WO2002001227A1

WO2002001227A1 - Biocapteur

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Publication number: WO2002001227A1
Application number: PCT/JP2001/005561
Authority: WO
Inventors: Mie Takahashi; Masataka Nadaoka; Hirotaka Tanaka; Fumihisa Kitawaki
Original assignee: Matsushita Electric Industrial Co., Ltd.
Priority date: 2000-06-28
Filing date: 2001-06-28
Publication date: 2002-01-03
Also published as: EP1296141A4; US7598090B2; DE60142394D1; US20020164822A1; CN1175269C; KR100513216B1; JP3543000B2; EP1296141A1; KR20020043567A; US7112451B2; US20060275921A1; CN1383488A; EP1296141B1

Description

明細書バイオセンサ技術分野

本発明は、バイオセンサに関し、特に血夜成分を分析するバイオセンサに関するものである。背景技術

従来のバイォセンサの構造を第 1 6図に示す。

第 1 6図は従来のバイオセンサ試験片の構成を示す斜視図である。

第 1 6図において、 1は、クロマトグラフィー材料を支持するプラスチックなどで構成された反応層担体支持体である。 2は、吸収†生の大きぃ不織布ゃガラス繊維濾紙などで構成された被検査溶液を添加あるいは塗布するための試料添加領域、 3は、溶解可能なように標識試薬が保持された標識物保持部位、 4は、ニトロセルロースなどからなる試料を展開し反応を行う反応層、 5は、反応層 4の領域上に特異的タンパク質が固定化された特異的タンパク質固定化部、 6は、被検查溶液を最終的に吸収する吸水領域である。以上、試料添加領域 2、標識物保持部位 3、反応層 4、特異的タンパク質固定化部 5、吸水領域 6の各部位は、反応層担体支持体 1の上部に形成されている。

このように構成されたバイオセンサの動作について第 1 6図を用いて説明するまず、被検査溶液である液体試料を試料添加領域 2に添加すると、標識物保持部位 3の領域に達する。次に、標識物保持部位 3の領域に保持された標識試薬は、液体試料の浸透により溶解され、反応層 4の領域に浸透する。反応層 4の領域上には、特異的タンパク質が固定化された特異的タンパク質固定化部 5があり、標識物保持部位 3の領域から溶け出した標識試薬と液体試料中の分析対象物と、特異的タンパク質との間で反応が行われる。このとき、液体試料中に分析対象物が存在すれば、特異的タンパク質固定化部 5の領域に何らかの呈色反応が見られる。最終的に、液体試料は吸水領域 6に吸収され反応は終了する。

このように、バイオセンサは被検査溶液を添加するだけで、容易に測定対象物の測定成分を定性、もしくは定量することができる。またこのようなバイオセンサの例として、ィムノクロマトセンサがある。

一般的なィムノクロマトセンサは、被検査溶液を添加する添加層と、少なくとも一つあるいは複数の展開層と、終端に吸収層とを備えている。また、展開層の一部には、被検査溶液中の測定対象物に対する抗体を固定化してある抗体固定化部分を備えている。さらに、抗体固定化部分の抗体とは異なるェピトープに対する抗体が、抗体固定化部分よりも上流側に標識されており、被検査溶液により溶出可能な乾燥状態で保持されている。ここで、異なるェピトープと述べたが、同一分子内に同一構造をもつ場合、例えば 2量体以上の抗原を用いた場合などはこの限りではない。

このようなィムノクロマトセンサは、サンドイッチ反応といわれる反応形態であり、抗体固定化部分に固定化された抗体と、被検査溶液中の測定対象物と、抗体固定化部分の抗体とは異なるェピトープに対する抗体との間で複合体が形成される。

このように構成されたィムノクロマトセンサについて、その動作を説明する。まず、被検査溶液を添加層に必要量添加すると、被検査溶液は、展開層中を浸透し測定が開始する。そして、被検査溶液中に測定対象物が存在するならば、抗体固定化部分に結合した標識抗体により測定対象物を得ることができる。この標識抗体の一般例としては金コロイド粒子があり、抗体固定化部分に測定対象物が存在するならば、金コロイド粒子により目視による確認が可能となり、それによつて測定結果が得られる。

ここでは、被検査溶液中の抗原を検出するために試験片に抗体を用いた、抗原抗体反応のサンドイッチ反応を測定原理とした場合について述べた。しかしながら、測定原理はそれに限るものではなく、被検査溶液中の抗体を検出するために、抗原を固定化試薬、及び標識試薬に含む反応系を用いてもよく、その他にも、競合反応を測定原理とした場合でも同様に、抗体固定化部分における標識試薬の結合状態を確認することで測定結果を得ることができる。ところで、人の健康状態を診断する手段として、血液の生化学的検査が幅広く実施されている。例えば血液中の構成成分である代謝産物、タンパク質、脂質、電解質、酵素、抗原、抗体などの種類や濃度の測定が行われるが、前述したィムノクロマトセンサを用いて測定する際、全血をそのまま実施することは困難である。通常、全血をクロマトセンサを用いて測定するには、まず、全血を遠心分離機にかけて、そこで得られる血漿、または血清を検体として測定を行わなければならない。ところが、遠心分離は手間と時間がかかるため、特に少数の検体を早急に処理したいときや、そのような設備を持たない屋外.べッドサイド.緊急医療などの現場で検査を実施したいときなどの場合には不向きである。

近年、医療診断現場では、 P O C (ポイント 'ォブ ·ケア—）の概念の元、迅速-簡便 '正確、かつ低価格で容易に取り扱い可能な、測定装置が望まれている。被検査溶液を添加することにより測定ができるィムノクロマトセンサは、その測定操作の簡便さから、医療現場のみならず限定された測定項目の診断等に広く利用されている。

し力しながら、従来のィムノクロマトセンサを代表とするバイオセンサによれば、一般的な血液成分を分析することは、困難とされていた。つまり、血液成分の分析は、予め採血した血液を遠心分離機にかけ、それによつて得られた血漿または血清を用いて、大型の分析機器にて分析を行わなければならず、測定に特殊な機械を要するばかりでなく、前処理が必要なため、検査に多大な時間を要してきた。そのため血球等の細胞成分に影響が生じるという問題があった。

そこで、血球成分の影響を受けない、血液成分の分析方法としては、特開昭 5 7 - 5 3 6 6 1号公報、特開平 8— 5 4 3 8 7号公報、あるいは特開平 9—1 9 6 9 0 8号公報に、全血を濾過することにより、全血から血漿を分離する血球濾過方法が示されている。

例えば、特開昭 5 7— 5 3 6 6 1号公報、特開平 8— 5 4 3 8 7号公報によれば、血球成分をより完全に分離するために、平均直径 0 . 2〜 5 μ m、及び密度 0 . 1〜0 . 5 g Z c m ³のガラス繊維濾紙を用いて血液を滲み出させ、それによって分離された血漿、または血清を取得している。しかしながら、この方法によれば、確かに血球の分離効率は向上するものの、血球をほぼ完全に分離するためにはかなりの時間を要するばかりでなく、検査に必要な検体量を得るために、大量の血液が必要とされている。つまり、添加する血液量の割には、得られる血清量、もしくは血漿量が少ないという問題がある。

また、特開平 9一 1 9 6 9 0 8号公報によれば、血球による濾過材料の目詰まりを回避し、. より少量の血液から、より大量の血漿、または血清成分を得るために、全血にアミノ酸、もしくは無機塩の水溶液を混合した後に、血球成分を濾別することを特徴としている。しかしながら、この方法では、予め得られた血液に添加用の水溶液を加え、その後に血球成分を濾別する作業が必要であるため、作業が繁雑となり、測定に時間を要し、緊急時の検査には対処できないという問題があった。

それらの問題を解決するために特願 2 0 0 0 - 1 6 4 9 9 0では、細胞収縮剤を用いて血液中の細胞成分を収縮し、クロマト試験片上を展開する方法が示されている。これによれば、クロマト試験片上に血液検体を前処理なく点着するために、試験片上に細胞収縮剤を担持したことを特徴としている。しかしながら、この方法では、 ift夜検体は予め何らかの前処理をしなくとも短時間でク口マト試験片上を展開することが可能になったものの、展開していく血液中の血色素の影響によりバックグランド値が上昇し、 S ZN比が小さくなることで、機器を用いた測定での感度低下を招くばかりでなく、血色素が呈色度合の読み取りを妨げるため、定量測定を行うには、非常に精度が悪いという問題があった。

本発明は、かかる問題点を解消するためになされたものであり、有色成分を有する液体試料中の測定対象物を、特別な機器を用いることなく、簡便に、力、っ迅速に分析することができ、さらに、測定成分をより正確に定性、あるいは定量分析を行うことが可能なバイォセンサを提供するものである。発明の開示

本発明（請求の範囲第 1項）に係るバイオセンサは、被検査溶液を展開する展開層を備え、前記展開層の一部に、被検査溶液の展開により、溶解可能なように標識試薬が保持された標識試薬部分と、前記展開層の一部に、被検査溶液中の分析対象物と特異的に反応する試薬が固定化された試薬固定化部分とを少なくとも , . 備えたバイオセンサにおいて、前記展開層に被検査溶液を添加する試料添加領域、もしくは前記試料添加領域に対して被検査溶液の浸透方向下流側の少なくとも一部に漂白作用を有する試薬を溶解可能な乾燥状態で担持した漂白試薬領域を設けるものとした。

5 このような構成のバイオセンサによれば、液体試料中の有色成分を漂白試薬により退色させることができ、測定結果を目視にて容易に判断することが可能である。また、反応層上に血色素が付着しないので、測定機器による分析対象物の読み取り誤差を限りなく抑えることができ、より正確な測定結果を得ることができる。

0 この発明（請求の範囲第 2項）は、請求の範囲第 1項記載のバイオセンサにおいて、前記展開層がニトロセルロースからなるものとした。

このような構成のバイオセンサによれば、微細空間をもつ多孔質性の担体であるニトロセルロースを用いることにより、被検査溶液の添加量をより少量に抑えることが可能である。

5 この発明（請求の範囲第 3項）は、請求の範囲第 1項記載のバイオセンサにおいて、前記展開層上に漂白作用を有する試薬を、溶解可能なように直接担持するものとした。

このような構成のバイオセンサによれば、漂白作用を有する試薬を特定の部材に予め担持したものを準備する必要がないので、バイオセンサを構成する部材の0 数を削減することができる。また、漂白試薬を直接担持した部材に、被検査溶液を添加することによって、被検査溶液の浸透性を左右することなく展開するため、より均一な漂白作用と反応性によって、高感度かつ高性能な測定結果を得ることができる。この発明 (請求の範囲第 5項）は、請求の範囲第 1項記載のバイォセンサにおいて、添加する被検査溶液が全血であるものとした。

このような構成のバイォセンサによれば、血液検体を予め前処理することなく、検体として直接点着して測定することができるため、血液中の分析対象物を測定する場合に、従来用いていた大型機器を必要とすることなく、より簡便かつ迅速に測定でき、高感度で高性能な測定結果を得ることができる。

この発明（請求の範囲第 6項）は、請求の範囲第 1項記載のバイオセンサにおレ、て、上記漂白作用を有する試薬が過炭酸ナトリゥムであるものとした。

このような構成のバイオセンサによれば、反応に重要とされるタンパク質等に及ぼす悪影響を限りなく抑えることができるため、高感度で高性能な測定結果を得ることができる。

この発明（請求の範囲第 7項）は、請求の範囲第 1項記載のバイオセンサにおいて、上記漂白作用を有する試薬が過酸化水素であるものとした。

このような構成のバイオセンサによれば、より短時間で、より効果的に漂白することができるため、より簡便でかつ迅速に測定できるばかりでなく、高感度で高性能な測定結果を得ることができる。

この発明（請求の範囲第 8項）は、請求の範囲第 1項記載のバイオセンサにおいて、上記漂白作用を有する試薬が次亜塩素酸ナトリゥムであるものとした。このような構成のバイオセンサによれば、反応に重要とされるタンパク質等に及ぼす悪影響を限りなく抑えることができるため、高感度で高性能な測定結果を得ることができる。

この発明（請求の範囲第 9項）は、請求の範囲第 1項記載のバイオセンサにおいて、上記バイオセンサが、ワンステップの免疫クロマトグラフィー試験片であるものとした。

このような構成のパイォセンサによれば、全血などの細胞成分を含む被検査溶液を予め前処理する必要性がない。また、免疫反応を利用しているため、測定対象物に対する抗体あるいは抗原を入手することで、広い分野における測定対象が測定でき、全血のような細胞成分を含む被検査溶液を用いた場合において、簡易迅速な測定が可能となる。こ.の発明 (請求の範囲第 1 .0項）は、 .請求の範囲第 1項記載のバイオセンサにおいて、上記バイオセンサが、乾式分析要素であるものとした。

. このような構成のバイオセンザによれば、バイオセンサ全体が乾燥担体であることから、持ち運びが容易であるばかりでなく、保存環境や保存状態を厳密に管理する必要がなく、取り扱いが容易で保存条件を選ばない長期保存の可能なバイォセンサを提供することができる。

本発明（請求の範囲第 1 1項）に係るバイオセンサは、被検査溶液を展開する展開層を備え、前記展開層の一部に、被検査溶液の展開により、溶解可能なように標識試薬が保持された標識試薬部分と、前記展開層の一部に、被検査溶液中の分析対象物と特異的に反応する試薬が固定化された試薬固定化部分とを少なくとも備えたバイオセンサにおいて、前記展開層に被検查溶液の浸透方向に対して、被検査溶液を添加する試料添加領域よりも被検査溶液の浸透方向下流側の少なくとも一部に、細胞成分収縮剤と漂白作用を有する試薬をそれぞれ溶解可能なように担持した領域を設けるものとした。

このような構成のバイォセンサによれば、細胞成分を含む被検査溶液が添加された場合、細胞成分が細胞収縮剤と接触することによって収縮され、細胞成分が試験片上を効率よく、かつ展開液を加えずとも十分に浸透することができる。つまり、予め被検査溶液中の細胞成分を取り除くための前処理を行う必要がない。また、漂白試薬の作用により、液体試料中の有色成分を漂白試薬により退色させることができ、測定結果を目視にて容易に判断することが可能である。また、反応層上に血色素が付着しないので、測定機器による分析対象物の読み取り誤差を限りなく抑えることができ、より正確な測定結果を得ることができる。

この発明（請求の範囲第 1 2項）は、請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、前記展開層がエトロセルロースからなるものとした。

このような構成のバイオセンサによれば、微細空間をもつ多孔質性の担体であるニトロセルロースを用いることにより、被検査溶:?夜の添; ¾量をより少量に抑えることが可能である。

この発明（請求の範囲第 1 3項）は、請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、前記展開層上に漂白作用を有する試薬を、溶解可能なように直接担持するものとした。

このような構成のバイオ'センサによれば、漂白作用を有する試薬を特定の部材に予め担持したものを準備する必要がないので、バイオセンサを構成する部材の数を削減することができる。また、漂白試薬を直接担持した部材に、被検査溶液を添加することによって、被検査溶液の浸透性を左右することなく展開するため、より均一な漂白作用と反応性によって、高感度かつ高性能な測定結果を得ることができる。

この発明（請求の範囲第 1 4項）は、請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、前記展開層上には、被検査溶液を毛細管現象により流入する試料流入領域を配設し、前記試料流入領域中に前記漂白試薬領域を保持するものとした。このような構成のバイオセンサによれば、被検查溶液は、添加直後、素早く漂白試薬を溶解し、漂白試薬と反応することができるので、より均一な漂白作用と反応性によつて高感度かつ高性能な測定結果を得ることができる。

この発明（請求の範囲第 1 5項）は、請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、前記展開層に、細胞収縮剤と漂白作用を有する試薬を混合した試薬を担持するものとした。

このような構成のバイォセンサによれば、細胞成分を含む被検査溶液が添加された場合、細胞成分が細胞収縮剤と接触することによって収縮され、細胞成分が試験片上を効率よく、力^ 3展開液を加えずとも十分に浸透することができる。つまり、予め被検査溶液中の細胞成分を取り除くための前処理を行う必要がない。また、漂白試薬の作用により、液体試料中の有色成分を漂白試薬により退色させることができ、測定結果を目視にて容易に判断することが可能である。また、反応層上に血色素が付着しないので、測定機器による分析対象物の読み取り誤差を限りなく抑えることができ、より正確な測定結果を得ることができる。また、細胞収縮剤と漂白試薬を混合して担持したので、バイオセンサを構成する部材の数を削減することができる。

この発明（請求の範囲第 1 6項）は、請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、前記展開層上には、被検査溶液を毛細管現象により流入する試料流入領域を配設し、細胞収縮剤と漂白作用を混合した試薬が前記試料流入領域中に保持するものとした。

. このような構成のバイオセンサによれば、毛細管現象による被検査溶液が流入される空間が配設されており、前記空間中に細胞収縮剤と漂白作用を混合した試薬を担持しているため、被検査溶液の吸引とともに素早く試薬を溶解することが可能となる。

この発明（請求の範囲第 1 7項）は、請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、添加する被検査溶液が全血であるものとした。

このような構成のバイォセンサによれば、血液検体を予め前処理することなく、検体として直接点着して測定することができるため、血液中の分析対象物を測定する場合に、従来用いていた大型機器を必要とすることなく、より簡便かつ迅速に測定でき、. 高感度で高性能な測定結果を得ることができる。

この発明（請求の範囲第 1 8項）は、請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、上記漂白作用を有する試薬が過炭酸ナトリゥムであるものとした。このような構成のバイォセンサによれば、反応に重要とされるタンパク質等に及ぼす悪影響を限りなく抑えることができるため、高感度で高性能な測定結果を得ることができる。

この発明（請求の範囲第 1 9項）は、請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、上記漂白作用を有する試薬が過酸化水素であるものとした。

この発明（請求の範囲第 2 0項）は、請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、上記漂白作用を有する試薬が次亜塩素酸ナトリゥムであるものとしたこのような構成のバイオセンサによれば、反応に重要とされるタンパク質等に及ぼす悪影響を限りなく抑えることができるため、高感度で高性能な測定結果を得ることができる。

この発明（請求の範囲第 2 1項）は、請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、上記細胞収縮剤が無機塩であるものとした。 ' のような構成のバイオセサによれば、血液成分の分析を反応を阻害することなく短時間でより正確な測定を行うことが可能である。

. この発明（請求の範囲第 2 2項）は、請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、上記細胞収縮剤がァミノ酸であるものとした。

このような構成のバイオセンサによれば、血液成分の分析を反応を阻害することなく短時間でより正確な測定を行うことが可能である。

この発明（請求の範囲第 2 3項）は、請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、上記細胞収縮剤が糖類であるものとした。

この発明（請求の範囲第 2 4項）は、請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、上記バイオセンサが、ワンステップの免疫クロマトグラフィー試験片であるものとした。

このような構成のバイオセンサによれば、全血などの細胞成分を含む被検査溶液を予め前処理する必要性がない。また、免疫反応を利用しているため、測定対象物に対する抗体あるいは抗原を入手することで、広い分野における測定対象が測定でき、全血のような細胞成分を含む被検査溶液を用いた場合において、簡易迅速な測定が可能となる。

この発明（請求の範囲第 2 5項）は、請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、上記バイオセンサが、乾式分析要素であるものとした。

このような構成のバイオセンサによれば、バイオセンサ全体が乾燥担体であること力ゝら、持ち運びが容易であるばかりでなく、保存環境や保存状態を厳密に管理する必要がなく、取り扱いが容易で保存条件を選ばない長期保存の可能なバイォセンサを提供することができる。図面の簡単な説明

第 1図は、本発明の実施の形態 1によるバイオセンサの構成を示す斜視図である。

第 2図は、本発明の実施の形態 2によるバイオセンサの構成を示す斜視図である。

• 第 3図は、本発明の実施の形態 2による別のバイオセンサの構成を示す斜視図である。

第 4図は、本発明の実施の形態 3によるバイオセンサの構成を示す斜視図である。

第 5図は、本発明の実施の形態 3による別のバイオセンサの構成を示す斜視図である。

第 6図は、本発明の実施の形態 4によるバイオセンサの構成を示す斜視図である。

第 7図は、第 6図を漂白試薬保持部位から見た斜視図である。

第 8図は、第 6図を吸水領域から見た斜視図である。

第 9図は、第 7図の漂白試薬保持部位の上部に試料添加領域を有する構造の斜視図である。

第 1 0図は、第 8図の漂白試薬保持部位の下部に試料添加領域を有する構造の斜視図である。

第 1 1図は、第 7図の漂白試薬保持部位の上部に収縮剤保持部位を有する構造の斜視図である。

第 1 2図は、第 8図の漂白試薬保持部位の下部に収縮剤保持部位を有する構造の斜視図である。

第 1 3図は、第 7図の漂白試薬保持部位を混合試薬保持部位に変更した構造の斜視図である。

第 1 4図は、第 8図の漂白試薬保持部位を混合試薬保持部位に変更した構造の斜視図である。

第 1 5図は、漂白作用を有する試薬を試験片に有した場合と無い場合での、呈色度合を測定した場合の性能差を表す図である。

第 1 6図は、従来のバイオセンサの構成を示す斜視図である。発明を実施するための最良の形態

以下、本発明の実施の形態について、図面を参照しながら説明する。なお、ここで示す実施の形態はあくまでも：例であって、必ずしもこの実施の形態に限定されるものではない。

(実施の形態 1 )

本発明の実施の形態 1について、第 1図を参照して説明する。

第 1図において、 1は、クロマトグラフィー材料を支持するプラスチックなどの液体不透過性材料で構成された反応層担体支持体である。 2は、吸収性の大きぃ不織布やガラス繊維濾紙などで構成された被検査溶液を添加あるいは塗布するための試料添加領域、 8は血色素を漂白する働きのある漂白試薬が溶解可能なように保持された漂白試薬保持部位、 3は、溶解可能なように標識試薬が保持された標識物保持部位、 4は、ニトロセルロースなどからなる試料を展開し反応を行う反応層、 5は、反応層 4の領域上に特異的タンパク質が固定化された特異的タンパク質固定化部、 6は、被検査溶液を最終的に吸収する吸水領域である。以上、試料添加領域 2、標識物保持部位 3、反応層 4、特異的タンパク質固定化部 5 、吸水領域 6、漂白試薬保持部位 8の各部位は、反応層担体支持体 1の上部に積層あるいは接続して形成されている。

このように構成されたバイオセンサについて、その動作を第 1図を用いて説明する。

まず、被検査溶液として全血検体を試料添加領域 2に添加すると、全血検体は漂白試薬保持部位 8の領域に達する。そして、漂白試薬保持部位 8の領域に保持された漂白試薬が全血検体の浸透により溶解され、全血検体は血液成分を退色させながら、標識物保持部位 3の領域に達する。次に、標識物保持部位 3の領域に保持された標識試薬が、全血検体の浸透により溶解され、反応層 4の領域に浸透する。反応層 4の領域上には、特異的タンパク質が固定化された特異的タンパク質固定化部 5力 Sあり、標識物保持部位 3の領域から溶け出した標識試薬と全血検体中の分析対象物、及び特異的タンパク質との間で反応が行われる。このとき、全血検体中に分析対象物が存在すれば、特異的タンパク質固定化部 5の領域に何らかの呈色反応が見られる。最終的に、全血検体は吸水領域 6に吸収されて反応は終了する。

このように、本実施の形態 1によるバイオセンサによれば、反応層担体支持体上に漂白作用を有する漂白試薬を備えたので、漂白試薬の溶出とともに被検査溶液中の成分色素が退色され、判定領域以外の反応層上の色合いを抑えることができるため、測定結果を目視にて容易に判断することができる。また、測定機器を用いた計測においても、血色素によるバックグラウンドの影響を限りなく低く抑えることが可能となる。さらに、予め血球などの細胞成分を分離する必要がなく、血色素の影響を受けることがないので、より簡便かつ迅速で、高性能な定性、あるいは定量分析を行うことができる。

なお、本実施の形態 1において、試料添加領域 2と漂白試薬保持部位 8は個々に構成された例を示したが、試料添加領域 2を除いて、漂白試薬保持部位 8が試料添加領域 2を兼ね備えた構造をとってもよい。このように構成することにより、バイオセンサを構成する部材数を削減することができる。また、漂白試薬を直接担持した部材に、被検査溶液を添加したので、被検査溶液の浸透性に左右されることなく展開でき、より均一な漂白作用と反応性によって、高感度かつ高性能な測定結果を得ることができる。

' また、第 1図の構成を複数の部材からなるものとして説明を行ったが、ニトロセルロース等の多孔質性担体からなる反応層 4に漂白試薬や標識試薬を溶解可能なように保持した漂白試薬保持領域 8と標識試薬保持領域 3と、特異的タンパク質が固定化された特異的タンパク質固定化部 5とを同一の担体上に形成した構成をとつてもかまわない。

(実施の形態 2 )

以下、本発明の実施の形態 2について、第 2図、及び第 3図を参照して説明する。

第 2図は、本努明の実施の形態 2によるバイオセンサの構成を示す斜視図であり、第 3図は、本発明の実施の形態 2による別のバイオセンサの構成を示す斜視図である。

第 2図、及び第 3図において、 7は溶解可能なように細胞収縮剤が保持された収縮剤保持部位である。なお、その他の構成について第 1図と同じ部位は同一の符号を付して説明を省略する。以土、試料添加領域 2、標識物保持部位 3、反応層 4、特異的タンパク質固定化部 5·、'吸水領域 6、収縮剤保持部位 7、漂白試薬保持部位 8の各部位は、反応層担体支持体 1の上部に積層あるいは接続して形成されている。

ここで、細胞収縮剤は、無機塩、あるいはアミノ酸、または糖類を用いるものとした。また、無機塩とは、塩化ナトリウムや塩化カリウム、リン酸ナトリウムなど、塩を含む無機化合物を示し、アミノ酸とは、グリシンやグルタミン酸など同一分子内にカルボキシル基とアミノ基を有する化合物であり、プロリンゃヒド口キシルプロリンのようなイミノ酸も含むものとし、糖類とは、グルコースゃスクロース、トレハロースなどの糖質や、グルシトールなどの糖アルコールを示すこのように構成されたバイオセンサについてその動作を第 2図を用いて説明する。

まず、被検査溶液である全血検体を試料添加部 2に添加すると、全血検体は収縮剤保持部位 7の領域に達する。そして、全血検体は、細胞収縮剤の溶出とともに細胞成分を収縮しながら、標識物保持部位 3の領域に達する。次に、標識物保持部位 3の領域に保持された標識試薬は、全血検体の浸透により溶解され、反応層 4の領域に浸透する。反応層 4の領域上には、特異的タンパク質が固定化された特異的タンパク質固定化部 5力 Sあり、標識物保持部位 3の領域から溶け出した標識試薬と全血検体中の分析対象物、及び特異的タンパク質との間で反応が行われる。このとき、全血検体中に分析対象物が存在すれば、特異的タンパク質固定化部 5の領域に何らかの呈色反応が見られる。最終的に、全血検体は吸水領域 6 に吸収されて反応は終了する。

次に、上述したバイオセンサの別の構成について、その動作を第 3図を用いて説明する。

まず、被検查溶液である全血検体を試料添加部 2に添加すると、全血検体は収縮剤保持部位 7の領域に達する。そして、全血検体は、細胞収縮剤の溶出とともに細胞成分を収縮しながら、漂白試薬保持部位 8の領域に達する。漂白試薬保持部位 8の領域に保持された漂白試薬は全血検体の浸透により溶解され、全血検体は血液成分の色素を退色させながら、標識物保持部位 3の領域に達する。次に、標識物保持部位 3.の領域に保持された標識試薬は、全血検体の浸透により溶解され、反応層 4の領域に浸透する。反応層 4の領域上には、特異的タンパク質が固定化された特異的タンパク質固定化部 5があり、標識物保持部位 3の領域から溶け出した標識試薬と全血検体中の分析対象物、及び特異的タンパク質との間で反応が行われる。このとき、全血検体中に分析対象物が存在すれば、特異的タンパク質固定化部 5の領域に何らかの呈色反応が見られる。最終的に、全血検体は吸水領域 6に吸収されて反応は終了する。

なお、ここで示す細胞収縮剤とは、細胞の膜平衡の性質を利用し、細胞の通過可能な物質の高濃度状態下で、浸透圧の作用により細胞を収縮させた状態を示す。また、細胞収縮剤には、浸透圧の作用により細胞を収縮させる効果のある物質であることが好ましい。

このように、本実施の形態 2によるバイオセンサによれば、反応層担体支持体上に細胞成分収縮剤が保持されている収縮剤保持部位を備えたので、収縮された細胞成分は、二 .トロセル口ースのような孔径の小さな多孔質担体上でも目詰まりすることなく浸透していくことができ、全血検体を予め何らかの処理を施すことなく使用することができる。

また、収縮剤保持部位より液体試料が浸透する下流側に、漂白作用を有する漂白試薬が保持された漂白試薬保持部位をさらに備えたので、液体試料中の血液成分色素は、漂白試薬の溶出とともに退色し、それによつて、反応層担体上を浸透していく血色素の色合いを低く抑えることが可能となり、液体試料展開後の呈色反応を目視にて容易に確認することができるばかりでなく、測定機器を用いた計測においても、血色素によるバックグラゥンドの影響を限りなく低く抑えることができる。

なお、本実施の形態 2において、試料添加領域 2と漂白試薬保持部位 8は個々に構成された例を示したが、試料添加領域 2を除いて、漂白試薬保持部位 8が試料添加領域 2を兼ね備えた構造をとってもよい。このように構成することにより、バイオセンサを構成する部材数を削減することができる。また、漂白試薬を直接担持した部材に、被検査溶液を添加したので、被検査溶液の浸透性に左右されることなく展開でき、より均一な漂白作用と反応性によって、高感度かつ高性能な測定結果を得ることができる。

また、第 2図、及び第 3図の構成を複数の部材からなるものとして説明を行つたが、ニトロセルロース等の多孔質性担体からなる反応層 4に細胞成分収縮剤や漂白試薬、標識試薬を溶解可能なように保持した、収縮剤保持領域 7と漂白試薬保持領域 8と、標識試薬保持領域 3と、特異的タンパク質が固定化された特異的タンパク質固定化部 5とを同一の担体上に形成した構成をとつてもかまわない。

(実施の形態 3 )

以下、本発明の実施の形態 3について、第 4図、及び第 5図を参照して説明する。

第 4図は本発明の実施の形態 3によるパイォセンサの構成を示す斜視図であり、第 5図は、本発明の実施の形態 3による別のバイオセンサの構成を示す斜視図である。

第 4図において、 9は細胞収縮剤と漂白試薬の混合試薬が溶解可能なように保持された混合試薬保持部位である。なお、その他の構成について第 1図と同様の部分については、同一の符号を付して説明を省略する。以上、標識物保持部位 3 、反応層 4、特異的タンパク質固定化部 5、吸水領域 6、混合試薬保持部位 9の各部位は、反応層担体支持体 1の上部に形成されている。

第 5図において、 1 1は試料添加領域 2上に設けられ、毛細管現象により被検査溶液が流入可能なように空間領域を形成した試料流入領域である。なお、その他の構成について第 1図と同様の部分については、同一の符号を付して説明を省略する。以上、試料添加領域 2、標識物保持部位 3、特異的タンパク質固定化部 3、吸水領域 6の各部位は、反応層担体支持体 1の上部に形成されている。また、混合試薬保持部位 9は、試料添加領域 2の上部に形成されている。

このように構成されたバイオセンサについてその動作を第 4図、及び第 5図を用いて説明する。

まず、被検査溶液が添加、あるいは吸引されると、混合試薬保持部位 9において、混合試薬の溶出とともに細胞成分を収縮し、有色成分を退色させながら、液体試料は標識物保持部位 3の領域に達する。次に、標識物保持部位 3の領域に保持された標識試薬が、液体試料の浸透により溶解され、反応層 4の領域に浸透する。反応層 4の領域上には、特異的タンパク質が固定化された特異的タンパク質固定化部 5力 Sあり、標識物保持部位 3の領域から溶け出した標識試薬と被検査溶液中の分析対象物と、特異的タンパク質との間で反応が行われる。このとき、被検査溶液中に分析対象物が存在すれば、特異的タンパク質固定化部 5の領域に何らかの呈色反応が見られる。最終的に、被検查溶液は吸水領域 6に吸収され反応は終了する。

このように、本実施の形態 3によるバイオセンサによれば、反応層担体支持体上に細胞成分収縮剤と漂白試薬の混合試薬である混合試薬保持部位が反応層 4上に保持されているので、被検查溶液中の細胞成分は、細胞収縮剤の溶出とともに収縮し、収縮された細胞成分は、ュトロセルロースのような孔径の小さな多孔質担体上でも目詰まりすることなく浸透していくことができ、さらに、全血検体のような細胞成分を含む被検査溶液を、予め何らかの処理を施すことなく使用することができる。また、混合試薬には、漂白作用を有する漂白試薬も混合されているため、被検査溶液中の血液成分色素のような色素成分は、漂白試薬の溶出とともに退色していく。それによつて、反応層担体上を浸透していく血色素の色合いを低く抑えることが可能となり、液体試料展開後の呈色反応を目視にて容易に確認することができるばかりでなく、測定機器を用いた計測においても、血色素によるバックグラウンドの影響を限りなく低く抑えることが可能となる。

また、毛細管現象により被検査溶液が流入可能なように空間領域が形成された空間形成部を備えたので、その内部に混合試薬が保持されているため、被検査溶液の吸引とともに混合試薬が溶解され、細胞成分の収縮と色素成分の退色が行われる。それによつて、エトロセルロースのような孔径の小さな多孔質担体上でも目詰まりすることなく浸透していくことができ、全血検体のような細胞成分を含む被検査溶液を予め何らかの処理を施すことなく使用することができるばかりでなく、反応層担体上を浸透していく血色素の色合いを低く抑えることが可能となり、液体試料展開後の呈色反応を肉眼にて容易に確認することができる。また、測定機器を用いた計測においても、血色素によるバックグラウンドの影響を限りなく低く抑えることが可能となる。なお、本実施の形態 3において、第 4図では、直接、混合試薬保持部位 9に液体試料を添加する構造をとつたが、混合試薬保持部位よりも被検査溶液の浸透方向上流側に試料添加領域 2を設けた構造をとつてもよい。また、第 5図では、混合試薬が試料添加領域 2上の空間內に保持された構造をとったが、細胞収縮剤あるいは標識試薬のいずれか一方を反応層上に備え、残る一方を空間内に保持した構造をとっても何ら問題はない。

また、第 4図、及び第 5図の構成は、標識試薬保持部位 3や吸水領域 6が異なる複数の部材からなる構成、あるいは反応層 4上に標識試薬保持部位 3が保持され、吸水領域を持たない単層の部材を支持体上に形成した構成のいずれをとつてもかまわない。

(実施の形態 4 )

以下、本発明の実施の形態 4について、第 6図〜第 1 4図を参照して説明する第 6図は、本発明の実施の形態 4によるバイオセンサの構成を示す斜視図である。

第 6図において、 1 0は反応層 4上の結果を確認するための結果確認窓である。なお、その他の構成について第 1図と同様の部分については、同一の符号を付して説明を省略する。以上、吸水領域 6、反応層 4、標識物保持部位 3、漂白試薬保持部位 8の順に各部位は、積層された形状で試験片が形成されている。また、第 7図は、第 6図に示す試験片を漂白試薬保持部位 8から見た斜視図であり、第 8図は、第 6図に示す試験片を吸水領域 6から見た斜視図である。また、第 9図は、第 6図に示す漂白試薬保持部位 8上に吸収性の大きい不織布ゃガラス繊維濾紙などで構成された被検査溶液を添加あるいは塗布するための試料添加領域 2を積層した試験片を試料添加部側から見た斜視図であり、第 1 0図は、第 9図を吸水領域 6側から見た斜視図である。

第 1 1図は、第 6図に示す漂白試薬保持部位 8上に、不織布やガラス繊維濾紙などに溶解可能なように細胞収縮剤が保持された細胞収縮剤保持部位 Ίを積層した試験片を細胞収縮剤保持部位 7側から見た斜視図であり、第 1 2図は、第 1 1 図を吸水領域 6側から見た斜視図である。第 1 3図は、第 6図に示す漂白試薬保持部位 8を、細胞収縮剤と漂白試薬の混合試薬に変更した混合試薬保持部位 9.を積層した試験片を混合試薬保持部位 9側から見た斜視図であり、第 1 4図は、第 1 3図を吸水領域 6側から見た斜視図である。

このように構成されたバイオセンサについて、その動作を第 6図〜第 1 4図を用いて説明する。，

まず、被検査溶液が試料添加部 2に添加されると、収縮剤保持部位 7の領域に達する。被検査溶液は、収縮剤の溶出とともに細胞成分を収縮しながら、漂白試薬保持部位 8の領域に達する。漂白試薬保持部位 8の領域に保持された漂白試薬は被検査溶液の浸透により溶解され、血液色素のような色素成分を退色させながら、標識物保持部位 3の領域に達する。標識物保持部位 3の領域に保持された標識試薬は、被検査溶液の浸透により溶解され、反応層 4の領域に浸透する。反応層 4の領域上には、特異的タンパク質が固定ィヒされた特異的タンパク質固定化部 5力 Sあり、標識物保持部位 3の領域から溶出した標識試薬と被検査溶液中の分析対象物と、特異的タンパク質との間で反応が行われる。このとき、被検查溶液中に分析対象物が存在すれば、特異的タンパク質固定化部 5の領域に何らかの呈色反応が見られる。最終的に、被検査溶液は吸水領域 6に吸収され反応は終了する。そして、測定の結果は、結果確認窓 1 0から目視によって確認する。

このように、本実施の形態 4によるバイオセンサによれば、試験片上に細胞成分収縮剤が保持された領域が構成されているので、細胞成分による目詰まりを生じることがなく、被検査溶液中の液体成分が素早く反応層 4に浸透することができ、検体のような細胞成分を含む被検査溶液を添加する場合でも、予め前処理をする必要がなく、直接添加して測定することができる。また、試験片上に漂白試薬保持部位を構成したので、漂白試薬の溶出とともに被検査溶液中の色素成分が退色され、判定領域以外の反応層上の色合いを抑えることができ、血色素の影響を受けない、より簡便かつ迅速で、高性能な定¾£あるいは定量測定を行うことができる。

以上、本実施の形態 1〜4におけるバイオセンサによれば、ニトロセルロースゃ不織布あるいはガラス繊維濾紙のような、任意の多孔質性担体で構成されたク口マトグラフィー材料からなる試験片を用いたので、例えば、抗原抗体反応のような任意の測定原理を用いて、ある特定物質を分析検出し、定性または定量測定を行うことができる。

なお、本実施の形態 1〜4では、標識物を用いた抗原抗体反応を例として説明を行ったが、酵素のように反応の前後において何らかの変化が生じる標識物であれば何を用いてもよい。

また、本実施の形態 1〜4におけるバイオセンサによれば、試験片に添加する被検査溶液を全血としたので、血液検体を予め前処理することなく、検体として直接点着して測定することができるため、血液中の分析対象物を測定する場合に、従来用いていた大型機器を必要とすることなく、より簡便かつ迅速に測定でき

、高感度で高性能な測定結果を得ることができる。

また、本実施の形態 1 ~ 4におけるバイオセンサによれば、標識試薬は、金属ゾル、非金属ゾ ^レ、染料ゾル、着色粒子、色素、酵素、タンパク質などが考えられ、これらの標識物の何を用レ、ても何ら問題はなレ、。

このような構成により、予め血液検体のような細胞成分を含む被検査溶液を測定する場合でも、前処理をする必要がない、また、色素成分による影響を受けないので、より簡便かつ迅速で、高感度 ·高性能な測定を行うことができる。

また、本実施の形態 1〜4におけるバイオセンサによれば、ワンステップの免疫クロマトグラフィー試験片であってもよく、このような構成により、全血などの細胞成分を含む被検査溶液を予め前処理する必要がなく、免疫反応を利用することで、測定対象物に対する抗体あるいは抗原を入手することで広い分野における測定対象物を測定することができ、全血等の細胞成分を含む被検査溶液を用いた場合においても、簡易迅速な測定が可能となる。なお、ここで示すワンステツプとは、その測定操作において、全血など細胞成分を含む被検査溶液の前処理を必要とせず、試験片に被検査溶液を点着するのみで、被検査溶液の点着の前後に試験片上に被検査溶液とは異なる展開溶液を用いたり、 B /F分離を目的としたクロマト担体の洗浄操作を行う等を必要としない操作を示し、免疫クロマトグラフィー試験片とは、クロマト展開する担体上で、抗原抗体反応を利用して被検査溶液中の被検物質の検出を行うセンサを示す。また、本実施の形態 1 4におけるバイオセンサによれば、乾式分析要素の免疫クロマ.トグラフィー試験片であつでも—よく、このような構成により、バイオセンサ全体が乾燥担体であることから、 '持ち運びが容易であるばかりでなく、保存環境や保存状態を厳密にする必要性がなく、取り扱いが容易で保存条件を選ばない長期保存の可能なバイオセンサを提供することが可能となる。なお、ここで示す乾式分析要素とは、バイオセンサを構成する全ての部材及び担持された試薬が乾燥状態であるものを示す。

(実施例）

以下の実施例により、本発明を実施する方法をさらに詳細に説明する。なお、本発明は、以下の実施例になんら制約されるものではない。

実施例 1.

(横型クロマトセンサによる全血中 hCGの定量）

a) クロマトグラフィー試験片の調製

まず、リン酸緩衝溶液にて希釈して濃度調整をした抗 h CG— ]3抗体溶液を準備した。この抗体溶液を溶液吐出装置を用いて、ニトロセルロース膜上に塗布した。これにより、ニトロセルロース膜上に検出用の抗体固定ィ匕ラインが得られた。このニトロセルロース膜を乾燥後、 1%スキムミルクを含有する T r i s— H C 1緩衝溶液中に浸漬して 30分間緩やかに振った。 30分後、 T r i s— HC 1緩衝溶液槽に膜を移動し、 10分間緩やかに振った後に、別の Tr i s -HC 1緩衝溶液槽にて更に 10分間緩やかに振り、膜の洗浄を行なった。洗浄を 2度行った後に、膜を液槽から取り出して、室温で乾燥させた。

金コロイドの調整は、 0. 01 %塩化金酸の還流中の 100 °C溶液に、 1 %クェン酸溶液を加えることによって行った。還流を 30分間続けた後に、室温放置にて冷却した。 0, 2 Mの炭酸カリウム溶液によって、 pH9に調製した金コロィド溶液に、抗 h C G _ _α抗体を加えて数分間攪拌した後に、 ρ Η 9の 10 % Β SA (牛血清ァ /レブミン）溶液を最終 1%になる量だけ加えて攪拌することで、抗体一金コロイド複合体（標識抗体）を調製した。標識抗体溶液を 4°C、 200 00Gで 50分間遠心分離することによって、標識抗体を単離して、それを洗浄緩衝液（1%B SA * リン酸緩衝液）中に懸濁した後に、遠心分離を行って、標 - ' . 識抗体を洗浄単離..した。こ'.の標識抗体を洗浄緩衝液で懸濁して、 0. 8 // mのフ - - ィルタにて濾過,した後に当初の'金コ口ィド溶液量の 1 0分の 1に調製して、 4 °Cで貯蔵した。

標識抗体溶液を溶液吐出装置にセットして、抗 h CG— ]3抗体固定化乾燥膜上の抗体固定化位置から離れた位置に塗布した後に、膜を乾燥させた。これによつて、固定ィヒ膜上に標識抗体保持部位が得られた。

0. 1 5Mに調製された塩化カリウムと 0. 05%に調整された過炭酸ナトリゥムとの混合水溶液を、不織布に対して単位面積あたり 0. 1 m 1点着した後に、液体窒素にて直ちに凍結し、凍結乾燥を行った。これによつて、塩化カリウムと過炭酸ナトリウムが含浸された混合試薬保持部材が得られた。また、 0. 05 %の過炭酸ナトリゥムを含まない細胞収縮剤である塩化力リゥムのみの保持部材も同様に作製した。

こうして調製された標識抗体保持部位を含む抗体固定化膜を、反応層担体支持体上に貼り付け、混合試薬保持部材あるいは細胞収縮剤保持部材と、ガラス繊維ろ紙を吸水領域として付け加えてから 0. 5 cm幅の細片に切断して、試験片を作製した。

b) 試料の調製

抗凝固剤としてへパリンを加えた人の血液を、へマトクリット値 45%になるように調製した。この血液に既知濃度の h CG溶液を加えることにより、さまざまな既知濃度の h C G溶液を調製した。

c) 試験片上の呈色度合の測定

試験片上の試料添加部に h C Gを含む血液を 200 / 1以上添加して、吸水領域方向へと展開処理して、抗原抗体反応をさせて抗体固定化部における呈色反応を行った。この試験片への試料添加から 5分後の呈色状況を反射型分光光度計（ CS 9 300 ；島津製作所製）を用いて計測して、呈色度を演算処理した。

0、 1 00、 1 000、 10000UZ 1の h CGを含有する血液（へマトクリット値 45%) を試験片に添加して展開処理を行った。各 h CG濃度の血液に対する試験片上の抗体固定化部の呈色状況を反射型分光光度計で測定した。 63 5 nmの波長における吸光度を計測して、予め作成しておいた hCG濃度と吸光度との関係を示 tf検量線に代入した。その結果を第 15図に示す。

第 15 は漂白作用を有する試薬を試験片に有した場合と、無い場合での、呈色度合を測定.した場合の性能を示す'図であり、第 15 (a) 図は、漂白試薬である過炭酸ナトリウムを含まないバイオセンサを用いた場合であり、第 15 (b) 図は、漂白試薬保持部位を設けたバイオセンサを用いた場合の定量性能を示す図である。横軸は、試験片に添加した試料の hCG濃度を表す。縦軸は、試験片上の呈色領域における標識物からの信号を検量線に代入して求めた試料中 hCG濃度の換算値を表す。

本来、例えば 1000UZ1の h CGを含有する血液の吸光度を計測し、その吸光度を検量線に代入すると、 h C G濃度は 1000 U/ 1となるはずであるが、実際には、少しずれる。そのずれの大きさにより、その測定の正確さを知ることができる。

以下、全血を試料としたクロマトグラフィー定量測定において、漂白試薬を用いなかった場合と、漂白試薬保持部位を試験片上に設けた場合について説明する o

第 15図は、免疫ク口マトグラフィ一試験片に全血試料を添カ卩し、 5分後の呈色度合の測定値をもとに、分析対象物の濃度を換算した結果を表している。この際に使用した標識試薬は、第 1 5 (a) 図、及び第 15 (b) 図共に同じ抗体一金コロイド複合体を使用している。まず、試験片に漂白試薬を含む場合（第 1 5 (b) 図）は、 CV値（変動係数）力 0〜15%であるのに対して、漂白試薬を含まない場合（第 15 (a) 図）は、血球色素の影響を受け、 CV値が 20〜6 5%と、大きなばらつきを示し、定量性能が悪いことがわかる。

• 以上の結果から、漂白試薬をバイオセンサに組み込むことにより、血液由来の色素の影響を抑え、定量性能の向上が可能なことがわかる。

本実施例では、過炭酸ナトリゥムを漂白試薬として、塩化力リゥムを細胞収縮剤として用いた場合の結果を説明したが、それ以外の漂白効果や細胞収縮効果をもつものを用いても何ら問題はない。

また、本実施例におけるクロマトグラフィー測定装置として、ニトロセルロースゃガラス繊維濾紙のような、任意の多孔質性担体で構成されたクロマトグラフ ,イ材料からなる試験片が用ヽられている。このような材料からなる試験片は、例えば、抗原抗体反応のよ:うな任意の測定原理を用いて、ある特定物質を分析検出し、定性または定量する機能を持っている。また、標識物を用いた抗原抗体反応を例として説明を行ったが、酵素のように反応の前後において何らかの変化が生じるものであれば何を用いても良い。産業上の利用可能性

以上のように本発明に係るバイオセンサは、特別な機器を必要とせず、また、予め被検査溶液を前処理することなく添加するだけで、血液色素のような被検査溶液由来の色素成分の影響を低減させる'ことで分析結果を目視にて確認することができ、特に、本発明のバイオセンサは、血液成分を代表とする有色成分を含む液体試料の分析に適している。

Claims

請求の範囲

1 . 被検査溶液を展開する展開層を備え、前記展開層の一部に、被検査溶液の展開により、溶解可能なように標識試薬が保持された標識試薬部分と、前記展開層の一部に、被検査溶液中の分析対象物と特異的に反応する試薬が固定化された試薬固定化部分とを少なくとも備えたバイオセンサにおいて、

前記展開層に被検査溶液を添加する試料添加領域、もしくは前記試料添加領域に対して被検査溶液の浸透方向下流側の少なくとも一部に漂白作用を有する試薬を溶解可能な乾燥状態で担持した漂白試薬領域を設けたことを特徴とするバイオセンサ。

2 . 請求の範囲第 1項記載のバイオセンサにおいて、

前記展開層がニトロセルロースからなることを特徴とするバイオセンサ。

3 . 請求の範囲第 1項記載のバイセンサにおいて、

前記展開層上に漂白作用を有する試薬を、溶解可能なように直接担持したことを特徴とするバイオセンサ。

4. 請求の範囲第 1項記載のバイオセンサにおいて、

前記展開層上には、被検査溶液を毛細管現象により流入する試料流入領域を配設し、前記試料流入領域中に前記漂白試薬領域を保持したことを特徴とするバイォセンサ。

5 . 請求の範囲第 1項記載のバイオセンサにおいて、

添加する被検査溶液が全血であることを特徴とするバイォセンサ。

6 . 請求の範囲第 1項記載のバイオセンサにおいて、

上記漂白作用を有する試薬が過炭酸ナトリゥムであることを特徴とするバイオセンサ。 '

7 . 請求の範囲第 1項記載のバイオセンサにおいて、

上記漂白作用を有する試薬が過酸化水素であることを特徴とするバイォセンサ

8 . 請求の範囲第 1項記載のバイオセンサにおいて、

上記漂白作用を有する試薬が次亜塩素酸ナトリゥムであることを特徴とするバィォセンサ。

9 . 請求の範囲第 1項記載のバイオセンサにおいて、

上記バイオセンサが、ワンステップの.免疫クロマトグラフィー試験片であることを特徴とするバイオセンサ。

1 0 . 請求の範囲第 1項記載のバイオセンサにおいて、

上記バイォセンサが、乾式分析要素であることを特徴とするバイォセンサ。

1 1 . 被検査溶液を展開する展開層を備え、前記展開層の一部に、被検査溶液の展開により、溶解可能なように標識試薬が保持された標識試薬部分と、前記展開層の一部に、被検査溶液中の分析対象物と特異的に反応する試薬が固定化された試薬固定化部分とを少なくとも備えたバイオセンサにおいて、

前記展開層に被検査溶液の浸透方向に対して、被検査溶液を添加する試料添加領域よりも被検査溶液の浸透方向下流側の少なくとも一部に、細胞成分収縮剤と漂白作用を有する試薬をそれぞれ溶解可能なように担持した領域を設けたことを特徴とするバイオセンサ。

1 2 . 請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、

1 3 . 請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、

1 4 . 請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、

1 5 . 請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、

前記展開層に、細胞収縮剤と漂白作用を有する試薬を混合した試薬を担持したことを特徴とするバイォセンサ。

1 6 . 請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、

前記展開層上には、被検査溶液の接触により、毛細管現象による被検査溶液が流入される空間が配設されており、混合された細胞収縮剤と漂白作用を有する試薬が前記空間中に被検査溶液流入:により'溶解可能な乾燥状態で保持したことを特徴とするバイオセンサ。

1 7 . 請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、

添加する被検査溶液が全血であることを特徴とするバイオセンサ。

1 8 . 請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、

上記漂白作用を有する試薬が過炭酸ナトリゥムであることを特徴とするバイオセンサ。

1 9 . 請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、

上記漂白作用を有する試薬が過酸化水素であることを特徴とするバイオセンサ。

2 0 . 請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、

2 1 . 請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、

上記細胞収縮剤が無機塩であることを特徴とするバイオセンサ。

2 2 . 請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、

上記細胞収縮剤がァミノ酸であることを特徴とするバイォセンサ。

2 3 . 請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、

上記細胞収縮剤が糖類であることを特徴とするバイオセンサ。

2 4 . 請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、

上記バイオセンサが、ワンステップの免疫ク口マトグラフィー試験片であることを特 ί敷とするバイオセンサ。

2 5 . 請求の範囲第 1 1項記載のバイオセンサにおいて、

上記バイォセンサが、乾式分析要素であることを特徴とするバイオセンサ。