WO2002098344A1

WO2002098344A1 - Compositions antithrombotiques et instruments medicaux contenant lesdites compositions

Info

Publication number: WO2002098344A1
Application number: PCT/JP2002/005542
Authority: WO
Inventors: Susumu Kashiwabara; Hidenori Tanaka; Masaki Sato
Original assignee: Toyo Boseki Kabushiki Kaisha
Priority date: 2001-06-05
Filing date: 2002-06-05
Publication date: 2002-12-12
Also published as: US20040213818A1; EP1402871B1; EP1402871A4; JP4273965B2; JPWO2002098344A1; DE60231209D1; EP1402871A1

Description

明細書

抗血栓性組成物およびそれを有する医療用具

技術分野

本発明は、抗血栓性組成物に関する。本発明の抗血栓性組成物は、血液に接触して使用される医療用具の血液接触表面に塗布することにより、医療用具本来の機能を損なうことなく優れた抗血栓性を医療用具に付与することができる。

より詳細には、本発明は、 ①医療用具に、長期にわたる優れた抗血栓性と抗菌性とを付与することができる抗血栓性組成物、ならびに②血液が極めて速く流れかつその動きが激しい条件下での使用が意図される医療用具に、長期にわたる優れた抗血栓性を付与することができる抗血栓性組成物に関する。

また、本発明は、上記抗血栓性組成物を有する医療用具に関する。

背景技術

従来から、医療用具（例えば、血液用回路チューブ、サンプリングモニタ一用チューブ、大動脈内バルーンポンプ、人工心臓用血液ポンプ、血管造影用カテ一テル、人工肺、静脈リザーバ一、人工腎臓、動脈フィル夕一等）の血液に接触する表面に、血液が凝固しないよう抗血栓性を付与する技術が開発、実用化されてきた。医療用具の抗血栓性向上のために主に検討されてきたのは、抗凝血作用を有するへパリンまたはへパリン誘導体を医療用具の血液接触表面上に何らかの方法で固定することにより、抗血栓性を付与する手法である。

へパリンまたはへパリン誘導体を医療用具の血液接触表面に導入する方法としては、へパリンまたはへパリン誘導体に種々の官能基を導入し、医療用具の血液接触表面の基材上に導入された官能基との共有結合により固定化させる方法が挙げられる。このような方法として、例えば、特開平 4-197264には、へパリンのァミノ基を、ポリエチレングリコ一ルジグリシジルェ一テルの一方の末端グリシジル基と共有結合させた後、他方の末端グリシジル基を、基材上に導入されたアミノ基と共有結合させる方法が開示されている。

また、特開昭 58-147404には、へパリンを低分子化して生じる遊離の末端アルデヒド基と医療用具の血液接触表面の基材上のァミノ基とを共有結合させた後、当該共有結合を還元反応にて安定ィヒさせる方法が開示されている。

しかし、これらの方法では、医療用具の基材上にへパリンまたはへパリン誘導体と反応し得る基を導入する工程を要するという問題、およびへパリンまたはへパリン誘導体が基材に強く結合しすぎてその自由度が失われ、抗凝血活性を十分に発揮することができないという問題があった。さらに、これらの方法は多段階の工程を必要とするので、医療用具のコストが非常に高くなり、医療費が高騰している現状では大きな問題となる。

一方、医療用具に抗血栓性を付与するための別の方法としては、例えば、へパリンまたはへパリン誘導体のもつ負電荷（スルホン酸基やアミノスルホン酸基）にアンモニゥム塩ゃホスホニゥム塩等の有機カチオン化合物を結合させて、水に不溶かつ有機溶媒に可溶な複合体を形成し、これを医療用具にコ一ティングする手法も提案されている。例えば、特公昭 48-13341には、へパリンとカチオン性界面活性剤とを反応させて水に不溶かつ有機溶剤に可溶なへパリン複合体を調製し、これを単独でまたはプラスチックとともに有機溶媒に溶解させた溶液を医療用具の血液接触表面に塗布し、次いで乾燥することによって、抗血栓性を付与する方法が開示されている。

上記特公昭 48- 13341において、カチオン性界面活性剤としては、アルキルトリメチルアンモニゥムクロリド、ジラウリルジメチルアンモニゥムクロリド等のァンモニゥム塩が挙げられている。しかし、これらのアンモニゥム塩とへパリンとの複合体は、血液中に曝した場合に複合体が早期に溶出し、短時間で抗血栓性が消失してしまうことが判明している。

特公昭 48-13341にはまた、この問題の解決手段として、ペンザルコニゥム塩（1 本の長鎖アルキル基、 2個のメチル基および 1個のベンジル基を有するアンモニゥム塩）の長鎖アルキル基の炭素数が 1 8であるべンジルジメチルステアリルァンモニゥム塩とへパリンとの複合体（本願比較例 6に対応）も開示されており、この複合体は、従来の複合体において短時間で抗血栓性が消失してしまうという問題をある程度までは改善し得るものであった。しかし、上記複合体を用いても、十分に長期間にわたって優れた抗血栓性を付与するという課題は解決できなかつた。

また、 J. Biomater. Sci. Polymer Edn, vol 6には、医療用具に長期間にわたる優れた抗血栓性を付与することを目的として、へパリンとジォク夕デシルジメチルアンモニゥムブロミドとのイオン性複合体（本願比較例 7に対応）が記載されている。このイオン複合体を含む組成物は、へパリンに結合した有機カチオン化合物（ジォクタデシルジメチルアンモニゥムブロミド）の疎水性が非常に高いために、へパリンを医療用具の表面に長時間保持することができる一方、へパリンの抗血栓性が著しく抑えられ、医療用具にコーティングした場合に、血液の滞留部ゃ段差等に血栓が生じやすいという問題を有していた。

これまで検討されてきたへパリン一有機カチオン化合物のイオン性複合体における問題は、親水性が高すぎる有機カチオン化合物（例えば、ベンザルコニゥム塩等の水に可溶性のアンモニゥム塩）を用いた場合にはへパリンが短時間で溶出するので長時間にわたる抗血栓性の維持ができないことであり、一方、疎水性が高すぎる有機カチオン化合物（例えば、ジォク夕デシルジメチルアンモニゥムブ口ミド）を用いた場合にはへパリンの抗凝血活性が抑制されて十分な性能を発揮できないことであった。、本発明者らは、これらの問題が現在まで解決できなかった原因は、従来のィォン性複合体に、へパリンまたはへパリン誘導体と 1種類のみのアンモニゥム塩とを用いたことであつたと考えた。へパリンまたはへパリン誘導体と 1種類のみのアンモニゥム塩とのイオン性複合体は、アンモニゥム塩の 4つの脂肪族基（例えば、アルキル基）の炭素の総数およびその構造が単一であるので、このイオン性. 複合体の性質が親水性または疎水性のどちらかに偏りすぎてしまう。その結果、 . へパリンまたはへパリン誘導体が短時間で血液中に溶出してしまうか、あるいはへパリンまたはへパリン誘導体の溶出が著しく抑えられてしまい、いずれの場合にも期待された抗血栓性を発揮できないのである。すなわち、医療用具において優れた抗血栓性を発揮するためには、ィォン性複合体が親水性と疎水性との適度なバランスを有することが必要とされるのである。

このような課題を解決するために、本発明者らは、 4つの脂肪族アルキル基の炭素の総数が異なる 2種類のアンモニゥム塩とへパリンまたはへパリン誘導体とを結合させたィォン性複合体とすることによって、ィォン性複合体の親水性と疎水性とのバランスを調整し、医療用具において必要かつ十分な抗血栓性を長期間にわたり維持することを試みた。具体的には、本発明者らは、少なくとも 2つのアンモニゥム塩（ジメチルジドデシルアンモニゥム塩と、炭素原子総数が 3 0〜 3 8であり炭素数 1 0以上のアルキル基を少なくとも 2つ有するアンモニゥム塩）とへパリンまたはへパリン誘導体とのイオン性複合体（本願比較例 4および 5に対応）を開発し、これが上記の問題点を解決できることを見出した [特許第 3228409 号 (特開平 11-164882) ] 。

上記特許第 3228409号記載のイオン性複合体を含むコ一ティング用組成物は、従来のへパリンコ一テイング材と比較すると、血液の流速がそれほど速くなくか. つその動きが穏やかな条件下で使用される医療用具（カテーテル等）にコーティングした場合には極めて高い抗血栓性を発揮する。しかし、上記イオン性複合体は、近年使用が増加している、長期間にわたり血液と接触して使用され、血液が極めて速く流れかつその動きが激しい条件下での使用が意図される医療用具（例えば、埋め込み型人工心臓や体外設置の補助人工心臓等の人工臓器）に用いるには、未だ抗血栓性が十分ではないことが判明した。すなわち、上記イオン性複合体を含む組成物を用いたコ一ティングは、血液の速い流れと激しい動きに曝された場合に、へパリンが血液中に速やかに流失してしまうので、長期間にわたる優れた抗血栓性を維持することが困難であった。

従って、上記のような苛酷な条件下での使用が意図される医療用具においても、長期にわたる優れた抗血栓性を付与できるような抗血栓性組成物が必要とされている。このような医療用具では、血液の流れが速いために血栓が基本的に発生しにくい環境にあることから、抗血栓性自体は、本発明者らが上記特許第 3228409 号に示した材料より低くても良いが、抗血栓性が従来よりも長期間にわたって維持されることが必要である。

また、これまでに述べたような医療用具では、使用中の菌感染による種々の合併症も問題となる。従って、抗血栓性に加えて抗菌性を有する抗血栓性組成物もまた必要とされている。

発明の開示

本発明の目的は、医療用具に、長期にわたる優れた抗血栓性を付与することができる抗血栓性組成物を提供することである。

本発明の 1つの目的は、医療用具に、長期にわたる優れた抗血栓性と抗菌性とを付与することができる抗血栓性組成物を提供することである。

さらに、本発明のもう 1つの目的は、血液が極めて速く流れかつその動きが激しい条件下での使用が意図される医療用具に、長期にわたる優れた抗血栓性を付与することができる抗血栓性組成物を提供することである。

本発明者らは、上記目的達成のために、有機カチオン混合物と.へパリンまたはへパリン誘導体とから形成されるイオン性複合体を含む抗血栓性組成物であって、当該有機カチオン混合物が、少なくとも 2種のアンモニゥム塩の混合物である抗血栓性組成物が有用であることを見出した。具体的には、本発明者らは、上記抗血栓性組成物において、有機カチオン混合物として、（a ) 水に可溶性のアンモニゥム塩と（b ) 水に不溶性のアンモニゥム塩との混合物を用いることにより、医療用具に長期にわたる優れた抗血栓性に加えて抗菌性を付与できることを見出した。また、本発明者らは、上記抗血栓性組成物において、有機カチオン混合物として、下記で詳述する特定のアンモニゥム塩（c ) および（d ) の混合物を用いることにより、血液が極めて速く流れかつその動きが激しい条件下での^ ¾用が意図される医療用具に、長期にわたる優れた抗血栓性を付与できることを見出し- た。

すなわち、本発明は以下の通りである。

有機カチオン混合物とへパリンまたはへパリン誘導体とから形成されるイオン • 性複合体を含む抗血栓性組成物であって、

当該有機カチオン混合物が、少なくとも 2種のアンモニゥム塩の混合物であることを特徴とする、抗血栓性組成物。

[ただし、上記有機カチオン混合物が、ジドデシルジメチルアンモニゥム塩と、 4つの脂肪族基を有するアンモニゥム塩であって、 4つの脂肪族基の炭素原子の総数が 3 0〜3 8でありかつ 4つの脂肪族基のうち 2つがそれそれ炭素数 1 0以上のアルキル基であるアンモニゥム塩から選択される少なくとも 1種のアンモニゥム塩との混合物である場合を除く。 ]

詳細には、本発明は以下の①および②である。

①有機カチォン混合物とへパリンまたはへパリン誘導体とから形成されるイオン性複合体を含む抗血栓性組成物であって、

当該有機カチオン混合物が、少なくとも 1種の（a ) 水に可溶性のアンモニゥム塩と、少なくとも 1種の（b ) 水に不溶性のアンモニゥム塩との混合物である、抗血栓性組成物、

②有機力チォン混合物とへパリンまたはへパリン誘導体とから形成されるイオン性複合体を含む抗血栓性組成物であって、

当該有機カチオン混合物が、以下に示す少なくとも 1種のアンモニゥム塩（c ) と少なくとも 1種のアンモニゥム塩（d ) との混合物である、抗血栓性組成物。

( c ) 4つの脂肪族基が結合したアンモニゥム塩であって、 4つの脂肪族基の炭素原子の総数が 4 0以上であり、かつ少なくとも 2つの脂肪族基がそれそれ炭素数 1 2以上の脂肪族アルキル基であるアンモニゥム塩、

( d ) 4つの脂肪族基が結合したアンモニゥム塩であって、 4つの脂肪族基のうち 2つがそれそれ炭素数 3以下の脂肪族アルキル基であり、かつ残り 2つがそれそれ炭素数 1 0〜1 4の脂肪族アルキル基であるアンモニゥム塩。

また、本発明は、上記抗血栓性組成物が少なくとも血液接触面の一部にコ一ティングされている医療用具である。

以下の説明において、本発明①または本発明②として言及されている場合には、各々の発明に関する事項を表し、格別言及のない場合には、本発明①および本発明②についての共通事項を表す。

本発明において用いられるアンモニゥム塩は、例えばフッ素、塩素、臭素、ョゥ素等のハロゲンとの塩であり、好ましくはアンモニゥムクロリド、アンモニゥムブロミドである。

本発明において、「抗血栓性」とは、特に、血液が医療用具等の表面に接触した場合に凝固しにくく、血栓を形成しにくい性質を意味する。

本発明における「イオン性複合体を含む抗血栓性組成物」および「抗血栓性組成物」は、上記有機カチオン混合物とへパリンまたはへパリン誘導体とから形成されるイオン性複合体の他に、上記以外の有機カチオン混合物とへパリンまたはへパリン誘導体とから形成されるイオン性複合体を含んでいてもよく、その他にも抗菌性物質などの生理活性物質や、バインダーとなる高分子物質や、その他の添加剤を上記イオン性複合体の性質に実質的に影響を及ぼさない範囲で含んでいてもよい。

本発明①の抗血栓性組成物は、少なくとも 1種の（a ) 水に可溶性のアンモニゥム塩と、少なくとも 1種の（b ) 水に不溶性のアンモニゥム塩との混合物である有機カチオン混合物を、へパリンまたはへパリン誘導体と結合させて得られるイオン性複合体を含むことを特徴とする。このような抗血栓性組成物は、（b ) 水に不溶性のアンモニゥム塩が、へパリンまたはへパリン誘導体を医療用具の血液接触表面に強く保持する一方で、（a ) 水に可溶性のアンモニゥム塩が、ィォン性複合体が疎水性に偏りすぎるのを防ぎへパリンまたはへパリン誘導体の放出速度を適度に調節するので、医療用具に長期間にわたる優れた抗血栓性を付与することができる。

また、本発明①の抗血栓性組成物は、（a ) 水に可溶性のアンモニゥム塩が血液中に徐放されてその抗菌性を発揮するので、医療用具における菌の付着や繁殖を防止し、菌感染による種々の合併症を防止することができる。

ここで、本発明①における「抗菌性」とは、菌の発生、生育および増殖を抑制する（好ましくは減少させる）ことを意味する。

本発明①で用いられる有機カチオン混合物に含まれる、（a )水に可溶性のァンモニゥム塩としては、ベンゼトニゥム塩およびベンザルコニゥム塩が挙げられ、例えば、デシルベンジルジメチルアンモニゥム塩、ドデシルペンジルジメチルァンモニゥム塩、テトラデシルペンジルジメチルアンモニゥム塩、へキサデシルべンジルジメチルアンモニゥム塩、ォク夕デシルペンジルジメチルアンモニゥム塩、 c ₈— c _{1 8}アルキルべンジルジメチルアンモニゥム塩混合物の水溶液（ォスパン等の商品名で市販されている消毒用水溶液）およびペンゼトニゥム塩等が好ましく、より好ましくはドデシルペンジルジメチルアンモニゥムブロミド、ベンゼトニゥムクロリドおよびテトラデシルペンジルジメチルアンモニゥムクロリドである

上記（a ) 水に可溶性のアンモニゥム塩の使用量は、有機カチオン混合物全重量 [すなわち、（a ) 水に可溶性のアンモニゥム塩と（b ) 水に不溶性のアンモニゥム塩との重量の合計] に対して、通常 5〜7 0重量％、好ましくは 1 0〜5 0重量％、より好ましくは 1 5〜3 0重量％の割合である。有機カチオン混合物中で（a ) 水に可溶性のアンモニゥム塩が 7 0重量％を越えると、医療用具の使用初期に大量に溶出してしまうので好ましくない。また、 3重量％未満では、ィオン性複合体が疎水性に偏りすぎてへパリンを放出しにくくなるので医療用具の抗血栓性が低くなり、しかも医療用具に十分な抗菌性を付与することもできないので、好ましくない。

本発明①で用いられる有機カチオン混合物中の（b )水に不溶性のアンモニゥム塩としては、 4つの脂肪族基が結合したアンモニゥム塩が挙げられ、具体的には、該 4つの脂肪族基のうち 2つがそれそれ炭素数 1 2以上の脂肪族アルキル基であるアンモニゥム塩、および該 4つの脂肪族基のうち 3つがそれそれ炭素数 1 0以上の脂肪族アルキル基であるアンモニゥム塩が好ましい。

ここで、本発明①における「水に不溶性」とは、体内温度に近い 4 0 °Cの純水中 1 %濃度のアンモニゥム塩を含む混合物を撹拌した時に、透明な均一溶液にならず、該アンモニゥム塩がオイル状になって水と分離するかまたは分散した白濁状態のままであることを意味する。 ' ■ 本発明①における、「4つの脂肪族基のうち 2つがそれぞれ炭素数 1 2以上の脂肪族アルキル基であるアンモニゥム塩」としては、例えばジドデシルジメチルアンモニゥム塩、'ジテトラデシルジメチルアンモニゥム塩、ジへキサデシルジメチルアンモニゥム塩、ジォク夕デシルジメチルアンモニゥム塩、ジエイコサニルジメチルアンモニゥム塩、ジメチルジパルミチルアンモニゥム塩、ジドコサニルジメチルアンモニゥム塩、ジテトラエイコサニルジメチルアンモニゥム塩等が挙げられ、好ましくはジテトラデシルジメチルアンモニゥム塩、ジへキサデシルジメチルアンモニゥム塩、ジメチルジパルミチルアンモニゥ：ム塩およびジォク夕デシルジメチルアンモニゥム塩であり、より.好ましくはジテトラデシルジメチルァンモニゥムプロミド、ジォク夕デシルジメチルアンモニゥムプロミド、ジメチルジパルミチルアンモニゥムプロミドである。

本発明①における、上記「4つの脂肪族基のうち 3つがそれそれ炭素数 1 0以上の脂肪族アルキル基であるアンモニゥム塩」としては、例えば、トリデシルメチルアンモニゥム塩、トリドデシルメチルアンモニゥム塩、トリテトラデシルメチルアンモニゥム塩、トリへキサデシルメチルアンモニゥム塩、トリオクタデシルアンモニゥム塩、トリエイコサニルメチルアンモニゥム塩等が挙げられ、好ましくはトリドデシルメチルアンモニゥム塩、トリへキサデシルメチルアンモニゥム塩である。

本発明②の抗血栓性組成物は、少なくとも 1種の（c ) 4つの脂肪族基が結合したアンモニゥム塩であって、 4つの脂肪族基の炭素原子の総数が 4 0以上であり、かつ少なくとも 2つの脂肪族基がそれそれ炭素数 1 2以上の脂肪族アルキル基であるアンモニゥム塩と、少なくとも 1種の（d ) 4つの脂肪族基が結合したアンモニゥム塩であって、 4つの脂肪族基のうち 2つがそれそれ炭素数 3以下の脂肪族アルキル基であり、かつ残り 2つがそれそれ炭素数 1 0〜1 4の脂肪族ァルキル基であるアンモニゥム塩との混合物である有機カチオン混合物を、へパリ · ンまたはへパリン誘導体と結合させたイオン性複合体を含むことを特徴とする。このようなイオン性複合体は、上記（C ) のアンモニゥム塩が従来よりも高い疎水性を有し、へパリンまたはへパリン誘導体を医療用具表面により強く保持する一方、上記（d ) のアンモニゥム塩が、イオン性複合体が疎水性に偏りすぎるのを防ぎへパリンまたはへパリン誘導体の放出速度を適度に調節する。従って、本発明②の抗血栓性組成物は、血液の流れが速くかつその動きが激しい条件下での使用が意図される医療用具（例えば、人工心臓等の人工臓器）にコ一ティングした場合でも、長期間にわたる優れた抗血栓性を維持することができる。

本発明②の抗血栓性組成物において、「（c ) 4つの脂肪族基が結合したアンモニゥム塩であって、 4つの脂肪族基の炭素原子の総数が 4 0以上であり、かつ少なくとも 2つの脂肪族基がそれそれ炭素数 1 2以上の脂肪族アルキル基であるアンモニゥム塩」としては、例えば、ジエイコサニルジメチルアンモニゥム塩、ジエイコサニルジェチルアンモニゥム塩、ジドコサ二ルジメチルアンモニゥム塩、ジテトラエイコサニルジメチルアンモニゥム塩、トリテトラデシルメチルアンモニゥム塩、トリへキサデシルメチルアンモニゥム塩等が挙げられ、好ましくはジエイコサニルジメチルアンモニゥムブロミド、ジエイコサニルジェチルアンモニゥムブロミドおよびジドコサニルジメチルアンモニゥムブロミドである。

本発明②の抗血栓性組成物において、「（d ) 4つの脂肪族基が結合したアンモニゥム塩であって、 4つの脂肪族基のうち 2つがそれそれ炭素数 3以下の脂肪族アルキル基であり、かつ残り 2つがそれそれ炭素数 1 0〜1 4の脂肪族アルキル基であるアンモニゥム塩」としては、例えば、ジドデシルジメチルアンモニゥム塩、ジデシルジメチルアンモニゥム塩、ジドデシルジェチルアンモニゥム塩、ジテトラデシルジメチルアンモニゥム塩、ジデシルジェチルアンモニゥム塩、ジドデシルジプロピルアンモニゥム塩、ジデシルジプロピルアンモニゥム塩等が挙げられ、好ましくはジドデシルジメチルアンモニゥム塩、ジデシルジメチルアンモニゥム塩およびジテトラデシルジメチルアンモニゥム塩であり、より好ましくはジドデシルジメチルアンモニゥムブロミド、ジデシルジメチルアンモニゥムブロミドおよびジテトラデシルジメチルアンモニゥムブロミドである。

本発明②において、上記（c ) と（d ) との重量比は、好ましくは 1 ： 1〜1 0 ： 1であり、より好ましぐは 1 ： 1〜5 : 1である。

本発明で用いられるィォン性複合体には、へパリンまたはへパリン誘導体を用いることができる。へパリン誘導体としては、へパリンナトリゥム、へパリンカリウム、へパリンリチウム、へパリンカルシウム、へパリン亜鉛、低分子へパリン、エポキシ化へパリンなどが挙げられるが、これらに限定されない。

本発明において、医療用具基材の材料としては、通常使用される全ての材料を用いることができ、例えば、 (例えば、ポリ塩化ビニル、ポリカーボネート、

'一ト、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリメチルペンテン、熱可塑性ポリエーテルポリウレタン、熱硬化性ポリウレタン、架橋部を有するポリジメチルシロキサン等のシリコーンゴム、ポリメチルメタクリレート、ポリフヅ化ビニリデン、四フヅ化ポリエチレン、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、ポリアセ夕一ル、ポリスチレン、 AB S樹月旨およびこれらの樹脂の混合物等）、金属（例えば、ステンレス、チタニウム、アルミニウム等）等が挙げられるが、これらに限定されない。

本発明の抗血栓性組成物は、例えば以下の方法で医療用具の血液接触表面に付与されるが、これらの方法に限定されない。

(方法 1 )

まず、有機カチオン混合物とへパリンまたはへパリン誘導体とを溶媒中で攪袢して混合し、ィオン性複合体を含む沈殿物を得る。この沈殿物を回収、洗浄して、未反応のへパリンまたはへパリン誘導体およびアンモニゥム塩を除去し、次いで残留物を公知方法により精製して、イオン性複合体を得る。このイオン性複合体を有機溶媒に溶解して、溶液を得る。この溶液を、後述の方法により医療用具の血液接触表面に塗布し、次いで溶媒を乾燥除去すると、該表面に最適化された抗血栓性を付与することができる。 '

本方法において、医療用具の表面に上記溶液を塗布する方法としては、.浸漬法、スプレーを吹き付ける方法、刷毛等で塗布する方法等が挙げられるが、これらの方法に限定されない。

：本方法で用いられる有機溶媒としては、ィオン性複合体の抗血栓性を損なわず、かつ、医療用具の基材表面にできる限り損傷を与えないものであれば特に限定さ. れないが、一般的には、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、 n —プロピルアルコール、 n—へキサン、シクロへキサン、テトラヒドロフラン（以下、 T H Fという）、 1， 4一ジォキサン、シクロへキサノン、 N , N—ジメチルホルムアミド、 N， N—ジメチルァセトアミド、 N—メチルピロリドン等が挙げられる。

(方法 2 )

あるいは、本発明の抗血栓性組成物は、有機カチオン混合物を適当な有機溶媒に溶解した溶液を医療用具の血液接触表面に塗布し、有機溶媒を乾燥除去し、次いでへパリンまたはへパリン誘導体の水溶液を塗布して、血液接触表面上でィォン性複合体を含む抗血栓性組成物を形成させた後、水を乾燥除去する方法によつても付与することができる。

本方法において、有機溶媒は、方法 1で上述した有機溶媒と同じものを用いることができる。

実施例

以下に、本発明を実施形態に基づいて説明する。 .

(実施例 1 )

ドデシルペンジルジメチルアンモニゥムプロミド（東京化成製） 2 0重量部およびジテトラデシルジメチルアンモニゥムブロミド（東京化成製） 6 0重量部をメタノール 1 5 0重量部に溶解した。完全に溶解したことを確認した後、この有機アンモニゥムのメタノール溶液に、水を、 [メタノール溶液：水] = [ 3 0 ： 7 0 (重量比） ] の割合となるまで添加した。この際、溶液中にアンモニゥム塩がー部析出したが、溶液の温度を 5 0 °Cに上げることにより均一溶液になった。へパリン 3 0重量部をイオン交換水 1 5 0重量部に溶解した。続いて、このへパリン水溶液に、メタノールを、 [へパリン水溶液：メタノ一ル] = [ 7 0 ： 3 0 (重量比） ] の割合となるまで添加した。この際、溶液中にへパリンが一部析出して溶液が懸濁したが、 7 0 °Cに温度を上げることにより均一溶液になった。得られたへパリン溶液を攪袢しながら、これに上記アンモニゥム塩溶液を滴下. した。反応物は溶液中ですぐに沈殿した。沈殿物を回収し、十分に洗浄し、未反応のへパリンおよびアンモニゥム塩を除去した。残留物を遠心分離して水分を除去し、次いで凍結乾燥して、本発明で用いられるイオン性複合体（実施例 1 ) を得た。

(実施例 2 )

ペンゼトニゥムクロリド（アルドリッチ製） 1 5重量部およびジォク夕デシルジメチルアンモニゥムブロミド（東京化成製） 7 2重量部をメ夕ノール 1 5 0重量部に溶解し、実施例 1と同様の方法により、本発明で用いられるイオン性複合体（実施例 2 ) を得た。

(実施例 3 )

テトラデシルペンジルジメチルアンモニゥムクロリド（東京化成製） 2 0重量部およびジメチルジパルミチルアンモニゥムプロミド（東京化成製） 4 0重量部をメタノール 1 5 0重量部に溶解し、実施例 1と同様の方法により、本発明で用いられるイオン性複合体（実施例 3 ) を得た。

(比較例 1 )

トリドデシルメチルアンモニゥムプロミド（東京化成製） 6 0重量部をメタノ一ル 1 5 0重量部に溶解し、実施例 1と同様の方法により、イオン性複合体（比較例 1 ) を得た。

(比較例 2 )

ジォク夕デシルジメチルアンモニゥムブロミド（東京化成製） 6 5重量部をメ夕ノール 1 5 0重量部に溶解し、実施例 1と同様の方法により、イオン性複合体 (比較例 2 ) を得た。

(比較例 3 )

ドデシルペンジルジメチルアンモニゥムクロリド（東京化成製） 3 0重量部をメ夕ノ一ル 5 0重量部に溶解し、実施例 1と同様の方法により、イオン性複合体（比較例 3 ) を得た。

(試験 1 .抗血栓性の評価）

実施例:！〜 3および比較例 1〜3で得られたイオン性複合体を含む組成物の抗血栓性を、以下の方法で評価した。 ' 上記実施例および比較例で得られたイオン性複合体を各々、濃度 1 . 0重量％になるように T H Fに溶解した。この溶液を内径 3 mmのポリ塩ィ匕ビニルチューブ内面に通し、次いで乾燥することにより、チューブにイオン性複合体をコーティングした。

実際の使用状態に近い環境下での抗血栓性を観察するために、上記イオン性複合体をコ一ティングしたチューブの内部に、 3 7 °Cに加温した生理食塩液を口一ラーポンプにて循璟させ、 1日経過後にサンプルを採取した。採取したサンプルにクェン酸加牛血を充填し、 3 7 °Cにてインキュベートした。次いで、サンプルに 1/40規定の塩化カルシウム溶液を加えて、血液の凝固を開始させた。 3分後、クェン酸三ナトリウムをサンプルに加えて、血液の凝固を停止させた。凝固した血液（血栓）を採取し、凍結乾燥して、重量を測定した。結果を表 1の「抗血栓性」欄に示す。ここで、「抗血栓性」欄における数値は、本試験で用いたポリ塩化ビニルチューブと同一の直径を有するガラス管内に生成した血栓量を 1としたときの、ポリ塩化ビニルチューブ内に生成した血栓量の相対重量比を示す。

なお、比較として、未コーティングの塩化ビニルチューブの抗血栓性も同様の方法で評価した。

表 1

* 表中、 Bzはベンジルを表す。

* * 本試験で用いたポリ塩化ビニルチューブと同一の直径を有するガラス管内に生成した血栓量を 1としたときの、ポリ塩化ビニルチューブ内に生成した血栓量の相対重量比を示す。 (試験 2 '抗菌性の評価）

実施例 1 ~ 3および比較例 1〜 3で得られたイオン性複合体を含む組成物の抗菌性を、以下の方法にて評価した。なお、本試験における一連の操作は、全て無菌的に行った。

滅菌生理食塩水で 50倍希釈されたブロース液により約 1 X 10⁷個/ mlの濃度に調整した緑膿菌液（以下、この菌液を菌原液と呼ぶ）を調製した。

この菌原液の細菌数は次のように測定した。菌原液の 10⁴倍希釈溶液 100 1を普通寒天板上に捲き、 24時間後に形成された緑膿菌のコロニー数を計測した。このコロニー数を N個とすると、菌原液の濃度 Cは

C= 10⁴xN/0. 1 = 10⁵xN (個 Zml)

と示される。

この菌原液 100 /1を、ブロース液（滅菌生理食塩液で 40倍希釈）で希釈して、全量を 40mlに調整した（以下、この液を浸漬原液と呼ぶ）。この浸漬原液に、予め 5 cmx 5 cmに裁断して EOG滅菌した塩化ビニル製フィルム（以下、フィルム Aという）を浸潰し、 37 °Cで 24時間培養した。培養後、浸漬原液を、滅菌生理食塩水を用いて、 10倍系列で 10⁴倍まで希釈した（以下、 1 0ⁿ倍希釈液と略記する）。それそれの希釈液 100〃1を普通寒天培地上にまき、 24時間後、普通寒天培地上に形成された緑膿菌のコロニー数が 30〜30 0個のプレートについて菌数を計測した。すなわち、計測されたコロニー数を N _n個とすると、 25 cm²のフィルム Aとの接触後の菌数 N_aは次の式で与えられ

N_a=4 Oxl 0ⁿxNノ 0. 1

フィルム Aと接触する前の菌原液の濃度は前記 Cの通りであり、使用した原液量は 100 1であるから、フィルム Α接触前の菌数 N_bは次式で示ざれる。 N_b = Cx 0. 1 = 10.⁴ X N

浸漬原液 40ml中での 25 cm²の大きさのフィルム Aとの接触による N_b→ N_aの個数変化を表 2に示す。接触によって菌数が減少するということは、フィルム A表面に付与されたイオン性複合体の抗菌性が発揮されていることを示す。ここで「N . D .」は、菌が全く観察されなかったことを示す。

表 2

実施例のイオン性複合体を含む組成物は、長期間にわたる優れた抗血栓性と高い抗菌性とを兼ね備えていた。これは、実施例のイオン性複合体を含む組成物では、（b ) 水に不溶性のアンモニゥム塩が、へパリンまたはへパリン誘導体を医療用具の血液接触表面に強く保持する一方で、（a ) 水に可溶性のアンモニゥム塩が、イオン性複合体が疎水性に偏りすぎるのを防ぎへパリンの放出速度を適度に調節するので、長期間にわたる優れた抗血栓性を発揮するとともに、（a ) 水に可溶性のアンモニゥム塩に起因する抗菌性も発揮されるからであると考えられ

^> o

一方、比較例のイオン性複合体を含む組成物には、長期間にわたる優れた抗血栓性と抗菌性とを兼ね備えているものは全くなかつた。

(実施例 4 )

ジドデシルジメチルアンモニゥムプロミド（東京化成製） 2 0重量部およびジエイコザニル.ジメチルアンモニゥムプロミド（東京化成製） 6 5重量部をエタノール 1 4 0重量部に溶解した。完全に溶解したことを確認した後、この有機アンモ二ゥムのエタノール溶液に、水を、 [エタノール溶液：水] = [ 3 0 : 7 0 (重量比） ] の割合となるまで添加した。この際、溶液中にアンモニゥム塩が一部析出したが、溶液の温度を 5 0 °Cに上げることにより均一溶液となった。

へパリン 3 5重量部をイオン交換水 1 5 0重量部に溶解し、続いてこのへパリン水溶液に、エタノールを、 [へパリン水溶液：ェタノール] = [ 7 0 : 3 0 (重量比） ] の割合となるまで添加した。この際、溶液中にへパリンが一部析出して溶液が懸濁したが、溶液の温度を 7 0 °Cに上げることにより均一溶液となった。得られたへパリン溶液を攪拌しながら、これにアンモニゥム塩溶液を滴下した。反応物は溶液中ですぐに沈殿した。沈殿物を回収し、十分に洗浄し、未反応のへパリンおよびアンモニゥム塩を除去した。残留物を遠心分離して水分を除去し、次いで凍結乾燥して、本発明で用いられるイオン性複合体（実施例 4 ) を得た。 (実施例 5 )

ジドデシルジメチルアンモニゥムブロミド（東京化成製） 1 8重量部およびジエイコサニルジェチルアンモニゥムプロミド（東京化成製） 7 2重量部をエタノール 1 4 0重量部に溶解し、実施例 4と同様の方法で、本発明で用いられるイオン性複合体（実施例 5 ) を得た。

(実施例 6 )

ジデシルジメチルアンモニゥムプロミド 1 6重量部（東京化成製）およびジドコサニルジメチルアンモニゥムブロミド（東京化成製） 4 0重量部を 'エタノール 1 5 0重量部に溶解し、実施例 4と同様の方法により、本発明で用いられるィォン性複合体（実施例 6 ) を得た。

(実施例 7 )

ジテトラデシルジメチルアンモニゥムプロミド（東京化成製） 1 5重量部およびジエイコサニルジメチルアンモニゥムプロミド（東京化成製） 4 5重量部をェ夕ノール 1 5 0重量部に溶解し、実施例 4と同様の方法により、本発明で用いられるイオン性複合体（実施例 7 ) を得た。 · ·

(比較例 4 )

ジドデシルジメチルアンモニゥムプロミド（東京化成製） 1 5重量部およびジォク夕デシルジメチルアンモニゥムブロミド（東京化成製） 4 0重量部をェタノ一ル 1 5 0重量部に溶解し、実施例 4と同様の方法により、イオン性複合体（比較例 4 ) を得た。

(比較例 5 )

ジドデシルジメチルアンモニムプロミド（東京化成製） 1 5重量部、ジへキサデシルジメチルアンモニゥムプロミド（東京化成製） 3 8重量部をエタノール 1 5 0重量部に溶解し、実施例 4と同様の方法により、イオン性複合体（比較例 5 ) を得た。

(比較例 6 )

ペンジルジメチルォク夕デシルアンモニゥムプロミド（東京化成製） 6 0重量部を水 1 5 0重量部に溶解し、実施例 4と同様の方法により、イオン性複合体（比較例 6 ) を得た。

(比較例 7 )

ジォク夕デシルジメチルアンモニゥムプロミド（東京化成製） 4 5重量部をェ夕ノール 1 5 0重量部に溶解し、実施例 4と同様の方法により、イオン性複合体 (比較例 7 ) を得た。

実施例 4〜 7および比較例 4〜 7で得られたィォン性複合体を含む組成物の抗血栓性は、以下の方法で評価した。

(試験 3 ·へパリン活性値の評価）

実施例 4〜 7および比較例 4〜 7で得られたィオン性複合体を、各々 T H Fに濃度 0 . 2重量％になるように溶解し、次いで、この溶液を、内径 1 2 mmのポリ塩化ビニル製チューブ内部にコ一ティングした。このチューブを一回拍出量 7

0 m lのダイアフラム型補助人工心臓（東洋紡績製補助人工心臓）の流入口および流出口に接続した。 1 0 0 0 m lの血液バッグに生理食塩水を充填し、流入口、流出口に接続した上記チューブの片端を各々当該血液バグに接続し、そしてこの血液バッグを 3 7 °Cの水槽に入れて加温した。この補助人工心臓を、専用の駆動装置（東洋紡績製 V C T— 2 0 ) に接続して、陰圧— 8 0 mmH g、陽圧 3 0 0 mmH g、％s y s t o 1 3 7 %で流量約 7 1/m i nの条件にて駆動させた。血液バッグに充填した生理食塩液は、遊離したへパリンまたはへパリン誘導体やアンモニゥム塩が評価チューブに再結合しないように、毎日交換した。この条件下で、評価に必要な長さのチューブを定期的に採取しながら、 2週間駆動させた。採取したチューブをイオン交換水で軽く洗浄した後、表面に残存するへパリンの活性値を、テストチームへパリン S (第一化学薬品製）を用いて測定した。結果を以下の表 3に示す。

(試験 4 ·抗血栓性の評価：血栓の生じるまでの日数）実施例 4 ~ 7および比較例 4〜 7のィォン性複合体の 0. 2重量％ THF溶液を調製し、これを一回拍出量 70mlのダイアフラム型補助人工心臓（東洋紡績製）の内面に各々コーティングした。健常な成山羊に補助人工心臓（力ニューレが皮膚を貫通し、血液ポンプが体外に設置された体外設置式補助人工心臓）を装着した。補助人工心臓の脱血力ニューレを成山羊の左心房に揷入し、送血力ニューレを人工血管を介して成山羊の大動脈に装着した。

補助人工心臓の血液ポンプ内を毎日観察し、血栓が生じていた場合には、血液ポンプを脱血および送血力ニューレからはずし、新たな評価用の血液ポンプと交換した。抗血栓性は、血栓が発生した時点までの日数にて評価した。結果を以下の表 3に示す。

表 3

*へパリンの抗凝血活性値の単位は、 (mU/cm²) である,

**表中の Bzは、ベンジル基である, 上記結果から明らかなように、本発明のイオン性複合体を含む組成物は、従来技術であるへパリンまたはへパリン誘導体と 1種類のみのアンモニゥム塩とのィオン性複合体を含む組成物（比較例 6および 7 ) と比較して、良好な抗血栓性を有する。

また、本発明の組成物は、本発明者らが特許第 3228409号で開示した組成物（比較例 4および 5 ) と比較して、より長期間にわたる優れた抗血栓性を付与することができる。

産業上の利用可能性

本発明の組成物は、少なくとも 2種のアンモニゥム塩の混合物である有機カチォン混合物とへパリンまたはへパリン誘導体とから形成されるィォン性複合体を含むことにより、医療用具に長期間にわたる優れた抗血栓性を付与することがで, きる。

特に、本発明①の組成物は、少なくとも 2種のアンモニゥム塩、すなわち少なくとも 1種の（a ) 水に可溶性のアンモニゥム塩と少なくとも 1種の（b ) 水に不溶性のアンモニゥム塩との混合物である有機カチオン混合物とへパリンまたはへパリン誘導体とのイオン性複合体を含むことにより、医療用具に長期間にわたる優れた抗血栓性と抗菌性とを付与することができる。

また、本発明②の組成物は、少なくとも 2種のアンモニゥム塩、すなわち上述の特定のアンモニゥム塩（c ) および（d ) との混合物である有機カチオン混合物とへパリンまたはへパリン誘導体とのィォン性複合体を含むことにより、特に血液が極めて速く流れかつその動きが激しい条件下での使用が意図される医療用具においても、長期にわたる優れた抗血栓性を付与することができる。.

本出願は日本で出願された特願 2001-169978および特願 2001-342335を基礎としており、その内容は本明細書にすべて包含されるものである。また、本明細書において引用された特許および特許出願を含む文献は、引用したことによってその内容のすべてが開示されたと同程度に本明細書中に組み込まれるものである。

Claims

請求の範囲

1 . 有機カチォン混合物とへパリンまたはへパリン誘導体とから形成されるィォン性複合体を含む抗血栓性組成物であって、

当該有機カチオン混合物が、少なくとも 2種のアンモニゥム塩の混合物である、抗血栓性組成物。

[ただし、上記有機カチオン混合物が、ジドデシルジメチルアンモニゥム塩と、 4つの脂肪族基を有するアンモニゥム塩であって、 4つの脂肪族基の炭素原子の総数が 3 0〜 3 8でありかつ 4つの脂肪族基のうち 2つがそれそれ炭素数 1 0以上のアルキル基であるアンモニゥム塩から選択される少なくとも 1種のアンモニゥム塩との混合物である場合を除く。 ]

2 . 有機カチオン混合物が、少なくとも 1種の（a ) 水に可溶性のアンモニゥム塩と、少なくとも 1種の（b ) 水に不溶性のアンモニゥム塩との混合物である、請求項 1に記載の抗血栓性組成物。

3 . ( a ) 水に可溶性のアンモニゥム塩が、ペンゼトニゥム塩およびベンザルコニゥム塩から選択される少なくとも 1種のアンモニゥム塩である、請求項 2に記載の抗血栓性組成物。 ·

4 . ( b ) 水に不溶性のアンモニゥム塩が、 4つの脂肪族基が結合したアンモニゥム塩である、請求項 2または 3に記載の抗血栓性組成物。..

5 . 4つの脂肪族基が結合したアンモニゥム塩の 4つの脂肪族基のうち 2つがそれぞれ炭素数 1 2以上のアルキル基である、請求項 4に記載の抗血栓性組成物。

6 . 4つの脂肪族基が結合したアンモニゥム塩の 4つの脂肪族基のうち 3つがそれそれ炭素数 1 0以上のアルキル基である、請求項 4に記載の抗血栓性組成物。

7 . 有機カチオン混合物が、以下に示す少なくとも 1種のアンモニゥム塩（c ) と少なくとも 1種のアンモニゥム塩（d ) との混合物である、請求項 1に記載の抗血栓性組成物。

8 . アンモニゥム塩（c ) が、 4つの脂肪族基のうち 2つがそれそれ炭素数 2以下の脂肪族アルキル基であり、かつ残り 2つがそれそれ炭素数 1 9以上の脂肪族アルキル基であるアンモニゥム塩である、請求項 7に記載の抗血栓性組成物。

9 . 請求項 1〜 8のいずれか 1項に記載の抗血栓性組成物が少なくとも血液接触面の一部にコーティングされている、医療用具。