂肪組織におけるレプチン
の発現レベルと比較して低減しており；該トランスジェ
ニック動物における褐色脂肪組織の総質量が、該対照動
物における褐色脂肪組織の総質量よりも多く；そして該
トランスジェニック動物の白色脂肪組織におけるミトコ
ンドリア含量が、該対照動物の白色脂肪組織におけるミ
トコンドリア含量よりも高い。
【０００６】他の実施態様において、本発明のトランス
ジェニック動物は、そのゲノムＤＮＡが、２コピーの前
記遺伝子を含む。他の実施態様において、前記トランス
ジェニック動物の白色脂肪組織における脂肪細胞の大き
さは、前記対照動物の白色脂肪組織における脂肪細胞の
大きさよりも小さい。他の実施態様において、前記トラ
ンスジェニック動物における血清グルコースおよびトリ
アシルグリセリドのレベルは、前記対照動物における血
清グルコースおよびトリアシルグリセリドのレベルと実
質的に同じである。他の実施態様において、利用可能な
食物の量が制限されず、そして同じ種類の食物が前記ト
ランスジェニック動物および前記対照動物に提示される
ならば、該トランスジェニック動物は、該対照動物より
も多量の食物を消費する。他の実施態様において、前記
低減した脂肪蓄積が、前記トランスジェニック動物およ
び前記対照動物に約３０重量％の脂肪を含む餌が与えら
れた場合に観察される。他の実施態様において、前記ト
ランスジェニック動物の白色脂肪組織におけるアジプシ
ンの発現レベルは、前記対照動物の白色脂肪組織におけ
るアジプシンの発現レベルと比較して低減している。他
の実施態様において、前記トランスジェニック動物の白
色脂肪組織におけるレプチンの発現レベルは、前記対照
動物の白色脂肪組織におけるレプチンの発現レベルと比
較して低減している。他の実施態様において、前記トラ
ンスジェニック動物における褐色脂肪組織の総質量は、
前記対照動物における褐色脂肪組織の総質量よりも多
い。
ジェニック動物は、そのゲノムＤＮＡが、２コピーの前
記遺伝子を含む。他の実施態様において、前記トランス
ジェニック動物の白色脂肪組織における脂肪細胞の大き
さは、前記対照動物の白色脂肪組織における脂肪細胞の
大きさよりも小さい。他の実施態様において、前記トラ
ンスジェニック動物における血清グルコースおよびトリ
アシルグリセリドのレベルは、前記対照動物における血
清グルコースおよびトリアシルグリセリドのレベルと実
質的に同じである。他の実施態様において、利用可能な
食物の量が制限されず、そして同じ種類の食物が前記ト
ランスジェニック動物および前記対照動物に提示される
ならば、該トランスジェニック動物は、該対照動物より
も多量の食物を消費する。他の実施態様において、前記
低減した脂肪蓄積が、前記トランスジェニック動物およ
び前記対照動物に約３０重量％の脂肪を含む餌が与えら
れた場合に観察される。他の実施態様において、前記ト
ランスジェニック動物の白色脂肪組織におけるアジプシ
ンの発現レベルは、前記対照動物の白色脂肪組織におけ
るアジプシンの発現レベルと比較して低減している。他
の実施態様において、前記トランスジェニック動物の白
色脂肪組織におけるレプチンの発現レベルは、前記対照
動物の白色脂肪組織におけるレプチンの発現レベルと比
較して低減している。他の実施態様において、前記トラ
ンスジェニック動物における褐色脂肪組織の総質量は、
前記対照動物における褐色脂肪組織の総質量よりも多
い。
【０００７】他の実施態様において、前記トランスジェ
ニック動物の白色脂肪組織における脂肪細胞の大きさ
が、前記対照動物の白色脂肪組織における脂肪細胞の大
きさよりも小さく；該トランスジェニック動物における
血清グルコースおよびトリアシルグリセリドのレベル
が、該対照動物における血清グルコースおよびトリアシ
ルグリセリドのレベルと実質的に同じであり；利用可能
な食物の量が制限されず、そして同じ種類の食物が該ト
ランスジェニック動物および該対照動物に提示されるな
らば、該トランスジェニック動物が、該対照動物よりも
多量の食物を消費し；前記低減した脂肪蓄積が、該トラ
ンスジェニック動物および該対照動物に約３０重量％の
脂肪を含む餌が与えられた場合に観察され；該トランス
ジェニック動物の白色脂肪組織におけるアジプシンの発
現レベルが、該対照動物の白色脂肪組織におけるアジプ
シンの発現レベルと比較して低減しており；該トランス
ジェニック動物の白色脂肪組織におけるレプチンの発現
レベルが、該対照動物の白色脂肪組織におけるレプチン
の発現レベルと比較して低減しており；該トランスジェ
ニック動物における褐色脂肪組織の総質量が、該対照動
物における褐色脂肪組織の総質量よりも多く；そして該
トランスジェニック動物の白色脂肪組織におけるミトコ
ンドリア含量が、該対照動物の白色脂肪組織におけるミ
トコンドリア含量よりも高い。
ニック動物の白色脂肪組織における脂肪細胞の大きさ
が、前記対照動物の白色脂肪組織における脂肪細胞の大
きさよりも小さく；該トランスジェニック動物における
血清グルコースおよびトリアシルグリセリドのレベル
が、該対照動物における血清グルコースおよびトリアシ
ルグリセリドのレベルと実質的に同じであり；利用可能
な食物の量が制限されず、そして同じ種類の食物が該ト
ランスジェニック動物および該対照動物に提示されるな
らば、該トランスジェニック動物が、該対照動物よりも
多量の食物を消費し；前記低減した脂肪蓄積が、該トラ
ンスジェニック動物および該対照動物に約３０重量％の
脂肪を含む餌が与えられた場合に観察され；該トランス
ジェニック動物の白色脂肪組織におけるアジプシンの発
現レベルが、該対照動物の白色脂肪組織におけるアジプ
シンの発現レベルと比較して低減しており；該トランス
ジェニック動物の白色脂肪組織におけるレプチンの発現
レベルが、該対照動物の白色脂肪組織におけるレプチン
の発現レベルと比較して低減しており；該トランスジェ
ニック動物における褐色脂肪組織の総質量が、該対照動
物における褐色脂肪組織の総質量よりも多く；そして該
トランスジェニック動物の白色脂肪組織におけるミトコ
ンドリア含量が、該対照動物の白色脂肪組織におけるミ
トコンドリア含量よりも高い。
【０００８】本発明は、別の局面において、トランスジ
ェニック動物の作製方法を提供する。この作製方法は、
該トランスジェニック動物のゲノムＤＮＡにおけるＣ／
ＥＢＰα遺伝子の少なくとも一部を、Ｃ／ＥＢＰβポリ
ペプチドをコードする第１の配列および選択マーカーを
コードする第２の配列を含むＤＮＡ挿入物で置換する工
程；ならびに該第２の配列を該ゲノムＤＮＡから除去
し、それにより、該トランスジェニック動物を作製する
工程を包含する。本発明は、他の局面において、Ｃ／Ｅ
ＢＰβポリペプチドをコードする配列に作動可能に連結
されたＣ／ＥＢＰαプロモーターを含む、核酸を提供す
る。
ェニック動物の作製方法を提供する。この作製方法は、
該トランスジェニック動物のゲノムＤＮＡにおけるＣ／
ＥＢＰα遺伝子の少なくとも一部を、Ｃ／ＥＢＰβポリ
ペプチドをコードする第１の配列および選択マーカーを
コードする第２の配列を含むＤＮＡ挿入物で置換する工
程；ならびに該第２の配列を該ゲノムＤＮＡから除去
し、それにより、該トランスジェニック動物を作製する
工程を包含する。本発明は、他の局面において、Ｃ／Ｅ
ＢＰβポリペプチドをコードする配列に作動可能に連結
されたＣ／ＥＢＰαプロモーターを含む、核酸を提供す
る。
【０００９】本発明のトランスジェニック動物はまた、
他の局面において、前記トランスジェニック動物の白色
脂肪組織におけるミトコンドリア含量が、前記対照動物
の白色脂肪組織におけるミトコンドリア含量よりも高
い。
他の局面において、前記トランスジェニック動物の白色
脂肪組織におけるミトコンドリア含量が、前記対照動物
の白色脂肪組織におけるミトコンドリア含量よりも高
い。
【００１０】
【発明の実施の形態】（発明の要旨）本発明は、ＣＣＡ
ＡＴ／エンハンサー結合タンパク質（Ｃ／ＥＢＰ）α遺
伝子を含む新しいトランスジェニック動物に基づき、こ
こで、Ｃ／ＥＢＰαポリペプチドをコードするオープン
リーディングフレームは、Ｃ／ＥＢＰβのオープンリー
ディングフレームと置換されている。この動物は、白色
脂肪組織（ＷＡＴ）中の脂肪の蓄積の減少を示す。従っ
て、本発明のトランスジェニック動物は、独特の動物モ
デルを提供し、ここで、ＷＡＴ質量の減少の原因である
遺伝的機構および生化学的機構を解読し得る。
ＡＴ／エンハンサー結合タンパク質（Ｃ／ＥＢＰ）α遺
伝子を含む新しいトランスジェニック動物に基づき、こ
こで、Ｃ／ＥＢＰαポリペプチドをコードするオープン
リーディングフレームは、Ｃ／ＥＢＰβのオープンリー
ディングフレームと置換されている。この動物は、白色
脂肪組織（ＷＡＴ）中の脂肪の蓄積の減少を示す。従っ
て、本発明のトランスジェニック動物は、独特の動物モ
デルを提供し、ここで、ＷＡＴ質量の減少の原因である
遺伝的機構および生化学的機構を解読し得る。
【００１１】従って、本発明は、ゲノムＤＮＡがＣ／Ｅ
ＢＰβポリペプチドをコードするＤＮＡ配列に作動可能
に連結されたＣ／ＥＢＰαプロモーターを有する遺伝子
を含む、トランスジェニック動物（例えば、非ヒト哺乳
動物、げっ歯類、ラット、マウス、ウサギ、ブタ、ウ
シ、ニワトリ、または魚）を特色とする。本発明におい
て、トランスジェニック動物は、非ヒト動物であり得
る。「作動可能に連結された」とは、ヌクレオチド配列
（例えば、オープンリーディングフレーム）が、インビ
トロまたはインビボでヌクレオチド配列の発現を可能に
する様式において、調節配列（例えば、プロモーター）
に連結されることを意味する。このトランスジェニック
動物は、ゲノムＤＮＡがこの遺伝子を含まない対照動物
（例えば、トランスジェニック動物が作製された動物が
由来する野生型動物）と比較した場合、そのＷＡＴ中の
脂肪の蓄積の減少（例えば、統計学的に有意な減少）を
示す。
ＢＰβポリペプチドをコードするＤＮＡ配列に作動可能
に連結されたＣ／ＥＢＰαプロモーターを有する遺伝子
を含む、トランスジェニック動物（例えば、非ヒト哺乳
動物、げっ歯類、ラット、マウス、ウサギ、ブタ、ウ
シ、ニワトリ、または魚）を特色とする。本発明におい
て、トランスジェニック動物は、非ヒト動物であり得
る。「作動可能に連結された」とは、ヌクレオチド配列
（例えば、オープンリーディングフレーム）が、インビ
トロまたはインビボでヌクレオチド配列の発現を可能に
する様式において、調節配列（例えば、プロモーター）
に連結されることを意味する。このトランスジェニック
動物は、ゲノムＤＮＡがこの遺伝子を含まない対照動物
（例えば、トランスジェニック動物が作製された動物が
由来する野生型動物）と比較した場合、そのＷＡＴ中の
脂肪の蓄積の減少（例えば、統計学的に有意な減少）を
示す。
【００１２】「Ｃ／ＥＢＰα」プロモーターとは、野生
型Ｃ／ＥＢＰα遺伝子の発現と同一ではなくとも、少な
くとも実質的に類似する時間的かつ細胞型特異的な様式
において、ＲＮＡの転写を指向するプロモーターをい
う。従って、「Ｃ／ＥＢＰα」プロモーターは、野生型
Ｃ／ＥＢＰαプロモーター、ならびにＣ／ＥＢＰαプロ
モーターの時間的かつ組織特異的な発現に影響しない、
挿入、欠失、または置換を含むようなプロモーターを包
含する。同様に、「Ｃ／ＥＢＰβポリペプチド」は、野
生型Ｃ／ＥＢＰβポリペプチドと関連する少なくとも１
つの生化学的活性または細胞活性を有するポリペプチド
である。従って、Ｃ／ＥＢＰβポリペプチドは、野生型
Ｃ／ＥＢＰβポリペプチド、ならびにＣ／ＥＢＰβポリ
ペプチドの生化学的活性または細胞活性に影響しない、
アミノ酸の挿入、欠失、または置換を含むようなポリペ
プチドを包含する。
型Ｃ／ＥＢＰα遺伝子の発現と同一ではなくとも、少な
くとも実質的に類似する時間的かつ細胞型特異的な様式
において、ＲＮＡの転写を指向するプロモーターをい
う。従って、「Ｃ／ＥＢＰα」プロモーターは、野生型
Ｃ／ＥＢＰαプロモーター、ならびにＣ／ＥＢＰαプロ
モーターの時間的かつ組織特異的な発現に影響しない、
挿入、欠失、または置換を含むようなプロモーターを包
含する。同様に、「Ｃ／ＥＢＰβポリペプチド」は、野
生型Ｃ／ＥＢＰβポリペプチドと関連する少なくとも１
つの生化学的活性または細胞活性を有するポリペプチド
である。従って、Ｃ／ＥＢＰβポリペプチドは、野生型
Ｃ／ＥＢＰβポリペプチド、ならびにＣ／ＥＢＰβポリ
ペプチドの生化学的活性または細胞活性に影響しない、
アミノ酸の挿入、欠失、または置換を含むようなポリペ
プチドを包含する。
【００１３】トランスジェニック動物のゲノムＤＮＡは
また、トランスジェニック動物がその白色脂肪組織中の
脂肪の蓄積の減少を示す限り、複数のコピー（すなわ
ち、２つ以上のコピー）の遺伝子を含み得る。さらに、
この遺伝子が、野生型の内因性Ｃ／ＥＢＰα遺伝子の部
分をＣ／ＥＢＰβオープンリーディングフレームで置換
することによって作製される場合、このトランスジェニ
ック動物は、変異されたＣ／ＥＢＰα遺伝子に対してホ
モ接合性またはヘテロ接合性であり得る。
また、トランスジェニック動物がその白色脂肪組織中の
脂肪の蓄積の減少を示す限り、複数のコピー（すなわ
ち、２つ以上のコピー）の遺伝子を含み得る。さらに、
この遺伝子が、野生型の内因性Ｃ／ＥＢＰα遺伝子の部
分をＣ／ＥＢＰβオープンリーディングフレームで置換
することによって作製される場合、このトランスジェニ
ック動物は、変異されたＣ／ＥＢＰα遺伝子に対してホ
モ接合性またはヘテロ接合性であり得る。
【００１４】本発明のトランスジェニック動物はまた、
１以上の以下の表現型を含み得る：トランスジェニック
動物のＷＡＴ中の脂肪細胞の大きさが、対照動物のＷＡ
Ｔ中の脂肪細胞の大きさよりも小さい；トランスジェニ
ック動物の血清グルコースレベルおよびトリアシルグリ
セリドレベルが、対照動物のこれらのレベルと実質的に
同じ（すなわち、統計学的に有意な差がない）；利用可
能な食物の量が制限されておらず、そして同じ種類の食
物をトランスジェニック動物および対照動物に対して提
示されるならば、トランスジェニック動物は、対照動物
よりも多量の食物を消費する；トランスジェニク動物お
よび対照動物が、少なくとも約３０重量％の脂肪である
食餌を与えられた場合、脂肪の蓄積の減少が観察され
る；対照動物の白色脂肪組織中のアジプシン（ａｄｉｐ
ｓｉｎ）の発現レベルと比較した場合、トランスジェニ
ック動物の白色脂肪組織中のアジプシンの発現レベル
は、減少される；トランスジェニック動物の白色脂肪組
織中のレプチンの発現レベルは、対照動物の白色脂肪組
織中のレプチンの発現レベルと比較した場合、減少され
る；トランスジェニック動物における褐色脂肪組織中の
総質量は、対照動物における褐色脂肪組織の総質量より
も大きい；ならびに、トランスジェニック動物の白色脂
肪組織におけるミトコンドリア含量は、対照動物の白色
脂肪組織におけるミトコンドリア含量よりも多い。用語
「より小さい（な）」「減少した」「〜よりも」「〜よ
り多い」または「〜より大きい（な）」は、統計学的に
有意である差について言及し得る。
１以上の以下の表現型を含み得る：トランスジェニック
動物のＷＡＴ中の脂肪細胞の大きさが、対照動物のＷＡ
Ｔ中の脂肪細胞の大きさよりも小さい；トランスジェニ
ック動物の血清グルコースレベルおよびトリアシルグリ
セリドレベルが、対照動物のこれらのレベルと実質的に
同じ（すなわち、統計学的に有意な差がない）；利用可
能な食物の量が制限されておらず、そして同じ種類の食
物をトランスジェニック動物および対照動物に対して提
示されるならば、トランスジェニック動物は、対照動物
よりも多量の食物を消費する；トランスジェニク動物お
よび対照動物が、少なくとも約３０重量％の脂肪である
食餌を与えられた場合、脂肪の蓄積の減少が観察され
る；対照動物の白色脂肪組織中のアジプシン（ａｄｉｐ
ｓｉｎ）の発現レベルと比較した場合、トランスジェニ
ック動物の白色脂肪組織中のアジプシンの発現レベル
は、減少される；トランスジェニック動物の白色脂肪組
織中のレプチンの発現レベルは、対照動物の白色脂肪組
織中のレプチンの発現レベルと比較した場合、減少され
る；トランスジェニック動物における褐色脂肪組織中の
総質量は、対照動物における褐色脂肪組織の総質量より
も大きい；ならびに、トランスジェニック動物の白色脂
肪組織におけるミトコンドリア含量は、対照動物の白色
脂肪組織におけるミトコンドリア含量よりも多い。用語
「より小さい（な）」「減少した」「〜よりも」「〜よ
り多い」または「〜より大きい（な）」は、統計学的に
有意である差について言及し得る。
【００１５】本発明はまた、トランスジェニック動物の
ゲノムＤＮＡにおけるＣ／ＥＢＰα遺伝子の少なくとも
一部を、Ｃ／ＥＢＰβポリペプチドをコードする第１の
配列および選択マーカーをコードする第２の配列を含む
ＤＮＡインサートで置換する工程；およびゲノムＤＮＡ
から第２の配列を除去し、これによりトランスジェニッ
ク動物を作製する工程により本発明のトランスジェニッ
ク動物を作製する方法を特徴付ける。
ゲノムＤＮＡにおけるＣ／ＥＢＰα遺伝子の少なくとも
一部を、Ｃ／ＥＢＰβポリペプチドをコードする第１の
配列および選択マーカーをコードする第２の配列を含む
ＤＮＡインサートで置換する工程；およびゲノムＤＮＡ
から第２の配列を除去し、これによりトランスジェニッ
ク動物を作製する工程により本発明のトランスジェニッ
ク動物を作製する方法を特徴付ける。
【００１６】さらに、本発明は、本発明のトランスジェ
ニック動物作製のために有用であるＣ／ＥＢＰβポリペ
プチドをコードする配列に作動可能に連結されるＣ／Ｅ
ＢＰαプロモーターを含む核酸を含む。
ニック動物作製のために有用であるＣ／ＥＢＰβポリペ
プチドをコードする配列に作動可能に連結されるＣ／Ｅ
ＢＰαプロモーターを含む核酸を含む。
【００１７】本発明のトランスジェニック動物は、痩せ
た（すなわち痩身）の（低脂肪の）身体をもたらす生化
学的決定因子および遺伝的決定因子を解明するために用
いられ得る。例えば、トランスジェニック動物および対
照動物の白色脂肪組織由来のｃＤＮＡは、発現プロフィ
ールにおけるいかなる差異をも明らかにするためにＤＮ
Ａチップを用いてインターロゲート（ｉｎｔｅｒｒｏｇ
ａｔｅ）され得る。個々のヒット、または発現において
有意な変化を示す遺伝子は、体脂肪減少について可能性
のある薬物または薬物標的であり得るかまたはそれをコ
ードし得る。
た（すなわち痩身）の（低脂肪の）身体をもたらす生化
学的決定因子および遺伝的決定因子を解明するために用
いられ得る。例えば、トランスジェニック動物および対
照動物の白色脂肪組織由来のｃＤＮＡは、発現プロフィ
ールにおけるいかなる差異をも明らかにするためにＤＮ
Ａチップを用いてインターロゲート（ｉｎｔｅｒｒｏｇ
ａｔｅ）され得る。個々のヒット、または発現において
有意な変化を示す遺伝子は、体脂肪減少について可能性
のある薬物または薬物標的であり得るかまたはそれをコ
ードし得る。
【００１８】本発明の他の特徴または利点は、以下の発
明の詳細な説明から、そしてまた特許請求の範囲から明
確になる。
明の詳細な説明から、そしてまた特許請求の範囲から明
確になる。
【００１９】（発明の詳細な説明）本発明は、白色脂肪
組織の減少を示すトランスジェニック動物に関する。こ
れらの動物は、脂肪代謝に関与する分子パラメーターを
解明するための重要な動物モデルとして役立つ。
組織の減少を示すトランスジェニック動物に関する。こ
れらの動物は、脂肪代謝に関与する分子パラメーターを
解明するための重要な動物モデルとして役立つ。
【００２０】動物（例えば、哺乳動物）の受精卵へのト
ランスジーンの導入は、トランスジェニック技術におけ
るかなり多くの標準的な技術により達成される。例え
ば、Ｈｏｇａｎら、Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ
Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ；Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ
ｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８６；および
米国特許第５，８１１，６３４号を参照のこと。最も通
常には、トランスジーンは、マイクロインジェクション
により胚に導入される。
ランスジーンの導入は、トランスジェニック技術におけ
るかなり多くの標準的な技術により達成される。例え
ば、Ｈｏｇａｎら、Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ
Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ；Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ
ｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８６；および
米国特許第５，８１１，６３４号を参照のこと。最も通
常には、トランスジーンは、マイクロインジェクション
により胚に導入される。
【００２１】一旦、トランスジーンが卵に導入される
と、この卵は、短期間インキュベートされ、次いで、卵
が得られたのと同じ種の偽妊娠状態の動物に移入される
（Ｈｏｇａｎら、前出）。哺乳動物の場合、代表的に
は、１実験あたり１２５の卵が注入され、そのおよそ３
分の２が手順を生き残る。２０の生存卵が、偽妊娠状態
の哺乳動物に移入され、その４〜１０が生きた子孫に成
長する。代表的には、子孫の１０〜３０％（マウスの場
合）がトランスジーンを保有する。
と、この卵は、短期間インキュベートされ、次いで、卵
が得られたのと同じ種の偽妊娠状態の動物に移入される
（Ｈｏｇａｎら、前出）。哺乳動物の場合、代表的に
は、１実験あたり１２５の卵が注入され、そのおよそ３
分の２が手順を生き残る。２０の生存卵が、偽妊娠状態
の哺乳動物に移入され、その４〜１０が生きた子孫に成
長する。代表的には、子孫の１０〜３０％（マウスの場
合）がトランスジーンを保有する。
【００２２】本発明のトランスジェニック動物を同定す
るため、子孫は、サザンブロットハイブリダイゼーショ
ンまたはＰＣＲのような標準的手順を用いてトランスジ
ーンの存在について試験される。トランスジーンの発現
はまた、ノーザンブロット、ウエスタンブロットおよび
免疫学的アッセイを用いて評価され得る。
るため、子孫は、サザンブロットハイブリダイゼーショ
ンまたはＰＣＲのような標準的手順を用いてトランスジ
ーンの存在について試験される。トランスジーンの発現
はまた、ノーザンブロット、ウエスタンブロットおよび
免疫学的アッセイを用いて評価され得る。
【００２３】さらなる労力なしに、当業者は、上記開示
および以下の記載に基づいて、その最も完全な範囲まで
本発明を利用し得ると考えられる。以下の実施例は、当
業者がどのように本発明を実施し得るかの単なる例示と
して解釈されるべきであり、そしていかなる方法でも開
示の残り部分を制限しない。本開示において引用される
すべての刊行物は、参考として本明細書に援用される。
および以下の記載に基づいて、その最も完全な範囲まで
本発明を利用し得ると考えられる。以下の実施例は、当
業者がどのように本発明を実施し得るかの単なる例示と
して解釈されるべきであり、そしていかなる方法でも開
示の残り部分を制限しない。本開示において引用される
すべての刊行物は、参考として本明細書に援用される。
【００２４】
【実施例】（材料および方法）標的化構築物の作製。遺
伝子標的化構築物を調製するために用いられるＣ／ｅｂ
ｐαゲノムフラグメントは、Ｌｅｅら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌ
ｌ Ｂｉｏｌ．１７：６０１４〜６０２２、１９９７に
記載されている。手短には、ｃ／ｅｂｐαゲノムクロー
ンを、マウス１２９ＳＶＪ λ ＤＡＳＨゲノムライブ
ラリー （Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）から入手した。そし
て、Ｃ／ＥＢＰαコード領域を含む９．５−ｋｂ Ｓａ
ｌＩ−ＢａｍＨＩフラグメントを単離し、そして標的構
築物を調製するために使用した。第１のｌｏｘＰ部位
を、Ｃ／ＥＢＰαの発現を妨害しないように、ｃ／ｅｂ
ｐα遺伝子の転写開始部位の４０ｂｐ下流に位置するＤ
ｒａＩＩＩ部位の５９非翻訳領域に挿入した。Ｈｉｎｄ
ＩＩＩ部位もまた、第１のｌｏｘＰ部位とともに組み込
んだ。ＰＧＫ−ｎｅｏ遺伝子に隣接する第２および第３
のｌｏｘＰ部位を、ポリアデニル化シグナルの２ｋｂ下
流のＥｃｏＲＩ部位に、かつ、第１のｌｏｘＰ部位と同
じ方向に組み込んだ。この標的化構築物は、第１のｌｏ
ｘＰ部位の下流の４ｋｂの相同なＤＮＡおよびｌｏｘＰ
−ＰＧＫ−ｎｅｏカセットの下流の１．３ｋｂの相同な
ＤＮＡを含んだ。
伝子標的化構築物を調製するために用いられるＣ／ｅｂ
ｐαゲノムフラグメントは、Ｌｅｅら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌ
ｌ Ｂｉｏｌ．１７：６０１４〜６０２２、１９９７に
記載されている。手短には、ｃ／ｅｂｐαゲノムクロー
ンを、マウス１２９ＳＶＪ λ ＤＡＳＨゲノムライブ
ラリー （Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）から入手した。そし
て、Ｃ／ＥＢＰαコード領域を含む９．５−ｋｂ Ｓａ
ｌＩ−ＢａｍＨＩフラグメントを単離し、そして標的構
築物を調製するために使用した。第１のｌｏｘＰ部位
を、Ｃ／ＥＢＰαの発現を妨害しないように、ｃ／ｅｂ
ｐα遺伝子の転写開始部位の４０ｂｐ下流に位置するＤ
ｒａＩＩＩ部位の５９非翻訳領域に挿入した。Ｈｉｎｄ
ＩＩＩ部位もまた、第１のｌｏｘＰ部位とともに組み込
んだ。ＰＧＫ−ｎｅｏ遺伝子に隣接する第２および第３
のｌｏｘＰ部位を、ポリアデニル化シグナルの２ｋｂ下
流のＥｃｏＲＩ部位に、かつ、第１のｌｏｘＰ部位と同
じ方向に組み込んだ。この標的化構築物は、第１のｌｏ
ｘＰ部位の下流の４ｋｂの相同なＤＮＡおよびｌｏｘＰ
−ＰＧＫ−ｎｅｏカセットの下流の１．３ｋｂの相同な
ＤＮＡを含んだ。
【００２５】この標的化構築物において、Ｃ／ＥＢＰα
の全タンパク質コード領域（１１８８ｂｐ、開始コドン
〜停止コドン）を欠失させ、そしてマウスＣ／ＥＢＰβ
タンパク質コード領域を含む８３１ｂｐのＤＮＡフラグ
メントで置換した。次いで、ｌｏｘＰ−ＰＧＫ．ｎｅｏ
−ｌｏｘＰ発現カセットを、停止コドンＴＡＧの１５９
ｂｐ下流のＳｐｅＩ部位に挿入した。標的化ベクター
は、Ｃ／ＥＢＰα開始コドンの上流に４．１ｋｂの相同
ＤＮＡおよびｌｏｘＰ−ＰＧＫ−ｎｅｏ−ｌｏｘＰカセ
ットの下流に３．８ｋｂの相同ＤＮＡを含んでいた。
の全タンパク質コード領域（１１８８ｂｐ、開始コドン
〜停止コドン）を欠失させ、そしてマウスＣ／ＥＢＰβ
タンパク質コード領域を含む８３１ｂｐのＤＮＡフラグ
メントで置換した。次いで、ｌｏｘＰ−ＰＧＫ．ｎｅｏ
−ｌｏｘＰ発現カセットを、停止コドンＴＡＧの１５９
ｂｐ下流のＳｐｅＩ部位に挿入した。標的化ベクター
は、Ｃ／ＥＢＰα開始コドンの上流に４．１ｋｂの相同
ＤＮＡおよびｌｏｘＰ−ＰＧＫ−ｎｅｏ−ｌｏｘＰカセ
ットの下流に３．８ｋｂの相同ＤＮＡを含んでいた。
【００２６】（ホモ接合性マウスの作製）ＥＳ細胞（Ｒ
Ｗ４，Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｙｓｔｅｍ）を、直鎖標的化ベ
クターＤＮＡを用いてエレクトロポレーションした。Ｇ
４１８耐性クローンを選択し、増大し、そして５’プロ
ーブ、および特定の相同組換え体を同定するためのコー
ド領域プローブを用いてサザンブロッティングにより分
析した。正確に標的化されたＥＳ細胞を、以前にＨｏｇ
ａｎら（Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｍｏｕｓ
ｅ ｅｍｂｒｙｏ：ａ ｌａｂｏｒａｒｏｒｙ ｍａｎ
ｕａｌ，第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏ
ｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９９４）に記載さ
れたようにしてＣ５７ＢＬ／６Ｊ胚盤胞に注射して、キ
メラ始原マウスを作製した。ほぼ９０〜１００％のアグ
ーチの毛色を有するキメラ雄性始原マウスを、Ｃ５７Ｂ
Ｌ／６Ｊ雌性マウスと交配した。変異対立遺伝子の生殖
系列伝達を有する子孫マウスを、ホモ接合性ＥＩＩａ−
ｃｒｅマウス（Ｌａｓｋｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：５８６０−５８６５，
１９９６）と交配して、Ｌｅｅら（前出）に記載される
ようにして標的マーカーＰＧＫｎｅｏ遺伝子をマウスゲ
ノムから除いた。１つの変異体、Ｃ／ｅｂｐα対立遺伝
子（Ｃ／ｅｂｐαβと称する）を保有するＦ１マウスを
品種間交配して、ホモ接合性Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウス
を作製した。このマウスは、Ｃ／ＥＢＰβに関するオー
プンリーディングフレームで置換された内因性のＣ／Ｅ
ＢＰα遺伝子のオープンリーディングフレームを有し
た。
Ｗ４，Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｙｓｔｅｍ）を、直鎖標的化ベ
クターＤＮＡを用いてエレクトロポレーションした。Ｇ
４１８耐性クローンを選択し、増大し、そして５’プロ
ーブ、および特定の相同組換え体を同定するためのコー
ド領域プローブを用いてサザンブロッティングにより分
析した。正確に標的化されたＥＳ細胞を、以前にＨｏｇ
ａｎら（Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｍｏｕｓ
ｅ ｅｍｂｒｙｏ：ａ ｌａｂｏｒａｒｏｒｙ ｍａｎ
ｕａｌ，第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏ
ｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９９４）に記載さ
れたようにしてＣ５７ＢＬ／６Ｊ胚盤胞に注射して、キ
メラ始原マウスを作製した。ほぼ９０〜１００％のアグ
ーチの毛色を有するキメラ雄性始原マウスを、Ｃ５７Ｂ
Ｌ／６Ｊ雌性マウスと交配した。変異対立遺伝子の生殖
系列伝達を有する子孫マウスを、ホモ接合性ＥＩＩａ−
ｃｒｅマウス（Ｌａｓｋｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：５８６０−５８６５，
１９９６）と交配して、Ｌｅｅら（前出）に記載される
ようにして標的マーカーＰＧＫｎｅｏ遺伝子をマウスゲ
ノムから除いた。１つの変異体、Ｃ／ｅｂｐα対立遺伝
子（Ｃ／ｅｂｐαβと称する）を保有するＦ１マウスを
品種間交配して、ホモ接合性Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウス
を作製した。このマウスは、Ｃ／ＥＢＰβに関するオー
プンリーディングフレームで置換された内因性のＣ／Ｅ
ＢＰα遺伝子のオープンリーディングフレームを有し
た。
【００２７】（サザンブロッティング分析）単離したＥ
Ｓ細胞ＤＮＡまたはマウス尾部ＤＮＡを、適切な制限酵
素で消化し、０．５％アガロースゲルにて電気泳動し、
ナイロンメンブレン（ＧｅｎｅＳｃｒｅｅｎ Ｐｌｕ
ｓ，Ｄｕｐｏｎｔ）へ転写し、そしてＣ／ｅｂｐα遺伝
子またはＣ／ｅｂｐβ遺伝子に由来するプローブを用い
てハイブリダイゼーションした。
Ｓ細胞ＤＮＡまたはマウス尾部ＤＮＡを、適切な制限酵
素で消化し、０．５％アガロースゲルにて電気泳動し、
ナイロンメンブレン（ＧｅｎｅＳｃｒｅｅｎ Ｐｌｕ
ｓ，Ｄｕｐｏｎｔ）へ転写し、そしてＣ／ｅｂｐα遺伝
子またはＣ／ｅｂｐβ遺伝子に由来するプローブを用い
てハイブリダイゼーションした。
【００２８】（高脂肪（ＨＦ）食餌実験）この研究に使
用した全てのマウスは、Ｃ／ｅｂｐαβ+/-のＦ２マウ
スの品種間交配に由来する、Ｆ３同腹仔であった。マウ
スを滅菌マイクロ隔離装置にて飼育し、そして実験の間
中、綿密に観察した。ＨＦ食餌の効果を測定するため
に、各性別の３匹のマウスおよびいずれかの表現形の３
匹のマウスを、出生後、マイクロ隔離装置にて２．５週
間別々に配置した。標準（１０％脂肪）または高脂肪食
餌（３０％脂肪、ＬａｂＤｉｅｔ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，
ＩＮ）の新鮮な食物を毎日与え、そして消費した食物の
量を毎日記録した。これらのマウスの成長速度を測定す
るために、マウスの体重を毎週２回モニタした。
用した全てのマウスは、Ｃ／ｅｂｐαβ+/-のＦ２マウ
スの品種間交配に由来する、Ｆ３同腹仔であった。マウ
スを滅菌マイクロ隔離装置にて飼育し、そして実験の間
中、綿密に観察した。ＨＦ食餌の効果を測定するため
に、各性別の３匹のマウスおよびいずれかの表現形の３
匹のマウスを、出生後、マイクロ隔離装置にて２．５週
間別々に配置した。標準（１０％脂肪）または高脂肪食
餌（３０％脂肪、ＬａｂＤｉｅｔ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，
ＩＮ）の新鮮な食物を毎日与え、そして消費した食物の
量を毎日記録した。これらのマウスの成長速度を測定す
るために、マウスの体重を毎週２回モニタした。
【００２９】（肝臓組織および脂肪組織の組織学的な分
析）精巣上体の脂肪パッドおよび肝臓を、パラフィン中
に包埋するために４％ＰＢＳ緩衝化パラホルムアルデヒ
ド溶液中で固定するか、または組織凍結培地（ＯＣＴ，
Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｒｅｋ，Ｍｉｌｅｓ Ｉｎｃ．）中に
直ちに包埋し、そして液体窒素で凍結した。５μｍの切
片（パラフィン包埋組織について）または１０μｍ（凍
結組織について）を、カットし、そしてシラン処理スラ
イド上にマウントした。Ｖａｎ Ｇｏｏｒら（Ｈｉｓｔ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ８５：２５１−２５３，１９８
６）に記載されるようにして、この凍結組織切片をＯｉ
ｌ Ｒｅｄ Ｏで染色し、そして対比染色の対比物をヘ
マトキシリンで染色した。パラフィン組織切片をヘマト
キシリンおよびエオシン溶液で染色した（Ｈ＆Ｅ染
色）。
析）精巣上体の脂肪パッドおよび肝臓を、パラフィン中
に包埋するために４％ＰＢＳ緩衝化パラホルムアルデヒ
ド溶液中で固定するか、または組織凍結培地（ＯＣＴ，
Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｒｅｋ，Ｍｉｌｅｓ Ｉｎｃ．）中に
直ちに包埋し、そして液体窒素で凍結した。５μｍの切
片（パラフィン包埋組織について）または１０μｍ（凍
結組織について）を、カットし、そしてシラン処理スラ
イド上にマウントした。Ｖａｎ Ｇｏｏｒら（Ｈｉｓｔ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ８５：２５１−２５３，１９８
６）に記載されるようにして、この凍結組織切片をＯｉ
ｌ Ｒｅｄ Ｏで染色し、そして対比染色の対比物をヘ
マトキシリンで染色した。パラフィン組織切片をヘマト
キシリンおよびエオシン溶液で染色した（Ｈ＆Ｅ染
色）。
【００３０】（レプチンおよびインスリンの血清の化学
およびレベルの分析）種々の発生段階から得たマウス血
清を、血清のグルコース、トリアシルグリセリドおよび
他の血液化学のレベルをモニタするために、自動乾燥化
学分析機器（ａｕｔｏ−ｄｒｙ ｃｈｅｍｉｃａｌ ａ
ｎａｌｙｚｅｒ）（ＳＰ４４１０；Ｓｐｏｔｃｈｅｍ）
にて分析した。血清のレプチンおよびインスリンを、適
切なＥＬＩＳＡキット（Ｃｒｙｓｔａｌ Ｃｈｅｍ Ｉ
ｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）を用いてアッセイし
た。
およびレベルの分析）種々の発生段階から得たマウス血
清を、血清のグルコース、トリアシルグリセリドおよび
他の血液化学のレベルをモニタするために、自動乾燥化
学分析機器（ａｕｔｏ−ｄｒｙ ｃｈｅｍｉｃａｌ ａ
ｎａｌｙｚｅｒ）（ＳＰ４４１０；Ｓｐｏｔｃｈｅｍ）
にて分析した。血清のレプチンおよびインスリンを、適
切なＥＬＩＳＡキット（Ｃｒｙｓｔａｌ Ｃｈｅｍ Ｉ
ｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）を用いてアッセイし
た。
【００３１】（溶血性アッセイ）血清因子Ｄ活性を、Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２７９：７７５−７７９、１９９１
に記載されるように、ウサギ赤血球および血清因子Ｄ欠
乏ヒト血清を使用する溶血性アッセイよりモニタした。
１５０μｌのアッセイ総容積において、２５μｌのマウ
ス血清および２５μｌの血清因子Ｄ欠乏ヒト血清を、ウ
サギ赤血球（５ｍＭのベロナール緩衝生理食塩水、１２
ｍＭ ＭｇＣｌ2、ｐＨ ７．４の１００μｌ中に１０7
細胞）に添加した。３７℃での１時間のインキュベーシ
ョン後、溶血性活性を決定し、そしてこの活性を、溶解
したコントロールにおける活性の割合として表した。
ｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２７９：７７５−７７９、１９９１
に記載されるように、ウサギ赤血球および血清因子Ｄ欠
乏ヒト血清を使用する溶血性アッセイよりモニタした。
１５０μｌのアッセイ総容積において、２５μｌのマウ
ス血清および２５μｌの血清因子Ｄ欠乏ヒト血清を、ウ
サギ赤血球（５ｍＭのベロナール緩衝生理食塩水、１２
ｍＭ ＭｇＣｌ2、ｐＨ ７．４の１００μｌ中に１０7
細胞）に添加した。３７℃での１時間のインキュベーシ
ョン後、溶血性活性を決定し、そしてこの活性を、溶解
したコントロールにおける活性の割合として表した。
【００３２】（ＲＮＡ抽出およびノーザンブロット分
析）凍結したマウス組織を、ＴＲＩｚｏｌ ＲＮＡ ｒ
ｅａｇｅｎｔ（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）中でホモジナイズ
し、そして全ＲＮＡを製造者のプロトコルに従って単離
した。全ＲＮＡ（１０μｇ）を、標準的なプロトコルを
使用することにより、変性し、電気泳動し、ナイロンメ
ンブランに転写し、そしてｃＤＮＡプローブを用いてプ
ローブした。
析）凍結したマウス組織を、ＴＲＩｚｏｌ ＲＮＡ ｒ
ｅａｇｅｎｔ（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）中でホモジナイズ
し、そして全ＲＮＡを製造者のプロトコルに従って単離
した。全ＲＮＡ（１０μｇ）を、標準的なプロトコルを
使用することにより、変性し、電気泳動し、ナイロンメ
ンブランに転写し、そしてｃＤＮＡプローブを用いてプ
ローブした。
【００３３】ミトコンドリアＤＮＡの単離。精巣上体脂
肪パッドの核およびミトコンドリアを単離し、そしてそ
れらのＤＮＡをＰｌａｖａら、ＦＥＢＳ １９２：２６
７−２７０、１９８５に記載されるように抽出した。こ
の抽出した核ＤＮＡおよびミトコンドリアＤＮＡを、さ
らにプロテイナーゼＫおよびＤＮａｓｅを含まないＲＮ
ａｓｅを用いて、それぞれ１００μｇ／ｍｌの最終濃度
で処理した。次いで、ＤＮＡを、イソプロパノールを用
いて２回沈殿させ、その後１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣ
ｌ、ｐＨ８．０、１ｍＭ ＥＤＴＡ中に再懸濁した。Ｄ
ＮＡを、ＵＶスペクトロメータで２６０ｎｍおよび２８
０ｎｍで吸光度を測定することにより定量した。
肪パッドの核およびミトコンドリアを単離し、そしてそ
れらのＤＮＡをＰｌａｖａら、ＦＥＢＳ １９２：２６
７−２７０、１９８５に記載されるように抽出した。こ
の抽出した核ＤＮＡおよびミトコンドリアＤＮＡを、さ
らにプロテイナーゼＫおよびＤＮａｓｅを含まないＲＮ
ａｓｅを用いて、それぞれ１００μｇ／ｍｌの最終濃度
で処理した。次いで、ＤＮＡを、イソプロパノールを用
いて２回沈殿させ、その後１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣ
ｌ、ｐＨ８．０、１ｍＭ ＥＤＴＡ中に再懸濁した。Ｄ
ＮＡを、ＵＶスペクトロメータで２６０ｎｍおよび２８
０ｎｍで吸光度を測定することにより定量した。
【００３４】（結果）Ｃ／ＥＢＰβノックイン標的化ベ
クターを構築し、Ｃ／ＥＢＰαの完全なタンパク質コー
ド領域と、Ｃ／ｅｂｐα遺伝子座のＣ／ＥＢＰβのタン
パク質コード領域とを置換した。ｌｏｘＰ−ＰＧＫ．ｎ
ｅｏ−ｌｏｘＰカセットを、終止コドンの下流に挿入
し、標的化選択マーカーとして供した。Ｃｒｅ媒介組換
えは、Ｃ／ｅｂｐα遺伝子座のからのマーカー遺伝子の
除去を生じた。ＥＳ細胞中への線状標的化ベクターＤＮ
Ａのトランスフェクション後、１％のＧ４１８耐性ＥＳ
クローンが、変異型Ｃ／ｅｂｐα対立遺伝子を有するこ
とを見出した。これは、Ｃ／ＥＢＰαのタンパク質コー
ド領域を欠失し、そしてＣ／ＥＢＰβのタンパク質コー
ド領域と置きかえられている。Ｃ／ｅｂｐαβと呼ばれ
る変異型対立遺伝子の生殖細胞系伝達を有するマウス
が、産生された。Ｃ／ｅｂｐαβ+/-マウスを、品種間
交配させ、ホモ接合性のＣ／ｅｂｐαβ+/+マウスを産
生した。操作されたＣ／ｅｂｐα遺伝子座におけるＣ／
ＥＢＰαタンパク質コード領域の欠失を、完全なタンパ
ク質コード領域を含む１．２ｋｂのＤＮＡプローブ（プ
ローブＩ）および全長Ｃ／ＥＢＰα転写物にわたる２ｋ
ｂのプローブ（プローブＩＩ）を用いるサザン分析によ
り確認した。さらに、Ｃ／ｅｂｐα遺伝子座におけるＣ
／ＥＢＰβタンパク質コード領域の存在を、Ｃ／ｅｂｐ
αβ+/+マウスゲノムをＣ／ＥＢＰβ ｃＤＮＡプロー
ブ（プローブＩＩＩ）でプローブすることにより確認し
た。さらに、標的化工程の間にＣ／ｅｂｐα遺伝子座中
に導入されるＰＧＫ．ｎｅｏマーカー遺伝子によるＣ／
ＥＢＰαβ発現に対する影響の可能性を排除するため
に、次いで、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスをｃｒｅトラン
スジェニックマウス系統を用いて交配させ、Ｌｅｅら、
前出およびＬａｓｋｏら、前出に従って、Ｃ／ｅｂｐα
β遺伝子座からＰＧＫ．ｎｅｏマーカー遺伝子を取り除
いた。得られたＣ／ｅｂｐαβ対立遺伝子に対するヘテ
ロ接合性のＦ１マウスおよびマーカー遺伝子を欠くＦ１
マウスを、Ｆ２ Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスを産生する
ために品種間交配のために選択した。Ｃ／ｅｂｐαβ
+/+マウスにおける、Ｃ／ＥＢＰα ｍＲＮＡ発現の欠
如およびＣ／ＥＢＰαβ ｍＲＮＡ（１．８ｋｂ）の存
在を、さらにそれぞれのｃＤＮＡプローブを用いて種々
の組織（例えば、肝臓組織および脂肪組織）から抽出し
た総ＲＮＡのプロービングにより確認した。
クターを構築し、Ｃ／ＥＢＰαの完全なタンパク質コー
ド領域と、Ｃ／ｅｂｐα遺伝子座のＣ／ＥＢＰβのタン
パク質コード領域とを置換した。ｌｏｘＰ−ＰＧＫ．ｎ
ｅｏ−ｌｏｘＰカセットを、終止コドンの下流に挿入
し、標的化選択マーカーとして供した。Ｃｒｅ媒介組換
えは、Ｃ／ｅｂｐα遺伝子座のからのマーカー遺伝子の
除去を生じた。ＥＳ細胞中への線状標的化ベクターＤＮ
Ａのトランスフェクション後、１％のＧ４１８耐性ＥＳ
クローンが、変異型Ｃ／ｅｂｐα対立遺伝子を有するこ
とを見出した。これは、Ｃ／ＥＢＰαのタンパク質コー
ド領域を欠失し、そしてＣ／ＥＢＰβのタンパク質コー
ド領域と置きかえられている。Ｃ／ｅｂｐαβと呼ばれ
る変異型対立遺伝子の生殖細胞系伝達を有するマウス
が、産生された。Ｃ／ｅｂｐαβ+/-マウスを、品種間
交配させ、ホモ接合性のＣ／ｅｂｐαβ+/+マウスを産
生した。操作されたＣ／ｅｂｐα遺伝子座におけるＣ／
ＥＢＰαタンパク質コード領域の欠失を、完全なタンパ
ク質コード領域を含む１．２ｋｂのＤＮＡプローブ（プ
ローブＩ）および全長Ｃ／ＥＢＰα転写物にわたる２ｋ
ｂのプローブ（プローブＩＩ）を用いるサザン分析によ
り確認した。さらに、Ｃ／ｅｂｐα遺伝子座におけるＣ
／ＥＢＰβタンパク質コード領域の存在を、Ｃ／ｅｂｐ
αβ+/+マウスゲノムをＣ／ＥＢＰβ ｃＤＮＡプロー
ブ（プローブＩＩＩ）でプローブすることにより確認し
た。さらに、標的化工程の間にＣ／ｅｂｐα遺伝子座中
に導入されるＰＧＫ．ｎｅｏマーカー遺伝子によるＣ／
ＥＢＰαβ発現に対する影響の可能性を排除するため
に、次いで、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスをｃｒｅトラン
スジェニックマウス系統を用いて交配させ、Ｌｅｅら、
前出およびＬａｓｋｏら、前出に従って、Ｃ／ｅｂｐα
β遺伝子座からＰＧＫ．ｎｅｏマーカー遺伝子を取り除
いた。得られたＣ／ｅｂｐαβ対立遺伝子に対するヘテ
ロ接合性のＦ１マウスおよびマーカー遺伝子を欠くＦ１
マウスを、Ｆ２ Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスを産生する
ために品種間交配のために選択した。Ｃ／ｅｂｐαβ
+/+マウスにおける、Ｃ／ＥＢＰα ｍＲＮＡ発現の欠
如およびＣ／ＥＢＰαβ ｍＲＮＡ（１．８ｋｂ）の存
在を、さらにそれぞれのｃＤＮＡプローブを用いて種々
の組織（例えば、肝臓組織および脂肪組織）から抽出し
た総ＲＮＡのプロービングにより確認した。
【００３５】（Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスの白色脂肪組
織における脂肪貯蔵の減少）Ｃ／ＥＢＰαヌルマウス
は、おそらく誕生時のグリコーゲン貯蔵の欠乏および重
度の低血糖に起因して生後まもなく死亡した。一方、Ｃ
／ｅｂｐαβ+/+マウスの新生児は、生存可能であり、
そして野生型の同腹仔の血糖レベルと同様の血糖レベル
を有した。このマウスは、誕生時およびこの研究期間中
にそれらの外見上に検出可能な異常を示さなかった。さ
らに、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスは、体重増加により測
定した場合、それらの成長速度において野生型同腹仔と
異ならなかった。Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスの両方の性
は、生殖可能であった。しかし、第１同腹仔の仔を出産
するために雌性のＣ／ｅｂｐαβ+/+マウスに必要とさ
れる平均時間は、野生型および同腹仔の雌性のＣ／ｅｂ
ｐαβ+/-マウスに必要な時間より２週間長かった。妊
娠における遅延にもかかわらず、雌性のＣ／ｅｂｐαβ
+/+マウスは、以後、この研究の期間中に野生型同腹仔
において見られたように正常な妊娠頻度を有した。
織における脂肪貯蔵の減少）Ｃ／ＥＢＰαヌルマウス
は、おそらく誕生時のグリコーゲン貯蔵の欠乏および重
度の低血糖に起因して生後まもなく死亡した。一方、Ｃ
／ｅｂｐαβ+/+マウスの新生児は、生存可能であり、
そして野生型の同腹仔の血糖レベルと同様の血糖レベル
を有した。このマウスは、誕生時およびこの研究期間中
にそれらの外見上に検出可能な異常を示さなかった。さ
らに、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスは、体重増加により測
定した場合、それらの成長速度において野生型同腹仔と
異ならなかった。Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスの両方の性
は、生殖可能であった。しかし、第１同腹仔の仔を出産
するために雌性のＣ／ｅｂｐαβ+/+マウスに必要とさ
れる平均時間は、野生型および同腹仔の雌性のＣ／ｅｂ
ｐαβ+/-マウスに必要な時間より２週間長かった。妊
娠における遅延にもかかわらず、雌性のＣ／ｅｂｐαβ
+/+マウスは、以後、この研究の期間中に野生型同腹仔
において見られたように正常な妊娠頻度を有した。
【００３６】Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスと野生型マウス
との間の類似した体重にもかかわらず、Ｃ／ｅｂｐαβ
+/+マウスは、ＷＡＴのサイズおよび外見において野生
型マウスと著しく異なっていた。Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マ
ウスにおけるＷＡＴは、野生型マウスにおける分布プロ
フィールに基づいてそれぞれの領域に位置付けし得る。
しかし、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスにおけるＷＡＴ質量
は、野生型同腹仔におけるＷＡＴ質量が有意に拡大さ
れ、そして白色がかっているにもかかわらず、小さく、
そして黄色がかっていた。組織学的切片およびＯｉｌ−
Ｒｅｄ Ｏ染色は、脂肪細胞のサイズおよび脂質蓄積の
程度が、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴにおいて著
しく減少したことを示した。一方で、血清グルコースお
よびトリアシルグリセリドのレベルは、Ｃ／ｅｂｐαβ
+/+マウスにおいて減少しなかった。これらの結果は、
Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴにおける脂質の蓄積
が阻害され、そしてこの阻害が、循環における脂質前駆
体の欠失に起因しないことを示唆した。１０週齢以上の
Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴは、より大きく、そ
してより脂肪を貯蔵していたが、それらは、同週齢の野
生型マウスのＷＡＴよりも有意に小さかった。
との間の類似した体重にもかかわらず、Ｃ／ｅｂｐαβ
+/+マウスは、ＷＡＴのサイズおよび外見において野生
型マウスと著しく異なっていた。Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マ
ウスにおけるＷＡＴは、野生型マウスにおける分布プロ
フィールに基づいてそれぞれの領域に位置付けし得る。
しかし、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスにおけるＷＡＴ質量
は、野生型同腹仔におけるＷＡＴ質量が有意に拡大さ
れ、そして白色がかっているにもかかわらず、小さく、
そして黄色がかっていた。組織学的切片およびＯｉｌ−
Ｒｅｄ Ｏ染色は、脂肪細胞のサイズおよび脂質蓄積の
程度が、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴにおいて著
しく減少したことを示した。一方で、血清グルコースお
よびトリアシルグリセリドのレベルは、Ｃ／ｅｂｐαβ
+/+マウスにおいて減少しなかった。これらの結果は、
Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴにおける脂質の蓄積
が阻害され、そしてこの阻害が、循環における脂質前駆
体の欠失に起因しないことを示唆した。１０週齢以上の
Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴは、より大きく、そ
してより脂肪を貯蔵していたが、それらは、同週齢の野
生型マウスのＷＡＴよりも有意に小さかった。
【００３７】（Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスにおける高脂
肪（ＨＦ）食餌誘導脂肪細胞肥大の耐性）Ｃ／ｅｂｐα
β+/+マウスは、痩せていたが、正常な成長速度を有し
た。驚くべきことに、食餌摂取量の測定は、Ｃ／ｅｂｐ
αβ+/+マウスが、同腹仔の野生型マウスよりも多くの
食餌を消費していることを示した。食事量が、Ｃ／ｅｂ
ｐαβ+/+マウスのＷＡＴにおける脂肪貯蔵の状態に影
響するか否かを決定するために、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マ
ウスを６週間の間、ＨＦ食餌（３０％の脂肪）条件下で
維持した。雄性Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスの食餌消費、
体重増加およびＷＡＴ質量を、食餌制限中モニターし
た。ＨＦ食餌下のＣ／ｅｂｐαβ+/+マウスは、６週間
の期間を通して野生型のマウスが消費した食餌よりも多
量の食餌を消費した。
肪（ＨＦ）食餌誘導脂肪細胞肥大の耐性）Ｃ／ｅｂｐα
β+/+マウスは、痩せていたが、正常な成長速度を有し
た。驚くべきことに、食餌摂取量の測定は、Ｃ／ｅｂｐ
αβ+/+マウスが、同腹仔の野生型マウスよりも多くの
食餌を消費していることを示した。食事量が、Ｃ／ｅｂ
ｐαβ+/+マウスのＷＡＴにおける脂肪貯蔵の状態に影
響するか否かを決定するために、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マ
ウスを６週間の間、ＨＦ食餌（３０％の脂肪）条件下で
維持した。雄性Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスの食餌消費、
体重増加およびＷＡＴ質量を、食餌制限中モニターし
た。ＨＦ食餌下のＣ／ｅｂｐαβ+/+マウスは、６週間
の期間を通して野生型のマウスが消費した食餌よりも多
量の食餌を消費した。
【００３８】しかし、ＨＦ摂食下のＣ／ｅｂｐαβ+/+
雄性マウスについての体重増加は、標準的な摂食下のＣ
／ｅｂｐαβ+/+雄性マウスについての体重増加と異な
らなかった。対照的に、ＨＦ摂食下の野生型雄性マウス
の体重は、標準的な摂食下のマウスよりも２５％重かっ
た。さらに、ＨＦ摂食下の野生型雄性マウスにおけるＷ
ＡＴ質量は、標準的な摂食下のマウスにおけるＷＡＴ質
量よりも３倍高かった。これに対して、体脂肪量は、い
ずれの摂食下のＣ／ｅｂｐαβ+/+雄性マウス間で有意
な差はなかった。これらの結果は、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+
雄性マウスがＨＦ摂食下でＷＡＴ質量増加に抵抗するこ
とを示した。
雄性マウスについての体重増加は、標準的な摂食下のＣ
／ｅｂｐαβ+/+雄性マウスについての体重増加と異な
らなかった。対照的に、ＨＦ摂食下の野生型雄性マウス
の体重は、標準的な摂食下のマウスよりも２５％重かっ
た。さらに、ＨＦ摂食下の野生型雄性マウスにおけるＷ
ＡＴ質量は、標準的な摂食下のマウスにおけるＷＡＴ質
量よりも３倍高かった。これに対して、体脂肪量は、い
ずれの摂食下のＣ／ｅｂｐαβ+/+雄性マウス間で有意
な差はなかった。これらの結果は、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+
雄性マウスがＨＦ摂食下でＷＡＴ質量増加に抵抗するこ
とを示した。
【００３９】（Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスの脂肪組織に
おけるレプチンおよびアジプシンの発現の減少）Ｃ／ｅ
ｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴにおける脂肪蓄積の耐性の
基礎をなす分子機構を理解するために、機能が脂肪細胞
の分化および成熟に関連する多くの遺伝子の発現を、初
めに試験した。この内因性遺伝子座から発現されたＣ／
ＥＢＰβのｍＲＮＡレベル（１．５ｋｂの転写物の場
合）は、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴにおいてア
ップレギュレートされるようであった。Ｃ／ｅｂｐα遺
伝子座から発現されたＣ／ＥＢＰβのレベル（１．８ｋ
ｂの転写物の場合）は、Ｃ／ＥＢＰβ遺伝子座からのも
のと同様であった。脂肪細胞の発達に関与する他の転写
調節因子（例えば、ペルオキシソーム増殖因子活性化レ
セプター（ＰＰＡＲγ）ならびに脂肪細胞決定および分
化依存性因子（ＡＤＤ１／ＳＲＥＢＰ−１））のｍＲＮ
Ａレベルは、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスと野生型マウス
との間のＷＡＴにおいて差はなかった。同様に、ａＰ２
およびグルコース輸送体ＩＶ（ＧＬＵＴ４）（これは、
成熟脂肪細胞において発現される）は、Ｃ／ｅｂｐαβ
+/+マウスのＷＡＴに影響を及ぼさなかった。脂肪酸合
成に関与する酵素（例えば、脂肪酸シンテターゼ（ＦＡ
Ｓ）およびステアリル−ＣｏＡ−デサチュラーゼ（ＳＣ
Ｄ））の発現は、野生型マウスとＣ／ｅｂｐαβ+/+マ
ウスとの間で有意な差はなかった。これらの結果は、脂
肪生成において役割を果たす全ての上記の因子の発現が
Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴにおいて阻害されな
いことを示した。しかし、成熟脂肪細胞、アジプシン
（因子Ｄ）、およびレプチン（ｏｂ遺伝子の産物）にお
いて特異的に発現される２つの因子をコードするｍＲＮ
Ａレベルは、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴにおい
て、有意に減少した。
おけるレプチンおよびアジプシンの発現の減少）Ｃ／ｅ
ｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴにおける脂肪蓄積の耐性の
基礎をなす分子機構を理解するために、機能が脂肪細胞
の分化および成熟に関連する多くの遺伝子の発現を、初
めに試験した。この内因性遺伝子座から発現されたＣ／
ＥＢＰβのｍＲＮＡレベル（１．５ｋｂの転写物の場
合）は、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴにおいてア
ップレギュレートされるようであった。Ｃ／ｅｂｐα遺
伝子座から発現されたＣ／ＥＢＰβのレベル（１．８ｋ
ｂの転写物の場合）は、Ｃ／ＥＢＰβ遺伝子座からのも
のと同様であった。脂肪細胞の発達に関与する他の転写
調節因子（例えば、ペルオキシソーム増殖因子活性化レ
セプター（ＰＰＡＲγ）ならびに脂肪細胞決定および分
化依存性因子（ＡＤＤ１／ＳＲＥＢＰ−１））のｍＲＮ
Ａレベルは、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスと野生型マウス
との間のＷＡＴにおいて差はなかった。同様に、ａＰ２
およびグルコース輸送体ＩＶ（ＧＬＵＴ４）（これは、
成熟脂肪細胞において発現される）は、Ｃ／ｅｂｐαβ
+/+マウスのＷＡＴに影響を及ぼさなかった。脂肪酸合
成に関与する酵素（例えば、脂肪酸シンテターゼ（ＦＡ
Ｓ）およびステアリル−ＣｏＡ−デサチュラーゼ（ＳＣ
Ｄ））の発現は、野生型マウスとＣ／ｅｂｐαβ+/+マ
ウスとの間で有意な差はなかった。これらの結果は、脂
肪生成において役割を果たす全ての上記の因子の発現が
Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴにおいて阻害されな
いことを示した。しかし、成熟脂肪細胞、アジプシン
（因子Ｄ）、およびレプチン（ｏｂ遺伝子の産物）にお
いて特異的に発現される２つの因子をコードするｍＲＮ
Ａレベルは、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴにおい
て、有意に減少した。
【００４０】アジプシンおよびレプチンは、ＷＡＴにお
いて産生され、循環中に放出され、そしてエネルギー恒
常性の維持に、特にＷＡＴの脂質貯蔵の調節に関与す
る。Ｃ／ｅｂｐαβ+/+の血液中のこのアジプシンレベ
ルが、ＷＡＴにおけるこれらのｍＲＮＡレベルを反映し
て減少するか否かを決定するために、溶血アッセイを、
Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスの血清におけるアジプシン活
性を決定するために実行した。実際、Ｃ／ｅｂｐαβ
+/+マウスの血清における溶血活性は、野生型マウスの
血清における活性の５０％に減少した。同様に、Ｃ／ｅ
ｂｐαβ+/+マウスの血清レプチンレベルは、有意に減
少した。
いて産生され、循環中に放出され、そしてエネルギー恒
常性の維持に、特にＷＡＴの脂質貯蔵の調節に関与す
る。Ｃ／ｅｂｐαβ+/+の血液中のこのアジプシンレベ
ルが、ＷＡＴにおけるこれらのｍＲＮＡレベルを反映し
て減少するか否かを決定するために、溶血アッセイを、
Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスの血清におけるアジプシン活
性を決定するために実行した。実際、Ｃ／ｅｂｐαβ
+/+マウスの血清における溶血活性は、野生型マウスの
血清における活性の５０％に減少した。同様に、Ｃ／ｅ
ｂｐαβ+/+マウスの血清レプチンレベルは、有意に減
少した。
【００４１】（Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴにお
けるミトコンドリア含量およびエネルギーの酸化の増
加）アジプシンは、活性補体Ｃ３ａの生成に関与するセ
リンプロテアーゼである（アシル化刺激タンパク質（Ａ
ＳＰ）１２としてもまた、知られている）。ＡＳＰは、
脂肪細胞においてトリグリセリド合成を刺激する。Ｃ／
ｅｂｐαβ+/+マウスの循環におけるアジプシンレベル
の減少は、脂肪細胞において脂肪貯蔵のためのシグナル
伝達が不完全であることを示唆し、これは、Ｃ／ｅｂｐ
αβ+/+マウスのＷＡＴにおいて脂肪貯蔵の減少を部分
的に説明し得る。しかし、より多い食物を消費するにも
関わらず、ＨＦ摂食下においてＣ／ｅｂｐαβ+/+マウ
スはまた、野生型マウスに見られるようなＨＦ摂食誘導
する脂肪細胞の肥大に抵抗した。さらに、Ｃ／ｅｂｐα
β+/+マウスのＷＡＴにおいて脂肪貯蔵を顕著に減少す
るにも関わらず、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスは、高脂質
血症を発症しなかった。同様に、肝臓の組織学的分析に
よって、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスにおいて脂肪肝は検
出されなかった。従って、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスの
ＷＡＴおよび肝臓における脂肪蓄積の予防は、エネルギ
ー消費における増加のような他の機構を含み得ることが
誘起される。
けるミトコンドリア含量およびエネルギーの酸化の増
加）アジプシンは、活性補体Ｃ３ａの生成に関与するセ
リンプロテアーゼである（アシル化刺激タンパク質（Ａ
ＳＰ）１２としてもまた、知られている）。ＡＳＰは、
脂肪細胞においてトリグリセリド合成を刺激する。Ｃ／
ｅｂｐαβ+/+マウスの循環におけるアジプシンレベル
の減少は、脂肪細胞において脂肪貯蔵のためのシグナル
伝達が不完全であることを示唆し、これは、Ｃ／ｅｂｐ
αβ+/+マウスのＷＡＴにおいて脂肪貯蔵の減少を部分
的に説明し得る。しかし、より多い食物を消費するにも
関わらず、ＨＦ摂食下においてＣ／ｅｂｐαβ+/+マウ
スはまた、野生型マウスに見られるようなＨＦ摂食誘導
する脂肪細胞の肥大に抵抗した。さらに、Ｃ／ｅｂｐα
β+/+マウスのＷＡＴにおいて脂肪貯蔵を顕著に減少す
るにも関わらず、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスは、高脂質
血症を発症しなかった。同様に、肝臓の組織学的分析に
よって、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスにおいて脂肪肝は検
出されなかった。従って、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスの
ＷＡＴおよび肝臓における脂肪蓄積の予防は、エネルギ
ー消費における増加のような他の機構を含み得ることが
誘起される。
【００４２】Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスにおけるエネル
ギー消耗の状態を決定するために、本発明者らは、まず
Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスの体温および褐色脂肪組織
（ＢＡＴ）の質量を測定した。Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウ
スの体温（２９．１±０．３℃）は、それらの野生型の
同腹仔の体温（２８．５±０．２℃）よりも０．５〜
０．７℃高かった。このことは、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マ
ウスがより高いエネルギー消耗を有することを示す。Ｂ
ＡＴは、熱発生についての主要組織であり；ＢＡＴは、
エネルギーを保存するのではなく、脂肪酸の脱共役酸化
に対する非常に高い活性を通して、熱としてエネルギー
を放出するように設計されている。それらのＷＡＴと異
なり、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスは、野生型マウスより
６５％高いＢＡＴ質量を有した。さらに、Ｃ／ｅｂｐα
β+/+マウスのＢＡＴにおける脂肪細胞は、高度に空胞
を有した。しかし、脱共役タンパク質（ＵＣＰ１）およ
びシトクロムｂ（これらは、熱発生および酸化に対する
ミトコンドリアの電子伝達系に関与する）のｍＲＮＡレ
ベルはそれぞれ、野生型とＣ／ｅｂｐαβ+/+マウスと
の間のＢＡＴにおいて差はなかった。このことは、ＢＡ
Ｔの代謝活性が、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスにおいて影
響されていないことを示唆する。これらの結果は、Ｃ／
ｅｂｐαβ+/+マウスにおけるより高いエネルギー消耗
が、ＢＡＴにおける脱共役酸化のみに依存し得ないとい
うことを示した。従って、他の組織の酸化活性がＣ／ｅ
ｂｐαβ+/+マウスにおいて改変されたか否かを、電子
伝達系の酵素をコードするミトコンドリア遺伝子に対す
るプローブを用いて、種々の組織から単離された全ＲＮ
Ａを探索することによって試験した。
ギー消耗の状態を決定するために、本発明者らは、まず
Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスの体温および褐色脂肪組織
（ＢＡＴ）の質量を測定した。Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウ
スの体温（２９．１±０．３℃）は、それらの野生型の
同腹仔の体温（２８．５±０．２℃）よりも０．５〜
０．７℃高かった。このことは、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マ
ウスがより高いエネルギー消耗を有することを示す。Ｂ
ＡＴは、熱発生についての主要組織であり；ＢＡＴは、
エネルギーを保存するのではなく、脂肪酸の脱共役酸化
に対する非常に高い活性を通して、熱としてエネルギー
を放出するように設計されている。それらのＷＡＴと異
なり、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスは、野生型マウスより
６５％高いＢＡＴ質量を有した。さらに、Ｃ／ｅｂｐα
β+/+マウスのＢＡＴにおける脂肪細胞は、高度に空胞
を有した。しかし、脱共役タンパク質（ＵＣＰ１）およ
びシトクロムｂ（これらは、熱発生および酸化に対する
ミトコンドリアの電子伝達系に関与する）のｍＲＮＡレ
ベルはそれぞれ、野生型とＣ／ｅｂｐαβ+/+マウスと
の間のＢＡＴにおいて差はなかった。このことは、ＢＡ
Ｔの代謝活性が、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスにおいて影
響されていないことを示唆する。これらの結果は、Ｃ／
ｅｂｐαβ+/+マウスにおけるより高いエネルギー消耗
が、ＢＡＴにおける脱共役酸化のみに依存し得ないとい
うことを示した。従って、他の組織の酸化活性がＣ／ｅ
ｂｐαβ+/+マウスにおいて改変されたか否かを、電子
伝達系の酵素をコードするミトコンドリア遺伝子に対す
るプローブを用いて、種々の組織から単離された全ＲＮ
Ａを探索することによって試験した。
【００４３】ミトコンドリアのシトクロムｂおよびＮＡ
ＤＨデヒドロゲナーゼの両方のｍＲＮＡレベルは、野生
型マウスにおけるレベルと比較してＣ／ｅｂｐαβ+/+
マウスのＷＡＴにおいて著しく増加し、そしてこの増加
はＷＡＴに特異的であった。電子伝達系についてのミト
コンドリアｍＲＮＡの増加が細胞のミトコンドリア数の
増加に起因するのか否かを決定するために、本発明者ら
は、それらのＤＮＡ含有量を測定することによって、Ｃ
／ｅｂｐαβ+/+マウスの精巣上体ＷＡＴからミトコン
ドリアを単離および定量化した。実際、Ｃ／ｅｂｐαβ
+/+マウスは、その精巣上体ＷＡＴの脂肪細胞におい
て、野生型マウスより５２％多いミトコンドリアを保有
した。このことは、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴ
は、野生型マウスよりも高い酸化能力を有することを示
す。
ＤＨデヒドロゲナーゼの両方のｍＲＮＡレベルは、野生
型マウスにおけるレベルと比較してＣ／ｅｂｐαβ+/+
マウスのＷＡＴにおいて著しく増加し、そしてこの増加
はＷＡＴに特異的であった。電子伝達系についてのミト
コンドリアｍＲＮＡの増加が細胞のミトコンドリア数の
増加に起因するのか否かを決定するために、本発明者ら
は、それらのＤＮＡ含有量を測定することによって、Ｃ
／ｅｂｐαβ+/+マウスの精巣上体ＷＡＴからミトコン
ドリアを単離および定量化した。実際、Ｃ／ｅｂｐαβ
+/+マウスは、その精巣上体ＷＡＴの脂肪細胞におい
て、野生型マウスより５２％多いミトコンドリアを保有
した。このことは、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴ
は、野生型マウスよりも高い酸化能力を有することを示
す。
【００４４】しかし、興味深いことに、ＵＳＰ１の発現
に関して、ＢＡＴ酸化活性は、Ｃ／ＥＢＰαを欠損する
がＣ／ＥＢＰβの随伴性増大を有するＣ／ｅｂｐαβ
+/+マウスにおいて増大しなかった。対照的に、ＵＣＰ
１のｍＲＮＡレベルは、野生型マウスにおけるレベルと
比較して、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴにおいて
有意により高かった。ミトコンドリア含有量の増加およ
びＵＣＰ１発現の上昇は、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスの
ＷＡＴが、ＢＡＴにおけるエネルギー代謝の状態の暗示
である、より高い代謝活性および脱共役酸化を獲得した
ことを示唆する。従って、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスの
ＷＡＴにおける脂肪蓄積の予防は、脂質貯蔵についての
刺激物質の産生の減少およびＷＡＴ自体における酸化活
性の上昇の両方に関与し得る。
に関して、ＢＡＴ酸化活性は、Ｃ／ＥＢＰαを欠損する
がＣ／ＥＢＰβの随伴性増大を有するＣ／ｅｂｐαβ
+/+マウスにおいて増大しなかった。対照的に、ＵＣＰ
１のｍＲＮＡレベルは、野生型マウスにおけるレベルと
比較して、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスのＷＡＴにおいて
有意により高かった。ミトコンドリア含有量の増加およ
びＵＣＰ１発現の上昇は、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスの
ＷＡＴが、ＢＡＴにおけるエネルギー代謝の状態の暗示
である、より高い代謝活性および脱共役酸化を獲得した
ことを示唆する。従って、Ｃ／ｅｂｐαβ+/+マウスの
ＷＡＴにおける脂肪蓄積の予防は、脂質貯蔵についての
刺激物質の産生の減少およびＷＡＴ自体における酸化活
性の上昇の両方に関与し得る。
【００４５】（他の実施態様）本発明は、その詳細な説
明と共に記載されているが、前述の説明は例示すること
を意図し、そして本発明の範囲を限定することは意図さ
れず、本発明は添付の特許請求の範囲によって規定され
ることが理解される。他の局面、進歩、および改変は、
本発明の範囲内である。
明と共に記載されているが、前述の説明は例示すること
を意図し、そして本発明の範囲を限定することは意図さ
れず、本発明は添付の特許請求の範囲によって規定され
ることが理解される。他の局面、進歩、および改変は、
本発明の範囲内である。
【００４６】例えば、Ｃ／ＥＢＰβオープンリーディン
グフレームおよびその発現を駆動するＣ／ＥＢＰαプロ
モーターは、ＷＡＴにおける減少が所望される動物での
遺伝子治療法において、ウイルス（例えば、レトロウイ
ルスベクター）によって、送達され得る。さらに、内因
性Ｃ／ＥＢＰαにおけるオープンリーディングフレーム
の置換が上記されるが、Ｃ／ＥＢＰβオープンリーディ
ングフレームも、その発現を駆動するＣ／ＥＢＰαプロ
モーターも、動物のいかなる内因性配列とも対応する必
要はない。
グフレームおよびその発現を駆動するＣ／ＥＢＰαプロ
モーターは、ＷＡＴにおける減少が所望される動物での
遺伝子治療法において、ウイルス（例えば、レトロウイ
ルスベクター）によって、送達され得る。さらに、内因
性Ｃ／ＥＢＰαにおけるオープンリーディングフレーム
の置換が上記されるが、Ｃ／ＥＢＰβオープンリーディ
ングフレームも、その発現を駆動するＣ／ＥＢＰαプロ
モーターも、動物のいかなる内因性配列とも対応する必
要はない。
【００４７】（発明の簡単な要旨）本発明は、ゲノムＤ
ＮＡが、Ｃ／ＥＢＰβポリペプチドをコードするＤＮＡ
配列に作動可能に連結されたＣ／ＥＢＰαプロモーター
を含む遺伝子を含む、トランスジェニック動物に関し、
ここで、このトランスジェニック動物は、ゲノムＤＮＡ
がこの遺伝子を含まない対照動物と比較して、その白色
脂肪組織において低減した脂肪蓄積を示す。
ＮＡが、Ｃ／ＥＢＰβポリペプチドをコードするＤＮＡ
配列に作動可能に連結されたＣ／ＥＢＰαプロモーター
を含む遺伝子を含む、トランスジェニック動物に関し、
ここで、このトランスジェニック動物は、ゲノムＤＮＡ
がこの遺伝子を含まない対照動物と比較して、その白色
脂肪組織において低減した脂肪蓄積を示す。
【００４８】
【発明の効果】本発明によって、白色脂肪組織の減少を
示すトランスジェニック動物が提供され、これらの動物
は、脂肪代謝に関与する分子パラメーターを解明するた
めの重要な動物モデルとして役立つという予想外の効果
が達成された。
示すトランスジェニック動物が提供され、これらの動物
は、脂肪代謝に関与する分子パラメーターを解明するた
めの重要な動物モデルとして役立つという予想外の効果
が達成された。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA20 BA63 BA80 CA04 DA02 EA04 FA02 GA14 HA01 HA20 4B065 AA91X AA91Y AB01 AC20 BA02 BA03 CA60
Claims (24)
- 【請求項１】 ゲノムＤＮＡが、Ｃ／ＥＢＰβポリペプ
チドをコードするＤＮＡ配列に作動可能に連結されたＣ
／ＥＢＰαプロモーターを含む遺伝子を含む、トランス
ジェニック動物であって、ここで、該トランスジェニッ
ク動物は、ゲノムＤＮＡが該遺伝子を含まない対照動物
と比較して、該トランスジェニック動物の白色脂肪組織
において低減した脂肪蓄積を示す、トランスジェニック
動物。 - 【請求項２】 前記トランスジェニック動物が、マウス
である、請求項１に記載のトランスジェニック動物。 - 【請求項３】 そのゲノムＤＮＡが、２コピーの前記遺
伝子を含む、請求項２に記載のトランスジェニック動
物。 - 【請求項４】 前記トランスジェニック動物の白色脂肪
組織における脂肪細胞の大きさが、前記対照動物の白色
脂肪組織における脂肪細胞の大きさよりも小さい、請求
項２に記載のトランスジェニック動物。 - 【請求項５】 前記トランスジェニック動物における血
清グルコースおよびトリアシルグリセリドのレベルが、
前記対照動物における血清グルコースおよびトリアシル
グリセリドのレベルと実質的に同じである、請求項２に
記載のトランスジェニック動物。 - 【請求項６】 利用可能な食物の量が制限されず、そし
て同じ種類の食物が前記トランスジェニック動物および
前記対照動物に提示されるならば、該トランスジェニッ
ク動物が、該対照動物よりも多量の食物を消費する、請
求項２に記載のトランスジェニック動物。 - 【請求項７】 前記低減した脂肪蓄積が、前記トランス
ジェニック動物および前記対照動物に約３０重量％の脂
肪を含む餌が与えられた場合に観察される、請求項２に
記載のトランスジェニック動物。 - 【請求項８】 前記トランスジェニック動物の白色脂肪
組織におけるアジプシンの発現レベルが、前記対照動物
の白色脂肪組織におけるアジプシンの発現レベルと比較
して低減している、請求項２に記載のトランスジェニッ
ク動物。 - 【請求項９】 前記トランスジェニック動物の白色脂肪
組織におけるレプチンの発現レベルが、前記対照動物の
白色脂肪組織におけるレプチンの発現レベルと比較して
低減している、請求項２に記載のトランスジェニック動
物。 - 【請求項１０】 前記トランスジェニック動物における
褐色脂肪組織の総質量が、前記対照動物における褐色脂
肪組織の総質量よりも多い、請求項２に記載のトランス
ジェニック動物。 - 【請求項１１】 前記トランスジェニック動物の白色脂
肪組織における脂肪細胞の大きさが、前記対照動物の白
色脂肪組織における脂肪細胞の大きさよりも小さく；該
トランスジェニック動物における血清グルコースおよび
トリアシルグリセリドのレベルが、該対照動物における
血清グルコースおよびトリアシルグリセリドのレベルと
実質的に同じであり；利用可能な食物の量が制限され
ず、そして同じ種類の食物が該トランスジェニック動物
および該対照動物に提示されるならば、該トランスジェ
ニック動物が、該対照動物よりも多量の食物を消費し；
前記低減した脂肪蓄積が、該トランスジェニック動物お
よび該対照動物に約３０重量％の脂肪を含む餌が与えら
れた場合に観察され；該トランスジェニック動物の白色
脂肪組織におけるアジプシンの発現レベルが、該対照動
物の白色脂肪組織におけるアジプシンの発現レベルと比
較して低減しており；該トランスジェニック動物の白色
脂肪組織におけるレプチンの発現レベルが、該対照動物
の白色脂肪組織におけるレプチンの発現レベルと比較し
て低減しており；該トランスジェニック動物における褐
色脂肪組織の総質量が、該対照動物における褐色脂肪組
織の総質量よりも多く；そして該トランスジェニック動
物の白色脂肪組織におけるミトコンドリア含量が、該対
照動物の白色脂肪組織におけるミトコンドリア含量より
も高い、請求項２に記載のトランスジェニック動物。 - 【請求項１２】 そのゲノムＤＮＡが、２コピーの前記
遺伝子を含む、請求項１に記載のトランスジェニック動
物。 - 【請求項１３】 前記トランスジェニック動物の白色脂
肪組織における脂肪細胞の大きさが、前記対照動物の白
色脂肪組織における脂肪細胞の大きさよりも小さい、請
求項１に記載のトランスジェニック動物。 - 【請求項１４】 前記トランスジェニック動物における
血清グルコースおよびトリアシルグリセリドのレベル
が、前記対照動物における血清グルコースおよびトリア
シルグリセリドのレベルと実質的に同じである、請求項
１に記載のトランスジェニック動物。 - 【請求項１５】 利用可能な食物の量が制限されず、そ
して同じ種類の食物が前記トランスジェニック動物およ
び前記対照動物に提示されるならば、該トランスジェニ
ック動物が、該対照動物よりも多量の食物を消費する、
請求項１に記載のトランスジェニック動物。 - 【請求項１６】 前記低減した脂肪蓄積が、前記トラン
スジェニック動物および前記対照動物に約３０重量％の
脂肪を含む餌が与えられた場合に観察される、請求項１
に記載のトランスジェニック動物。 - 【請求項１７】 前記トランスジェニック動物の白色脂
肪組織におけるアジプシンの発現レベルが、前記対照動
物の白色脂肪組織におけるアジプシンの発現レベルと比
較して低減している、請求項１に記載のトランスジェニ
ック動物。 - 【請求項１８】 前記トランスジェニック動物の白色脂
肪組織におけるレプチンの発現レベルが、前記対照動物
の白色脂肪組織におけるレプチンの発現レベルと比較し
て低減している、請求項１に記載のトランスジェニック
動物。 - 【請求項１９】 前記トランスジェニック動物における
褐色脂肪組織の総質量が、前記対照動物における褐色脂
肪組織の総質量よりも多い、請求項１に記載のトランス
ジェニック動物。 - 【請求項２０】 前記トランスジェニック動物の白色脂
肪組織における脂肪細胞の大きさが、前記対照動物の白
色脂肪組織における脂肪細胞の大きさよりも小さく；該
トランスジェニック動物における血清グルコースおよび
トリアシルグリセリドのレベルが、該対照動物における
血清グルコースおよびトリアシルグリセリドのレベルと
実質的に同じであり；利用可能な食物の量が制限され
ず、そして同じ種類の食物が該トランスジェニック動物
および該対照動物に提示されるならば、該トランスジェ
ニック動物が、該対照動物よりも多量の食物を消費し；
前記低減した脂肪蓄積が、該トランスジェニック動物お
よび該対照動物に約３０重量％の脂肪を含む餌が与えら
れた場合に観察され；該トランスジェニック動物の白色
脂肪組織におけるアジプシンの発現レベルが、該対照動
物の白色脂肪組織におけるアジプシンの発現レベルと比
較して低減しており；該トランスジェニック動物の白色
脂肪組織におけるレプチンの発現レベルが、該対照動物
の白色脂肪組織におけるレプチンの発現レベルと比較し
て低減しており；該トランスジェニック動物における褐
色脂肪組織の総質量が、該対照動物における褐色脂肪組
織の総質量よりも多く；そして該トランスジェニック動
物の白色脂肪組織におけるミトコンドリア含量が、該対
照動物の白色脂肪組織におけるミトコンドリア含量より
も高い、請求項１に記載のトランスジェニック動物。 - 【請求項２１】 トランスジェニック動物の作製方法で
あって、該方法は、該トランスジェニック動物のゲノム
ＤＮＡにおけるＣ／ＥＢＰα遺伝子の少なくとも一部
を、Ｃ／ＥＢＰβポリペプチドをコードする第１の配列
および選択マーカーをコードする第２の配列を含むＤＮ
Ａ挿入物で置換する工程；ならびに該第２の配列を該ゲ
ノムＤＮＡから除去し、それにより、該トランスジェニ
ック動物を作製する工程、を包含する、方法。 - 【請求項２２】 Ｃ／ＥＢＰβポリペプチドをコードす
る配列に作動可能に連結されたＣ／ＥＢＰαプロモータ
ーを含む、核酸。 - 【請求項２３】 前記トランスジェニック動物の白色脂
肪組織におけるミトコンドリア含量が、前記対照動物の
白色脂肪組織におけるミトコンドリア含量よりも高い、
請求項１に記載のトランスジェニック動物。 - 【請求項２４】 前記トランスジェニック動物の白色脂
肪組織におけるミトコンドリア含量が、前記対照動物の
白色脂肪組織におけるミトコンドリア含量よりも高い、
請求項２に記載のトランスジェニック動物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000246570A JP2002058388A (ja) | 2000-08-15 | 2000-08-15 | 痩身のトランスジェニック動物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000246570A JP2002058388A (ja) | 2000-08-15 | 2000-08-15 | 痩身のトランスジェニック動物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002058388A true JP2002058388A (ja) | 2002-02-26 |
Family
ID=18736854
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000246570A Withdrawn JP2002058388A (ja) | 2000-08-15 | 2000-08-15 | 痩身のトランスジェニック動物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2002058388A (ja) |
-
2000
- 2000-08-15 JP JP2000246570A patent/JP2002058388A/ja not_active Withdrawn
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Legal Events
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|---|---|---|---|
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