WO1998011084A1 - Antibiotische und antitumorale verbindung, herstellungsverfahren, mittel und dsm 11 071 - Google Patents

Antibiotische und antitumorale verbindung, herstellungsverfahren, mittel und dsm 11 071 Download PDF

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WO1998011084A1 PCT/EP1997/004954 EP9704954W WO9811084A1 WO 1998011084 A1 WO1998011084 A1 WO 1998011084A1 EP 9704954 W EP9704954 W EP 9704954W WO 9811084 A1 WO9811084 A1 WO 9811084A1
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    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Definitions

  • Ant biotic and antitumor compound manufacturing process, agent and DSM 11 071
  • the invention relates to a compound with antibiotic and antitumoral activity of the formula:
  • the invention relates to a compound (Ratjadon B) of the empirical formula 2 7 H 38 O5 and with the following parameters: 1 H and 13 C NMR spectrum according to Table 1,
  • ny 2964 (s), 2919 (s), 2880 (s), 1720 (vs), 1382 (s), 1249 (s), 1078 (s), 1058 (s), 1036 (s), 1013 (s), 991 (s) and 968 (s) cm “1 .
  • the invention relates to a compound with antibiotic and antitumoral activity, which can be obtained by:
  • the compound to be isolated can be obtained by working in stage (a) with Amberlite R XAD-16 as adsorber resin. In step (e) you can chromatograph with Nucleosil R -100 RP 18.
  • a method for obtaining a compound according to the invention is provided, which is characterized in that
  • Sorangium cellulosum belongs to the order of the Myxococcales, subordination Sorangineae, family Polyangiaceae.
  • the Sorangium cellulosum So ce477 production strain was isolated in 1989 from a soil sample from Victoria Falls, Colombia. The strain is deposited with the German Collection of Microorganisms (DSM) under DSM 11 071.
  • Stock culture and morphological description Stock cultures are kept on VY / 2 agar (0.5% baker's yeast according to fresh weight; 0.1% C Cl2 x 2H2O; 1.5% agar; pH 7.2) or on filter paper over ST21 agar (0.1% KNO3; 0.1% MgS0 4 x 7H 2 0; 0.1% CaCl 2 2H 2 0; 0.1% K 2 HP0; 0.01% MnS0 4 x 7H 2 0; 0.02 % FeCl 3 ; 0.002% Yeast extract; Standard trace element solution, e.g. B. after G. Drews, microbiological internship, 2nd edition, p. 6, Berlin, Springer Verlag (1974); 1% agar. The plates are incubated at 30 ° C.
  • the stem On filter paper over mineral salt agar or on yeast agar (VY / 2-agar) the stem forms large, bright orange swarm colonies with many yellow-orange to black-brown fruiting bodies.
  • the latter consist of small sporangioles with a diameter of 15 to 20 ⁇ m, which are densely packed in more or less large heaps; the piles usually measure between 50 and 150 ⁇ m in diameter.
  • the vegetative sticks have the shape typical of Sorangium: relatively coarse, dark cylindrical cylindrical sticks with broadly rounded ends, 3 to 5 ⁇ m long and 1 ⁇ m thick on average.
  • Ratjadon B As the main component. This substance inhibits the growth of numerous fungi and yeasts, the active ingredient was ineffective against all bacteria tested. The very strong effect on animal cell cultures is remarkable. An IC-50 against the Heia cell line KB3.1 of only 40 pg / ml indicates an anti-tumor effect of Ratjadon B.
  • the production medium can have the following composition (in g / 1 distilled water): soybean meal 2; Glucose (Maizena) 2; Starch (Maizena) 8; Yeast extract (Marcor) 2; CaCl x 2H 2 0 1; MgSO 4 x 7H 2 0 1; Ethylene diamine tetraacetic acid iron (III) sodium salt 0.008; HEPES 11.9.
  • the pH of the medium is adjusted to 7.2 before autoclaving. It is cultivated in 1 1 Erlenmeyer flask with 250 ml of the above medium and 2% XAD-16 adsorber resin (Rohm and Haas, Frankfurt).
  • Ratjadon B is produced during the logarithmic to the stationary growth phase and binds quantitatively to the adsorber resin. In absence XAD can isolate it from both the cells and the culture supernatant.
  • Ratjadon B 10.8 min. Yield of Ratjadon B: 17.3 mg
  • Ratjadon B C27H 38 ⁇ 5 (442) Structure: Fig. 1.
  • UV (methanol): lambda max (lg epsilon) 229 nm (4.57), 241 nm (sh; 4.52).
  • ny 2964 (s), 2919 (s), 2880 (s), 1720 (vs), 1382 (s), 1249 (s), 1078 (s), 1058 (s), 1036 (s ), 1013 (s), 991 (s), 968 (s).
  • the microorganism idendfied under 1. above was accompanied by:
  • the microorganism identified undcr 1 above was received by this International Depositarv Aulhonry on (date of original deposit) and a request to convert the original deposit to a deposit under the Budapest Treaty was received by it on (date of receipt of request for conve ⁇ ion).

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Abstract

Die Erfindung betrifft eine Verbindung mit antibiotischer und antitumoraler Aktivität der Formel (I). Ferner betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung sowie ein antibiotisches und ein antitumorales Mittel mit einem Gehalt an der Verbindung. Schließlich betrifft die Erfindung den Sorangium cellulosum Stamm DSM 11 071.

Description

Ant biotische und antitumorale Verbindung, Herstellungsverfahren, Mittel und DSM 11 071
Gemäß einer ersten Ausführungsform betrifft die Erfindung eine Verbindung mit antibiotischer und antitumoraler Aktivität der Formel :
Figure imgf000003_0001
Gemäß einer weiteren Ausführungsform betrifft die Erfindung eine Verbindung (Ratjadon B) der Summenformel 27H38O5 und mit den folgenden Parametern: 1H- und 13C-NMR-Spektrum gemäß Tabelle 1,
UV-Spektrum (Methanol): larnbdamax (lg epsilon) = 229 (4,57) und 241 (sh; 4,52) nm,
IR-Spektrum (KBr) : ny = 2964 (s) , 2919 (s) , 2880 (s) , 1720 (vs) , 1382 (s) , 1249 (s) , 1078 (s) , 1058 (s), 1036 (s), 1013 (s) , 991 (s) und 968 (s) cm"1.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform betrifft die Erfindung eine Verbindung mit anitbiotischer und antitumoraler Aktivität, dadurch gewinnbar, daß man
(a) Sorangium cellulosum Stamm So ce477 = DSM 11 071 in einem C- und N-Quellen sowie Mineralsalze enthaltenden wäßrigen Medium gegebenenfalls in Gegenwart eines Adsorberharzes kultiviert ,
(b) Ratjadon B,
(bl) sofern ohne Gegenwart eines Adsorberharzes kultiviert wurde, aus den Sorangium cell ulosum-Zellen und/oder dem Kulturmedium oder mit Essigsäureethylester extrahiert oder
(b2) sofern in Gegenwart eines Adsorberharzes kultiviert wurde, aus dem Adsorberharz mit Methanol eluiert, das Eluat einengt und mit Essigsäureethylester extrahiert,
(c) den Essigester abzieht und den öligen Rückstand in Methanol löst,
(d) die methanolische Lösung über Kieselgel filtriert und mit Methanol eluiert, (e) das methanolische Eluat einengt und an einer Cig-Umkehr- phase einer HPLC-Chro atographie mit einem Methanol/Wasser- Gemisch als Laufmittel unterwirft,
(f) Fraktionen mit einem Gehalt an Ratjadon B (Detektion: 230 nm) sammelt und Ratjadon B isoliert.
Die zu isolierende Verbindung kann dadurch gewinnbar sein, daß man in Stufe (a) mit AmberliteR XAD-16 als Adsorberharz arbeitet. Bei Stufe (e) kann man mit NucleosilR-100 RP 18 chromato- graphieren.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform gemäß der Erfindung wird ein Verfahren zur Gewinnung einer erfindungsgemäßen Verbindung vorgesehen, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man
(a) Sorangium cellulosum Stamm So ce477 = DSM 11 071 in einem C- und N-Quellen sowie Mineralsalze enthaltenden wäßrigen Medium gegebenenfalls in Gegenwart eines Adsorberharzes kultiviert ,
(b) Ratjadon B,
(bl) sofern ohne Gegenwart eines Adsorberharzes kultiviert wurde, aus den Sorangium cellulosum-Zellen und/oder dem Kulturmedium mit Essigsäureethylester extrahiert oder
(b2) sofern in Gegenwart eines Adsorberharzes kultiviert wurde, aus dem Adsorberharz mit Methanol eluiert, das Eluat einengt und mit Essigsäureethylester extrahiert,
(c) den Essigester abzieht und den öligen Rückstand in Methanol löst, (d) die methanolische Lösung über Kieselgel filtriert und mit Methanol eluiert,
(e) das methanolische Eluat einengt und an einer C^g-Umkehr- phase einer HPLC-Chromatographie mit einem Methanol/Wasser- Gemisch als Lauf ittel unterwirft,
(f) Fraktionen mit einem Gehalt an Ratjadon B (Detektion: 230 nm) sammelt und Ratjadon B isoliert.
Eine weitere Ausführungsform der Erfindung betrifft Sorangium cellulosum So ce477 = DSM 11 071.
Schließlich betreffen weitere Ausführungsformen der Erfindung eine antibiotisches Mittel mit einem Gehalt an einer erfindungsgemäßen Verbindung sowie ein antitumorales Mittel mit einem Gehalt an einer erfindungsgemäßen Verbindung.
Nachstehend wird die Erfindung durch experimentelle Daten näher erläutert .
Ratjadon B aus Sorangium cellulosum So ce477
Produktionsstamm: Sorangium cellulosum gehört zur Ordnung der Myxococcales, Unterordnung Sorangineae, Familie Polyangiaceae . Der Produktionsstamm Sorangium cellulosum So ce477 wurde 1989 aus einer Bodenprobe von den Victoria Falls, Zimbabwe, isoliert. Der Stamm ist bei der Deutschen Sammlung von Mikroorganismen (DSM) unter DSM 11 071 hinterlegt.
Stammkultur und morphologische Beschreibung: Stammkulturen werden gehalten auf VY/2-Agar (0,5 % Bäckerhefe nach Frischgewicht; 0,1 % C Cl2 x 2H2O; 1,5 % Agar; pH 7,2) oder auf Filterpapier über ST21-Agar (0,1 % KNO3 ; 0,1 % MgS04 x 7H20; 0,1 % CaCl2 2H20; 0,1 % K2HP0 ; 0,01 % MnS04 x 7H20; 0,02 % FeCl3 ; 0,002 % Hefeextrakt; Standard-Spurenelementlösung, z. B. nach G. Drews, Mikrobiologisches Praktikum, 2. Auflage, S. 6., Berlin, Springer Verlag (1974); 1 % Agar . Die Platten werden bei 30 °C bebrütet.
Auf Filterpapier über Mineralsalzagar oder auf Hefeagar (VY/2- Agar) bildet der Stamm große hell orange Schwarmkolonien mit vielen gelborange bis schwarzbraunen Fruchtkörpern. Letztere bestehen aus kleinen Sporangiolen von 15 bis 20 μm Durchmesser, die in mehr oder weniger großen Haufen dicht gepackt liegen; die Haufen messen meist zwischen 50 und 150 μm Durchmesser. Die vegetativen Stäbchen haben die für Sorangium typische Form: relativ derbe, im Phasenkontrastmikroskop dunkle, zylindrische Stäbchen mit breit abgerundeten Enden, im Mittel 3 bis 5 μm lang und um 1 μm dick.
Leistungen: Der Stamm So ce477 produziert Ratjadon B als Hauptkomponente. Diese Substanz hemmt das Wachstum zahlreicher Pilze und Hefen, gegen alle getesteten Bakterien war der Wirkstoff unwirksam. Bemerkenswert ist die sehr starke Wirkung gegenüber tierischen Zellkulturen. Eine IC-50 gegen die Heia Zelllinie KB3.1 von nur 40 pg/ml weist auf eine antitumorale Wirkung von Ratjadon B hin.
Produktion der Aktivitäten: Das Produktionsmedium kann folgende Zusammensetzung haben (in g/1 destilliertes Wasser) : Soyabohnenmehl 2; Glukose (Maizena) 2; Stärke (Maizena) 8; Hefeextrakt (Marcor) 2; CaCl x 2H20 1; MgS04 x 7H20 1; Ethylen- diamin-tetraessigsäure Eisen (III) -Natriumsalz 0,008; HEPES 11,9. Der pH-Wert des Mediums wird vor dem Autoklavieren auf 7,2 eingestellt. Kultiviert wird in 1 1 Erlenmeyerkolben mit 250 ml des obigen Mediums und 2 % XAD-16 Adsorberharz (Rohm und Haas, Frankfurt) . Die Kolben werden bei 30 °C auf einem Rundschüttler bei 180 U/m für 7 Tage inkubiert. Ratjadon B wird während der logarithmischen bis hin zur stationären Wachstumsphase produziert und bindet quantitativ an das Adsorberharz. In Abwesenheit von XAD kann es sowohl aus den Zellen als auch aus dem Kulturüberstand isoliert werden.
Hemmspektrum von Ratjadon B im Plattendiffusionstest .
Testorganismus
Phytophthora drechsleri DSMb 62679 Λfucor hiemaliε DSM 2655 Schizosaccharomyces po be Tüc 501 Al ternaria solani DSM 2954 Taphrina deformans DSM 4398
Figure imgf000008_0001
* Testblättchen (6 mm Durchmesser) mit 10 μg Ratjadon B
Deutsche Sammlung von Mikroorganismen, Braunschweig c Stammsammlung, Universität Tübingen
Isolierung von Ratjadon B
4,2 Liter Kulturmedium werden dreimal mit je 500 ml Essigester extrahiert. Die Essigesterphasen werden vereinigt und das Lösungsmittel wird abgezogen. Der braunrote ölige Rückstand wird in 10 ml Methanol gelöst und über 200 ml Kieselgel 60 (0,063 bis 0,2 mm Korngröße; 4 cm Säulenduchmesser) filtriert. Die ersten 100 ml Methanol -Eluat enthalten Ratjadon B.
Trennung der Komponenten
Präparative HPLC: Das Eluat wird auf ein Volumen von ca. 5 ml eingeengt und in mehreren Läufen durch präparative RP-HPLC getrennt (Säulenabmessungen: 250 x 20 mm; Säulenmaterial: RP 18, 100 Ä, 7 μ; Laufmittel: MeOH/H 0 70/30, Flußrate: 28 ml/min; Detektion: 230 nm) . Retentionszeit : Ratjadon B = 27 min.
Analytische HPLC:
(Säule: 125 x 2 mm, Nucleosil 120-5 C18, 5 μ; Laufmittel: linearer Gradient MeOH/H20 60/40 in 20 min auf MeOH/H20 80/20; Flußrate 0,3 ml/min; Detektion 230 nm) Retentionszeit: Ratjadon B = 10,8 min. Ausbeute an Ratjadon B: 17,3 mg
Charakterisierung:
Ratjadon B: C27H38θ5 (442) Struktur: Abb. 1.
UV (Methanol): lambdamax (lg epsilon) = 229 nm (4,57), 241 nm (sh; 4,52) .
IR (KBr) : ny = 2964 (s) , 2919 (s) , 2880 (s) , 1720 (vs) , 1382 (s) , 1249 (s) , 1078 (s) , 1058 (s) , 1036 (s) , 1013 (s), 991 (s) , 968 (s) .
^•H und 13C-NMR: s. Tabelle 1. Molmasse: (-)-FAB-MS (TEG) (negativ-Ion) [M-H] = 441,2675.
Literatur zu Ratjadon A:
1) D. Schummer, K. Gerth, H. Reichenbach, G. Höfle, Liebigs Ann, Chem., (1995) 685-688.
2) K. Gerth, D. Schummer, G. Höfle, H. Irschik, H. Reichenbach, J. Antibiot., 48 (1995) 973-976. Tabelle 1. NMR-Daten von Ratjadon B in CDC13
Η: 300 MHz; 13C: 150 MHz.
Figure imgf000010_0001
'Die Werte können getauscht werden. BUDAPEST TRJEATY ON THE INTERNATIONAL
RECOGNITION OF THE DEPOSIT OF MlCROOKOΛNlSMb
FOR THE PURPOSES OF PATENT PROCHDURE
INTERNATIONAL FORM
GBF - Gesellschaft für Biotechn. Forschung mbH Mascheroder Weg 1
38124 Braunschweig VIABIL1TY STATEMENT issued pursuam to Rulc 102 by the
INTERNATIONAL DEPOSITARY AUTHORΠΎ identified at the bottom of ihn page
I DEPOSITOR 11. IDENTIFICATION OF THE MICROORGANISM
ame GBF - Geseilschaf t für Acecsstσn number given by the
Biotechn . Forschung mbH INTERNATIONAL DEPOSITARY AUTHORπΥ Address Mascheroder Weg 1 DSM 11071
38124 Braunschweig Date of the deposit or the trai fer' 1996 -07-08
HI. VIABILΠΎ STATEMENT
The vlability of the microorganutn identified undcr II above was tested on 1996 - 07 - 08 * On that date, the said microorgamsm was
(X)' viable
( )' no longer viable
IV. CONDITIONS UNDER WHICH THE VIABILITY TEST HAS BEEN PERFORMED'
V. INTERNATIONAL DEPOSITARY AUTHORITY
DSMZ-DCUTSCHE SAMMLUNG VON Sιgnaturc(s) of person(s) havmg die power to rcprcsent the MIKROORGANISMEN UND ZELLKULTUREN GmbH International Depositary Audiomy or of aut onzed offιcial(s)
Address Mascheroder Weg Ib D-38I24 Braunschweig C ü e* >
Date: 1996-07-23
Indicate the date of original deposit or. where a new deposit or a transfer has bcen made. the mosi recent relevant date (date of die new deposit or date of die transfer) in the c ses referred to in Rulc 10.2(a) (ii) and (iii), refer to the most recent viability tcs
Mark with a crαss die applicable box.
Fill in if die Information has been requesled and if the results of die test were negative.
Form DSMZ-BP (sole page) 0196 BUDAPEST TREATY
RECOGNITION OF THE D
FOR THE PURPOSES
Figure imgf000012_0001
INTERNATIONAL FORM
GBF - Gesellschaft für Biotechn. Forschung mbH Mascheroder Weg 1
3B124 Braunschweig RECEIPT IN THE CASE OF AN ORIGINAL DEPOSIT issued pursuant to Rulc 7.1 by the INTERNATIONAL DEPOSITARY AUTHORπΥ identified at die botiom of ihis page
1. IDENTIFICATION OF THE MICROORGANISM
Idemificauon refcreπce given by die DEPOSITOR. Accession number given by d e INTERNATIONAL DEPOSITARY AUTHORITY.
So ce477
DSM 11071
ιι. sciENTiπc DESCRIPΠON AND/OR PROPOSED TAXONOMIC DESIGNAΠON
The microorganism idendfied under 1. above was accompanied by:
( ) a sctenlific description
(X ) a proposed taxonomic designaüon
(Mark widi a cross where applicable)
III. RECEIPT AND ACCEPTANCE
This International Depositary Au ionty acccpts die microorganism identified undcr I. above, which was received by it on 1996 - 07 - 06 (Date of die original deposit)1.
IV. RECEIPT OF REQUEST FOR CONVERSION
The microorganism identified undcr 1 above was received by this International Depositarv Aulhonry on (date of original deposit) and a request to convert die original deposit to a deposit under die Budapest Treaty was received by it on (date of receipt of request for conveπion).
V. INTERNATIONAL DEPOSITARY AUTHORITY
Name DSMZ-DUUTSCUL SAMMLUNG VON igiMiiurc ) ui μcrϊoiic.) iiavmt; Um power lo reptesenl U c
MIKROORGANISMEN UND ZELLKULTUREN GmbH International Deposiiary Authority or of audioπzed olTιcial(s)
Address. Mascheroder Weg lb D S 124 Braunschweig
Date: 19 96 - 07 - 23
' Where Rule 6.4 (d) applies, such daie is die date on which die Status of international depositary audionty was acquired. Form DSMZ-BP/4 (sole page) 0196

Claims

PATEN ANSPRÜCHE
1. Verbindung mit antibiotischer und antitumoraler Aktivität der Formel :
Figure imgf000013_0001
2. Verbindung (Ratjadon B) der Summenformel C27H38θ5 und mit den folgenden Parametern :
1H- und 13C-N R-Spektrum gemäß Tabelle 1, UV-Spektrum (Methanol): lambdamax (lg epsilon) = 229 (4,57) und 241 (sh; 4,52) nm,
IR-Spektrum (KBr) : ny = 2964 (s) , 2919 (s) , 2880 (s) , 1720 (vs) , 1382 (s) , 1249 (s) , 1078 (s) , 1058 (s) , 1036 (s), 1013 (s) , 991 (s) und 968 (s) cm-1.
3. Verbindung mit antibiotischer und antitumoraler Aktivität, dadurch gewinnbar, daß man
(a) Sorangium cellulosum Stamm So ce477 = DSM 11 071 in einem C- und N-Quellen sowie Mineralsalze enthaltenden wäßrigen Medium gegebenenfalls in Gegenwart eines Adsorberharzes kultiviert,
(b) Ratjadon B,
(bl) sofern ohne Gegenwart eines Adsorberharzes kultiviert wurde, aus den Sorangium cellulosum- Zellen und/oder dem Kulturmedium oder mit Essigsäureethylester extrahiert oder
(b2) sofern in Gegenwart eines Adsorberharzes kultiviert wurde, aus dem Adsorberharz mit Methanol eluiert, das Eluat einengt und mit Essigsäureethylester extrahiert,
(c) den Essigester abzieht und den öligen Rückstand in Methanol löst,
(d) die methanolische Lösung über Kieselgel filtriert und mit Methanol eluiert,
(e) das methanolische Eluat einengt und an einer C]_β-Umkehrphase einer HPLC-Chromatographie mit einem Methanol/Wasser- Gemisch als Laufmittel unterwirft, (f) Fraktionen mit einem Gehalt an Ratjadon B (Detektion: 230 nm) sammelt und Ratjadon B isoliert.
4. Verbindung nach Anspruch 3, dadurch gewinnbar, daß man in Stufe (a) mit AmberliteR XAD-16 als Adsorberharz arbeitet.
5. Verbindung nach Anspruch 3 oder 4, dadurch gewinnbar, daß man bei Stufe (e) mit NucleosilR-100 RP 18 chromatographiert .
6. Verfahren zur Gewinnung der Verbindung gemäß einem der Ansprüche 3 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß man
(a) Sorangium cellul osum Stamm So ce477 = DSM 11 071 in einem C- und N-Quellen sowie Mineralsalze enthaltenden wäßrigen Medium gegebenenfalls in Gegenwart eines Adsorberharzes kultiviert,
(b) Ratjadon B,
(bl) sofern ohne Gegenwart eines Adsorberharzes kultiviert wurde, aus den Sorangium cellulosum-Zellen und/oder dem Kulturmedium mit Essigsäureethylester extrahiert oder
(b2) sofern in Gegenwart eines Adsorberharzes kultiviert wurde, aus dem Adsorberharz mit Methanol eluiert, das Eluat einengt und mit Essigsäureethylester extrahiert,
(c) den Essigester abzieht und den öligen Rückstand in Methanol löst,
(d) die methanolische Lösung über Kieselgel filtriert und mit Methanol eluiert, (e) das methanolische Eluat einengt und an einer C^g-Umkehr- phase einer HPLC-Chromatographie mit einem Methanol/Wasser- Gemisch als Laufmittel unterwirft,
(f) Fraktionen mit einem Gehalt an Ratjadon B (Detektion: 230 nm) sammelt und Ratjadon B isoliert.
7. Sorangium cellulosum So ce477 = DSM 11 071.
8. Antibiotisches Mittel mit einem Gehalt an einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5.
9. Antitumorales Mittel mit einem Gehalt an einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5.
PCT/EP1997/004954 1996-09-10 1997-09-10 Antibiotische und antitumorale verbindung, herstellungsverfahren, mittel und dsm 11 071 Ceased WO1998011084A1 (de)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 123, no. 1, 3 July 1995, Columbus, Ohio, US; abstract no. 005217, SCHUMMER D ET AL: "Antibiotics from gliding bacterial. LXIII. Ratjadone: a new antifungal metabolite from Sorangium cellulosum" XP002050939 *
CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 123, no. 17, 23 October 1995, Columbus, Ohio, US; abstract no. 222498, GERTH K ET AL: "Antibiotics from gliding bacteria. 69. Ratjadon: a new antifungal compound from Sorangium cellulosum (Myxobacteria) production, physico-chemical and biological properties" XP002050938 *
GERTH K ET AL: "THE JERANGOLIDS: A FAMILY OF NEW ANTIFUNGAL COMPOUNDS FROM SORANGIUM CELLULOSUM (MYXOBACTERIA) PRODUCTION, PHYSICO-CHEMICAL AND BIOLOGICAL PROPERTIES OF JERANGOLID A", JOURNAL OF ANTIBIOTICS, vol. 49, no. 1, January 1996 (1996-01-01), pages 71 - 75, XP000655139 *
J. ANTIBIOT. (JANTAJ,00218820);95; VOL.48 (9); PP.973-6, GESELLSCHAFT BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG;ABTEILUNG NATURSTOFFBIOLOGIE; BRAUNSCHWEIG; D-38124; GERMANY (DE) *
LIEBIGS ANN. (LANAEM,09473440);95; (4); PP.685-8, GESELLSCHAFT FUR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH;ABTEILUNG NATURSTOFFCHEMIE; BRAUNSCHWEIG; D-38124; GERMANY (DE) *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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