WO2000053190A1 - Nouveaux immunodepresseurs - Google Patents

Description

明 細 書

新規な免疫抑制剤

技術分野

本発明 は、 新規な免疫抑制剤に 関する。

背景技術

現在臨床において は、 化学療法では治癒不可能 と 判断 さ れ る 疾病においてそ の原因臓器あ る いはそ の一部分を他者か ら 移植す る こ と に よ っ て回復を 図 る と い う 方法が選択 さ れ得る よ う に な っ た。 腎臓、 肝臓、 肺、 腸管、 心臓、 鸱臓、 角膜な ど多種の臓器において移植治療が鋭意進め られその件数も増 え続けて レ、 る。

ま た、 皮膚組織は元来免疫能の高い組織であ る が、 他人の 皮膚を移植する 場合、 わずか数週間定着を維持でき れば、 そ の後の 自 己皮膚再生に よ り 治癒可能に な る た め、 高度の広範 囲火傷や裂傷な ど において は他人の皮膚を移植する こ と に よ り 形態的回復 を図 る 方法が選択 さ れる 。

こ う した各組織及び臓器を他者か ら移植する 場合最 も 懸念 さ れる の は、 被移植者の免疫力 に 由 来す る 拒絶反応であ る。

そ こ で、 1 9 7 0年代か ら 欧米を 中心に被移植者の拒絶反応を 防止 し、 移植臓器の永続的定着を 目 的に免疫抑制剤の研究が 進め ら れて き た。

ま た一方で、 リ ウ マチ、 膠原病な どいわゆ る 自 己免疫疾患 において も免疫抑制剤はそ の症状の緩和 において重要な薬剤 と な り 得る 。

過去に シ ク 口 ス ポ リ ン A 、 F K 5 0 6な ど の免疫抑制剤が開発 さ れて い る。 しか しなが ら 、 こ れ ら の免疫抑制剤は作用機構 も 近似 し、 ま た慢性毒性が懸念 さ れてお り 、 長期延命を 目 的 と する 次世代の臓器移植に対 して は、 異な る化学構造で異な る 作用機構が期待でき る 、 よ り 毒性の低い物質が求め られて レヽ る。

天然か ら得 られた含硫糖脂質に は、 こ れま で制癌性 （佐原 ら 、 British Journal of Cancer, 75 (3) , 324-332， （1997) ) 、 DNA合成酵素阻害活性 （ 7k品 ら 、 Biochemical Pharmacology, 55， 537-541， （1998)、 太 田 ら 、 Chemical & Pharmaceutical Bul letin, 46 (4) , ( 1998) ) 、 HIV抑制斉 ij (特表平 5— 501105号 公報） と 薬理活性が見いだ さ れて い る。 しか しなが ら 、 含硫 糖脂質、 特に、 ス ノレホ キ ノ ボシルジァ シルグ リ セ ロ ール誘導 体についての免疫抑制反応に関す る 知見は未だない。

発明 の開示

本発明 は、新規な免疫抑制剤 を提供する こ と を 目 的 と す る。 よ り 詳細 に は、 よ り 毒性が低 く 、 長期投与が可能であ り 、 か つそ の免疫抑制活性の高い免疫抑制剤 を提供する こ と を 目 的 と す る。

本発明者 ら は、 上記事情に鑑みて研究 した結果、 特定の ス ノレホ キ ノ ボ シルジァ シル グ リ セ ロ ール誘導体に顕著な免疫抑 制活性を認め、 本発明 を完成す る に至っ た。 すなわち 、 本発 明 は、 次の一般式 （ 1 ) ： O H

II I

(式中 、 R _1(H及び R ₁₀₂は、 互いに独立 して高級脂肪酸のァ シル残基を表す。 ） に よ り 表 さ れる化合物及びその薬学的に 許容 さ れ る塩か ら な る 群か ら選択 さ れる 少な く と も 1 種を有 効成分 と して含有する 免疫抑制剤 を提供する 。

図面の簡単な説明

図 1 は、 一般式 （ 1 ) で表 さ れ る 化合物 （SQAG3)の濃度 と 免疫抑制能 と の関係を表す グラ フ であ る。

図 2 は、 一般式 （ 1 ) で表 さ れ る 化合物 （SQAG5)の濃度 と 免疫抑制能 と の 関係を表す グ ラ フ であ る 。

図 3 は、 一般式 （ 1 ) で表 さ れ る 化合物 （SQAG7)の濃度 と 免疫抑制能 と の関係 を表す グ ラ フ であ る。

図 4 は、 一般式 （ 1 ) で表 さ れる 化合物 （SQAG9)の濃度 と 免疫抑制能 と の関係 を表す グ ラ フ であ る 。

発明 を実施す る た め の最良の形態

本明細書において 、 保護基の 「炭素数」 と は、 当該保護基 を非置換 と してみな した場合の炭素原子の数をい う 。従つ て、 例 えば、 R 6に よ り 表 さ れ る 基が置換ア ル キ ル基であ る場合、 そ の炭素数 と は、 当該ア ルキ ル基に置換する 置換基の炭素原 子 を含ま ない、アルキル基の骨格部分の炭素原子の数をい う 。 保護基がアルキル基以外の場合について も 同様であ る。 まず、 本発明 の免疫抑制剤が有効成分 と して含有する一般 式 （ 1 ) ：

(式中 、 R ₁₀₁及び R ₁₀₂は、 互いに独立 して高級脂肪酸のァ シル残基を表す。 ） で表 さ れる ス ル ホ キ ノ ボシルジァ シルグ リ セ ロ 一ル誘導体について詳細に説明す る。

上記一般式 （ 1 ) において 、 R 0 は、 高級脂肪酸のァ シ ル残基を表す。 R 1₀₁に よ り 表 さ れ る 高級脂肪酸のァ シル残 基を提供す る脂肪酸には、 直鎖状又 は分岐状の、 飽和又は不 飽和高級脂肪酸が含まれる 。

R i 0 iに よ り 表 さ れる 、 直鎖状又 は分岐状の、 高級脂肪酸 の ァ シ ル残基には、 R - C ( = O ) 一 (式中 、 R は、 炭素数 13 以上の アルキル基又はァノレケニル基を表す。 ） で表 さ れる 基 が含ま れる。 こ の ア シノレ残基 ： R - C ( = O ) -の R に よ り 表 さ れ る ア ル キ ル基及びア ル ケ ニ ル 基 の炭素数は、 免疫抑制活 性、 製造 コ ス ト 等 を考慮す る と 、 13以上 25以下が好ま し く 、 15〜 25の奇数が更 に好ま しい。 R の炭素数が 25を越 え る と 、 特に製造 コ ス ト が高 く な る と レ、 う 問題点が あ る 。

上記一般式 （ 1 ) において 、 R ₁₀₂は、 上述の R ₁₀₁と 同義 であ る 。

R lOlと R l02は、 互いに 同 じであ っ て も 異な っ て いて も よ いが、 製造の容易性の観点か ら 同 じであ る こ と が好ま しい。 上記一般式 （ 1 ) において 、 ス ル ホ キ ノ ボ シ ドの糖骨格は、 舟形、 いす型のいずれの配置を も と り 得る。 しか しなが ら 、 いす型の も ののほ う が、 安定性の観点か ら好ま しい。 ま た、 グ リ セ ロ ール部分の ₂ 位の炭素 （不斉炭素） におけ る絶対配 置は、 S 又は R の何れであ っ て も よ い。

ス ノレホ キ ノ ボ シ ド と グ リ セ ロ ール と の結合は、 a 又 は β の 何れで も よ いが、 細胞 を用 いた免疫抑制活性のア ツセィ 結果 力 ら判断す る と 、 ]3 が好ま しい。

本発明 のス ノレホ キ ノ ボ シルジァ シル グ リ セ ロ ール誘導体 は、 次の反応式に従い、 （工程 Α ) 〜 （工程 】 ） を経て製造 する こ と ができ る。

00/53190 ス キ ー ム 1

(工程 A ) D — グル コ ー ス の C 1 炭素に結合する 水酸基を

₂ 一 プロ ぺニ ル化する 。 （工程 B ) グル コ ー ス の C 6 炭素の 水酸基を保護す る。 （工程 C ) グル コ ー ス の C 2、 C 3 お よ び C 4 炭素に結合す る 水酸基を保護す る。 （工程 D ) 先に保 護 した C 6 炭素の保護基を脱保護す る。 （工程 E ) C 6 炭素 に結合す る水酸基をカルボ二ルチオ基に変換 し得る基 （例え ば、 ァ ノレ キ ノレ ス ノレ ホ ニ /レ オキ シ基又はァ リ 一ノレ ス ノレ ホ ニ ノレォ キ シ基） に置換する。 （工程 F ) C 6 炭素 をカ ルボ二ルチオ ィ匕する。 （工程 G ) C 1 炭素に結合す る 2 — プロ ぺニル基を ジオー ル化する。 （工程 H ) 得 ら れた ジオールのそれぞれを 所望の高級脂肪酸に よ り エ ス テ ル化す る。 （工程 I ) C 6 炭 素のカ ル ボ二ルチ オ基を ス ルホ ン酸塩化する。 （工程 J ) 得 ら れた ス ノレホ ン酸塩の C 2 、 C 3 お よ び C 4 炭素の保護基を 脱保護する こ と に よ り 、 塩の形態に あ る 、 本発明の スルホ キ ノ ボシルジァ シルグ リ セ ロ ール誘導体を製造する こ と ができ る。 こ の よ う に して得 られた塩は、 塩酸等の酸に よ る滴定に 供す る こ と に よ り 、 本発明 の ス ノレホ キ ノ ポシルジァ シルグ リ セ ロ ール誘導体にする こ と ができ る。

上記工程 A〜 J を さ ら に詳細に説明す る 。

工程 A の 2 — プ ロ ぺニ ノレ イ匕は、 グノレ コ ー ス と ァ リ ノレ ア ノレコ 一ノレを ト リ フ ノレオ ロ メ タ ン ス ルホ ン酸等の強酸の存在下に、 通常、 室温カゝ ら 1 0 0 °C、 好ま し く は 8 0 ° (： 〜 9 0 °Cの温度 で、 半 日 〜 2 日 間反応 さ せる こ と に よ り 行 う こ と ができ る。 但 し、 反応条件の設定に よ っ て反応時間は異な る。

工程 B において は、 C 6 炭素に結合す る 水酸基を保護 し、 C 6 炭素に 一 O R 6を結合 さ せる （ こ こ で 、 R 6は、 ア ルキル 基又は置換シ リ ル基を表す。 ） 。

水酸基を保護 し得る化合物 と して は、 R 6に よ り 表 さ れる基 がアルキル基又は置換シ リ ル基にな る よ う な化合物を用 レヽ る こ と ができ る。

R ⁶に よ り 表 さ れる アルキル基には、好ま し く はか さ 高い置 換の低級アルキル基が含まれる 。 置換基にはメ チル基、 フ エ ニル基等が含まれる。 置換アルキ ル基の具体例 と して は、 t 一 ブチル基、 ト リ チル基等を挙げる こ と ができ る。

R ⁶に よ り 表 さ れる 基が置換シ リ ル基であ る 場合、置換シ リ ノレ基の置換基には、 低級ア ル キル基、 好ま し く は炭素数 1 〜 4 の ア ル キ ル基 （例 えば、 メ チル基、 ェ チル基、 イ ソ プ ロ ピ ノレ基、 _t 一 ブチル基） 、 お よ びァ リ ール基、 好ま し く は炭素 数 6 の ァ リ ール基 （例 えば、 フ エ ニ ル基） 等が含ま れる。 R 6 に よ り 表 さ れる 置換シ リ ル基は、 好ま し く は 3 置換の シ リ ノレ 基であ り 、 よ り 好ま し く は t — ブチルジフ エ -ル シ リ ノレ基等 が含ま れる。

工程 B におけ る 水酸基の保護は、 R 6がア ル キ ル基であ る化 合物 3 を得 る 場合、 乾燥 ピ リ ジ ン等の有機溶媒に溶解 した化 合物 2 の溶液に、 R 6— X で表 さ れる 化合物 （式中 、 R 6は上 で規定 したアルキル基、 X は塩素原子等のハ ロ ゲ ン原子。 ） を添力□ し、 p — ジ メ チルァ ミ ノ ピ リ ジ ン （ D M A P ) 等の触 媒の存在下に室温で反応 さ せ る こ と に よ り 行 う こ と ができ る 。 ィ匕合物 R ⁶— と して は、 ト リ チノレク ロ リ ドが、 製造コ ス ト 、 反応の容易性の観点か ら 好ま し く 用 レ、 ら れる。

R 6が置換シ リ ル基であ る 化合物 3 を得 る場合、 化合物 R 6 一 X と し て t ー ブチノレ ジ フ エ ニ ノレ シ リ ノレ ク ロ リ ド等を用 い 、 イ ミ ダ ゾール等の触媒の存在下、 室温で、 半 日 〜 2 日 間反応 さ せる こ と に よ り 行 う こ と ができ る 。 但 し、 反応条件の設定 に よ っ て反応時間 は異な る。

工程 C において は、 C 2 、 C 3 お よ び C 4 炭素に結合する 水酸基を保護 し、 それぞれ一 O R l、 一 O R 2お よ び— 〇 R 3 ( こ こ で 、 R 1〜 R 3は 、 互 い に独立 し て 、 ア ルキル基又 は置 換シ リ ル基を表わす。 ） にす る。 こ れ ら の水酸基の保護は、 N , N — ジメ チルホ ルム ア ミ ド （ D M F ) 等の有機溶媒に溶 解 した化合物 3 の 、 C 2 、 C 3 お よ び C 4 炭素に結合する水 酸基を水素化ナ ト リ ウ ム等に よ り 活性化 し、 水酸基を保護 し 得る化合物 を室温で反応 さ せ る こ と に よ り 行 う こ と ができ る 。

水酸基を保護 し得る化合物 と して は、 ベ ン ジルブ ロ ミ ド 、 p — メ ト キ シベ ン ジルブ ロ ミ ド 、 t ー ブチノレ ジ メ チノレ シ リ ノレ ク ロ リ ド 、 ト リ ェ チル シ リ ノレ ク ロ リ ド等 を 用 レ、 る こ と が で き る。

こ れ ら の水酸基を保護 し得 る化合物 を用 い る場合の反応 は、 それぞれの保護基に適 した反応条件に よ り 行 う こ と がで さ る。

工程 D にお け る C 6 炭素に結合す る保護基の脱保護は、 メ タ ノ ール等の有機溶媒に溶解 した化合物 4 の溶液を、 p — ト ノレ エ ン ス ルホ ン酸等の触媒の存在下に室温で、 半 日 〜 i 日 間 反応 させ る こ と に よ り 行 う こ と ができ る。 但 し、 反応条件の 設定に よ っ て反応時間 は異な る。

工程 E において は、 化合物 5 の C 6 炭素の水酸基に、 R 4、 す な わ ち ア ル キル ス ルホ ニ ル基又 は ァ リ 一ル ス ルホ ニル基 を 結合 さ せる こ と に よ り 、当該水酸基を 一 O R 4に転化 して化合 物 6 を得る。

こ の 一 O R 4基への反応は、有機溶媒に溶解 した化合物 5 の 溶液に、 ア ル キルス ルホ 二ル基 を有する 化合物又 は ァ リ ール ス ルホ 二ル基を有する化合物等を添加 し、 反応 させる こ と に よ り 行 う こ と ができ る。 アルキルス ルホ 二ル基を有する 化合 物のアルキル基 と して は、 好ま し く は非置換のアルキル基で あ っ て 、 よ り 好ま し く は低級アルキル基、 さ ら に よ り 好ま し く は炭素数 1 〜 2 の ア ルキル基 （ メ チル基、 ェ チル基） が含 ま れる。 アルキルス ルホ二ル基を有す るィ匕合物 と して は、 式 ： R ⁴ ' 一 X (式中 、 R ⁴ ' はァ ノレキルス ノレ ホ ニル基を表 し、 X はハ ロ ゲ ン原子 を表す。 ） で表 さ れる も の を用 い る こ と がで き 、 その具体例 を挙げる と 、 メ タ ンス ノレホ ニルク ロ リ ド、 ェ タ ン ス ノレホ ニ ル ク ロ リ ド等が含まれる。

一方、 ァ リ ール ス ルホ ニル基を有する 化合物のァ リ ール基 と して は、 非置換又は置換のァ リ ール基であ っ て 、 好ま し く は炭素数 6 の ァ リ ー ル基 （例 えば、 フ エ ュ ル基） が含まれる。 置換ァ リ ール基の場合、 そ の置換基 と して は、 p — メ チル基、 P — メ ト キ シ基等が含まれる 。 ァ リ 一ル スルホニル基を有す る ィ匕合物 と して は、 式 ： R 4 " — X (式中 、 R 4 " はァ リ ール ス ノレホ ニル基を表 し 、 X はハ ロ ゲン原子 を表す。 ） で表 さ れ る も の を用 い る こ と が で き 、 そ の具体例 を挙げる と 、 p — ト ノレエ ン ス ノレホ ニ ノレ ク ロ リ ド 、 p — メ ト キ シベ ンゼ ン ス ノレホ ニ ル ク ロ リ ド 、 ベ ンゼ ン ス ノレホ ニ ル ク ロ リ ド等が含まれる。

こ れ ら のア ル キ ル ス ノレホ ニ ノレ基又 は ァ リ 一ノレス ルホ 二ノレ基 を有す る 化合物の う ち 、 ト シル基を有す る も のが反応の容易 性の観点か ら好ま しい。

工程 E の反応において、 有機溶媒 と しては、 ピ リ ジン、 ジ ク ロ ロ メ タ ン等を用 レ、 る こ と 力 Sでき る。

上記の反応は、 必要に応 じて 、 D M A P 等の触媒の存在下 に室温で、 2 時間〜 1 日 間行 う こ と がで き る。 但 し、 反応条 件の設定に よ っ て反応時間 は異な る。

工程 F にお い て 、化合物 6 の ス ルホ - ルォ キ シ基（ 一 O R 4 ) を カ ノレボニルチオ基 { — S C ( = O ) R ⁵ ( こ こ で、 R ⁵は、 水素原子、 ア ル キ ル基又はァ リ ー ル基を表す。 ） } に置換す る。

こ の反応では、 有機溶媒中 の化合物 6 のァノレ キ ル ス ノレ ホ ニ ノレォキ シ基又はァ リ 一ル スノレホニルォキ シ基をカノレボニルチ ォ基に置換する こ と の でき る 化合物 （以下、 「 o —置換基→ S —置換基化合物」 と も い う 。 ） を反応 さ せ る こ と に よ り ィ匕 合物 7 が得 られる 。

O — 置換基— S —置換基化合物には、 チォカ ルボ ン酸のァ ノレ力 リ 金属塩お よ びア ル力 リ 土類金属塩が含まれる。 チォカ ノレボ ン酸に は、 チオギ酸、 並びに低級チォカ ルボ ン酸、 好ま し く は炭素数 1 〜 5 の脂肪族炭化水素が置換 した脂肪族チォ カ ルボ ン酸 （例 え ば、 チォ g乍酸、 チォプ ロ ピオン酸） 、 お よ び好ま し く は炭素数 6 〜 1 0 の芳香族炭化水素が置換 した芳 香族チォカ ルボ ン酸 （例 え ば、 チォ安息香酸） 等が含ま れる。

こ れ ら のチォカ ルボ ン酸 と 塩を形成する ア ル力 リ 金属に は、 カ リ ウ ム 、 ナ ト リ ウ ム等が含まれ、 ア ル カ リ 土類金属に は 、 マ グネ シ ウ ム 、 カ ノレ シ ゥ ム等が含ま れる 。

上記〇 一置換基→ S —置換基化合物の う ち 、 チォ酢酸の塩 は、 反応の安定性の点お よ び後の工程において硫黄原子を酸 化 しやすい点か ら好ま し く 用 レヽ る こ と ができ る。

反応に用 い る 有機溶媒に は、 ア ル コ ー ル 、 好ま し く は低級 ァ ノレ コ ー ノレ （例 え ば 、 メ タ ノ ーノレ 、 エ タ ノ ーノレ 、 プ ロ ノく ノ ー ノレ ） 、 N , N — ジ メ チノレホ ノレ ム ア ミ ド 、 ジ メ チノレ ス ノレホ キ シ ド等が含まれる。

上記反応は、 通常、 室温ない し用 い る 溶媒の沸点において 、 通常、 1 時間〜 1 日 間撹拌す る こ と に よ り 行 う こ と ができ る。 但 し、 反応条件の設定に よ っ て反応時間 は異な る。

工程 G の ジオール化は、 t ー ブタ ノ ールお よ び水等の溶媒 混液に溶解 した化合物 7 の溶液に 、 四酸化ォ ス ミ ゥ ム等の酸 ィ匕剤 を添力 [] し、 ト リ メ チルァ ミ ン N — ォキ シ ド等の再酸化剤 を共存 さ せ、 室温で、 1 時間〜 3 日 間反応 さ せる こ と に よ り 行 う こ と ができ る。 但 し、 反応条件の設定に よ っ て反応時間 は異な る。

工程 H のエ ス テ ル化反応に よ り 、 所望の高級脂肪酸が ダ リ セ ロ ーノレ と エ ス テ ノレ結合 し た ス ノレ ホ キ ノ ボ シル ジァ シル グ リ セ ロ ール誘導体を得る こ と がで き る 。

こ の反応は、 ジ ク 口 ロ メ タ ン等 の適 当 な有機溶媒に溶解 し た化合物 8 の溶液に、 最終生成物に対応す る 高級脂肪酸を添 カロ し 、 必要 に応 じ て 、 ェ チル ジ メ チルァ ミ ノ プ ロ ピルカ ノレボ ジイ ミ ド （ E D C I ) — D M A P 系等の適 当 な触媒の存在下 に反応 さ せ る こ と に よ り 行 う こ と 力；で き る。 工程 H の反応において 、 添加すべき 脂肪酸 と して は、 上述 した一般式 （ 1 ) の R ₁₀₁に よ り 表 さ れ る ァ シル残基を有す る 高級脂肪酸、 すなわち 、 直鎖状又は分岐状の、 飽和又は不 飽和高級脂肪酸を用 レ、 る こ と ができ る。

工程 H の反応に よ り 、 化合物 9 において、 R 101及び R 102 が 、 添加 した高級脂肪酸のァ シ ル残基であ る本発明 の一般式 ( 1 ) で表 さ れる ジァ シルエ ス テル と 、 R i ₀ iのみにァ シル 残基が結合 したモ ノ ァ シルエ ス テ ル の混合物が得 られる。 ェ 程 H の反応において は、 所望に応 じて 、 添加すべき 高級脂肪 酸を 2 種以上用 レ、 る こ と も で き る 。 こ の場合、 R ₁₀₁及び

02が 同 じァ シ ル残基ま たは互いに異な る ァ シル残基であ る 一般式 （ 1 ) で表 さ れる ジァ シルエス テル と 、 R 丄 01が互い に異な る ァ シル残基であ る モ ノ エ ス テル と の混合物が得 られ こ れ ら のモ ノ エ ス テル と ジエ ス テ ルの混合物は、 必要に応 じて 、 例 え ば、 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ り 、 各々 のエ ス テル に単離 し 、 次の工程 I の反応に供す る こ と ができ る。 ま た、 脂肪酸の添加量を化合物 8 の 2 〜 3 倍モ ル に設定する こ と に よ り 、 モ ノ エ ス テ ル の生成を極力抑 え 、 ジエ ス テ ルを優 占的 に合成す る こ と が でき る 。

工程 I の ス ル ホ ン酸塩化は、 酢酸お よ び酢酸力 リ ゥ ム を用 いて緩衝 した有機溶媒中 の化合物 9 の溶液に、 O X O N E ( 2 K H S 0 ₅、 K H S 0₄、 K 2 S O ₄) 等の酸化剤 を添加 し、 室 温で、半 日 〜 2 日 間反応 さ せる こ と に よ り 行 う こ と ができ る。 但 し、 反応条件の設定に よ っ て反応時間 は異な る。 工程 J の C 2 〜 C 4 炭素に結合す る保護基の脱保護は、 用 いた保護基お よ び結合する 高級脂肪酸のァ シル残基に合っ た 脱保護の方法で行 う こ と ができ る。 例 えば、 保護基がベ ンジ ル基であ り 、 R 0 i及び R 0 2が飽和の高級脂肪酸のァ シル残 基であ る 場合、 エ タ ノ ー ル等の有機溶媒に溶解 した化合物 1 0 の溶液を 、 ノ、。 ラ ジ ウ ム —活性炭 （ P d — C ) 等の触媒の存 在下に水素ガ ス 雰囲気下に室温で反応 さ せる こ と に よ り 行 う こ と がで き る。 ま た 、 R _{1 0 1}及び R _{1 0}2に よ り 表 さ れる 高級脂 肪酸のァ シ ル残基の少な く と も 一方が不飽和の高級脂肪酸の ァ シ ル残基であ る 場合に は、 用 いた保護基に合っ た脱保護法 であ り 、 なおかつ不飽和脂肪酸の二重結合を維持でき る 方法 に よ り 行 う こ と ができ る。 例 え ば、 シ リ ル系の保護基の場合 は、 酸触媒 （例 えば、 ト リ フ ルォ ロ 酢酸） で脱保護する こ と 力 Sでき る 。

なお、 出発物質であ る グル コ ー ス は溶液中で _α — ァ ノ マ ー お よ び ー ァ ノ マーの構造を と り う る た め 、 各工程の生成物 は、 α — お よ び — ァ ノ マ ー の混合物 と な る。 これ ら の混合 物は、 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ 一等に供す る こ と に よ り 各ァ ノ マ ー に分離す る こ と が で き る 。

ま た 、 工程 Β の前に 、 化合物 2 と べン ズアルデ ヒ ドを反応 さ せ、 ベ ン ジ リ デ ン化す る 工程を採用す る こ と に よ り 、 _α - ァ ノ マ ー を選択的 に結晶化 さ せ、 分離す る こ と も でき る。 さ ら に、 工程 Α の 2 — プロ ぺニル化の前に 、 C 1 炭素に臭素等 のハ ロ ゲン を結合 さ せる こ と に よ り 、 そ の後 の反応において プ ロ ぺ ニ ル基を 位に導入す る こ と がで き 、 —ァ ノ マ ー を選 択的に合成する こ と も でき る。

本発明 の免疫抑制剤は、 上述の本発明 の一般式 （ 1 ) で表 さ れ る ス ル ホ キ ノ ボ シル ジァ シル グ リ セ ロ ール誘導体及びそ の薬学的に許容 さ れる塩か ら な る群か ら選択 さ れる 少な く と も 1 種を有効成分 と して含有す る。 本発明 の免疫抑制剤にお いて用 い得る薬学的に許容 さ れる塩には、 例 えば、 ナ ト リ ウ ム及び力 リ ゥ ム の よ う な一価の陽イ オンの塩が含まれる が、 こ れ ら に限定 さ れる も の ではない。 以下、 本発明のス ノレホ キ ノ ボ シルジァ シルグ リ セ ロ ール誘導体及びそ の薬学的に許容 さ れる塩か ら な る 群の化合物 を 「本発明 の免疫抑制物質」 と も い う 。

本発明 の免疫抑制物質が有効成分 と して含有する ス ルホ キ ノ ボ シルァ シル グ リ セ ロ ール誘導体に は 、 キ ノ ボー ス と グ リ セ ロ ー ルの結合が _α 結合又 は （3 結合であ る 異性体、 グ リ セ 口 ールの C 2 炭素 （不斉炭素） におけ る 異性体等が含まれる。 本発明 の免疫抑制物質は、 そ の活性に悪影響を及ぼ さ ない限 り 、 こ れ ら の異性体を単独で含有す る こ と も 、 2 種以上の異 性体の混合物 を含有す る こ と も でき る。

本発 明 の免疫抑制物質は、 例 えば、 経 口 投与、 非経 口 投与 す る こ と がで き る 。 本発明 の免疫抑制物質は、 こ れ ら の投与 経路に応 じて 、 適切 な薬学的に許容 さ れ る 賦形剤又は希釈剤 等 と 組み合わせ る こ と に よ り 薬学的製剤 にする こ と ができ る。

経 口 投与に適 した剤型 と して は、 固体、 半固体、 液体又は 気体等の状態の も のが含ま れ、 具体的に は、 錠剤、 カ プセ ル 剤、 粉末剤、 顆粒剤、 溶液剤、 懸濁剤、 シ ロ ッ プ剤、 エ リ キ シル剤等 を挙げる こ と ができ る が、 こ れ ら に限定 さ れる も の ではない。

本発明 の免疫抑制物質を錠剤、 カ プセ ル剤、 粉末剤、 顆粒 剤、 溶液剤、 懸濁剤等に製剤化す る た め に は、 それ 自 体は既 知の方法を用 いて 、 本発明 の免疫抑制物質をバイ ンダー、 錠 剤崩壊剤、 潤滑剤等 と 混合 し 、 さ ら に、 必要に応 じて、 希釈 剤、 緩衝剤、 浸潤剤、 保存剤、 フ レー バー剤等 と 混合す る こ と に よ り 行 う こ と がで き る 。 一例 を挙げる と 、 上記バ イ ンダ 一 に は 、 結晶セ ノレ ロ ー ス 、 セ ノレ ロ ー ス誘導体、 コ ー ン ス タ ー チ、 ゼ ラ チ ン等が、 錠剤崩壊剤に は、 コ ー ン ス タ ー チ 、 馬鈴 薯デ ン プ ン 、 カ ノレポ キ シ メ チルセ ノレ ロ ー ス ナ ト リ ゥ ム等が、 潤滑剤には、 タ ノレ ク 、 ス テ ア リ ン酸マ グネ シ ウ ム等が含ま れ、 さ ら に は、 ラ ク ト ー ス 、 マ ン ニ ト 一ル等の よ う な従来用 レヽ ら れて レ、 る 添加剤等を用 レ、 る こ と が でき る 。

ま た 、 本発明 の免疫抑制物質は、 液体、 微細粉末の形態の も の を 、 気体又は液体の噴霧剤 と 共に 、 又は必要に応 じ て浸 潤性付与剤の よ う な既知の助剤 と 共に 、 エア 口 ゾル容器、 ネ ブ ラ イ ザ一の よ う な非加圧容器に充填 し、 エア ロ ゾル剤又は 吸入剤の形態で投与する こ と も でき る 。 噴霧剤 と して は、 ジ ク ロ ロ フ ノレォ ロ メ タ ン、 プ ロ ノく' ン 、 窒素等の加圧ガス を用 い る こ と がで き る。

本発明 の免疫抑制物質を非経 口 投与す る 場合、 例 えば、 注 射、 経皮投与、 直腸投与、 お よ び眼内投与等に よ り 投与する こ と がで き る。 注射に よ る投与 と して は、 皮下、 皮 内 、 静脈内、 筋肉 内等 に投与す る こ と ができ る。 こ れ ら の注射用製剤は、 それ 自 体 は既知の方法に よ り 、 本発明 の免疫抑制物質を、 植物性油、 合成脂肪酸ダ リ セ リ ド、 高級脂肪酸のエ ス テ ル、 プロ ピ レン グ リ コ ー ルの よ う な水性又は非水性の溶媒中 に溶解、 懸濁又 は乳化 し 、 さ ら に 、 所望に よ り 、 可溶化剤、 浸透圧調節剤、 乳化剤、 安定剤及び保存料の よ う な従来用 い られて い る 添加 剤 と 共に製剤化す る こ と ができ る。

本発明 の免疫抑制物質を溶液、 懸濁液、 シ ロ ッ プ、 エ リ キ シル等の形態にす る た め に は、 注射用滅菌水や規定生理食塩 水の よ う な薬学的 に許容 さ れる溶媒を用 い る こ と ができ る。

経皮投与は、 対象 と な る 皮膚の状態等に応 じて軟膏剤、 乳 ィ匕剤、 パ ス タ 剤 、 ハ ッ プ剤、 リ ニ メ ン ト 剤、 ロ ー シ ョ ン剤、 懸濁剤等 と して投与す る こ と ができ る。

軟膏剤は、 それ 自 体は既知の方法に よ り 、 本発明の免疫抑 制物質を ヮ セ リ ン 、 パ ラ フ ィ ン等の よ う な疎水性基材ま たは 親水 ヮ セ リ ン 、 マ ク ロ ゴー ル等の よ う な親水性基材 と 練合す る こ と に よ り 製剤化す る こ と がで き る 。 乳化剤そ の他の経皮 投与剤 も 、 通常用 レ、 られる 方法に よ り 製剤化す る こ と がで き る 。

直腸投与には、 例 えば、 坐薬 と して投与す る こ と がで き る 。 坐薬は、 それ 自 体は既知の方法に よ り 、 本発明の免疫抑制物 質を 、体温で融解する が室温では固化 してい る カ カ オバ タ ー、 カ ー ボ ン ワ ッ ク ス 、 ポ リ エ チ レ ン ダ リ コ ールの よ う な賦形剤 と 混合 し 、 成形す る こ と に よ り 製剤化す る こ と ができ る。 眼内投与は、 点眼剤、 眼軟膏等の よ う な眼用製剤等 と して 投与す る こ と ができ る。 点眼剤は、 それ 自 体は既知の方法に よ り 、 滅菌精製水の よ う な水性溶剤に本発明 の免疫抑制物質 を溶解ま たは懸濁 し、 必要に応 じて保存剤、 緩衝剤、 界面活 性剤等を添加す る こ と に よ り 製剤化す る こ と ができ る。

本発明 の免疫抑制物質は、 薬学的に許容 さ れる他の活性を 有す る 化合物 と 併用 して薬学的製剤 と する こ と も でき る。

本発明 の免疫抑制物質の投与量は、 投与形態、 投与経路、 対象 と する 疾病の程度や段階等に応 じて適宜設定、 調節する こ と がで き る。 一例 を挙げる と 、 経 口 投与する場合は、 免疫 抑制物質 と して 、 l 〜 100mg/kg体重 /日 、 好ま し く は ：！ 〜 10m g/kg体重 /日 、 注射剤 と して投与する 場合は、 免疫抑制物質 と して 、 1 〜 50mg/kg体重 /日 、 好ま し く は l〜 5mg/kg体重 /日 、 経皮投与する 場合は 、 免疫抑制物質 と して、 l 〜 100mg/kg体 重 /日 、 好ま し く は 1〜 10m_g/kg体重 /日 、 直腸投与す る 場合は、 免疫抑制物質 と し て 、 1 〜 50mg/kg体重 /日 、 好ま し く は 1〜 5 _mg/kg体重 /日 、 眼内投与の場合は、 免疫抑制物質 と して 、 0. 01〜 3 %程度の溶液を 1 日 数回に分けて点眼する な どに設定 する こ と 力 Sでき る が 、 こ れ ら に限定 さ れ る も のではない。 実施例

以下、 本発明 を例 を挙げて説明す る。 しか しなが ら 、 本発 明 は、 こ れ ら の例に限定 さ れる も の ではない。

合成例

本発明 の免疫抑制剤において用 い る 有効成分の う ち 、 ス ル ホ キ ノ ボ シルジァ シルグ リ セ ロ ール 3 誘導体の合成例を以下 に示す。

< 例 1 >

経路 a ； 2, 3, 4, 6-テ ト ラ 0—ァ セ チノレ D—グノレ コ ピ ラ ノ シノレ ' ブ ロ ミ ド （II)

無水酢酸 400mLに 0°C条件下、 60%過塩素酸 2.4mLを滴下 し た。 溶液を室温に戻 した後 、 撹拌 しつつ D-グルコ ー ス 100 g (0.56mol)を液温が 30〜 40 °Cに保たれる よ う に約 30分で添カロ した。 反応液を 20°Cに冷却後 、 赤 リ ン 30g (1. Oraol)を添カロ し た。 さ ら に液温を 20°C以下に保ち なが ら 臭素 180g (2.3mol) を 、 ついで水 36mLを滴下 した。 室温で 2時間放置後、 冷 ク ロ ロ ホ ノレ ム 3 OOmLを力 [1 え、 ガ ラ ス ウ ールを敷き 詰めた漏斗で反 応液を濾過 した。 濾液を冷水 800mLに注ぎ、 分液漏斗で ク ロ ロ ホ ノレ ム層 を分離 した。 水層 を ク 口 ロ ホ ノレム 50mLで抽出 し、 ク ロ ロ ホ ノレ ム層 を合わせて 、 冷水 300mLで洗浄 した。 ク ロ 口 ホ ル ム層 を飽和炭酸水素ナ ト リ ゥ ム溶液 50 OmLに注ぎ、 分液 漏斗で十分振 と う し 、 ク ロ 口 ホ ル ム層 を回収 した。 無水硫酸 ナ ト リ ゥ ムで乾燥後、 濾過、 減圧濃縮 し、 結晶状物質を得た。 乳鉢内で石油エー テ ル ： エ ー テ ル = 2 ： 1溶液 と と も に細力、 く 砕き 、 こ れを濾別 し、 粗結晶物質を減圧乾燥 した。 冷ジイ ソ プ ロ ピルエ ー テ ルを用 いて再結晶 を行い純粋な結晶 を得た (収量 152.6g 0.37mol、 収率 66. 7% )。

融点 ； 88〜 90°C、 Rf値 ； 0.338 (へキサ ン ： 酢酸ェチノレ = 4 : 1)

( I ) ( Π ) 経路 b ; 2， 3， 4， 6—テ ト ラー 0_ァセ チノレ 一 1一 0— (2—プロ ぺニノレ ） 一 ]3 -D-グル コ ー ス （III)

ィ匕合物 （II) 16. 7g (40.6mmol)をァ リ ノレ ア ノレ コ ー ノレ lOOmL に溶解 し、 シア ン化水銀 10.0g (39.6minol)を添加 し、 室温で 一晩撹拌 した。 反応液を減圧濃縮 し 、 ク ロ 口 ホ ルム 1 OOmL及 び冷水 と と も に分液漏斗中で振 と う し 、 ク ロ ロ ホ ルム層 を分 離 した。 無水硫酸ナ ト リ ウ ムで乾燥後 、 濾過、 減圧濃縮 し、 得 ら れた シ ロ ッ プを冷 ジィ ソ プ ロ ピルエー テ ルに溶力、 し、 少 量の結晶種を加 え、 氷冷下にて結晶 を得た （収量 12.6 g 32. 5m m o 1、 収率 80 % )。

融点 ； 77〜 81°C。 R f値 ； 0.282 (ベンゼ ン ： 酢酸ェチノレ = 4： 1 )

経路 c ； 1— 0— (2—プ ロ ぺ ニ ル ト β — D -ダ ル コ ー ス （IV)

化合物 （III) 30. 3g (78. lmmol)を メ タ ノ 一ノレ 120mLに溶角？ し 、 撹拌 しな力； ら 28 %ナ ト リ ウ ム メ ト キ シ ド . メ タ ノ ーノレ溶 液を少量滴下 し、 室温で 4時間反応 した。 0. 1 N塩酸で中和 し、 無水硫酸ナ ト リ ウ ム で乾燥後、 濾過、 減圧濃縮 し、 シ リ カ ゲ ノレ フ ラ ッ シ ュ ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー （ク ロ ロ ホ ノレム ： メ タ ノ ーノレ = 4 ： 1)で精製 し、 無色透明 油状物質を得た （収量 15.8g 71.8 mmo 1 収率 91.9% )。 Rfィ直 ； 0.407 (ク ロ ロ ホ ノレム ： メ タ ノ ー ル = 4 ： 1 )

経路 d ; 1 0— (2—プ ロ ぺ ニ ル）— 6— 0— ト リ フ エ ニ ノレ メ チ ノレ — 3 — D— グノレ コ ー ス （ V )

ィ匕合物 (IV) 15. 8g (71. 8mmol)を乾燥 ピ リ ジ ン 120mLに溶 解 し 、 そ の溶液に ト リ チル ク ロ リ ド 23. 4 g ( 83. 9mmo 1 ) 、 p - ジメ チ ノレ ア ミ ノ ピ リ ジン (DMAP) 0. 1 g (0. 82mmol)を添カロ し 、 撹拌 しなが ら 室温で 36時間反応 した。 そ の後冷水 30 OmLをカロ え て反応 を停止 し、 酢酸ェチルで抽出 （300raL X 3回） し、 有機 層 を合わせて 1. ON塩酸で pH 4ま で 中和 し、 飽和食塩水で洗浄 (300mL X 2回） し、 無水硫酸ナ ト リ ウ ム で乾燥 した後 、 濾過、 減圧濃縮 し、シ リ カ ゲノレフ ラ ッ シュ ク ロ マ ト グ ラ フ ィ 一 （ジク ロ ロ メ タ ン ： メ タ ノ ー ル = 20 : 1)で精製 し 、 淡黄色油状物質 を得た （4又量 28. 7g 62. ImmoU 4又率 86. 5。/。 ）。 Rfィ直 ； 0. 306 (ク

経路 e ; 2, 3, 4— ト リ ー 0—ベ ン ジ /レ 一 1一 0— (2—フ。 ロ ぺ ニ ノレ）一 6— 0— ト リ フ エ ニ ノレ メ チ ノレ — — D—グ ノレ コ ー ス （VI)

ミ ネ ラ ノレオイ ノレ中 に拡散 さ れて レ、 る 80 %水素化ナ ト リ ゥ ム 3. 2g (133mmol)を反応器に取 り 、 乾燥へキサ ン 50mLで よ く 洗浄 した後へキサ ンを取 り 除き 、乾燥 N， N-ジメ チルホルム ァ ミ ドに溶解 した化合物 （V) 14. 2g (30. 7mmol)を氷冷下にて 徐 々 に添加 し、 15分後室温に戻 し、 撹拌 し なが ら 1時間反応 した。

次に再び氷冷下にてベン ジルブ 口 ミ ド 21. 6 g ( 126mmo 1 )を 徐 々 に添力 [] し、 15分後室温に戻 し、 撹拌 し なが ら 3時間反応 した。 そ の後 メ タ ノ ール 20mし、 冷水 30mLを加 えて反応を停止 し、 酢酸ェチルで抽出 （50mL X 3回） し、 有機層 を合わせて飽和 食塩水で洗浄 （ 1 OOmL X 2回） し 、 無水硫酸ナ ト リ ゥ ム で乾燥 し た後、 濾過、 減圧濃縮 し、 シ リ カ ゲルフ ラ ッ シュ ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー （へキサ ン ： 酢酸ェ チル = 10 : 1)で精製 し、 淡黄色 油状物質を得た （収量 21. 6g 29. 5mmol、 収率 96. 1% )。 Rf値 ； 0. 410 (へ キ サ ン ： 酢酸ェ チル = 4 : 1)

経路 f ; 2， 3, 4ー ト リ ー 0—ベ ン ジノレ 一 1一 0— (2—プ ロ ぺ ニ ノレ ） 一 |3 — D— グノレ コ ー ス （ V I I )

ィ匕合物 (VI) 21. 6g (29. 5mmol)を メ タ ノ ーノレ 150mLに溶角 し、 p— ト ノレ エ ン ス ノレホ ン酸一水和物 2. 80g (14. 7 mm ol)を添力 tl し 、 撹拌 し なが ら 一晩反応 した。 そ の後冷水 10 OmLを加 えて反応 を停止 し 、 酢酸ェ チ ルで抽出 （200mL X 3回） し、 有機層 を合わ せて飽和食塩水で洗浄 （300mL X 2回） し、 無水硫酸ナ ト リ ゥ ム で乾燥 した後 、 濾過、 減圧濃縮 し、 シ リ カ ゲルフ ラ ッ シュ ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー （へ キ サ ン ： 酢酸ェ チ ル = 4 : 1)で精製 し、 白 色結晶状物質を得た （収量 9. 0g 18. 4mmol , 収率 62. 4% )。 融 点 80〜 82 °C。 R f値； 0. 338 (へキサ ン ： 酢酸ェチル = 4： 1 )。 [ α ] _D = + 0. 4° (c 5. 50、 CHC 1₃)

! H NMR ( 300MHZ、 CDC 1₃+TMS、 δ ) ； 7. 36— 7. 23 ( 15H、 m、 A r) 、 6. 02 ~ 5. 89 ( 1 H、 m、 -CH = CH₂) ^ 5. 34 ( 1H、 dd、 J = 1. 5

& 17. 2、 -CH = CH₂) , 5. 22 ( 1H、 dd、 J = 1. 4 & 10. 4、 - CH = CH₂) 、

4. 95 ( 1 H、 d、 J= 10. 9、 Ar-CH₂) , 4. 94 ( 1 H、 d、 J= 10. 9、 A r-CH₂) , 4. 86 ( 1 H、 d、 J= 10. 9、 Ar-CH₂) , 4. 81 ( 1 H、 d、 J

= 10. 9、 Ar-CH^) , 4. 73 ( 1H、 d、 J = 10. 9 , Ar-CH₂) . 4. 64 ( 1

H、 d、 J= 10. 9、 A r - C H 2 ) , 4. 50 ( 1 H、 d、 J= 7. 8、 H- 1)、 4. 4

3— 4. 13 (2H、 ra、 -0-CH₂-CH = CH₂) , 3. 88— 3. 34 (6H、 m、 H - 2

& H - 3 & H - 4 & H - 5 & H - 6a, b)

経路 g ; 2, 3， 4ー ト リ ー 0—べ ン ジノレ 一 1—0—（2ーフ。 ロ ぺニノレ ） 一 6一 0— (4 — ト リ ノレ ス ノレ ホ ニ ノレ ） 一 — D—グノレ コ ー ス （VIII)

ィ匕合物 (VII) 9. 80g (20. Ommol)を乾燥 ピ リ ジン 200mLに 溶角 し 、 DMAP 24. 4mg (0. 2mmol)、 p— ト ルエ ン ス ノレホ ニ ノレ ク 口 リ ド 11. 4g (60. Ommol)を添加 し、 撹拌 し なが ら室温でー晚反 応 した。 そ の後、 冷水 300mLを加 え て反応 を停止 し、 酢酸ェ チ ルで抽出 （200mL X 3回） し 、 有機層 を合わせて 1. 0N及び 0. 1N 塩酸で pH 4ま で中和 し、 飽和食塩水で洗浄 （300mL X 2回） し、 無水硫酸ナ ト リ ウ ムで乾燥 した後、 濾過、 減圧濃縮 し、 シ リ 力 ゲル フ ラ ッ シ ュ ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー （へ キ サ ン：酢酸ェチノレ = 4 ： 1)で精製 し 、 白色結晶状物質を得た （収量 9. 00g 14. 0mm o 1、 収率 70. 0 % )。 融点 111〜 112 °C 、 R fィ直 ； 0. 295 (へキサ ン ： 酢酸ェ チル = 4 : l )

¹ti NMR (300MHz , CDC I 3+TMS, 5 ) ; 7. 77 (2H、 d、 J= 8. 2、 Ts Me側の H)、 7. 31— 7. 25 (15H、 m、 Ar)、 7. 19〜了 . 16 (2H、 m、 Ts S0₂側の H)、 5. 98〜 5. 85 (1H、 m、 - C 二 CH₂)、 5. 35— 5. 19 (2H、 m、 -CH = CH^) , 4. 92 (2H、 d、 J= 10. 9、 Ar-CH_2_) , 4. 81 (1H、 d、 J= 10. 8、 Ar-CH₂) , 4. 75 (1H、 d、 J= 10. 9、 Ar-CH_2) 4. 68 (2H、 d、 J= 10. 9、 Ar-CH_?) ^ 4. 48 (1H、 d、 J= 10. 8、 A r-CH₂) , 4. 39 (1H、 d、 J= 7. 8、 H- 1)、 4. 34〜 3. 38 (8H、 m、 H - 2 & H - 3 & H- 4 & H - 5 & H - 6a， b & - 0 - C ϋ₂ - C H = C H ₂ ) 、 2. 42 (3 H、 s、 Ts CHQ)

経路 h ; 2， 3， 4ー ト リ 一 0—ベ ン ジ ノレ ー 1一 0— (2—プ ロ ぺ ニ ノレ ） 一 6—デ才 キ シ— 6 -ァ セ チノレチ ォ—）3 — D—グノレ コ ー ス （IX)

ィ匕合物 （VIII) 9. 00g (14. 0mmol)を乾 '燥エ タ ノ ー ノレ 250tnL に溶解 し、 チォ酢酸カ リ ウ ム 4. 80g (42. Ommol)を添力□ し 、 還 流条件下で撹拌 し なが ら 3時間反応 し た。 そ の後、 冷水 30 OmL を加 えて反応を停止 し、 齚酸ェチルで抽 出 （200mL X 3回） し、 有機層 を合わせて飽和食塩水で洗浄 （300mL X 2回） し、 無水硫 酸ナ ト リ ウ ム で乾燥 した後 、 濾過 、 減圧濃縮 し 、 シ リ カ ゲル フ ラ ッ シ ュ ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー （へ キ サ ン ： 酢酸ェチノレ = 1 0： 1)で精製 し、 白 色結晶状物質を得た （収量 6. 60g 12. Ommol, 収率 85. 7 % )。 融点 70〜 73 °C。 R f値 ； 0. 295 (へキサ ン ： 酢酸 ェチノレ = 4 : 1)、 [ a ] D= + 26. 7° (c 0. 75, CHC1 Q ) ¹H NMR (300MHz _s CDC1₃ + TMS、 δ ) ； 7. 35— 7. 25 ( 15H、 m、 A r) 、 6. 00— 5. 89 (1H、 m、 -CH = CH₂) ^ 5. 35 (1H、 dd、 J= 1. 5 & 17. 2、 -CH = CH₂) , 5. 22 (1H、 dd、 J= 1. 3 & 10. 4、 -CH = CH_2) ^ 4. 95 (1H、 d、 J= 10. 9、 Ar-CH₂) , 4. 93 (1H、 d、 J= 10. 8、 A r-CH₂) , 4. 87 (1H、 d、 J= 10. 8、 Ar-CH₂) , 4. 78 (1H、 d、 J = 10. 9、 Ar-CH^) , 4. 71 (1H、 d、 J= 10. 9、 Ar-CH₂) , 4. 63 ( 1 H、 d、 J= 10. 7、 Ar-CH₂) , 4. 42 (1H、 d、 J= 7. 9、 H - 1)、 4. 3 7— 3. 33 (7H、 m、 H - 2 & H_3 & H - 4 & H- 5 & H - 6a & - 0_C _2一 ^c H = CH₂) , 2. 96 (1H、 dd、 J = 6. 9 & 13. 6、 H - 6b) 、 2. 34 (3H、 s、

経路 i ； 3— 0—（2， 3, 4— 卜 リ ー 0—ペ ン ジ ノレ ー 6—デォキ シ一 6—ァセチ ルチ オ— /3 — D—グノレ コ ビラ ノ シノレ ） —グ リ セ ロ ー ノレ （ X )

ィ匕合物 (IX) 3. 30g (6. 02mmol)を tーフ、、 タ ノ 一 ノレ ： 水 = 4 : 1 溶液に溶解 し 、 ト リ メ チノレ ア ミ ン N ォキ シ ドニ水和物 1. 34 g (12. 1mmol)、 四酸化オス ミ ウ ム t-ブ タ ノ 一ル溶液 （0. 04M) 1 1. 7 mLを添加 し、 撹拌 し なが ら 室温で 3日 間反応 した。 そ の後 活性炭 5. 8 gを加 え 、 撹拌 しなが ら 室温で 1. 5時間放置 し、 そ の後吸引濾過 した。 次に冷水 25 OmLを加 えて反応を停止 し 、 酢酸ェチルで抽出 （200mL X 3回） し 、 有機層 を合わせて飽和食 塩水で洗浄 （ 300mL X 2回） し 、 無水硫酸ナ ト リ ゥ ム で乾燥 した 後 、 濾過、 減圧濃縮 し、 シ リ カ ゲルフ ラ ッ シュ ク ロ マ ト ダラ フ ィ ー （へキサ ン ： 酢酸ェ チル = 1 : 1)で精製 し、 白色結晶状 物質を得た （収量 1. 79 g 3. 08 mm o 1、 収率 51. 2 % )。 融点 91〜 9 3°C 、 Rf値 ； 0. 112 (へキサ ン ： 酢酸ェチル = 1 : 1)、 [ α ] _D = + 18. 0° (c 0. 75、 CHC1₃)

lW NMR (300MHz , CDC1₃+TMS、 δ ) ； 7. 35— 7. 25 (15H、 m、 A r) 、 4. 94〜 4. 61 (6H、 m、 Ar-CH₂) , 4. 38 (0. 5H、 d、 J = 7. 8、

H-l (R or S) )、 4. 37 (0. 5H、 d、 J= 7. 8、 H - 1 (R or S) )、 3. 83 〜 3. 37 (7H、 m、 H - 2 & H - 3 & H - 4 & H - 5 & H - 6a & - 0 - - CH = CH₂) , 2. 96 (1H、 dd、 J = 6. 9 & 13. 6、 H- 6b)、 2. 34 (3H、 s、

経路 j ; 3— 0—（2， 3， 4ー ト リ 一 0—ベ ン ジ ノレ ー 6—デォキ シ一 6—ァセチ ノレチォ— /3 — D—グノレ コ ビラ ノ シノレ ） 一 1， 2—ジ— 0— ス テ ア ロ イ ノレ — グ リ セ ロ ール （XI)

化合物 （X) 1. 23g (2. 12mmol)を ジ ク 口 口 メ タ ン lOOmLに溶 解 し、 1—ェチノレ — 3— ( 3—ジ メ チ ノレ ア ミ ノ プ ロ ピノレ ） —力 ノレボ ジィ ミ ド塩酸塩 （EDCI) 1. 30g (6. 79mmol)、 DMAP 260mg (2. 13mmo 1 ) 、 ス テ ア リ ン酸 1. 75 _g ( 6. 15mmo 1 )を添カヨ し、 撹拌 しなが ら 室温にて 1 日 反応 した。 そ の後 ジ ク 口 ロ メ タ ン 100mLを力 [1 え反 応 を停止 し、 飽和食塩水で洗浄 （ 5 OmL X 2回） し 、 無水硫酸ナ ト リ ウ ム で乾燥後、 濾過、 減圧濃縮 し、 シ リ カ ゲルフ ラ ッ シュ ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー （へキサ ン ： 酢酸ェチノレ = 10 : 1→ 8 ： 1) で精製 し 、 白 色非結晶状固形物質を得た （収量 2. 10g 1. 88mmo 1、 収率 88. 7 % )。 R f値 ； 0. 487 (へキサ ン ： 酢酸ェチノレ = 4： 1 ) 、 [ c ] D=— 21. 3° (c 0. 15、 CHC 1₃)

!H NMR (300MHZ、 CDC 1₃+TMS、 6 ) ； 7. 34— 7. 26 ( 15H、 m、 A r)、 5. 28 ( 1H、 m、 Gly - H- 2) 、 4. 92— 4. 60 (6H、 m、 Ar - C 2)、 4. 36 (0. 5H、 d、 J = 7. 7、 H- 1 (R or S) ) 、 4. 35 (0. 5H、 d、 J = 7. 8、 H- 1 (R or S) ) 、 4. 25 ~ 2. 96 ( 10H、 m、 H - 2 & H - 3 & H - 4 & H - 5 & H - 6a， b & Gly- H - la， b & Gly- H - 3a， b)、 2. 37 ( 1. 5H、 s、 SCOCH3 (R or S) ) 、 2. 35 ( 1. 5H、 s、 SCOCH3 (R or S) ) 、 2. 32— 2. 24 (4H、 m、 OCOCH.2) , 1. 65— 1. 58 (4H、 m , OCOCH2 CH₂) , 1. 25 (56H、 br、 - C H ₂ - ) , 0. 88 (6H、 t、 J = 6. 3、 CH₃)

R 101 = R 102 ス テ ア ロ イ ノレ

経路 k ; 3— 0—（2, 3， 4— ト リ 一 0—べ ン ジノレ 一 6—デ才 キ シ一 6—ス ノレホー β 一 D—グノレ コ ビ ラ ノ シノレ ） — 1， 2—ジ— 0—ス テ ア 口 ィ ノレ —グ リ セ 口 — ル ' ナ ト リ ウ ム塩 （XII)

ィ匕合物 （XI) 1. 24g (1. 1 lmmol)を酢酸 50mLに溶解 し 、 酢酸 カ リ ク ム 1. 5g 及び 0X0NE (2KHS0₅、 KHSO4, K₂S0₄) 1. 55gを 添加 し、 撹拌 しなが ら 室温にてー晚反応 した。 そ の後冷水 10 OmLを加 えて反応を停止 し、 酢酸ェ チルで抽出 （50mL X 5回） し、 有機層 を合わせて飽和炭酸水素ナ ト リ ゥ ム溶液で中和 し、 さ ら に飽和食塩水で洗浄 （100mL X 2回） し、 無水硫酸ナ ト リ ゥ ム で乾燥 した後、 濾過、 減圧濃縮 し、 シ リ カ ゲルフ ラ ッ シュ ク 口 マ ト グ ラ フ ィ 一 （ク ロ ロ ホ ノレ ム ： メ タ ノ ーノレ = 20 : 1→ 15 ： 1 )で精製 し、 白 色非結晶状固形物質を得た （収量 773 mg 0. 677 mmo 収率 61.0 % )。 Rfィ直 ； 0.288 (ジ ク ロ ロ メ タ ン ： メ タ ノ 一ノレ = 10 : 1) 、 [ ci ]_D=+ 4.8° (c 0. 17、 CHC1₃)

¹H NMR (300MHz CDC1₃ + TMS , δ ) ； 7.29- 7. 16 (15H、 m、 A r) 、 5. 31 (1H、 m、 Gly - H- 2) 、 4.91〜 4. 56 (6H、 m、 A r - C H ₂ ) ,

4.50 (1H、 d、 J= 7.6、 H-l) 、 4.44〜 3.03 (10H、 m、 H - 2 & H -3 & H - 4 & H_5 & H - 6a， b & Gly - H - la, b & Gly - H - 3a， b) 、 2.62 (4H、 br、 0C0CH₂) , 2. 19— 2. 17 (4H、 br、 0C0CH₂CH₂) , 1.49 (4H、 br、 OCO CH2CH2CH2) , 1.25 (52H、 br、 -CH₂-) 0. 88 (6H、 t、 J = 6.3、 CH )

R ioi R ios: ス テ ア ロ イ ノレ 経路 1 ； 3— 0— ( 6 デォキ シ— 6 -ス ノレホ— ]3 D グノレ コ ビラ ノ シノレ ） — 1， 2—ジ 0—ス テ ア ロ イ ノレ —グ リ セ 口 一 ノレ · ナ ト リ ゥ ム塩 （XII I)

ィ匕合物 (XII) 773mg ( 0.677 mm 01 )をエ タ ノ ール 50 m Lに溶角？ し、 10%パ ラ ジ ウ ム -活性炭 （Pd-C) 2.00gを添力□ し、 フ ラ ス コ 内 を水素で置換 し、 撹拌 し なが ら 室温で一晩反応 した。 その 後、 セ ラ イ ト を用 いて吸引濾過 し、 減圧濃縮後、 シ リ カ ゲル フ ラ ッ シ ュ ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー （ク 口 ロ ホ ノレ ム ： メ タ ノ 一ノレ ： = 10 : 1→ ク ロ 口 ホ ノレ ム ： メ タ ノ ー ノレ ： 水 = 70 : 30 : 4)で精製 し、 白 色非結晶状固形物質を得た （収量 31 lmg 0.356mmol、 収 率 52.6 % ) _Q

白 色非結晶状固形物質、 Rf値 ； 0.402 (ク ロ ロ ホ ノレ ム メ タ ノ —ノレ ： ΤΚ = 65 : 25 : 4) 、 [ o; ] _D=— 3. 6° (c 0. 59、 CHCl₃ : CH ₃0H： H₂0=70 : 30 : 4)

! H NMR ( 300MH Z、 CDCI3 + TMS , δ ) ； 5. 28 (1H、 m、 Gly-H - 2) 、 4. 32 ( 1H、 d、 J = 7. 7、 H- 1) 、 4. 27— 3. 11 ( 10H、 m、 H - 2 & H - 3 & H - 4 & H - 5 & H - 6a, b & Gly - H - l a， b & Gly - H - 3a， b) 、 2. 36— 2. 30 (4H、 m、 OCOCH₂) , 1. 60 (4H、 m、 OCOCH₂C H2) 、 1. 27 (56H、 br、 — CH₂ -） 、 0. 89 (6H、 t、 J = 6. 4、 CH₃)

R 101 = R 102 = ス テ ア ロ イ ル く ア ツ セィ 1 >

混合 リ ンパ球反応

刺激細胞、 反応細胞 と な る リ ンパ球をそれぞれ別の健康人 か ら採取 した血液 よ り 調製 した。

リ ンパ球の う ち反応細胞に な る も の は、 更に選別 をかけ、 τ リ ンパ球のみ と した。

反応細胞は無処理、 刺激細胞は増殖を停止 させ る た め に 10 ⁶/mLの細胞に対 して 10 g/mLのマイ ト マイ シ ン C で処理 し た。 処理後 ίま PBS (phosphate buffer sal ine)で 4 回洗净 した。

次に反応細胞 を 105個 / ゥ エルずつ播種 し、 被験物質 （以 下の表 1 に示す SQAG3、 SQAG5、 S Q A G 7 及び S Q A G 9 ) を所定濃 度添加 し、 37 ° (：、 一時間培養 した。 そ の後刺激細胞を 105個 Zゥ エルずつ添力 [] し、 C 0₂ィ ン キ ュ ベー タ 一で 37。C 4 日 間培 養 した。 そ の培養の後 、 反応細胞の増殖能を定量する た めに、 [ 3 H ] — チ ミ ジ ン を添力 B し、 12時間培養 して細胞核内へ取 り 込ませた後、 シ ンチ レー シ ョ ンカ ウ ンタ ーで細胞内取 り 込 み量を計測 した。

得 られた結果を図 1 〜図 4 に示す。

図 1 〜図 4 は、 それぞれ SQAG3、 SQAG5、 SQAG7及び SQAG9を 添カ卩 した時の細胞への [ 3 H ] — チ ミ ジ ンの取 り 込み量を表す。

[ ³ H ] — チ ミ ジ ン の核内取 り 込み量が低いほ ど免疫抑制能が 高い こ と を表す。 図 1 〜図 4 の何れ も 、 縦軸は、 放射能の強 さ を表 し 、 横軸は、 試験化合物の濃度 を表す。

図 1 〜図 4 カゝ ら 明 ら かな よ う に 、 試験 した化合物は、 何れ も 有意な免疫抑制活性を有す る 。 特に、 S Q AG9は他の化合物 よ り も 顕著に優れた免疫抑制活性を有す る こ と が分かる。

< ア ツ セ ィ 2 >

皮膚移植に よ る 拒絶反応試験

AC Iラ ッ ト お よ び LEWラ ッ ト を準備 し、 エ ーテ ルの吸入麻酔 を施 した。 AC Iラ ッ ト の背部 を剃毛 した後、 側背部カゝ ら 1 X I cmの大 き さ に皮膚 を除去 して皮膚欠損創 を作 り 、 止血 した。 一方、 LEWラ ッ ト の尾部の皮膚を採取 し、 1 X I cmの大き さ の 皮膚片 と した。 こ の採皮片 を ACIラ ッ ト の皮膚欠損創に 当 て、 5 - 0ナ イ ロ ン糸で縫合 し 、 手術部にガーゼ を あてがい、 さ ら に創の安静を図 る た め ゴム バ ン ド付き の胴巻き を取 り 付け た。 こ の よ う な 、 皮膚移植手術を合計 10匹の ACIラ ッ ト に対 して行い、 ラ ン ダム に 5 匹を コ ン ト ロ ール群、 5 匹を被験物 質投与群 と した。 コ ン ト ロ ー ル群に は、 手術後 5 日 間 にわた り 毎 日 、 10mLの生理食塩水を腹腔内 に投与 した。 被験物質投 与群には、 SQAG9を lmg/mLの濃度に生理食塩水に溶解 した溶 液 1 OniLを 、 コ ン ト ロ ール群 と 同様、 手術後 5 日 間にわた り 毎 日 、 腹腔内 に投与 した。

手術後 7 日 目 に 、 移植 した皮膚を採取 して組織標本を作製 し、 藤田 ら の方 '法 ( T. Fujita, S. Takahashi , A. Yagihashi , K. J i mbow, N. Sato, Transplantation, vol.64, 922 - 92 5, 1997 ) に したが っ て H — E 染色 を行レ、、 組織学的 に判定 し た。

判定の結果、 コ ン ト ロ ール群は、 5 匹全て の組織像におい て 、 表皮 が真皮か ら 剥離 してお り 、 表皮が壊死 して い る こ と を確認 した。 それに対 し、 SQAG9投与群では、 5 匹の う ち 3 匹の組織像か ら 、 表皮の壊死が確認 さ れたが、 2 匹の組織像 について は、 表皮が真皮か ら 剥離 して い る 部分が見 られた も の の 、 生着 した部分が観察でき た。

本発明者 ら は、 免疫抑制活性の評価法 と して は、 皮膚移植 に よ る 拒絶反応試験は、 最 も厳 しい試験であ り 、 さ ら に、 こ のア ツ セ ィ で用 いた、 ACI系 ラ ッ ト と し EW系 ラ ッ ト の組み合わ せは、 拒絶反応力 S も っ と も激 し く 起 こ る も のであ る と 考えて レヽ る。 こ の よ う な厳 しい条件下でのア ツ セ ィ において も 5 例 中 2 例で拒絶反応の抑制効果が観察 さ れた こ と は、本発明 の S QAGが免疫抑制剤 と して高い効果を も つ こ と を示すも のであ る。

ま た、 SQAGを投与 した群の ラ ッ ト にはいずれも 、 試験期間 中、 急性毒性に よ る 死亡例は一例 も なかっ た。 さ ら に、 体重 の減少、 肉眼的な所見に よ る 体調不良、 一般病理試験に よ る 主要臓器の異常等の所見 も 全 く 見 られず、 本発明の免疫抑制 剤が極めて毒性の低い も のであ る こ と を確認 した。

市販の免疫抑制剤の う ち 、 皮膚移植試験で拒絶反応防止に 効果を示す も のは FK506な ど少数が知 られてい る が 、 低毒性 で効果の高い免疫抑制剤は未だ知 られて いない。

Claims

求 の 車 Q

次の一般式 （ 1

言

(式中 、 1¾ ₁₀₁及び 1¾ ₁₀₂は、 互いに独立 して高級脂肪酸のァ シル残基を表す。 ） に よ り 表 さ れる 化合物及びそ の薬学的に 許容 さ れる塩か ら な る 群カゝ ら 選択 さ れる 少な く と も 1 種を有 効成分 と して含有す る免疫抑制剤。

2 . 一般式 （ 1 ) で表 さ れる化合物が、 次の一般式 （ 2 ) ：

(式中 、 R ₁₀₁及び R io2は、 一般式 （ 1 ) で規定 した と お り 。 ） で表 さ れる も のであ る請求項 1 に記載の免疫抑制剤。