WO2001019848A1

WO2001019848A1 - Nouveaux procedes de production de composes peptidiques

Info

Publication number: WO2001019848A1
Application number: PCT/JP2000/006246
Authority: WO
Inventors: Masaharu Ichihara; Koji Machiya; Yasuhiro Morinaga; Nobutaka Kawai; Kazuo Ike
Original assignee: Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 1999-09-14
Filing date: 2000-09-13
Publication date: 2001-03-22
Also published as: AU7311100A

Description

明細書

ぺプチド化合物の新規製造法技術分野

この発明はタキキニン拮抗作用、特にサブスタンス P拮抗作用、ニューロキニン A拮抗作用、ニューロキニン B拮抗作用などの薬理活性を有するへプチド化合物またはその塩を少ない工程数で効率よく製造することのできる方法に関する _n この方法によって得られるペプチド化合物またはその塩は、ヒトまたは動物におけるタキキニン介在性疾患、例えば、喘息、気管支炎、鼻炎、咳、喀痰などの呼吸器疾患；結膜炎、春季カタルなどの眼疾患：搔痒、接触性皮膚炎、ァトピー性皮膚炎、じんま疹、その他の湿疹様皮膚炎などの皮廣疾患；慢性関節リウマチ、変形性関節炎などの炎症性疾患；疼痛（例えば、片頭痛、頭痛、歯痛、癌性疼痛、背痛等）などの治療または予防に有用である，従来の技術

本出願人は、タキキニン拮抗剤として有用な化合物として、下 -般式（ I ) で示されるペプチド化合物またはその塩を開示している（特開平 4 2 1 0 9 9 6号) _c

( I )

差替え用紙（規貝 IJ26) 一般式（ I ) で示されるペプチド化合物またはその塩を製造する方法として上記公開公報に開示されている方法を以下に示す。

I zR一

H->N-CHCON'

、R³

(ID

またはアミノ基における

その反応性誘導体または

その塩

ける塩

(V)

またはその塩

差替え用紙（規則 26) ァミノ保護基の脱離

( VI )

またはその塩

( I )

またはその塩ところが上記の方法は、 C末端から保護、脱保護を繰り返しペプチド鎖を伸長する一般的なぺプチド化合物の製造法であるが、工程数が多い（3工程からなる）ため製造が煩雑であるばかりでなく、最終工程において再結晶操作も必要となり、全工程を通すと目的物質の収率は低くなり、製造コストを高める要因となってレ、る。また、反応試剤として塩化メチレンを使用しており環境面で問題がある。差替え用紙（規則 26) そこで、式（ I )のべブチド化合物をより少ない工程数でしかも高収率で得られる新規の製造法の提供が切望されていた。発明が解決しょうとする課題

この発明は上記事情に鑑みてなされたものであり、その目的は、ペプチド化合物またはその塩を、少ない工程で収率よく得ることのできる新規な製造方法を提供することにある. 課題を解決するための手段

上記課題を解決するこの発明の製造方法は、式（ I I ) ：

[式中、は低級アルキル基、

R ^:<はアル（低級）アルキル基を意味する] で示される化合物またはァミノ基おけるその反応性誘導体またはその塩を、式（ I I 〗）：

[式中、 R ¹は低級アルキル基を意味する]で示される化合物またはカルボキシ基におけるその反応性誘導体またはその塩と反応させて、式（ I ) ：

差替え用紙（規則 26)

[式中、 R R 2および R^:iはそれぞれ前と同じ意味] で示されるペプチド化合物またはその塩類を得るところに要旨を有するものである。

原料化合物 U I I ) は新規であり、下記反応式で説明される製造法により製造することができる。

またはカルボキシ基における

反応性 K導体またはその塩

またはその塩

[式中、 R 'は前と同じ意味] 。発明の実施の形態

本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意検討を進めた結果、〗ステップで、しかも収率良く上式（ I ) のペプチド化合物が得られる方法を見出し、この発明を完成したのである。本発明で用いられる原料化合物および目的化合物の好適な塩類は常用の無毒性塩類であり、例えば酢酸塩、トリフルォロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ギ酸塩、トルエンスルホン酸塩等の有機酸塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、沃化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩のような酸付加塩、または例えばアルギニン、ァスパラギン酸、グルタミン酸等のアミノ酸との塩、または例えばナトリウム塩、カリウム塩等差替え用紙（規則 26) のアル力リ金属塩および例えばカルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩のような金属塩、アンモニゥム塩、例えばトリメチルァミン塩、トリェチルァミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、ジシクロへキシルァミン塩、 N , N ' — ジベンジルエチレンジァミン塩等の有機塩基塩等が挙げられる。

この明細書の以上および以下の記載においてこの発明の範囲内に包含される種々の定義の好適な例および説明を以下詳細に述べる

「低級」とは、特に指示がなければ、炭素原子 1なし、し 6個、好ましくは 1ないし 4個を意味すろものとする _c 好適な「低級アルキル基」としては、メチル、ェチル、プロビル、イソフロピル、ブチル、イソブチル、第三級ブチル、ヘンチル、へキシル等のような直鎖または分枝鎖アルキル基が挙げられるが、最も好ましいものはメチル基である，好適な「アル（低級）アルキル基」としては、例えばトリチル、ベンズヒドリル、ベンジル、フ: r-ネチル等のアル（低級）アルキル基等のようなアミノ酸およびぺフチド化学の分野で使用される常用の基が挙げられる。

好適な「ァミノ保護基」としては、ァミノ酸およびべプチド化学の分野で使用される常用の保護基、すなわち、例えばホルミル、ァセチル、プロピオニル、プチリル、イソブチリル、ノくレリノレ、イソノくレリル、ビバロイル、へキサノィル等の低級アルカノィル基、例えばメトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロボキシカルボニル、ブトキシカルボニル、第三級ブトキシカルボニル等の低級アルコキシカルボニル基等のようなァシル基が挙げられる。本発明の目的化合物（ I ) の製造法を以下詳細に説明する。

目的化合物 Π ) またはその塩は、化合物（ I I ) またはアミノ基におけるその反応性誘導体またはその塩を、化合物（ I I I ) またはカルボキシ基におけるその反応性誘導体またはその塩と反応させることにより製造することができる。

差替え用紙（規則 26) 化合物（ I I ) のァミノ基における好適な反応性誘導体としては、化合物（ I I ) とアルデヒド、ケトン等のようなカルボニル化合物との反応によって生成するシッフの塩基型ィミノまたはそのェナミン型互変異性体；化合物 U I ) とビス（トリメチルシリル）ァセトアミド、モノ（トリメチルシリル）ァセトアミド、ビス（卜リメチルシリル）尿素等のようなシリル化合物との反応によって生成するシリル誘導体；化合物（ I I ) と三塩化リンまたはホスゲン等との反応によつて生成する誘導体が挙げられる，化合物（ I I I ) のカルボキシ基における好適な反応性誘導体としては、酸ハロゲン化物、酸無水物、活性化アミド、活性化エステル等が挙げられる反応性誘導体の好適な例としては、酸塩化物：酸アジ化物；例えばジアルキルリン酸、フエニルリン酸、ジフユ二ルリン酸、ジベンジルリン酸、ハロゲン化リン酸等の置換されたリン酸、ジアルキル亜リン酸、亜硫酸、チォ硫酸、硫酸、例えばメタンスルホン酸等のスルホン酸、例えば酢酸、ブロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、ピバリン酸、ベンタン酸、イソベンタン酸、 2 —ェチル酪酸、トリクロ口酢酸等の脂肪族カルボン酸または例えば安息香酸等の芳香族カルボン酸のような酸との混合酸無水物；対称酸無水物；ィミダゾ一ル、 4—置換ィミダゾール、ジメチルビラゾ一ル、トリアゾールまたはテトラゾールとの活性化ァミド；または例えばシァノメチノレエステル、メトキシメチルエステノレ、ジメチルイミノメチルエステル、ビニノレエステノレ、ブロパノレギノレエステル、 p—二トロフエ二ノレエステノレ、 2， 4—ジニトロフエ二ノレエステノレ、トリクロ口フエニノレステノレ、ペンタクロロフエニノレエステノレ、メシノレフエ二ノレエステル、フエニノレアゾフエ二ノレエステル、フエ二ルチオエステノレ、 p —ニトロフエ二ルチオエステノレ、 p—クレジルチオエステノレ、カルボキシメチルチオエステル、ビラニルエステル、ピリジルエステル、ピペリジルエステル、 8 —キノリルチオエステル等の活性化エステル、または例えば N , N—ジメチルヒドロキシルァミン、 1—ヒドロキシ一 2 _ ( 1 H) —ピリドン、 N—ヒドロキシスクシンイミド、 N—ヒドロキシフタルイミド、〗一ヒド口キシー 1 H—ベンゾトリァゾール等の N—ヒドロキシ化合物とのエステル等が挙げられる。これらの反応性誘導体は使用すべき化合物 U I I ) の種類に従つ差替え用紙（規則 26) てそれらの中から任意に選択することができる。反応は通常、水、例えばメタノール、エタノール等のアルコール、アセトン、ジォキサン、ァセトニトリル、クロ口ホルム、塩化メチレン、塩化エチレン、テトラヒドロフラン、酢酸ェチル、 N， N—ジメチルホルムアミド、ピリジンのような常用の溶媒中で行われるが、反応に悪影響を及ぼさない溶媒であれば、その他のいかなる有機溶媒中でも反応を行うことができる,，これらの常用の溶媒は水との混合物として使用してもよレ、この反応において化合物（ 1 1 】）を遊離酸の形またはその塩の形で使用する場合には、 Ν， Ν ' ージシクロへキシルカルボジイミド； Ν—シクロへキシルー ' 一モルホリノェチルカノレボジイミド； Ν—シクロへキシルー N ' ― ( 4—ジェチルアミノシクロへキシル）カルボジイミド； Ν， Ν ' ージェチルカルボジィミド Ν , N ' —ジイソブロビルカルボジイミド； Ν—ェチルー Ν ' ― ( 3—ジメチアミノブ口ビル）カルボジイミド； Ν， Ν ' 一カルボニルビス（2—メチルイミダゾール）；ペンタメチレンケテン一 Ν—シク口へキシルイミン；ジフエ二ノレケテン一 Ν—シク口へキシルイミン；ェトキシアセチレン、 ] 一アルコキシ一 ] —クロ口エチレン；亜リン酸トリアルキル；ポリリン酸ェチル；ポリリン酸ィソプロヒル；ォキシ塩化リン（塩化ホスホリル）；三塩化リン；ホスホリルアジ化ジフエニル；塩化チォニル；塩化ォキサリル；例えばクロ口ギ酸ェチル、クロ口ギ酸イソプロピル等のハロギ酸低級アルキル；トリフエニルホスフィン； 2—ェチル— 7 —ヒドロキシベンズイソォキサゾリゥム塩； 2 —ェチル— 5— ( m—スルホフエニル）ィソォキサゾリゥムヒドロキシド分子内塩；へキサフルォロリン酸べンゾトリアゾール— 1 一^ fルーォキシートリス（ジメチルァミノ）ホスホニゥム； 1 一（ p—クロ口ベンゼンスルホニルォキシ）一 6 —クロロー 1 H—ベンゾトリァゾール； N， N—ジメチルホルムアミドと塩化チォニル、ホスゲン、クロロギ酸トリク口ロメチル、ォキシ塩化リン等との反応によって調製したいわゆるビルスマイヤー試薬等のような常用の縮合剤の存在下に反応を行うのが望ましい差替え用紙（規則 26) 反応はまた、アルカリ金属炭酸水素塩、トリ（低級）アルキルァミン、ビリジン、 N— （低級）アルキルモルホリン、 N， N—ジ（低級）アルキルベンジルァミン等のような無機塩基または有機塩基の存在下に行ってもよい。

反応温度は特に限定されないが、通常は冷却下ないし加温下に反応が行われる。また原料化合物（ I I I ) の製造法を以下詳細に説明する,.

化合物（ I I I ) またはその塩は、化合物（V I I ) またはカルボキシ基におけるその反応性誘導体またはその塩を、化合物（V I I I ) またはイミノ基におけるその反応性誘導体またはその塩と反応させることにより製造することができる

化合物（V I I ) および化合物（V I I I ) の好適な塩類については、化合物 ( I ) について例示したものを参照すればよい。

この反応は前記化合物（ I ) の製造法と実質的に同様にして行うことができ、従つてこの反応の反応方式および例えば反応性誘導体、溶媒、反応温度等の反応条件については前記製造法の説明を参照すればよい。上記製造法によって得られた化合物は、粉砕、再結晶、カラムクロマトグラフィー、再沈殿等のような常法により単離、精製することができる尚、化合物（ 1 ) およびその他の化合物は、不斉炭素による立体異性体を 1個またはそれ以上含有することがあるが、これらの異性体およびそれらの混合物もすべてこの発明の範囲に含まれる。以下、製造例および実施例に従ってこの発明をさらに詳細に説明する。製造例 1

乾燥した反応釜に窒素置換後、テトラヒドロフラン（42. 5 1 ) 、 (4 R) —4—ヒドロキシー L—ブロリン（7. 00 k g) 、へキサメチルジシラザン（ 9. 40 k g) 、トリメチルシリルクロリド（ 6. 33 k g) を順次仕込み、内差替え用紙（規則 26) 温約 5 OT:で約〗時間シリル化反応を行った。反応終了後、窒素気流下 0— 1 0 じまで冷却した。一方、別の反応釜にテトラヒドロフラン（42. 5 1 ) 、 Ν— メチルインドール— 3—力ルボン酸（8. 50 k g) 、ジメチルホルムアミド（ 0. 7 1 k g) を順次仕込み、窒素気流下 0— 1 0tまで冷却した.. 冷却下、チォニルクロリド（6. 93 k g) を加え、内温 20— 30 Cで約 1時間酸ク口化反を行った。酸クロ反応液を減圧下濃縮乾固し、過剰の酸成分を除去した。析出した結晶をテトラヒドロフラン（42. 5 1 ) に溶解し、先に調製したシリル化反応液中へ内温 0— 20°Cで滴下したし滴下後、 20— 30 Cで約 1時間ァミド化反応を行い、次いで、冷却下トリエチルァミン（4. 9〗 k g) を滴下し、内温 20— 30^;'Cで約 30分間反応を行った。ァミド化反応終了後、これに 1 0 %クェン酸水溶液（85 1 ) を内温】 0— 30 Cを加え、内温 20- 3 CTCで】 2時間以上攪拌した脱シリル化反応終了後、反応液中のテトラヒドロフラン（約 85 1 ) を減圧下濃縮し、内温 20— 30 Cで 1時間以上熟成した析出した結晶を遠心分離器で濾過し、得られた結晶を水（42. 5 1 ) で洗浄し、乾燥して、（4R) — 4ーヒドロキシ一 1— (1ーメチルー 1 H—インドール— 3ィル ) カルボ二ルー L—プロリン（ 1 3. 5 k g) を得た。（収率 96. 5%)

I R ( a s t e) ： 3320, 1 730, 1 590, 1 580. 1 2 1 0, 1 1 90 cm '

NMR (DMS 0- d _h ) ： 1 - 8— 2. 3 (2 H, m) ， 3. 65 ( 1 H, d , J = 1 0. 8 H z) , 3. 7— 4. 0 (1 H， m) , 3. 85 ( 3 H, s) ， 4. 3— 4. 4 ( 1 H, m) , 4. 53 ( 1 H, t , J = 8. 5 H z ) , 5. 0 9 ( 1 H, d， J = 2. 0H z) ， 7. 0— 7. 2 (2H, m) , 7. 48 (1 H， d, J = 7. 8H z) , 7. 9 1 (1 H, s) ， 8. 05 (】 H， d， J = 7. 8H z) , 1 2. 4 ( 1 H, b r. s) 実施例 1

反応釜を窒素置換後、ジメチルホルムアミド（80 1 ) 、 N—ベンジル— N— メチルー 3— （2—ナフチル） —L—ァラニンアミド塩酸塩（ 1 6. 0 k g) 、差替え用紙（規則 26) (4 R) 一 4ーヒドロキシー 1— ( 1—メチルー； 1 H—インド一ル一 3ィル）力ルボニル一 L—フロリン（1 3. O k g) 、ヒドロキシベンゾトリアゾ一ル（8 . 3 k g) を順次仕込み、窒素気流下冷却下、 N—ェチルー N' - (3—ジメチアミノブ口ビル）カルポジイミド塩酸塩（1 0. 4 k g) 、トリェチルァミン (5. 02 k g) を順次仕込み、内温 20 - 30^UCで約 2時間反応を行った。反応終了後、反応液に酢酸ェチル（320 1 ) 及び水（320 1 ) を加え、内温 2 ()— 3 (TCで慢拌、静置後、有機層を分取した，得られた有機層に洗浄の都度メタノール（ 1 6 1 ) を加えながら、 5%重曹水（80 1 ) で 2回、 1 N—塩酸（ 80 】）、水（80 1 ) で各々洗浄した。得られた有機層を減圧下、濃縮乾固し、再度、酢酸ェチル（240 1 ) で溶解し、減圧下、濃縮乾固した,，濃縮残渣に酢酸ェチル（240 1 ) を加え、內温 75 - 80 Cで溶解後、内温 20— 30V まで冷却し、結晶を析出させた,— 同温度下で.1時間以上熟成後、析出結晶を遠心分離機で濾過した, 濾過した結晶を酢酸ェチル（80 1 ) にて洗浄し、乾燥後、 N 2 - [ (4 R) 一 4—ヒドロキシー 1— ( 1—メチル— 1 H—インドール一 3 ィル）カルボ二ルー L—フロリル] — N—ベンジルー N—メチル— 3— (2—ナフチル）一 L—ァラニンアミド（26. 5 k g) を粗結晶として得た。反応釜にエタノール（69 1 ) を仕込み、内温 20— 30°Cまで昇温し、上記粗結晶（2 3. O k g) を仕込み懸濁後、さらに内温 55— 65°Cまで昇温し溶解後、内温 20— 35じまで冷却し、さらに U F水を仕込み冷却し、滴下し晶析した。濾過した結晶を U F水にて洗浄後、乾燥して精 N 2— [ (4 R) — 4—ヒドロキシ— 1一（ 1—メチルー ] H—インドール— 3ィル）カルボ二ルー Lーブロリル] ― N—べンジルー N—メチル— 3— (2—ナフチル）一 Lーァラニンアミドの無晶形粉末（22. 5 k g) を得た。（収率 88. 2 %)

1 R (p a s t e) ： 33 1 0, 3050， 1 639， 1 597, 1 53 1 , 1 246, 1 1 24, 1 080， 82 1 , 748, 700 cm"'

NMR (DMS 0- d_H) ： 1 - 6— 2. 2 ( 2 H, m) ， 2. 8 1 ( 3 H, s ) ， 2. 9— 3. 4 ( 2 H, m) ， 3. 69 ( 1 H, d) ， 3. 71 -4 . 1 ( 1 H, m) ， 3. 85 ( 3 H, s ) ， 4. ユー 4. 4 (2 H, m) ， 4. 49 ( 1 H, m) ， 4. 6— 4. 9 ( 1 H, m) , 5. 05 ( 1 H, d 差替え用紙（規則 26) ) ， 5. 0- 5. 2 ( 1 H, m) , 6 - 88 (2 H， d) ， 6. 9— 7. 3

(6 H, m) , 7. 4— 7. 6 (3 H， m) , 7. 6 - 8. 0 ( 5 H, m) ， 8. 】 1 ( 1 H， d) ， 8. 54 ( 1 H， d) 実施例 2

反応釜を窒素置換後、ジメチルホルムアミド（8 1 L) 、 N -ベンジル- N-メチル- 3- (2-ナフチル） - L-ァラニンアミド塩酸塩（2 7kg) 、（4R)- 4-ヒドロキシ -1-(1-メチル -1H-ィンドール- 3-ィノレ）カルボニル- L -ブロリン（2 1 . 9 kg ) 、ヒドロキシベンゾトリアゾ一ル（2. 39 k g) を順次仕込んだ，溶解確認後、冷却し、内温 0〜 3 でトリエチルァミン（8. 4 7 kg) を滴下した「次いで内温 0〜30°Cで N-ェチル - N'-(3 -ジメチルアミノブ口ビル)カルボジイミド（〗 6. 0 kg) を添加した後、 20〜： 3 0でで 2時間反応を行つ †:_c 予め抽出 ·晶析釜に酢酸チル（540 L) 、市水（540 L) を仕込み、 50〜6 O'Cに調整した後、この中へ反応終了液を添加したぐ內温 50 〜60°じで 1 0分間攪拌、静置後、有機層を分取した。得られた有機層に内温 40〜60 Cにて巿水（2 70 L) を添加した後、內温 50〜6 ()°Cで 1 ()分間洗浄した。有機層を分取し、內温 7 0〜80 °Cで常圧下、濃縮を行い、約 4 3 2 Lを留去した。次いで酢酸ェチル（2 9 7 L) を 60〜7 5°Cで添加し、同温度で 1時間晶析した後、 1 5〜30 Cまで冷却し、同温度下にて 1時間以上攪拌した。析出結晶を遠心分離機で濾過した。濾過した結晶を酢酸ェチル（2 1 6 L) にて洗浄後、 60°Cにて真空乾燥し、 N² - [(4R)- 4-ヒド口キシ- 1- (1-メチノレ- 1H-ィンドール- 3-ィノレ）カルボニル- L-ブロリル]- N-ベンジル- N-メチル- 3- (2-ナフチル） - L-ァラニンアミド（44 k g) を粗結晶として得た。

溶解釜に上記粗結晶（44kg) 、メタノール（7 6 L) を仕込み、内温 4

0〜6 0°Cで溶解した後、内温 2 0〜30°Cに冷却した。この溶解液を 0. 4 5 mメンブランフィルターで清澄濾過した。溶解釜及びノンブランフィルターはメタノール（2 1 L) で洗浄した。清澄濾過液および洗液は予め晶析釜で内温 2〜 1 0°Cに調整した精製水（7 8 3 L) 中へ滴下し、沈殿を行つ差替え用紙（規則 26) た，滴下終了後、内温 2〜〗 0°Cで 3 0分間攪拌した。沈殿液を遠心分離機で濾過した ₍，濾過した沈殿物は精製水（2 1 6 L) で洗浄後、 40tにて真空乾燥を行い、精 N²- [(4R)- 4-ヒドロキシ- 1- (1 -メチル- 1H-インドール- 3-ィノレ）カルボ二ル- L-ブロリル]- N-ベンジル- N-メチル- 3- (2-ナフチル） -し-ァラニンアミドの無晶形粉末（40. 3kg) を得た _c

参考例〗一（ I )

N—ベンジル— N—メチル— 3— (2—ナフチル）一 Lーァラニンアミド塩酸塩（1 . 5 g) 、 1 —第 3級ブトキシカルボ二ルー（4 R) — 4—ヒドロキシ - L—フロリン（0. 98 g) およびヒドロキシベンゾトリアゾール（0. 5 7 g ) の塩化メチレン（40m l ) およびジメチルホルムアミド（5m l ) の混合溶媒中氷冷溶液に N—ェチル— N' — （3—ジメチアミノブ口ピル）カルポジイミド（0. 7 7m l ) を加えた溶液を同温で 1時間、室温で一夜攪拌した. 溶媒を留去した後、反応混合物を酢酸ェチルで抽出し、有機層を順次炭酸水素ナトリゥム水溶液、水、 0. 5 N塩酸、水および塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去した後、残渣をシリカゲルカラム（7 5 g ) で精製し、クロ口ホルムとメタノールとの混合溶媒（5 0 ： 1 ) で溶出して、 N 2— [ 1 —第 3級ブトキシカルボニル— （4 R) — 4—ヒドロキシ— L—プロリル] 一 N—ベンジル一 N—メチル— 3— （2—ナフチル）一 Lーァラニンアミド（ 1. 74 g) を無定形固体として得た。（収率 7 7. 3%) 参考例〗一（ 2 )

N 2 - [ 1 —第 3級ブトキシカルボニル一（4 R) — 4—ヒドロキシ—し—ブ口リル] — N—べンジルー N—メチルー 3— （2—ナフチル）一 Lーァラニンァミド（】 · 07 g) の塩化メチレン（ 1 1 m l ) 氷冷溶液に 1， 4—ジォキサン中 4 N塩化水素（8. 2m l ) を加える。溶液を同温で 5分間、室温で 5 5分間攪拌する。溶媒を留去後、残渣をジイソプロピルエーテルで粉碎し、濾取、乾燥して、 N 2— [ (4 R) — 4ーヒドロキシ一 L一プロリノレ] 一 N—ベンジルー N 差替え用紙（規則 26) —メチル一 3— （2—ナフチル）一しーァラニンアミド塩酸塩（0. 90 g) を得た。（収率 95. 6 %) 参考例】一（3)

1一メチルインドール— 3—カルボン酸（0. 33 g) 、 N 2 - [ (4 R) 一 4 -ーヒドロキシ— L一プロリル] 一 N—ベンジル一 N—メチルー 3— (2—ナフチル） — Lーァラニンアミド塩酸塩（0. 88 g) およびヒドロキシベンゾトリァゾール（0. 25 g) の氷冷溶液に N—ェチル — （3—ジメチアミノブ口ビル）カルボジィミド（0. 34m l ) を加えた。溶液を同温で 1時間、室温で一夜攪拌した。溶媒を留去した後、反応混合物を酢酸ェチルで抽出し、有機層を順次炭酸水素ナトリウム水溶液、水、 0. 5 N塩酸、水および塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去した後、残渣をシリ力ゲルカラム（50 g) で精製し、クロ口ホルムとメタノールとの混合溶媒（5 0 ：〗）で溶出する所望の化合物を含む画分を集めて溶媒を留去した，次いで残渣を酢酸ェチルから結晶化させ、濾取、乾燥して、 N2— [ (4 R) — 4ーヒドロキシ一 1— ( 1一メチル— 1 H—インドール— 3ィル）カルボ二ルー L—プ口リル] —N—べンジノレ一 N—メチルー 3— (2—ナフチル）一 L—ァラニンァミド（ 0. 66 g ) を得た。（収率 59. 5 %) 従来の技術

さらに一般式 U) で示されるペプチド化合物またはその塩を製造する方法として上記公開公報に開示されている方法を以下に示す。

差替え用紙（規則 26)

(Π)

(ΠΙ)

における体または

(V)

またはその塩

差替え用紙（規則 26)

(VI)

またはその塩

ける塩

( VIII )

またはその塩

差替え用紙（規則 26) ァミノ保護基の脱離

(IX)

またはその塩

(I)

またはその塩

[式中、 R'、 R²および R^:iはそれぞれ前と同じ意味であり、およびはそれぞれァミノ保護基を意味する]

差替え用紙（規則 26) ところが上記の方法は、 c末端から保護、脱保護を繰り返しへプチド鎖を伸長する一般的なぺブチド化合物の製造法であるが、工程数が多い（6工程からなる）ため製造が煩雑であるばかりでなく、最終工程において再結晶操作も必要となり、全工程を通すと目的物質の収率は低くなり、製造コストを高める要因となっているまた、反応試剤として塩化メチレンを使用しており環境面で問題がある。そこで、式（ 1 )のへブチド化合物をより少ない工程数でしかも高収率で得られる新規の製造法の提供が切望されていた。発明が解決しょうとする課題

この発明は上記事情に鑑みてなされたものであり、その目的は、へフチド化合物またはその塩を、少ない工程で収率よく得ることのできる新規な製造方法を提供することにある課題を解決するための手段

上記課題を解決するこの発明の製造方法は、式（ I ί )

化】

H7N-CHCOOH

で示される化合物またはアミノ基におけるその反応性誘導体またはその塩を、式

( X I ) :

化 2

差替え用紙（規則 26) [式中、 R'は前と同じ意味]で示される化合物またはカルボキシ基におけるその反応性誘導体またはその塩と反応させて、式（X I I ) ：

[式中、 R¹は前と同じ意味] で示される化合物またはその塩を得、さらに式（ ί V) ：

ΗΝ

[式中、 R²および! ^はそれぞれ前と同じ意味] で示される化合物またはァミノ基におけるその反応性誘導体またはその塩と反応させて、式（ I ) ：

[式中、 R'、 R 2および R³はそれぞれ前と同じ意味] で示されるペプチド化合物またはその塩類を得るところに要旨を有するものである。

原料化合物（X I ) は新規であり、下記反応式で説明される製造法により製造することができる。

差替え用紙（規則 26) ま

反

[式中、は前と同じ意味] 発明の実施の形態

本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意検討を進めた結果、 3ステツフで、しかも収率良く上式（ I ) のペプチド化合物が得られる方法を見出し、この発明を完成したのである，本発明で用いられる原料化合物および目的化合物の好適な塩類は常用の無毒性塩類であり、例えば酢酸塩、トリフルォロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ギ酸塩、トルエンスルホン酸塩等の有機酸塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、沃化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩のような酸付加塩、または例えばアルギニン、ァスバラギン酸、グルタミン酸等のアミノ酸との塩、または例えばナトリウム塩、カリウム塩等のアル力リ金属塩および例えばカルシウム塩、マグネシウム塩等のアル力リ土類金属塩のような金属塩、アンモニゥム塩、例えばトリメチルァミン塩、トリェチルァミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、ジシクロへキシルァミン塩、 N , N ' 一ジベンジルエチレンジァミン塩等の有機塩基塩等が挙げられる。この明細書の以上および以下の記載においてこの発明の範囲内に包含される種々の定義の好適な例および説明を以下詳細に述べる。

「低級」とは、特に指示がなければ、炭素原子 1ないし 6個、好ましくは 1ないし 4個を意味するものとする。差替え用紙（規貝 IJ26) 好適な「低級アルキル基」としては、メチル、ェチル、プロピル、イソプロビノレ、ブチル、イソブチル、第三級ブチル、ベンチル、へキシル等のような直鎖または分枝鎖アルキル基が挙げられるが、最も好ましいものはメチル基である _c 好適な「アル（低級）アルキル基」としては、例えばトリチル、ベンズヒドリル、ベンジル、フ; ネチル等のアル（低級）アルキル基等のようなアミノ酸およびへプチド化学の分野で使用される常用の基が挙げられる。

好適な「ァミノ保護基」としては、アミノ酸およびペプチド化学の分野で使用される常用の保護基、すなわち、例えばホルミル、ァセチル、プロピオニル、プチリノレ、イソブチリル、ノくレリノレ、イソノくレリル、ヒバロイノレ、へキサノィル等の低級アルカノィル基、例えばメトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ブロボキシカルボニル、ブトキシカルボニル、第三級ブトキシカルボニル等の低級アルコキシカルボニル基等のようなァシル基が挙げられる。本発明の目的化合物（ I ) の製造法を以下詳細に説明する。

目的化合物（ 1 ) またはその塩は、化合物（〗 1 ) またはアミノ基におけるその反応性誘導体またはその塩を、化合物（X I ) またはカルボキシ基におけるその反応性誘導体またはその塩と反応させることにより製造された化合物（X I 1 ) を、さらに化合物（ I V) またはアミノ基におけるその反応性誘導体またはその塩と反応させることにより製造することができる。化合物（ I 〗）または化合物（ I V) のァミノ基における好適な反応性誘導体としては、化合物（ I I ) または化合物（ I V) とアルデヒド、ケトン等のようなカルボニル化合物との反応によって生成するシッフの塩基型ィミノまたはそのェナミン型互変異性体；化合物（ I I ) または化合物（ I V) とビス（トリメチルシリル）ァセトアミド、モノ（トリメチルシリル）ァセトアミド、ビス（トリメチルシリル）尿素等のようなシリル化合物との反応によって生成するシリル誘導体；化合物（ I I ) または化合物（ I V) と三塩化リンまたはホスゲン等との差替え用紙（規則 26) W 01/19848 T 6246

22

反応によって生成する誘導体が挙げられる。化合物（X I ) のカルボキシ基における好適な反応性誘導体としては、酸ハロゲン化物、酸無水物、活性化アミド、活性化エステル等が挙げられる。反応性誘導体の好適な例としては、酸塩化物；酸アジ化物；例えばジアルキルリン酸、フェニルリン酸、ジフエニルリン酸、ジベンジルリン酸、ハロゲン化リン酸等の置換されたリン酸、ジアルキル亜リン酸、亜硫酸、チォ硫酸、硫酸、例えばメタンスルホン酸等のスルホン酸、例えば酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酷酸、ヒバリン酸、ベンタン酸、イソペンタン酸、 2—ェチル酪酸、トリクロ口酢酸等の脂肪族カルボン酸または例えば安息香酸等の芳香族カルボン酸のよ '：)な酸との混合酸無水物：対称酸無水物：ィミダゾール、 4一置換ィミダゾール、ジメチルヒラゾール、卜リアゾールまたはテトラゾールとの活性化ァミド；または例えばシァノメチルエステル、メトキシメチルエステル、ジメチノレイミノメチルエステル、ビエルエステル、ブロパノレギノレエステル、 p—二トロフエニルエステル、 2， 4 ージニトロフエニノレエステノレ、トリクロ口フエニノレステ /レ、ペンタクロロフエ二ノレエステノレ、メシノレフエニルエステノレ、フエニノレアゾフエ二ノレエステル、フエ二ノレチォエステノレ、 p—二トロフエニノレチォエステノレ、 p —クレジノレチォエステル、カルボキシメチノレチォエステノレ、ビラニルエステル、ビリジルエステル、ビべリジルエステル、 8—キノリルチオエステル等の活性化エステル、または例えば N , N—ジメチルヒドロキシルァミン、 1 ーヒドロキシ一 2— ( 1 H ) —ヒリドン、 N—ヒドロキシスクシンイミド、 N—ヒドロキシフタルイミド、 1—ヒドロキシー ] H—べンゾトリアゾ一ル等の N—ヒドロキシ化合物とのエステル等が挙げられる。これらの反応性誘導体は使用すべき化合物（X 】）の種類に従ってそれらの中から任意に選択することができる。反応は通常、水、例えばメタノール、エタノール等のアルコール、アセトン、ジォキサン、ァセトニトリル、クロ口ホルム、塩化メチレン、塩化エチレン、テトラヒドロフラン、醉酸ェチル、 N , N—ジメチルホルムアミド、ピリジンのような常用の溶媒中で行われるが、反応に悪影響を及ぼさない溶媒であれば、その差替え用紙（規則 26) 他のいかなる有機溶媒中でも反応を行うことができる。これらの常用の溶媒は水との混合物として使用してもよレ、。この反応において化合物（X I ) または化合物（X I I ) を遊離酸の形またはその塩の形で使用する場合には、 N， N ' —ジシクロへキシルカルボジイミド； N—シク口へキシルー N ' —モルホリノェチルカルボジィミド； N—シク口へキシルー N ' — （4ージェチルアミノシクロへキシル）カルボジイミド； N， N ' ―ジェチルカルボジィミド N， N ' —ジィソブ口ヒルカルボジィミド； N—ェチルー N' — （ 3—ジメチアミノプロビル）カルボジイミド； N， N ' —カルボ二ノレビス（ 2—メチノレイミダゾール）：ベンタメチレンケテン一 N—シクロへキシルイミン；ジフエニノレケテン一 N—シク口へキシノレイミン；ェトキシアセチレン、】一ァノレコキシ一 ] —クロ口エチレン；亜リン酸トリアルキノレ；ボリリン酸ェチル；ボリリン酸ィソブ口ピル；ォキシ塩化リン（塩化ホスホリル）；三塩化リン；ホスホリルアジ化ジフエニル；塩化チォニル；塩化ォキサリル；例えばク口口ギ酸ェチル、クロロギ酸イソプロビル等のハロギ酸低級アルキル；トリフエ二ルホスフィン； 2—ェチル— 7—ヒドロキシベンズィソォキサゾリゥム塩； 2— ェチルー 5— (m—スルホフエニル）イソォキサゾリゥムヒドロキシド分子内塩；へキサフルォロリン酸ベンゾトリアゾール— 1 一ィル—ォキシ一トリス（ジメチノレアミノ）ホスホニゥム； 1— ( p—クロ口ベンゼンスノレホニノレォキシ）一 6 —クロロー 1 H—ベンゾトリァゾール； N， N—ジメチルホルムアミドと塩化チォニル、ホスゲン、クロロギ酸トリクロロメチル、ォキシ塩化リン等との反応によって調製したいわゆるビルスマイヤー試薬等のような常用の縮合剤の存在下に反応を行うのが望ましい。反応はまた、アルカリ金属炭酸水素塩、トリ（低級）アルキルァミン、ピリジン、 N— （低級）アルキルモルホリン、 N , N—ジ（低級）アルキルベンジルァミン等のような無機塩基または有機塩基の存在下に行つてもょレ、 _c.

反応温度は特に限定されないが、通常は冷却下ないし加温下に反応が行われる。また原料化合物（ I I I ) の製造法を以下詳細に説明する。差替え用紙（規則 26) 化合物（ I 1 〗）またはその塩は、化合物（V I I ) またはカルボキシ基におけるその反応性誘導体またはその塩を、化合物（V I 1 I ) またはイミノ基におけるその反応性誘導体またはその塩と反応させることにより製造することができる化合物（V I I ) および化合物（V I I I ) の好適な塩類については、化合物 ( 1 ) について例示したものを参照すればよレ、

この反応は前記化合物 U) の製造法と実質的に同様にして行うことができ、従つてこの反応の反応方式および例えば反応性誘導体、溶媒、反応温度等の反応条件にっレ、ては前記製造法の説明を参照すればょレ、_c. 上記製造法によって得られた化合物は、粉砕、再結晶、カラムクロマトグラフィー、再沈殿等のような常法により単離、精製することができる。尚、化合物（ I ) およびその他の化合物は、不斉炭素による立体異性体を 1個またはそれ以上含有することがあるが、これらの異性体およびそれらの混合物もすべてこの発明の範囲に含まれる。以下、製造例および実施例に従ってこの発明をさらに詳細に説明する，実施例

製造例 2

乾燥した反応釜に窒素置換後、テトラヒドロフラン（42. 5 】）、（4 R) — 4—ヒドロキシ一 L—ブロリン（ 7. O O k g) 、へキサメチルジシラザン（ 9. 40 k g) 、トリメチルシリルクロリド（ 6. 33 k g) を順次仕込み、內温約 50°Cで約 1時間シリル化反応を行った。反応終了後、窒素気流下 0 - 1 0 °Cまで冷却した。一方、別の反応釜にテトラヒドロフラン（42. 5 1 ) 、 - メチルインドールー 3—力ルボン酸（8. 50 k g) 、ジメチルホルムアミド（ 0. 71 k g) を順次仕込み、窒素気流下 0— 1 0°Cまで冷却した。冷却下、チォニルクロリド（6. 93 k g) を加え、内温 20— 30°Cで約】時間酸クロ化反応を行った。酸クロ反応液を減圧下濃縮乾固し、過剰の酸成分を除去した。析差替え用紙（規則 26) 出した結晶をテトラヒドロフラン（42. 5 1 ) に溶解し、先に調製したシリル化反応液中へ内温 0— 20°Cで滴下した _t 滴下後、 2 0— 30 Cで約 1時間ァミド化反応を行い、次いで、冷却下トリエチルァミン（4. 9 1 k g) を滴下し、内温 20 - 30 Cで約 30分間反応を行った，ァミド化反応終了後、これに ] 0 %クェン酸水溶液（8 5 1 ) を内温 1 0― 3 O'Cを加え、內温 20— 30°Cで 1 2時間以上攪拌した。脱シリル化反応終了後、反応液中のテトラヒドロフラン（約 8 5 1 ) を減圧下濃縮し、内温 20 - 3 ()し'で 1時間以上熟成した析出した結晶を遠心分離器で濾過し、得られた結晶を水（42. 5 1 ) で洗浄し、乾燥して、（4 R) — 4—ヒドロキシー 1 一（ 1 —メチルー 1 H—インドール一 3ィル ) カルボ二ルー L一プロリン（ 1 3. 5 k ) を得た。（収率 96. 5%)

]R (paste) ： 3320, 1730， 1590, 1580, 1210, 1190cm ¹

NMR(DMS()-d_h) ： 1.8-2.3 (2H，m)， 3.65 (Hi, d, .] = 10.8Hz) , 3.7-4.0 (lH,m), 3.85 (3H, s) , 4.3-4.4 (1H, m) , 4.53 (111， t， j=8.5Hz)， 5.09 (1H， d， J=2. Oll'z) , 7.0-7.2 (2H,m), 7.48 (1H, d, J=7.8Hz), 7.91 (lH，s)， 8.05 (1H, d, J-7.8Hz), 12.4 (111, br. s) 製造例 3

乾燥した 3径フラスコに、ジメチルホルムアミド（5 0 m l ) 、 3 - (2—ナフチル）一 L—ァラニン（ 1 0. 0 g) 、ビストリメチルシリスァセトアミド（ 4 7. 5 g ) を順次仕込み、内温約 2 0〜 30 °Cで約 1時間シリル化反応を行レ、、反応終了後、 0〜 1 0°Cまで冷却した ₍.

一方、別の 3径フラスコに、ジメチルホルムアミド（50m l ) 、 N—べンジルー N—メチル— 3— （2—ナフチル） — L—ァラニンアミド塩酸塩（ 1 3. 4 g) 、 N—ヒドロキシベンゾトリアゾール 8. 7 9 g (6 5. Omm o 1 ) を仕込み、内温一 5〜0°Cまで冷却した。冷却下、 1 一ェチル— 3— (3 ' 一ジメチルァミノプロピル）カルボジイミド ·塩酸塩（ ] 0. 7 g) を加え、同温で約 1 時間、活性エステル化反応を行った。この反応液を先に調製したシリル化反応液 (0〜 1 0°C) 中へ内温 0〜 1 0°Cで滴下した。滴下後、 20〜2 5°Cで約 3時差替え用紙（規則 26) 間、アミド化反応を行った。アミド化反応終了後、これに 1 0%クェン酸水溶液 200m lを内温 1 0〜30°Cを加え、内温 20〜30°Cで終夜攪拌（ 1 2時間以上）を行ったい脱シリル化反応終了後、更に反応液中へ 1 0%クェン酸水溶液 1 00m l , メタノール 50m lを加え、内温 2 0〜 30 Cで ]時間以上熟成した、.

析出した結晶を濾取し、濾過した結晶は、 1 0 %メタノール水溶液 1 00 m 1 にて洗浄し、 WET結晶を乾燥し、 N— [； (4 R) 一 4ーヒドロキシ— 1 — ( 1 —メチル- - 1 II一インドール— 3—ィル）カルボ二ルー L一プロリル] 一 3 ( 2—ナフチル） — L—ァラニン（2 1. 4 g) を得た,. （収率 9 5. 0%) Ή-NMlUD SO-d,, 200MHz) ：

1.8-2.1 (211, m), 3.0-3.3 (2H,m)， 3.65 (111, d, J=10.8), 3.84 (3H, m),

3.7-1.0 (IH'm), 4.2-4.4 (1H, m) , 4.52 (IH, q, J=7.7), 4.72 (1H, tr, J=7.6), 4.97 (1H, d,J=3.3), 7.0-7.3 (2H， m) , 7.3-7.6 (4H, m) , 7.7—7.9 (5H, m) , 8.06 (1H, d, J=7.5), 8.2-8.4 (1H, m) , 12.6 (111, br)

mass[M+H] ： 486

IR (paste, cm ' ) ： 3280, 1475, 1652, 1238 実施例 3

3径フラスコにジメチルホルムァミド（ 1 00m l ) 、 N— [ (4 R) — 4— ヒドロキシ一 1 一（】一メチル一 1 H—インドール一 3—ィノレ）カルボ二ルー L 一プロリル] 一 3— (2—ナフチル）一 L—ァラニン（2 0. 0 g) 仕込み、內温 0〜 5。Cまで冷却し、冷却下、内温 0〜 1 0°Cで N—メチルベンジルァミン（ 1 5. 0 g) 、ジフエニルホスホリルアミド（34. 0 g) を加え、同温で約 4 時間アミド化反応を行った。

反応終了後、反応液にァセトン 1 50m 1、市水 4 00 m 1を加え、内温 1 0 〜2 0°Cで終夜攪拌し、結晶を析出させた。その後、更に内温 0〜5 Cまで冷却、 1時間以上熟成する。析出結晶を濾過し、結晶は 30%アセトン水溶液 2 00 m 1 で洗浄する。得られた WET結晶を酢酸ェチル 2 00m l で内温 7 5〜80 °C (還流）で溶解後、内温 2 0〜30°Cまで冷却し、結晶を析出させた。更に内差替え用紙（規則 26) 温 0〜5°Cで]時間以上熟成後、析出結晶を濾過し、濾過した結晶は酢酸ェチル 200m lにて洗浄した _c

WET結晶を真空乾燥機にて乾燥後、粗 — [ (4 R) —4ーヒドロキシ— ] — ( 1 —メチル— 1 H—インド一ルー 3 -ィル）カルボニル— L一プロリル] —N—ベンジル— N—メチルー 3— （2—ナフチル） — L—ァラニンアミド結晶 ( 1 8. 2 g) として得た

3径フラスコにェタノール 54m lを仕込み、內温 40〜 5 5 ^JCまで昇温し、上記粗結晶（ 1 8. 0 g) を仕込み懸濁した懸濁後、さらに內温 55〜651：まで昇温し、溶解した, 溶解確認後、内温 2 0〜 3 5 "Cまで冷却し、 0. 45 mのカートリックフィルタ一にて清澄濾過するフラスコ等はエタノール（ 1 8 m l ) で洗浄した。別のフラスコに、し^;ド水（64 8m l ) を仕込み、內温 2〜 1 o :まで冷却した。冷却後、先の清澄濾過液と洗液を同温で〗時間以内に滴下し、晶析した。滴下終了後、內温 2〜】 0"じで5〜] 0分間熟成した後攪拌を停止した。

析出した結晶を濾過機で濾過し、濾過した結晶は、 U F水（90m l ) にて洗浄した。 WET結晶を真空乾燥機にて乾燥後、精 N²— [ (4 R) 一 4—ヒドロキシ― 】 — （ 1 一メチル— 1 H—インドールー 3—ィル）カルボニル一 Lーブロリル] 一 N—ベンジル— N—メチル一 3— (2—ナフチル）一 Lーァラニンアミドの無晶形粉末（1 6. 2 g) を得た。（収率 7 3. 5%)

1 H-NMR (DMS0- d_h, 200MHz) ：

1.6-2.2 (2H，m), 2.81 (3H, s) , 2.9-3.4 (2Η, m), 3.69 (1Η, d) , 3.71-4.1 (lH,m )， 3.85 (3H, s), 4. ]-4.4 (2H，m), 4.49 (111, d) , 4.6—4.9 (lH,m)， 5.05 (IH'd) ， 5.0-5.2 (lH,m), 6.88 (2H, d) 6.9-7.3 (6H, m) , 7.4-7.6 (3H,m), 7.6-8.0 (5 H, m), 8.11 (1H， d), 8.54 (】H， d)

mass [M*H] ： 589

IR (paste, cm-¹) ： 3310, 3050, 1639, 1597, 1531, 1246, 1126, 1080, 821,748,700 参考例 2— ( 1 )

3— (2—ナフチル）一 Lーァラニン（2. 0 g) の水（30m l ) とァセト差替え用紙（規則 26) ン（3 0m l ) との混合溶媒中懸濁混合物に、トリェチルァミン（ 1. 94m i ) を氷冷下に加える。溶液にジ炭酸ジ—第三級ブチル（2. 4 3 g) のアセトン ( 1 0m l ) 溶液を加え、溶液を同温で 2時間、室温でさらに 2時間攪拌し、この間にジ炭酸ジー第三級ブチル（0. 4 g) を加える。アセトンを留去後、水（ 50m l ) を加え、水溶液を酢酸ェチルで]回洗浄する。次いで水層を 6 N塩酸を加えて酸性にして ρΠ 2とし、酢酸ェチルで抽出するし抽出液を塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥する.，溶媒を留去後、残渣をジイソプロビルェ一テルと η—へキサンとの混合溶媒から結晶化させ、濾取、乾燥して

、 Ν—第三級ブトキシカルボ二ルー 3— (2—ナフチル）一 L—ァラニン（2. 46 g) を得る

IR (ヌシ、ヨール）： 3390, 1720, J 690, 1520, 127Ί, 1250, 1170 cm ¹

NMR(DMS()-d , δ) ： 1.28 (9Η, s) , 3.00 (】H, d οί' ABq, , 13.7Hzおよび 10.1Hz) , 3.20 (川， d, οί' ABq, J=I3.7Hzおよび 4.7Hz)， 4.20 (1H, m) , 7.16

(1H, d, J=8.5Hz), 7.4-7.6 (3H, m)， 7.7-7.9 (lH'm) 参考例 2— （2)

N—第三級ブトキシカルボニル— 3— (2—ナフチル）一 Lーァラニン（ 1 . 34 g ) 、 N—メチルベンジルァミン（ 0. 4 9m l ) および N—ヒドロキシべンゾ卜リアゾール（ 0. 5 1 g ) の塩化メチレン（3 0m l ) 氷冷溶液にーェチルー 3— (3 ' —ジメチルアミノブ口ピル）カルボジイミド '塩酸塩（0. 9 5 g) を加える。溶液を同温で 1時間、室温で一夜攪拌する。溶媒を留去後、反応混合物を酢酸ェチルで抽出し、有機層を順次水および炭酸水素ナトリゥム水溶液、 0. 5 N塩酸、水および塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥する。溶媒を留去して N² —第三級ブトキシカルボニル— N—ベンジル— N—メチル— 3— (2—ナフチル） — L—ァラニンアミド（1. 74 g) を油状物として得る。

IR(CHCl_:i) ： 3300， 1710, 1640，】490, 】 170cm— ¹

NMR(DMS0-d_e, δ ) ： 1.22および 1.32 (9H，s)， 2.76および 2· 87 (3Η, s) , 2.9-3.2 (2Η, m)， 4.6-4.8 (3Η, m) , 6.9—8.0 (13H,m) 差替え用紙（規則 26) 参考例 2— (3)

N²—第三級ブトキシカルボ二ルー N—ベンジル— N—メチルー 3— （2—ナフチル） — Lーァラニンアミド（ 1. 74 g) の塩化メチレン（ 1 7m l ) 氷冷溶液に 1， 4一ジォキサン中 4 N塩化水素（1 7m l ) を加える。溶液を同温で 5分間攪拌する。次いで冷却浴を取除き、溶液を室温で半時間攪拌し、この間 1 ， 4一ジォキサン中 4N塩化水素（8. 4m l ) を溶液に加える。溶媒を留去後、残渣をジィソブロビルエーテルで粉砕して濾取し、水酸化ナトリゥムで真空乾燥して N—ベンジル一 N—メチルー 3— (2—ナフチル） — L—ァラニンアミド塩酸塩（ 1. 54 g) を得る：

Mp ： 141- 145°C

IR (ヌシ "ヨール）： 3320, 2700, 1660, 1605, 1 80, 】-'195, 1280cm ¹

NMR(DMS0-d_H) δ) ： 2.65および 2.7〗 (311, s) , 3.1-3.4 (2H， m)， 4.09, 4.59および 4.35,4.56 (2H，二組の ABq, j=16.2Hzおよび 1'1·9Ηζそれぞれ）， .7-4.8 (111, m), 7.0-7.25 (5H, m) , 7.35-7.6 (3H, m) , 7.8-8.0 (4H, m) , 8.51 (311, s) 参考例 2— （4)

N—べンジルー N—メチル— 3— （2—ナフチル） — Lーァラニンアミド塩酸塩（1 . 5 g) 、 1 一第 3級ブトキシカルボ二ルー（4 R) — 4ーヒドロキシ— L一プロリン（0. 9 8 g) およびヒドロキシベンゾトリアゾール（0. 5 7 g ) の塩化メチレン（40m l ) およびジメチルホルムアミド（5m l ) の混合溶媒中氷冷溶液に N—ェチルー Ν' — （3—ジメチアミノブ口ピル）カルボジイミド（0. 7 7m l ) を加えた。溶液を同温で 1時間、室温で一夜攪拌した。溶媒を留去した後、反応混合物を酢酸ェチルで抽出し、有機層を順次炭酸水素ナトリゥム水溶液、水、 0. 5 N塩酸、水および塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去した後、残渣をシリカゲルカラム（7 5 g ) で精製し、クロ口ホルムとメタノールとの混合溶媒（50 ： 1 ) で溶出して、 N² - [ 1一第 3級ブトキシカルボニル— （4 R) — 4—ヒドロキシ— L—プロリル] 一 N—ベンジル一 N—メチルー 3— （2—ナフチル）一 L—ァラニンアミド（ 1 . 74 g) を無定形固体として得た。（収率 7 7. 3%) 差替え用紙（規則 26) 参考例 2 (5)

N² - [ 1—第 3級ブトキシカルボニル— （4R) —4—ヒドロキシ—しーブ口リル] 一 N—べンジルー N—メチルー 3— (2—ナフチル）一 Lーァラニンァミド（1. 07 g) の塩化メチレン（】 1 m l ) 氷冷溶液に 1， 4—ジォキサン中 4 N塩化水素（ 8. 2m l ) を加える溶液を同温で 5分間、室温で 55分間攪拌する，溶媒を留去後、残渣をジイソプロビルエーテルで粉砕し、濾取、乾燥して、 — [ (4 R) ー4ーヒドロキシ一し一プロリル] — N—ベンジル— N —メチル— 3— （2—ナフチル）一しーァラニンアミド塩酸塩（0. 90 g) を得た,. （収率 95. β %) 参考例 2— (6)

] —メチルインドール— 3—力ルボン酸（0. 33 g) 、 N' - [ (4 R) 一 4ーヒドロキシ— L—ブロリル] 一 N—ベンジル一 N—メチル— 3— （2—ナフチル） — Lーァラニンアミド塩酸塩 (0. 88 g) およびヒドロキシベンゾトリァゾール（0. 25 g) の氷冷溶液に N—ェチル—N' ― (3—ジメチアミノフ口ビル）カルボジィミド（0. 34m l ) を加えた。溶液を同温で】時間、室温で一夜攪拌した。溶媒を留去した後、反応混合物を酢酸ェチルで抽出し、有機層を順次炭酸水素ナトリゥム水溶液、水、 0. 5 N塩酸、水および塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去した後、残渣をシリ力ゲルカラム（50 g) で精製し、クロ口ホルムとメタノールとの混合溶媒（5 0 : 1 ) で溶出する。所望の化合物を含む画分を集めて溶媒を留去した。次いで残渣を酢酸ェチルから結晶化させ、濾取、乾燥して、 N²— [ (4 R) _4ーヒドロキシー 1— ( 1ーメチルー 1 H—インドールー 3—ィル）カルボ二ルーし— ブロリル] 一 N—ベンジルー N—メチル一 3— (2—ナフチル） —L—ァラニンアミド（ 0. 66 g ) を得た。（収率 59. 5 %) 発明の効果

この発明の製造方法は、上記のように構成されており、タキキニン拮抗作用な

差替え用紙（規則 26) どの薬理活性を有するぺブチド化合物またはその塩を、従来法に比べて少ないェ程数で収率よく製造することができた。また、反応試剤として塩化メチレンを使用しなくてすみ環境面での問題もないという効果も奏する。

差替え用紙（規則 26)