EA003098B1 - Новое иммунодепрессивное средство - Google Patents

Abstract

Описывается иммунодепрессивное средство, содержащее в качестве активного ингредиента, по меньшей мере, одно соединение, выбранное из группы, состоящей из соединений, представленных формулой (1)в которой Rи Rпредставляют, независимо, ацильный остаток высшей жирной кислоты и их фармацевтически приемлемых солей.

Description

Настоящее изобретение относится к новому иммунодепрессивному средству.

Предпосылки создания изобретения

При проводимом в настоящее время клиническом лечении для лечения химиотерапевтически неизлечимых заболеваний может применяться трансплантация. Трансплантация является технологией лечения заболеваний путем частичной или полной замены больного органа здоровым органом, взятым у другого индивидуума. Трансплантацию органов осуществляют в отношении широкого ряда органов, таких как почки, печень, легкие, кишечник, сердце, поджелудочная железа и роговица. Число трансплантаций органов растет.

Иммунная реакция кожи является сильной от природы. Однако трансплантация кожи может быть успешной, если кожный трансплантат, пересаживаемый от одного человека другому, может оставаться живым, по меньшей мере, в течение нескольких недель. Это является следствием того, что новая кожная ткань, если эпидермис трансплантата остается живым в течение нескольких недель, может саморегенерироваться, посредством чего залечивается повреждение кожной ткани. Следовательно, возможно осуществление физического восстановления тяжелого и обширного ожога или разрыва путем трансплантации кожной ткани от другого человека.

Наиболее серьезной проблемой, присущей трансплантации ткани или органов, является отторжение, вызываемое иммунной реакцией реципиента.

При данных обстоятельствах, с целью разработки иммунодепрессивного средства, способного предотвратить отторжение у реципиента, и достижения тем самым постоянной фиксации пересаженного органа, с 1970-х годов проводятся интенсивные исследования, в особенности, в европейских странах и США.

С другой стороны, иммунодепрессивное средство также может быть важным при лечении аутоиммунных заболеваний, таких как ревматизм и коллагеновая болезнь, так как оно может до некоторой степени смягчать симптомы.

Вплоть до настоящего времени в качестве иммунодепрессивных средств были разработаны циклоспорин А и РК506, и т.п. Однако функциональные механизмы этих иммунодепрессивных средств напоминают друг друга, а предметом для беспокойства является их хроническая токсичность. Таким образом, для достижения продолжительной жизни для генерации после пересадки органа, желателен другой тип иммунодепрессивного средства, который имел бы более низкую токсичность, иную химическую структуру, и таким образом можно было бы ожидать иной механизм действия.

Обнаружено, что встречающиеся в природе серусодержащие гликолипиды обладают фармацевтической активностью, такой как противораковое действие (8айага е! а1., Βπΐίδΐι 1оигпа1 о£ Сапсег, 75(3), 324-332 (1997)); ингибирующей активностью в отношении ДНКполимеразы (Μίζιΐ51ιίη;·ι е! а1.. Вюсйетка1 Рйагтасо1оду. 55, 537-541 (1998), 0111а е! а1. СИеписа1 & Рйагтасеийса1 Ви11е1т, 46(4), (1998)) и ВИЧ-подавляющим действием (Национальная патентная публикация № 5-501105). Однако пока не обнаружено, что серусодержащий гликолипид, в частности, производное сульфохиновозилдиацилглицерина, обладает иммунодепрессивной активностью.

Описание изобретения

Целью настоящего изобретения является создание нового иммунодепрессивного средства. Более конкретно, целью настоящего изобретения является предоставление иммунодепрессивного средства, демонстрирующего низкую токсичность и применимость для длительного введения, а также высокую иммунодепрессивную активность.

Настоящие изобретатели провели исследования для достижения вышеуказанной цели. В результате они обнаружили, что специфические производные сульфохиновозилдиацилглицерина имеют заметную иммунодепрессивную активность, и осуществили настоящее изобретение. Настоящее изобретение относится к иммунодепрессивному средству, содержащему в качестве активного ингредиента, по меньшей мере, одно соединение, выбранное из группы, состоящей из соединений, представленных формулой (1) н Н0-5-С-Н

О/¹----О Н Н Н

К?^Н ^-0-6—С-—с—н

ОН'““| Н 0^192^^101

ОН (1) в которой К₁₀₁ и К₁₀₂ представляют, независимо, ацильный остаток высшей жирной кислоты, и их фармацевтически приемлемых солей.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 показывает взаимосвязь между концентрацией соединения (8ОЛС 3), представленного формулой (1), и иммунодепрессивной активностью.

Фиг. 2 показывает взаимосвязь между концентрацией соединения (8ОЛС 5), представленного формулой (1), и иммунодепрессивной активностью.

Фиг. 3 показывает взаимосвязь между концентрацией соединения (8ОЛС 7), представленного формулой (1), и иммунодепрессивной активностью.

Фиг. 4 показывает взаимосвязь между концентрацией соединения (8ОЛС 9), представленного формулой (1), и иммунодепрессивной активностью.

Наилучший способ осуществления изобретения

В описании термин атомы углерода защитной группы относится к числу атомов углерода с учетом того, что защитная группа является незамещенной. Более конкретно, когда группа, представленная В⁶, представляет замещенную алкильную группу, число атомов углерода в ней является числом атомов углерода в самой алкильной группе, а число атомов углерода заместителя алкильной группы не учитывается. Такие же условия применимы к случаю, когда защитная группа является иной, чем алкильная группа.

Прежде всего следует пояснить более конкретно активный ингредиент, содержащийся в иммунодепрессивном средстве настоящего изобретения, т.е. производное сульфохиновозилдиацилглицерина, представленное формулой (1)

9 н НО-5-С-Н
о/—		н	н	н
	>	νν-Ο--С--	-σ-	—с—н
он**”“	т он	н	οκ	102ОК101	(П

в которой В₁₀₁ и В₁₀₂ представляют, независимо, ацильный остаток высшей жирной кислоты.

В формуле (1) В₁₀₁ представляет ацильный остаток высшей жирной кислоты. Жирные кислоты, дающие ацильный остаток, представленный В₁₀₁, включают насыщенные или ненасыщенные высшие жирные кислоты с линейными или разветвленными цепями.

Ацильные остатки высших жирных кислот с линейными или разветвленными цепями, представленные В₁₀₁, включают группы, представленные В-С(=О), в которых В представляет алкильную или алкенильную группу с 13 или более атомами углерода. Число атомов углерода алкильных или алкенильных групп, представленных в В-С(=О) символом В, равно, предпочтительно, 13 или более и 25 или менее, и более предпочтительно, равно нечетному числу в пределах 15-25. Это является следствием того что, если число атомов углерода превышает 25, стоимость производства увеличивается. В формуле (1) В₁₀₂ имеет те же значения, что и В₁₀₁. В₁₀₁ и В)₀₂ могут быть одинаковыми или различными. Однако, с точки зрения легкости получения, они предпочтительно являются одинаковыми.

Сахарный каркас сульфохиновозида в формуле (1) может иметь лодкообразную или кресловидную конформацию. Однако конформация кресла предпочтительна ввиду стабильности. Абсолютная конфигурация углерода (асимметрического углерода) в положении 2 глицериновой группы может представлять или 8- или В-конфигурацию.

Связь между сульфохиновозидом и глицерином является или α-или β-связью. Однако, судя по результатам анализа на иммунодепрес сивную активность с использованием культивированных клеток, предпочтительна β-связь.

Производные сульфохиновозилдиацилглицерина настоящего изобретения можно получить по способу от стадии А до стадии I в соответствии со следующей реакционной процедурой.

занную с углеродом С1 Ό-глюкозы, превращают в 2-пропенильную группу. (Стадия В) Защищают гидроксильную группу у углерода С6 глюкозы. (Стадия С) Защищают гидроксильные группы, связанные с углеродами С2, С3 и С4 глюкозы. (Стадия Ό) Снимают защиту ранее защищенной защитной группой группы у углерода С6. (Стадия Е) Гидроксильную группу, связанную с углеродом С6, замещают группой (например, алкилсульфонилоксигруппой или арилсульфонилоксигруппой), которую можно превратить в карбонилтиогруппу. (Стадия Е) Углерод С6 превращают в карбонилтиогруппу. (Стадия О) 2-Пропенильную группу, связанную с углеродом С1, превращают в диол. (Стадия Н) Каждую из гидроксильных групп полученного таким образом диола этерифицируют нужной высшей жирной кислотой. (Стадия I) Карбонилтиогруппу у углерода С6 превращают в сульфонатную соль. (Стадия I) Снимают защиту у защищенных защитными группами углеродов С2, С3 и С4 полученной сульфонатной соли. В результате можно получить соль производного сульфохиновозилдиацилглицерина настоящего изобретения. Полученную таким образом соль подвергают титрованию кислотой, такой как хлористо-водородная кислота, получая производное сульфохиновозилдиацилглицерина настоящего изобретения.

Вышеуказанные стадии Л-1 далее будут пояснены подробнее.

На стадии А осуществляют 2пропенилирование посредством взаимодействия глюкозы с аллиловым спиртом в присутствии сильной кислоты, такой как трифторметансульфоновая кислота, обычно при температуре от комнатной до 100°С, предпочтительно от 80 до 90°С, в течение полусуток-двух суток. Однако время реакции меняется в зависимости от условий реакции.

На стадии В защищают гидроксильную группу, связанную с углеродом С6, и получают соединение, в котором с углеродом С6 связана -ОК⁶ (где К⁶ представляет алкильную или замещенную силильную группу).

В качестве соединения, способного защищать гидроксильную группу, можно использовать соединение, которое в качестве группы К⁶ может представлять алкильную или замещенную силильную группу.

Примеры алкильных групп, представленных К⁶, включают, предпочтительно, объемные и замещенные низшие алкильные группы. Заместители больших групп и замещенные алкильные группы включают метильные и фенильные группы. Конкретными примерами замещенной алкильной группы являются третбутильная и тритильная группы.

Когда группа, представленная К⁶, представляет замещенную силильную группу, примерами заместителей замещенной силильной группы являются низшие алкильные группы, предпочтительно, алкильные группы с 1-4 атомами углерода (например, метильная, этильная, изопропильная и трет-бутильная группы), и арильные группы, предпочтительно, арильные группы с 6 атомами углерода (например, фенильная группа). Замещенные силильные группы, представленные К⁶, включают, предпочтительно, тризамещенные силильные группы, и более предпочтительной является третбутилдифенилсилильная группа.

Когда необходимо получить соединение 3, в котором К⁶ представляет алкильную группу, защиту гидроксильной группы на стадии В можно осуществить добавлением соединения, представленного формулой К⁶-Х (в которой К⁶ представляет алкильную группу, определенную выше, и Х представляет атом галогена, такой как атом хлора), к раствору соединения 2 в органическом растворителе, таком как безводный пиридин, и взаимодействием смеси в растворе при комнатной температуре в присутствии катализатора, такого как п-диметиламинопиридин (ΌΜΑΡ). В качестве соединения К⁶-Х предпочтительно используют тритилхлорид ввиду стоимости производства и легкости взаимодействия.

Когда необходимо получить соединение 3, в котором К⁶ представляет замещенную силильную группу, в качестве соединения К⁶-Х используют, например, трет-бутилдифенилсилилхлорид, и реакцию осуществляют в присутствии катализатора, такого как имидазол, при комнатной температуре в течение полусуток - двух суток. Следует заметить, время реакции меняется в зависимости от условий реакции.

На стадии С защищают гидроксильные группы, связанные с углеродами С2, С3 и С4, и превращают их, соответственно, в -ОК¹, -ОК² и -ОК³, где К¹-К³ представляют, независимо, алкильную или замещенную силильную группу. Защиту указанных гидроксильных групп можно осуществить активированием гидридом натрия гидроксильных групп, связанных с углеродами С2, С3 и С4 соединения 3, растворенного в органическом растворителе, таком как Ν,Νдиметилформамид (ДМФ), и взаимодействием при комнатной температуре с соединением, способным защищать указанные гидроксильные группы.

В качестве соединения, способного защищать гидроксильные группы, можно использовать бензилбромид, п-метоксибензилбромид, трет-бутилдиметилсилилхлорид или триэтилсилилхлорид. Реакцию с использованием соединения, способного защищать гидроксильные группы, можно осуществлять в условиях реакции, подходящих для каждой защитной группы.

Снятие защиты связанной с углеродом С6 защитной группы на стадии Ό можно осуществлять взаимодействием раствора соединения 4 в органическом растворителе, таком как метанол, в присутствии катализатора, такого как птолуолсульфоновая кислота, в течение полусуток-одного дня при комнатной температуре. Время реакции меняется в зависимости от условий реакции.

На стадии Е к гидроксильной группе у углерода С6 соединения 5 присоединяют К⁴, т.е. алкилсульфонильную или арилсульфонильную группу, так что гидроксильная группа превращается в -ОК⁴ с образованием соединения 6.

Взаимодействие с образованием группы -ОК⁴ осуществляют добавлением соединения, содержащего алкилсульфонильную группу, или соединения, содержащего арилсульфонильную группу, к раствору соединения 5 в органическом растворителе, и осуществлением их реакции. Алкильные группы соединения, содержащего алкилсульфонильную группу, являются, предпочтительно, незамещенными алкильными группами, более предпочтительно - низшими алкильными группами, и еще более предпочтительно - алкильными группами с 1-2 атомами углерода (метильная и этильная группы). Соединение, содержащее алкилсульфонильную группу, может быть представлено К⁴-Х, где К⁴ представляет алкилсульфонильную группу, и Х представляет атом галогена. Конкретными примерами являются метансульфонилхлорид и этансульфонилхлорид.

С другой стороны, арильная группа соединения, содержащего арилсульфонильную группу, может включать незамещенные или замещенные арильные группы, предпочтительно, арильные группы с 6 атомами углерода (например, фенильную группу). В случае замещенной арильной группы примерами заместителей ее являются п-метильная группа и пметоксигруппа. Примеры соединений, содержащих арилсульфонильную группу, включают соединения Я⁴ -Х, в которых Я⁴ представляет арилсульфонильную группу, и Х представляет атом галогена. Конкретными примерами являются п-толуолсульфонилхлорид, п-метоксибензолсульфонилхлорид и бензолсульфонилхлорид.

Из соединений, содержащих алкилсульфонильную или арилсульфонильную группу, предпочтительно используют соединение, содержащее тозильную группу ввиду легкости проведения реакции.

В реакции на стадии Е в качестве органического растворителя можно использовать, например, пиридин или дихлорметан.

Указанную выше реакцию можно проводить, в зависимости от обстоятельств, в присутствии катализатора, такого как ИМАР, при комнатной температуре в течение от 2 ч до 1 суток. Время реакции меняется в зависимости от условий реакции.

На стадии Е сульфонилоксигруппу (-ОЯ⁴) соединения 6 заменяют карбонилтиогруппой, представленной формулой -8С(=О)Я⁵, в которой Я⁵ представляет атом водорода, алкильную или арильную группу.

В данной реакции соединению, способному к замещению алкилсульфонилокси- или арилсульфонилоксигруппы соединения 6 карбонилтиогруппой, дают возможность реагировать в органическом растворителе с образованием соединения 7. После этого данное соединение будет обозначаться как О-замещенное^-8замещенное соединение.

Примеры О-замещенного^-8-замещенного соединения включают соли щелочных металлов и соли щелочно-земельных металлов тиокарбоновой кислоты. Примерами тиокарбоновой кислоты являются тиомуравьиная кислота, низшие тиокарбоновые кислоты, предпочтительно, алифатические тиокарбоновые кислоты, каждая из которых имеет 1-5 атомов углерода в своей алифатической углеводородной части (например, тиоуксусная и тиопропионовая кислота) и ароматические тиокарбоновые кислоты, каждая с 6-10 атомами углерода в своей ароматической углеводородной части (например, тиобензойная кислота).

Щелочным металлом, образующим соль с тиокарбоновой кислотой, является калий и натрий. Щелочно-земельным металлом является магний и кальций.

Из вышеуказанных О-замещенных^-8замещенных соединений предпочтительно могут использоваться соли тиоуксусной кислоты, поскольку реакция может протекать стабильно, и атом серы можно легко окислять на более поздней стадии.

Примеры органического растворителя, используемого в реакции, включают спирт, например метанол, этанол и пропанол, Ν,Νдиметилформамид и диметилсульфоксид.

Вышеуказанную реакцию можно проводить обычно при температуре от комнатной до температуры кипения используемого растворителя, при перемешивании в течение 1 ч-1 суток. Время реакции меняется в зависимости от условий реакции.

Дигидроксилирование на стадии С можно осуществлять добавлением окислителя, такого как тетраоксид осмия, к раствору соединения 7 в смеси растворителей, такой как смесь третбутанола и воды, и затем взаимодействием полученной смеси в присутствии реокисляющего агента, такого как Ν-оксид триметил-амина, при комнатной температуре в течение 1 ч-3 суток. Время реакции меняется в зависимости от условий реакции.

С помощью этерификации на стадии Н можно получать производное сульфохиновозилдиацилглицерина с нужными высшими жирными кислотами, связанными с его глицериновым фрагментом через эфирную связь.

Данную реакцию можно осуществлять добавлением высшей жирной кислоты, соответствующей конечному продукту, к раствору соединения 8 в подходящем органическом растворителе, таком как дихлорметан, и затем взаимодействием в полученной смеси, если необходимо, в присутствии подходящего катализатора, такого как этилдиметиламинопропилкарбодиимид (ЕИСЦ-ИМАР.

В реакции на стадии Н, в качестве добавляемой кислоты, можно использовать высшую жирную кислоту, ацильная группа которой представляет группу, представленную Я₁₀₁ в формуле (1), т. е. насыщенную или ненасыщенную высшую жирную кислоту с линейной или разветвленной цепью.

В реакции на стадии Н соединение 9 получают в форме смеси диацилэфира и моноацилэфира. При этом данный диацилэфир представлен формулой (1) настоящего изобретения, в которой каждый из Я₁₀₁ и Я₁₀₂ представляет ацильный остаток добавляемой высшей жирной кислоты. При этом данный моноацилэфир содержит остаток добавляемой высшей жирной кислоты только в виде Я101. При реакции на стадии Н можно добавлять две или более жирных кислот, при желании. В данном случае полученная смесь содержит диацилэфиры, представленные формулой (1), в которой Я₁₀₁ и Я₁₀₂ являются одинаковыми или различными ацильными остатками, причем моноэфиры имеют различные ацильные остатки в виде К₁₀₁.

При необходимости смесь моноэфиров и диэфиров можно разделять друг от друга, например, хроматографией, и подвергать взаимодействию на следующей стадии I. Кроме того, получение моноэфира подавляют настолько, насколько возможно, установлением добавляемого количества жирной кислоты в 2-3 раза выше, чем количество соединения 8, в молях, с помощью чего можно получать преимущественно диэфир.

На стадии I превращение в сульфонатную соль можно осуществлять добавлением окислителя, например оксона (2КН8О₅, КН§0₄ и К₂§0₄), к раствору соединения 9 в органическом растворителе, забуференном уксусной кислотой и ацетатом калия, и последующим взаимодействием полученной смеси при комнатной температуре в течение полусуток-двух суток. Следует заметить, что время реакции меняется в зависимости от условий реакции.

Снятие на стадии 1 защиты защитными группами, связанными с углеродами у углеродов С2 и С4, можно осуществлять способом, подходящим для используемой защитной группы и ацильного остатка присоединенной высшей жирной кислоты. Например, когда защитной группой является бензильная группа, и каждый из К₁₀₁ и К₁₀₂ представляет ацильный остаток насыщенной высшей жирной кислоты, снятие защиты можно проводить с помощью взаимодействия раствора соединения 10 в органическом растворителе, таком как этанол, в присутствии катализатора, такого как палладий на активированном угле, в атмосфере водорода при комнатной температуре. Кроме того, когда, по меньшей мере, один из ацильных остатков высших жирных кислот, представленный К₁₀₁ и К₁₀₂, представляет остаток ненасыщенной высшей жирной кислоты, можно использовать способ снятия защиты, подходящий для используемой защитной группы и способный к сохранению двойной связи ненасыщенной высшей жирной кислоты. Например, когда защитная группа является силильной группой, снятие защиты можно проводить с использованием кислотного катализатора (например, трифторуксусной кислоты).

Следует заметить, глюкоза исходного вещества обычно принимает в растворе α- и βаномерную конфигурацию. Следовательно, продукт на каждой стадии получается в виде смеси α- и β-аномеров. Смесь можно разделить на α- и β-аномеры с помощью хроматографии.

Перед стадией В, если осуществляют стадию взаимодействия соединения 2 с бензальдегидом с образованием бензилидена, можно селективно кристаллизовать α-аномер и с помощью этого отделить его. Кроме того, если перед 2-пропенилированием на стадии А к углероду

С1 присоединяют галоген, такой как бром, пропенильную группу можно ввести в βконфигурацию в более поздней реакции. Данным образом можно селективно синтезировать β-аномеры.

Иммунодепрессивное средство настоящего изобретения содержит в качестве активного ингредиента, по меньшей мере, одно соединение, выбранное из группы, состоящей из производных сульфохиновозилдиацилглицерина настоящего изобретения, представленных формулой (1), и их фармацевтически приемлемых солей. Примерами фармацевтически приемлемых солей, используемых в иммунодепрессивном средстве настоящего изобретения, являются, но не ограничиваются ими, соли с одновалентным катионом, таким как ион натрия или калия. Далее соединения группы, состоящей из производных сульфохиновозилдиацилглицерина и их фармацевтически приемлемых солей, иногда называются иммунодепрессивным веществом настоящего изобретения.

Примеры производного сульфохиновозилдиацилглицерина, содержащегося в иммунодепрессивном веществе настоящего изобретения в качестве активного ингредиента, включают изомер, в котором хиновоза связана с глицерином с α- и β-конфигурацией, и изомер, имеющий асимметрический углерод - углерод С2 глицеринового фрагмента. Иммунодепрессивное вещество настоящего изобретения может включать указанные изомеры отдельно или в виде сочетания двух или более типов изомеров, если они не влияют отрицательно на активность иммунодепрессивного вещества.

Иммунодепрессивное вещество настоящего изобретения можно вводить перорально или парентерально. Иммунодепрессивное вещество настоящего изобретения можно сочетать, например, с фармацевтически приемлемым эксципиентом или разбавителем, в зависимости от способа введения, посредством чего образуется лекарственная композиция.

Формы средства, подходящие для перорального введения, включают твердые, полутвердые, жидкие и газообразные формы. Конкретные примеры включают, но не ограничиваются ими, таблетки, капсулы, порошки, гранулы, растворы, суспензии, сиропы, эликсиры.

Для того, чтобы ввести иммунодепрессивное вещество в состав таблеток, капсул, гранул, растворов или суспензий, вещество смешивают со связующим веществом, дезинтегрирующим агентом и/или смазывающим веществом и, при необходимости, полученную смесь смешивают известным способом с разбавителем, буферным веществом, смачивающим веществом, консервантом и/или корригентом. Примерами связующего вещества являются кристаллическая целлюлоза, производные целлюлозы, кукурузный крахмал и желатин. Примеры дезинтегрирую11 щих агентов включают кукурузный крахмал, картофельный крахмал и натрийкарбоксиметилцеллюлозу. Примерами смазывающего вещества являются тальк и стеарат магния. Кроме того, также можно использовать добавки, такие как лактоза, постольку, поскольку они обычно используются.

Кроме того, иммунодепрессивное вещество настоящего изобретения можно вводить в форме аэрозоля или средства для ингаляции, которое получают путем загрузки активного вещества в жидкой форме или форме тонкоизмельченного порошка вместе с газообразным или жидким распыляющим агентом, и, при необходимости, с известным вспомогательным веществом, таким как смачивающий агент, в неопрессованный контейнер, такой как аэрозольный контейнер или распылитель лекарственного средства. В качестве распыляющего средства можно использовать сжатый газ, например, дихлорфторметан, пропан или азот.

Для парентерального введения иммунодепрессивное вещество настоящего изобретения можно вводить путем инъекции, чрескожно, ректально или внутриглазным способом.

Для введения путем инъекции иммунодепрессивное вещество настоящего изобретения можно инъецировать, например, подкожно, внутрикожно, внутривенно или внутримышечно. Препарат для инъекции можно получить растворением, суспендированием или эмульгированием иммунодепрессивного вещества настоящего изобретения в водном или неводном растворителе, таком как растительное масло, синтетический глицирид жирной кислоты, эфир высшей жирной кислоты или пропиленгликоль, известным способом. При желании, в препарат можно добавлять обычные добавки, такие как солюбилизирующий агент, осморегулирующий агент, эмульгатор, стабилизатор или консервант.

Для введения иммунодепрессивного вещества настоящего изобретения в состав растворов, суспензий, сиропов или эликсиров можно использовать фармацевтически приемлемый растворитель, такой как стерилизованная вода для инъекций или нормализованный физиологический раствор.

При чрескожном введении иммунодепрессивное вещество настоящего изобретения можно вводить в форме мази, эмульсий, паст, пластырей, линиментов, лосьонов, суспензий, в соответствии с состоянием кожи, подвергаемой лечению.

Мази можно получать известным способом, смешением иммунодепрессивного вещества настоящего изобретения с гидрофобной основой, такой как вазелин или парафин, или гидрофильной основой, такой как гидрофильный вазелин или макроголь. В состав можно вводить обычно эмульгаторы и другие чрескожные агенты.

Для ректального введения можно использовать суппозиторий. Суппозитории можно получать смешением иммунодепрессивного вещества настоящего изобретения с эксципиентом, который может плавиться при температуре тела, но является твердым при комнатной температуре, таким как масло какао, карбовакс или полиэтиленгликоль, и формованием полученного материала известным способом.

Для внутриглазного введения можно назначать офтальмические препараты, такие как глазные капли и глазные мази. Глазные капли получают растворением или суспендированием иммунодепрессивного вещества настоящего изобретения в водном растворителе, таком как стерилизованная вода, при необходимости, с добавлением консервантов, буферных веществ и поверхностно-активных веществ.

Для получения фармацевтического препарата иммунодепрессивное вещество настоящего изобретения можно использовать вместе с фармацевтически приемлемым соединением, обладающим другой активностью.

Дозу иммунодепрессивного вещества настоящего изобретения можно устанавливать или доводить соответствующим образом в соответствии с формой для введения, способом введения, степенью или стадией заболевания и т.п. Например, при пероральном введении доза иммунодепрессивного вещества может составлять 1-100 мг на кг массы тела в сутки, предпочтительно - 1-10 мг на кг массы тела в сутки. В случае введения путем инъекции доза иммунодепрессивного вещества может составлять 1-50 мг на кг массы тела в сутки, предпочтительнее 1-5 мг на кг массы тела в сутки. В случае чрескожного введения доза иммунодепрессивного вещества может быть равной 1-100 мг на кг массы тела в сутки, предпочтительнее - 1-10 мг на кг массы тела в сутки. В случае ректального введения доза иммунодепрессивного вещества может составлять 1-50 мг на кг массы тела в сутки, предпочтительнее -1-5 мг на кг массы тела в сутки. В случае внутриглазного введения примерно 0,01-3% раствор иммунодепрессивного вещества можно применять по каплям несколько раз в день. Однако дозы не ограничиваются указанными здесь.

Примеры

Настоящее изобретение теперь будет описано с помощью примеров. Однако настоящее изобретение не ограничивается приведенными примерами.

Ниже приводится пример синтеза βпроизводного сульфохиновозилдиацилглицерина в качестве примера активного ингредиента, используемого в иммунодепрессивном веществе настоящего изобретения.

Пример 1.

Стадия а. 2,3,4,6-Тетра-О-ацетил-О-глюкопиранозилбромид (II).

К 400 мл уксусного ангидрида при 0°С добавляют по каплям 2,4 мл 60% перхлорной кислоты. После того, как раствор достигает комнатной температуры, добавляют при перемешивании в течение примерно 30 мин 100 г (0,56 моль) Ό-глюкозы, при поддержании температуры раствора при 30-40°С. После охлаждения реакционного раствора до 20°С добавляют 30 г (1,0 моль) красного фосфора. При поддержании температуры раствора при 20°С или ниже добавляют по каплям 180 г (2,3 моль) брома и затем 36 мл воды. После стояния полученной смеси при комнатной температуре в течение 2 ч к ней добавляют 300 мл холодного хлороформа. Реакционный раствор фильтруют через воронку со стекловатой, помещенной на дне. Фильтрат выливают в холодную воду (800 мл) и хлороформный слой отделяют с помощью делительной воронки. Водный слой экстрагируют 50 мл хлороформа. Хлороформные слои объединяют и промывают холодной водой (300 мл). Полученный хлороформный слой выливают в 500 мл насыщенного раствора гидрокарбоната натрия и тщательно встряхивают в делительной воронке. Полученный хлороформный слой извлекают, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме, получая кристаллическое вещество. Полученное кристаллическое вещество растирают в ступке со смесью петролейный эфир/диэтиловый эфир (2:1) и отфильтровывают. Сырое кристаллическое вещество сушат в вакууме и перекристаллизовывают из холодного диизопропилового эфира. В результате получают чистые кристаллы (выход

152,6 г, 0,37 моль, 66,7%).

Т.пл. 88-90°С, величина КГ 0,338 (гексан:этилацетат=4:1).

Стадия Ь. 2,3,4,6-Тетра-О-ацетил-1-О-(2пропенил)-3-О-глюкоза (III).

В 100 мл аллилового спирта растворяют 16,7 г (40,6 ммоль) соединения (II) и к раствору добавляют 10,0 г (39,6 ммоль) цианида ртути. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционный раствор концентрируют в вакууме, остаток встряхивают со 100 мл хлороформа и холодной воды в делительной воронке и отделяют хлороформный слой. После сушки хлороформного слоя над безводным сульфатом натрия, фильтрования и концентрирования в вакууме полученный сироп растворяют в холодном диизопропиловом эфире. К полученному раствору добавляют небольшое количество кристаллов затравки и раствор охлаждают льдом. В результате получают кристаллы (выход 12,6 г, 32,5 ммоль, 80%).

Т.пл. 77-81°С, величина КГ 0,282 (бензол: этилацетат=4:1).

Стадия с. 1-О-(2-Пропенил)-3-Б-глюкоза (IV).

Соединение (III) (30,3 г, 78,1 ммоль) растворяют в 120 мл метанола. К раствору при перемешивании добавляют по каплям небольшое количество 28% раствора метоксида натрия в метаноле. Реакционную смесь оставляют реагировать при комнатной температуре на 4 ч, нейтрализуют 0,1 N соляной кислотой, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют, кон центрируют в вакууме, и остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (хлороформ :метанол=4:1). В результате получают бес цветное и прозрачное маслянистое вещество (выход 15,8 г, 71,8 ммоль, 91,9%).

Величина КГ метанол=4:1).

АсО~^

АсО (Ш)

Стадия б.

0,407 (хлороформ:

С но (IV)

-О-(2-Пропенил)-6-О трифенилметил-З-О-глюкоза (V).

Соединение (IV) (15,8 г, 71,8 ммоль) растворяют в 120 мл безводного пиридина. К раствору добавляют 23,4 г (83,9 ммоль) тритилхлорида и 0,1 г (0,82 ммоль) пдиметиламинопиридина (ΌΜΑΡ). Реакционная смесь реагирует в течение 36 ч при комнатной температуре и перемешивании. Затем реакцию гасят добавлением 300 мл холодной воды и смесь экстрагируют этилацетатом (3х300 мл). Полученные органические слои объединяют, нейтрализуют 1,0 N соляной кислотой до рН 4, промывают рассолом (2х300 мл), сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют, концентрируют в вакууме и остаток очищают флэшхроматографией на силикагеле (дихлорметан: метанол=20:1). В результате получают светлое желтоватое маслянистое вещество (выход

28,7 г, 62,1 ммоль, 86,5%). Величина КГ 0,306 (хлороформ:метанол=19:1).

Стадия е. 2,3,4-Три-О-бензил-1-О-(2пропенил)-6-О-трифенилметил-З-О-глюкоза (VI).

В реакционный сосуд помещают 80% гидрид натрия (3,2 г, 133 ммоль), диспергированный в минеральном масле, и тщательно промывают безводным гексаном (50 мл). После удаления гексана к полученной суспензии при охлаждении льдом постепенно добавляют 14,2 г (30,7 ммоль) соединения (V), растворенного в сухом Ν,Ν-диметилформамиде. Через 15 мин реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и проводят реакцию в течение 1 ч при пе ремешивании.

Затем к реакционной смеси, также при охлаждении льдом, добавляют 21,6 г (126 ммоль) бензилбромида. Через 15 мин реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и проводят реакцию в течение 3 ч при перемешивании. Затем к реакционной смеси добавляют 20 мл метанола и 30 мл холодной воды для гашения реакции. Реакционную смесь экстрагируют этилацетатом (3х50 мл). Органические слои объединяют, промывают рассолом (2х100 мл), сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют, концентрируют в вакууме и остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат=10:1). В результате получают светлое желтоватое маслянистое вещество (выход 21,6 г, 29,5 ммоль, 96,1%). Величина РГ 0,410 (гексан:этилацетат=4:1).

Стадия ί. 2,3,4-Три-О-бензил-1-О-(2пропенил)-3-Э-глюкоза (VII).

В 150 мл метанола растворяют соединение (VI) (21,6 г, 29,5 ммоль) и добавляют 2,80 г (14,7 ммоль) моногидрата п-толуолсульфоновой кислоты. Реакция в растворе протекает в течение ночи при перемешивании. Затем реакцию гасят добавлением 100 мл холодной воды и смесь экстрагируют этилацетатом (3х200 мл). Органические слои объединяют, промывают рассолом (2 х 300 мл), сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют, концентрируют в вакууме и остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат=4:1). В результате получают белое кристаллическое вещество (выход 9,0 г, 18,4 ммоль, 62,4%).

Т.пл. 80-82°С.

Величина РГ 0,338 (гексан:этилацетат=4:1). [а]_с=+0,4° (с 5,50 СНС1₃).

Ή ЯМР (300 МГц, СПСР-ТМС. δ): 7,36-

7,23 (15Н, м, Аг), 6,02-5,89 (1Н, м, -СН=СН₂),

5,34 (1Н, дд, 1= 1,5 и 17,2, -СН=СН₂), 5,22 (1Н, дд, 1=1,4 и 10,4, -СН=СН₂), 4,95 (1Н, д, 1=10,9, Аг-СНз), 4,94 (1Н, д, 1=10,9, Аг-СН₂), 4,86 (1Н, д, 1=10,9, Аг-СН₂), 4,81 (1Н, д, 1=10,9, Аг-СН₂),

4,73 (1Н, д, 1=10,9, Аг-СН₂), 4,64 (1Н, д, 1=10,9, Аг-СНз), 4,50 (1Н, д, 1=7,8, Н-1), 4,43-4,13 (2Н, м, -О-СН₂-СН=СН₂), 3,88-3,34 (6Н, м, Н-2; Н-3; Н-4; Н-5 и Н-6а,Ь)

Стадия д. 2,3,4-Три-О-бензил-1-О-(2-пропенил)-6-О-(4-толилсульфонил)-3-Э-глюкоза (VIII).

В 200 мл безводного пиридина растворяют 9,80 г (20,0 ммоль) соединения (VII) и затем добавляют 24,4 мг (0,2 ммоль) ОМАР и 11,4 г (60,0 ммоль) п-толуолсульфонилхлорида. Проводят реакцию в растворе при комнатной температуре и перемешивании в течение ночи. Затем реакцию гасят добавлением 300 мл холод ной воды, и смесь экстрагируют этилацетатом (3х200 мл). Полученные органические слои объединяют, нейтрализуют до рН 4 1,0 N и 0,1 N соляной кислотой, промывают рассолом (2х300 мл), сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют, концентрируют в вакууме и остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат=4:1). В результате получают белое кристаллическое вещество (выход 9,00 г, 14,0 ммоль, 70,0%).

Т.пл. 111-112°С. Величина РГ 0,295 (гексан:этилацетат=4:1).

Ή ЯМР (300 МГц, СИСР-ТМС. δ): 7,77 (2Н, д, 1=8,2, Н в Τδ МЕ), 7,31-7,25 (15Н, м, Аг),

7,19-7,16 (2Н, м, Н в Τδ 8О₂), 5,98-5,85 (1Н, м, -СН=СН₂), 5,35-5,19 (2Н, м, -СН=СН₂), 4,92 (2Н, д, 1=10,9, Аг-СНг), 4,81 (1Н, д, 1=10,8, Аг-СН₂), 4,75 (1Н, д, 1=10,9, Аг-СНг), 4,68 (2Н, д, 1=10,9, Аг-СН₂), 4,48 (1Н, д, 1=10,8, Аг-СНг), 4,39 (1Н, д, 1=7,8, Н-1), 4,34-3,38 (8Н, м, Н-2; Н-3; Н-4; Н5 и Н-6а,Ь и -О-СН₂-СН=СН₂), 2,42 (3Н, с, Т8 СН₃)

Стадия 11. 2,3,4-Три-О-бензил-1-О-(2пропенил)-6-дезокси-6-ацетилтио-3-Э-глюкоза (IX).

В 250 мл безводного этанола растворяют 9,00 г (14,0 ммоль) соединения (VIII) и затем добавляют 4,80 г (42,0 ммоль) тиоацетата калия. Реакцию в растворе проводят при кипячении с обратным холодильником при перемешивании в течение 3 ч. Затем реакцию гасят добавлением 300 мл холодной воды и смесь экстрагируют этилацетатом (3х200 мл). Органические слои объединяют, промывают рассолом (2х300 мл), сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют, концентрируют в вакууме и остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат=10:1). В результате получают белое кристаллическое вещество (выход 6,60 г, 12,0 ммоль, 85,7%). Т.пл. 70-73°С, величина РГ 0,295 (гексан:этилацетат=4:1).

[а]_с=+0,267° (с 0,75 СНС1₃).

Ή ЯМР (300 МГц, СОС1₃+ТМС, δ): 7,35-

7,25 (15Н, м, Аг), 6,00-5,89 (1Н, м, -СН=СН₂),

5,35 (1Н, дд, 1=1,5 и 17,2, -СН-СН), 5,22 (1Н, дд, 1=1,3 и 10,4, -СН=СН₂), 4,95 (1Н, д, 1=10,9, Аг-СН₂), 4,93 (1Н, д, 1=10,8, Аг-СНз), 4,87 (1Н, д, 1=10,8, Аг-СНз), 4,78 (1Н, д, 1=10,9, Аг-СН₂),

4,71 (1Н, д, 1=10,9, Аг-СНз), 4,63 (1Н, д, 1=10,7, Аг-СН₂), 4,42 (1Н, д, 1=7,9, Н-1), 4,37-3,33 (7Н, м, Н-2; Н-3; Н-4; Н-5 и Н-6а и -О-СН₂-СН=СН₂),

2,96 (1Н, дд, 1=6,9 и 13,6, Н-6Ь), 2,34 (3Н, с, 8СОСН₃)

Τ5θΖ Ас5—

Βησ (ш) -* Βηο (IX)

Стадия ΐ. 3-О-(2,3,4-Три-О-бензил-6дезокси-6-ацетилтио-в-О-глюкопиранозил)глицерин (X).

В смеси трет-бутанола и Н₂О (4:1) растворяют 3,30 г (6,02 ммоль) соединения (IX) и затем добавляют 1,34 г (12,1 ммоль) дигидрата триметиламин-Ν-оксида и 1,7 мл 0,04 М раствора тетраоксида осмия в трет-бутаноле. Реакцию в растворе проводят при комнатной температуре и перемешивании в течение 3 суток. Затем добавляют 5,8 г активированного угля и затем реакционную смесь оставляют стоять при перемешивании в течение 1,5 ч. После фильтрирования с отсосом реакцию гасят добавлением 250 мл холодной воды и смесь экстрагируют этилацетатом (3х200 мл). Органические слои объединяют, промывают рассолом (2х300 мл), сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют, концентрируют в вакууме и остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат=1:1). В результате получают белое кристаллическое вещество (выход 1,79 г, 3,08 ммоль, 51,2%). Т.пл. 91-93°С, величина КГ 0,112 (гексан:этилацетат=1:1).

[а]_с=+18,0° (с 0,75, СНС1₃).

Ή ЯМР (300 МГц, СБС1₃+ТМС, δ): 7,35-

7,25 (15Н, м, Аг), 4,94-4,61 (6Н, м, Аг-СН₂), 4,38 (0,5Н, д, 1=7,8, Н-1 (К или 8)), 4,37 (0,5Н, д, 1=7,8, Н-1 (К или 8)), 3,83-3,37 (7Н, м, Н-2; Н-3; Н-4; Н-5 и Н-6а и -О-СНг-СН=СН₂), 2,96 (1Н, дд, 1=6,9 и 13,6, Н-6Ь), 2,34 (3Н, с, 8СОСН₃)

Стадия ф 3-О-(2,3,4-Три-О-бензил-6дезокси-6-ацетилтио-3-О-глюкопиранозил)-1,2ди-О-стеароилглицерин (XI).

В 100 мл дихлорметана растворяют 1,23 г (2,12 ммоль) соединения (X) и затем добавляют 1,30 г (6,79 ммоль) гидрохлорида 1-этил-3-(3диметиламинопропил)карбодиимида (ЕБС.Ч). 260 мг (2,13 ммоль) БМАР и 1,75 г (6,15 ммоль) стеариновой кислоты. Реакцию в растворе проводят при комнатной температуре и перемешивании в течение дня. Затем реакцию гасят добавлением 100 мл дихлорметана, реакционную смесь промывают рассолом (2х50 мл), сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют, концентрируют в вакууме и остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат=10:1^8:1). В результате получают белое некристаллическое твердое вещество (выход 2,10 г, 1,88 ммоль, 88,7%). Величина КГ 0,487 (гексан: этилацетат = 4:1).

[α]_ο=-21,3 (с 0,15, СНС1₃).

Ή ЯМР (300 МГц, СБС1₃+ТМС, δ): 7,34-

7,26 (15Н, м, Аг), 5,28 (1Н, м, 61у-Н-2), 4,92-4,60 (6Н, м, Аг-СН₂), 4,36 (0,5Н, д, 1=7,7, Н-1 (К или 8)), 4,35 (0,5Н, д, 1=7,8, Н-1 (К или 8)), 4,25-2,96 (10Н, м, Н-2; Н-3; Н-4; Н-5 и Н-6а, Ь и 61у-Н-3а, b, 2,37 (1,5Н, с, 8СОСН₃ (К или 8)), 2,35 (1,5Н, c, 8СОСН₃ (К или 8)), 2,32-2,24 (4Н, м, ОСОСН2), 1,65-1,58 (4Н, м, ОСОСН₂СН₂), 1,25 (56Н, ушир., -СН2-), 0,88 (6Н, т, 1=6,3, СН₃)

К₁₀₁ =Кю₂=стеароил

Стадия к. Натриевая соль 3-О-(2,3,4-три-Обензил-6-дезокси-6-сульфо-в-Б-глюкопиранозил)-1,2-ди-О-стеароилглицерина (XII).

В 50 мл уксусной кислоты растворяют 1,24 г (1,11 ммоль) соединения (XI) и затем добавляют 1,5 г ацетата калия и 1,55 г оксона (2КН8О₅, КН8О₄, К₂8О₄). Реакцию в растворе проводят в течение ночи при комнатной температуре и перемешивании. Затем реакцию гасят добавлением 100 мл холодной воды и смесь экстрагируют этилацетатом (5х50 мл). Органические слои объединяют, нейтрализуют насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (2х100 мл), промывают рассолом (2х100 мл), сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют, концентрируют в вакууме и остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (хлороформ:метанол=20:1 15:1). В результате получают белое некристаллическое твердое вещество (выход 773 мг, 0,677 ммоль, 61,0%). Величина КГ 0,288 (дихлорметан:метанол=10:1).

[а]_с=+4,8° (с 0,17, СНС1₃).

Ή ЯМР (300 МГц, СБС1₃+ТМС, δ): 7,29-

7,16 (15Н, м, Аг), 5,31 (1Н, м, 61у-Н-2), 4,91-4,56 (6Н, м, Аг-СН₂), 4,50 (1Н, д, 1=7,6, Н-1), 4,443,03 (10Н, м, Н-2; Н-3; Н-4; Н-5 и Н-6а, Ь и 61уН-1а, Ь и 61у-Н-3а, Ь), 2,62 (4Н, ушир., ОСОСН₂), 2,19-2,17 (4Н, ушир., ОСОСН₂СН₂),

1,49 (4Н, ушир., ОСОСН₂СН₂СН₂), 1,25 (52Н, ушир., -СН₂-), 0,88 (6Н, т, 1=6,3, СН₃) ^АсЬ--х ОК₁₀₂ N3038-^ ОК_!СР

ВпО (Я)^-*· ВпО (ХЦ)

К101=К102=стеароил

Стадия 1. Натриевая соль 3-О-(6-дезокси6-сульфо-в-Б-глюкопиранозил)-1,2-ди-Остеароилглицерина (XIII).

В 50 мл этанола растворяют 773 мг (0,677 ммоль) соединения (XII) и затем добавляют 2,0 г 10% палладия на активированном угле (Рб-С). После замещения атмосферы в колбе водородом проводят реакцию в растворе в течение ночи при комнатной температуре и перемешивании. Затем реакционную смесь фильтруют с отсасыванием с использованием целита, концентрируют в вакууме и остаток очищают флэшхроматографией на силикагеле (хлороформ: метанол=10:1 ^хлоро форм: метанол :вода= 70:30:4). В результате получают белое некристаллическое твердое вещество (выход 311 мг, 0,356 ммоль, 52,6%).

Величина КГ 0,402 (хлороформ :метанол:вода=65:25:4) [а]_с=-3,6° (с 0,59, СНС1₃:СН₃ОН:Н₂О=

70:30:4).

Ή ЯМР (300 МГц, СБС1₃+ТМС, δ): 5,28 (1Н, м, 61у-Н-2), 4,32 (1Н, д, 1=7,7, Н-1), 4,273,11 (10Н, м, Н-2; Н-3; Н-4; Н-5 и Н-6а, Ь и 61у19

Н-1а, Ь и О1у-Н-3а, Ь), 2,36-2,30 (4Н, м, ОСОСНД, 1,60 (4Н, м, ОСОСН₂СН₂), 1,27 (56Н, ушир., -СН₂-), 0,89 (6Н, т, 1=6,4, СН₃)

N»0,8^ н_ао,5-д ОК,₀₂

Впо ¢¢3 —► но 5<πη

К.₁₀₁=К₁₀₂=стеароил

Анализ 1. Реакция смешанной культуры лимфоцитов.

Лимфоциты, служащие в качестве стимулирующих клеток, и клетки-респондеры получают из крови, взятой у отдельных здоровых людей.

Затем клетки-респондеры отделяют от клеток лимфоцитов и получают одни Тлимфоциты.

Клетки-респондеры не обрабатывают. Стимулирующие клетки (10⁶/мл) обрабатывают 10 мкг/мл митомицина С для остановки клеточного роста. Затем стимулирующие клетки 4 раза промывают РВ8 (забуференный фосфатом физиологический раствор).

Затем клетки-респондеры инокулируют в количестве 10⁵ клеток на лунку, и затем добавляют испытываемые соединения (соединения 8ОАС> 3, 8ОАС> 5, 8ОАС> 7 и 8ОАС> 9, перечисленные в приведенной ниже таблице) в предварительно установленной концентрации. Реакционную смесь культивируют при 37°С в течение 1 ч. Затем добавляют стимулирующие клетки в количестве 10⁵ клеток на лунку. Смесь культивируют в СО₂-инкубаторе при 37°С в течение 4 суток. После инкубации проводят количественное определение пролиферирующей активности клеток-респондеров следующим образом. Сначала к клеткам-респондерам добавляют [³Н]тимидин и вводят в ядра клеток путем культивирования клеток в течение 12 ч. Затем определяют в клетках количество поглощенного [³Н]тимидина с помощью сцинтилляционного счетчика.

Соединение	·· οψ · но-^-с-н ----о у ? у >~о-с—с—с—н он^·'·^ А ОЯ,огОК|01 ОН	Связь между глюкозой и глицеридом
к101-	к102~
50Ά6 3	СН3(СНр)т 4со-	СНз(СНр)14СО-	а
80 АС 5	СН3(СН?)1ЙСО-	СНз(СН2)16СО-	а
50АС 7	СНз (СН2)]фСО-	СНз )14СО-	β
5САС 9	СН3(СН7)16со-	СНз(СН2)16со-	β

Результаты приводятся на фиг. 1-4.

Фиг. 1-4 показывают количества поглощенного [³Н]-тимидина, когда добавляют 8ОАС 3, 8ОАС 5, 8ОАС 7 и 8ОАС 9. Чем меньше количество поглощенного [³Н]-тимидина, тем выше иммунодепрессивная активность. На каждой фиг. 1-4 по вертикальной оси показана интенсивность радиоактивности, и по горизонтальной оси показана концентрация испытываемого вещества.

Как видно из фиг. 1-4, все испытываемые вещества обладают существенной иммунодепрессивной активностью. В частности, 8ОАС 9 обладает значительно более высокой иммунодепрессивной активностью, чем другие соединения.

Анализ 2. Испытание на отторжение кожного трансплантата.

Подготавливают крыс АС1 и крыс ЬЕ^ и подвергают ингаляционному наркозу эфиром. После удаления шерсти со спины каждой крысы АС1 с задней боковой части удаляют кожу (1х1 см) для образования раны с удаленной кожей и затем осуществляют гемостатическую обработку. С другой стороны, получают кусочек кожи (1х1 см) с хвоста каждой крысы ЬЕ^. Донорскую кожу накладывают на рану с удаленной кожей каждой крысы АС1 и пришивают нейлоновым шовным материалом 5-0. Затем на прооперированную часть накладывают марлю, и для ее защиты закрепляют на ней корсет резиновым бинтом. Такую операцию по пересадке кожи проводят таким же способом для всех десяти крыс АС1. Из десяти крыс АС1 пять крыс отбирают произвольно как контрольную группу, а остальных пять крыс классифицируют как экспериментальную группу, которой должны вводиться испытываемые вещества. Контрольной группе инъецируют интраперитонеально по 10 мл физиологического раствора ежедневно в течение пяти дней после операции. Экспериментальной группе ежедневно в течение пяти дней после операции инъецируют интраперитонеально по 10 мл раствора 8ОАС 9 в физиологическом растворе при концентрации 1 мг/мл таким же способом, как и контрольной группе.

На седьмой день после операции берут трансплантат для получения образца ткани. Затем осуществляют окрашивание Н-Е в соответствии с методом Еир1а с1 а1. (Т. Еиц1а, 8. Такайа8Ы, А. УадйтЫ. К. ЛшЬоте, N. 8а1о, Тгаи8р1аи1а1юи, νοί. 64, 922-925, 1997). Результаты оценивают гистологически.

В результате гистологических наблюдений подтверждается, что эпидермальный слой удален с дермы у всех пяти крыс контрольной группы, и происходит некроз эпидермиса. Напротив, в группе, которой вводили 8ОАС 9, некроз эпидермального слоя наблюдают у трех крыс из пяти. Однако у остальных двух крыс наблюдают успешное прилипание некоторых частей эпидермиса к дерме, даже если другие части эпидермального слоя частично удалены с дермы.

Авторы настоящего изобретения считают, что испытание на отторжение кожного трансплантата является наиболее точным и надежным способом оценки иммунодепрессивной активности. Считается, что отторжение происходит наиболее тяжело, когда проводят пересадку между крысами группы АС1 и крысами группы ЬЕ^, используемыми в данном испытании. Однако в таких строгих условиях в данном испытании активность подавления отторжения наблюдают у двух из пяти крыс. Этот факт пока21 зывает, что 5>ОЛС настоящего изобретения являются высокоэффективными в качестве иммунодепрессивных средств.

Кроме того, в течение испытания ни одна из крыс, которым вводили 5>ОЛС. не погибла от острой токсичности. Визуально не наблюдали ни снижения массы, ни аномалии физического состояния. Аномалии не наблюдали и в отношении основных органов при общих патологических испытаниях. Следовательно, показано, что иммунодепрессивные средства настоящего изобретения имеют исключительно низкую токсичность.

Из промышленно доступных иммунодепрессивных средств некоторые (например, ЕК506) известны как эффективные при испытаниях на подавление отторжения кожного трансплантата. Однако пока не сообщалось о высокоэффективных иммунодепрессивных средствах с низкой токсичностью.

группы, состоящей из соединений, представ ленных формулой (1)

О Н
НО-5-С-Н
о/—	°ч	н	н н
	>	νν>0--0-	—с—с—н $ 1 ΟΚΐ02θ^101
О1Г“	Г ОН	н

(1) в которой К.₁₀₁ и Р|₀₂ представляют независимо ацильный остаток высшей жирной кислоты, и их фармацевтически приемлемых солей.

2. Иммунодепрессивное средство по п.1, в котором соединение формулы (1) представлено формулой (2)

НО-е-С-Н У У

θ	—с—. А	—с--с—н ОК102ОЧ101
он*—Г
он			(2

в которой К.₁₀₁ и Р_|02 имеют значения, указанные для формулы (1).

Claims (1)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ