WO2001019324A1

WO2001019324A1 - Cosmetiques

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Publication number: WO2001019324A1
Application number: PCT/JP2000/004223
Authority: WO
Inventors: Isao Horiuchi
Original assignee: Isao Horiuchi
Priority date: 1999-09-14
Filing date: 2000-06-28
Publication date: 2001-03-22
Also published as: EP1132074A1; JP3533427B2; EP1132074A4

Description

明細書化粧料技術分野

本発明は、化粧料に関する。さらに詳しくはシミ、ソバカス、ほくろなどを除去することのできる化粧料に関するものである。背景技術

従来、シミ、ソバカスなどの色素沈着症の治療法としてはァスコルビン酸の内服が知られ、化粧料としても安定化剤を配合して使用することが知られている（特公昭 5 4 — 9 7 4号公報、特公昭 5 5 — 4 3 4 4 3号公報等）。また、ハイドロキノンがシミ、ソバカスなどの治療に有効であることが知られているが、ハイドロキノンも熱、空気等の対し不安定であるため、皮膚中でハイドロキノンに変化するアルブチンを配合した皮膚外用剤（特開昭 6 0 一 1 6 9 0 6 号公報等）やハイドロキノン誘導体にコウジ酸を配合した漂白化粧料（特公昭 3 2 — 8 1 0 0 号公報）が公知になっている。その他、動物臓器から抽出した化粧料（特開昭 6 3 - 8 3 1 2号公報他）、発酵乳ケフィァのスターターであるケフィァ粒から分離したサッカロマイセス属酵母の培養液を配合した化粧料（特開平 7 — 1 0 7 3 4号公報）などが提案されている。

また、乳酸菌を利用した化粧料として、紫外線照射時に発生する皮膚紅斑の予防治療用としてラクトバチルス属の菌体またはその細胞壁成分を含有する化粧料（特開平 5 - 1 7 3 6 3号公報）、紫外線照射時の皮膚の着色抑制のためにォゥゴンエキス等の生薬エキスと乳酸菌発酵液を含有する皮膚外用剤（特開平 5 — 2 3 8 9 2 5 号公報）が知られ、また、メラニン生成を抑制するため、ケフィァ粒から分離したラクトバチルス属乳酸菌の菌体抽出物を配合する化粧料（特開平 5 — 1 6 3 1 3 4号公報）等が提案されている。

しかしながら、従来の化粧料は十分なシミ、ソバカスの除去効果を有しないものやシミ、ソバカスの形成を抑制するものが多く、十分な除去効果を有する化粧料の開発が待たれていた。

そこで本発明は、シミ、ソバカスなどの除去効果に優れた化粧料を提供することを目的とする。発明の開示

本発明に係る化粧料は、プロテア一ゼおよび乳酸菌の培養上清を配合したことを特徴とする。

また、本発明の別の態様は、前記プロテアーゼがパパインであることを特徴とする。

また、本発明の別の態様は、前記プロテア一ゼがブロメラインであることを特徴とする。

また、本発明の別の態様は、前記プロテア一ゼがァガリクス ' ブラゼィ - ムリル由来のプロテアーゼであることを特徴とする。

また、本発明の別の態様は、前記プロテアーゼがマイタケ由来のプロテァーゼであることを特徴とする。

また、本発明の別の態様は、前記プロテアーゼが納豆菌由来のプロテアーゼであることを特徵とする。

また、本発明の別の態様は、前記乳酸菌がケフィァ発酵用乳酸菌であることを特徴とする。

また、本発明の別の態様は、水、グリセリンおよびコロジオンからなる群から選ばれる 1 種または 2種以上をさらに配合したことを特徴とする。かかる構成によって、上記のようなプロテアーゼの酵素作用を利用することで色素の沈着した古い皮膚細胞および死細胞が分解され、シミ、ソバカス、ほくろなどが除去される。発明を実施するための最良の形態

以下、本発明の化粧料をより詳細に説述する。

本発明において、プロテアーゼとしては、パパイン、プロメライン、フイシンなどの植物由来のもの、ペプシン、トリプシン、キモトリブシン、レンニンなどの動物由来のもの、担子菌ゃ微生物などの菌類由来のプロテァーゼを挙げることができる。担子菌としては、例えば、ァガリクス · ブラゼィ - ムリル（Agaricus b 1 aze i Mur i 1 ! ¾ ¾ % ¾ (Gri fola f rondosa) , ホンシメジ ( Tr i cho 1 oraa c o ng 1 o b a t um) , シィタケ ( Len t i nus edodes ) , 力バノアナタケ ( Fuscopor i a ob 1 i qua) , メシマコブ ( Phe 1 I i nus l inteus)、ハナビラタケ ( Sparass i s c r i spa) , ャマブシタケ ( Aer i c i um er i naceum) を挙げることができる。これらの担子菌の子実体および菌糸体に含まれるプロテアーゼが使用できる。菌糸体は栽培した子実体を収穫した後の廃床中にも存在し，これも利用できる。微生物としては納豆菌（Baci l lus nat to), 枯草菌（Bac i l lus subt i l is) が挙げられる。

これらのプロテアーゼのなかでも、パパイン、ブロメライン、ァガリクス · ブラゼィ · ムリル由来、マイタケ由来のプロテア一ゼおよび納豆菌由来のプロテアーゼが好ましく使用できる。パパイン、ブロメラインは食品分野で広く用いられており、ァガリクス ' ブラゼィ ' ムリルは健康食品に、さらに、マイタケも生を食用に、乾燥物を健康食品に使用されており、納豆菌は日本古来の食品である納豆の製造に利用されているように、これらは安全性にすぐれており、好ましい。この中で、パパインはパパイヤの果実の乳汁に含まれる蛋白分解酵素であり、ブロメラインはパイナップルの果実の表皮や果肉に含まれる蛋白分解酵素であり、これらは市販されている。本発明にはこれら市販のものを使用することができる。プロテア一ゼは 2 種以上を併用してもよい。ァガリクス · ブラゼィ · ムリルは、ブラジルサンパゥロ市の郊外ピエ口ダーテを原産地とするハラ夕ケ属茸の一種であり、同属茸であるマツシュルーム（Agaricus bisuporous) に似た白色の釣鐘状の子実体を有する。近年、ァガリクス · ブラゼィ · ムリル由来の多糖体がマウス等の細胞組織内でマクロファージゃイン夕一フエロンを活性化する能力を有し、ウィルスの細胞への侵入を防ぐ力も大きいことが知られ、ガンの免疫療法への応用が提案され、また、子実体由来の蛋白多糖体、または核酸成分を抗腫瘍剤として利用することが提案されたこともあって、広く栽培されるようになってきている。

マイタケは、ミズナラ、ブナ、シィなど主にブナ科の大木の根元に、扇形、へら状のかさが多数重なりあって巨大株となって発生し、極めて香りがよく、美味で、一級の食用茸とされている。近年、乾燥品が健康食品として加工され、各地で栽培されるようになってきている。

本発明において、ァガリクス · ブラゼィ · ムリル由来およびマイタケ由来のプロテアーゼは、一般に栽培されたものでも、もちろん野生のものから抽出されたものでもよい。茸のプロテアーゼは、一般に至適 P H 4付近のものと p H 7 付近の I 種類のアイソザィムが知られており、それらの p Hのバッファーで抽出するのがよい。例えば、 P H 4付近ではクェン酸— クェン酸ナトリウムノ'ッファー、 P H 7 付近ではリン酸 1 ナトリウム— リン酸 2 ナトリウムバッファーを、子実体および/または菌糸体重量の、例えば、 1 〜 2 倍量、抽出溶媒として用い、子実体および Zまたは菌糸体を共にミルなどに入れて破枠して抽出するとよい。破枠後、固形分を分離して抽出液を凍結乾燥した後、精製し、プロテアーゼとして用いる。未精製のものもプロテアーゼとして使用できる。しかし、プロテアーゼの抽出法はこれに限定されず、一般の酵素の抽出法により行うことができる。

本発明者らは、上記例示の抽出法により得られたプロテアーゼの活性を担子菌に含まれるプロテアーゼ測定法（小崎道雄監修、酵素利用ハンドブック、地人書館、第 2 0 7頁（ 1980)) により測定した。具体的には'、子実体 2 0 0 g と抽出溶媒（共に、 0 . 1 M ) 2 0 0 ml とをミルに入れて 5分間、 2 回破砕して抽出後、濾過して得られたろ液のプロテアーゼ活性を測定した。、測定結果によると、ァガリクス ' ブラゼィ ' ムリルの子実体からの PH4.0 抽出プロテア一ゼの活性は 46.9 単位/ mし pH7.0 抽出プロテア一ゼの活性は 82.4 単位/ ml であった。同様にして抽出されたマイタケの子実体由来のプロテアーゼの活性は、 PH7.0 抽出 505. 1 単位/ ml であり、同時に測定したパパイン（和光純薬（株）製、 188-00171 ) は 117.6 単位/ ml であつた。

なお、この測定法は、 3 0 °Cに保温した基質（ 0 . 5 %カゼイン） 5 ml に、プロテアーゼ液 1 ml (パパイン粉末は lmg/ml)を加え、 1 0分間反応させ、 1 分間に 1 g のチロシン相当量を T C A可溶性とする酵素力価をもつて 1 単位とするものであり、具体的には、酵素反応による吸光度の増加値に 1 4 9 をかけて算出する。

納豆菌由来のプロテアーゼは、ナツトウキナーゼと呼ばれることがあり、これは強い血栓溶解作用を有し、心筋梗塞や脳梗塞等の血栓症の治療ゃ予防に応用できるといわれている蛋白分解酵素である。本発明者らの実験によると、腕のシミ（死細胞）に塗布したところ、数日でシミが小さくなり、色も薄くなるなど高い溶解効果を示した。本発明の化粧料の成分として、強力かつ安全なものの一つである。

本発明の化粧料においては、上記のようなプロテアーゼにより色素の沈着した古い皮膚細胞および死細胞が分解され、シミ、ソバカス、ほくろなどが除去されるものであり、プロテアーゼの酵素作用を利用するものである。

乳酸菌は、菌形態により球菌と桿菌に分けられるが、球菌にはストレブトコッ力ス（Streptococcus) , ロイコノス卜ック（Leuconos toc)、ベジオコッカス（Pediococcus)が含まれ，桿菌にはラクトバチルス（Lactobaci l lus) , ビフィドバクテリゥム（Bi f idobacterium)が含まれる。本発明には上記の属のいずれの乳酸菌も含まれ、遺伝子組換法によって得られる組換乳酸菌、人工的に変異を誘発して得られる乳酸菌変異体などの非天然型の乳酸菌も包含されるものとする。好ましい乳酸菌はヒ卜や他の動物に対して病原性を持たないものであり、発酵乳製品、発酵肉製品、醸造製品、発酵豆乳、漬物などの食品類の製造に使用される市販の乳酸菌である。そのような乳酸菌は、例えば、 Chに Hansen' s 社から市販され入手可能である。

本発明で使用できる乳酸菌の例として、例えば、ストレプトコッカス属の例としては、ストレプトコッカス - サ一モフィラス（ Streptococcus thermoph i 1 us) , ス卜レフトコッカス ' ラクチス (Streptococcus lact is)、ストレプトコッカス . ラクチス亜種ジァセチラクチス（ S eptococcus 1 act is subap. d i ac e t i 1 ac t i s )などが挙げられる。ロイコノストック属の例としては、ロイコノストック ' クレモリス（Leuconostoc cremoris) 、ロイコノストック . ォエノス（ Leuconos toe oenos)などが挙げられる。ぺジォコッカス属の例としては、ベジオコッカス · セレビシァェ（Pediococcus cerevis iae) 、ペンォコッカス ' ァシシラクナシ ( Pediococcus acidi lac t ic i) 、ぺジォコッカス - ペントサセウス ( Pediococcus penntosaceus) , ぺジォコッ刀ス · /ヽロフィラス (Pediococcus halophi lus) , ぺジォコッ力ス .' ゥリナエーェクイ（Pediococcus urinae— equi)など力挙げられる。

また、ラクトバチルス属の例としては、ラクトバチルス ' デルブルエキ

( Lactobaci l lus del bruecki) 、ラクトバチルス · ロイクマニイ

(Lac tobac i l lus leichmanni i)、ラク卜ノチノレス · ラクチス (Lactobaci l lus lact is) 、ラクトノ、チルス ' ブルガリカス（Lactobaci l lus bulgaricus) 、ラクトノ ^；チルス · ヘルべチカス（Lactobaci l lus he 1 ve t i cus) 、ラクトバチノレス · ファーメンチュム (Lactobaci l lus f ermen turn) , ラクトハ'チレス · ブレビス（ Lactobac i 1 lus b rev is) 、ラクトノチルス ' ピリデッセンス ( Lac tobac i 1 l us vi r idescens)などが挙げられる。ビフィドバクテリゥム属の例としては、ビフイドバクテリゥム ' ロンガム（ Bi f i dobac ter ium l ongum) 、ビフィドバクテリゥム ' ビフイデュム（Bi f idobac ter ium bi f idum)、ビフィドノクテリゥム ' ブレビ（Bi f i dobac ter ium breve)、ビフィドノ、クテリゥム ' インファンチス（Bi f i dobac ter ium infant i s) などが挙げられる。

これらの乳酸菌のうち、好適な例として、発酵乳ケフィァの製造に用いられる乳酸菌を挙げることができる。ケフィァは長寿国として知られるコ一カサス地方の入々の健康を支えてきたといわれている発酵乳であり、そのスター夕一はケフィァ粒と称されており、これには、前記、ストレプトコッカス · ラクテイスおよびラクトバチルス · ブルガリカスの乳酸菌が含まれている。

本発明における乳酸菌の培養上清は、前記例示のような乳酸菌培養液の上澄み液であり、乳酸菌を培養し、得られた培養液から菌体を除去することによって得ることができる。

乳酸菌の培養には、特に制限はなく、乳酸菌が十分に増殖できる条件であればいずれの培養方法によることもできるが、乳酸菌の種類に応じて、培地、温度、 P H、培養時間等の条件が変化しうる。培養条件および培養方法については、例えば、 Bergey' s Manual of Determinat ive Bac ter i ology (第 8版、 1 9 7 4年）やメーカーにより提供される市販乳酸菌の使用説明書に記載されるものを使用できる。

培地成分としては、例えば、乳清（ホエイ）、グルコース、ラクト一ス（乳糖）、ペプトンなどの炭素源、窒素源の 1 つまたはそれ以上を任意に組み合わせて用いることができる。ホエイに代えて牛乳、山羊乳、人乳などの動物乳も用いることができる。培養温度は、菌の種類によって異なる力通常知られている温度（約 2 0 〜 4 5 °C) である。耐熱性の乳酸菌の場合には、それより高い温度で培養できる。また、培養時間は数時間〜 7 2時間、好ましくは約 1 5 〜約 5 0 時間である。乳酸菌の接種量は培地 1 リットルあたり、 1 0〜： L 0 0 m l の範囲である。

以下に培養条件の一例を示すが、これに限定されるものではない。

ストレプトコッカス属、ロイコノストツク属およびラクトバチルス属の乳酸菌の場合、 M R S培地（Difco 社市販）で 3 0 ~ 3 7 °C、 p H 6. 8、

2 4〜 4 8時間で培養することができる。ベジオコッカス属乳酸菌の場合、

M R S培地に 1 〜 3 %塩化ナトリウムを添加したもので、 3 δ ~ 4 0 ：、 p H 6 . 8 、 2 4〜 4 8時間で培養することができる。

ビフィドバクテリゥム属乳酸菌の場合、 B L培地（和光純薬（株）市販）もしくは E G培地（メルク社市販）で 3 0 〜 3 7 °C、 p H 7 〜 8 、 2 4 〜

4 8時間、嫌気的条件下で培養することができる。

本発明の具体例によれば、乳清と乳糖（例えば、各々 1 0 %、 5 % ) を含む培地に乳酸菌を接種し、 3 5 〜 3 7でで約 2 4時間、静置または振盪培養を行い、培養後、培養液を遠心分離、濾過等の分離手段を用いて菌体を取り除き、培養上清を回収することができる。

乳酸菌の培養上清は、プロテアーゼの酵素作用、すなわち細胞分解作用を調整して生細胞を安定化し、いわばバッファー効果を奏する。また、乳酸菌の培養上清中には培地および発酵生産物としてビタミン類、ミネラル等の各種栄養分が含まれており、これらを皮膚に補給し、保湿効果を与え、生細胞を賦活し、さらには皮膚細胞の新生を促す効果も奏する。

本発明の化粧料においては、化粧料全量中に、プロテアーゼ 0 . 1 ~ 5 重量％、乳酸菌の培養上清 1 〜 5 0 重量％が配合されることが好ましい。プロテアーゼの配合量が 0 . 1 重量％未満では酵素作用が不十分であり、一方 5 重量％を超えると酵素作用が強すぎ生細胞を損傷する。また、乳酸菌の培養上清が 1 重量％未満ではバッファー効果が十分でなく、一方、上限は特にないが、 5 0重量％を超えるとその効果が飽和するのでこの量で十分である。さらに好ましくは、プロテアーゼの配合量は、パパインの場合、 0 . 2 〜 2 重量％、プロメラインの場合， 0 . 1 ~ 1 重量％、ァガリクス . ブラゼィ * ムリル由来、マイタケ由来および納豆菌由来のプロテアーゼの場合 0 . 1 〜 4 重量％であり、乳酸菌の培養上清は 5 〜 2 5 重量％である。

本発明の化粧料を製剤化する場合、プロテアーゼおよび乳酸菌の培養上清を皮膚に塗布する場合の濃度調整のため、それらを水または水一アルコール混液に溶解して 1 0 0 重量％とし、液状の形態の化粧料とすることができる。または、水に代えてワセリン等の化粧品用基剤を用い、クリーム状等の形態にすることもできる。 '

化粧品用基剤としては、前記ワセリンの他、例えば、流動パラフィン、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビ夕ンモノステアレート、セトステアリルアルコール、吸着精製ラノリン、メチルパラバンなど、通常化粧品基剤として知られたものを挙げることができる。

さらに、皮膚に塗布する場合の媒体として、グリセリンを配合することにより保湿効果を、またコロジオンを後から添加することによりコロジォンが皮膜を形成し、皮膚表面に本発明の化粧料を定着させ効果を上げることができる。さらには，美白剤として通常知られているァスコルビン酸を添加してもよい。これらは通常.化粧料に配合される量配合すればよく、一般にグリセリンは 1 〜 2 0 重量％、コロジオンは局所に皮膜の欲しいときに 1 〜 2滴（約 0 . 2 m l Z l 0 0 m l ) である。

上記、水、グリセリン、コロジオンおよびァスコルビン酸はいずれか 1 または 2 以上をプロテアーゼおよび乳酸菌の培養上清と混合して化粧料とすることができる。

また、本発明の化粧料が液体や乳液の場合にはメチルパラベンやェチルパラベン等を保存料として配合し、クリームの場合にはェチルパラベンやプロピルパラベン等を保存料として配合することができる。保存料としてはその他にも安息香酸、ソルビン酸、プロピレングリコールなどを用いることができる。配合量としては、ノラベン類は 0 . 1 ~ 3 重量％、安息香酸やソルビン酸は通常 0 . 5重量％以下、そしてプロピレングリコールは 3 〜 4 0重量％である。

本発明の化粧料は、上記のとおり、溶液またはクリーム等の形態とすることができ、老人性シミなどのシミ、ソバカス、ほくろなどの色素の沈着した皮膚に適量を 1 日に数回塗布すると、経日的に皮膚の色が薄くなり、またはソバカスが徐々に縮小し、数日〜十数日程度で、シミゃソバカスを除去することができる。なかでも、老人性シミは死細胞であるため生細胞に比べ酵素による分解を受け易く、より効果的に除去される。

【実施例】

以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。なお、実施例中，％は重量％である。

参考例 1 (乳酸菌培養上清の製造）

5 リツトル容の三角フラスコに 4 リットルの蒸留水を入れ、これに 1 0 % のホエイパウダー（明治乳業（株）製）および 5 %の乳糖を添加したものに、 0. 1 %のケフィァ発酵用乳酸菌（Chr. Hansen' s 社市販）を接種し、 3 7 °Cで 2 4 時間、静置培養した。得られた培養液の p Hは 4 . 0 であつた。この培養液を遠心分離して上清を分離し、下記実施例の化粧料用に培養上清として用いた。

実施例 1

参考例 1 で得られた培養上清 5 0 g に、グリセリン（試薬 1 級） 3 5 g を加え、攪拌後、 0 . 5 g のパパイン（ 164-00172 、和光純薬（株）製）を溶解し、 1 5 gの蒸留水を加え、攪拌して得た液状化粧料を、 A〜（：の手の甲のソバカス部分（表中、検体）（注： A、 Bは成人男性、 Cは成人女性）に 1 日 3 〜 4 回塗布したときの結果を表 1 に示す。結果はソバカスの大きさをノギスで測定し（単位： m m )、その変化で示す。表 1 から、ソバカスが次第に小さくなり、 7 〜 1 0 日後には消失したとがわかる。

【表 1 】

実施例 2

パパインに代えてプロメライン（和光純薬（株）製） 0 . 5 g を溶解するほかは実施例 1 と同様にして得た液状化粧料を、 D 〜 Fの手の甲のソバカス部分（注： D 、 Eは成人男性、 F は女性）に 1 日 3 〜 4回塗布したときの結果を表 2 に示す。

【表 2】

実施例 3

パパイン 0 . 5 gに代えて、ノ、。パイン 0 . 2 5 gおよびブロメライン 0 . 2 5 g を溶解するほかは実施例 1 と同様にして得た液状化粧料を、 G 〜 I の手の甲のソバカス部分（注： G 、 Hは成人男性、 I は女性）に 1 日 3 ~ 4回塗布したときの結果を表 3 に示す,

【表 3】

実施例 4

参考例 1 で得られた培養上清 3 0 g に、グリセリン 2 0 g を加え、攪拌後、 1 . 0 g のパパインを溶解させ、 5 0 gのハンドクリーム（カネボウ S I L Kハンドクリーム）を加え良くかき混ぜて得られたクリーム状化粧料を、 J 〜 L の手の甲のソバカス部分（ J 、 Kは成人男性、 L は女性）に 1 日 3 〜 4回塗布したときの結果を表 4 に示す。

【表 4】

実施例 5

パパイン 1 . O g に代えてプロメライン（和光和光純薬（株）製） 1 .

0 g を溶解するほかは実施例 4 と同様にして得たクリーム状化粧料を、 M

〜 0の手の甲のソバカス部分（注： M、 Nは成人男性、 Oは女性）に 1 日 3〜 4回塗布したときの結果を表 5 に示す

【表 5】

実施例 6

パパイン 1 . O g に代えて、パパイン 0 . 5 gおよびブロメライン 0 . 5 g を溶解するほかは実施例 4 と同様にして得たクリーム状化粧料を、 P 〜 Rの手の甲のソバカス部分（注： P 、 Qは成人男性、 Rは女性）に 1 日 3〜 4回塗布したときの結果を表 6 に示す。

【表 6】

実施例 7

実施例 1 で用いた液状化粧料（パパイン 0 . 5 g含有）を、 1 3 のの甲のシミ部分（ 1 、 2 は 6 0才台男性、 3 は 5 0 才台女性）に 1 日 1 回塗布したときの結果を色度の変化（目視により観察）により、表 7 に示す【表 7】検体塗布前 3 曰後 7 曰後 10日後

1 4.3x 4.0 + + + +

2 4.0 3.2

3 2.5x 2.8

注：表中、 +++ は色の濃さが変わらない、 ++は少し色が薄くなる、 + は多少色がある、 —は肌の色と変わらないことを示す。

実施例 8

実施例 2 で用いた液状化粧料（ブロメライン 0. 5 g含有）を、 4 〜 6 の手の甲のシミ部分（ 4 、 5 は 6 0 才台男性、 6 は 5 0才台女性）に 1 日 1 回塗布したときの結果を色度の変化により、表 8 に示す。

【表 8】

実施例 9

実施例 3 で用いた液状化粧料（パパイン 0 . 2 5 gおよびプロメライン 0 . 2 5 g含有）を 7 〜 9 の手の甲のシミ部分（ 7 、 8 は 6 0才台男性、 9 は 5 0才台女性）に 1 日 1 回塗布したときの結果を色度の変化により、表 9 に示す。

【表 9】検体塗布前 3 日後 7 曰後 10曰後

7 4.8x 4.3 +

+ + ,

1

8 8.4x 6.8 + + + ^! +

9 2. Ox 1.9 -

実施例 1 0

実施例 4 で用いたクリーム状化粧料（パパイン 1 . 0 g含有）を、 1 0 〜 1 2 の手の甲のシミ部分（ 1 0 、 1 1 は 6 0才台男性、 1 2 は 5 0才台女性）に 1 日 1 回塗布したときの結果を色度の変化により、表 1 0 に示す。【表 1 0】

実施例 1 1

実施例 5 で用いたクリーム状化粧料（ブロメライン 1 . O g含有）を、 1 3 〜 1 5 の手の甲のシミ部分（ 1 3 、 1 4 は 6 0才台男性、 1 5 は 5 0 才台女性）に 1 日 1 回塗布したときの結果を色度の変化により、表 1 1 に示す。

【表 1 1】検体塗布前 3 日後 7 日後 10日後

1 3 4.7x4.0 + + +

1 4 3.6x3.3 + + + +

1 5 6.4x 5.5 + + 4 + + +

実施例 1 2

実施例 6 で用いたクリーム状化粧料（パパイン 0 . 5 gおよびプロメライン 0 . 5 g含有）を、 1 6 〜 1 8 の手の甲のシミ部分（ 1 6 、 1 7 は 6 0才台男性、 1 8 は 5 0才台女性）に 1 日 1 回塗布したときの結果を色度の変化により、表 1 2 に示す。

【表 1 2】

実施例 1 3

参考例 1 で得られた培養上清 1 0 g、グリセリン 1 0 g、パパイン 1 . 0 g、ヮセリン 7 9 g をよく混ぜ合わせてクリーム状化粧料を調製して、手の甲のソバカス部分（ S 〜 U ) に塗布してその変化を測定した。結果を表 1 3 に示す。比較のため、培養上清およびパパインを含まない化粧料についても同様に試験した（ V )。

【表 1 3】検体塗布前 3 曰後 7 日後 10曰後

s 3.4x 3.2 2 2x 2.8 2.2x 2.2 1.2x 1.2 丁 4.0x3.8 3 6X3.0 1.8x 2.8 0

u 3.1 x 2.1 1 8x 1.8 1.2x 1.0 0

V 2.9x 2.9 2 9X 2.9 2.9X 2.9 2.9x 2.9

表 1 3 に見るとおり，ブランクテスト（ V ) では、ソバカスに何の変化も見られないのに対し、本発明の化粧料では経日的に縮小しており、本発明の化粧料の効果がわかる。

実施例 1 4

下記の処方により液状化粧料を調製した（重量比）。

参考例 1 でえられた培養上清 10.0

パパイン 1.0

スクァラン 5.0

ステアリン酸 2.5

セ夕ノール 2.5

自己乳化型モノステアリン酸グリセリン 1.5

ポリオキシエチレンセチルエーテル 1.5

パラベン適量

濃グリセリン 3.5

プロピレングリコール 3.5

精製水にて全量を 100 とする。

香料適量

参考例 2 (ァガリクス · ブラゼィ · ムリル子実体由来のプロテアーゼの製造）栽培後の生のァガリクス · ブラゼィ . ムリルの子実体を水で洗浄し、 2 種類のバッファー、すなわち、 PH4.0 (酸性プロテアーゼ抽出用、 0.1M クェン酸— クェン酸ナトリウムバッファー）、 pH7.0 (金属プロテアーゼ抽出用、 0. 1 M リン酸— リン酸ナトリウムノッファー）を用いて、プロテアーゼを抽出した。具体的には、各バッファ一 200ml と子実体 200g をミル（日本精機製、 2.5 リットル、 180 ）に入れて、 5分間、 2 回破砕した。その後、破碎液をナイロンメッシュ（NYLON Νο· 300，アース（株）製）で濾過し、固形物を除去した。上澄み液を回収してこれらを凍結乾燥して粉末とし、ァガリクス · ブラゼィ · ムリル子実体由来のプロテアーゼとした。このプロテア一ゼは冷暗所（ 5 °C以下）で安定であった。

実施例 1 5

実施例 1 4 の処方において、パパイン 1.0 に代えて、参考例 2 で製造したァガリクス · ブラゼィ · ムリル子実体由来のプロテアーゼのうち、 pH7.0 の抽出液の乾燥粉末 1.0 を配合するほかは実施例 1 4 と全く同様にして液状化粧料を調製した。この液状化粧料を 1 9〜 2 2 の手の甲のシミ部分（ 1 9 ， 2 0 は 6 0 才台男性、 2 1 , 2 2 は 5 0才台女性）に 1 日 2 〜 3 回塗布したときの結果を色度の変化（目視による観察）により表 1 4 に示す。【表 1 4】

実施例 1 6

参考例 2 と同様にしてマイタケ子実体から pH7.0 のバッファーで抽出後乾燥させた粉末（マイタケ由来のプロテアーゼ）を、実施例 1 4 の配合のパパインに替えて配合して、同様に液状化粧料を調製した。この液状化粧料を 2 3 〜 2 6 の手の甲のシミ部分（ 2 3 、 2 4 は 6 0才台男性、 2 5 、 2 6 は 5 0才台女性）に 1 日 2 ~ 3 回塗布した後のシミの大きさ（縦長と横長の平均値（mm)) の変化をノギスにより測定した。測定の結果を表 1 δ に示^ 。

【表 1 5】

産業上の利用可能性

以上説明したように、本発明に係る化粧料は、シミ、ソバカスなどを効果的に除去することのできる。また、グリセリンをさらに配合することにより保湿効果に優れ、また、コロジオンを配合することにより定着効果に優れた化粧料とすることができる。

Claims

請求の範囲

1 . プロテア一ゼおよび乳酸菌の培養上清を配合したことを特徴とする化粧料。

2 . 前記プロテアーゼがパパインである請求の範囲第 1 項記載の化粧料。

3 . 前記プロテア一ゼがブロメラインである請求の範囲第 1 項記載の化粧料。

4 . 前記プロテア一ゼがァガリクス · ブラゼィ · ムリル由来のプロテア一ゼである請求の範囲第 1 項記載の化粧料。

5 . 前記プロテアーゼがマイタケ由来のプロテアーゼである請求の範囲第 1項記載の化粧料。

6 . 前記プロテアーゼが納豆菌由来のプロテア一ゼである請求の範囲第 1 項記載の化粧料。

7 . 前記乳酸菌がケフィァ発酵用乳酸菌である請求の範囲第 1 項記載の化粧料。

8 . 水、グリセリンおよびコロジオンからなる群から選ばれる 1 種または 2種以上をさらに配合した請求の範囲第 1 項記載の化粧料。