WO2002036544A1

WO2002036544A1 - Procede pour separer des isomeres optiques d'un derive d'acide amine

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Publication number: WO2002036544A1
Application number: PCT/JP2001/009384
Authority: WO
Inventors: Shin Watanabe; Mizue Kawahara
Original assignee: Tokuyama Corporation
Priority date: 2000-11-02
Filing date: 2001-10-25
Publication date: 2002-05-10
Also published as: EP1338588A4; US7199264B2; EP1338588A1; CN1473145A; ATE374175T1; DE60130674T2; KR100790507B1; EP1338588B1; US20040102646A1; DE60130674D1; JP2002145837A; KR20030059171A; JP4783496B2

Description

明細書

ァミノ酸誘導体の光学異性体の分離方法技術分野

本発明はァミノ酸誘導体の一対の光学異性体からなる混合物から各異性体を相互に分離する方法に関する。

背景技術

ァミノ酸のァミノ基における水素原子が t e r t —ブトキシカルボ二ル基等のアルコキシカルボニル基、.ァラルキルォキシカルボニル基、ァリールォキシカルボニル基、アルケニルォキシカルボニル基、又はァシル基で置換 ·保護されたアミノ酸誘導体は、医薬品または医薬中間体として重要な化合物である。これらァミノ酸誘導体においては光学異性体が存在することが多く、これら光学異性体間ではその生理活性や毒性にしばしば大きな差が有ることが広く知られている。そのため、このような分野で使用されるアミノ酸誘導体については、光学純度の高いものを製造することや、使用 ίこ先立って光学純度を確認しておくこと、等が非常に重要である。

一般に、光学異性体の分離精製は、液体クロマトグラフィーを用いて行なうことができ、多糖類、アミノ酸誘導体などをシリカゲルに担持した光学異性体分離用のカラムも種々開発されている。

例えば、 Takeuchi et al. , Journal of Chromatography, 3 5 7 ( 1

9 8 6 ) 4 0 9— 4 1 5には、ラセミマンデル酸及びラセミマンデル酸誘導体の分離に際し、移動相成分として一シクロデキス卜リン及び/? ーシクロデキストリンを使用した例や、高性能（もしくは高速）液体ク口マトグラフィ一（H P L C ) 用にシクロデキストリンが結合された相が光学異性体、幾可異性体及び構造異性体の分離に応用されていることが紹介されている。

他方、著者らは、移動相成分として^ーシクロデキストリンを用いるミクロ H P L Cによりダンシルアミノ酸の鏡像異性体分離について報告している。該文献に記載されている分離方法は/?ーシクロデキストリンがダンシル基を構成するナフタレン璟を有する低分子化合物と複合体（包接錯体）を作り易いという性質を利用したものであり、ナフタレン環を有しないァミノ酸誘導体の光学異性体分離について該分離方法をそのまま適用することはできない。例えば、上記文献には、分離因子（セパレ一シヨンファクター）は、移動相の p Hが高くなるほど増大する傾向があり、 p H 6付近が最も好ましい旨が説明されているが、このような p H領域で、例えば前記の様な t e r t—ブトキシカルボ二ル等を有するアミノ酸誘導体の光学異性体の分離を行なっても分離できない。

ァミノ酸のァミノ基にダンシル基を導入したアミノ酸誘導体の光学異性体は、上記 Takeuchi et al. の方法により分離できるものの、ダンシル基を脱離してもとのァミノ酸にもどすのが必ずしも容易でない場合がある。したがって、医薬品、例えば、生理活性ペプチドの合成中間として使用することができ、そしてかような使用のため及び/又は分離のために導入した基が所定の目的が達成された後、容易に脱離できるような基（例、前記 t e r t —ブトキシカルポ二ル基等参照）であるァミノ酸誘導体の分離方法の提供には、依然として強い要望が存在するであろラ o

発明の開示

本発明者らは前記の要望に応えるべく、一対の D型及び L型光学異性体を含む前記ァミノ酸誘導体を、各光学異性体に対してそれぞれ異なる親和性を有する親水性化合物と共存させることにより両者に疎水性の差を発現させれば、この差を利用して両者を分離できるのではないかと考え、種々検討を行なった。その結果、上記の t e r t —ブトキシカルボ二ル基を初めとする置換基を有するァミノ酸誘導体を Takeuchi et al. に従って/ δ—シクロデキストリンで処理するだけでは十分な分離を行なうことはできなかったが、光学異性体混合物を^ーシクロデキストリンを初めとし、一対の各光学異性体に対してそれぞれ異なる親和性を有する一定の親水性化合物の共存下に、生成することが予測される複合体の疎水性を高めるような特定の条件下で疎水性物質と接触させると各光学異性体を相互に効率よく分離することができることを見出し、本発明を完成するに至った。 .

したがって、本発明によれば、不斉炭素を少なくとも一つ有するアミノ酸のァミノ基もしくはイミノ基の水素原子の一つが有機カルボニル基により Ν—置換されたアミノ酸誘導体の一対の光学異性体を含有する混合物からの各光学異性体の分離方法が提供され、該分離方法は、

( Α ) 該混合物を用意し、

( Β ) 該混合物を、それに含まれる各光学異性体に対してそれぞれ異なる親和性を有する親水性化合物と水性溶液中で混合して複合体を形成し、

( C ) 該複合体を含有する水性溶液又は水性懸濁液を、

( i ) p Hが 3 . 5以下となる条件下、或いは

(ii) 該ァミノ酸誘導体の荷電性基に由来するイオンの対ィオンとなりうる基及び疎水性の原子団を有する化合物の共存下

に置くことにより、各光学異性体間の疎水性に差違をもたらし、そして

( D ) かような疎水性の差違を利用した各光学異性体を相互に分離する、

工程を含んでなる。

また本発明によれば、かような分離方法を用いるアミノ酸またはその誘導体の高純度光学活性体の製造方法、並びにそのような製造方法を効率よく実施するための該分離方法の使用も提供される。

発明を実施するための最良の形態

本発明の方法が適用されるアミノ酸誘導体は、本発明による作用効果、一例としては、上記工程（B ) 及び（C ) を経た時、各光学異性体間（または各光学異性体から形成された複合体間）の疎水性に差違をもたらすものであれば、いかなる誘導体であってもよい。なお、本発明にいう「一対の光学異性体」とは、ある特定のアミノ酸の、例えば、 L型一と D型一からなる光学異性体を意味している。

上記作用効果に関し、理論に拘束されるものでないが、本発明によれば、次のような機構により一対の光学異性体から各光学異性体の分離が可能になったものと思われる。例えば、 D型及び L型の光学異性体を含むアミノ酸誘導体が前記のような性質を有する親水性化合物と水性溶液中で共存すると、該親水性化合物に対して強い親和性を有する光学異性体は何らかの形で相互作用を起こしてもう一方の光学異性体よりも親水性の高い複合体（包接錯体や、その他の物理的もしくは化学的相互作用で結合する分子集合体）となるが、これらを疎水性物質と接触させたとしても両者の該疎水性物質に対する親和性（例えば吸着力）の差が十分ではないため両者を分離することはできない。一方、水性溶液の p Hを 3 . 5以下にしたときには、アミノ酸誘導体のカルボキシル基が解離しなくなるため、相対的に疎水性が高くなつている光学異性体（すなわち親水性化合物と複合体を形成していないか若しくは上記複合体より不安定な複合体を形成していると思われる光学異性体）の疎水性が更に高まるのに対し、上記複合体においては親水性化合物の効果が大きくその親水性はあまり変わらないため、両者の疎水性物質へ対する平衡分配率が変化し、結果として光学異性体を効率良く分離することが可能になったものと思われる。また、疎水性を有する原子団を含むイオンを含有させた場合には、相対的に疎水性が高くなつている光学異性体のカルボキシル基が解離したとしても該イオンとイオン対を形成するために疎水性は高まるのに対し、より安定な複合体の光学異性体はその近傍の親水性化合物の存在によりこのようなイオン対を形成できず、或いは、対イオンの効果が弱められて上記と同様に疎水性物質への平衡分配率が変化し、光学異性体の分離が可能になつたものと思われる。

たがって、以下に詳述する本発明の各構成は、上記のような作用を奏する上で好適なものが選ばれる。

本発明方法で用いられるか又は処理の対象である N—置換されたァミノ酸誘導体は、一般式（ I ) ： ' ,

で表され、上式中の各基は、それぞれの定義に関連して包含される典型的なァミノ酸を慣用名で力ッコ内に併記しながら例示すると次のとおりである。

R ¹は未置換もしくは置換された C i —eアルキル基を表し、かつ、置換された場合の置換基はヒドロキシ（セリン、スレオニン）、メルカプト (システィン）、メチルチオ（メチォニン）、ァミノ（リジン）、モノ一もしくはジメチルァミノ、 d - ₆アルキル、 C i - 6アルキルカルボニルァミノ、 C ₆アルキルォキシカルボニル、アミジノアミノ（アルギニン）、カルボキシ（グルタミン酸、ァスパラギン酸）、 d - 6アルキルォキシカルボニル、力ルバモイル（ダルタミン、ァスパラギン）、未置換もしくは置換されたフユニル [未置換フニルの場合（フニ二ルァラニン）、置換されたフニルの場合の置換基は同一もしくは異なり、 1 〜 3個のハロゲン原子、ヒドロキシ（チロシン）、メルカプト、メチル、トリフルォロメチル又はァミノであることができる。 ] 、環員窒素原子を 1もしくは 2個有し、ベンゼン環が縮合していてもよい 5員環式基（ヒスチジン、トリブトファン）からなる群より選ばれる。

なお、 R ¹が未置換 d— ₆アルキルの場合の典型的な原料アミノ酸（又は基本アミノ酸ともいう）には、ァラニン、イソロイシン、ロイシン、バリンが包含される。

R ²及び R ³は一方が水素原子であり、そして他方がアルコキシカルボニル、ァラルキルォキシカルボニル、ァリールォキシカルボニル、アルケニルォキシカルボニル又はァシルを表し、或いは R ²及び R ³の水素原子を表す基は、水素原子に代わり、 R ¹と一緒になつて、それらが結合する窒素原子を介して、 5員環を形成しうるプロパン一 1， 3—ジィル (プロリン）、 2—ヒドロキシプロパン一 1， 3—ジィル又は 1ーヒドロキシプロパン一 1， 3—ジィルを表す。

こうして特定されるアミノ酸誘導体は、中でも、ァラニン、プロリン、ロイシン、イソロイシン、ノリン、トリプトファン、フヱ二ルァラニン、チロシン、セリン、メチォニン、グルタミン、グルタミン酸及びリジンに由来するものに、本発明の方法が好適に用いられる。

以上の一般式（ I ) の化合物を初め、本明細書に記載するアルキル並びにアルコキシもしくはアルキルォキシ、アルコキシカルボニル及ぴァルキルカルボニル基におけるアルキルは、それぞれ記載された炭素原子数をもつものであって、直鎖又は分岐鎖のアルキルであることができ、限定されるものでないが、メチル、ェチル、プロピル、 i s o—プロピノレ、 n—ブチノレ、 s e c—ブチル、 i s o—ブチノレ、 t e r t—ブチノレ、 n—ペンチル、ォクチル、ドデシル、ォクタデシル、等から選ばれる。他方、ァラルキル、好ましくはフヱニル一 d— 4アルキレンにいう、 C l— 4アルキレンには、メチレン、エチレン、プロピレン、 2 _メチルプロピレン、ブチレンが挙げられる。また、アルケニルォキシカルボ二ルにいうアルケニルは、 C _{3 9}アルケニルが好ましく、限定されるものでないが、 1ーブテン、 2—ブテン、等が挙げられる。

なお、本明細書に記載のァラルキルォキシカルボニル、ァリ一ルォキシカルボニルァリール、ベンゾィルに包含されるベンゼン環上には、同一もしくは異なる置換基が最高 3個まで存在することができ、かような置換基としては、限定されるものでないが、ハロゲン原子（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、ヒドロキシ、メルカプト、メチル、トリフルォロメチル、ァミノ、二トロ等を挙げることができる。

本発明の分離方法では、上記のとおりのァミノ酸のアミノ基における水素原子の少なくとも一つが、アルコキシカルボニル基、ァラルキルォキシカルボニル基、ァリールォキシカルボニル基、アルケニルォキシ力ルポ二ル基、又はァシル基で置換されたァミノ酸誘導体のいずれか一対の光学異性体混合物が処理される。典型的にはあるアミノ酸誘導体の D 型及び L型の光学異性体（以下、単にそれぞれ D体及び L体ともいう。）が混在するアミノ酸誘導体から D体又は L体を分離する。混在する D体及び L体はいずれか一方が他方より著しく多い場合（9 0〜9 9 . 9 %) や、ラセミ混合物のょラに D体及び L体が等量ずつ混在してもよい。なお、本発明の分離方法は、不斉炭素を 2以上有するアミノ酸誘導体の光学異性体の分離についても適用可能であるが、分離効果の高さの観点から、不斉炭素を 1つ有することにより 2種類の光学異性体が存在するァミノ酸誘導体に用いるのが好適である。

本発明方法で処理される N—置換されたァミノ酸誘導体の N—置換基の具体的なものとしては、限定されるものでないが、分離性およびアミノ酸誘導体それ自身の有用性の観点から、それぞれ次のような基であるのが好適である。すなわち、アルコキシカルボニル基は、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、 n—プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、 t e r t —ブトキシカルボニル基、イソブトキシカルボニル基、 t e r tーァミルォキシカルボニル基等の総炭素数 2〜1 0の基であるのが好適である。また、ァラルキルォキシカルボ二ルは、ベンジルォキシカルボニル基、 p—ニトロべンジルォキシカルボニル基、 p—メトキシベンジルォキシカルボニル基、 9一フルォレニルメトキシカルボニル基等の総炭素数 8〜1 5の基であるのが好適であり、ァリールォキシカルボニル基は、フヱニルォキシカルボニル基、 m—二トロフヱニルォキシカルボニル基、 p—メチルフェニルォキシカルボ二ル基、 m—メチルフヱニルォキシカルボニル基、 2， 4一ジメチルフヱニルォキシカルボニル基、. 2， 4， 6— トリメチルフヱニルォキシカルボニル基等の総炭素数 7〜1 0の基であるのが好適であり、アルケニルォキシカルボニル基は、 1ーブテンォキシカルボニル基、 2—ブテンォキシカルボニル基等の総炭素数 4〜1 0の基であるのが好適であり、更にァシル基は、ホルミル基、ァセチル基、プロパノィル基、ブタノィル基、ベンゾィル基等の総炭素数 1〜 7の基であるのが好適である。

これらの置換基の中でも特に高い分離が期待されることから、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、 t e r t —ブトキシカルボ二ル基、 t e r t —アミルォキシカルボニル基、ベンジルォキシカルボ二ル基、フヱニルォキシカルボニル基、ホルミル甚、ァセチル基、プロパノィル基、又はベンゾィル基が特に好ましい。

本発明の分離方法において好適に用いられる本ァミノ酸誘導体を具体的に示せば、 N— ( t e r t —ブトキシカルボニル）ーァラニン、 N— ( t e r t —ブトキシカルボニル）一プロリン、 N— ( t e r t —ブトキシカルボニル）一口イシン、 N— （ t e r t—ブトキシカルボニル） —イソロイシン、 N— （ t e r t —ブトキシカルボニル）一バリン、 N 一（ t e r t _ブトキシカルボニル）一トリブトファン、 N— ( t e r t 一ブトキシカルボニル）一フヱニルァラニン、 N— ( t e r t —ブトキシカルボニル）ーセリン、 N— ( t e r t 一ブトキシカルボニル）一メチォニン、 N— ( t e r t —ブトキシカルボニル）一グルタミン、 N ― ( t e r t —ブトキシカルボニル） —グルタミン酸、 N— ( t e r t —ブトキシカルボニル）一リジン、 N— （ t e r t —ブトキシカルボニル）一チロシン等のアルコキシカルボニル基で置換されたアミノ酸誘導体； N—ベンジルォキシカルボニル一ァラニン、 N—ベンジルォキシカルボニル一プロリン、 N—ベンジルォキンカルボニル一ロイシン、 N— ベンジルォキシカルボ二ルーィソロイシン、 N—ベンジルォキシカルボ二ル一バリン、 N—ベンジルォキシカルボニル一トリプトファン、 N— ベンジルォキシカルボ二ルーフヱ二ルァラニン、 N—ベンジルォキシカルボニルーセリン、 N—ベンジルォキシカルボ二ルーメチォニン、 N— ベンジルォキシカルボ二ルーグルタミン、 N—べンジルォキシカルボ二ルーグルタミン酸、 N—ベンジルォキシカルボ二ルーリジン等のァラルキルカルボニル基で置換されたァミノ酸誘導体； N—フヱニルォキシカルボニル一ァラニン、 N—フヱニルォキシカルボニル一プロリン、 N— フヱニルォキシカルボ二ルーロイシン、 N—フヱニルォキシカルボニル一イソロイシン、 N—フヱニルォキシカルボ二ル一バリン、 N—フエ二ルォキシカルボ二ルートリプトファン、 N—フヱニルォキシカルボニル一フヱニルァラニン、 N—フエニルォキシカルボ二ルーセリン、 N—フエニルォキシカルボ二ルーメチォニン、 N—フヱニルォキシカルボ二ルーグルタミン、 N—フヱニルォキシカルボ二ルーグルタミン酸、 N—フエニルォキシカルボ二ルーリジン等のァリ一ルォキシカルボニル基で置換されたアミノ酸誘導体、 N—ベンゾィル一ァラニン、 N—ベンゾィループロリン、 N—ベンゾィル一ロイシン、 N—べンゾィルーイソロイシン、 N—ベンゾィルーパ'リン、 N—べンゾィルートリプトフアン、 N—ベンゾィル一フエ二ルァラニン、 N—べンゾィルーセリン、 N—ベンゾィル一メチォニン、 N—ベンゾィル一グルタミン、 N—べンゾィル一グルタミン酸、 N—べンゾィルーリジン等のァシル基で置換されたアミノ酸誘導体等が挙げられる。これらの中でも分子中における不斉炭素数が 1個であるものが特に好適に用いられる。

本発明方法で処理する N—置換されたァミノ酸誘導体の一対の光学異性体を含有する混合物は、いかなる方法でもたらされたものであってもよい。例えば、一般式（ I 一 a ) ：

(上式中、 R ¹は上記一般式（ I ) についての定義と同じであり、そして R ²— ^a及び R ³— ^aは独立して水素原子であるか、或いはいずれか一方が、 R ¹と一緒になつてそれらが結合する窒素原子を介して 5員環を形成しうるプロパン一 1， 3 —ジィル、 2 —ヒドロキシプロパン一 1， 3 —ジィル又は 1 —ヒドロキシプロパン一 1， 3 —ジィルを表すことができる）で表されるアミノ酸（原料アミノ酸又は基本アミノ酸ともいう）を、反応に悪影響を及ぼさない溶媒中、塩基の存在下で、一般式（Π )

A— C O O H ( Π )

(上式中、 Aは、アルコキシ、ァラルキルォキシ、ァリールォキシ、ァルケニルォキシ又はアルキルもしくはァリールを表わす）

で表わされる酸の活性エステル（例えば、ジー t e r t —プチルカ一ボネート、クロロギ酸エステル、ァシルハロゲン化物）と反応させることによって得られるものを、本発明方法の処理対象（光学異性体の混合物又は未分離アミノ酸誘導体ともいう）とすることができる。通常、このような有機化学的合成反応を用いてァミノ酸誘導体を合成した場合には光学純度の高い原料ァミノ酸を使用したときでもラセミ体或いは光学純度 8 0〜9 9 %のものが得られることがある。

本発明の分離方法においては、未分離ァミノ酸誘導体に含まれる各光学異性体（D体及び L体）に対してそれぞれ異なる親和性を有する親水性化合物（以下、キラルセレクタともいう。）と該未分離アミノ酸誘導体とを水性溶液中で混合し、次いで得られた水性溶液又は水性懸濁液を、 P Hが 3 . 5以下となる条件下、又は前記ァミノ酸誘導体の対イオンとなり得る疎水性を有する原子団を含むイオンの共存下（に置くことで、各光学異性体間の疎水性に差違がもたらされ、そして）で疎水性物質と接触させて該水性溶液又は水性懸濁液中に存在する各光学異性体（D型アミノ酸誘導体と L型アミノ酸誘導体）とを分離する。

キラルセレクタとしては、各光学異性体に対してそれぞれ異なる親和性を有する親水性化合物であれば公知の化合物が特に限定なく使用できる。一般に光学活性な化合物及び内部にキラルな裂講ゃ空間を有するホスト化合物（内部に他の化合物やイオン等を包接して包接化合物を形成し得る化合物）は、各光学異性体 D型異性体と L型異性体とに対する親和性が異なるので、このような化合物の中で親水性のものが、本発明におけるキラルセレクタとして好適に使用することができる。なお、本明細書において親水性とは、水に対して僅かでも溶解性を有することを意味する。キラルセレクタが疎水性の場合は、 D体と L体の分離を効率よく行なうことができない。

本発明でキラルセレクタとして使用できる化合物としては、多糖類及びその誘導体、並びにアミノ酸の天然光学活性化合物及びその誘導体が挙げられ、これら化合物を具体的に例示すれば次のような化合物が挙げりれる。即ち、多糖類としては、了ミロース、 α—シクロデキストリン、 β— シクロデキストリン、アーシクロデキストリン等が例示される。また、多糖類誘導体としては、ヘプタキス（2、 6— 0—ジメチル） — β—シクロデキストリン、ヘプタキス（2、 3、 6— 0— トリメチル） — β _ シクロデキストリン、ヘプタキス（2、 6— 0—ヒドロキシプロピル） — 3—シクロデキストリン、ヘプタキス（2、 3、 6 _ 0—ヒドロキシプロピル） — β—シクロデキストリン、ヘプタキス（2、 6— 0—メチルー 3— 0—ァセチル）一 β—シクロデキストリン、へキサキス（2、 6— 0—ジメチル）一 ^—シクロデキストリン、へキサキス（2、 3、 6— 0— トリメチル）一 /3—シクロデキストリン、へキサキス（2、 6 一 0—ヒドロキシプロピル） — β—シクロデキストリン、へキサキス（2 、 3、 6— 0—ヒドロキシプロピル）一 /3—シクロデキストリン、へキサキス（2、 6— 0—メチルー 3— 0—ァセチル）一 /S—シクロデキストリン、ォクタキス（2、 6— 0—ジメチル）一^一シクロデキストリン、ォクタキス（2、 3、 6— 0—トリメチル） _ 3—シクロデキストリン、ォクタキス（2、 6— 0—ヒドロキシプロピル）一 β—シクロデキストリン、ォクタキス（2、 3、 6—0—ヒドロキシプロピル） — β ーシクロデキストリン、ォクタキス（2、 6一 0—メチル一 3— 0—ァセチル）一 /?ーシクロデキストリン等のシクロデキストリン誘導体が例示される。また、アミノ酸の天然光学活性化合物としては、フヱニルァラニン、トリブトファン、ロイシン等が、さらにこれらの誘導体としては Ν— ( t e r t —ブトキシカルボニル）一 L一トリプトファン、 N— ( t e r t —ブトキシカルポニル）一 D— トリプトファン、 N— ( t e r tーブトキシカルボニル）一 L—フヱ二ルァラニン、 N— ( t e r t 一ブトキシカルボニル）一 D—フヱニルァラニン、 N— （ t e r t —ブトキシカルボニル）一 L一口イシン、 N— ( t e r t —ブトキシカルボニル）一 D—口イシン等が例示される。なお、これら化合物は単独で用いても 2種類以上を併用してもかまわない。

本発明においては、上記キラルセレクタの中でも分離能が高いことから、各種シクロデキストリン又はその誘導体を用いるのが好適である。また、シクロデキストリン誘導体としては、入手の容易さ、水に対する溶解度、分離能の点から、シクロデキストリンの水酸基あるいは水素原子の一部がヒドロキシェチル基、ヒドロキシプロピル基、トリフルォロァセチル基、ァセチル基で置換されたシクロデキストリンを用いるのが好適である。

本発明で使用するキラルセレクタの量は、該キラルセレクタが親和性を有する D体若しくは L体の量に対して十分な量となるように、使用する未分離ァミノ酸誘導体の量及びその光学純度等に応じて適宜決定すればよいが、十分な分離効果が得られ、且つ過剰使用および粘度上昇による操作性低下を防止するという観点から、水性溶液中の濃度で l mM〜 1 0 0 mMの範囲で使用するのが好適である。

本発明の分離方法においては、キラルセレクタと、未分離アミノ酸誘導体中の D体あるいは L体との接触を良くし、高い分離効果を得るために、未分離アミノ酸誘導体と上記キラルセレクタとは、水性溶液中で混合される。ここで、水性溶液とは水を含有する溶液、即ち、水、又は水及び水に対して溶解性を有する有機化合物の混合溶液を意味するが、未分離ァミノ酸誘導体中の D体又は L体とキラルセレクタとの相互作用を効率よく起こし、高い分離効果を得るためには、水と有機化合物との混合溶液を用いるのが好適である。この時用いる有機化合物は、水に対して混和性を有するものであれば特に限定されず、ァセトニトリル等の二トリル化合物；メタノール、イソプロピルアルコール、プロピルアルコ

—ル、エタノール、ブチルアルコール、 t e r t —ブチルアルコール、ォクタノール等の脂肪族アルコール；フヱノ一ル等の芳香族アルコール；エチレングリコール、グリセロール、ポリェチレングリコール、ポリビニルアルコールなどの水溶性高分子などが挙げられる。これらの中でも、光学異性体分離後の除去の容易さの点から、沸点の低いァセトニトリル、メタノール、イソプロピルアルコール、エタノール等が好適に使用される。有機化合物の使用量は特に限定されないが、水と該有機化合物の合計質量を基準として 0 . 0 1〜5 0質量％、特に有 0 . 1〜2 5質量％となる量であるのが好適である。

水性溶液中で未分離ァミノ酸誘導体とキラルセレクタとを混合させる方法は、特に限定されず、それぞれ所定量の未分離アミノ酸誘導体及びキラルセレクタを計りとり、水性溶液に同時にあるいは順次添加し、攪拌混合すればよい。このとき未分離ァミノ酸誘導体とキラルセレクタとの量比は、キラルセレクタのモル数が少なくとも未分離ァミノ酸誘導体中のキラルセレクタに対する親和性の高い光学異性体のモル数より多くなる量であれば特に限定されないが、分離効果の高さの点から、未分離アミノ酸誘導体（即ち D体と L体の合計）モル数に対するキラルセレク夕のモル数の比 {キラルセレクタモル数 Z ( D体モル数 + L体モル数） } が 1 0 0 0〜1、特に 1 0 0〜5とするのが好適である。

本発明の分離方法では、上記のようにして調製された未分離アミノ酸誘導体及びキラルセレクタを含む水性溶液又ほ水性懸濁液を、 ( i ) その pHが 3.5以下となる条件下、又は（il) 使用する本アミノ酸誘導体の対イオンとなり得る "疎水性を有する原子団を含むイオン" （以下、疎水性対イオンとも言う。）の共存下で疎水性物質と接触させる必要がある。上記（ i ) 又は（il) の条件を満足しないで疎水性物質と接触させた場合には、 D体と L体との疎水性に有効な差が生じないためと思われるが、良好な分離効果が得られない。

上記（ i ) の条件を満足させるためには、 PH調整剤を用いて水性溶液又は水性懸濁液の p Hが 3.5以下となるように調整すればよい。この時使用できる pH調整剤は、水性溶液の pHを 3.5以下に調整できるものであれば特に限定されず、リン酸、硫酸、塩酸等の鉱酸類；及びギ酸、酢酸、乳酸、プロピオン酸、クェン酸、マレイン酸、マロン酸など φ有機酸類が制限なく使用できる。これら ρ Η調整剤の濃度は特に制限されないが、一般的には 1〜10 OmM、好適には 1〜3 OmMの範囲で使用される。また、分離効果の高さから、水性溶液又は水性懸濁液の p Hは、 1〜3、特に 1.4〜2.5とするのが好適である。なお、 p H調節は疎水性物質と接触させる前に行われていればよく、未分離ァミノ酸とキラルセレクタとの混合前に行なってもよい。かような混合は、混合が十分に行われる温度であれば、限定されるものでないが、一般的に、 10°C〜30°Cで行うのがよい。

また、前記（ii) の条件下で疎水性物質との接触を行なう場合に共存させる疎水性対イオンは、本ァミノ酸誘導体中のカルボキシル基等のィォン化し得る部位が水性溶液中でィォン化した際に、その反対の電荷を有するイオンとして存在し、イオンペアを形成するものであれば特に限定されない。上記疎水性対イオンが有する "疎水性を有する原子団" とは、メチル基、ェチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、 t e r t一ブチル基、ォクチル基、ドデシル基、ォクタデシル基などの C 卜_{2 2}アルキル基；フヱニル基、ナフチル基などのァリール基等の疎水性を増大させる作用を有する原子団を意味する。なお、これら原子団は、全体として疎水性を有していればよく、その一部にヒドロキシル基、二トロ基等の官能基、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等のハロゲン原子を有していてもよい。

疎水性対イオンは、水性溶液中でイオン化し、カチオンあるいはァニオンを形成する化合物（以下、疎水性対イオン形成化合物ともいう。）の形で水性溶液に添加して使用される。このような化合物としては、上記の疎水性を有する原子団を有するアミン化合物、アンモニゥム化合物、ホウ素化合物、リン化合物、スルホン酸化合物などが使用できる。なお、ァミン化合物は中性であるため、水性溶液中で水素イオンを付加させてカチオンとして存在させる必要がある。そのためには水性溶液の p Hを使用するアミン化合物の p K a以下にして使用する。

本発明で使用できる疎水性対イオンを与える化合物を例示すれば、ァミン化合物としては、トリメチルァミン、ジェチルァミン、トリェチルァミン、トリエタノールァミン、トリイソプロピルァミン、ジイソプロピルメチルエタノールァミン、トリブチルァミン、ジブチルァミン、ブチルァミン、ォクチルァミン、ジォクチルァミン、トリオクチルァミン、ジフヱニルァミン、トリフヱニルァミン等が挙げられる。

また、アンモニゥム化合物としては、これらァミン化合物の塩酸塩、臭素酸塩、水酸化塩等のアンモニゥム塩の他、塩化テトラメチルアンモ二ゥム、臭化テトラメチルアンモニゥム、塩化テトラエチルアンモニゥム、臭化テトラェチルアンモニゥム、リン酸テトラブチルアンモニゥム、塩化テトラブチルァンモニゥム、臭化テトラブチルァンモニゥム、水酸化テトラプチルアンモニゥム等が挙げられる。

また、ホウ素化合物としては、テトラフヱニルホウ素ナトリウム、テトラ（クロロフヱニル）ホウ素ナトリウムなどのイオン性ホウ素化合物等が；リン化合物としては、塩化テトラフヱニルフォスフィン、塩化テトラォクチルフォスフィン等が；さらにスルホン酸化合物としては、トルエンスルホン酸、ォクチルスルホン酸、ドデシルスルホン酸等が挙げられる。

これら化合物の中でも水性溶液に対する溶解度の点からトリェチルァミ：、トリエタノールァミン、トリブチルァミン、ジブチルァミン、トリプチルァミン、テトラブチルァミン、テトラアミルァミン、ドデシルスルホン酸等が好適に使用される。

前記疎水性対イオンの使用量は、未分離ァミノ酸誘導体中に存在する D体又は L体のうちキラルセレクタとの親和性が低いものに対して十分な量であれば特に限定されず、用いる未分離ァミノ酸誘導体の種類及び量、キラルセレクタの種類等に応じて分離効果の観点から最適な量を適宜決定すればよいが、通常は、水性溶液又は水性懸濁液中の濃度で表して 0 . 0 l mM〜5 O mM、特に 0 . l mM〜3 O mMの範囲となる量使用するのが好適である。

また、上記疎水性対イオンを含有する水性溶液の p Hは、分離対象となる本ァミノ酸誘導体がイオン化し、疎水性対イオンとイオンペアを形成することができる p H領域であれば特に制限されないが、一般的には、緩衝液の p H調整の容易さや、使用後の廃液処理の容易さを勘案して p H = 4〜8の範囲、特に p H = 4〜7の範囲とするのが好適である。なお、このような p Hに調整するためには、前記した無機酸及び有機酸の他に、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、炭酸ナトリウム、炭酸力リウム、炭酸カルシウムなどのアル力リ性塩類、リン酸水素ナトリウム、リン酸 2水素カリウム等の塩類、トリス（ヒドロキシメチル）ァミノメタン、 4一（2—ヒドロキシェチル）一 1一ピペラジンェタンスルホン酸、モルホリンプロパンスルホン酸などの p H緩衝液用有機化合物などが使用できる。

疎水性対イオンを与える化合物の添加及び必要に応じて行なう p H調節は、疎水性物質と接触させる前に行われていればよく、未分離ァミノ酸とキラルセレクタとの混合前に行なってもよい。

また、疎水性物質と接触される前記水性溶液又は水性懸濁液には、任意成分として、イオン強度を調整するための塩類、或いは本発明の分離方法を光学純度分析方法に適用する際に D体及び L体の検出を容易にするための "紫外領域、可視領域に吸収スぺクトルを有する化合物" 等を添加することもできる。このとき、塩類としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウムなどが使用でき、 "紫外領域、可視領域に吸収スペクトルを有する化合物" としてはトルエンスルホン酸、トルェンスルホン酸ナトリウム、ベンゼンスルホン酸ナトリウム、ナフタレンスルホン酸ナトリウム、フルォレセイン、フエノールフタレイン、二一ルブルー、ェォシン、クマリンなどの芳香族を有する有機化合物等が使用できる。

本発明の分離方法においては、 "未分離ァミノ酸誘導体及びキラルセレクタを含む水性溶液又は水性懸濁液" を前記（ i ) 又は（il ) の条件を満足するような条件下で疎水性物質と接触させ、該疎水性物質に対する親和性の差を利用して D体と L体を分離する。

ここで使用する疎水性物質とは、前記水性溶液よりも疎水性が高く、これと容易に分離できる物質であれば特に制限無く液体または固体の疎水性物質が使用される。例えば、液体の疎水性物質としては、クロロホルム、ジクロロメタン、へキサン、ォクタノール等の水に不溶若しくは難溶の有機溶媒を使用することができる。また、固体の疎水性物質としては疎水的表面を有する固体であれば特に制限無く使用することができる。このような物質を例示すれば、シリカ、チタニア等の無機微粒子の表面に、ォクタデシル基、ォクチル基、ブチル基、メチル基、フヱニル基、シァノプロピル基等の炭素数 1以上の疎水性基を有する化合物を結合させた固体；シリ力、チタニア等の無機微粒子の表面にポリスチレン、シリコーン、ポリメタクリル酸メチル等の疎水性ポリマ一を吸着あるいは結合させた固体；ポリスチレン、ポリメタクリル酸メチル等の疎水性を有する高分子の微粒子固体；ポリスチレン、ポリメタクリル酸メチル等の高分子の微粒子表面にォクタデシル基、ォクチル基、ブチル基、メチル基、フニル基、シァノプロピル基等の炭素数 1以上の疎水性基を有する化合物を結合させた固体などをあげることができる。必要があれば、さらにこれらの固体の表面に疎水性を調整するために、スルホニル基、アミノ基、アンモニゥム基等のイオン交換基を有する化合物を結合させて用いることもできる。また、固体の疎水性物質を用いる場合には、表面積が大きいほど一度に分離できる本ァミノ酸誘導体の量が犬くなるため、疎水的表面を有する固体の微粒子を用いることが好ましい。

本発明の分離方法において、未分離ァミノ酸誘導体（各光学異性体の混合物）及びキラルセレクタを含む水性溶液又は水性懸濁液と疎水性物質とを接触させ、 D体と L体を分離する方法は特に限定されず、次のような方法により好適に行なうことができる。

即ち、固体の疎水性物質を中空管に充填し、クロマトグラフフィ一の分離カラムとして用いることにより、光学異性体の分離を行うことができる。この場合には、移動相としてキラルセレクタを含み前記（ i ) 又は（11 ) の条件を満足する水性溶液を分離カラムに流し、分離カラムの上流に未分離アミノ酸誘導体を注入し液体クロマトグラフィーを行えばよい。カラム内の水性溶液中で未分離ァミノ酸誘導体とキラルセレクタとが混合されると共に、カラム内の充填物である疎水性物質と接触し、一定時間の経過の後に分離カラムの下流から各光学異性体が分離された状態（換言すれば異なる保持時間で）で流出する。流出する移動相を特定の波長での紫外吸収、電気電導度、屈折率等を経時的に観測し、クロマトグラフを得ることができ、該クロマトグラフより D体又は L体の流出を検出し、これを分取することにより光学純度が向上した本発明のァミノ酸誘導体を得ることができる。該液体クロマトグラフィ一による方法は、操作が簡便であり、且つ分離性能が高いため、本発明の分離方法として特に好適な態様であると言える。

また、予め未分ァミノ酸誘導体及びキラルセレクタを水性溶液中で混合し、次いで前記（ i ) 又は（11 ) の条件を満足するように調製した水性溶液又は水性懸濁液（以下、このように調製された水性溶液又は水性懸濁液を単に調製済水性溶液ともいう。）を疎水性物質接触させることによっても D体と L体とを分離することができる。

例えば、疎水性物質として液体を用いる場合には、調製済水性溶液と疎水性物質を容器に導入し、攪拌機を用い或いは容器が分液ロートのように密閉できる構造である場合には容器を激しく振とうする等して攪拌し、その後静置して液を 2層分離させ、 2層の液を別々に回収することにより行なうことができる。この場合には、疎水性層には疎水性の強い光学異性体（若しくはその複合体）が多く、また水性溶液層には親水性の強い光学異性体（若しくはその複合体）が多くなるように用いたキラルセレクタの特性に応じた比率で分配され、各層において D体又は L体が濃縮される。この濃縮により十分な光学純度の D体又は L体が得られない場合は、上記操作で分離回収された一方の層について減圧留去等により液体を除去し、その後に再び同様の分離操作を繰り返すことにより、光学純度の高い D体又は L体を得ることができる。

また、疎水性物質として固体を用いる場合には、調製済水性溶液に固体の疎水性物質を投入して攪拌することにより接触させ、一定時間経過後に濾過により固体の疎水性物質を取り除き、液体成分を回収することにより行なうことができる。この場合には、疎水性の強い光学異性体（若しくはその複合体）は固体疎水性物質に多く吸着されるため、濾液には親水性の強い光学異性体（若しくはその複合体）が多くなる。 1回の操作で十分な分離が行なえない場合は、前記と同様に瀘液について減圧留去等により液体を除去し、その後に再び同様の分離操作を繰り返すことにより、光学純度の高い D体又は L体を得ることができる。なお、固体疎水性物質に吸着した光学異性体についても疎水性有機溶媒で洗浄し、洗浄液を回収し、回収された液から溶媒を除去することによりもう一方の光学異性体を回収することも勿論可能である。この場合にも操作を繰り返すことにより高純度化を図ることができる。上記の様な本発明の分離方法で分離された光学異性体は、一般に夾雑物（分離に用いたキラルセレクタや各種塩類等）を含む溶液又は懸濁液の形で得られることが多いが、これら溶液等から光学純度の向上したァミノ酸誘導体を単離することも勿論可能である。このような単離方法としては、種々の方法を用いることができるが、一例をあげれば、減圧留去により液体成分を除去し、その後、アミノ酸誘導体は溶解するが他の夾雑物は溶解しない溶媒を添加してアミノ酸誘導体のみを溶解させ、ろ過等により分離した後、溶媒を除去する方法が挙げられる。

本発明の分離方法によれば、 D体と L体が混在する本ァミノ酸誘導体から、 D体と L体容とを容易に分離することができる。したがって、該分離方法は、前記したような化学合成的方法、或いは酵素や微生物を用いた反応により、ラセミ体又は光学活性な基本アミノ酸から未分離アミノ酸誘導体（すなわち、 D体と L体が混在する本アミノ酸誘導体）を得て、該未分離アミノ酸の光学分離を行ない高純度（高い光学純度）の D 体又は L体を製造する方法における光学分離工程として好適に採用することができる。

また、本発明の分離方法によれば、未分離アミノ酸誘導体に含まれる D体及び L体を相互に分離した状態でそれぞれの量を定量することもできるので、光学純度が未知の未分離ァミノ酸誘導体の光学純度分析方法としても好適に採用することができる。特に本発明の分離方法の中でも前記した液体クロマトグラフィ一による方法は、簡便で分離性能が高いばかりでなく、 D体及び L体を単離しなくそも検量線等を用いることによりそれぞれの量を高精度で求めることができるので、優れた光学純度分析方法（光学純度測定方法）になる。さらに、上記の光学純度分析方法は、上記の様な優れた特徴を有するため、例えば、前記したような方法により基本アミノ酸から未分離アミノ酸誘導体を得て、該未分離アミノ酸の光学分離（光学分割）を行ない高純度（高い光学純度）の D体又は L体を製造する方法における工程管理の手法として好適に採用することができる。なお、この場合において、光学分離方法としては、本発明の分離方法の他、光学異性体の結晶形を利用して物理的に分離する方法、ジァステレオマーの分離を原理とする方法、具体的には、安定なジァステレオマー（分子錯体を含む）に転化し、ついで結晶分別、クロマトグラフィー、蒸留等の操作により分離する方法、キラルな吸着剤ゃキラルな溶媒を用いて選択的に吸着、抽出する方法等、不斉変換法、不斉反応を利用する方法等、公知の光学分割法が採用できることは勿論である。

以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。

実施例 1

キラルセレクタとして^ーシクロデキストリン（東京化成社製） 11. 35 gを 0.1%リン酸水溶液（容量比） 1 Lに溶解してシクロデキストリン濃度が 10mM、 p H 2とした溶液に対して、ァセトニトリノレ（和光純薬工業社製）を 10% (容量比）混合した水性溶液を調製した。この溶液を移動相とし、疎水性物質としてシリカゲル粒子表面にォクタデシル基を化学結合した固定相が充填された分離カラム I n e r t s i 1 OD S— 2 (GLサイエンス社製）を用い、 N— ( t e r t—ブトキ ' シカルボニル）一 DL—ァラニン { (D体 ZL体）モル比 =1 2} を該分離カラムに注入して高速液体クロマトグラフィーを行なって、クロマトグラムを得た。

なお、本実施例で用いた高速液体クロマトグラフィ一の構成と条件は、以下の通りである。

ポンプ： Wa t e r s社製 600 E

インジヱクタ一： Wa t e r s社製 U 6 K

カラムオーブン：島津製作所社製 CTO 1 O A

検出器： Wa t e r s社製 99 1 J

移動相流速： 1m l /m i n

カラム温度： 30°C

カラムサイズ：内径 4. 6mm、長さ 25 Omm

検出波長： 2 10 nm。

上記のようにして得られたクロマトグラムに基づいて、分離能（R s ) で光学異性体分離の程度を評価したところ、 R s = 2. 25であり、良好な分離が行われていることが確認された。

なお、分離能（R s) とは、この分離能 R sは 2本のピークがどの位良く分離しているかを表すものであり、下記式で定義される値である。この値が大きいほど 2本のピークが良く分離していることを示し、 R s が 0のときは 2本のピークが全く分離されていないことを示し、また、 R s > 1のときは 2本のピークは底辺部分でも完全に分離した状態であることを示す。

但し、上式中の t _R1は、 2種顯の成分からなる化合物を分離して得られたクロマトグラムにおけるピーク 1の保持時間を表し、 t _R2はピーク 2の保持時間を表し、はピーク 1の底辺（時間長）を表し、 W₂はピーク 2の底辺（時間長）を表す。

実施例 2

分離力ラムをシリカゲル粒子表面にォクチル基を化学結合した固定相が充填された I n e r t s i 1 C 8 (GLサイエンス社製）に変える以外は実施例 1と同様の方法で、 N— ( t e r t—ブトキシカルボニル） — DL—ァラニン { (D体/ L体）モル比 =1 2} の分離を行ないその程度を評価したところ、 R sは 2.03であり良好な分離を行うことができた。

実施例 3

ァセトニトリルの割合を 15% (容量比）に変えて実施例 1と同様の方法で N— （t e r t—ブトキシカルボニル）一 DL—メチォニン { (D 体/ L体）モル比 =1/2} の分離を行ないその程度を評価したところ、 R sは 1.46であり良好な分離を行うことができた。

実施例 4

分離カラムをシリカゲル表面にフ二ル基を化学結合した固定相が充填された I n e r t s i l PH (G Lサイエンス社製）に、ァセトニトリルの割合を 15% (容量比）に変えて、実施例 1と同様にして N— ( t e r t—ブトキシカルボニル）一 DL—ロイシン { (0体体）モル比 =1ノ 2} の分離を行ないその程度を評価したところ、 Rsは 2. 1 であり、良好な分離を行うごとができた。

実施例 5

キラルセレクタとして /3—シクロデキストリンの水酸基がヒドロキシプロピル化されたシクロデキストリンである CAVA S OL W7 HP (ヮッ力一ケミカルズイーストアジア社製） 43.2 gを用い、 0.1% リン酸溶液（容量比） 1 Lに溶解してシクロデキストリン濃度を 30m Mとした溶液に対して、ァセトニトリル（和光純薬工業社製）を 20% (容量比）混合した溶液を移動相とし、カラムは I n e r t s i l 0 D S - 2 (GLサイエンス社製）を用いて、 N— ( t e r t _ブトキシカルボニル）一 DL—フヱニルァラニン { (D体/ L体）モル比 =1/ 2} の高速液体クロマトグラフィーによる分離を行なった。なお、装置は実施例 1で用いたのと同じ装置を用いたが、感度が良好であるため検出波長は 254 nmを用いた。この時の R sは 1.56であり、やはり良好な分離を行うことができた。

実施例 6

/3_シクロデキストリン（東京化成社製） 11.35 gを、 10 mM リン酸トリェチルァミン（東京化成社製）溶液 1 Lに溶解してシクロデキストリン濃度を 1 OmMとした溶液に対して、ァセトニトリル（和光純薬工業社製）を 15% (容量比）混合した溶液を移動相とし、カラムは I n e r t s i l 0 D S— 2 ( G Lサイエンス社製）を用いて、実施例 5と同様にして N— ( t e r t—ブトキシカルボニル）一 DL—トリブトフアン { (D体/ L体）モル比 =1/2} の高速液体クロマトグラフィ一による分離を行なったところ、 R s = 1.59であった。

実施例 7

リン酸トリェチルァミンをリン酸テトラプチルアンモニゥム（GLサィエンス社製）に、ァセトニトリルの割合を 10% (容量比）に変えて、さらに検出波長を 210 nmに変えて、実施例 6と同様に N_ ( t e r t—ブトキシカルボニル）一DL—プロリン { (D体 ZL体）モル比 = 1X2} の分離を行なったところ、 Rs = 1.91であった。実施例 8

キラルセレクタとしての CAVASOL W7 HP (ヮッカーケミカルズイーストアジア社製） 43.2 gを、 1 OmMリン酸テトラブチルアンモニゥム溶液（GLサイエンス社製） 1 Lに溶解してシクロデキストリン濃度を 3 OmMとした溶液に対して、ァセトニトリル（和光純薬工業社製）を 15% (容量比）混合した溶液を移動相とし、カラムとして I n e r t s i l ODS— 2 (GLサイエンス社製）を用いて、実施例 1と同様にして N— （ t e r t—ブ'トキシカルボニル）一 DL—チ口シン { (D体 ZL体）モル比 =1Z2} の高速液体クロマトグラフィ一による分離を行なった。但し、ピークの検出は、検出波長 210 nm を用いて吸光度をモニタ一した。その結果、 Rsは 1.96であった。実施例 9

p H調整剤に 1 OmMクェン酸ナトリウムを用い p Hを 2. 8とし、キラルセレクタにァミノ酸誘導体である N— ( t e r t—ブトキシカルボニル）一L—トリブトファンを用い、分離対象を N—ベンジルォキシカルボニル一 DL—ロイシン { (D体 ZL体）モル比 =1/2} として実施例 1と同様に高速液体クロマトグラフィーを行った。但し、ピークの検出は検出波長 254 nmを用いて吸光度をモニタ一した。その結果は R s = 0.34であり、分離を行うことができた。

実施例 10

pH調整剤に 1 OmMクェン酸ナトリウムを用い p H 3.4とし、キラルセレクタにァミノ酸誘導体であるべンジルォキシカルボニル一 L— ァラニンを用い分離対象を N—ベンゾィル一DL—バリン { (D体 ZL 体）モル比 = 1/2} として実施例 1と同様にして高速液体クロマトグラフィー分析を行った。但し、ピークの検出は、検出波長 254 nmを用いて吸光度をモニタ一した。その結果、 R sは 0.08であり分離を行うことができた。

実施例 1〜10の結果を表 1にまとめる。

水性溶液の組成（移動相組成）

疎水性物質疎水性対ィォァセトニト分離能 (分離カラム） H H調整剤ン生成化合物キラルセレクタ (Rs)

N- (tert-ブトキシ lOmM S-シクロデ

実施例 1 カルボ二ル DL - Inertsil ODS-2 2. 0 0. 1% Vン酸なしキストリン 10% 2. 25

ァラニン

N (tert-ブトキシ lOmM /?—シクロデ

実施例 2 カルボ二ル DL- Inertsil C8 2. 0 0. 1%リン酸なしキストリン 10% 2. 03

ァラニン

N -（tert-ブトキシ lOmM /S-シクロデ

実施例 3 カルボ二ノレ） DL- Inertsil ODS-2 2. 0 0. 1%リン酸なしキストリン 15% 1. 46

メチォニン

N -（tert-ブトキシ 10mM β シク jデ

実施例 4 カルボ二ル DL - Inertsil PH 2. 0 0. 1%リン酸なしキストリン 15% 2. 18

ロイシン

N (tert-ブトキシ 30mM CAVASOL W7

実施例 5 カルボ二ノレ) DL- Inertsil ODS-2 2. 0 0. 1%リン酸なし HP 20% 1. 56

フエ二ルァラニン

N -（tert-ブトキシ 10mMリン酸ト 10mM jS-シクロデ

実施例 6 カルボ二ル DL- Inertsil ODS-2 7. 0 なしリェチルァミキストリン 15¾ 1. 59

卜リプ卜ファンン

N -（tert-ブ卜キシ lOmM ' Jン酸テ lOmM β シク Όデ

実施例 7 カルボ二ノレ) DL- Inertsil ODS-2 7. 5 なしトラブチノレアキストリン 10% 1. 91

プロリンンモニゥム

N (tert-ブトキシ 10mMリン酸テ 30mM CAVASOL W7

実施例 8 カルボ二ル DL - Inertsil ODS-2 7. 5 なしトラプチルァ HP 15% 1. 96

チロシンンモニゥム

N-ベンジルォキシ 10mMクェン 20mM N- (tert-ブト

実施例 9 カルボ二ル DL 口 Inertsil ODS-2 2. 8 酸ナトリウなしキシカルボニル) - 10% 0. 34

イシンム L一トリプ卜ファン

N-ベンゾィル DL- 10mMクェン 30mMベンジルォキ

実施例 10 バリン Inertsil ODS-2 3. 4 酸ナトリウなしシカルボ二ノレ Lァ 10% 0. 08

ムラニン

実施例 11

試料として予め D型 50%、 L型 50%の比率で混合した N— ( t e r t—ブトキシカルボニル） — D L—ァラニンの 5 %溶液 50〃 1を用い、実施例 1と同様にして分離し、得られたクロマトピークの面積を算出した。その結果、面積の比率は D型 50%、 L型 50%となった。面積の比率は混合した比率と同じであり、本発明の分離定法を用いれば、簡便な操作で正しく光学純度を測定できることが確認された。

また、各クロマトピークに相当するカラムからの溶出液をそれぞれ分取した。先に溶出したクロマトピークの溶出液を溶出液 1、後に溶出したクロマトピークの溶出液を溶出液 2とした。次いで、溶出液 1、溶出液 2について以下の操作を行い、各溶出液に含まれるアミノ酸誘導体の光学純度を測定した。

即ち、分液ロート中に、上記溶出液および、上記溶出液とほぼ等体積のクロ口ホルムを加え、 1分間振とう後、 10分間静置した。その後、クロ口ホルム層をナスフラスコに取り出し、減圧留去によりクロ口ホルムを除き、白色固体を得た。次いで、該白色固体にジォキサン lm 1を添加して上記白色固体を再溶解し、不溶分を濾別除去した。濾液のジォキサン溶液に 4 N塩化水素ジォキサン溶液 0. lm 1を加え混合して脱保護（t e r t—ブトキシカルボニル基の水素原子への置換）を行った後、 _;, 12時間放置して生成したアミノ酸塩酸塩を濾過して回収し、真空下で十分乾燥した後、 1 OmMリン酸緩衝 (pH7.0) 0.1mlに溶解した。次いで、得られたリン酸緩衝液溶液 10 1を、市販のァミノ酸光学異性体分離用カラム（ダイセル化学工業株式会社製 CH I RA LPAK WE) を用いて下記条件で分離分析した。分析条件：

ポンプ ·· Wa t e r s社製 600 E

インジヱクタ一： Wa t e r s社製 U 6 K

カラムオーブン：島津製作所社製 C TO 1 OA

検出器： Wa t e r s社製 991 J

移動相組成： 0.25 mM 硫酸銅水溶液

移動相流速： 0.6m 1 Zm i n

カラム温度： 50°C

カラムサイズ：内径 4.6 mm. 長さ 250mm

検出波長： 210 nm。

その結果から溶出液 1及び溶出液 2からそれぞれ得られた前記白色固体は、それぞれ 100 %D型の N— （ t e r t—ブトキシカルボニル）ーァラニン及び 100%L型のN— （ t e r t—ブトキシカルボニル） —ァラニンであることが確認された。

比較例 1

キラルセレクタである ; 8—シクロデキストリンを移動相に添加しない他は実施例 1と同様にして N— （ t e r t—ブトキシカルボニル）一 D L—ァラニンの分離を行ったが R s = 0となり、 D型と L型はまったく分離されなかった。

比較例 2〜 4

濃度 1 OmMの酢酸ナトリウム緩衝液を用いて移動相の pHを表 2に示すように 3.5よりも大きな値とする他は実施例 1と同様にして N— ( t e r t—ブトキシカルボニル）一 D L—ァラニンの分離を行った。その結果を表 2中に示した。何れの場合も R s =0となり、 D型と L型はまったく分離されなかった。

表 2 水性溶液の組成（移動相組成）

疎水性物質

分離対象分離能セトニト

(分離カラム）疎水性対ィォァ

PH pH調整剤キラルセレクタ (Es)

ン生成化合物

N- (tert-ブトキシ

比較例 1 カルボ二ル)- DL - Inertsil 0DS-2 2 0. 1%リン酸なしなし 10% 0

ァノノ—一、ノノ

N-(tert-ブトキシ 10mM酢酸ナト 10mM yS-シクロデ

比較例 2 カルボ二ル)- DL - Inertsil ODS-2 3. 6 リウムなしキストリン 10% 0

ァノ、— ソ z

N -（tert-ブトキシ 10mM酢酸ナト 10mM ^-シクロデ

O 比較例 3 カルボ二ノレ)- DL- Inertsil ODS-2 3. 7 リウムなしキストリン 10% 0

ァ

ノノ—一 V ,

N -（tert-ブトキシ 10mM酢酸ナト 10mM /S-シクロデ

比較例 4 カルボ二ル)- DL - Inertsil ODS-2 4. 1 リウムなしキストリン 10% 0

ァラニン

N- (tert-ブトキシ 10mM酢酸ナト 10mM β -シク Όデ

比較例 5 カルボ二ル)- DL - Inertsil ODS-2 5. 4 リウムなしキストリン 10% 0

ァラニン

N- (tert-ブトキシ 10mMリン酸 2 10mM /3-シクロデ

比較例 6 カルボ二ル)- DL - Inertsil ODS-2 7 水素カリウムなしキストリン 15% 0

トリプ卜ファン -リン酸水素

2ナトリウム

比較例 5

疎水性対イオンを生成する化合物であるトリエチルァミンを添加しない移動相を用いる他は実施例 5と同様にして N— ( t e r t—ブトキシカルボニル）一 DL— トリブトファンを分離分析した。その結果を表 2 中に示した。表 2に示されるように R s = 0となり D型と L型はまったく分離できなかった。

比較例 6

比較例 5において p Hの調整剤としてリン酸緩衝液（リン酸 2水素力リウム、リン酸水素 2ナトリウムを混合したもの）を加え、 p Hが実施例 5と同じ 7になるようにして分離を行なったが、やはり R s = 0となり D型と L型はまったく分離できなかつた。

比較例 7

市販の光学異性体分離用カラムであるスミキラル OA 7000 (β- シクロデキストリンをシリカゲル微粒子表面に固定化した担体を使用した分離カラム）を充填として使用し、移動相として、ァセトニトリル 2 0%を含有する 20mM KH₂P0₄水溶液（pH 2. 5) を用い、 N - ( t e r t—ブトキシカルボニル）一DL—フヱ二ルァラニン { (D 体/ L体）モル比 = 1/2} を注入して高速液体クロマトグラフィーを行なった。なお、この時採用した装置および条件は、以下の通りである。

ポンプ： Wa t e r s社製 600 E

インジヱクタ一： Wa t e r s社製 U 6 K

カラムオーブン：島津製作所社製 CTO 1 O A

検出器： wa t e r s社製 99 1 J

移動相流速： lm 1 Zm i n カラム温度： 30°C

カラムサイズ：内径 4.6 mm. 長さ 250mm

検出波長： 210 nm

得られたクロマトグラムについて分離能を調べたところ R s =0であり、 D体と L体はまったく分離されていなかった。

実施例 12

ラセミ体の N— （ t e r t—ブトキシカルボニル）一 DL—ァラニン { (D体 ZL体）モル比 =1} を、キラルセレクタとしての ;5—シクロデキストリンを 1 OmM含みリン酸を用いて pH 2に調整された水性溶液 1 Om 1に 10 OmMの濃度となるよう溶解した。この水性溶液と、液体の疎水性物質であるクロ口ホルム i Om lとを 50ml分液口一トに入れ、 3分間振とう後、静置した。その後疎水性物質を 5m l取り出し、減圧留去してクロ口ホルムを除去し、白色固体を得た。次いで得られた白色固体をキラルセレクタとしての S—シクロデキストリンを 10 mM含みリン酸を用いて pH 2に調整された水性溶液 1 Om 1に 100 mMの濃度となるよう溶解し、該溶液を上記と同様にしてクロ口ホルム 10m lと接触させた後に分離し、さらにクロ口ホルムを除去し、白色固体を回収した。この白色固体について同様の分離操作を合計分離操作回数が 5回となるように更に繰り返して白色固体を得た。最終的に得られた白色固体について、実施例 11における溶出液.1から得た白色固体と同様にして脱保護を行なつた後に市販のァミノ酸光学異性体分離用力ラムを使用して液体クロマトグラフィーを行った。その結果、該白色固体中の（D体/ L体）モル比は 0.53であった。

産業上の利用可能性本発明は、 D体と L体が混在した特定の置換基を有する本ァミノ酸誘導体から、 D体と L体とを分離する、新しい方法を提供するものである。しかも、従来の分離方法と比べると分離能が高く、例えば前記した液体クロマトグラフィ一による方法を採用することにより、 D体と L体とを完全且つ容易に分離することが可能となる。

したがって、本発明の分離方法は、光学活性の低い本アミノ酸誘導体から光学分割により光学純度の高い本ァミノ酸誘導体を製造する際の光学分割法として好適に採用できるばかりでなく。光学純度の測定方法としても好適に採用できる。さらに、従来の光学分割法を採用して光学純度の高い本ァミノ酸誘導体を製造する際の工程管理にも応用できる。かくして、本発明は、例えば、アミノ酸誘導体の製造業、医薬品製造業等で利用できる。

Claims

請求の範囲

1. 不斉炭素を少なくとも一つ有するアミノ酸のアミノ基もしくはィミノ基の水素原子の一つが有機カルボニル基により N—置換されたァミノ酸誘導体の一対の光学異性体を含有する混合物からの各光学異性体の分離方法であって、

(A) 該混合物を用意し、

(B) 該混合物を、それに含まれる各光学異性体に対してそれぞれ異なる親和性を有する親水性化合物と水性溶液中で混合して複合体を形成し、

(C) 該複合体を含有する水性溶液又は水性懸濁液を、

( i ) pHが 3.5以下となる条件下、或いは

(D) かような疎水性の差違を利用して各光学異性体を相互に分離する、

ことを特徴とする、前記方法。

2. N—置換されたアミノ酸誘導体が、一般式（ I ) ：

R

N-CHCOOH (I)

(上式中、 R¹は未置換もしくは置換された 0ぃ₆アルキル基を表し、かつ、置換された場合の置換基はヒドロキシ、メルカプト、メチルチオ、ァミノ、モノーもしくはジメチルァミノ、 C i— ₆アルキルカルボニルァミノ、 C ₆アルキルォキシカルボニル、アミジノアミノ、カルボキシ、 C アルキルォキシカルボニル、力ルバモイル、未置換もしくは置換されたフニル（ここで、置換された場合の置換基は同一もしくは異なり、 1〜3個のハロゲン原子、ヒドロキシ、メルカプト、メチル、トリフルォロメチル又はアミノであることができる）、環員窒素原子を 1もしくは 2個有し、ベンゼン環が縮合していてもよい 5員環式基からなる群より選ばれ；

R ²及び R ³は一方が水素原子であり、そして他方がアルコキシカルボニル、ァラルキルォキシカルボル、ァリールォキシカルボニル、アルケニルォキシカルボニル又はァシルを表し、或いは R ²及び R ³の水素原子を表す基は、水素原子に代わり、 R ¹と一緒になつて、それらが結合する窒素原子を介して、 5員環を形成しうるプロパン一 1， 3 —ジィル、 2—ヒドロキシプロパン一 1， 3—ジィル又は 1—ヒドロキシプロパン - 1 , 3 _ジィルを表すことができる）

で表される請求項 1記載の方法。

3 . N _置換されたアミノ酸誘導体がァラニン、プロリン、ロイシン、イソロイシン、バリン、トリプトファン、フエ二ルァラニン、チロシン、セリン、メチォニン、グルタミン、グルタミン酸及びリジンからなる群より選ばれるアミノ酸に由来する請求項 1記載の方法。

4 . アルコキシカルボニルが Cぃ₉アルキルォキシカルボニルであり；ァラルキルォキシカルボ二ルが未置換もしくは置換されたフヱニルー

C 1 — 4アルキレンォキシカルボニル又は 9—フルォレニルー C ₄アルキレンォキシカルボニルであって、置換された場合の置換基が同一もしくは異なり、 1〜 3個のメチル、ニトロ、メトキシ又はハロゲンであり；ァリ一ルォキシカルボ二ルが未置換もしくは置換されたフヱニルォキシカルボニルであって、置換された場合の置換基が前記「置換されたフエ二ルー」について定義したとおりであり；アルケニルォキシカルボニルが C ₃ - ₉アルケニルォキシカルボニルであり；そしてァシルがホルミル、 d - ₆アルキルカルボニル及びベンゾィルである請求項 1記載の方法。

5 . 各光学異性体に対してそれぞれ異なる親和性を有する親水性化合物が多糖類及びそれらの誘導体、並びにアミノ酸の光学活性化合物及びそれらの誘導体からなる群より選ばれる請求項 1記載の方法。

6 . 多糖類及びそれらの誘導体が、シクロデキストリン及びそれらの誘導体である請求項 5記載の方法。

7 . アミノ酸の光学活性化合物及びそれらの誘導体が L一もしくは D ―フヱ二ルァラニン、 L—もしくは D— トリプトファン及び, L—もしくは D—ロイシンから選ばれ、そしてそれらの誘導体がそれぞれ対応する N— ( t e r t 一ブトキシカルボニル）化物から選ばれる請求項 5記載の方法。

8 . 工程（C ) が、（ i ) の p Hが 3 . 5以下となる条件下で行われる請求項 1記載の方法。

9 . 工程（C ) が、（11 ) の対イオンとなりうる基及び疎水性の原子団を有する化合物の共存下で行われ、該化合物が疎水性の原子団として未置換もしくは置換された C ! - 2 2アルキル基または未置換もしくは置換されたァリール基を有し、かつ、対イオンとなりうる基として、四級ァンモニゥム基を有する請求項 1記載の方法。

10. 工程（D) の疎水性の差違の利用が、各光学異性体を疎水性物質と接触させることにより達成される請求項 1記載の方法。

1 1. 疎水性物質が疎水性表面を有する固定相である請求項 10記載の方法。

12. 請求項 1に記載の分離方法における工程（A) の N—置換アミノ酸誘導体の一対の光学異性体を含有する混合物の用意が、不斉炭素を少なくとも一つを有するアミノ酸の一対の光学異性体混合物中の各光学異性体のァミノ基もしくはイミノ基の窒素原子を有機カルボニル化することにより行われ、そして工程（D) を経て得られるいずれか一方の光学異性体を採取し、必要により、 N—有機カルボ二ル基を脱離する工程をさらに含んでなる光学活性ァミノ酸又はその誘導体の製造方法。

13. 各光学異性体のァミノ基もしくはイミノ基の窒素原子を有機力ルポニル化することが、一般式（ I一 a) ：

(上式中、 R¹は請求項 1における一般式（ I) についての定義と同じであり、そして R² _ a及び R³— ^aは独立して水素原子であるか、或いはいずれか一方が、 R¹と一緒になつてそれらが結合する窒素原子を介して 5員環を形成しうるプロパン一 1， 3—ジィル、 2—ヒドロキシプロパン一 1， 3 _ジィル又は 1—ヒドロキシプロパン一 1， 3—ジィルを表すことができる）

で表されるアミノ酸を、反応に悪影響を及ぼさない溶媒中で、一般式 (Π) ： A-COOH (Π)

(上式中、 Aは、アルコキシ、ァラルキルォキシ、ァリールォキシ、ァルケニルォキシ又はアルキルもしくはァリ一ルを表す）

で表される酸の活性エステルと反応させることによって行われる請求項 12記載の製造方法。

14. 請求項 1に記載の分離方法における工程（D) で相互に分離される各光学異性体のいずれか一方又は両者を定量する工程をさらに含む工程（A) で用意された一対の光学異性体混合物の光学純度の分析方法。

15. 請求項 1に記載の分離方法における工程（D) の分離が、疎水性表面を有する固定相と各光学異性体とを接触することによって行われる請求項 14の分析方法。

16. 請求項 14または 15に記載の分析方法によって、光学活性ァミノ酸の製造工程を監視することを特徴とする高光学純度を有する光学活性アミノ酸の製造方法。