DE10106647A1 - Ratjadon-Derivate zum Hemmen des Zellwachstums - Google Patents

Abstract

Es werden Ratjadon-Derivate angegeben, die den Zellzyklus von Tumorzellen in der G¶1¶-Phase anhalten können und/oder eine geringere Cytotoxizität als Ratjadon aufweisen. Es handelt sich hierbei um Ratjadon-Derivate der Formel DOLLAR F1 wobei R¶1¶, R¶2¶ und R¶3¶ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe, die aus H, CH¶3¶ und C¶2¶H¶5¶ besteht, R¶4¶ CH¶3¶ oder C¶2¶H¶5¶ ist, R¶5¶ H oder OH ist und R¶6¶ und R¶7¶ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe, die aus H, CH¶3¶, C¶2¶H¶5¶, n-C¶3¶H¶7¶, iso-C¶3¶H¶7¶, DOLLAR F2 und DOLLAR F3 besteht, und wobei C10 R-konfiguriert ist und C17 R-konfiguriert ist, wenn (a) C16 R-konfiguriert ist und gleichzeitig (b) weder R¶5¶ noch R¶6¶ noch R¶7¶ H ist. DOLLAR A Ferner wird ein Verfahren zur Synthese von Ratjadon-Derivaten angegeben.

Description

Die Erfindung betrifft Ratjadon-Derivate sowie Verfahren zum Herstellen dieser Substanzen.

Der Naturstoff Ratjadon (Formel I) wurde 1994 von Höfle et al. aus dem Myxobakterienstamm Sorangium cellulosum (So ce360) isoliert (D. Schummer, K. Gerth, H. Reichenbach, G. Höfle, Liebigs Ann., 1995, 685-688). Ratjadon inhibiert das Wachstum von HeLa-Zellen (KB 3.1) in niedriger Konzentration (IC₅₀ = 50 pg ml^-1, vgl. K. Gerth, D. Schummer, G. Höfle, H. Irschik, H. Reichenbach, J. Antibiot. 1995, 48, 973-976). In einer eigenen Veröffentlichung (M. Christmann, U. Bhatt, M. Quitschalle, E. Claus, M. Kalesse, Angew. Chem. 2000, 112, 4535-4538) haben wir gezeigt, dass die chiralen Zentren C5, C10 und C16 von Ratjadon R- konfiguriert sind; dies war vorher nicht bekannt.

Nachteilig an Ratjadon ist dessen hohe Cytotoxität. In der Praxis ist seine Anwendbarkeit zum Inhibieren des Zellwachstums stark eingeschränkt, da seine Cytotoxizität eine sehr genaue Dosierung erforderlich macht. Bei dieser eingeschränkten Anwendbarkeit wirkt es sich zudem nachteilig aus, dass die Synthese von Ratjadon aufwendig und teuer ist, so daß sie zu unwirtschaftlich erscheint, um in industriellem Maßstab durchgeführt zu werden.

Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung war es daher, andere Substanzen anzugeben, die bei ähnlich niedrigen Konzentrationen wie Ratjadon das Zellwachstum insbesondere von Tumorzellen inhibieren.

Eine weitere Aufgabe war es, zellwachstumshemmende Substanzen anzugeben, die eine geringere Cytotoxizität als Ratjadon aufweisen.

Eine weitere Aufgabe war es, zellwachstumshemmende Substanzen anzugeben, deren Synthese weniger aufwendig ist als die von Ratjadon.

Diese Aufgaben werden gelöst durch eine Substanz, nämlich ein Ratjadon- Derivat, der Formel

wobei R₁, R₂ und R₃ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe, die aus H, CH₃ und C₂H₅ besteht, R₄ CH₃ oder C₂H₅ ist, R₅ H oder OH ist und R₆ und R₇ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe, die aus H, CH₃, C₂H₅, n-C₃H₇, iso-C₃H₇,

und

besteht, und wobei C10 R-konfiguriert ist und C17 R-konfiguriert ist, wenn (a) C16 R-konfiguriert ist und gleichzeitig (b) weder R₅, noch R₆, noch R₇ H ist.

Die geschlängelte Linie

symbolisiert dabei die Verknüpfung mit dem jeweils zugeordneten Kohlenstoffatom der Tetrahydropyran-Untereinheit (C19, C20 bzw C21).

Substanzen der Formel II mit den obigen Bedeutungen der Reste R₁ bis R₇ und den angegebenen Konfigurations-Einschränkungen werden nachfolgend "erfindungsgemäße Substanz der Formel II" genannt.

Die erfindungsgemäßen Substanzen der Formel II unterscheiden sich vom Naturstoff Ratjadon (a) zumindest in einem der Reste R₅ bis R₇ und/oder (b) in der Konfiguration der Kohlenstoffatome C16 und/oder C17.

Die Erfindung beruht zum einen auf der Erkenntnis, dass die Cytotoxizität einer erfindungsgemäßen Substanz der Formei II regelmäßig geringer als die von Ratjadon ist, wenn einer oder mehrere der Reste R₅, R₆ bzw. R₇ H statt - wie bei Ratjadon - OH, Methyl bzw. Propenyl ist. Dabei bleibt die zellwachstums- und zellvermehrungshemmende Wirkung im wesentlichen unverändert, so dass die therapeatische Breite solcher Substanzen im allgemeinen größer als die von Ratjadon ist. "Therapeutische Breite" bezeichnet im Rahmen dieses Textes das Verhältnis zwischen der Konzentration, bei der 50% der Zellen absterben (cytotoxische Konzentration, LC₅₀), und der Konzentration, bei der das Zellwachstum von 50% der Zellen völlig gehemmt wird, ohne dass die Zellen innerhalb von 12 h absterben (zellwachstumsinhibierende Konzentration, GI₅₀).

Im Rahmen dieses Textes bezeichnet "Zellwachstum" den Vorgang der Vervielfältigung des genetischen Materials einer Zeile, deren Größenwachstum und deren Teilung. Der Begriff bezeichnet insbesondere den Übergang zwischen den Phasen G₀, G₁, S, G₂ und Mitose des Zellzyklus (cell cycle oder auch cell division cycle) sowie die Vorgänge in diesen jeweiligen Zellzyklus-Phasen. Zellwachstumsinhibierende Substanzen sind also insbesondere solche Substanzen, die die Zellvermehrung hemmen und den Zellzyklus in einer Phase anhalten (cell cycle arrest).

Ein zusätzlicher Vorteil von Substanzen, bei denen einer oder mehrere der Reste R₅ bis R₇ durch H ersetzt ist, liegt darin, dass sie leichter synthetisierbar sind als natürliches Ratjadon. Eine Synthese dieser Substanzen in industriellem Masstab ist daher wirtschaftlicher als eine industrielle Synthese von Ratjadon.

Die Erfindung beruht zum anderen auf der Erkennntnis, dass eine erfindungsgemäße Substanz der Formel II eine geringere Cytotoxizität als Ratjadon aufweist, wenn die Konfiguration der Kohlenstoffatome C16 und/oder C17 von der des Ratjadons abweicht, wenn also C16 R-konfiguriert und C17 R- konfiguriert ist, oder C16 S-konfiguriert und C17 R- oder S-konfiguriert ist. Überraschend hat sich zudem gezeigt, dass diese Substanzen noch immer bei ähnlich niedrigen Konzentrationen wie Ratjadon das Zellwachstum und die Zellvermehrung inhibieren.

Besonders bevorzugt sind dabei solche erfindungsgemäße Substanzen der Formel II, bei denen C16 S-konfiguriert und C17 R-konfiguriert ist. Diese Substanzen weisen eine besonders geringe Cytotoxizität auf, können jedoch das Zellwachstum und die Zellvermehrung bereits bei ähnlich niedrigen Konzentationen wie Ratjadon inhibieren.

Den erfindungsgemäßen Substanzen gemeinsam ist ihre Fähigkeit, das Wachstum von Tumorzellen in Zellkultur und/oder im lebenden Organismus zu verlangsamen oder völlig zu inhibieren und Tumorzellen bei fortdauernder Behandlung innerhalb weniger Tage abzutöten (siehe dazu Beispiel 36 weiter unten). Erfindungsgemäße Substanzen der Formel II können regelmäßig bei ausreichender Dosierung Zellen in der G₁-Zellzyklusphase anhalten. Die Behandlung von auf einer Trägeroberfläche wachsenden Zellen mit erfindungsgemäßen Substanzen der Formel II führt zudem regelmäßig dazu, dass diese sich leicht vom Träger lösen lassen.

An C10 sind die erfindungsgemäßen Substanzen der Formel II R-konfiguriert. Es hat sich überraschend gezeigt, dass Substanzen mit einer S-Konfiguration an diesem Kohlenstoffatom erst bei erhöhten Konzentrationen zellwachstums- und zellvermehrungshemmend wirken und dass die therapeutische Breite verringert ist.

Vorzugsweise ist C5 R-konfiguriert. Solche Substanzen wirken im allgemeinen stärker wachstumsinhibierend (d. h. sie inhibieren das Zellwachstum bereits bei niedrigeren Konzentrationen) als die entsprechenden an C5 S-konfigurierten Epimere.

Die erfindungsgemäßen Substanzen der Formel II können weitere chirale Zentren aufweisen:
Wenn R₁, nicht H ist, so ist das zugeordnete Kohlenstoffatom C4 chiral.

Die Kohlenstoffatome C19, C20 und C21 können ebenfalls chirale Zentren sein, und zwar wenn die jeweils zugeordneten Reste R₅, R₆ bzw. R₇ nicht H sind. In diesen Fällen ist es bevorzugt, wenn C19 S-konfiguriert ist und/oder C20 S- konfiguriert ist und/oder C21 R-konfiguriert ist. Solche Substanzen lassen sich leichter synthetisieren als Ratjadon und sind außerdem stark zellwachstums- und zellvermehrungsinhibierend bei großer therapeutischer Breite.

Bevorzugt ist eine erfindungsgemäße Substanz der Formel II, bei der R₅, R₆ und R₇ jeweils H sind. Eine solche Substanz lässt sich aufgrund der verringerten Zahl chiraler Zentren besonders leicht und mit geringen Kosten herstellen, auch im industriellen Maßstab. Sie ist außerdem stark zellwachstums- und zellvermehrungsinhibierend und im Vergleich zu Ratjadon weniger cytotoxisch.

Eine weitere Aufgabe war es, eine Formulierung zum Hemmen der Vermehrung von Tumorzellen anzugeben, wobei einer der oder die Wirkstoffe der Formulierung in ähnlich niedrigen oder geringeren Konzentrationen wie Ratjadon zellvermehrungshemmend wirksam sollte(n), vorzugsweise auch eine geringere Cytotoxizität als Ratjadon aufweisen sollte(n) und vorzugsweise leichter synthetisierbar sein sollte(n) als Ratjadon.

Diese Aufgabe wird gelöst durch eine Formulierung (nachfolgend "erfindungsgemäße Formulierung" genannt) zum Hemmen der Vermehrung von Tumorzellen, umfassend

• a) in einer ausreichenden Konzentration zum Hemmen der Vermehrung von Tumorzellen eine erfindungsgemäße Substanz der Formel II oder ein Gemisch zweier oder mehrerer unterschiedlicher erfindungsgemäßer Substanzen der Formel II, und
• b) einen pharmazeutisch akzeptablen Träger.

Pharmazeutisch akzeptabel sind dabei solche Träger, die mit den anderen Bestandteilen der Formulierung verträglich sind und keine unvertretbaren schädigenden Auswirkungen auf solche Zellen haben, die nicht durch die Formulierung beeinflusst werden sollen. Dem Fachmann sind pharmazeutisch akzeptable Träger bekannt, wie beispielsweise Wasser, PBS-(phosphate buffered sahne)-Lösung, Emulsionen wie Öl/Wasser-Emulsionen oder Triglyzerid- Emulsionen. Die Formulierung kann als Flüssigkeit oder in Form von Tabletten, Dragees oder Kapseln dargereicht werden. Der Fachmann kann einen geeigneten pharmazeutisch akzeptablen Träger entsprechend der gewünschten Anwendungsform leicht selbst auswählen.

Solche Formulierungen sind vorteilhafterweise dazu geeignet, die Vermehrung von Tumorzellen in Zellkultur oder im lebenden Organismus zu hemmen. Durch Behandlung einer Tumorzellkultur bzw. eines Tumors mit einer erfindungsgemäßen Formulierung kann das Wachstum von Tumorzellen bzw. Tumoren, die auf die erfindungsgemäßen Substanzen ansprechen, verringert oder völlig zum Stillstand gebracht werden.

Eine weitere Aufgabe war es, ein Verfahren zur Herstellung eines Arzneimittels anzugeben, wobei das Arzneimittel geeignet sein sollte zum Inhibieren des Zellwachstums von Tumorzellen. Vorzugsweise sollte der Wirkstoff oder die Gesamtheit der Wirkstoffe des Arzneimittels eine geringere Cytotoxizität als Ratjadon aufweisen. Ebenfalls vorzugsweise sollte die Synthese des Wirkstoffs oder der einzelnen Wirkstoffe weniger aufwendig sein als die von Ratjadon.

Die Aufgabe wird gelöst durch Verwendung einer erfindungsgemäßen Substanz der Formel II oder einer erfindungsgemäßen Formulierung zum Herstellen eines Arzneimittels zum Hemmen der Vermehrung von Tumorzellen. Ein solches Arzneimittel verwirklicht die mit der Verwendung der oben beschriebenen erfindungsgemäßen Substanzen bzw. der erfindungsgemäßen Formulierungen verbundenen Vorteile.

Eine weitere Aufgabe war es, ein Verfahren zum Hemmen der Vermehrung von Zellen, insbesondere von Tumorzellen, anzugeben. Vorzugsweise sollte der Zellzyklus der verfahrensgemäß behandelten Zellen angehalten werden.

Die Aufgabe wird gelöst durch die Verwendung einer erfindungsgemäßen Substanz der Formel II oder einer erfindungsgemäßen Formulierung zum Hemmen der Vermehrung von Zellen, insbesondere zum Hemmen der Vermehrung von Tumorzellen. Mit der Verwendung einer erfindungsgemäßen Substanz der Formel II oder einer erfindungsgemäßen Formulierung sind die zuvor beschriebenen Vorteile verbunden. Beispielsweise ist das Arzneimittel regelmäßig weniger cytotoxisch als ein Arzneimittel, bei dem die erfindungsgemäße Substanz oder die erfindungsgemäßen Substanzen durch Ratjadon in gleicher Konzentration ersetzt ist bzw. sind.

Die Aufgabe wird ebenfalls gelöst durch ein Verfahren zum (gegebenenfalls nichttherapeutischen) Hemmen der Vermehrung von Tumorzellen, wobei die Tumorzellen einer vermehrungshemmenden Dosis einer erfindungsgemäßen Substanz der Formel II oder einer vermehrungshemmenden Dosis eines Gemischs zweier oder mehrerer unterschiedlicher erfindungsgemäßer Substanzen der Formel II ausgesetzt werden. Ein solches Verfahren kann beispielsweise an Tumorzellen in einer Zellkultur (in vitro) statt an einem Tumor in einem Lebewesen (in vivo) durchgeführt werden.

Eine weitere Aufgabe war es, eine Substanz anzugeben, die als Baustein zum modularen Aufbau einer erfindungsgemäßen Verbindung der Formel II dienen kann.

Die Aufgabe wird gelöst durch eine Substanz der Formel

wobei X eine ungeschützte oder geschützte Hydroxy-Funktion ist, R₅ H, eine ungeschützte oder eine geschützte Hydroxy-Funktion ist und R₆ und R₇ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe, die aus H, CH₃, C₂H₅, n-C₃H₇, iso-C₃H₇,

und

besteht, und wobei C"17" R-konfiguriert ist, wenn (a) C"16" R-konfiguriert ist und gleichzeitig (b) weder R₅, noch R₆, noch R₇ H ist.

Eine "geschützte Hydroxy-Funktion" ist dabei eine Seitengruppe, die eine Schutzgruppe wie beispielsweise TBS (SitBuMe₂) umfasst und die durch Entfernen dieser Schutzgruppe in eine OH-Funktion umgewandelt werden kann.

Der Übersichtlichkeit halber wurde die Nummerierung der Kohlenstoffatome so gewählt, dass diese mit den entsprechenden Nummern im Endprodukt übereinstimmen. Zusätzlich wurden die Nummern in Anführungszeichen gesetzt.

Substanzen der Formel III mit den angegebenen Bedeutungen der Reste R₅ bis R₇ und X werden nachfolgend "erfindungsgemäße Fragmente" genannt.

Aus solchen erfindungsgemäßen Fragmenten lassen sich vorteilhaft einfach die erfindungsgemäßen Substanzen der Formel II synthetisieren.

Besonders bevorzugt ist ein erfindungsgemäßes Fragment, bei dem R₅, R₆ und R₇ jeweils H sind. Solche Substanzen lassen sich besonders leicht und kostengünstig herstellen. Sie lassen sich auch besonders leicht weiterverarbeiten zu einem Endprodukt gemäß Formel II, bei dem R₅, R₆ und R₇ jeweils H sind.

Eine weitere Aufgabe war es, ein Verfahren zum Herstellen einer erfindungsgemäßen Substanz der Formel II anzugeben.

Die Aufgabe wird gelöst durch ein Verfahren, wobei ein erfindungsgemäßes Fragment (vgl. Formel III), bei dem jeweils X eine geschützte Hydroxy-Funktion ist und R₅ H oder eine geschützte Hydroxy-Funktion ist, verbunden wird mit einem Iodid der Formel

bei dem R₁, R₂ und R₃ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe, die aus H, CH₃ und C₂H₅ besteht, R₄ CH₃ oder C₂H₅ ist und Y Methyl, Ethyl oder Isopropyl ist.

Die Verknüpfung (Heck-Kupplung) eines erfindungsgemäßen Fragments mit einem Iodid der Formel IV ist besonders vorteilhaft, da auf diese Weise auf die Verwendung pharmakologisch unerwünschter Zinn-Verbindungen verzichtet werden kann.

In den nachfolgenden Beispielen wird zunächst die Synthese einer erfindungsgemäßen Substanz 1 der Formel II sowie eines erfindungsgemäßen Fragments A der Formel III beschrieben. Anschließend wird die Wirkung einiger bevorzugter erfindungsgemäßer Substanzen 1, 36 und 37 der Formel II näher beschrieben. Zuvor jedoch einige allgemeine Bemerkungen zu den Versuchsbeschreibungen:
¹H-NMR-Spektren wurden mit den Geräten WP-200 SY, AM-400 und AM-500 der Firma Bruker gemessen. Als interner Standard diente, sofern nicht anders angegeben, Tetramethylsilan (TMS). Als Lösungsmittel wurde, sofern nicht anders angegeben, Deuterochloroform (CDCl₃) verwendet. Die chemischen Verschiebungen sind in ppm auf der δ-Skala angegeben. Die Kopplungskonstanten sind in Hertz (Hz) aufgeführt. Die Signalmultiplizitäten sind wie folgt gekennzeichnet:
s = Singulett, d = Dublett, t = Triplett, q = Quartett, qui = Quintett, m = Multiplett, dd = Doppeldublett, dt = Doppeltriplett, dq = Doppelquartett, br = breit.
¹³C-NMR-Spektren wurden mit den o. g. Geräten bei 100, 200 oder 250 MHz mit TMS als innerem Standard gemessen. Als Lösungsmittel diente, sofern nicht anders angegeben, CDCl₃. Die Spektren sind nach dem APT- oder DEPT- Verfahren erstellt worden.
Infrarotspektren (IR) wurden entweder in CHCl₃ mit dem Elektrophotometer 580, als KBr-Preßling oder als Kapillarfilm mit dem FT-Spektralphotometer 1710 der Firma Perkin-Elmer aufgenommen; darüber hinaus wurden für IR-Messungen die Geräte IFS-25 und Vector-22 der Fa. Bruker verwendet. Die charakteristischen Banden sind in Wellenzahlen ν [cm^-1] angegeben.
Massenspektren (MS, MS-FAB, HRMS) wurden mit den Geräten Finnigan MAT 312 oder Autospec von VG bei einem Ionisierungspotential von 70 eV aufgenommen. Es sind jeweils die m/z-Verhältnisse angegeben, wobei die Signalintensitäten in % des Basispeaks angegeben sind.
Drehwerte [α] wurden mit dem Polarimeter Perkin-Elmer 341 gemessen. Die verwendete Wellenlänge, die Temperatur, das Lösungsmittel und die Konzentration (in 10 mg/ml) der Meßsubstanz sind angegeben.
Elementaranalysen (EA) wurden mit dem Gerät CHN-Rapid der Fa. Heräus durchgeführt.
Schmelzpunkte wurden mit einer Büchi-Apparatur nach Dr. Tottoli gemessen und nicht korrigiert.
Kugelrohrdestillationen erfolgten mit einem Büchi GKR 50-Kugelrohrofen, die angegebenen Temperaturen beziehen sich auf das Luftbad.
Gaschromatogramme sind mit einem HP 6890-II der Fa. Hewlett-Packard mit einer SE-54-Kapillarsäule (25 m, Fa. Macherey-Nagel) und Flammenionisator gemessen worden, wobei Stickstoff als Trägergas diente. Chirale Gaschromatogramme wurden mit einem HP 5890-II der Fa. Hewlett-Packard und einer chiralen Säule (Lipodex E Nr. 723368, Oktakis-(2,6-di-O-pentyl-O-butyryl)-γ- cyclodextrin als stationäre Phase) der Fa. Macherey-Nagel aufgenommen.
Säulenchromatographie wurde unter Verwendung von Silicagel (Korngröße 40-­ 60 µm, Porendurchmesser 60 Å) der Firma J. T. Baker bei leichtem Überdruck durchgeführt.
Analytische Dünnschichtchromatographie erfolgte auf mit Kieselgel beschichteten Aluminiumfolien 60F₂₅₄ (Schichtdicke 0.2 mm) der Firma Merck. Als Färbereagentien wurden Vanillin-, Cer-, Bromkresolgrün- oder DNPH- Lösungen verwendet.
Lösungsmittel sind nur destilliert eingesetzt worden. Absolute Lösungsmittel sind nach den bekannten Vorschriften (Perrin, D. D.; Armarego, W. L. F. Purification of Laboratory Chemicals, 3rd Ed., Pergamon Press Oxford, 1988) getrocknet und über Molsieb, CaH₂ oder Na gelagert worden. THF wurde über Natrium/Benzophenon in einer Stickstoffatmosphäre, Et₂O über Natrium in einer Argonatmosphäre destilliert.
Reaktionen wurden unter Argonatmosphäre durchgeführt. Bei allen Experimenten wurde, sofern nicht anders angegeben, ein Magnetrührer verwendet.

Beispiel 1 Allgemeines Syntheseschema erfindungsgemäßer Substanzen der Formel II

Die Synthese erfolgt modular aus drei Fragmenten der Formeln

mit den zuvor beschriebenen Bedeutungen der Reste R₁ bis R₇.

Zur Synthese eines A-Fragments (siehe Fig. 1) wird ein Aldoladdukt 2 umamidiert zum Weinreb-Amid 3. Das Weinreb-Amid 3 wird anschließend zum Amid 4 TBS- geschützt. Das Amid 4 wird zu Aldehyd 5 reduziert. Aldehyd 5 wird mit Ketenacetal 6 in einer vinylogen Mukaiyama Aldol-Reaktion zu Hydroxyester 7 umgesetzt. Hydroxyester 7 wird zu Allylalkohol 8 umgesetzt. Allylalkohol 8 wird zu Epoxid 9 epoxidiert. Epoxid 9 wird zu Epoxytriol 10 entschützt. Epoxytriol 10 wird zu Tetrahydropyran-Triol 11 cyclisiert. Tetrahydropyran-Triol 11 wird zu tris-TBS- Ether 12 geschützt. Die primäre Alkohol-Gruppe der Verbindung 12 wird zu Alkohol 13 entschützt. Alkohol 13 wird zu Aldehyd 14 oxidiert. Aldehyd 14 wird schließlich zu einem A-Fragment A1 olefiniert.

Zur Synthese eines B-Fragments (siehe Fig. 2) wird das Alkin 15 zu Alkohol 16 carbometalliert. Der Alkohol 16 wird zu Aldehyd 17 oxidiert. Aldehyd 17 wird in einer Still-Gennari-Olefinierung zu Ester 18 umgesetzt. Ester 18 wird zu Alkohol 19 reduziert. Alkohol 19 wird zu Bromid 20 bromiert. Bromid 20 wird zum Phosphoniumsalz B1 umgesetzt.

Die Synthese eines C-Fragments (siehe Fig. 3) beginnt mit einer Hetero-Diels- Alder-Reaktion zum Ester 21. Ester 21 wird zu Alkohol 22 reduziert. Alkohol 22 wird zum Aldehyd C1 oxidiert.

Zur Synthese der erfindungsgemäßen Substanz 1 (siehe Fig. 4) werden die Fragmente B1 und C1 in einer Wittig-Reaktion miteinander zu Verbindung 23 verknüpft. Verbindung 23 und Fragment A1 werden in einer Heck-Kupplung zu Verbindung 24 umgesetzt. Verbindung 24 wird zu Lacton 25 oxidiert. Lacton 25 wird durch Entschützen in das Ratjadon-Derivat 1 überführt.

Nachfolgend wird in den Beispielen 2 bis 13 die Synthese eines bevorzugten A- Fragments, nämlich des Fragments A1, genauer beschrieben.

In den Beispielen 14 bis 19 wird die Synthese eines B-Fragments, nämlich des Fragments B1, genauer beschrieben.

In den Beispielen 20 bis 22 wird die Synthese eines C-Fragments, nämlich des Fragments C1, genauer beschrieben.

In den Beispielen 23 bis 26 wird die Synthese der bevorzugten Substanz 1 aus den Fragmenten A1, B1 und C1 genauer beschrieben.

In den Beispielen 27 bis 35 wird die Synthese der bevorzugten Verbindung 35, eines alternativen A-Fragments, genauer beschrieben. Diese Verbindung unterscheidet sich strukturell vom zuvor beschriebenen A1-Fragment dadurch, dass sein Tetrahydropyran-Ring an den Positionen C"19", C"20" und C"21" (siehe dazu Formel III) lediglich H-substituiert ist (die Reste R₅, R₆ und R₇ nach Formel III sind also H). Gegenüber der in den Beispielen 2 bis 13 beschriebenen Synthese des A1-Fragments ist die Synthese der bevorzugten Verbindung 35 vorteilhaft vereinfacht. Verbindung 35 kann genau wie das beschriebene A1- Fragment in den Beispielen 23 bis 26 zur Synthese einer bevorzugten Substanz der Formel II, nämlich der Verbindung 36, eingesetzt werden.

Zur Synthese der bevorzugten Verbindung 35 (siehe Fig. 5) wird ein Aldehyd 27 aus Diol 26 synthetisiert. Aldehyd 27 wird in einer Wittig-Horner-Reaktion zu Ester 28 umgewandelt. Ester 28 wird zu Allylalkohol 29 reduziert. Allylalkohol 29 wird in einer asymmetrischen Sharpless-Epoxidierung zu Epoxid 30 umgewandelt. Epoxid 30 wird zu Diol 31 cyclisiert. Diol 31 wird doppelt zum TBS-Ether 32 geschützt. Die primäre OH-Gruppe des TBS-Ether 32 wird zum einfach geschützten Alkohol 33 entschützt. Alkohol 33 wird zu Aldehyd 34 in einer Dess-Martin-Oxidation umgewandelt. Aldehyd 34 wird zum bevorzugten Olefin 35 in einer Tebbe- Olefinierung umgewandelt.

Beispiel 2

Umamidierung des Aldol-Addukts 2 zum Weinreb-Amid 3

Zu einer Suspension (0°C) von N,O-Dimethylhydroxylaminhydrochlorid (13.57 g, 139 mmol) in 200 mL CH₂Cl₂ wird Trimethylaluminium (70 mL, 140 mmol, 2 M in Toluol) über einen Zeitraum von 40 min zugetropft. Die Lösung wird auf Raumtemperatur erwärmt und für 1 h bei dieser Temperatur gerührt. Danach wird sie auf -20°C gekühlt und eine Lösung des Aldoladdukts 2 (20 g, 66 mmol, beschrieben in D. A. Evans et al., J. Org. Chem. 1990, 55, 6260-6268) in 50 mL CH₂Cl₂ wird mit einer Spritze zugegeben. Die getrübte Mischung wird über einen Zeitraum von 5 h auf Raumtemperatur erwärmt und anschließend über Nacht gerührt. Die Lösung wird mit einer Spritze in 400 mL wässrige Weinsäure (1 M) überführt (0°C) und diese Mischung für 1 h stark gerührt. Die Phasen werden getrennt, und die wässrige Phase wird mit CH₂Cl₂ (3 × 100 mL) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit gesättigter wässriger NaCl-Lösung gewaschen, mit MgSO₄ getrocknet und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt kann ohne weitere Reinigung in die nächste Reaktion eingesetzt werden. Durch Säulenchromatographie (EtOAc/Petrolether 1 : 1) erhält man Amid 3 als farbloses Öl: R_f = 0.20 (EtOAc/Petrolether 1 : 1); [α] 20|D -24.8 (c 1.1, CHCl₃); ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.71 (ddq, J = 14.3, 6.5, 1.3 Hz, 1H), 5.44 (ddq, J = 14.3, 6.3, 1.6 Hz, 1H), 4.31 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.47 (bs, 1H), 3.15 (s, 3H), 2.89 (bs, 1H), 1.66 (ddd, J = 6.5, 1.6, 1.0 Hz, 3H), 1.13 (d, J = 7.2 Hz, 3H); ¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 177.7, 130.6, 127.5, 72.5, 61.5, 39.7, 31.8, 17.7, 10.7; IR 3415, 1637 cm^{- 1}; MS (EI) m/z (%) = 187 (5) [M]⁺, 127 (25), 117 (35), 71 (100); HRMS berechnet für C₉H₁₇NO₃: 187.1208, gefunden 187.1208.

Beispiel 3

TBS-Schützung des Weinreb-Amids 3 zum Amid 4

Zu einer Lösung (0°C) des nicht gereinigten Alkohols 3 in 300 mL CH₂Cl₂ werden sukzessive 2,6-Lutidin (13.5 mL, 116 mmol) und TBSOTf (20 mL, 87 mmol) gegeben. Die Reaktion wird für 15 min bei 0°C gerührt und dann auf Raumtemperatur erwärmt. Das überschüssige Triflat wird durch die Zugabe von 2.5 mL Methanol gequencht. Die Lösung wird mit 300 mL CH₂Cl₂ verdünnt und mit gesättigter wässriger NaHCO₃-Lösung (2 × 200 mL) gewaschen. Die wässrigen Phasen werden mit CH₂Cl₂ (100 mL) extrahiert, und die vereinigten organischen Phasen werden 1 M wässriger NaHSO₄-Lösung (3 × 200 mL) gewaschen. Die organischen Phasen werden mit gesättigter wässriger NaCl-Lösung gewaschen, mit MgSO₄ getrocknet und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt kann direkt in der nächsten Reaktion eingesetzt werden. Durch eine säulenchromatographische Trennung (Petrolether/EtOAc 2 : 1) erhält man Amid 4 als farbloses Öl: R_f = 0.50 (EtOAc/Petrolether 1 : 1); [α] 20|D +0.7 (c 1.0, CHCl₃); ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.54 (ddq, J = 15.4, 6.4, 0.9 Hz, 1H), 5.38 (ddq, J = 15.4, 7.3, 1.0 Hz, 1H), 4.12 (m, 1H), 3.62 (s, 3H), 3.10 (s, 3H), 2.95 (bs, 1H), 1.60 (ddd, J = 6.4, 1.6, 0.5 Hz, 3H), 1.14 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.86 (s, 9H), 0.02 (s, 3H), -0.02 (s, 3H); ¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 176.0, 133.0, 126.6, 75.7, 61.4, 42.8, 32.0, 25.9, 18.2, 17.5, 14.5, -4.1, -4.8; IR 1663 cm^-1 MS (EI) m/z (%) = 302 (4) [M]⁺, 244 (82), 185 (73), 142 (42), 115 (34), 89 (69), 73 (100); HRMS berechnet für C₁₅H₃₁NO₃Si: 301.2073, gefunden 301.2075.

Beispiel 4

Reduktion des Amids 4 zum Aldehyd 5

Zu einer Lösung (-78°C) des Rohproduktes 4 (~66 mmol) aus der vorhergehenden Reaktion in 400 mL THF wird Dibal-H (140 mL, 168 mmol, 1.2 M in Toluol) über einen Zeitraum von 1 h zugetropft, und die resultierende Lösung für weitere 15 min bei dieser Temperatur gerührt. Das überschüssige Dibal-H wird durch die Zugabe von 8 mL Aceton gequencht. Die Lösung wird mit einer Spritze in eine stark gerührte Mischung von 600 mL 1 M wässriger Weinsäure und 500 mL Petrolether überführt. Nach 1 h wird Ether (800 mL) zugegeben, die Phasen werden getrennt und die wässrige Phase mit Ether (2 × 300 mL) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit gesättigter wässriger NaCl-Lösung gewaschen, mit MgSO₄ getrocknet und im Vakuum eingeengt. Nach der Reinigung durch Flash-Chromatographie (Petrolether/EtOAc 20 : 1) erhält man den Aldehyd 5 (13.3 g, 83%) als farbloses Öl.

R_f = 0.56 (Petrolether/EtOAc 5 : 1); [α] 20|D -43.0 (c 1.0, CHCl₃); ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.74 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 5.62 (ddq, J = 15.3, 6.5, 1.0 Hz, 1H), 5.41 (ddq, J = 15.2, 7.2, 1.6 Hz, 1H), 4.41 (ddt, J = 7.2, 4.7, 0.9 Hz, 1H), 2.43 (ddq, J = 6.9, 4.7, 1.4 Hz, 1H), 1.67 (ddd, J = 6.4, 1.6, 0.8 Hz, 3H), 1.02 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.84 (s, 9H), 0.02 (s, 3H), -0.01 (s, 3H); ¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 205.0, 131.3, 127.5, 73.8, 52.9, 25.7, 18.1, 17.5, 8.6, -4.1, -5.0; IR (CHCl₃) 1721 cm^-1; MS (EI) m/z (%) = 227 (1) [M-CH₃]⁺, 201 (49), 185 (61), 75 (100); HRMS berechnet für C₁₂H₂₃O₂Si: 227.1467, gefunden 227.1471.

Beispiel 5

Vinyloge Mukaiyama Aldol-Reaktion des Aldehyds 5 zum Hydroxyester 7

Zu einer Lösung (-78°C) des Aldehyds 5 (2.42 g, 10 mmol) und dem Ketenacetal 6 (4.29 g, 20 mmol) in 100 mL CH₂Cl₂/Et₂O (9 : 1) wird Tris(pentafluorphenyl)boran (1.02 g, 2 mmol) gegeben. Die Lösung wird auf Raumtemperatur erwärmt und im Vakuum eingeengt. Der feste Rückstand wird durch Flash-Chromatographie (Petrolether/EtOAc 18 : 1) gereinigt. Man erhält Hydroxyester 7 (3.38 g, 74%) als farbloses Öl: R_f = 0.59 (Petrolether/EtOAc 5 : 1); [α] 20|D +3.8 (c 0.5, CHCl₃); ¹H- NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.89 (dt, J = 15.7, 7.5 Hz, 1H), 5.81 (dt, J = 15.7, 1.5 Hz, 1H), 5.49 (ddq, J = 15.3, 6.3, 0.6 Hz, 1H), 5.36 (ddq, J = 15.3, 7.8, 1.1 Hz, 1H), 4.04 (dd, J = 7.8, 5.9 Hz, 1H), 3.79 (dt, J = 5.9, 4.4 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H), 2.40 (m, 2H), 1.65 (dd, J = 6.4, 1.6 Hz, 3H), 1.49 (ddq, J = 6.9, 5.9, 4.4 Hz, 1H), 0.87 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.84-0.87 (2s, 9H), -0.03-0.02 (4s, 12H); ¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 168.8, 146.5, 133.8, 126.5, 122.7, 74.6, 71.7, 51.4, 44.6, 38.2, 25.9 (2C), 18.12 (2C), 17.6, 9.7, -3.7, -3.9, -4.5, -4.8; IR (CHCl₃) 1716 cm^-1; MS (EI) m/z (%) = 441 (1) [M-CH₃]⁺, 399 (29) [M-tBu]⁺, 317 (35), 243 (46), 185 (100), 147 (24), 73 (71); HRMS berechnet für C₂₃H₄₅O₄Si₂: 441.2856 gefunden 441.2855.

Das andere Diastereomer am neu generierten Asymmetriezentrum kann durch Verwendung von BF₃ anstelle von Tris(pentafluorphenyl)boran hergestellt werden.

Beispiel 6

Reduktion des Hydroxyesters 7 zum Allylalkohol 8

Zu einer Lösung (-78°C) des Hydroxyesters 7 (6 g, 13 mmol) in 100 mL CH₂Cl₂ wird Dibal-H (33 mL, 40 mmol, 1.2 M in Toluol) gegeben. Die Lösung wird für 1 h bei dieser Temperatur gerührt, mit 100 mL MTBE verdünnt und auf Raumtemperatur erwärmt. Nach der Zugabe von 3.3 mL H₂O wird die Mischung stark gerührt bis ein weißes Gel entstanden ist. Zu diesem Gel werden NaOH (3.3 mL, 4 M) und H₂O (6.6 mL) gegeben und die Suspension wird so lange gerührt bis ein weißer Feststoff entstanden ist. Die Mischung wird mit MgSO₄ getrocknet und die Feststoffe durch Filtration abgetrennt. Das Filtrat wird im Vakuum eingeengt und durch Flash-Chromatographie (Petrolether/EtOAc 6 : 1) gereinigt. Man erhält Allylalkohol 8 (5.58 g, 99%) als farbloses Öl: R_f = 0.41 (Petrolether/EtOAc 5 : 1); ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.62 (m, 2H), 5.49 (ddq, J = 15.4, 6.3, 0.6 Hz, 1H), 5.35 (ddq, J = 15.3, 7.8, 1.5 Hz, 1H), 4.06 (m, 2H), 4.01 (m, 1H), 3.72 (ddd, J = 6.8, 6.4, 4.0 Hz, 1H), 2.25 (m, 2H), 1.65 (ddd, J = 6.4, 1.5, 0.5 Hz, 3H), 1.49 (ddq, J = 6.8, 6.4, 4.0 Hz, 1H), 0.87 (s, 9H), 0.86 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.85 (s, 9H), 0.01 (s, 3H), 0.00 (s, 3H), -0.01 (s, 3H), -0.04 (s, 3H); ¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 134.1, 131.1, 129.6, 126.3, 74.9, 72.1, 63.8, 43.9, 38.2, 26.0 (2C), 18.2 (2C), 17.6, 9.4, -3.7, -3.8, -4.5, -4.7; IR (CHCl₃): ν = 3613 cm^-1; MS (EI) m/z (%) = 289 (3), 259 (3), 235 (1), 225 (1), 215 (2), 185 (100), 145 (14), 75 (13), 73 (26); HRMS berechnet für C₁₁H₂₃O₂Si: 215.1467, gefunden 215.1467.

Beispiel 7

Epoxidierung des Allylalkohls 8 zum Epoxid 9

Zu einer Lösung des Allylalkohols 8 (2.44 g, 5.7 mmol) in 75 mL CH₂Cl₂ bei 0°C wird NaHCO₃ (0.92 g, 10.9 mmol) gegeben. Nach der Zugabe von 70% mCPBA (1.53 g, 6.2 mmol) wird die Suspension für 3 h bei 0°C gerührt und durch die Zugabe von gesättigter wässriger NaHCO₃-Lösung (50 mL) gequencht. Die wässrige Phase wird mit CH₂Cl₂ (2 × 50 mL) extrahiert und die vereinigten organischen Phasen werden nacheinander mit 2 N NaOH, H₂O und gesättigter NaCl-Lösung gewaschen. Die organische Phase wird mit MgSO₄ getrocknet und im Vakuum eingeengt. Nach der Reinigung durch Flash-Chromatographie (Petrolether/EtOAc 8 : 1) wird das Epoxid 9 (2.21 g, 87%) als farbloses Öl erhalten: R_f = 0.27 (Petrolether/EtOAc 5 : 1); [α] 20|D +17.8 (c 1.0, CHCl₃); ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) 5 5.50 (ddq, J = 15.4, 6.2, 0.6 Hz, 1H), 5.39 (ddq, J = 15.3, 7.8, 1.3 Hz, 1H), 4.10 (dd, J = 7.7, 5.4 Hz, 1H), 3.89 (dd, J = 12.3, 2.2 Hz, 1H), 3.84 (ddd, J = 6.9, 5.7, 4.1 Hz, 1H), 3.57 (dd, J = 12.3, 4.4 Hz, 1H), 2.98 (ddd, J = 7.0, 4.7, 2.4 Hz, 1H), 2.89 (m, 1H), 1.80 (ddd, J = 14.3, 6.9, 4.7 Hz, 1H), 1.65 (ddd, J = 6.2, 1.4, 0.6 Hz, 3H), 1.64 (ddd, J = 14.3, 7.0, 5.6 Hz, 1H), 1.59 (ddq, J = 6.9, 5.4, 4.1 Hz, 1H), 0.87 (s, 9H), 0.87 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.84 (s, 9H), -0.05-0.03 (45, 12H); ¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 134.2, 126.2, 74.1, 71.1, 61.6, 58.7, 53.4, 45.2, 36.9, 25.9 (2C), 25.9, 18.1 (2C), 17.6, 9.8, -3.6, -4.2, -4.4, -4.7; IR (CHCl₃) 3402 cm^-1; MS (EI) m/z (%) = 305 (4), 287 (2), 259 (2), 227 (2), 185 (100), 147 (15), 75 (18), 73 (27); HRMS berechnet für C₁₀H₂₁OSi: 185.1362, gefunden 185.1361.

Durch Verwendung der analogen Verbindung mit Z-Doppelbindung kann das andere Diastereomer dargestellt werden.

Beispiel 8

Entschützung des Epoxids 9 zum Epoxytriol 10

Zu einer Lösung des Epoxids 9 (3.03 g, 6.8 mmol) in 100 mL THF wird TBAF (20 mL, 20 mmol, 1.0 M in THF) gegeben und die Lösung für 48 h bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktion wird durch die Zugabe von gesättigter wässriger NH₄Cl-Lösung (50 mL) gequencht. Die Phasen werden getrennt und die wässrige Phase mit EtOAc (6 × 50 mL) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wird über eine kurze Kieselgelsäule mit EtOAc filtriert. Man erhält das Epoxytriol 10, das schon partiell zum Tetrahydropyran-Triol 11 cyclisiert ist, als farbloses Öl. Dieses Produkt kann direkt in der nächsten Reaktion verwendet werden oder durch Flash-Chromatographie (EtOAc/MeOH 15 : 1) gereinigt werden: ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.67 (ddq, J = 15.3, 1.3, 6.4 Hz, 1H), 5.53 (ddq, J = 15.3, 6.0, 1.5 Hz, 1H), 4.09 (m, 1H), 4.33 (m, 1H), 3.61 (m, 1H, 3.82 (m, 1H), 3.38 (bs, 1H), 3.08 (m, 1H), 2.97 (m, 1H), 2.66 (bs, 1H), 2.38 (bs, 1H), 1.92 (ddd, J = 14.0, 9.7, 4.1 Hz, 1H), 1.70 (dt, J = 6.3, 1.3 Hz, 3H), 1.55 (ddq, J = 3.0, 2.3, 6.9 Hz, 1H), 1.46 (ddd, J = 14.3, 6.9, 3.6 Hz, 1H), 0.90 (d, J = 7.1 Hz, 3H); ¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 133.0, 126.9, 77.5, 73.4, 62.2, 58.9, 54.3, 42.9, 37.4, 17.8, 5.6; IR 3345, 966 cm^{- 1}; HRMS berechnet für C₁₁H₂₀O₄: 213.1362, gefunden 213.1361.

Beispiel 9

Cyclisierung des Epoxytriols 10 zum Tetrahydropyran-Triol 11

Zu einer Lösung des Epoxytriols 10 (~6.8 mmol) in 50 mL THF wird Amberlyst 15 (40 mg) gegeben. Nach 6 h wird das Harz abfiltriert und das Filtrat im Vakuum eingeengt. Nach der Reinigung durch Flash-Chromatographie (EtOAc/MeOH 15 : 1) wird das Tetrahydropyran-Triol 11 (1.21 g, 82%) als farbloses Öl erhalten: [α] 20|D -2.0 (c 1.0, CHCl₃); ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.64 (ddq, J = 15.4, 1.4, 6.5 Hz, 1H), 5.40 (ddq, J = 15.4, 6.0, 1.6 Hz, 1H), 4.39 (m, 1H), 3.99 (q, J = 2.9 Hz, H) 3.94 (ddd, J = 12.3, 4.4, 1.5 Hz, 1H), 3.61-3.78 (m, 3H), 1.78 (ddd, J = 14.1, 12.3, 2.9 Hz, 1H), 1.78 (dt, J = 6.5, 1.4 Hz, 3H), 1.68 (m, 1H), 1.50 (m, 1H), 0.89 (d, J = 7.2 Hz, 3H); ¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 129.9, 126.8, 74.8, 74.2, 73.5, 70.0, 63.5, 39.6, 29.1, 17.9, 11.2; 1R 3682, 3609, 3470 cm^-1; HRMS berechnet für C₁₁H₂₂O₄: 216.1362, gefunden 216.1364.

Beispiel 10

Schützung des Tetrahydropyran-Triols 11 zum tris-TBS-Ether 12

Zu einer Lösung (-78°C) des Tetrahydropyran-Triols 11 (1 g, 4.6 mmol) in 100 mL CH₂Cl₂ werden nacheinander 2,6-Lutidin (3.2 mL, 27.5 mmol) und TBSOTf (4.8 mL, 20.9 mmol) gegeben. Die Lösung wird auf Raumtemperatur erwärmt und durch die Zugabe von gesättigter wässriger NaHCO₃-Lösung (50 mL) gequencht. Die Phasen werden getrennt und die wässrige Phase wird mit CH₂Cl₂ (2 × 50 mL) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden zunächst mit 1 M wässriger NaHSO₄-Lösung (3 × 50 mL) und anschließend mit gesättigter wässriger NaCl- Lösung gewaschen, mit MgSO₄ getrocknet und im Vakuum eingeengt. Nach der Reinigung durch Flash-Chromatographie (Petrolether/EtOAc 40 : 1) wird der TBS- Ether 12 (2.25 g, 87%) als farbloses Öl erhalten: R_f = 0.17 (Petrolether/EtOAc 50 : 1); [α] 20|D -23.8 (c 1.0, CHCl₃); ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.61 (ddq, J = 15.4, 6.4, 1.5 Hz, 1H), 5.37 (ddq, J = 15.4, 5.6, 1.6 Hz, 1H), 4.37 (m, 1H), 3.86 (m, 2H), 3.72 (m, 1H), 3.49 (m, 2H), 1.72 (ddd, J = 13.8, 11.8, 2.6 Hz, 1H), 1.67 (dt, J = 6.5 Hz, 3H), 1.47 (m, 1H), 1.34 (ddd, J = 13.8, 2.5, 1.3 Hz, 1H), 0.87-0.86 (35, 27H), 0.83 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.07-0.00 (4s, 18H); ¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 131.3, 125.2, 75.8, 74.5. 72.5, 70.9, 64.5, 40.4, 28.1, 26.0, 25.9, 25.8, 18.3, 18.2, 18.1, 17.9, 11.2, -4.4, -4.5, -4.8, -5.0, -5.5 (2C); MS (EI) m/z (%) = 558 (4) [M]⁺, 501 (25) [M-tBu]⁺, 419 (30), 369 (17), 327 (18) 287 (39), 261 (36), 227 (53), 171 (69), 147 (34), 73 (100); HRMS berechnet für C₂₉H₆₂O₄Si₃: 558.3956 gefunden 558.3956.

Beispiel 11

Selektive Entschützung der primären Alkohol-Gruppe der Verbindung 12 zu Alkohol 13

Chloroform (100 mL) und konzentrierte wässrige HCl (20 mL) werden in einem Scheidetrichter gemischt und die organische Phase wird abgetrennt. Der TBS- Ether 12 aus der vorhergehenden Reaktion (2.6 g, 4.7 mmol) wird in der organischen Phase gelöst und die so erhaltene Lösung für 4 h bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktion wird durch die Zugabe von gesättigter wässriger NaHCO₃-Lösung (50 mL) gequencht. Die Phasen werden getrennt und die wässrige Phase wird mit CHCl₃ (2 × 50 mL) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Nach der Reinigung durch Flash-Chromatographie (Petrolether/EtOAc 15 : 1) wird der Alkohol 13 (2.01 g, 97%) als farbloses Öl erhalten: R_f = 0.34 (Petrolether(EtOAc 10 : 1); [α] 20|D -14.3 (c 1.0, CHCl₃) ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.58 (ddq, J = 15.4, 6.4, 1.4 Hz, 1H), 5.37 (ddq, J = 15.4, 5.9, 1.6 Hz, 1H), 4.38 (m, 1H), 3.85 (q, J = 2.9 Hz, 1H), 3.80 (m, 1H), 3.65-3.55 (m, 3H), 2.60 (s, 1H), 1.66 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.62-1.47 (m, 3H), 0.87 (2s, 18H), 0.84 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.07 (2s, 6H), 0.02 (4s, 6H); ¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 130.5, 126.0, 75.4, 74.9, 74.3, 70.5, 65.7, 40.2, 31.1, 25.8 (2C), 18.1, 18.0, 17.9, 11.2, -4.4, -4.6, -4.9 (2C); IR 3460 cm^-1; MS (EI) m/z (%) = 444 (6) [M]⁺, 387 (21) [M-tBu]⁺, 287 (66), 255 (73), 219 (60) 173 (100), 171 (79); HRMS berechnet für C₂₃H₄₈O₄Si₂: 444.3091, gefunden 444.3091.

Beispiel 12

Oxidation des Alkohols 13 zum Aldehyd 14

Zu einer Lösung (0°C) des Alkohols 13 (700 mg, 1.57 mmol) in 50 mL CH₂Cl₂ wird das Dess-Martin-Periodinan (800 mg, 1.89 mmol) gegeben. Die Lösung wird auf Raumtemperatur erwärmt und für weitere 3 h gerührt. Die Reaktion wird durch die Zugabe einer Lösung von Na₂S₂O₃ 5 H₂O (2.5 g) in gesättigter wässriger NaHCO₃- Lösung (25 mL) gequencht und stark gerührt bis eine klare Lösung entstanden ist. Die wässrige Phase wird mit CH₂Cl₂ (2 × 25 mL) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum eingeengt. Nach der Reinigung durch Flash-Chromatographie (Petrolether/EtOAc 15 : 1) wird der Aldehyd 14 (641 mg, 92%) als farbloses Öl erhalten: R_f = 0.64 (Petrolether/EtOAc 10 : 1); [α] 20|D -19.4 (c 1.0, CHCl₃); ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.61 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 5.60 (ddq, J = 15.4, 6.5, 1.5 Hz, 1H), 5.36 (ddq, J = 15.4, 5.6, 1.6 Hz, 1H), 4.39 (m, 1H), 4.08 (ddd, J = 11.3, 4.6, 2.2 Hz, 1H), 4.04 (dd, J = 4.6, 1.4 Hz, 1H), 3.86 (q, J = 2.9 Hz, 1H), 1.80 (ddd, J = 13.7, 11.4, 2.2 Hz, 1H), 1.67 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.50 (m, 1H), 1.30 (ddd, J = 13.7, 2.2, 1.4 Hz, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.86 (s, 9H), 0.83 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.07 (2s, 6H), 0.01 (s, 3H), 0.00 (s, 3H); ¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 203.7, 130.5, 125.8, 80.4, 74.8, 73.3, 70.4, 40.1, 29.3, 25.7 (2C), 18.3, 18.0, 17.9, 11.1, -4.8 (2C), -4.9 (2C); IR 1738 cm^-1; MS (EI) m/z (%) = 442 (3) [M]⁺, 385 (14) [M-tBu]⁺, 303 (55), 187 (90), 73 (100); HRMS berechnet für C₁₉H₃₇O₄Si₂: 385.2230, gefunden 385.2231.

Beispiel 13

Olefinierung des Aldehyds 14 zum A1-Fragment

Zu einer Lösung (0°C) des Aldehyds 14 aus der vorhergehenden Reaktion (700 mg, 1.58 mmol) in 50 mL THF wird das Tebbe-Reagenz (3.2 mL, 1.60 mmol, 0.5 M in Toluol) gegeben. Nach 15 min bei dieser Temperatur wird die Lösung mit 50 mL Et₂O verdünnt und durch die langsame Zugabe von 0.6 mL 1 M NaOH gequencht. Die so erhaltene Mischung wird mit MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Nach der Trennung durch Flash-Chromatographie wird das A1-Fragment (662 mg, 95%) als farbloses Öl erhalten: R_f = 0.68 (Petrolether/EtOAc 20 : 1); [α] 20|D -11.3 (c 1.0, CHCl₃); ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.79 (ddd, J = 17.2, 10.5, 5.0 Hz, 1H), 5.63 (ddq, J = 15.4, 6.5, 1.5, 1H), 5.39 (ddq, J = 15.4, 5.8, 1.6 Hz, 1H), 5.23 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 5.07 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 4.38 (m, 1H), 4.23 (m, 1H), 3.85 (q, J = 2.9 Hz, 1H), 3.67 (ddd, J = 11.7, 3.9, 2.3 Hz, 1H), 1.73 (ddd, J = 13.8, 11.7, 2.3 Hz, 1H), 1.67 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.47 (m, 1H), 1.30 (ddd, J = 13.8, 2.3, 1.3 Hz, 1H, 0.89 (s, 9H), 0.86 (s, 9H), 0.83 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.07-0.00 (4s, 12H); ¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 138.7, 131.2, 125.3, 114.6, 75.7, 75.6, 74.6, 70.9, 40.3, 27.5, 25.9, 25.8, 18.3, 18.0, 17.9, 11.1, - 4.6 (2C), -4.8, -4.9; MS (EI) m/z (%) = 40 (5) [M]⁺, 383 (15), 301 (69), 187 (52), 143 (100); HRMS berechnet für C₂₄H₄₈O₃Si₂: 440.3142, gefunden 440.3141.

Beispiel 14

Carbometallierung des Alkins 15 zum Alkohol 16

Zu einer Lösung (-10°C) von Cp₂ZrCl₂ (1.20 g, 4.09 mmol) in 7 mL CH₂Cl₂ wird langsam AlMe₃ (15.30 mL, 2 M in Toluol) zugegeben. Nach 10 min wird das Alkin 15 (1.00 g, 10.19 mmol) in 10 mL CH₂Cl₂ zugetropft und die Lösung wird für 12 h gerührt. Die Lösung wird auf -40°C gekühlt und I₂ (2.85 g, 11.23 mmol), in 12 mL THF gelöst, wird tropfenweise zugegeben. Die Lösung wird für 1 h gerührt und anschließend mit gesättigter wässriger NaHCO₃-Lösung bei -20°C gequencht. Die Phasen werden getrennt, und die wässrige Phase wird mit MTBE extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Nach der Reinigung durch Flash-Chromatographie (Petrolether/EtOAc 2 : 1) erhält man den Alkohol 16 (2.03 g, 83%) als farblose Flüssigkeit: R_f = 0.30 (Petrolether/EtOAc 2 : 1); [α] 20|D +9.4 (c 1.0, CHCl₃); ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.87 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 3.40-3.45 (m, 2H), 2.33 (dd, J = 13.4, 6.0 Hz, 1H), 1.99 (dd, J = 13.4, 8.4 Hz, 1H), 1.80-1.85 (m 1H), 1.80 (d, J = 0.98 Hz, 3H), 0.85 (d, J = 6.8 Hz, 3H); ¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 146.5, 75.6, 67.6, 43.6, 33.7, 23.7, 16.3; IR 3302, 2870, 1456, 1377 cm^-1; HRMS berechnet für C₇H₁₃IO: 240.0011; gefunden 240.0011.

Beispiel 15

Oxidation des Alkohols 16 zum Aldehyd 17

Zu einer Lösung (0°C) des Alkohols 16 (1.75 g, 7.29 mmol) in 60 mL CH₂Cl₂ wird das Dess-Martin-Periodinan (3.99 g, 9.41 mmol) gegeben. Die Lösung wird auf Raumtemperatur erwärmt und für weitere 3 h gerührt. Die Reaktion wird durch die Zugabe einer Lösung von Na₂S₂O₃ 5 H₂O (2.5 g) in gesättigter wässriger NaHCO₃- Lösung (25 mL) gequencht und stark gerührt bis eine klare Lösung entstanden ist. Die wässrige Phase wird mit CH₂Cl₂ (2 × 25 mL) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum eingeengt. Nach der Reinigung durch Flash-Chromatographie (Petrolether/EtOAc 5 : 1) wird der Aldehyd 17 (1.41 g, 81%) als farblose Flüssigkeit erhalten. Der Aldehyd 17 zersetzt sich sehr schnell und wird daher direkt in die nachfolgende Still-Gennari- Olefinierung eingesetzt.

Beispiel 16

Still-Gennari Olefinierung des Aldehyds 17 zu Ester 18

Zu einer Lösung (-40°C) von 18-Krone-6 (3.51 g, 13.3 mmol) in 30 mL THF wird das Still-Gennari-Reagenz (2.90 g, 8.38 mmol) in 10 mL THF gegeben. Die Lösung wird auf -78°C gekühlt und eine KHMDS-Lösung (16.0 mL, 0.5 M in Toluol, 8 mmol) wird mit einer Spritze langsam zugetropft. Nach 15 min wird der Aldehyd 17 aus der vorhergehenden Reaktion (1.59 g, 6.68 mmol) in 10 mL THF gelöst zugetropft. Die Reaktion wird durch die Zugabe von gesättigter wässriger NaHCO₃-Lösung gequencht, mit MTBE extrahiert und mit MgSO₄ getrocknet. Das Filtrat wird im Vakuum eingeengt und durch Säulenchromatographie (Petrolether/EtOAc 3 : 1) gereinigt. Man erhält den Ester 18 (1.73 g, 85%) als farbloses Öl. R_f = 0.51 (Petrolether/EtOAc 4 : 1); [α] 20|D -32.4 (c 1.0, CHCl₃); ¹H- NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.83 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 5.58 (dd, J = 9.8, 1.2 Hz, 1H), 4.17 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.30-3.40 (m, 1H), 2.20 (dd, J = 13.5, 6.9 Hz, 1H), 2.10 (dd, J = 13.5, 7.5 Hz, 1H), 1.85 (d, J = 1.2 Hz, 3H), 1.78 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 1.28 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6.7 Hz, 3H); ¹³C-NMR δ 167.9, 147.0, 146.3, 126.5, 75.8, 60.2, 47.0, 31.5, 23.8, 20.8, 19.9, 14.3; IR 2977, 1712, 1454, 1372 cm^-1; MS (EI) m/z (%) = 322 (5) [M]⁺, 195 (25), 121 (48), 113 (100), 95 (22), 67 (15); HRMS berechnet für C₁₂H₁₉IO₂: 322.0430, gefunden 322.0431.

Beispiel 17

Reduktion des Esters 18 zum Alkohol 19

Zu einer Lösung (-78°C) des Esters 18 (635 mg, 1.97 mmol) in 5 mL CH₂Cl₂ wird Dibal-H (6.0 mL, 1.2 M in Toluol) langsam zugetropft. Die Lösung wird für eine Stunde bei dieser Temperatur gerührt und mit 15 mL MTBE verdünnt. Nach der Zugabe von 1 mL H₂O wird die Mischung stark gerührt bis ein weißes Gel entstanden ist. Zu diesem Gel werden NaOH (2.5 mL, 4 M) und H₂O (1 mL) gegeben und die Suspension wird so lange gerührt bis ein weißer Feststoff entstanden ist. Die Mischung wird mit MgSO₄ getrocknet und die Feststoffe durch Filtration abgetrennt. Das Filtrat wird im Vakuum eingeengt und durch Flash- Chromatographie (Petrolether/EtOAc 4 : 1) gereinigt. Man erhält Alkohol 19 (425 mg, 77%) als farbloses Öl: R_f = 0.15 (Petrolether/EtOAc 4 : 1); [α] 20|D -3.7 (c 1.0, CHCl₃); ¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD) δ), 5.80 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 4.99 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.00-4.10 (m, 2H), 2.55-2.70 (m, 1H), 2.05-2.15 (m, 2H), 1.78 (d, J = 0.9 Hz, 3H), 1.75 (d, J = 1.2 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.6 Hz, 3H); ¹³C-NMR (100 MHz, CD₃OD) δ 146.5, 133.8, 133.6, 75.9, 61.8, 47.6, 30.7, 24.1, 21.2, 21.1; IR 3316, 2956, 2921, 1867, 1452, 1376, 1273, 1000 cm^-1 MS (EI) m/z (%) = 262 (20), 153 (15), 135 (14), 99 (100), 95 (49), 81 (16); HRMS berechnet für C₁₀H₁₇IO: 280.0324, gefunden 280.0324.

Beispiel 18

Bromierung des Alkohols 19 zum Bromid 20

Der Alkohol 19 (140 mg, 0.5 mmol) wird bei Raumtemperatur in 5 mL Acetonitril gelöst. Nacheinander werden Triphenylphosphan (262 mg, 1 mmol) und CBr₄ (331 mg, 1 mmol) zugegeben und die so erhaltene Suspension für 10 min bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktion wird mit 2 ml H₂O gequencht und mit Petrolether extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit MgSO₄ getrocknet und im Vakuum eingeengt. Nach der Filtration über eine kurze Kieselgelsäule mit Petrolether erhält man das Bromid 20 (120 mg, 70%) als eine farblose Flüssigkeit: ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.85 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 5.10 (dq, J = 9.8, 1.5 Hz, 1H), 3.92 (d, J = 3.0 Hz, 2H), 2.61 (dq, J = 9.8, 6.8 Hz, 1H), 2.16 (dt, J = 7.2, 1.1 Hz, 2H), 1.81 (d, J = 1.1 Hz, 3H), 1.80 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 0.92 (d, J = 6.6 Hz, 3H); ); ¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 146.0, 136.5, 130.8, 76.2, 47.0, 32.1, 31.2, 24.1, 21.9, 20.2;

Beispiel 19

Umwandlung des Bromids 20 zum Phosphoniumsalz B1

Zu einer Lösung des Bromids 20 aus der vorhergehenden Reaktion (120 mg, 0.35 mmol) in 3 ml Acetonitril wird langsam Tributylphosphan (106 mg, 0.13 ml, 0.52 mmol) getropft. Die Lösung wird 2 h bei Raumtemperatur gerührt und dann im Vakuum eingeengt. Man erhält das Phosphoniumsalz B1 als braunes Öl, das ohne weitere Reinigung in die Wittig-Reaktion mit dem C-Fragment eingesetzt wird.

Beispiel 20

Hetero-Diels-Alder-Reaktion zum Ester 21

Zu einer Lösung von (R)-BINOL (429 mg, 1.5 mmol) in 2 mL CH₂Cl₂ wird eine Lösung von Ti(OiPr)₄ (0.223 mL, 0.75 mmol) in 1 mL CH₂Cl₂ getropft. Das Gemisch wird für 1 h unter Rückfluß erhitzt und anschließend auf -30°C gekühlt. Zunächst wird frisch destilliertes Ethylglyoxylat (870 mg, 7.5 mmol) zugegeben, gefolgt von einer Lösung von 1-Methoxy-1,3-butadien (504 mg, 6.0 mmol) in 1 mL CH₂Cl₂. Die Lösung wird für 2.5 h bei -30°C gerührt und dann auf Raumtemperatur erwärmt. Die Reaktion wird mit gesättigter wässriger NaHCO₃- Lösung gequencht und mit MTBE extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Nach der Reinigung durch Flash-Chromatographie (Petrolether/Ether, 8 : 1) erhält man den Ester 21 als eine farblose Flüssigkeit (780 mg, 65%): R_f = 0.34 (Petrolether/EtOAc 4 : 1); [α] 20|D +45.6 (c 1.0, CHCl₃); ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.01 (ddt, J = 10.3, 4.0, 1.5 Hz, 1H), 5.67 (dq, J = 10.3, 2.0 Hz, 1H) 5.15 (m, 1H), 4.36 (dd, J = 6.5, 5.1 Hz, 1H), 4.12-4.27 (m, 2H), 3.48 (s, 3H), 2.42-2.52 (m, 1H), 2.27-2.36 (m, 1H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H); ¹³C-NMR δ 171.2, 127.6, 125.4, 95.9, 65.8, 61.1, 55.6, 27.5, 14.2; IR 2930, 1736, 1447, 1372 cm^-1 HRMS berechnet für C₉H₁₄O₄: 186.0892, gefunden 186.0830.

Durch Verwendung von (S)-BINOL kann das korrespondierende Enantiomer hergestellt werden.

Beispiel 21

Reduktion des Esters 21 zum Alkohol 22

Zu einer Suspension von LiAlH₄ (20 mg, 0.54 mmol) in 10 mL Et₂O bei 0°C wird der Ester 21 (100 mg, 0.54 mmol) mit einer Spritze zugegeben. Die Suspension wird für 45 min bei dieser Temperatur gerührt und dann durch die sukzessive Zugabe von Wasser (0.025 mL), 15% NaOH-Lösung (0.025 mL) und nochmals Wasser (0.050 mL) gequencht. Die Aluminium-Salze werden durch Filtration entfernt und das Filtrat im Vakuum eingeengt. Nach der Reinigung durch Flash- Chromatographie (Petrolether/Et₂O 1 : 1) wird ein alkoholisches Zwischenprodukt als farbloses Öl (80 mg, 100%) erhalten. Das Zwischenprodukt (1.48 g, 10.27 mmol) wird in 20 mL iPrOH aufgenommen und mit 50 mg PPTS versetzt. Die Lösung wird 4 h bei Raumtemperatur gerührt und durch die Zugabe von gesättigter wässriger NaHCO₃-Lösung (100 mL) und EtOAc (100 mL) gequencht. Nach der Trennung der Phasen wird die wässrige Phase mit EtOAc extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit MgSO₄ getrocknet, filtriert und das Filtrat im Vakuum eingeengt. Nach der Reinigung durch Flash-Chromatographie (Petrolether/EtOAc 4 : 1) und Umkristallisieren aus Petrolether wird der Alkohol 22 als farbloser Feststoff erhalten (1.37 g, 77%): R_f = 0.10 (Petrolether/EtOAc 6 : 1); [α] 20|D +33.2 (c 0.9, CHCl₃); ¹H-NMR δ 5.90-6.00 (m, 1H), 5.65-5.70 (m, 1H), 5.05-5.10 (m, 1H), 4.00-4.10 (m, 1H), 3.97 (sep, J = 6.3 Hz, 1H), 3.65-3.70 (m, 1H), 3.55-3.60 (m, 1H), 1.80-2.20 (m, 2H), 1.22 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.14 (d, J = 6.1 Hz, 3H); ¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 128.1, 125.9, 92.7, 69.5, 66.6, 65.2, 25.9, 23.7, 21.9; IR (CHCl₃) 3296, 1657 cm^-1; HRMS berechnet für C₉H₁₆O₃: 172.1099, gefunden 172.1093.

Beispiel 22

Oxidation des Alkohols 22 zum Aldehyd C1

Zu einer Lösung (-78°C) von Oxalylchlorid (0.18 mL, 2.06 mmol) in 2 mL CH₂Cl₂ wird DMSO (0.25 mL) tropfenweise zugegeben. Nach 5 min werden eine Lösung des Alkohols 22 (300 mg, 1.76 mmol) in 4 mL CH₂Cl₂ und 0.13 mL DMSO zugetropft. Nachdem die Lösung für 40 min bei -78°C gerührt wurde, wird Triethylamin (1.0 mL) langsam zugetropft und die Lösung wird auf Raumtemperatur erwärmt. Das Lösungsmittel wird vorsichtig am Rotationsverdampfer entfernt und der Rückstand chromatographiert (CH₂Cl₂/MTBE 20 : 1). Man erhält den Aldehyd C1 (295 mg, 100%) als farblose Flüssigkeit: R_f = 0.27 (CH₂Cl₂/MTBE 20 : 1); [α] 20|D +90.0 (c 0.7, CDCl₃); ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.70 (s, 1H), 5.95-6.00 (m, 1H), 5.70-5.75 (m, 1H), 5.20 (bs, 1H), 4.39 (dd, J = 4.7, 11.3 Hz, 1H), 4.03 (sep, J = 6.2 Hz, 1H), 2.10-2.30 (m, 2H), 1.22 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.17 (d, J = 6.1 Hz, 3H); ¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 201.1, 126.8, 126.5, 93.0, 71.0, 53.4, 24.9, 23.7, 21.9; IR (CHCl₃) 2971, 2931, 1738, 1381, 1317, 1105, 1017 cm^-1 HRMS berechnet für C₉H₁₄O₃: 171.1021, gefunden 171.1015.

Beispiel 23

Wittig-Reaktion von B1 und C1 zu Verbindung 23

Zu einer Lösung (0°C) des Phosphoniumsalzes B1 (370 mg, 0.81 mmol) in 8 ml Toluol wird der Aldehyd C1 (170 mg, 0.98 mmol) gegeben. Danach wird KOtBu (1.10 mL, 1.10 mmol, 1.0 M in THF) langsam mit einer Spritze zugetropft. Nach 15 min bei dieser Temperatur wird die Reaktion mit 2 mL Wasser gequencht, mit Ether extrahiert und mit MgSO₄ getrocknet. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand durch Säulenchromatographie (Petrolether/EtOAc 8 : 1) gereinigt. Man erhält Verbindung 23 (258 mg, 76%) als farbloses Öl: R_f = 0.20 (Petrolether/EtOAc 1 : 1); [α] 20|D +45.8 (c 1.0, CHCl₃); ¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 6.68 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 6.00-6.05 (m, 1H), 5.91 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 5.60-5.80 (m, 2H), 5.10-5.20 (m, 2H), 4.01 (sep, J = 6.2 Hz, 1H), 2.80-2.95 (m, 1H), 2.20 (ddd, J = 13.5, 6.5, 1.1 Hz, 2H), 2.05-2.10 (m, 2H), 1.80 (d, J = 1.1 Hz, 3H), 1.79 (d, J = 1.0 Hz, 3H), 1.17 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 1.23 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 0.94 (d, J = 6.5 Hz, 3H); ¹³C-NMR (100 MHz, CD₃OD) δ 147.6, 137.5, 131.9, 130.8, 129.5, 129.0, 127.2, 94.8, 76.2, 71.2, 68.5, 48.2, 32.0, 31.4, 24.3, 24.2, 22.4, 21.1, 20.7; IR (CHCl₃): 1658, 1614, 1378, 1315, 1273, 1026, 998 cm^-1; HRMS (EI) berechnet für C₁₉H₂₉IO₂: 416.1212, gefunden 416.1385.

Beispiel 24

Heck-Kupplung von Verbindung 23 und Fragment A1 zu Acetal 24

Zu einer Lösung des A1-Fragments (122 mg, 0.28 mmol) und Verbindung 23 (73 mg, 0.17 mmol) in 0.3 mL DMF werden nacheinander Bu₄NBr (70 mg, 0.22 mmol), Cs₂CO₃ (84 mg, 0.26 mmol), Pd(OAc)₂ (48 mg, 0.22 mmol) und Et₃N (0.026 mL, 0.19 mmol) gegeben. Die Suspension wird für 36 h bei Raumtemperatur gerührt und dann direkt auf einer Kieselgelsäule chromatographiert (Petrolether/EtOAc 16 : 1). Man erhält das Heck-Produkt (Acetal) 24 (83 mg, 65%) als ein farbloses Öl.

R_f = 0.26 (Petrolether/EtOAc 5 : 1); [α] 20|D +49.5 (c 1.0, CHCl₃); ¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 6.72 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.43 (ddd, J = 15.2, 11.0, 1.6 Hz, 1H), 6.00-6.05 (m, 1H), 5.75 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.60-5.70 (m, 3H), 5.49 (dd, J = 15.0, 5.0 Hz, 1H), 5.41 (ddd, J = 15.5 Hz, 5.6 Hz, 1.6 Hz, 1H),. 5.10-5.30 (m, 2H), 4.40-4.50 (m, 1H), 4.34-4.38 (m, 1H), 4.22-4.28 (m, 1H), 4.01 (sep, J = 6.1 Hz, 1H), 3.90-3.95 (m, 1H), 3.66 (ddd, J = 11.5, 4.0, 2.0 Hz, 1H), 2.80-2.90 (m, 1H), 2.00-2.10 (m, 4H), 1.78 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.72 (d, J = 1.1 Hz, 3H), 1.69 (ddd, J = 6.5, 1.5, 1.4 Hz, 3H), 1.35-1.60 (m, 3H), 1.23 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 1.17 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 0.93 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.91 (2s, 18H), 0.86, (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.09 (s, 3H), 0.06 (s, 3H), 0.05 (s, 3H), 0.04 (s, 3H); ¹³C-NMR (100 MHz, CD₃OD) δ 138.5, 137.6, 132.4, 132.3, 131.2, 130.4, 129.5, 129.3, 128.3, 127.2, 127.1, 126.3, 94.9, 77.5, 77.0, 76.1, 72.3, 71.2, 68.6, 41.7, 32.0, 31.3, 29.2, 28.0, 26.5, 26.4, 24.3, 22.5, 21.3, 20.8, 19.2, 19.0, 18.1, 16.9, 11.6, -4.1, -4.3, -4.6, -4.7; HRMS berechnet für C₄₃H₇₆O₅Si₂: 729.5231, gefunden 729.5236.

Beispiel 25

Oxidation von Acetal 24 zum Lacton 25

Zu einer Lösung des Acetals 24 (20 mg, 0.03 mmol) in 3 mL Aceton und 0.5 mL Wasser wird PPTS (6 mg) gegeben. Die Lösung wird für 12 h bei Raumtemperatur gerührt und dann mit gesättigter wässriger NaHCO₃-Lösung gequencht. Die wässrige Phase wird mit EtOAc extrahiert, die vereinigten organischen Phasen werden mit MgSO₄ getrocknet, filtriert, und im Vakuum eingeengt. Nach der Reinigung durch Flash-Chromatographie erhält man ein Lactol (16 mg, 83%) als farbloses Öl. Das Lactol wird in 2 mL CH₂Cl₂ aufgenommen und mit MnO₂ (20 mg) versetzt. Die Suspension wird für 12 h bei Raumtemperatur gerührt und dann direkt auf eine Kieselgelsäule gegeben. Durch Flash-Chromatographie (Petrolether/EtOAc 5 : 1) erhält man das Lacton 25 (12 mg, 79%) als farbloses Öl: R_f = 0.19 (Petrolether/EtOAc 5 : 1); [α] 20|D +40.0 (c 0.2, CHCl₃); ¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7.04 (ddd, J = 9.8, 5.5, 2.9 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 6.44 (ddd, J = 15.2, 11.0, 1.5 Hz, 1H), 6.02 (ddd, J = 9.8, 2.8, 1.3 Hz, 1H), 5.70-5.80 (m, 2H), 5.64 (ddd, J = 15.5, 6.5, 1.5 Hz, 1H), 5.50 (dd, J = 15.2, 5.8 Hz, 1H), 5.41 (ddd, J = 15.5, 5.6, 1.6 Hz, 1H), 5.20-5.30 (m, 1H), 5.00-5.10 (m, 1H), 4.35-4.40 (m, 1H), 4.20-4.30 (m, 1H), 3.90-3.95 (m, 1H), 3.67 (ddd, J = 11.6, 3.9, 2.2 Hz, 1H), 2.85-2.95 (m, 1H), 2.40-2.60 (m, 2H), 2.00-2.10 (m, 2H), 1.80 (d, J = 1.3 Hz, 3H), 1.73 (d, J = 1.1 Hz, 3H), 1.69 (ddd, J = 6.5, 1.4, 1.3 Hz, 3H), 1.30-1.60 (m, 3H), 0.90-1.00 (m, 6H), 0.92 (s, 9H), 0.90 (s, 9H), 0.09 (s, 3H), 0.06 (s, 3H), 0.05 (s, 3H), 0.04 (s, 3H); ¹³C-NMR (100 MHz, CD₃OD) δ 166.6, 140.2, 147.9, 137.6, 132.5, 132.3, 131.2, 130.8, 128.4, 127.3, 127.2, 126.4, 121.6, 80.1, 77.5, 77.0, 76.1, 72.4, 41.8, 31.4, 31.0, 29.3, 26.5, 26.3, 21.2, 20.6, 19.2, 18.9, 18.0, 16.9, 11.6, -4.1, -4.3, -4.6, -4.7; HRMS berechnet für C₄₀H₆₈O₅Si₂: 685.4605, gefunden 685.4608.

Beispiel 26

Entschützung von Verbindung 25 zum bevorzugten Ratjadon-Derivat 1

Zu einer Lösung des Lactons 25 aus der vorhergehenden Reaktion (4 mg, 6 µmol) in 0.3 mL THF und 0.3 mL Pyridin wird bei Raumtemperatur HF.Pyridin (0.2 mL) getropft. Die Lösung wird 24 h bei Raumtemperatur gerührt und mit gesättigter wässriger NaHCO₃-Lösung gequencht. Diese Mischung wird in EtOAc und Phosphat-Puffer (pH 7) aufgenommen. Die Phasen werden getrennt und die organische Phase mit EtOAc extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Nach der Reinigung durch Flash-Chromatographie (CH₂Cl₂/CH₃OH, 16 : 1) erhält man Ratjadon-Derivat 1 (2.0 mg, 76%) als farblosen Feststoff. R_f = 0.25 (CH₂Cl₂/Methanol 19 : 1); [α] 20|D +48.0 (c 0.1, CHCl₃); ¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7.05 (ddd, J = 9.6, 5.5, 2.9 Hz, 1H), 6.46 (ddd, J = 15.2, 10.9, 1.2 Hz, 1H), 6.01 (ddd, J = 9.8, 2.4, 1.3 Hz, 1H), 5.80-5.85 (m, 1H), 5.68 (ddq, J = 15.5, 6.5, 1.3 Hz, 1H), 5.62 (dd, J = 15.2, 6.7 Hz, 1H), 5.46 (ddd, J = 15.5, 6.0, 1.6 Hz, 1H), 5.20-5.30 (m, 1H), 5.05-5.15 (m, 1H), 4.35-4.40 (m, 1H), 4.06 (ddd, J = 6.5, 2.5, 1.2 Hz, 1H), 3.85-3.90 (m, 1H), 3.76 (ddd, J = 12.2, 4.2, 2.5 Hz, 1H), 2.40-2.60 (m, 2H), 2.85-2.95 (m, 1H), 1.79 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 1.95-2.10 (m, 2H), 1.74 (d, J = 1.3 Hz, 3H), 1.69 (ddd, J = 6.5, 1.5, 1.3 Hz, 3H), 1.80-1.85 (m, 1H), 1.60-1.65 (m, 1H), 1.45-1.50 (m, 1H), 0.94 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 7.1 Hz, 3H); ¹³C-NMR (CD₃OD) δ 166.7, 148.0, 140.1, 138.1, 132.0, 131.3, 130.9, 129.3, 127.5, 127.1, 126.9, 121.5, 80.1, 76.8, 76.1, 76.0, 71.0, 40.7, 31.7, 31.0, 29.2, 21.3, 20.6, 18.0, 17.0, 11.6; HRMS berechnet für C₂₈H₄₀O₅: 456.2876, gefunden 456.2880.

Beispiel 27

Synthese des Aldehydes 27 aus dem Diol 26

In einen 50 ml Rundkolben, ausgerüstet mit Argon-Ballon und Rückflußkühler, wird das Diol 26 (8.17 g, 78.44 mmol) in 12 ml trockenem Toluol vorgelegt. Die Lösung wird gerührt und Natrium-Hydrid (60%ige Suspension in Mineralöl) (1.53 g, 38.25 mmol) wird portionsweise über einen Zeitraum von 45 min dazugegeben. Die Suspension wird für 3 h unter Argon-Schutzgasatmosphäre unter Rückfluß erhitzt. Anschließend wird 4-Methoxy-Benzylchlorid (5.2 ml, 38.31 mmol) über einen Zeitraum von 30 min dazugegeben und für 18 h unter Rückfluß gekocht. Nach dieser Zeit wird die Reaktionsmischung auf Raumtemperatur abgekühlt und zu 50 ml Wasser gegossen. Die Phasen werden getrennt und die wässerige Phase wird mit Dichlormethan (3 × 50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über Na₂SO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Nach Reinigung an Kieselgel (EtOAc : Petrolether = 1 : 1), wird 5-(4-Methoxy-benzyloxy)- pentan-1-ol (3.469 g) als farbloses Öl erhalten (40% Ausbeute): R_f = 0.32 in Hexan : EtOAc (2 : 3); ¹H NMR (200 MHz, CDCl₃)(δ ppm): 1.46-1.60 (m, 6H), 3.45 (t, 2H), 3.60 (t, 2H), 3.80 (s, 3H), 4.43 (s, 2H), 6,89 (dd, 2H), 7.26 (dd, 2H).

Die so erhaltene Verbindung wird dann in die nächste Reaktion eingesetzt.

In einen 50 ml Rundkolben, ausgerüstet mit Argon-Ballon und Rückflußkühler, werden Oxalylchlorid (1.45 ml, 16.62 mmol) und 75 ml trockenes Dichlormethan eingefüllt. Die Lösung wird auf -78°C gekühlt und eine Lösung von DMSO (2.36 ml, 33.25 mmol) in 5 ml trockenem Dichlormethan wird über einen Zeitraum von 5 min dazugegeben. Die Reaktion wird weitere 15 min gerührt. Dann wird eine Lösung von 5-(4-Methoxy-benzyloxy)-pentan-1-ol (3.4 g, 15.16 mmol) aus der oben beschriebenen Synthesereaktion in 5 ml trockenem Dichlormethan dazugegeben und bei -78°C für 2 h gerührt. Zu der Lösung wird Triethylamin (10.56 ml, 75.76 mmol) zugegeben und bei Raumtemperatur (RT, ca. 20°C) für 1 h gerührt. Die Reaktion wird durch die Zugabe von 150 ml Wasser abgebrochen und die wässerige Phase wird mit Dichlormethan extrahiert (3 × 50 ml). Die vereinigten organischen Phasen werden mit gesättigter NaCl-Lösung gewaschen (2 × 100 ml) und über Na₂SO₄ getrocknet. Nach dem Abfiltrieren vom Trockenmittel wird die Lösung im Vakuum konzentriert und mit Kieselgel gereinigt (Hexan : EtOAc = 8 : 2). Man erhält so 3.36 g des Aldehyds 27 als farbloses Öl (98% Ausbeute): ¹H NMR (200 MHz, CDCl₃) (δ ppm): 1.66-1.70 (m, 6H), 2.45 (m, 2H), 3.46 (m, 2H), 3.81 (m, 2H), 4.42 (s, 2H), 6.90 (d, 2H), 7.27 (m, 2H), 9.76 (s, 1H).

Beispiel 28

Wittip-Horner Reaktion von Aldehyd 27 zu Ester 28

In einen 100 ml Zweihals-Rundkolben, ausgerüstet mit Argonschutzgasballon, werden Natriumhydrid (60% Suspension in Mineralöl) (0.60 g, 24.70 mmol) und 49 ml trockenes THF gegeben. Der Inhalt wird gerührt und auf 0°C abgekühlt. Danach wird Triethyl-phosphonoacetat (3 ml, 14.84 mmol) langsam zugetropft und bei 0°C für 90 min gerührt. Eine Lösung von Aldehyd 27 (3 g, 13.49 mmol) in THF (14 ml) wird langsam bei 0°C zu dieser Lösung dazugetropft. Nach beendeter Zugabe wird das Eisbad entfernt und bei RT gerührt. Nach ca. 2 h wird die Reaktion durch die Zugabe von gesättigter NH₄Cl-Lösung abgebrochen. Die Phasen werden getrennt und die wässrige Phase wird mit Essigester (3 × 50 ml) extrahiert. Nach Reinigung durch Kieselgel-Flashchromatographie erhält man Ester 28 (1.90 g) als farbloses Öl (60% Ausbeute): R_f = 0.46 in Hexan : EtOAc (2 : 3); ¹H NMR (200 MHz, CDCl₃) (δ ppm): 1.25-1.32 (m, 6H), 2.21-2.23 (m, 2H), 3.41 (m, 3H), 3.81 (m, 4H), 4.16 (m, 4H), 4.43 (s, 2H), 5.77-5.85 (d, 1H, H_a, J = 15.6 Hz), 6.90 (m, 3H, H_b, J = 8.66 Hz), and 7.26 (dd, 2H).

Beispiel 29

Reduktion des Esters 28 zum Allylalkohol 29

In einen 250 ml Zweihals-Rundkolben, ausgerüstet mit Argonschutzgasballon, werden Ester 28 (10 g, 34.24 mmol) und 170 ml trockenes Dichlormethan gegeben. Die Lösung wird auf -78°C abgekühlt. Dann wird DIBAL-H (1 M in Hexan) (97.6 ml, 97.58 mmol) tropfenweise zugegeben und für 1 h gerührt. Die Reaktionslösung wird mit 70 ml MTB-Ether verdünnt und die Reaktion wird durch die Zugabe von 12 ml Wasser abgebrochen. Die resultierende Lösung wird solange kräftig bei RT gerührt, bis ein weißer Niederschlag entsteht. Zu dieser Mischung werden 4 N NaOH (12 ml) und Wasser (24 ml) zugegeben. Die Suspension wird gerührt. Die organische Phase wird abgetrennt, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Nach Reinigung durch Kieselgel- Flashchromatographie (Hexan : Essigester = 7 : 3) erhält man Allyl-Alkohol 29 (6.3 g) als farbloses Öl (74% Ausbeute): R_f = 0.46 in Hexan : EtOAc (1 : 1); ¹H NMR (200 MHz, CDCl₃) (δ ppm): 1.53 (m, 6H), 2.04 (m, 2H), 3.44 (t, 2H), 3.80 (s, 3H), 4.07 (d, 2H), 4.42 (s, 2H), 5.65 (m, 2H), 6.85-6.90 (d, 2H), and 7.24-7.28 (d, 2H).

Beispiel 30

Asymmetrische Sharpless-Epoxidierung des Allylalkohols 29 zum Epoxid 30

In einen 100 ml Zweihals-Rundkolben, ausgerüstet mit Argonschutzgasballon, werden aktiviertes Molekular-Sieb (4 Å) (3.6 g) und 42 ml trockenes Dichlormethan gegeben. Die Reaktionslösung wird auf -25°C abgekühlt. Zu der gerührten Lösung werden L(+) DET (0.350 ml, 2.03 mmol) und Ti(iOPr)₄ (0.416 ml, 1.317 mmol) nacheinander zugegeben. Danach wird TBHP (5.5 M in Decan) (5.01 ml, 27.52 mmol) tropfenweise über einen Zeitraum von 10 min zugetropft und für 30 min gerührt. Anschließend wird eine Lösung des Allylalkohols 29 (3 g, 12 mmol) in 10 ml trockenem Dichlormethan tropfenweise über einen Zeitraum von 30 min zugegeben und 3 h bei einer Temperatur von -20°C gerührt. Die Reaktion wird durch die Zugabe von Wasser (8.4 ml) abgebrochen und anschließend für 30 min bei RT gerührt. Dann wird 30%ige Natriumhydroxid-Lösung (0.8 ml) zugegeben und für weitere 30 min gerührt. Das Rohprodukt wird mit Dichlormethan extrahiert (4 × 150 ml). Die organischen Phasen werden vereinigt und über Na₂SO₄ getrocknet. Nach Konzentration im Vakuum wird durch Kieselgel- Flashchromatographie gereinigt (Hexan : EtOAc = 8 : 2). Man erhält so Epoxid 30 (2.186 g) als farbloses Öl (68.4% Ausbeute): R_f = 0.20 in Hexan : EtOAc (1 : 1); [α] 20|D -15.8 (c = 1, Chloroform); ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) (δ ppm): 1.57 (m, 6H), 2.89-2.90 (m, 2H), 3.44 (t, 2H), 3.61 (dd, 1H), 3.79 (s, 3H), 3,68 (dd, 1H), 4.42 (s, 2H), 6.88 (d, 2H), 7.24-7.25 (m, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) (δ ppm): 22.68, 29.43, 31.32, 55.24, 55.79, 58.33, 61.64, 69.71, 72.56, 113.74, 129.22, 159.11.

Beispiel 31

Cyclisierung des Epoxids 30 zum Diol 31

In einen 50 ml Zweihals-Rundkolben, ausgerüstet mit Argonschutzgasballon, wird eine Lösung von Epoxid 30 (2.03 g, 7.63 mmol) in 48 ml Dichlormethan/Wasser (10 : 1) gegeben und auf 0°C abgekühlt. Zu dieser Lösung wird DDQ (2.87 g, 13.10 mmol) portionsweise gegeben. Nach beendeter Zugabe wird das Kühlbad entfernt und die Reaktion bei RT für 3 h weiter gerührt. Die Reaktion wird dann mit 100 ml Dichlormethan verdünnt. Die organische Phase wird abgetrennt und nacheinander mit 50 ml gesättigter NaCl-Lösung, 50 ml gesättigter NaHCO₃-Lösung und wieder mit 50 ml gesättigter NaCl-Lösung gewaschen. Die organische Phase wird über Na₂SO₄ getrocknet und vom Trockenmittel abfiltriert. Nach Konzentration im Vakuum wird durch Kieselgel-Flashchromatographie gereinigt (Hexan : EtOAc = 3 : 1). Man erhält Diol 31 (0.180 g) als farbloses Öl (14% Ausbeute): R_f = 0.13 in Hexan : EtOAc (2 : 3); [α] 20|D = -2.4 (c = 1, Chloroform); ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) (δ ppm): 1.35-1.66 (m, 6H), 1.83-1.86 (d, 1H), 2.73 (s, 2H), 3.38 (m, 2H), 3.58 (m, 1H), 3.66-3.70 (m, 2H), 3.98 (dd, 1H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) (δ ppm): 23.01, 26.04, 27.47, 63.55, 68.77, 73.65, 79.98.

Beispiel 32

Doppelte TBS-Schützung des Diols 31 zum TBS-Ether 32

In einen 25 ml Zweihals-Rundkolben, ausgerüstet mit Argonschutzgasballon, wird eine Lösung von Diol 31 (0.170 g, 1.16 mmol) in 8 ml trockenem Dichlormethan gegeben und auf 0°C abgekühlt. Dann wird 2,6-Lutidin (0.693 ml, 5.822 mmol) langsam zugegeben. Zu dieser Lösung wird anschließend TBDMSOTf (0.802 ml, 3.493 mmol) tropfenweise über einen Zeitraum von 30 min zugegeben. Nach vollendeter Zugabe wird die Kühlung entfernt und 12 h bei RT gerührt. Die Reaktion wird anschließend durch Zugabe von gesättigter NHCO₃-Lösung (5 ml) und Wasser (9 ml) abgebrochen. Die wässrige Phase wird mit Dichlormethan (4 × 5 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über Na₂SO₄ getrocknet. Nach Konzentration im Vakuum und Reinigung durch Kieselgel- Flashchromatographie (Hexan : EtOAc = 4 : 1) erhält man 0.400 g des TBS-Ethers 32 als farbloses Öl (92% Ausbeute): R_f = 0.79 in Hexan : EtOAc (3 : 2); [α] 20|D = 5.2 (c = 1, Chloroform); ¹H NMR (200 MHz, CDCl₃) (δ ppm): -0.082 (s, 6H), 0.84 (m, 18H), 1.23 (m, 5H), 2.01 (s, 1H), 3.56 (m, 1H), 4.09 (m, 1H).

Beispiel 33

Entschützen der primären OH-Gruppe im TBS-Ether 32 zum einfach geschützten Alkohol 33

TBS-Ether 32 (0.144 g, 0.385 mmol) wird in 2 ml Ethanol gelöst und bei RT gerührt. Zu dieser Lösung wird PPTS (0.029 g, 0.115 mmol) gegeben und auf 65 °C erwärmt. Nach 2 h ist die Reaktion beendet und das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt. Anschließend wird das Rohprodukt durch Kieselgel- Flashchromatographie (Hexan : EtOAc = 4 : 1) gereinigt. Man erhält 0.095 g des Alkohols 33 (95% Ausbeute): R_f = 0.70 in Hexan : EtOAc (2 : 3); [α] 20|D = 1.2 (c = 1, Chloroform); ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) (δ ppm): 0.06 (s, 6H), 0.86 (s, 9H), 1.23 (ddd, 1H), 1.48 (m, 3H), 1.78 (m, 2H9, 2.23 (br, OH), 3.31-3.40 (m, 2H), 3.59-3.64 (m, 2H), 3.93 (dd, 1H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) (δ ppm): -5.59, 17.03, 22.05, 24.81, 25.07, 27.68, 64.21, 67.53, 73.58, 78.97.

Beispiel 34

Dess-Martin-Oxidation des Alkohols 33 zum Aldehyd 34

Zu einer Lösung des Alkohols 33 (0.112 g, 0.430 mmol) in Dichlormethan (13 ml) werden bei 0°C Dess-Martin-Reagenz (0.218 g, 0.516 mmol) gegeben. Nach beendeter Zugabe wird die Kühlung entfernt und für 2 h bei RT gerührt. Anschließend wird die Reaktion durch die Zugabe gesättigter NaHCO₃-Lösung (10 ml) abgebrochen. Die Phasen werden getrennt und die organische Phase wird mit Dichlormethan (3 × 10 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über Na₂SO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Nach Reinigung durch Kieselgel-Flashchromatographie (Hexan : EtOAc = 95 : 5) erhält man den Aldehyd 34 (0.105 g) (94.5% Ausbeute): R_f = 0.6 in Hexan : EtOAc (8 : 2).

Dieser Aldehyd wird direkt in die nächste Reaktion eingesetzt.

Beispiel 35

Tebbe-Olefinierung von Aldehyd 34 zu Olefin 35

Zu einer Lösung von Aldehyd 34 (0.105 g, 0.407 mmol) in THF (13 ml) wird bei 0°C Tebbe-Reagenz zugegeben (0.830 ml, 0.407 mmol). Die Reaktionslösung wird für 30 min unter Ar-Atmosphäre gerührt. Nach dieser Zeit wird die Reaktion durch die Zugabe von MTB-Ether (20 ml) und 1 M NaOH-Lösung (0.2 ml) abgebrochen. Die organische Phase wird über Na₂SO₄ getrocknet, vom Lösungsmittel abfiltriert und im Vakuum konzentriert. Nach Reinigung durch Kieselgel-Flashchromatographie (Hexan : EtOAc = 9 : 1) erhält man das Olefin 35 (0.093 g) (89.42% Ausbeute): R_f = 0.61 in Hexan: EtOAc (9 : 1); [α] 20|D = -1.0 (c = 1, Chloroform); ¹H NMR (200 MHz, CDCl₃): 0.04 (d, 6H), 0.85 (s, 9H), 1.21-1.40 (m, 6H), 3.14 (m, 1H), 3.36 (m, 1H), 3.94 (m, 2H), 5.14-5.26 (dd, 2H), 5.70-5.81 (m, 1H).

Beispiel 36 Einfluß der erfindungsgemäßen Substanz 1 auf den Zellzyklus von Glioblastom- und HepG2-Zellen

Glioblastomzellen und HepG2-Zellen (Lebercarcinom-Zellen) wurden jeweils ohne die erfindungsgemäße Substanz 1 und in Nährmedium mit verschiedenen Konzentrationen der erfindungsgemäßen Substanz 1 48 h inkubiert. Die Zellen wurden geerntet und durchflusscytometrisch vermessen.

Die Ergebnisse der durchflusscytometrischen Messungen sind in den Fig. 6 bis 8 für Glioblastom-Zellen und 9 bis 11 für HepG2-Zellen jeweils in Diagrammform dargestellt. Auf der X-Achse ist jeweils der DNA-Gehalt angegeben, auf der Y-Achse ist die Zellzahl angegeben. Die in den Fig. 6 bis 8 dargestellten Ergebnisse wurden jeweils mit 0 nM, 10 nM bzw. 20 nM der bevorzugten erfindungsgemäßen Substanz 1 im Kultivierungsmedium erzielt; die in den Fig. 9 bis 11 dargestellten Ergebnisse wurden mit 0 nM, 2 nM bzw. 5 nM der bevorzugten erfindungsgemäßen Substanz 1 im Kultivierungsmedium erzielt.

Man erkennt, dass bei beiden untersuchten Zelllinien die absolute Zahl und der Anteil der Zellen in der S- und in der G₂-Phase mit steigender Konzentration der Substanz 1 abnimmt. Bei einer Konzentration von 20 nM (Glioblastomzellen) bzw. 5 nM (HepG2) befinden sich praktisch alle untersuchten Zellen in der G₁-Phase. Die bevorzugte erfindungsgemäße Substanz 1 hält also bei für den jeweiligen Zelltyp passender Dosierung den Zellzyklus in der G₁-Phase an.

Zusätzlich wurde die Gestalt von auf einem üblichen Träger wachsenden Glioblastomzellen in Abhängigkeit von der Konzentration der erfindungsgemäßen Substanz 1 untersucht (keine Abbildung). in Abwesenheit der Substanz 1 besitzen die Zellen ihre typische dendritische Form und haften an der Trägeroberfläche an. In Anwesenheit von 50 nM der bevorzugten Substanz 1 haben die Zellen größtenteils ihre dendritische Form verloren und lösen sich leicht von der Trägeroberfläche ab.

Beispiel 37

Einfluß der erfindungsgemäßen Substanzen 1, 36 und 37 auf das Wachstum von Tumor-Zellen

Die nachfolgenden Tabellen zeigen den Einfluß der erfindungsgemäßen Substanzen 1, 36 und 37 auf das Wachstum von Tumor-Zellen, nämlich das Wachstum der Zelllinien HM02 (Magenadenocarcinom), HepG2 (Lebercarcinom) und MCF 7 (Mammacarcinom).

Die Untersuchungen wurden gemäß den NCI-Richtlinien (Grever et al., Seminars in Oncology 19 (1992), 622-638) durchgeführt. Die Zellen wurden in 96-well Mikrotiterplatten in RPMI 1640-Medium mit 10% FCS (fetales Kälberserum) kultiviert. 24 h nach der Zellaussaat wurden die in Methanol gelösten erfindungsgemäßen Substanzen 1 und 36 zugegeben und weitere 48 h inkubiert. Anschließend wurde die Zellzahl bestimmt.

In den Tabellen bedeutet jeweils:
G₅₀: Konzentration, die eine halbmaximale Hemmung des Zellwachstums bewirkt
TGI: Konzentration, die eine vollständige Hemmung des Zellwachstums bewirkt
LC₅₀: Konzentration, die eine halbmaximale cytotoxische Wirkung bewirkt, d. h. bei der die 24 h nach der Aussaat vorliegende Zellzahl um die Hälfte reduziert wird.

Zellinie HM02

^a: 90%ige Wachstumsinhibition bei 100 ng/ml

Zellinie: HEP-G2

^b: 80%ige Wachstumsinhibition bei 500 ng/ml; ^c: 60%ige Wachstumsinhibition bei 500 ng/ml

MCF 7

^b: 80%ige Wachstumsinhibition bei 500 ng/ml; ^c: 60%ige Wachstumsinhibition bei 500 ng/ml

Claims (9)

1. Substanz der Formel
wobei
R¹, R² und R³ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe, die aus H, CH₃ und C₂H₅ besteht,
R₄ CH₃ oder C₂H₅ ist,
R₅ H oder OH ist und
R₆ und R₇ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe, die aus H, CH₃, C₂H₅, n-C₃H₇, iso-C₃H₇,
und
besteht,
und wobei
C10 R-konfiguriert ist und
C17 R-konfiguriert ist, wenn

• a) C16 R-konfiguriert ist und gleichzeitig
• b) weder R₅, noch R₆, noch R₇ H ist.

2. Substanz gemäß Anspruch 1, wobei R₅, R₆ und R₇ jeweils H sind.

3. Formulierung zum Hemmen der Vermehrung von Tumorzellen, umfassend

• a) in einer ausreichenden Konzentration zum Hemmen der Vermehrung von Tumorzellen eine Substanz gemäß Anspruch 1 oder ein Gemisch zweier oder mehrerer unterschiedlicher Substanzen gemäß Anspruch 1, und
• b) einen pharmazeutisch akzeptablen Träger.

4. Verwendung einer Substanz gemäß Anspruch 1 oder einer Formulierung gemäß Anspruch 3 zum Herstellen eines Arzneimittels zum Hemmen der Vermehrung von Tumorzellen.

5. Verwendung einer Substanz gemäß Anspruch 1 oder einer Formulierung gemäß Anspruch 3 zum nichttherapeutischen Hemmen der Vermehrung von Zellen, insbesondere zum nichttherapeutischen Hemmen der Vermehrung von Tumorzellen.

6. Verfahren zum nichttherapeutischen Hemmen der Vermehrung von Tumorzellen, dadurch gekennzeichnet, daß die Tumorzellen einer vermehrungshemmenden Dosis einer Substanz gemäß Anspruch 1 oder einer vermehrungshemmenden Dosis eines Gemischs zweier oder mehrerer unterschiedlicher Substanzen gemäß Anspruch 1 ausgesetzt werden.

7. Substanz der Formel
wobei
X eine ungeschützte oder geschützte Hydroxy-Funktion ist,
R₅ H, eine ungeschützte oder eine geschützte Hydroxy-Funktion ist und
R₆ und R₇ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe, die aus H, CH₃, C₂H₅, n-C₃H₇, iso-C₃H₇,
und
besteht,
und wobei
C"17" R-konfiguriert ist, wenn

• a) C"16" R-konfiguriert ist und gleichzeitig
• b) weder R₅, noch R₆, noch R₇ H ist.

8. Substanz gemäß Anspruch 7, wobei R₅, R₆ und R₇ jeweils H sind.

9. Verfahren zum Herstellen einer Substanz gemäß Anspruch 1, wobei eine Substanz der Formel gemäß Anspruch 7, bei der jeweils X eine geschützte Hydroxy-Funktion ist und R₅ H oder eine geschützte Hydroxy-Funktion ist, verbunden wird mit einem Iodid der Formel
bei dem
R₁, R₂ und R₃ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe, die aus H, CH₃ und C₂H₅ besteht,
R₄ CH₃ oder C₂H₅ ist und
Y Methyl, Ethyl oder Isopropyl ist.