WO1995021188A1 - Untereinheiten von glutamatrezeptoren, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung - Google Patents

Untereinheiten von glutamatrezeptoren, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung Download PDF

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WO1995021188A1
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PCT/EP1995/000290
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Thomas Höger
Andreas Ultsch
Alfred Bach
Sylvia Sterrer
Hans-Georg Lemaire
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Basf Aktiengesellschaft
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70571—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for neuromediators, e.g. serotonin receptor, dopamine receptor

Definitions

  • the invention relates to the expression of new variants of ionotropic glutamate receptor subunits in eukaryotic cells and to methods for finding functional ligands for corresponding 10 glutamate receptor channels.
  • Glutamate is the most important excitatory neurotransmitter in the central nervous system (TIPS 11, 1990, 126-132; Pharmacological Reviews 40, 1989, 143-210; TIPS 13, 1992, 291-296) and is involved in numerous pathophysiological processes such as e.g. Epilepsy,
  • GluRB variants differ considerably in their electrophysiological properties (Cell 67, 1991, 11-19; Neuron 8; 1992, 189-198).
  • the human cDNA for GluRAflip and GluRAflop has also been published (PNAS USA 88, 1991, 7557-7561; PNAS USA 89,
  • GluRA For GluRA, a variant was also found which resulted from "alternative splicing", in which a 240 bp fragment is missing in the 5 'region of the GluRA cDNA and the corresponding protein is thus shortened by 80 amino acids.
  • the corresponding subunits are designated as follows:
  • DNA or amino acid sequences relate exclusively to human glutamate receptor subunits.
  • SEQ ID NO: 1 shows the cDNA sequence of GluRAflipG and the polypeptide sequence derived therefrom (SEQ ID NO: 2); in SEQ ID NO: 3 the cDNA sequence of GluRAflopG, in SEQ ID NO: 4 the polypeptide sequence derived therefrom.
  • the GluRAflipR cDNA has a base exchange at position bp 2269, which converts a glycine codon (GGA) into an arginine codon (AGA). The same applies to GluRAflopR.
  • the GluRAdel240 variants correspond to the GluRA
  • Variants however, have a deletion: bp 221-460 based on SEQ ID NO: 1 and 3.
  • SEQ ID NO: 5 shows the cDNA sequence of GluRBflipQ-G and the polypeptide sequence derived therefrom (SEQ ID NO: 6); in SEQ ID NO: 7 the cDNA sequence of GluRBflopQ-G, in SEQ ID NO: 8 the polypeptide sequence derived therefrom.
  • the cDNA for GluRBflipQ-R has a base exchange at position bp 2290, which converts a glycine codon (GGA) into an arginine codon (AGA).
  • the cDNA molecules for GluRBflipR-G, GluRBflipR-R, GluRBflopR-G and GluRBflopR-R have a base exchange at position bp 1820 in comparison to the above GluRB variants, which converts a glutamine codon (CAG) into an arginine Converts codon (CGG).
  • SEQ ID NO: 9 shows the cDNA sequence of GluRCflipG and SEQ ID NO: 10 shows the polypeptide sequence derived from it.
  • SEQ ID NO: 11 shows the cDNA sequence of GluRCflopG and SEQ ID NO: 12 the polypeptide sequence derived therefrom.
  • the cDNA molecules for GluRCflipR and GluRCflopR have a base exchange at position bp 2377, which converts a glycine codon (GGA) into an arginine codon (AGA).
  • SEQ ID NO: 13 shows the cDNA sequence of GluRDflipG and SEQ ID NO: 14 shows the polypeptide sequence derived from it.
  • SEQ ID NO: 15 shows the cDNA sequence of GluRDflopG and SEQ ID NO: 16 the polypeptide sequence derived therefrom.
  • the cDNA molecules for GluRDflipR and GluRDflopR have a base exchange at position bp 2293, which converts a glycine codon (GGA) into an arginine codon (AGA).
  • DNA sequences are those which have a different nucleotide sequence than that listed in SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 or 15, but which, owing to the degeneracy of the genetic code for those in SEQ ID NO: encode 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 or 16 listed polypeptide chain or parts thereof.
  • DNA sequences which code for AMPA glutamate receptor subunits and which, under standard conditions, have the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 or 15 or hybridize with a nucleotide sequence encoding the protein shown in SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 or 16.
  • Standard conditions are understood to mean, for example, temperatures between 42 and 58 ° C.
  • the invention furthermore relates to methods for identifying functional ligands for AMPA glutamate receptors, which are characterized in that cells are transfected with sequences which code for AMPA GluR subunits, the membranes of these cells are isolated and with them Performs membrane receptor binding experiments.
  • a further method for identifying functional ligands for AMPA glutamate receptors is characterized in that in cells which have been transfected with one or more DNA sequences which code for AMPA GluR subunits, the signal transduction path is influenced by binding the Ligands to the receptor caused, which is detected by a receptor system, for example the intracellular Ca ++ concentration after ligand binding using fluorimetric methods (Anal. Biochem. 209, 1993, 343).
  • the new polypeptides and DNA sequences can be genetically engineered using known methods. In this way, one can isolate mRNA from brain tissue and translate it into double-stranded cDNA.
  • This cDNA can be used as a template for the polymerase chain reaction.
  • the corresponding cDNA can be amplified under suitable reaction conditions.
  • the amplified cDNA can be sequenced without prior cloning.
  • the double-stranded cDNA can also be used in ⁇ vectors, e.g. ⁇ gt 10 or ⁇ ZAP, can be integrated to generate a brain-specific cDNA bank.
  • Such a cDNA bank can be searched with radioactively labeled DNA or RNA probes in order to identify clones which have homology with the hybridization sample.
  • the methods used are, for example, in "Current Protocols in Molecular Biology” (ed. FM Ausubel et al.) 1989, ISBN 0-471 50338-x (Vol. 1 and 2), for the polymerase chain reaction in Saiki et al . (1985) Science, 230, 1350-54 and Mullis and Faloona (1987) Meth. Enzymol., 155, 335-350.
  • the cDNA characterized in this way is easily accessible with the aid of restriction enzymes.
  • the resulting fragments possibly in conjunction with chemically synthesized oligonucleotides, adapters or gene fragments, can be used to clone the sequences coding for the protein.
  • the incorporation of the gene fragments or synthetic DNA sequences into cloning vectors for example the commercially available plasmids M13mpl8 or Bluescript, is carried out in a known manner.
  • the genes or gene fragments can also be mixed with suitable chemically synthesized or from bacteria, Phages, eukaryotic cells or their viruses isolated control regions are provided, which enable the expression of the proteins in different host systems.
  • vectors for expression in mammalian cells, vectors can be used which control the gene to be expressed, in this case the cDNA sequences coding for the subunits of AMPA glutamate receptors described here, under the control of the mouse metallothio no, the viral SV40 - or the cytomegalovirus promoter (J. Page Martin, Gene, 37 (1985), 139-144).
  • the expression of the methionine start codon of the gene which codes for these subunits of AMPA glutamate receptors is necessary for expression.
  • Clones are then isolated which have copies of these vectors as episomes or integrated into the genome.
  • the integration of the foreign gene into a vector which contains the promoter of the cytomegalovirus is particularly advantageous.
  • cells can be transfected with a suitable vector such that the transient expression of the DNA introduced in this way is sufficient for pharmacological characterization of the expressed heterologous polypeptides.
  • control of expression by the cytomegalovirus promoter is particularly advantageous.
  • AMPA-glutamate receptors can be produced by transfecting together one or more different DNA sequences from the group of the AMPA-GluR subunits in cells. In this way, AMPA glutamate receptors with different subunits can be obtained.
  • the use of "shuttle" vectors is well suited.
  • the plasmid is first constructed and propagated in bacterial cells; the conversion into the eukaryotic cells then takes place, for example into the human embryonic kidney cell line HEK 293.
  • Other cell systems for example yeast and other fungi, insect cells and animal and human cells such as, for example, CHO, COS and L cells, can also be used in conjunction with suitable expression vectors for the expression of the cloned cDNA.
  • the eukaryotic expression systems have the advantage that they are able to express their products effectively and mostly in their native form. They also have the ability to modify their products post-translationally.
  • the expressed receptor proteins can be solubilized by detergents and purified by affinity chromatography using known methods. After crystallization and X-ray structure analysis or other physical methods such as NMR or scanning tunneling microscopy, the pure polypeptide can be used to first clarify the spatial structure of the receptor and then the spatial structure of the ligand binding site.
  • the expressed receptor proteins can also serve as antigens for the generation of polyclonal or monoclonal antibodies. These antibodies in turn can be used for diagnostic purposes if necessary. Another application for such antibodies is to use them as aids for rational drug design.
  • the receptor-specific antibodies can be used as antigens for the generation of anti-idiotypic antibodies.
  • Such antibodies can represent an image of the receptor for defined areas and can be used for screening for specific receptor ligands or for rational drug design.
  • Receptor-expressing cell lines represent an important tool in the screening for specific receptor ligands.
  • the membranes of these cells can be used for the receptor binding test.
  • Information about the mode of action (agonism / antagonism) of a receptor ligand can be obtained by providing cells which have been transfected with a DNA sequence according to the invention with a suitable reporter system.
  • Suitable reporter systems are those in which a promoter which is regulated by compounds of the signal transduction pathway (second mes ⁇ senger) is functionally linked to a gene for an easily detectable product such as luciferase.
  • Such reporter systems are for example from Science 252, 1424 (1991); Proc. Natl. Acad. Be. USA 88, 5061 (1991) or Journal of Receiver Res.
  • a suitable promoter which is regulated, for example, by the intracellular Ca ++ concentration, is that of the fos gene. It is also possible to change the directly detect intracellular Ca ++ concentration with fluorescent dyes (e.g. FURA 2AM).
  • the current flow through the cell membrane can also be measured as a function of the ligand binding.
  • Another object of the invention is the use of oligonucleotides, which are derived from the structure described in SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 or 15, as antisense molecules for the targeted deactivation of Genes.
  • PCR polymreas chain reaction
  • 10 ⁇ l lysate one each human temporal cortex cDNA library (titer: 1,5xl0 n phages / ml; vector Lambda ZAP; GluRA cDNA fragment bp 1-839) or a human nucleus accumbens cDNA library (titer: 1-9xl0 9 phages / ml; Vector Lambda gtlO; GluRA cDNA fragments 1-1421 and 5 1407-2721) were used as templates for the first PCR reaction with the primer oligonucleotides A and B.
  • reaction volumes of the batches were in each case 100 .mu.l, 20 .mu.mol of the various primers were used and the reaction buffer contained 10 mM Tris-HCl pH 8.5, 50 mM KC1, 1.5 mM MgCl 2 , in each case 0.2 mM 0 dATP, dCTP, dGTP and dTTP.
  • 20 cycles with the following temperature profile were carried out: 1 minute 94 ° C, 1 minute 55 ° C, 1 minute 72 ° C.
  • a type 9600 thermal cycler from Perkin-Elmer was used.
  • the primer oligonucleotides for amplification of the human GluRA cDNA fragment comprising base pairs 1-1431 had the following sequences:
  • Primer A 5'-ATCTATGATTGGACCTGGGC-3 '(SEQ ID NO: 17)
  • Primer B 5'-ACATCTGCTCTTCCATAGACCAGC-3 '(SEQ ID NO: 18)
  • Primer C 5'-TGCGATAAGCTTATGCAGCACATTTTTGCCTTCTTCTGC-3 '(SEQ ID NO: 19)
  • Primer D 5 '-ATGCCATTCCAGGCCTTCGTGTCA-3' (SEQ ID NO: 20)
  • the primer oligonucleotides for amplification of the human GluRA cDNA fragment comprising base pairs 1407-2721 had the following sequences:
  • Primer A 5'-GATGGAAAATACGGAGCCCGA-3 '(SEQ ID NO: 21)
  • Primer B 5'-GCTGGGGAGCCGAGCCTGCTC-3 '(SEQ ID NO: 22)
  • Primer C 5'-TGACACGAAGGCCTGGAATGGCAT-3 '(SEQ ID NO: 23)
  • Primer D 5'-TGCGATGAATTCTTACAATCCCGTGGCTCCCAAGGGCAT-3 '(SEQ ID NO: 24)
  • the primer oligonucleotides for the amplification of the human GluRA cDNA fragment comprising base pairs 1-839 had the following sequences:
  • Primer B 5'-TACTTGGGTCTCTTCCAGTCCA-3 '(SEQ ID NO: 25)
  • Primer C SEQ ID NO: 20
  • Primer D 5'-TGTGTGGTCTCGAGCATCACTATT-3 '(SEQ ID NO: 26)
  • cDNA fragments specific for the human glutamate receptor subunits A, B, C and D were obtained by "screening" the following commercially available human brain cDNA libraries:
  • PCR fragments of sizes 600-3000 bp were used as screening samples, which had been amplified by the cDNA molecules cloned in pBluescript for GluRA, B, C and D of the rat. 1 ng of plasmid DNA was used as a template.
  • the primer concentrations and buffer conditions for the PCR reactions corresponded to those in Example 1, but in each case 2 ⁇ l of the dNTP labeling mixture from the DNA labeling and detection kit from Boehringer Mannheim were used as the nucleotide source. 35 cycles with the following temperature profile were carried out: 2 minutes 94 ° C., 2 minutes 55 ° C., 3 minutes 72 ° C.
  • the dig-düTP marked fragments were purified over a seaplaque agarose gel.
  • the screening procedure was carried out according to the Instructions of the manual for the above-mentioned kit carried out.
  • the GluR cDNA fragments of the lambda clones resulting from the screening were cloned into the vector pBluescript using the usual genetic engineering methods and assembled into the complete cDNA molecules of the various GluR variants.
  • the GluR cDNA molecules from Examples 1 and 2 were converted into conventional plasmids such as e.g. pBluescript (Stratagene) and pCRII (Invitrogen) cloned.
  • the cloned GluR fragments each comprise the entire open reading frame, including the start and stop codon, and at least 40 bp of the 5 'untranslated regions preceding the start codon.
  • the cloned GluR fragments were cloned into the expression vector pcDNA3 (Invitrogen).
  • the resulting recombinant plasmids were propagated in a known manner.
  • HEK 293 cells were cultured under standard conditions. After 'trypsinization, the cells in DMEM medium (Gibco), were the
  • the DNA to be transfected was prepared as follows: 20 ⁇ g of the DNA solution (1 mg / ml), purified with the Quiagen® system, from Diagen, were mixed with 437 ⁇ l H 2 0, after which 62.5 ⁇ l 2 M CaCl 2 added and finally 500 ul BBS. Ca ++ precipitates formed within 10 min at room temperature.
  • the solution was placed on a 10 cm cell culture dish with the HEK 293 cells cultured according to the above instructions. After thorough mixing, the cells were cultivated for 15 to 20 h in an incubator at 37 ° C./3% CO 2 . 5 ml of serum-free medium were then carefully added. After removing all of the medium and repeating the washing process with 5 ml of medium, 10 ml of medium were added to the cells. After 48 h incubation at 37 ° C and 5% CO 2 , the cells could be used for pharmacological and electrophysiological studies.
  • the DNA was mediated into the cells by liposomes.
  • Lipofectin from GIBCO-BRL was used in accordance with the manufacturer's instructions.
  • plasmid DNA was obtained by standard methods. This plamid DNA was cleaved with the restriction enzyme Not I and used for in vitro transcription. The transcription was started by the T3 or T7 promoter and carried out under standard conditions in accordance with the in vitro transcription kit from Stratagene.
  • the oocytes were dissolved in OR-2 (92.5 mM NaCl, 2.5 mM KCl, ImM Na 2 HP0 4 , 5 mM HEPES, 1 mM MgCl 2 , 1 mM CaCl 2 , 0.5 g / 1 polyvinylpyrolidone, pH 7.2 with the addition of 4 ⁇ g / ml Zinacef and 100 U / ml Penstrep) at 19 ° C. 24 hours after the injection, the oocytes were treated with collagenase (type II Sigma) (1 mg / ml in OR-2 for 1 hour). Electrophysiological recordings were made 2-6 days after injection of the cRNA.
  • OR-2 92.5 mM NaCl, 2.5 mM KCl, ImM Na 2 HP0 4 , 5 mM HEPES, 1 mM MgCl 2 , 1 mM CaCl 2 , 0.5 g / 1 polyvinylpyrolidone, pH 7.2 with the
  • HEK 293 cells ATCC were in RPMI 1640 medium (Glutamax I, Gibco BRL) with 10% FCS (Gibco BRL) under 5 % C0 2 cultivated.
  • AAC GAC ATT GTA GAC CAG GTT ATT ACC ATT GGA AAA CAC GTT AAA GGG 723 Asn Asp Ile Val Asp Gin Val Ile Thr Ile Gly Lys His Val Lys Gly 220 225 230
  • AAA ATC CAG TTT GGA GGT GCA AAT GTC TCT GGA TTT CAG ATA GTG GAC 819 Lys Ile Gin Phe Gly Gly Ala Asn Val Ser Gly Phe Gin Ile Val Asp 250 255 260
  • GAA AGG GCC CTC AAA CAG GTT CAG GTT GAA GGT CTC TCA GGA AAT ATA 1107 Glu Arg Ala Leu Lys Gin Val Gin Val Glu Gly Leu Ser Gly Asn Ile 345 350 355 360
  • GAG CTC AAA ACT AAT GGG CCC CGG AAG ATT GGC TAC TGG AGT GAA GTG 1203 Glu Leu Lys Thr Asn Gly Pro Arg Lys Ile Gly Tyr Trp Ser Glu Val 380 385 390 GAC AAA ATG GTT GTT ACC CTT ACT GAG CTC CCT TCT GGA AAT GAC ACC 1251
  • GCC AGG GAT GCA GAC ACG AAA ATT TGG AAT GGG ATG GTT GGA GAA CTT 1491 Ala Arg Asp Ala Asp Thr Lys Ile Trp Asn Gly Met Val Gly Glu Leu 475 480 485
  • GGT GGA AAC CTG GAT TCC AAA
  • GGA 2307 Gly Gly Asn Leu Asp Ser Lys Gly Tyr
  • AAC GAC ATT GTA GAC CAG GTT ATT ACC ATT GGA AAA CAC GTT AAA GGG 723
  • AAA ATC CAG TTT GGA GGT GCA AAT GTC TCT GGA TTT CAG ATA GTG GAC 819
  • GAG CTC AAA ACT AAT GGG CCC CGG AAG ATT GGC TAC TGG AGT GAA GTG 1203
  • GCC AGG GAT GCA GAC ACG AAA ATT TGG AAT GGG ATG GTT GGA GAA CTT 1491 Ala Arg Asp Ala Asp Thr Lys Ile Trp Asn Gly Met Val Gly Glu Leu 475 480 485
  • GGT GGA AAC CTG GAT TCC AAA
  • GGA 2307 Gly Gly Asn Leu Asp Ser Lys Gly Tyr
  • AGT CCT CCT GAT CCT CCA AAT GAA TTT GGA ATA TTT AAC AGT CTT TGG 1884 Ser Pro Pro Asp Pro Pro Asn Glu Phe Gly Ile Phe Asn Ser Leu Trp 590 595 600 TTT TCC TTG GGT GCC TTT ATG CAG CAA GGA TGT GAT ATT TCT CCA AGA 1932 Phe Ser Leu Gly Ala Phe Met Gin Gin Gly Cys Asp Ile Ser Pro Arg 605 610 615 620
  • AGT CCT CCT GAT CCT CCA AAT GAA TTT GGA ATA TTT AAC AGT CTT TGG 1884 Ser Pro Pro Asp Pro Pro Asn Glu Phe Gly Ile Phe Asn Ser Leu Trp 590 595 600 TTT TCC TTG GGT GCC TTT ATG CAG CAA GGA TGT GAT ATT TCT CCA AGA 1932 Phe Ser Leu Gly Ala Phe Met Gin Gin Gly Cys Asp Ile Ser Pro Arg 605 610 615 620

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Abstract

Die Erfindung betrifft neue Untereinheiten für Glutamatrezeptoren und für sie codierende DNA-Sequenzen, sowie Herstellverfahren für DNA-Sequenzen und Rezeptoren. Weiterhin betrifft die Erfindung Verfahren zur Identifizierung funktionaler Liganden für diese Rezeptoren.

Description

Untereinheiten von Glutamatrezeptoren, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung
5 Beschreibung
Die Erfindung betrifft die Expression neuer Varianten ionotroper Glutamatrezeptor-Untereinheiten in Eukaryontenzellen sowie Ver¬ fahren zum Auffinden funktioneller Liganden für entsprechende 10 Glutamatrezeptorkanäle.
Glutamat ist der wichtigste exzitatorische Neurotransmitter im zentralen Nervensystem (TIPS 11, 1990, 126-132; Pharmacological Reviews 40, 1989, 143-210; TIPS 13, 1992, 291-296) und ist in 15 zahlreiche pathophysiologische Vorgänge wie z.B. Epilepsie,
Schizophrenie, Ischämie involviert. Rezeptoren für Glutamat sind deshalb potentielle Angriffssorte für entsprechende Pharmaka.
In ihrer Primärstruktur aufgeklärt sind bislang einige Unterein- 20 heiten von AMPA-, Kainat- und NMDA-Rezeptoren sowie einige meta- . botrope Rezeptoren (Nature 342, 1989, 643; Science 249, 1990, 556; Neuron 8, 1992, 169; Science 256, 1992, 1217; Nature 358, 1992, 36) .
25 In der Literatur wurden bisher vier AMPA-Glutamatrezeptor-Unter- einheiten der Ratte beschrieben, GluRA, GluRB, GluRC und GluRD, die jeweils in zwei splicing-Varianten, "flip" und "flop", vor¬ kommen (Science 249, 1990, 1580) . Für GluRB von Maus und Ratte ist zusätzlich "RNA editing" gezeigt worden, das die sog. Q/R-
30 Stelle der zweiten Transmembrandomäne betrifft . Diese beiden
GluRB Varianten unterscheiden sich erheblich in ihren elektrophy- siologischen Eigenschaften (Cell 67, 1991, 11-19; Neuron 8; 1992, 189-198) . Die humane cDNA für GluRAflip und GluRAflop ist eben¬ falls publiziert (PNAS USA 88, 1991, 7557-7561; PNAS USA 89,
35 1992, 1443-1447) .
Es wurden nun Varianten der humanen Glutamatrezeptor-Untereinhei- ten A, B, C und D gefunden, sowie DNA-Sequenzen, die für solche Untereinheiten kodieren. Diese Untereinheiten führen zu GluR- 40 Kanälen mit spezifischen elektrophysiologischen Eigenschaften.
Für GluRA, GluRB, GluRC und GluRD wurde gefunden, daß die erste Aminosäure der "flip/flop"-Region durch "RNA-editing" als Glycin (G) oder als Arginin (R) vorliegen kann. Die entsprechen- 45 den Untereinheiten werden wie folgt bezeichnet:
GluRAflipG, GluRAflipR, GluRAflopG, GluRAflopR GluRBflipQ-G, GluRBflipQ-R, GluRBflopQ-G, GluRBflopQ-R
GiuRBflipR-G, GluRBflipR-R, GluRBflopR-G, GluRBflopR-R
GluRCflipG, GluRCflipR, GluRCflopG, GluRCflopR
GluRDflipG, GluRDflipR, GluRDflopG, GluRDflopR
Bei GluRB ist das bereits bei der Ratte bekannte "RNA-editing" bei der Bezeichnung der entsprechenden Varianten berücksichtigt worden.
Für GluRA wurde des weiteren eine durch das "alternative splicing" entstandene Variante gefunden, bei der ein 240 bp Frag- ment im 5'-Bereich der GluRA cDNA fehlt und das entsprechende Protein somit um 80 Aminosäuren verkürzt ist. Die entsprechenden Untereinheiten werden wie folgt bezeichnet:
GluRAdel240flipG, GluRAdel240flipR, GluRAdel240flopG, GluRAdel240flopR
Die folgenden DNA- bzw. Aminosäuresequenzen beziehen sich aus¬ schließlich auf humane Glutamatrezeptor-Untereinheiten.
In SEQ ID NO: 1 ist die cDNA-Sequenz von GluRAflipG und die davon abgeleitete Polypeptidsequenz (SEQ ID NO: 2) darstellt; in SEQ ID NO: 3 die cDNA-Sequenz von GluRAflopG, in SEQ ID NO: 4 die davon abgeleitete Polypeptidsequenz.
Die GluRAflipR cDNA besitzt im Vergleich zur GluRAflipG cDNA einen Basenaustausch an Position bp 2269, der ein Glycin-Codon (GGA) in ein Arginin-Codon (AGA) umwandelt. Für GluRAflopR gilt entsprechendes.
Die GluRAdel240-Varianten entsprechen den genannten GluRA-
Varianten, besitzen jedoch eine Deletion: bp 221-460 bezogen auf SEQ ID NO: 1 und 3.
In SEQ ID NO: 5 ist die cDNA-Sequenz von GluRBflipQ-G und die davon abgeleitete Polypeptidsequenz (SEQ ID NO: 6) dargestellt; in SEQ ID NO: 7 die cDNA-Sequenz von GluRBflopQ-G, in SEQ ID NO: 8 die davon abgeleitete Polypeptidsequenz.
Die cDNA für GluRBflipQ-R besitzt im Vergleich zu GluRBflipQ-G einen Basenaustausch an Position bp 2290, der ein Glycin-Codon (GGA) in ein Arginin-Codon (AGA) umwandelt. Für GluRBflopQ-R gilt entsprechendes. Die cDNA-Moleküle für GluRBflipR-G, GluRBflipR-R, GluRBflopR-G und GluRBflopR-R besitzen im Vergleich zu den o.g. GluRB-Varian- ten einen Basenaustausch an Position bp 1820, der ein Glutamin- Codon (CAG) in ein Arginin-Codon (CGG) umwandelt.
In SEQ ID NO: 9 ist die cDNA-Sequenz von GluRCflipG und in SEQ ID NO: 10 die davon abgeleitete Polypeptidsequenz dargestellt. SEQ ID NO: 11 zeigt die cDNA-Sequenz von GluRCflopG und SEQ ID NO: 12 die davon abgeleitete Polypeptidsequenz.
Die cDNA-Moleküle für GluRCflipR und GluRCflopR besitzen im Ver¬ gleich zu GluRCflipG bzw. GluRCflopG einen Basenaustausch an Po¬ sition bp 2377, der ein Glycin-Codon (GGA) in ein Arginin-Codon (AGA) umwandelt.
In SEQ ID NO: 13 ist die cDNA-Sequenz von GluRDflipG und in SEQ ID NO: 14 die davon abgeleitete Polypeptidsequenz dargestellt. SEQ ID NO: 15 zeigt die cDNA-Sequenz von GluRDflopG und SEQ ID NO: 16 die davon abgeleitete Polypeptidsequenz.
Die cDNA-Moleküle für GluRDflipR und GluRDflopR besitzen im Ver¬ gleich zu GluRDflipG bzw. GluRDflopG einen Basenaustausch an Po¬ sition bp 2293, der ein Glycin-Codon (GGA) in ein Arginin-Codon (AGA) umwandelt.
Weitere geeignete DNA-Sequenzen sind solche, die zwar eine andere Nukleotidsequenz als die in SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 oder 15 aufgeführte besitzen, die aber infolge der Degeneration des genetischen Codes für die in SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 oder 16 aufgeführte Polypeptidkette oder Teile davon codieren. Weiterhin sind solche DNA-Sequenzen geeignet, die für AMPA-Glut- amatrezeptor-Untereinheiten codieren und die unter Standardbedin¬ gungen mit der in SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 oder 15 darge¬ stellten Nukleotidsequenz oder mit einer Nukleotidsequenz, die für das in SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 oder 16 dargestellte Protein codiert, hybridisieren. Unter Standardbedingungen sind beispielsweise Temperaturen zwischen 42 und 58°C in einer wäßrigen Pufferlösung mit einer Konzentration zwischen 0,1 und 1 x SSC (1 x SSC: 0,15M NaCl, 15mM Natriumnitrat pH 7,2) zu verstehen. Die experimentellen Bedingungen für DNA-Hybridisierung sind in Lehrbüchern der Gentechnik, beispielsweise in Sambrook et al., "Molecular Cloning", Cold Spring Harbor Laboratory, 1989, be¬ schrieben.
Weiterhin wurden gentechnische Herstellverfahren für diese Unter¬ einheiten gefunden. Außerdem wurde gefunden, daß sich die für diese Rezeptor-Untereinheiten kodierenden DNA-Sequenzen zum Auf- finden von funktionellen Liganden für diese Rezeptoren verwenden lassen. Gegenstand der Erfindung sind darüber hinaus Verfahren zur Identifizierung funktioneller Liganden für AMPA-Glutamatre- zeptoren, die dadurch gekennzeichnet sind, daß man mit Sequenzen, welche für AMPA-GluR-Untereinheiten codieren, Zellen transfi- ziert, die Membranen dieser Zellen isoliert und mit diesen Mem¬ branen übliche Rezeptorbindungsexperimente durchführt.
Ein weiteres erfindungsgemäßes Verfahren zur Identifizierung funktioneller Liganden für AMPA-Glutamatrezeptoren ist dadurch gekennzeichnet, daß man in Zellen, welche mit einer oder mehreren DNA-Sequenzen transfiziert wurden, die für AMPA-GluR-Untereinhei¬ ten codieren, eine Beeinflussung des Signaltransduktionswegs durch Bindung der Liganden an den Rezeptor verursacht, die durch ein Rezeptorsystem detektiert wird, beispielsweise die intrazel¬ luläre Ca++-Konzentration nach Ligandenbindung mit fluorimetri- schen Methoden (Anal. Biochem. 209, 1993, 343).
Die neuen Polypeptide und DNA-Sequenzen lassen sich gentechnisch unter Verwendung bekannter Methoden herstellen. So kann man aus Hirngewebe mRNA isolieren und in doppelsträngige cDNA übersetzen. Diese cDNA kann als Matrize für die Polymerase-Kettenreaktion verwendet werden. Durch die Verwendung spezifischer Primer kann so unter geeigneten Reaktionsbedingungen die entsprechende cDNA amplifiziert werden. Durch die Verwendung geeigneter Primer kann die amplifizierte cDNA ohne vorherige Klonierung sequenziert werden. Die doppelsträngige cDNA kann auch in λ Vektoren, z.B. λ gt 10 oder λ ZAP, integriert werden, um eine hirnspezifische cDNA Bank zu generieren. Eine solche cDNA Bank kann mit radioak- tiv markierten DNA- oder RNA-Sonden durchgesucht werden, um Klone zu identifizieren, die Homologie mit der Hybridisierungsprobe aufweisen. Die dabei verwendeten Methoden sind beispielsweise in "Current Protocols in Molecular Biology" (Hrsg. F.M. Ausubel et al.) 1989, ISBN 0-471 50338-x (Vol. 1 u. 2), für die Polymerase- Kettenreaktion in Saiki et al. (1985) Science, 230, 1350-54 bzw. Mullis and Faloona (1987) Meth. Enzymol., 155, 335-350 beschrie¬ ben.
Die so charakterisierte cDNA ist mit Hilfe von Restriktionsenzy- men leicht zugänglich. Die dabei entstehenden Fragmente, ggf. in Verbindung mit chemisch synthetisierten Oligonukleotiden, Adapto- ren oder Genfragmenten, können benutzt werden, um die für das Protein codierende Sequenzen zu klonieren. Der Einbau der Gen¬ fragmente bzw. synthetischen DNA-Sequenzen in Klonierungsvekto- ren, z.B. die handelsüblichen Plasmide M13mpl8 oder Bluescript, erfolgt in bekannter Weise. Auch können die Gene oder Genfrag¬ mente mit geeigneten chemisch synthetisierten oder aus Bakterien, Phagen, Eukaryontenzellen oder deren Viren isolierten Kontroll¬ regionen versehen werden, die die Expression der Proteine in unterschiedlichen Wirtssystemen ermöglichen.
Die Transformation bzw. Transfektion geeigneter Wirtsorganismen mit Hybridplasmiden ist ebenfalls bekannt und eingehend be¬ schrieben (M. Wigler et al. , Cell, 16 (1979), 777 - 785; F.L. Graham and A.J. van der Eb, Virology, 52 (1973), 456 - 467).
Bei der Expression in Säugerzellen kann man Vektoren verwenden, die das zu exprimierende Gen, in diesem Fall die für die hier beschriebenen Untereinheiten von AMPA-Glutamatrezeptoren codie¬ renden cDNA-Sequenzen, unter die Kontrolle des Maus-Metallothio- nein-, des viralen SV40- oder des Cytomegalievirus -Promotors setzen (J. Page Martin, Gene, 37 (1985), 139 - 144). Notwendig für die Expression ist das Vorliegen des Methionin-Startcodons des Gens das für diese Untereinheiten von AMPA-Glutamatrezepto¬ ren codi.-rt. Man isoliert dann Klone, die Kopien dieser Vektoren als Episome oder ins Genom integriert besitzen. Besonders vor- teilhaft ist die Integration des Fremdgens in einen Vektor, der den Promoter des Cytomegalievirus enthält.
Alternativ dazu kann man Zellen mit einem geeigneten Vektor der¬ art transfizieren, daß die transiente Expression der so einge- brachten DNA für eine pharmakologische Charakterisierung der ex- primierten heterologen Polypeptide ausreicht. Auch hier ist die Kontrolle der Expression durch den Promoter des Cytomegalievirus besonders vorteilhaft.
Weiterhin kann man funktionelle AMPA-Glutamatrezeptoren dadurch herstellen, daß man eine oder mehrere verschiedene DNA-Sequenzen aus der Gruppe der AMPA-GluR-Untereinheiten zusammen in Zellen transfiziert. Auf diese Art lassen sich AMPA-Glutamatrezeptoren mit unterschiedlichen Untereinheiten gewinnen.
In Verbindung mit prokaryontischen Sequenzen, die für die Repli- kation in Bakterienzellen und eine Antibiotika-Resistenz kodie¬ ren, ist die Verwendung von "shuttle"-Vektoren gut geeignet. Kon¬ struktionen und Vermehrung des Plasmids erfolgen zunächst in Bak- terienzellen; anschließend erfolgt die Umsetzung in die Eukaryon¬ tenzellen, z.B. in die menschliche embryonale Nieren-Zellinie HEK 293. Auch andere Zellsysteme, z.B. Hefe und andere Pilze, Insektenzel¬ len sowie tierische und humane Zellen wie z.B. CHO-, COS- und L- Zellen, können in Verbindung mit geeigneten Expressionsvektoren zur Expression der klonierten cDNA verwendet werden.
Die eukaryontischen Expressionssysteme besitzen den Vorteil, daß sie in der Lage sind, ihre Produkte effektiv und meist in nativer Form zu exprimieren. Ferner besitzen sie die Fähigkeit, ihre Pro¬ dukte posttranslational zu modifizieren.
Die exprimierten Rezeptorproteine können durch Detergenzien solu- bilisiert werden und durch Affinitätschromatographie nach bekann¬ ten Verfahren gereinigt werden. Das reine Polypeptid kann, nach Kristallisation und Röntgen-Strukturanalyse oder anderen physika- lischen Verfahren wie NMR oder Raster-Tunnelmikroskopie , dazu benutzt werden, zunächst die räumliche Struktur des Rezeptors und dann die räumliche Struktur der Liganden-Bindungsstelle aufzuklä¬ ren.
Die exprimierten Rezeptorproteine können nach entsprechender Rei¬ nigung auch als Antigene für die Generierung polyklonaler oder monoklonaler Antikörper dienen. Diese Antikörper wiederum können gegebenenfalls für diagnostische Zwecke verwendet werden. Eine weitere Anwendungsmöglichkeit für solche Antikörper besteht in ihrer Verwendung als Hilfsmittel zum rationalen Drug Design. So können die Rezeptor-spezifischen Antikörper als Antigen für die Generierung antiidiotypischer Antikörper eingesetzt werden. Sol¬ che Antikörper können für definierte Bereiche ein Abbild des Re¬ zeptors darstellen und für das Screening nach spezifischen Rezep- torliganden oder für das rationale Drug Design verwendet werden.
Rezeptor exprimierende Zellinien stellen ein wichtiges Instrument im Screening nach spezifischen Rezeptorliganden dar. Dazu können die Membranen dieser Zellen für Rezeptorbindungstest verwendet werden. Informationen über Wirkungsweise (Agonismus / Antagonis¬ mus) eines Rezeptorliganden können dadurch gewonnen werden, daß man Zellen, die mit einer erfindungsgemäßen DNA-Sequenz transfi- ziert worden sind, mit einem geeigneten Reportersystem versieht. Geeignete Reportersysteme sind solche, bei denen ein Promotor, der durch Verbindungen des Signaltransduktionswegs (second mes¬ senger) reguliert wird, mit einem Gen für ein leicht nachzuwei¬ sendes Produkt wie Luciferase funktioneil verbunden ist. Solche Reportersysteme sind beispielsweise aus Science 252, 1424 (1991); Proc. Natl. Acad. Sei. USA 88, 5061 (1991) oder Journal of Recep- tor Res. 13, 1993, 79 bekannt. Ein geeigneter Promotor, der bei¬ spielsweise durch die intrazelluläre Ca++-Konzentration reguliert wird, ist der des fos-Gens. Auch ist es möglich, Änderungen der intrazellulären Ca++-Konzentration mit Fluoreszenzfarbstoffen z.B. FURA 2AM) direkt nachzuweisen.
Weiterhin kann der Stromfluß durch die Zellmembran in Abhängig- keit von der Ligandenbindung gemessen werden.
Aufgrund der Degeneration des genetischen Codes ist es möglich, andere DNA-Sequenzen als hier beschrieben, z.B. chemisch synthe¬ tisierte Gene mit unterschiedlicher DNA-Sequenz für die Expres- sion der beschriebenen Untereinheiten von humanen AMPA-Glutamat¬ rezeptoren zu benutzen.
Mit Hilfe der Erfindung wird es möglich, Substanzen zu identifi¬ zieren und zu charakterisieren, die an den hier beschriebenen Re- zeptor binden und dort agonistisch oder antagonistisch wirken.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist die Verwendung von Oli- gonukleotiden, die von der in SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 oder 15 beschriebenen Struktur abgeleitet sind, als antisense Mo- leküle zur gezielten Ausschaltung von Genen.
Mit Hilfe der Erfindung ist es auch möglich, synthetische Oligo- nukleotide herzustellen, mit denen die Expression von AMPA- Glutamatrezeptor-Untereinheiten durch intracerebroventrikuläre Applikation spezifisch inhibiert werden kann, wie es beispiels¬ weise für NMDA-Rezeptoren beschrieben wurde (Nature 363, 1993, 260) .
Weitere Ausgestaltungen der Erfindung sind in den Beispielen nä- her beschrieben.
Für gentechnische Methoden sei dazu z.B. auf das Handbuch von Sambrook et al. "Molecular Cloning", Cold Spring Harbor Labora- tory, 1989, oder "DNA cloning", Vol. I bis III, IRI Press 1985 bis 1987, Herausgeber D.M. Glover, hingewiesen.
Beispiel 1
Isolierung von cDNA-Molekülen, die für die humanen AMPA-Glutamat- rezeptor-Untereinheiten GluRA und GluRAdel240 kodieren.
Mit der Technik der Polymreasekettenreaktion (PCR) wurden drei cDNA-Fragmente, die für die humane AMPA-Glutamatrezeptor-Unter- einheit GluRA spezifisch sind, aus zwei kommerziell erhältlichen humanen Hirn cDNA-Bibliotheken amplifiziert. Zur Erhöhung der Spezifität der Amplifikation wurde das im folgenden beschriebene 2-stufige PCR-Verfahren durchgeführt: jeweils 10 μl Lysat einer humanen temporalen Cortex cDNA-Bibliothek (Titer: l,5xl0n Phagen/ml; Vektor Lambda ZAP; GluRA cDNA-Fragment bp 1-839) bzw. einer humanen Nucleus accumbens cDNA-Bibliothek (Titer: l-9xl09 Phagen/ml; Vektor Lambda gtlO; GluRA cDNA-Fragmente 1-1421 und 5 1407-2721) wurden als Template für die erste PCR-Reaktion mit den Primer-Oligonukleotiden A und B eingesetzt. Die Reaktionsvolumina der Ansätze betrugen jeweils 100 μl, jeweils 20 pMol der verschie¬ denen Primer wurden eingesetzt und der Reaktionspuffer enthielt 10 mM Tris-HCl pH 8,5, 50 mM KC1, 1,5 mM MgCl2, jeweils 0,2 mM 0 dATP, dCTP, dGTP und dTTP. Es wurden 20 Zyklen mit folgendem Temperaturprofil durchgeführt: 1 Minute 94°C, 1 Minute 55°C, 1 Minute 72°C. Verwendet wurde ein Thermocycler des Typs 9600 der Firma Perkin-Elmer.
Nach der Durchführung der PCR-Reaktion wurden jeweils 10 μl der PCR-Ansätze entnommen und als Template für eine zweite PCR-Reak¬ tion mit den Primern C und D eingesetzt. Die Reaktions- und Puf¬ ferbedingungen waren die gleichen wie bei der ersten PCR, die Zahl der Zyklen wurde jedoch auf 35 erhöht. Die amplifizierten cDNA-Fragemente wurden entsprechend den Herstellerangaben unter Einsatz des TA Cloning Kits der Firma Invitrogen in den Vektor pCRII kloniert.
Die Primer-Oligonukleotide für die Amplifikation des humanen GluRA cDNA-Fragments, das die Basenpaare 1-1431 umfaßt, hatten die folgenden Sequenzen:
Primer A: 5'-ATCTATGATTGGACCTGGGC-3' (SEQ ID NO: 17)
Primer B: 5'-ACATCTGCTCTTCCATAGACCAGC-3' (SEQ ID NO: 18)
Primer C: 5'-TGCGATAAGCTTATGCAGCACATTTTTGCCTTCTTCTGC-3' (SEQ ID NO: 19)
Primer D: 5' -ATGCCATTCCAGGCCTTCGTGTCA-3' (SEQ ID NO: 20)
Die Primer-Oligonukleotide für die Amplifikation des humanen GluRA cDNA-Fragments, das die Basenpaare 1407-2721 umfaßt, hatten die folgenden Sequenzen:
Primer A: 5'-GATGGAAAATACGGAGCCCGA-3' (SEQ ID NO: 21)
Primer B: 5'-GCTGGGGAGCCGAGCCTGCTC-3' (SEQ ID NO: 22)
Primer C: 5'-TGACACGAAGGCCTGGAATGGCAT-3' (SEQ ID NO: 23) Primer D: 5'-TGCGATGAATTCTTACAATCCCGTGGCTCCCAAGGGCAT-3' (SEQ ID NO: 24)
Die Primer-Oligonukleotide für die Amplifikation des humanen GluRA cDNA-Fragments, das die Basenpaare 1-839 umfaßt, hatten die folgenden Sequenzen:
Primer A: SEQ ID NO: 17
Primer B: 5'-TACTTGGGTCTCTTCCAGTCCA-3' (SEQ ID NO: 25)
Primer C: SEQ ID NO: 20
Primer D: 5'-TGTGTGGTCTCGAGCATCACTATT-3' (SEQ ID NO: 26)
Mit Hilfe gentechnischer Standardmethoden (s. z.B. Sambrook et al. (1989), "Molecular Cloning", Cold Spring Harbor Laboratory) wurden die amplifizierten cDNA-Fragmente jeweils zu den voll¬ ständigen kodierenden Regionen von GluRA und GluRAdel240 zusammengesetzt.
Beispiel 2
Isolierung von cDNA-Molekülen für die humanen Glutamatrezeptor- Untereinheiten A, B, C und D
cDNA-Fragmente, die für die humanen Glutamatrezeptor-Untereinhei- ten A, B, C und D spezifisch sind, wurden durch das "screenen" der folgenden kommerziell erhältlichen humanen Hirn cDNA-Biblio- theken erhalten:
Hippocampus (Fa. Stratagene)
Cerebellum (Firmen Clontech und Stratagene)
Nucleus accumbens (Clontech)
Als Screeningproben wurden PCR-Fragmente der Größen 600-3000 bp eingesetzt, die von den in pBluescript klonierten cDNA-Molekülen für GluRA, B, C und D der Ratte amplifiziert worden waren. Es wurde jeweils 1 ng Plasmid-DNA als Template eingesetzt. Die Pri- mer-Konzentrationen und Puffer-Bedingungen für die PCR-Reaktionen entsprachen denen in Beispiel 1, jedoch wurden jeweils 2 μl des dNTP-Markierungsgemisches aus dem DNA Labeling and Detection Kit der Fa. Boehringer Mannheim als Nukleotidquelle eingesetzt. Es wurden 35 Zyklen mit folgendem Temperaturprofil durchgeführt: 2 Minuten 94°C, 2 Minuten 55°C, 3 Minuten 72°C. Die Dig-düTP mar¬ kierten Fragmente wurden über ein Seaplaque-Agarose-Gel gerei¬ nigt. Die Durchführung der Screening-Prozedur wurde gemäß den Vorschriften des Manuals für o.g. Kit durchgeführt. Die GluR cDNA-Fragmente der aus dem Screening hervorgegangenen Lambda- Klone wurden mit Hilfe der üblichen gentechnischen Methoden in den Vektor pBluescript umkloniert und zu den vollständigen cDNA- Molekülen der verschiedenen GluR-Varianten zusammengesetzt.
Beispiel 3
Transiente Expression der klonierten humanen GluR-Gene in HEK293-Zellen.
Wenn nicht anders beschrieben, wurde die Zellkultur nach Lindl und Bauer, "Zeil- und Gewebekultur", Gustav Fischer Verlag, durchgeführt .
Die GluR cDNA-Moleküle aus den Beispielen 1 und 2 wurden im Rah¬ men ihrer Isolierung in übliche Plasmide wie z.B. pBluescript (Fa. Stratagene) und pCRII (Fa. Invitrogen) kloniert. Die klo¬ nierten GluR-Fragmente umfassen dabei jeweils das gesamte offene Leseraster, einschließlich Start- und Stopcodon, und mindestens 40 bp der dem Startcodon vorausgehenden 5'-nicht-translatierten Regionen.
Zur transienten Expression in eukaryontischen Zellinien wurden die klonierten GluR-Fragmente in den Expressionsvektor pcDNA3 (Fa. Invitrogen) kloniert. Die daraus resultierenden rekombinan- ten Plasmide wurden in bekannter Weise vermehrt.
HEK 293 Zellen wurden unter Standard-Bedingungen kultiviert. Nach 'Trypsinierung wurden die Zellen in DMEM Medium (Gibco) , das
3,7 g/1 NaHC03 enthielt, aufgenommen und 1,5 x 106-Zellen/10 cm Petrischalen ausgesät. Danach wurden die Zellen für 24 h bei 37°C und 5 % C02 kultiviert .
Die zu transfizierende DNA wurde wie folgt vorbereitet: 20 μg der DNA-Lösung (1 mg/ml) , gereinigt mit dem Quiagen®-System, Fa. Diagen, wurden mit 437 μl H20 versetzt, danach wurden 62,5 μl 2 M CaCl2 zugesetzt und schließlich 500 μl BBS. Innerhalb von 10 min bildeten sich bei Raumtemperatur Ca++-Präzipitate.
Die Lösung wurde auf eine 10-cm-Zellkulturschale mit den nach obiger Vorschrift kultivierten HEK 293 Zellen gegeben. Nach vor¬ sichtiger Durchmischung wurden die Zellen 15 bis 20 h in einem Inkubator bei 37°C/3 % C02 kultiviert. Danach wurden vorsichtig 5 ml serumfreies Medium zugesetzt. Nach Entfernung des gesamten Mediums und- Wiederholung des Waschvorgangs mit 5 ml Medium wurden den Zellen 10 ml Medium zugesetzt. Nach 48 h Inkubation bei 37°C und 5 % C02 konnten die Zellen für pharmakologische und elektro- physiologische Untersuchungen verwendet werden.
Alternativ wurde die DNA auch Liposomen-vermittelt in die Zellen eingebracht. Dabei wurde Lipofectin der Firma GIBCO-BRL den Herstellerangaben entsprechend eingesetzt.
Beispiel 4
Expression der AMPA-Glutamatrezeptor-Untereinheiten in Oozyten
Zur Herstellung von cRNA wurden die entsprechenden cDNA-Moleküle, welche für die Glutamatrezeptor-Untereinheiten kodieren, in das mit EcoRI gespaltene Plasmid Bluescript (Stratagene) nach Stan- dard-Protokollen einkloniert.
Nach Vermehrung der Bluescript-Klone, welche für Untereinheiten der AMPA-Glutamatrezeptoren codieren, wurde nach Standard-Metho¬ den Plasmid-DNA gewonnen. Diese Plamid DNA wurde mit dem Restrik- tionsenzym Not I gespalten und zur in vitro Transkription einge¬ setzt. Die Transkription wurde von dem T3 oder T7 Promotor ge¬ startet und unter Standard-Bedingungen entsprechend dem in vitro Transkriptionskit von Stratagene durchgeführt.
Zur Expression der Rezeptoruntereinheiten wurden jeweils 10 ng cRNA entweder einzeln oder in Kombination mit anderer cRNA in Oo¬ zyten injiziert, die aus dem Krallenfrosch Xenopus laevis explan- tiert worden waren [C. Methfessel et al., Pflügers Arch. 407, 577, (1986)]. Die Oozyten wurden in OR-2 (92,5 mM NaCl, 2,5 mM KCl, ImM Na2HP04, 5 mM HEPES, 1 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 0,5 g/1 Po- lyvinylpyrolidon, pH 7,2 mit dem Zusatz von 4 μg/ml Zinacef und 100 U/ml Penstrep) bei 19°C inkubiert. 24 Stunden nach der Injek¬ tion wurden die Oozyten mit Kollagenase (Typ II Sigma) behandelt (1 mg/ml in OR-2 für 1 Stunde) . Elektrophysiologische Ableitungen wurden 2 - 6 Tage nach Injektion der cRNA vorgenommen. Dabei wurde eine 2 Elektroden-"Voltage clamp" Konfiguration benutzt mit einem TEC 01C Amplifier (NPI Electronic, Tamm, Deutschland) . Wäh¬ rend der elektrophysiologischen Messungen wurden die Oozyten mit normaler Frosch Ringerlösung NFR (115 mM NaCl, 2,5 mM KCl, 1,8 mM CaCl2, 10 mM HEPES, pH 7,2) perf ndiert. Beispiel 5
Stabile Expression der Glutamatrezeptor-Untereinheiten in HEK 293 Zellen
Die in den Beispielen 1 und 2 beschriebenen Glutamatrezeptor- cDNA-Moleküle wurden in den eukaryontischen Expressionsvektoren pcDNA3 und pRc/CMV (Fa. Invitrogen) kloniert. Diese Expressions- konstrukte wurden nach folgendem Protokoll durch Elektroporation einzeln oder in Kombination in HEK 293 Zellen eingebracht: HEK 293 Zellen (ATCC) wurden in RPMI 1640 Medium (Glutamax I, Fa. Gibco BRL) mit 10 % FCS (Gibco BRL) unter 5 % C02 kultiviert. Für die Elektroporation wurden 107 Zellen in 0,8 ml PBS mit 20 μg des Expressionskonstruktes mit einem Elektroporator (BTX, electro cell manipulator 600, 3 μF, 130 V, 72 Ohm) transfiziert. Die Zel¬ len wurden anschließend 24 h in Kulturmedium inkubiert und an¬ schließend in Selektionsmedium (RPMI-Medium mit 600 μg/ml G418-Sulfat, Geneticin) überführt. Stabile Geneticin resistente Zeilklone wurden nach 10-12 Tagen über Einzelzellablage isoliert, expandiert und mittels Membranbindungsassay analysiert.
SEQUENZPROTOKOLL
(1) ALLGEMEINE INFORMATION:
(i) ANMELDER:
(A) NAME: BASF Aktiengesellschaft
(B) STRASSE: Carl-Bosch-Strasse 38
(C) ORT: Ludwigshafen
(E) LAND: Bundesrepublik Deutschland
(F) POSTLEITZAHL: D-67056
(G) TELEPHON: 0621/6048526 (H) TELEFAX: 0621/6043123 (I) TELEX: 1762175170
(ii) ANMELDETITEL: Untereinheiten von Glutamatrezeptoren, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung
(iii) ANZAHL DER SEQUENZEN: 26
(iv) COMPUTER-LESBARE FORM:
(A) DATENTRÄGER: Floppy disk
(B) COMPUTER: IBM PC compatible
(C) BETRIEBSSYSTEM: PC-DOS/MS-DOS
(D) SOFTWARE: Patentin Release #1.0, Version #1.25 (EPA)
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 1:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 2946 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: cDNS zu mRNS
(vi) URSPRÜNLICHE HERKUNFT:
(A) ORGANISMUS: Homo sapiens (D) ENTWICKLUNGSSTADIUM: Adult (F) GEWEBETYP: Gehirn
(ix) MERKMALE:
(A) NAME/SCHLÜSSEL: CDS
(B) LAGE: 144..2861
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 1:
GAAAGGAAGG AAGCAAGCAA GCAAGGAAGG AACTGCAGGA GGAAAAGAAC AGGCAGAACA 60
GCGAAAAGAA TAAAGGGAAA GGGGGGGAAA CACCAAATCT ATGATTGGAC CTGGGCTTCT 120
TTTTCGCCAA TGCAAAAAGG AAT ATG CAG CAC ATT TTT GCC TTC TTC TGC 170
Met Gin His Ile Phe Ala Phe Phe Cys 1 5 ACC GGT TTC CTA GGC GCG GTA GTA GGT GCC AAT TTC CCC AAC AAT ATC 218 Thr Gly Phe Leu Gly Ala Val Val Gly Ala Asn Phe Pro Asn Asn Ile 10 15 20 25
CAG ATC GGG GGA TTA TTT CCA AAC CAG CAG TCA CAG GAA CAT GCT GCT 266 Gin Ile Gly Gly Leu Phe Pro Asn Gin Gin Ser Gin Glu His Ala Ala 30 35 40
TTT AGA TTT GCT TTG TCG CAA CTC ACA GAG CCC CCG AAG CTG CTC CCC 314 Phe Arg Phe Ala Leu Ser Gin Leu Thr Glu Pro Pro Lys Leu Leu Pro 45 50 55
CAG ATT GAT ATT GTG AAC ATC AGC GAC AGC TTT GAG ATG ACC TAT AGA 362 Gin Ile Asp Ile Val Asn Ile Ser Asp Ser Phe Glu Met Thr Tyr Arg 60 65 70
TTC TGT TCC CAG TTC TCC AAA GGA GTC TAT GCC ATC TTT GGG TTT TAT 410 Phe Cys Ser Gin Phe Ser Lys Gly Val Tyr Ala Ile Phe Gly Phe Tyr 75 80 85
GAA CGT AGG ACT GTC AAC ATG CTG ACC TCC TTT TGT GGG GCC CTC CAC 458 Glu Arg Arg Thr Val Asn Met Leu Thr Ser Phe Cys Gly Ala Leu His 90 95 100 105
GTC TGC TTC ATT ACG CCG AGC TTT CCC GTT GAT ACA TCC AAT CAG TTT 506 Val Cys Phe Ile Thr Pro Ser Phe Pro Val Asp Thr Ser Asn Gin Phe 110 115 120
GTC CTT CAG CTG CGC CCT GAA CTG CAG GAT GCC CTC ATC AGC ATC ATT 554 Val Leu Gin Leu Arg Pro Glu Leu Gin Asp Ala Leu Ile Ser Ile Ile 125 130 135
GAC CAT TAC AAG TGG CAG AAA TTT GTC TAC ATT TAT GAT GCC GAC CGG 602 Asp His Tyr Lys Trp Gin Lys Phe Val Tyr Ile Tyr Asp Ala Asp Arg 140 145 150
GGC TTA TCC GTC CTG CAG AAA GTC CTG GAT ACA GCT GCT GAG AAG AAC 650 Gly Leu Ser Val Leu Gin Lys Val Leu Asp Thr Ala Ala Glu Lys Asn 155 160 165
TGG CAG GTG ACA GCA GTC AAC ATC TTG ACA ACC ACA GAG GAG GGA TAC 698 Trp Gin Val Thr Ala Val Asn Ile Leu Thr Thr Thr Glu Glu Gly Tyr 170 175 180 185
CGG ATG CTC TTT CAG GAC CTG GAG AAG AAA AAG GAG CGG CTG GTG GTG 746 Arg Met Leu Phe Gin Asp Leu Glu Lys Lys Lys Glu Arg Leu Val Val 190 195 200
GTG GAC TGT GAA TCA GAA CGC CTC AAT GCT ATC TTG GGC CAG ATT ATA 794 Val Asp Cys Glu Ser Glu Arg Leu Asn Ala Ile Leu Gly Gin Ile Ile 205 210 215 AAG CTA GAG AAG AAT GGC ATC GGC TAC CAC TAC ATT CTT GCA AAT CTG 842 Lys Leu Glu Lys Asn Gly Ile Gly Tyr His Tyr Ile Leu Ala Asn Leu 220 225 230
GGC TTC ATG GAC ATT GAC TTA AAC AAA TTC AAG GAG AGT GGC GCC AAT 890 Gly Phe Met Asp Ile Asp Leu Asn Lys Phe Lys Glu Ser Gly Ala Asn 235 240 245
GTG ACA GGT TTC CAG CTG GTG AAC TAC ACA GAC ACT ATT CCG GCC AAG 938 Val Thr Gly Phe Gin Leu Val Asn Tyr Thr Asp Thr Ile Pro Ala Lys 250 255 260 265
ATC ATG CAG CAG TGG AAG AAT AGT GAT GCT CGA GAC CAC ACA CGG GTG 986 Ile Met Gin Gin Trp Lys Asn Ser Asp Ala Arg Asp His Thr Arg Val 270 275 280
GAC TGG AAG AGA CCC AAG TAC ACC TCT GCG CTC ACC TAC GAT GGG GTG 1034 Asp Trp Lys Arg Pro Lys Tyr Thr Ser Ala Leu Thr Tyr Asp Gly Val 285 290 295
AAG GTG ATG GCT GAG GCT TTC CAG AGC CTG CGG AGG CAG AGA ATT GAT 1082 Lys Val Met Ala Glu Ala Phe Gin Ser Leu Arg Arg Gin Arg Ile Asp 300 305 310
ATA TCT CGC CGG GGG AAT GCT GGG GAT TGT CTG GCT AAC CCA GCT GTT 1130 Ile Ser Arg Arg Gly Asn Ala Gly Asp Cys Leu Ala Asn Pro Ala Val 315 320 325
CCC TGG GGC CAA GGG ATC GAC ATC CAG AGA GCT CTG CAG CAG GTG CGA 1178 Pro Trp Gly Gin Gly Ile Asp Ile Gin Arg Ala Leu Gin Gin Val Arg 330 335 340 345
TTT GAA GGT TTA ACA GGA AAC GTG CAG TTT AAT GAG AAA GGA CGC CGG 1226 Phe Glu Gly Leu Thr Gly Asn Val Gin Phe Asn Glu Lys Gly Arg Arg 350 355 360
ACC AAC TAC ACG CTC CAC GTG ATT GAA ATG AAA CAT GAC AGC ATC CGA 1274 Thr Asn Tyr Thr Leu His Val Ile Glu Met Lys His Asp Ser Ile Arg 365 370 375
AAG ATT GGT TAC TGG AAT GAA GAT GAT AAG TTT GTC CCT GCA GCC ACC 1322 Lys Ile Gly Tyr Trp Asn Glu Asp Asp Lys Phe Val Pro Ala Ala Thr 380 385 390
GAT GCC CAA GCT GGG GGC GAT AAT TCA AGT GTT CAG AAC AGA ACA TAC 1370 Asp Ala Gin Ala Gly Gly Asp Asn Ser Ser Val Gin Asn Arg Thr Tyr 395 400 405
ATC GTC ACA ACA ATC CTA GAA GAT CCT TAT GTG ATG CTC AAG AAG AAC 1418 Ile Val Thr Thr Ile Leu Glu Asp Pro Tyr Val Met Leu Lys Lys Asn 410 415 420 425 GCC AAT CAG TTT GAG GGC AAT GAC CGT TAC GAG GGC TAC TGT GTA GAG 1466 Ala Asn Gin Phe Glu Gly Asn Asp Arg Tyr Glu Gly Tyr Cys Val Glu 430 435 440
CTG GCG GCA GAG ATT GCC AAG CAC GTG GGC TAC TCC TAC CGT CTG GAG 1514 Leu Ala Ala Glu Ile Ala Lys His Val Gly Tyr Ser Tyr Arg Leu Glu 445 450 455
ATT GTC AGT GAT GGA AAA TAC GGA GCC CGA GAC CCT GAC ACG AAG GCC 1562 Ile Val Ser Asp Gly Lys Tyr Gly Ala Arg Asp Pro Asp Thr Lys Ala 460 465 470
TGG AAT GGC ATG GTG GGA GAG CTG GTC TAT GGA AGA GCA GAT GTG GCT 1610 Trp Asn Gly Met Val Gly Glu Leu Val Tyr Gly Arg Ala Asp Val Ala 475 480 485
GTG GCT CCC TTA ACT ATC ACT TTG GTC CGG GAA GAA GTT ATA GAT TTC 1658 Val Ala Pro Leu Thr Ile Thr Leu Val Arg Glu Glu Val Ile Asp Phe 490 495 500 505
TCC AAA CCA TTT ATG AGT TTG GGG ATC TCC ATC ATG ATT AAA AAA CCA 1706 Ser Lys Pro Phe Met Ser Leu Gly Ile Ser Ile Met Ile Lys Lys Pro 510 515 520
CAG AAA TCC AAG CCG GGT GTC TTC TCC TTC CTT GAT CCT TTG GCT TAT 1754 Gin Lys Ser Lys Pro Gly Val Phe Ser Phe Leu Asp Pro Leu Ala Tyr 525 530 535
GAG ATT TGG ATG TGC ATT GTT TTT GCC TAC ATT GGA GTG AGT GTT GTC 1802 Glu Ile Trp Met Cys Ile Val Phe Ala Tyr Ile Gly Val Ser Val Val 540 545 550
CTC TTC CTG GTC AGC CGC TTC AGT CCC TAT GAA TGG CAC AGT GAA GAG 1850 Leu Phe Leu Val Ser Arg Phe Ser Pro Tyr Glu Trp His Ser Glu Glu 555 560 565
TTT GAG GAA GGA CGG GAC CAG ACA ACC AGT GAC CAG TCC AAT GAG TTT 1898 Phe Glu Glu Gly Arg Asp Gin Thr Thr Ser Asp Gin Ser Asn Glu Phe 570 575 580 585
GGG ATA TTC AAC AGT TTG TGG TTC TCC CTG GGA GCC TTC ATG CAG CAA 1946 Gly Ile Phe Asn Ser Leu Trp Phe Ser Leu Gly Ala Phe Met Gin Gin 590 595 600
GGA TGT GAC ATT TCT CCC AGG TCC CTG TCT GGT CGC ATC GTT GGT GGC 1994 Gly Cys Asp Ile Ser Pro Arg Ser Leu Ser Gly Arg Ile Val Gly Gly 605 610 615
GTC TGG TGG TTC TTC ACC TTA ATC ATC ATC TCC TCA TAT ACA GCC AAT 2042 Val Trp Trp Phe Phe Thr Leu Ile Ile Ile Ser Ser Tyr Thr Ala Asn 620 625 630 CTG GCC GCC TTC CTG ACC GTG GAG AGG ATG GTG TCT CCC ATT GAG AGT 2090 Leu Ala Ala Phe Leu Thr Val Glu Arg Met Val Ser Pro Ile Glu Ser 635 640 645
GCA GAG GAC CTA GCG AAG CAG ACA GAA ATT GCC TAC GGG ACG CTG GAA 2138 Ala Glu Asp Leu Ala Lys Gin Thr Glu Ile Ala Tyr Gly Thr Leu Glu 650 655 660 665
GCA GGA TCT ACT AAG GAG TTC TTC AGG AGG TCT AAA ATT GCT GTG TTT 2186 Ala Gly Ser Thr Lys Glu Phe Phe Arg Arg Ser Lys Ile Ala Val Phe 670 675 680
GAG AAG ATG TGG ACA TAC ATG AAG TCA GCA GAG CCA TCA GTT TTT GTG 2234 Glu Lys Met Trp Thr Tyr Met Lys Ser Ala Glu Pro Ser Val Phe Val 685 690 695
CGG ACC ACA GAG GAG GGG ATG ATT CGA GTG AGG AAA TCC AAA GGC AAA 2282 Arg Thr Thr Glu Glu Gly Met Ile Arg Val Arg Lys Ser Lys Gly Lys 700 705 710
TAT GCC TAC CTC CTG GAG TCC ACC ATG AAT GAG TAC ATT GAG CAG CGG 2330 Tyr Ala Tyr Leu Leu Glu Ser Thr Met Asn Glu Tyr Ile Glu Gin Arg 715 720 725
AAA CCC TGT GAC ACC ATG AAG GTG GGA GGT AAC TTG GAT TCC AAA GGC 2378 Lys Pro Cys Asp Thr Met Lys Val Gly Gly Asn Leu Asp Ser Lys Gly 730 735 740 745
TAT GGC ATT GCA ACA CCC AAG GGG TCT GCC CTG GGA GGT CCC GTA AAC 2426 Tyr Gly Ile Ala Thr Pro Lys Gly Ser Ala Leu Gly Gly Pro Val Asn 750 755 760
CTA GCG GTT TTG AAA CTC AGT GAG CAA GGC GTC TTA GAC AAG CTG AAA 2474 Leu Ala Val Leu Lys Leu Ser Glu Gin Gly Val Leu Asp Lys Leu Lys 765 770 775
AGC AAA TGG TGG TAC GAT AAA GGG GAA TGT GGA AGC AAG GAC TCC GGA 2522 Ser Lys Trp Trp Tyr Asp Lys Gly Glu Cys Gly Ser Lys Asp Ser Gly 780 785 790
AGT AAG GAC AAG ACA AGC GCT CTG AGC CTC AGC AAT GTG GCA GGC GTG 2570 Ser Lys Asp Lys Thr Ser Ala Leu Ser Leu Ser Asn Val Ala Gly Val 795 800 805
TTC TAC ATC CTG ATC GGA GGA CTT GGA CTA GCC ATG CTG GTT GCC TTA 2618 Phe Tyr Ile Leu Ile Gly Gly Leu Gly Leu Ala Met Leu Val Ala Leu 810 815 820 825
ATC GAG TTC TGC TAC AAA TCC CGT AGT GAA TCC AAG CGG ATG AAG GGT 2666 Ile Glu Phe Cys Tyr Lys Ser Arg Ser Glu Ser Lys Arg Met Lys Gly 830 835 840 TTT TGT TTG ATC CCA CAG CAA TCC ATC AAC GAA GCC ATA CGG ACA TCG 2714 Phe Cys Leu Ile Pro Gin Gin Ser Ile Asn Glu Ala Ile Arg Thr Ser 845 850 855
ACC CTC CCC CGC AAC AGC GGG GCA GGA GCC AGC AGC GGC GGC AGT GGA 2762 Thr Leu Pro Arg Asn Ser Gly Ala Gly Ala Ser Ser Gly Gly Ser Gly 860 865 870
GAG AAT GGT CGG GTG GTC AGC CAT GAC TTC CCC AAG TCC ATG CAA TCG 2810 Glu Asn Gly Arg Val Val Ser His Asp Phe Pro Lys Ser Met Gin Ser 875 880 885
ATT CCT TGC ATG AGC CAC AGT TCA GGG ATG CCC TTG GGA GCC ACG GGA 2858 Ile Pro Cys Met Ser His Ser Ser Gly Met Pro Leu Gly Ala Thr Gly 890 895 900 905
TTG TAACTGGAGC AGATGGAGAC CCCTTGGGGA GCAGGCTCGG CTCCCCAGCC 2911
Leu
CCATCCCAAA CCCTTCAGTG CCAAAAACAA CAAAA 2946
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 2:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 906 Aminosäuren
(B) ART: Aminosäure (D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: Protein
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 2:
Met Gin His Ile Phe Ala Phe Phe Cys Thr Gly Phe Leu Gly Ala Val 1 5 10 15
Val Gly Ala Asn Phe Pro Asn Asn Ile Gin Ile Gly Gly Leu Phe Pro 20 25 30
Asn Gin Gin Ser Gin Glu His Ala Ala Phe Arg Phe Ala Leu Ser Gin 35 40 45
Leu Thr Glu Pro Pro Lys Leu Leu Pro Gin Ile Asp Ile Val Asn Ile 50 55 60
Ser Asp Ser Phe Glu Met Thr Tyr Arg Phe Cys Ser Gin Phe Ser Lys 65 70 75 80
Gly Val Tyr Ala Ile Phe Gly Phe Tyr Glu Arg Arg Thr Val Asn Met 85 90 95
Leu Thr Ser Phe Cys Gly Ala Leu His Val Cys Phe Ile Thr Pro Ser 100 105 110
Phe Pro Val Asp Thr Ser Asn Gin Phe Val Leu Gin Leu Arg Pro Glu 115 120 125 Leu Gin Asp Ala Leu Ile Ser Ile Ile Asp His Tyr Lys Trp Gin Lys 130 135 140
Phe Val Tyr Ile Tyr Asp Ala Asp Arg Gly Leu Ser Val Leu Gin Lys 145 150 155 160
Val Leu Asp Thr Ala Ala Glu Lys Asn Trp Gin Val Thr Ala Val Asn 165 170 175
Ile Leu Thr Thr Thr Glu Glu Gly Tyr Arg Met Leu Phe Gin Asp Leu 180 185 190
Glu Lys Lys Lys Glu Arg Leu Val Val Val Asp Cys Glu Ser Glu Arg 195 200 > 205
Leu Asn Ala Ile Leu Gly Gin Ile Ile Lys Leu Glu Lys Asn Gly Ile 210 215 220
Gly Tyr His Tyr Ile Leu Ala Asn Leu Gly Phe Met Asp Ile Asp Leu 225 230 235 240
Asn Lys Phe Lys Glu Ser Gly Ala Asn Val Thr Gly Phe Gin Leu Val 245 250 255
Asn Tyr Thr Asp Thr Ile Pro Ala Lys Ile Met Gin Gin Trp Lys Asn 260 265 270
Ser Asp Ala Arg Asp His Thr Arg Val Asp Trp Lys Arg Pro Lys Tyr 275 280 285
Thr Ser Ala Leu Thr Tyr Asp Gly Val Lys Val Met Ala Glu Ala Phe 290 295 300
Gin Ser Leu Arg Arg Gin Arg Ile Asp Ile Ser Arg Arg Gly Asn Ala 305 310 315 320
Gly Asp Cys Leu Ala Asn Pro Ala Val Pro Trp Gly Gin Gly Ile Asp 325 330 335
Ile Gin Arg Ala Leu Gin Gin Val Arg Phe Glu Gly Leu Thr Gly Asn \ 340 345 350
Val Gin Phe Asn Glu Lys Gly Arg Arg Thr Asn Tyr Thr Leu His Val 355 360 365
Ile Glu Met Lys His Asp Ser Ile Arg Lys Ile Gly Tyr Trp Asn Glu 370 375 380
Asp Asp Lys Phe Val Pro Ala Ala Thr Asp Ala Gin Ala Gly Gly Asp 385 390 395 400
Asn Ser Ser Val Gin Asn Arg Thr Tyr Ile Val Thr Thr Ile Leu Glu 405 410 415
Asp Pro Tyr Val Met Leu Lys Lys Asn Ala Asn Gin Phe Glu Gly Asn 420 425 430 Asp Arg Tyr Glu Gly Tyr Cys Val Glu Leu Ala Ala Glu Ile Ala Lys 435 440 445
His Val Gly Tyr Ser Tyr Arg Leu Glu Ile Val Ser Asp Gly Lys Tyr 450 455 460
Gly Ala Arg Asp Pro Asp Thr Lys Ala Trp Asn Gly Met Val Gly Glu 465 470 475 480
Leu Val Tyr Gly Arg Ala Asp Val Ala Val Ala Pro Leu Thr Ile Thr 485 490 495
Leu Val Arg Glu Glu Val Ile Asp Phe Ser Lys Pro Phe Met Ser Leu 500 505 510
Gly Ile Ser Ile Met Ile Lys Lys Pro Gin Lys Ser Lys Pro Gly Val 515 520 525
Phe Ser Phe Leu Asp Pro Leu Ala Tyr Glu Ile Trp Met Cys Ile Val 530 535 540
Phe Ala Tyr Ile Gly Val Ser Val Val Leu Phe Leu Val Ser Arg Phe 545 550 555 560
Ser Pro Tyr Glu Trp His Ser Glu Glu Phe Glu Glu Gly Arg Asp Gin 565 570 575
Thr Thr Ser Asp Gin Ser Asn Glu Phe Gly Ile Phe Asn Ser Leu Trp 580 585 590
Phe Ser Leu Gly Ala Phe Met Gin Gin Gly Cys Asp Ile Ser Pro Arg 595 600 605
Ser Leu Ser Gly Arg Ile Val Gly Gly Val Trp Trp Phe Phe Thr Leu 610 615 620
Ile Ile Ile Ser Ser Tyr Thr Ala Asn Leu Ala Ala Phe Leu Thr Val 625 630 635 640
Glu Arg Met Val Ser Pro Ile Glu Ser Ala Glu Asp Leu Ala Lys Gin 645 650 655
Thr Glu Ile Ala Tyr Gly Thr Leu Glu Ala Gly Ser Thr Lys Glu Phe 660 665 670
Phe Arg Arg Ser Lys Ile Ala Val Phe Glu Lys Met Trp Thr Tyr Met 675 680 685
Lys Ser Ala Glu Pro Ser Val Phe Val Arg Thr Thr Glu Glu Gly Met 690 695 700
Ile Arg Val Arg Lys Ser Lys Gly Lys Tyr Ala Tyr Leu Leu Glu Ser 705 710 715 720
Thr Met Asn Glu Tyr Ile Glu Gin Arg Lys Pro Cys Asp Thr Met Lys 725 730 735 23
GTG GAC TGT GAA TCA GAA CGC CTC AAT GCT ATC TTG GGC CAG ATT ATA 794 Val Asp Cys Glu Ser Glu Arg Leu Asn Ala Ile Leu Gly Gin Ile Ile 205 210 215
AAG CTA GAG AAG AAT GGC ATC GGC TAC CAC TAC ATT CTT GCA AAT CTG 842 Lys Leu Glu Lys Asn Gly Ile Gly Tyr His Tyr Ile Leu Ala Asn Leu 220 225 230
GGC TTC ATG GAC ATT GAC TTA AAC AAA TTC AAG GAG AGT GGC GCC AAT 890 Gly Phe Met Asp Ile Asp Leu Asn Lys Phe Lys Glu Ser Gly Ala Asn 235 240 245
GTG ACA GGT TTC CAG CTG GTG AAC TAC ACA GAC ACT ATT CCG GCC AAG 938 Val Thr Gly Phe Gin Leu Val Asn Tyr Thr Asp Thr Ile Pro Ala Lys 250 255 260 265
ATC ATG CAG CAG TGG AAG AAT AGT GAT GCT CGA GAC CAC ACA CGG GTG 986 Ile Met Gin Gin Trp Lys Asn Ser Asp Ala Arg Asp His Thr Arg Val 270 275 280
GAC TGG AAG AGA CCC AAG TAC ACC TCT GCG CTC ACC TAC GAT GGG GTG 1034 Asp Trp Lys Arg Pro Lys Tyr Thr Ser Ala Leu Thr Tyr Asp Gly Val 285 290 295
AAG GTG ATG GCT GAG GCT TTC CAG AGC CTG CGG AGG CAG AGA ATT GAT 1082 Lys Val Met Ala Glu Ala Phe Gin Ser Leu Arg Arg Gin Arg Ile Asp 300 305 310
ATA TCT CGC CGG GGG AAT GCT GGG GAT TGT CTG GCT AAC CCA GCT GTT 1130 Ile Ser Arg Arg Gly Asn Ala Gly Asp Cys Leu Ala Asn Pro Ala Val 315 320 325
CCC TGG GGC CAA GGG ATC GAC ATC CAG AGA GCT CTG CAG CAG GTG CGA 1178 Pro Trp Gly Gin Gly Ile Asp Ile Gin Arg Ala Leu Gin Gin Val Arg 330 335 340 345
TTT GAA GGT TTA ACA GGA AAC GTG CAG TTT AAT GAG AAA GGA CGC CGG 1226 Phe Glu Gly Leu Thr Gly Asn Val Gin Phe Asn Glu Lys Gly Arg Arg 350 355 360
ACC AAC TAC ACG CTC CAC GTG ATT GAA ATG AAA CAT GAC AGC ATC CGA 1274 Thr Asn Tyr Thr Leu His Val Ile Glu Met Lys His Asp Ser Ile Arg 365 370 375
AAG ATT GGT TAC TGG AAT GAA GAT GAT AAG TTT GTC CCT GCA GCC ACC 1322 Lys Ile Gly Tyr Trp Asn Glu Asp Asp Lys Phe Val Pro Ala Ala Thr 380 385 390
GAT GCC CAA GCT GGG GGC GAT AAT TCA AGT GTT CAG AAC AGA ACA TAC 1370 Asp Ala Gin Ala Gly Gly Asp Asn Ser Ser Val Gin Asn Arg Thr Tyr 395 400 405 24
ATC GTC ACA ACA ATC CTA GAA GAT CCT TAT GTG ATG CTC AAG AAG AAC 1418
Ile Val Thr Thr Ile Leu Glu Asp Pro Tyr Val Met Leu Lys Lys Asn 410 415 420 425
GCC AAT CAG TTT GAG GGC AAT GAC CGT TAC GAG GGC TAC TGT GTA GAG 1466 Ala Asn Gin Phe Glu Gly Asn Asp Arg Tyr Glu Gly Tyr Cys Val Glu 430 435 440
CTG GCG GCA GAG ATT GCC AAG CAC GTG GGC TAC TCC TAC CGT CTG GAG 1514 Leu Ala Ala Glu Ile Ala Lys His Val Gly Tyr Ser Tyr Arg Leu Glu 445 450 455
ATT GTC AGT GAT GGA AAA TAC GGA GCC CGA GAC CCT GAC ACG AAG GCC 1562 Ile Val Ser Asp Gly Lys Tyr Gly Ala Arg Asp Pro Asp Thr Lys Ala 460 465 470
TGG AAT GGC ATG GTG GGA GAG CTG GTC TAT GGA AGA GCA GAT GTG GCT 1610 Trp Asn Gly Met Val Gly Glu Leu Val Tyr Gly Arg Ala Asp Val Ala 475 480 485
GTG GCT CCC TTA ACT ATC ACT TTG GTC CGG GAA GAA GTT ATA GAT TTC 1658 Val Ala Pro Leu Thr Ile Thr Leu Val Arg Glu Glu Val Ile Asp Phe 490 495 500 505
TCC AAA CCA TTT ATG AGT TTG GGG ATC TCC ATC ATG ATT AAA AAA CCA 1706 Ser Lys Pro Phe Met Ser Leu Gly Ile Ser Ile Met Ile Lys Lys Pro 510 515 520
CAG AAA TCC AAG CCG GGT GTC TTC TCC TTC CTT GAT CCT TTG GCT TAT 1754 Gin Lys Ser Lys Pro Gly Val Phe Ser Phe Leu Asp Pro Leu Ala Tyr 525 530 535
GAG ATT TGG ATG TGC ATT GTT TTT GCC TAC ATT GGA GTG AGT GTT GTC 1802 Glu Ile Trp Met Cys Ile Val Phe Ala Tyr Ile Gly Val Ser Val Val 540 545 550
CTC TTC CTG GTC AGC CGC TTC AGT CCC TAT GAA TGG CAC AGT GAA GAG 1850 Leu Phe Leu Val Ser Arg Phe Ser Pro Tyr Glu Trp His Ser Glu Glu 555 560 565
TTT GAG GAA GGA CGG GAC CAG ACA ACC AGT GAC CAG TCC AAT GAG TTT 1898 Phe Glu Glu Gly Arg Asp Gin Thr Thr Ser Asp Gin Ser Asn Glu Phe 570 575 580 585
GGG ATA TTC AAC AGT TTG TGG TTC TCC CTG GGA GCC TTC ATG CAG CAA 1946 Gly Ile Phe Asn Ser Leu Trp Phe Ser Leu Gly Ala Phe Met Gin Gin 590 595 600
GGA TGT GAC ATT TCT CCC AGG TCC CTG TCT GGT CGC ATC GTT GGT GGC 1994 Gly Cys Asp Ile Ser Pro Arg Ser Leu Ser Gly Arg Ile Val Gly Gly 605 610 615 21
Val Gly Gly Asn Leu Asp Ser Lys Gly Tyr Gly Ile Ala Thr Pro Lys 740 745 750
Gly Ser Ala Leu Gly Gly Pro Val Asn Leu Ala Val Leu Lys Leu Ser 755 760 765
Glu Gin Gly Val Leu Asp Lys Leu Lys Ser Lys Trp Trp Tyr Asp Lys 770 775 780
Gly Glu Cys Gly Ser Lys Asp Ser Gly Ser Lys Asp Lys Thr Ser Ala 785 790 795 800
Leu Ser Leu Ser Asn Val Ala Gly Val Phe Tyr Ile Leu Ile Gly Gly 805 810 815
Leu Gly Leu Ala Met Leu Val Ala Leu Ile Glu Phe Cys Tyr Lys Ser 820 825 830
Arg Ser Glu Ser Lys Arg Met Lys Gly Phe Cys Leu Ile Pro Gin Gin 835 840 845
Ser Ile Asn Glu Ala Ile Arg Thr Ser Thr Leu Pro Arg Asn Ser Gly 850 855 860
Ala Gly Ala Ser Ser Gly Gly Ser Gly Glu Asn Gly Arg Val Val Ser 865 870 875 880
His Asp Phe Pro Lys Ser Met Gin Ser Ile Pro Cys Met Ser His Ser 885 890 895
Ser Gly Met Pro Leu Gly Ala Thr Gly Leu 900 905
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 3:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 2946 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: cDNS zu mRNS
(vi) URSPRÜNGLICHE HERKUNFT:
(A) ORGANISMUS: Homo sapiens (D) ENTWICKLUNGSSTADIUM: adult (F) GEWEBETYP: Gehirn
(ix) MERKMALE:
(A) NAME/SCHLÜSSEL: CDS
(B) LAGE: 144..2861
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 3: GAAAGGAAGG AAGCAAGCAA GCAAGGAAGG AACTGCAGGA GGAAAAGAAC AGGCAGAACA 60 22
GCGAAAAGAA TAAAGGGAAA GGGGGGGAAA CACCAAATCT ATGATTGGAC CTGGGCTTCT 120
TTTTCGCCAA TGCAAAAAGG AAT ATG CAG CAC ATT TTT GCC TTC TTC TGC 170
Met Gin His Ile Phe Ala Phe Phe Cys 1 5
ACC GGT TTC CTA GGC GCG GTA GTA GGT GCC AAT TTC CCC AAC AAT ATC 218 Thr Gly Phe Leu Gly Ala Val Val Gly Ala Asn Phe Pro Asn Asn Ile 10 15 20 25
CAG ATC GGG GGA TTA TTT CCA AAC CAG CAG TCA CAG GAA CAT GCT GCT 266 Gin Ile Gly Gly Leu Phe Pro Asn Gin Gin Ser Gin Glu His Ala Ala 30 35 40
TTT AGA TTT GCT TTG TCG CAA CTC ACA GAG CCC CCG AAG CTG CTC CCC 314 Phe Arg Phe Ala Leu Ser Gin Leu Thr Glu Pro Pro Lys Leu Leu Pro 45 50 55
CAG ATT GAT ATT GTG AAC ATC AGC GAC AGC TTT GAG ATG ACC TAT AGA 362 Gin Ile Asp Ile Val Asn Ile Ser Asp Ser Phe Glu Met Thr Tyr Arg 60 65 70
TTC TGT TCC CAG TTC TCC AAA GGA GTC TAT GCC ATC TTT GGG TTT TAT 410 Phe Cys Ser Gin Phe Ser Lys Gly Val Tyr Ala Ile Phe Gly Phe Tyr 75 80 85
GAA CGT AGG ACT GTC AAC ATG CTG ACC TCC TTT TGT GGG GCC CTC CAC 458 Glu Arg Arg Thr Val Asn Met Leu Thr Ser Phe Cys Gly Ala Leu His 90 95 100 105
GTC TGC TTC ATT ACG CCG AGC TTT CCC GTT GAT ACA TCC AAT CAG TTT 506 Val Cys Phe Ile Thr Pro Ser Phe Pro Val Asp Thr Ser Asn Gin Phe 110 115 120
GTC CTT CAG CTG CGC CCT GAA CTG CAG GAT GCC CTC ATC AGC ATC ATT 554 Val Leu Gin Leu Arg Pro Glu Leu Gin Asp Ala Leu Ile Ser Ile Ile 125 130 135
GAC CAT TAC AAG TGG CAG AAA TTT GTC TAC ATT TAT GAT GCC GAC CGG 602 Asp His Tyr Lys Trp Gin Lys Phe Val Tyr Ile Tyr Asp Ala Asp Arg 140 145 150
GGC TTA TCC GTC CTG CAG AAA GTC CTG GAT ACA GCT GCT GAG AAG AAC 650 Gly Leu Ser Val Leu Gin Lys Val Leu Asp Thr Ala Ala Glu Lys Asn 155 160 165
TGG CAG GTG ACA GCA GTC AAC ATC TTG ACA ACC ACA GAG GAG GGA TAC 698 Trp Gin Val Thr Ala Val Asn Ile Leu Thr Thr Thr Glu Glu Gly Tyr 170 175 180 185
CGG ATG CTC TTT CAG GAC CTG GAG AAG AAA AAG GAG CGG CTG GTG GTG 746 Arg Met Leu Phe Gin Asp Leu Glu Lys Lys Lys Glu Arg Leu Val Val 190 195 200 GTC TGG TGG TTC TTC ACC TTA ATC ATC ATC TCC TCA TAT ACA GCC AAT 2042
Val Trp Trp Phe Phe Thr Leu Ile Ile Ile Ser Ser Tyr Thr Ala Asn 620 625 630
CTG GCC GCC TTC CTG ACC GTG GAG AGG ATG GTG TCT CCC ATT GAG AGT 2090 Leu Ala Ala Phe Leu Thr Val Glu Arg Met Val Ser Pro Ile Glu Ser 635 640 645
GCA GAG GAC CTA GCG AAG CAG ACA GAA ATT GCC TAC GGG ACG CTG GAA 2138 Ala Glu Asp Leu Ala Lys Gin Thr Glu Ile Ala Tyr Gly Thr Leu Glu 650 655 660 665
GCA GGA TCT ACT AAG GAG TTC TTC AGG AGG TCT AAA ATT GCT GTG TTT 2186 Ala Gly Ser Thr Lys Glu Phe Phe Arg Arg Ser Lys Ile Ala Val Phe 670 675 680
GAG AAG ATG TGG ACA TAC ATG AAG TCA GCA GAG CCA TCA GTT TTT GTG 2234 Glu Lys Met Trp Thr Tyr Met Lys Ser Ala Glu Pro Ser Val Phe Val 685 690 695
CGG ACC ACA GAG GAG GGG ATG ATT CGA GTG AGG AAA TCC AAA GGC AAA 2282 Arg Thr Thr Glu Glu Gly Met Ile Arg Val Arg Lys Ser Lys Gly Lys 700 705 710
TAT GCC TAC CTC CTG GAG TCC ACC ATG AAT GAG TAC ATT GAG CAG CGG 2330 Tyr Ala Tyr Leu Leu Glu Ser Thr Met Asn Glu Tyr Ile Glu Gin Arg 715 720 725
AAA CCC TGT GAC ACC ATG AAG GTG GGA GGT AAC TTG GAT TCC AAA GGC 2378 Lys Pro Cys Asp Thr Met Lys Val Gly Gly Asn Leu Asp Ser Lys Gly 730 735 740 745
TAT GGC ATT GCA ACA CCC AAG GGG TCT GCC CTG GGA AAT CCA GTA AAC 2426 Tyr Gly Ile Ala Thr Pro Lys Gly Ser Ala Leu Gly Asn Pro Val Asn '750 755 760
CTG GCA GTG TTA AAA CTA AAC GAG CAG GGG CTT TTG GAC AAA TTG AAA 2474 Leu Ala Val Leu Lys Leu Asn Glu Gin Gly Leu Leu Asp Lys Leu Lys 765 770 775
AAC AAA TGG TGG TAC GAC AAG GGC GAG TGC GGC AGC GGG GGA GGT GAT 2522 Asn Lys Trp Trp Tyr Asp Lys Gly Glu Cys Gly Ser Gly Gly Gly Asp 780 785 790
TCC AAG GAC AAG ACA AGC GCT CTG AGC CTC AGC AAT GTG GCA GGC GTG 2570 Ser Lys Asp Lys Thr Ser Ala Leu Ser Leu Ser Asn Val Ala Gly Val 795 800 805
TTC TAC ATC CTG ATC GGA GGA CTT GGA CTA GCC ATG CTG GTT GCC TTA 2618 Phe Tyr Ile Leu Ile Gly Gly Leu Gly Leu Ala Met Leu Val Ala Leu 810 815 820 825 ATC GAG TTC TGC TAC AAA TCC CGT AGT GAA TCC AAG CGG ATG AAG GGT 2666 Ile Glu Phe Cys Tyr Lys Ser Arg Ser Glu Ser Lys Arg Met Lys Gly 830 835 840
TTT TGT TTG ATC CCA CAG CAA TCC ATC AAC GAA GCC ATA CGG ACA TCG 2714 Phe Cys Leu Ile Pro Gin Gin Ser Ile Asn Glu Ala Ile Arg Thr Ser 845 850 855
ACC CTC CCC CGC AAC AGC GGG GCA GGA GCC AGC AGC GGC GGC AGT GGA 2762 Thr Leu Pro Arg Asn Ser Gly Ala Gly Ala Ser Ser Gly Gly Ser Gly 860 865 870
GAG AAT GGT CGG GTG GTC AGC CAT GAC TTC CCC AAG TCC ATG CAA TCG 2810 Glu Asn Gly Arg Val Val Ser His Asp Phe Pro Lys Ser Met Gin Ser 875 880 885
ATT CCT TGC ATG AGC CAC AGT TCA GGG ATG CCC TTG GGA GCC ACG GGA 2858 Ile Pro Cys Met Ser His Ser Ser Gly Met Pro Leu Gly Ala Thr Gly 890 895 900 905
TTG TAACTGGAGC AGATGGAGAC CCCTTGGGGA GCAGGCTCGG CTCCCCAGCC 2911
Leu
CCATCCCAAA CCCTTCAGTG CCAAAAACAA CAAAA 2946
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 4:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 906 Aminosäuren
(B) ART: Aminosäure (D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: Protein
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 4:
Met Gin His Ile Phe Ala Phe Phe Cys Thr Gly Phe Leu Gly Ala Val 1 5 10 15
Val Gly Ala Asn Phe Pro Asn Asn Ile Gin Ile Gly Gly Leu Phe Pro 20 25 30
Asn Gin Gin Ser Gin Glu His Ala Ala Phe Arg Phe Ala Leu Ser Gin 35 40 45
Leu Thr Glu Pro Pro Lys Leu Leu Pro Gin Ile Asp Ile Val Asn Ile 50 55 60
Ser Asp Ser Phe Glu Met Thr Tyr Arg Phe Cys Ser Gin Phe Ser Lys 65 70 75 80
Gly Val Tyr Ala Ile Phe Gly Phe Tyr Glu Arg Arg Thr Val Asn Met 85 90 95 Leu Thr Ser Phe Cys Gly Ala Leu His Val Cys Phe Ile Thr Pro Ser 100 105 110
Phe Pro Val Asp Thr Ser Asn Gin Phe Val Leu Gin Leu Arg Pro Glu 115 120 125
Leu Gin Asp Ala Leu Ile Ser Ile Ile Asp His Tyr Lys Trp Gin Lys 130 135 140
Phe Val Tyr Ile Tyr Asp Ala Asp Arg Gly Leu Ser Val Leu Gin Lys 145 150 155 160
Val Leu Asp Thr Ala Ala Glu Lys Asn Trp Gin Val Thr Ala Val Asn 165 170 175
Ile Leu Thr Thr Thr Glu Glu Gly Tyr Arg Met Leu Phe Gin Asp Leu 180 185 190
Glu Lys Lys Lys Glu Arg Leu Val Val Val Asp Cys Glu Ser Glu Arg 195 200 205
Leu Asn Ala Ile Leu Gly Gin Ile Ile Lys Leu Glu Lys Asn Gly Ile 210 215 220
Gly Tyr His Tyr Ile Leu Ala Asn Leu Gly Phe Met Asp Ile Asp Leu 225 230 235 240
Asn Lys Phe Lys Glu Ser Gly Ala Asn Val Thr Gly Phe Gin Leu Val 245 250 255
Asn Tyr Thr Asp Thr Ile Pro Ala Lys Ile Met Gin Gin Trp Lys Asn 260 265 270
Ser Asp Ala Arg Asp His Thr Arg Val Asp Trp Lys Arg Pro Lys Tyr 275 280 285
Thr Ser Ala Leu Thr Tyr Asp Gly Val Lys Val Met Ala Glu Ala Phe 290 295 300
Gin Ser Leu Arg Arg Gin Arg Ile Asp Ile Ser Arg Arg Gly Asn Ala 305 310 315 320
Gly Asp Cys Leu Ala Asn Pro Ala Val Pro Trp Gly Gin Gly Ile Asp 325 330 335
Ile Gin Arg Ala Leu Gin Gin Val Arg Phe Glu Gly Leu Thr Gly Asn 340 345 350
Val Gin Phe Asn Glu Lys Gly Arg Arg Thr Asn Tyr Thr Leu His Val 355 360 365
Ile Glu Met Lys His Asp Ser Ile Arg Lys Ile Gly Tyr Trp Asn Glu 370 375 380
Asp Asp Lys Phe Val Pro Ala Ala Thr Asp Ala Gin Ala Gly Gly Asp 385 390 395 400 Asn Ser Ser Val Gin Asn Arg Thr Tyr Ile Val Thr Thr Ile Leu Glu 405 410 415
Asp Pro Tyr Val Met Leu Lys Lys Asn Ala Asn Gin Phe Glu Gly Asn 420 425 430
Asp Arg Tyr Glu Gly Tyr Cys Val Glu Leu Ala Ala Glu Ile Ala Lys 435 440 445
His Val Gly Tyr Ser Tyr Arg Leu Glu Ile Val Ser Asp Gly Lys Tyr 450 455 460
Gly Ala Arg Asp Pro Asp Thr Lys Ala Trp Asn Gly Met Val Gly Glu 465 470 475 480
Leu Val Tyr Gly Arg Ala Asp Val Ala Val Ala Pro Leu Thr Ile Thr 485 490 495
Leu Val Arg Glu Glu Val Ile Asp Phe Ser Lys Pro Phe Met Ser Leu 500 505 510
Gly Ile Ser Ile Met Ile Lys Lys Pro Gin Lys Ser Lys Pro Gly Val 515 520 525
Phe Ser Phe Leu Asp Pro Leu Ala Tyr Glu Ile Trp Met Cys Ile Val 530 535 540
Phe Ala Tyr Ile Gly Val Ser Val Val Leu Phe Leu Val Ser Arg Phe 545 550 555 560
Ser Pro Tyr Glu Trp His Ser Glu Glu Phe Glu Glu Gly Arg Asp Gin 565 570 575
Thr Thr Ser Asp Gin Ser Asn Glu Phe Gly Ile Phe Asn Ser Leu Trp 580 585 590
Phe Ser Leu Gly Ala Phe Met Gin Gin Gly Cys Asp Ile Ser Pro Arg 595 600 605
Ser Leu Ser Gly Arg Ile Val Gly Gly Val Trp Trp Phe Phe Thr Leu 610 615 620
Ile Ile Ile Ser Ser Tyr Thr Ala Asn Leu Ala Ala Phe Leu Thr Val 625 630 635 640
Glu Arg Met Val Ser Pro Ile Glu Ser Ala Glu Asp Leu Ala Lys Gin 645 650 655
Thr Glu Ile Ala Tyr Gly Thr Leu Glu Ala Gly Ser Thr Lys Glu Phe 660 665 670
Phe Arg Arg Ser Lys Ile Ala Val Phe Glu Lys Met Trp Thr Tyr Met 675 680 685
Lys Ser Ala Glu Pro Ser Val Phe Val Arg Thr Thr Glu Glu Gly Met 690 695 700 Ile Arg Val Arg Lys Ser Lys Gly Lys Tyr Ala Tyr Leu Leu Glu Ser 705 710 715 720
Thr Met Asn Glu Tyr Ile Glu Gin Arg Lys Pro Cys Asp Thr Met Lys 725 730 735
Val Gly Gly Asn Leu Asp Ser Lys Gly Tyr Gly Ile Ala Thr Pro Lys 740 745 750
Gly Ser Ala Leu Gly Asn Pro Val Asn Leu Ala Val Leu Lys Leu Asn 755 760 765
Glu Gin Gly Leu Leu Asp Lys Leu Lys Asn Lys Trp Trp Tyr Asp Lys 770 775 780
Gly Glu Cys Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ser Lys Asp Lys Thr Ser Ala 785 790 795 800
Leu Ser Leu Ser Asn Val Ala Gly Val Phe Tyr Ile Leu Ile Gly Gly 805 810 815
Leu Gly Leu Ala Met Leu Val Ala Leu Ile Glu Phe Cys Tyr Lys Ser 820 825 830
Arg Ser Glu Ser Lys Arg Met Lys Gly Phe Cys Leu Ile Pro Gin Gin 835 840 845
Ser Ile Asn Glu Ala Ile Arg Thr Ser Thr Leu Pro Arg Asn Ser Gly 850 855 860
Ala Gly Ala Ser Ser Gly Gly Ser Gly Glu Asn Gly Arg Val Val Ser 865 870 875 880
His Asp Phe Pro Lys Ser Met Gin Ser Ile Pro Cys Met Ser His Ser 885 890 895
Ser Gly Met Pro Leu Gly Ala Thr Gly Leu 900 905
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 5:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 2955 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: cDNS zu mRNS
(vi) URSPRÜNGLICHE HERKUNFT:
(A) ORGANISMUS: Homo sapiens (D) ENTWICKLUNGSSTADIUM: adult (F) GEWEBETYP: Gehirn ( ix) MERKMALE :
(A) NAME/SCHLÜSSEL: CDS
(B) LAGE: 28..2676
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 5:
TTTGTCGACG CTCTACTTTT CTTGGAA ATG CAA AAG ATT ATG CAT GTT TCT 51
Met Gin Lys Ile Met His Val Ser 1 5
GTC CTC CTT TCT CCT GTT TTA TGG GGA CTG ATT TTT GGT GTC TCT TCT 99 Val Leu Leu Ser Pro Val Leu Trp Gly Leu Ile Phe Gly Val Ser Ser 10 15 20
AAC AGC ATA CAG ATA GGG GGG CTA TTT CCT AGG GGC GCC GAT CAA GAA 147 Asn Ser Ile Gin Ile Gly Gly Leu Phe Pro Arg Gly Ala Asp Gin Glu 25 30 35 40
TAC AGT GCA TTT CGA GTA GGG ATG GTT CAG TTT TCC ACT TCG GAG TTC 195 Tyr Ser Ala Phe Arg Val Gly Met Val Gin Phe Ser Thr Ser Glu Phe 45 50 55
AGA CTG ACA CCC CAC ATC GAC AAT TTG GAG GTG GCA AAC AGC TTC GCA 243 Arg Leu Thr Pro His Ile Asp Asn Leu Glu Val Ala Asn Ser Phe Ala 60 65 70
GTC ACT AAT GCT TTC TGC TCC CAG TTT TCG AGA GGA GTC TAT GCT ATT 291 Val Thr Asn Ala Phe Cys Ser Gin Phe Ser Arg Gly Val Tyr Ala Ile 75 80 85
TTT GGA TTT TAT GAC AAG AAG TCT GTA AAT ACC ATC ACA TCA TTT TGC 339 Phe Gly Phe Tyr Asp Lys Lys Ser Val Asn Thr Ile Thr Ser Phe Cys 90 95 100
GGA ACA CTC CAC GTC TCC TTC ATC ACT CCC AGC TTC CCA ACA GAT GGC 387 Gly Thr Leu His Val Ser Phe Ile Thr Pro Ser Phe Pro Thr Asp Gly 105 110 115 120
ACA CAT CCA TTT GTC ATT CAG ATG AGA CCC GAC CTC AAA GGA GCT CTC 435 Thr His Pro Phe Val Ile Gin Met Arg Pro Asp Leu Lys Gly Ala Leu 125 130 135
CTT AGC TTG ATT GAA TAC TAT CAA TGG GAC AAG TTT GCA TAC CTC TAT 483 Leu Ser Leu Ile Glu Tyr Tyr Gin Trp Asp Lys Phe Ala Tyr Leu Tyr 140 145 150
GAC AGT GAC AGA GGC TTA TCA ACA CTG CAA GCT GTG CTG GAT TCT GCT 531 Asp Ser Asp Arg Gly Leu Ser Thr Leu Gin Ala Val Leu Asp Ser Ala 155 160 165
GCT GAA AAG AAA TGG CAA GTG ACT GCT ATC AAT GTG GGA AAC ATT AAC 579 Ala Glu Lys Lys Trp Gin Val Thr Ala Ile Asn Val Gly Asn Ile Asn 170 175 180 AAT GAC AAG AAA GAT GAG ATG TAC CGA TCA CTT TTT CAA GAT CTG GAG 627
Asn Asp Lys Lys Asp Glu Met Tyr Arg Ser Leu Phe Gin Asp Leu Glu 185 190 195 200
TTA AAA AAG GAA CGG CGT GTA ATT CTG GAC TGT GAA AGG GAT AAA GTA 675 Leu Lys Lys Glu Arg Arg Val Ile Leu Asp Cys Glu Arg Asp Lys Val 205 210 215
AAC GAC ATT GTA GAC CAG GTT ATT ACC ATT GGA AAA CAC GTT AAA GGG 723 Asn Asp Ile Val Asp Gin Val Ile Thr Ile Gly Lys His Val Lys Gly 220 225 230
TAC CAC TAC ATC ATT GCA AAT CTG GGA TTT ACT GAT GGA GAC CTA TTA 771 Tyr His Tyr Ile Ile Ala Asn Leu Gly Phe Thr Asp Gly Asp Leu Leu 235 240 245
AAA ATC CAG TTT GGA GGT GCA AAT GTC TCT GGA TTT CAG ATA GTG GAC 819 Lys Ile Gin Phe Gly Gly Ala Asn Val Ser Gly Phe Gin Ile Val Asp 250 255 260
TAT GAT GAT TCG TTG GTA TCT AAA TTT ATA GAA AGA TGG TCA ACA CTG 867 Tyr Asp Asp Ser Leu Val Ser Lys Phe Ile Glu Arg Trp Ser Thr Leu 265 270 275 280
GAA GAA AAA GAA TAC CCT GGA GCT CAC ACA ACA ACA ATT AAG TAT ACT 915 Glu Glu Lys Glu Tyr Pro Gly Ala His Thr Thr Thr Ile Lys Tyr Thr 285 290 295
TCT GCT CTG ACC TAT GAT GCC GTT CAA GTG ATG ACT GAA GCC TTC CGC 963 Ser Ala Leu Thr Tyr Asp Ala Val Gin Val Met Thr Glu Ala Phe Arg 300 305 310
AAC CTA AGG AAG CAA AGA ATT GAA ATC TCC CGA AGG GGG AAT GCA GGA 1011 Asn Leu Arg Lys Gin Arg Ile Glu Ile Ser Arg Arg Gly Asn Ala Gly 315 320 325
GAC TGT CTG GCA AAC CCA GCA GTG CCC TGG GGA CAA GGT GTA GAA ATA 1059 Asp Cys Leu Ala Asn Pro Ala Val Pro Trp Gly Gin Gly Val Glu Ile 330 335 340
GAA AGG GCC CTC AAA CAG GTT CAG GTT GAA GGT CTC TCA GGA AAT ATA 1107 Glu Arg Ala Leu Lys Gin Val Gin Val Glu Gly Leu Ser Gly Asn Ile 345 350 355 360
AAG TTT GAC CAG AAT GGA AAA AGA ATA AAC TAT ACA ATT AAC ATC ATG 1155 Lys Phe Asp Gin Asn Gly Lys Arg Ile Asn Tyr Thr Ile Asn Ile Met 365 370 375
GAG CTC AAA ACT AAT GGG CCC CGG AAG ATT GGC TAC TGG AGT GAA GTG 1203 Glu Leu Lys Thr Asn Gly Pro Arg Lys Ile Gly Tyr Trp Ser Glu Val 380 385 390 GAC AAA ATG GTT GTT ACC CTT ACT GAG CTC CCT TCT GGA AAT GAC ACC 1251
Asp Lys Met Val Val Thr Leu Thr Glu Leu Pro Ser Gly Asn Asp Thr 395 400 405
TCT GGG CTT GAG AAT AAG ACT GTT GTT GTC ACC ACA ATT TTG GAA TCT 1299 Ser Gly Leu Glu Asn Lys Thr Val Val Val Thr Thr Ile Leu Glu Ser 410 415 420
CCG TAT GTT ATG ATG AAG AAA AAT CAT GAA ATG CTT GAA GGC AAT GAG 1347 Pro Tyr Val Met Met Lys Lys Asn His Glu Met Leu Glu Gly Asn Glu 425 430 435 440
CGC TAT GAG GGC TAC TGT GTT GAC CTG GCT GCA GAA ATC GCC AAA CAT 1395 Arg Tyr Glu Gly Tyr Cys Val Asp Leu Ala Ala Glu Ile Ala Lys His 445 450 455
TGT GGG TTC AAG TAC AAG TTG ACA ATT GTT GGT GAT GGC AAG TAT GGG 1443 Cys Gly Phe Lys Tyr Lys Leu Thr Ile Val Gly Asp Gly Lys Tyr Gly 460 465 470
GCC AGG GAT GCA GAC ACG AAA ATT TGG AAT GGG ATG GTT GGA GAA CTT 1491 Ala Arg Asp Ala Asp Thr Lys Ile Trp Asn Gly Met Val Gly Glu Leu 475 480 485
GTA TAT GGG AAA GCT GAT ATT GCA ATT GCT CCA TTA ACT ATT ACC CTT 1539 Val Tyr Gly Lys Ala Asp Ile Ala Ile Ala Pro Leu Thr Ile Thr Leu 490 495 500
GTG AGA GAA GAG GTG ATT GAC TTC TCA AAG CCC TTC ATG AGC CTC GGG 1587 Val Arg Glu Glu Val Ile Asp Phe Ser Lys Pro Phe Met Ser Leu Gly 505 510 515 520
ATA TCT ATC ATG ATC AAG AAG CCT CAG AAG TCC AAA CCA GGA GTG TTT 1635 Ile Ser Ile Met Ile Lys Lys Pro Gin Lys Ser Lys Pro Gly Val Phe 525 530 535
TCC TTT CTT GAT CCT TTA GCC TAT GAG ATC TGG ATG TGC ATT GTT TTT 1683 Ser Phe Leu Asp Pro Leu Ala Tyr Glu Ile Trp Met Cys Ile Val Phe 540 545 550
GCC TAC ATT GGG GTC AGT GTA GTT TTA TTC CTG GTC AGC AGA TTT AGC 1731 Ala Tyr Ile Gly Val Ser Val Val Leu Phe Leu Val Ser Arg Phe Ser 555 560 565
CCC TAC GAG TGG CAC ACT GAG GAG TTT GAA GAT GGA AGA GAA ACA CAA 1779 Pro Tyr Glu Trp His Thr Glu Glu Phe Glu Asp Gly Arg Glu Thr Gin 570 575 580
AGT AGT GAA TCA ACT AAT GAA TTT GGG ATT TTT AAT AGT CTC TGG TTT 1827 Ser Ser Glu Ser Thr Asn Glu Phe Gly Ile Phe Asn Ser Leu Trp Phe 585 590 595 600 TCC TTG GGT GCC TTT ATG CGG CAA GGA TGC GAT ATT TCG CCA AGA TCC 1875
Ser Leu Gly Ala Phe Met Arg Gin Gly Cys Asp Ile Ser Pro Arg Ser 605 610 615
CTC TCT GGG CGC ATT GTT GGA GGT GTG TGG TGG TTC TTT ACC CTG ATC 1923 Leu Ser Gly Arg Ile Val Gly Gly Val Trp Trp Phe Phe Thr Leu Ile 620 625 630
ATA ATC TCC TCC TAC ACG GCT AAC TTA GCT GCC TTC CTG ACT GTA GAG 1971 Ile Ile Ser Ser Tyr Thr Ala Asn Leu Ala Ala Phe Leu Thr Val Glu 635 640 645
AGG ATG GTG TCT CCC ATC GAA AGT GCT GAG GAT CTT TCT AAG CAA ACA 2019 Arg Met Val Ser Pro Ile Glu Ser Ala Glu Asp Leu Ser Lys Gin Thr 650 655 660
GAA ATT GCT TAT GGA ACA TTA GAC TCT GGC TCC ACT AAA GAG TTT TTC 2067 Glu Ile Ala Tyr Gly Thr Leu Asp Ser Gly Ser Thr Lys Glu Phe Phe 665 670 675 680
AGG AGA TCT AAA ATT GCA GTG TTT GAT AAA ATG TGG ACC TAC ATG CGG 2115 Arg Arg Ser Lys Ile Ala Val Phe Asp Lys Met Trp Thr Tyr Met Arg 685 690 695
AGT GCG GAG CCC TCT GTG TTT GTG AGG ACT ACG GCC GAA GGG GTG GCT 2163 Ser Ala Glu Pro Ser Val Phe Val Arg Thr Thr Ala Glu Gly Val Ala 700 705 710
AGA GTG CGG AAG TCC AAA GGG AAA TAT GCC TAC TTG TTG GAG TCC ACG 2211 Arg Val Arg Lys Ser Lys Gly Lys Tyr Ala Tyr Leu Leu Glu Ser Thr 715 720 725
ATG AAC GAG TAC ATT GAG CAA AGG AAG CCT TGC GAC ACC ATG AAA GTT 2259 Met Asn Glu Tyr Ile Glu Gin Arg Lys Pro Cys Asp Thr Met Lys Val 730 735 740
GGT GGA AAC CTG GAT TCC AAA GGC TAT GGC ATC GCA ACA CCT AAA GGA 2307 Gly Gly Asn Leu Asp Ser Lys Gly Tyr Gly Ile Ala Thr Pro Lys Gly 745 750 755 760
TCC TCA TTA GGA ACC CCA GTA AAT CTT GCA GTA TTG AAA CTC AGT GAG 2355 Ser Ser Leu Gly Thr Pro Val Asn Leu Ala Val Leu Lys Leu Ser Glu 765 770 775
CAA GGC GTC TTA GAC AAG CTG AAA AAC AAA TGG TGG TAC GAT AAA GGT 2403 Gin Gly Val Leu Asp Lys Leu Lys Asn Lys Trp Trp Tyr Asp Lys Gly 780 785 790
GAA TGT GGA GCC AAG GAC TCT GGA AGT AAG GAA AAG ACC AGT GCC CTC 2451 Glu Cys Gly Ala Lys Asp Ser Gly Ser Lys Glu Lys Thr Ser Ala Leu 795 800 805 AGT CTG AGC AAC GTT GCT GGA GTA TTC TAC ATC CTT GTC GGG GGC CTT 2499
Ser Leu Ser Asn Val Ala Gly Val Phe Tyr Ile Leu Val Gly Gly Leu 810 815 820
GGT TTG GCA ATG CTG GTG GCT TTG ATT GAG TTC TGT TAC AAG TCA AGG 2547 Gly Leu Ala Met Leu Val Ala Leu Ile Glu Phe Cys Tyr Lys Ser Arg 825 830 835 840
GCC GAG GCG AAA CGA ATG AAG GTG GCA AAG AAT GCA CAG AAT ATT AAC 2595 Ala Glu Ala Lys Arg Met Lys Val Ala Lys Asn Ala Gin Asn Ile Asn 845 850 855
CCA TCT TCC TCG CAG AAT TCA CAG AAT TTT GCA ACT TAT AAG GAA GGT 2643 Pro Ser Ser Ser Gin Asn Ser Gin Asn Phe Ala Thr Tyr Lys Glu Gly 860 865 870
TAC AAC GTA TAT GGC ATC GAA AGT GTT AAA ATT TAGGGGATGA CCTTGAAATG 2696 Tyr Asn Val Tyr Gly Ile Glu Ser Val Lys Ile 875 880
ATGCCATGAG GAACAAGGCA AGGCTGTCAA TTACAGGAAG TACTGGAGAA AATGGACGTG 2756
TTATGACTCC AGAATTTCCC AAAGCAGTGC ATGCTGTCCC TTACGTGAGT CCTGGCATGG 2816
GAATGAATGT CAGTGTGACT GATCTCTCGT GATTGATAAG AACCTTTTGA GTGCCTTACA 2876
CAATGGTTTT CTTGTGTTTA TTGTCAAAGT GGTGAGAGGC ATCCAGTATC TTGAAGACTT 2936
TTCTTTCAGC CAAGAATTC 2955
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 6:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 883 Aminosäuren
(B) ART: Aminosäure (D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: Protein
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: C:
Met Gin Lys Ile Met His Val Ser Val Leu Leu Ser Pro Val Leu Trp 1 5 10 15
Gly Leu Ile Phe Gly Val Ser Ser Asn Ser Ile Gin Ile Gly Gly Leu 20 25 30
Phe Pro Arg Gly Ala Asp Gin Glu Tyr Ser Ala Phe Arg Val Gly Met 35 40 45
Val Gin Phe Ser Thr Ser Glu Phe Arg Leu Thr Pro His Ile Asp Asn 50 55 60
Leu Glu Val Ala Asn Ser Phe Ala Val Thr Asn Ala Phe Cys Ser Gin 65 70 75 80 Phe Ser Arg Gly Val Tyr Ala Ile Phe Gly Phe Tyr Asp Lys Lys Ser 85 90 95
Val Asn Thr Ile Thr Ser Phe Cys Gly Thr Leu His Val Ser Phe Ile 100 105 110
Thr Pro Ser Phe Pro Thr Asp Gly Thr His Pro Phe Val Ile Gin Met 115 120 125
Arg Pro Asp Leu Lys Gly Ala Leu Leu Ser Leu Ile Glu Tyr Tyr Gin 130 135 140
Trp Asp Lys Phe Ala Tyr Leu Tyr Asp Ser Asp Arg Gly Leu Ser Thr 145 150 155 160
Leu Gin Ala Val Leu Asp Ser Ala Ala Glu Lys Lys Trp Gin Val Thr 165 170 175
Ala Ile Asn Val Gly Asn Ile Asn Asn Asp Lys Lys Asp Glu Met Tyr 180 185 190
Arg Ser Leu Phe Gin Asp Leu Glu Leu Lys Lys Glu Arg Arg Val Ile 195 200 205
Leu Asp Cys Glu Arg Asp Lys Val Asn Asp Ile Val Asp Gin Val Ile 210 215 220
Thr Ile Gly Lys His Val Lys Gly Tyr His Tyr Ile Ile Ala Asn Leu 225 230 235 240
Gly Phe Thr Asp Gly Asp Leu Leu Lys Ile Gin Phe Gly Gly Ala Asn 245 250 255
Val Ser Gly Phe Gin Ile Val Asp Tyr Asp Asp Ser Leu Val Ser Lys 260. 265 270
Phe Ile Glu Arg Trp Ser Thr Leu Glu Glu Lys Glu Tyr Pro Gly Ala 275 280 285
His Thr Thr Thr Ile Lys Tyr Thr Ser Ala Leu Thr Tyr Asp Ala Val 290 295 300
Gin Val Met Thr Glu Ala Phe Arg Asn Leu Arg Lys Gin Arg Ile Glu 305 310 315 320
Ile Ser Arg Arg Gly Asn Ala Gly Asp Cys Leu Ala Asn Pro Ala Val 325 330 335
Pro Trp Gly Gin Gly Val Glu Ile Glu Arg Ala Leu Lys Gin Val Gin 340 345 350
Val Glu Gly Leu Ser Gly Asn Ile Lys Phe Asp Gin Asn Gly Lys Arg 355 360 365
Ile Asn Tyr Thr Ile Asn Ile Met Glu Leu Lys Thr Asn Gly Pro Arg 370 375 380 Lys Ile Gly Tyr Trp Ser Glu Val Asp Lys Met Val Val Thr Leu Thr 385 390 395 400
Glu Leu Pro Ser Gly Asn Asp Thr Ser Gly Leu Glu Asn Lys Thr Val 405 410 415
Val Val Thr Thr Ile Leu Glu Ser Pro Tyr Val Met Met Lys Lys Asn 420 425 430
His Glu Met Leu Glu Gly Asn Glu Arg Tyr Glu Gly Tyr Cys Val Asp 435 440 445
Leu Ala Ala Glu Ile Ala Lys His Cys Gly Phe Lys Tyr Lys Leu Thr 450 455 460
Ile Val Gly Asp Gly Lys Tyr Gly Ala Arg Asp Ala Asp Thr Lys Ile 465 470 475 480
Trp Asn Gly Met Val Gly Glu Leu Val Tyr Gly Lys Ala Asp Ile Ala 485 490 495
Ile Ala Pro Leu Thr Ile Thr Leu Val Arg Glu Glu Val Ile Asp Phe 500 505 510
Ser Lys Pro Phe Met Ser Leu Gly Ile Ser Ile Met Ile Lys Lys Pro 515 520 525
Gin Lys Ser Lys Pro Gly Val Phe Ser Phe Leu Asp Pro Leu Ala Tyr 530 535 540
Glu Ile Trp Met Cys Ile Val Phe Ala Tyr Ile Gly Val Ser Val Val 545 550 555 560
Leu Phe Leu Val Ser Arg Phe Ser Pro Tyr Glu Trp His Thr Glu Glu 565 570 575
Phe Glu Asp Gly Arg Glu Thr Gin Ser Ser Glu Ser Thr Asn Glu Phe 580 ' 585 590
Gly Ile Phe Asn Ser Leu Trp Phe Ser Leu Gly Ala Phe Met Arg Gin 595 600 605
Gly Cys Asp Ile Ser Pro Arg Ser Leu Ser Gly Arg Ile Val Gly Gly 610 615 620
Val Trp Trp Phe Phe Thr Leu Ile Ile Ile Ser Ser Tyr Thr Ala Asn 625 630 635 640
Leu Ala Ala Phe Leu Thr Val Glu Arg Met Val Ser Pro Ile Glu Ser 645 . 650 655
Ala Glu Asp Leu Ser Lys Gin Thr Glu Ile Ala Tyr Gly Thr Leu Asp 660 665 670
Ser Gly Ser Thr Lys Glu Phe Phe Arg Arg Ser Lys Ile Ala Val Phe 675 680 685 Asp Lys Met Trp Thr Tyr Met Arg Ser Ala Glu Pro Ser Val Phe Val 690 695 700
Arg Thr Thr Ala Glu Gly Val Ala Arg Val Arg Lys Ser Lys Gly Lys 705 710 715 720
Tyr Ala Tyr Leu Leu Glu Ser Thr Met Asn Glu Tyr Ile Glu Gin Arg 725 730 735
Lys Pro Cys Asp Thr Met Lys Val Gly Gly Asn Leu Asp Ser Lys Gly 740 745 750
Tyr Gly Ile Ala Thr Pro Lys Gly Ser Ser Leu Gly Thr Pro Val Asn 755 760 765
Leu Ala Val Leu Lys Leu Ser Glu Gin Gly Val Leu Asp Lys Leu Lys 770 775 780
Asn Lys Trp Trp Tyr Asp Lys Gly Glu Cys Gly Ala Lys Asp Ser Gly 785 790 795 800
Ser Lys Glu Lys Thr Ser Ala Leu Ser Leu Ser Asn Val Ala Gly Val 805 810 815
Phe Tyr Ile Leu Val Gly Gly Leu Gly Leu Ala Met Leu Val Ala Leu 820 825 830
Ile Glu Phe Cys Tyr Lys Ser Arg Ala Glu Ala Lys Arg Met Lys Val 835 840 845
Ala Lys Asn Ala Gin Asn Ile Asn Pro Ser Ser Ser Gin Asn Ser Gin 850 855 860
Asn Phe Ala Thr Tyr Lys Glu Gly Tyr Asn Val Tyr Gly Ile Glu Ser 865 870 875 880
Val Lys Ile
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 7:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 2955 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: cDNS zu mRNS
(vi) URSPRÜNGLICHE HERKUNFT:
(A) ORGANISMUS: Homo sapiens (D) ENTWICKLUNGSSTADIUM: adult (F) GEWEBETYP: Gehirn (ix) MERKMALE :
(A) NAME /SCHLÜSSEL : CDS
(B) LAGE : 28 . - 2676
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 7:
TTTGTCGACG CTCTACTTTT CTTGGAA ATG CAA AAG ATT ATG CAT GTT TCT 51
Met Gin Lys Ile Met His Val Ser 1 5
GTC CTC CTT TCT CCT GTT TTA TGG GGA CTG ATT TTT GGT GTC TCT TCT 99 Val Leu Leu Ser Pro Val Leu Trp Gly Leu Ile Phe Gly Val Ser Ser 10 15 20
AAC AGC ATA CAG ATA GGG GGG CTA TTT CCT AGG GGC GCC GAT CAA GAA 147 Asn Ser Ile Gin Ile Gly Gly Leu Phe Pro Arg Gly Ala Asp Gin Glu 25 30 35 40
TAC AGT GCA TTT CGA GTA GGG ATG GTT CAG TTT TCC ACT TCG GAG TTC 195 Tyr Ser Ala Phe Arg Val Gly Met Val Gin Phe Ser Thr Ser Glu Phe 45 50 55
AGA CTG ACA CCC CAC ATC GAC AAT TTG GAG GTG GCA AAC AGC TTC GCA 243 Arg Leu Thr Pro His Ile Asp Asn Leu Glu Val Ala Asn Ser Phe Ala 60 65 70
GTC ACT AAT GCT TTC TGC TCC CAG TTT TCG AGA GGA GTC TAT GCT ATT 291 Val Thr Asn Ala Phe Cys Ser Gin Phe Ser Arg Gly Val Tyr Ala Ile 75 80 85
TTT GGA TTT TAT GAC AAG AAG TCT GTA AAT ACC ATC ACA TCA TTT TGC 339 Phe Gly Phe Tyr Asp Lys Lys Ser Val Asn Thr Ile Thr Ser Phe Cys 90 95 100
GGA ACA CTC CAC GTC TCC TTC ATC ACT CCC AGC TTC CCA ACA GAT GGC 387 Gly Thr Leu His Val Ser Phe Ile Thr Pro Ser Phe Pro Thr Asp Gly 105 110 115 120
ACA CAT CCA TTT GTC ATT CAG ATG AGA CCC GAC CTC AAA GGA GCT CTC 435 Thr His Pro Phe Val Ile Gin Met Arg Pro Asp Leu Lys Gly Ala Leu 125 130 135
CTT AGC TTG ATT GAA TAC TAT CAA TGG GAC AAG TTT GCA TAC CTC TAT 483 Leu Ser Leu Ile Glu Tyr Tyr Gin Trp Asp Lys Phe Ala Tyr Leu Tyr 140 145 150
GAC AGT GAC AGA GGC TTA TCA ACA CTG CAA GCT GTG CTG GAT TCT GCT 531 Asp Ser Asp Arg Gly Leu Ser Thr Leu Gin Ala Val Leu Asp Ser Ala 155 160 165
GCT GAA AAG AAA TGG CAA GTG ACT GCT ATC AAT GTG GGA AAC ATT AAC 579 Ala Glu Lys Lys Trp Gin Val Thr Ala Ile Asn Val Gly Asn Ile Asn 170 175 180 AAT GAC AAG AAA GAT GAG ATG TAC CGA TCA CTT TTT CAA GAT CTG GAG 627 Asn Asp Lys Lys Asp Glu Met Tyr Arg Ser Leu Phe Gin Asp Leu Glu
185 190 195 200
TTA AAA AAG GAA CGG CGT GTA ATT CTG GAC TGT GAA AGG GAT AAA GTA 675
Leu Lys Lys Glu Arg Arg Val Ile Leu Asp Cys Glu Arg Asp Lys Val
205 210 215
AAC GAC ATT GTA GAC CAG GTT ATT ACC ATT GGA AAA CAC GTT AAA GGG 723
Asn Asp Ile Val Asp Gin Val Ile Thr Ile Gly Lys His Val Lys Gly
220 225 230
TAC CAC TAC ATC ATT GCA AAT CTG GGA TTT ACT GAT GGA GAC CTA TTA 771
Tyr His Tyr Ile Ile Ala Asn Leu Gly Phe Thr Asp Gly Asp Leu Leu 235 240 245
AAA ATC CAG TTT GGA GGT GCA AAT GTC TCT GGA TTT CAG ATA GTG GAC 819
Lys Ile Gin Phe Gly Gly Ala Asn Val Ser Gly Phe Gin Ile Val Asp 250 255 260
TAT GAT GAT TCG TTG GTA TCT AAA TTT ATA GAA AGA TGG TCA ACA CTG 867
Tyr Asp Asp Ser Leu Val Ser Lys Phe Ile Glu Arg Trp Ser Thr Leu
265 270 275 280
GAA GAA AAA GAA TAC CCT GGA GCT CAC ACA ACA ACA ATT AAG TAT ACT 915
Glu Glu Lys Glu Tyr Pro Gly Ala His Thr Thr Thr Ile Lys Tyr Thr
285 290 295
TCT GCT CTG ACC TAT GAT GCC GTT CAA GTG ATG ACT GAA GCC TTC CGC 963
Ser Ala Leu Thr Tyr Asp Ala Val Gin Val Met Thr Glu Ala Phe Arg
300 305 310
AAC CTA AGG AAG CAA AGA ATT GAA ATC TCC CGA AGG GGG AAT GCA GGA 1011
Asn Leu Arg Lys Gin Arg Ile Glu Ile Ser Arg Arg Gly Asn Ala Gly 315 320 325
GAC TGT CTG GCA AAC CCA GCA GTG CCC TGG GGA CAA GGT GTA GAA ATA 1059
Asp Cys Leu Ala Asn Pro Ala Val Pro Trp Gly Gin Gly Val Glu Ile 330 335 340
GAA AGG GCC CTC AAA CAG GTT CAG GTT GAA GGT CTC TCA GGA AAT ATA 1107
Glu Arg Ala Leu Lys Gin Val Gin Val Glu Gly Leu Ser Gly Asn Ile
345 350 355 360
AAG TTT GAC CAG AAT GGA AAA AGA ATA AAC TAT ACA ATT AAC ATC ATG 1155
Lys Phe Asp Gin Asn Gly Lys Arg Ile Asn Tyr Thr Ile Asn Ile Met
365 370 375
GAG CTC AAA ACT AAT GGG CCC CGG AAG ATT GGC TAC TGG AGT GAA GTG 1203
Glu Leu Lys Thr Asn Gly Pro Arg Lys Ile Gly Tyr Trp Ser Glu Val
380 385 390 GAC AAA ATG GTT GTT ACC CTT ACT GAG CTC CCT TCT GGA AAT GAC ACC 1251
Asp Lys Met Val Val Thr Leu Thr Glu Leu Pro Ser Gly Asn Asp Thr 395 400 405
TCT GGG CTT GAG AAT AAG ACT GTT GTT GTC ACC ACA ATT TTG GAA TCT 1299 Ser Gly Leu Glu Asn Lys Thr Val Val Val Thr Thr Ile Leu Glu Ser 410 415 420
CCG TAT GTT ATG ATG AAG AAA AAT CAT GAA ATG CTT GAA GGC AAT GAG 1347 Pro Tyr Val Met Met Lys Lys Asn His Glu Met Leu Glu Gly Asn Glu 425 430 435 440
CGC TAT GAG GGC TAC TGT GTT GAC CTG GCT GCA GAA ATC GCC AAA CAT 1395 Arg Tyr Glu Gly Tyr Cys Val Asp Leu Ala Ala Glu Ile Ala Lys His 445 450 455
TGT GGG TTC AAG TAC AAG TTG ACA ATT GTT GGT GAT GGC AAG TAT GGG 1443 Cys Gly Phe Lys Tyr Lys Leu Thr Ile Val Gly Asp Gly Lys Tyr Gly 460 465 470
GCC AGG GAT GCA GAC ACG AAA ATT TGG AAT GGG ATG GTT GGA GAA CTT 1491 Ala Arg Asp Ala Asp Thr Lys Ile Trp Asn Gly Met Val Gly Glu Leu 475 480 485
GTA TAT GGG AAA GCT GAT ATT GCA ATT GCT CCA TTA ACT ATT ACC CTT 1539 Val Tyr Gly Lys Ala Asp Ile Ala Ile Ala Pro Leu Thr Ile Thr Leu 490 495 500
GTG AGA GAA GAG GTG ATT GAC TTC TCA AAG CCC TTC ATG AGC CTC GGG 1587 Val Arg Glu Glu Val Ile Asp Phe Ser Lys Pro Phe Met Ser Leu Gly 505 510 515 520
ATA TCT ATC ATG ATC AAG AAG CCT CAG AAG TCC AAA CCA GGA GTG TTT 1635 Ile Ser Ile Met Ile Lys Lys Pro Gin Lys Ser Lys Pro Gly Val Phe 525 530 535
TCC TTT CTT GAT CCT TTA GCC TAT GAG ATC TGG ATG TGC ATT GTT TTT 1683 Ser Phe Leu Asp Pro Leu Ala Tyr Glu Ile Trp Met Cys Ile Val Phe 540 545 550
GCC TAC ATT GGG GTC AGT GTA GTT TTA TTC CTG GTC AGC AGA TTT AGC 1731 Ala Tyr Ile Gly Val Ser Val Val Leu Phe Leu Val Ser Arg Phe Ser 555 560 565
CCC TAC GAG TGG CAC ACT GAG GAG TTT GAA GAT GGA AGA GAA ACA CAA 1779 Pro Tyr Glu Trp His Thr Glu Glu Phe Glu Asp Gly Arg Glu Thr Gin 570 575 580
AGT AGT GAA TCA ACT AAT GAA TTT GGG ATT TTT AAT AGT CTC TGG TTT 1827 Ser Ser Glu Ser Thr Asn Glu Phe Gly Ile Phe Asn Ser Leu Trp Phe 585 590 595 600 TCC TTG GGT GCC TTT ATG CGG CAA GGA TGC GAT ATT TCG CCA AGA TCC 1875 Ser Leu Gly Ala Phe Met Arg Gin Gly Cys Asp Ile Ser Pro Arg Ser 605 610 615
CTC TCT GGG CGC ATT GTT GGA GGT GTG TGG TGG TTC TTT ACC CTG ATC 1923 Leu Ser Gly Arg Ile Val Gly Gly Val Trp Trp Phe Phe Thr Leu Ile 620 625 630
ATA ATC TCC TCC TAC ACG GCT AAC TTA GCT GCC TTC CTG ACT GTA GAG 1971 Ile Ile Ser Ser Tyr Thr Ala Asn Leu Ala Ala Phe Leu Thr Val Glu 635 640 645
AGG ATG GTG TCT CCC ATC GAA AGT GCT GAG GAT CTT TCT AAG CAA ACA 2019 Arg Met Val Ser Pro Ile Glu Ser Ala Glu Asp Leu Ser Lys Gin Thr 650 655 660
GAA ATT GCT TAT GGA ACA TTA GAC TCT GGC TCC ACT AAA GAG TTT TTC 2067 Glu Ile Ala Tyr Gly Thr Leu Asp Ser Gly Ser Thr Lys Glu Phe Phe 665 670 675 680
AGG AGA TCT AAA ATT GCA GTG TTT GAT AAA ATG TGG ACC TAC ATG CGG 2115 Arg Arg Ser Lys Ile Ala Val Phe Asp Lys Met Trp Thr Tyr Met Arg 685 690 695
AGT GCG GAG CCC TCT GTG TTT GTG AGG ACT ACG GCC GAA GGG GTG GCT 2163 Ser Ala Glu Pro Ser Val Phe Val Arg Thr Thr Ala Glu Gly Val Ala 700 705 710
AGA GTG CGG AAG TCC AAA GGG AAA TAT GCC TAC TTG TTG GAG TCC ACG 2211 Arg Val Arg Lys Ser Lys Gly Lys Tyr Ala Tyr Leu Leu Glu Ser Thr 715 720 725
ATG AAC GAG TAC ATT GAG CAA AGG AAG CCT TGC GAC ACC ATG AAA GTT 2259 Met Asn Glu Tyr. Ile Glu Gin Arg Lys Pro Cys Asp Thr Met Lys Val 730 735 740
GGT GGA AAC CTG GAT TCC AAA GGC TAT GGC ATC GCA ACA CCT AAA GGA 2307 Gly Gly Asn Leu Asp Ser Lys Gly Tyr Gly Ile Ala Thr Pro Lys Gly 745 750 755 760
TCC TCA TTA AGA AAT GCG GTT AAC CTC GCA GTA CTA AAA CTG AAT GAA 2355 Ser Ser Leu Arg Asn Ala Val Asn Leu Ala Val Leu Lys Leu Asn Glu 765 770 775
CAA GGC CTG TTG GAC AAA TTG AAA AAC AAA TGG TGG TAC GAC AAA GGA 2403 Gin Gly Leu Leu Asp Lys Leu Lys Asn Lys Trp Trp Tyr Asp Lys Gly 780 785 790
GAG TGC GGC AGC GGG GGA GGT GAT TCC AAG GAA AAG ACC AGT GCC CTC 2451 Glu Cys Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ser Lys Glu Lys Thr Ser Ala Leu 795 800 805 AGT CTG AGC AAC GTT GCT GGA GTA TTC TAC ATC CTT GTC GGG GGC CTT 2499 Ser Leu Ser Asn Val Ala Gly Val Phe Tyr Ile Leu Val Gly Gly Leu 810 815 820
GGT TTG GCA ATG CTG GTG GCT TTG ATT GAG TTC TGT TAC AAG TCA AGG 2547 Gly Leu Ala Met Leu Val Ala Leu Ile Glu Phe Cys Tyr Lys Ser Arg 825 830 835 840
GCC GAG GCG AAA CGA ATG AAG GTG GCA AAG AAT GCA CAG AAT ATT AAC 2595 Ala Glu Ala Lys Arg Met Lys Val Ala Lys Asn Ala Gin Asn Ile Asn 845 850 855
CCA TCT TCC TCG CAG AAT TCA CAG AAT TTT GCA ACT TAT AAG GAA GGT 2643 Pro Ser Ser Ser Gin Asn Ser Gin Asn Phe Ala Thr Tyr Lys Glu Gly 860 865 870
TAC AAC GTA TAT GGC ATC GAA AGT GTT AAA ATT TAGGGGATGA CCTTGAAATG 2696 Tyr Asn Val Tyr Gly Ile Glu Ser Val Lys Ile 875 880
ATGCCATGAG GAACAAGGCA AGGCTGTCAA TTACAGGAAG TACTGGAGAA AATGGACGTG 2756
TTATGACTCC AGAATTTCCC AAAGCAGTGC ATGCTGTCCC TTACGTGAGT CCTGGCATGG 2816
GAATGAATGT CAGTGTGACT GATCTCTCGT GATTGATAAG AACCTTTTGA GTGCCTTACA 2876
CAATGGTTTT CTTGTGTTTA TTGTCAAAGT GGTGAGAGGC ATCCAGTATC TTGAAGACTT 2936
TTCTTTCAGC CAAGAATTC 2955
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 8:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 883 Aminosäuren
(B) ART: Aminosäure (D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: Protein
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 8:
Met Gin Lys Ile Met His Val Ser Val Leu Leu Ser Pro Val Leu Trp 1 5 10 15
Gly Leu Ile Phe Gly Val Ser Ser Asn Ser Ile Gin Ile Gly Gly Leu 20 25 30
Phe Pro Arg Gly Ala Asp Gin Glu Tyr Ser Ala Phe Arg Val Gly Met 35 40 45
Val Gin Phe Ser Thr Ser Glu Phe Arg Leu Thr Pro His Ile Asp Asn 50 55 60
Leu Glu Val Ala Asn Ser Phe Ala Val Thr Asn Ala Phe Cys Ser Gin 65 70 75 80 Phe Ser Arg Gly Val Tyr Ala Ile Phe Gly Phe Tyr Asp Lys Lys Ser 85 90 95
Val Asn Thr Ile Thr Ser Phe Cys Gly Thr Leu His Val Ser Phe Ile 100 105 110
Thr Pro Ser Phe Pro Thr Asp Gly Thr His Pro Phe Val Ile Gin Met 115 120 125
Arg Pro Asp Leu Lys Gly Ala Leu Leu Ser Leu Ile Glu Tyr Tyr Gin 130 135 140
Trp Asp Lys Phe Ala Tyr Leu Tyr Asp Ser Asp Arg Gly Leu Ser Thr 145 150 155 160
Leu Gin Ala Val Leu Asp Ser Ala Ala Glu Lys Lys Trp Gin Val Thr 165 170 175
Ala Ile Asn Val Gly Asn Ile Asn Asn Asp Lys Lys Asp Glu Met Tyr 180 185 190
Arg Ser Leu Phe Gin Asp Leu Glu Leu Lys Lys Glu Arg Arg Val Ile 195 200 205
Leu Asp Cys Glu Arg Asp Lys Val Asn Asp Ile Val Asp Gin Val Ile 210 215 220
Thr Ile Gly Lys His Val Lys Gly Tyr His Tyr Ile Ile Ala Asn Leu 225 230 235 240
Gly Phe Thr Asp Gly Asp Leu Leu Lys Ile Gin Phe Gly Gly Ala Asn 245 250 255
Val Ser Gly Phe Gin Ile Val Asp Tyr Asp Asp Ser Leu Val Ser Lys 260 265 270
Phe Ile Glu Arg Trp Ser Thr Leu Glu Glu Lys Glu Tyr Pro Gly Ala 275 280 285
His Thr Thr Thr Ile Lys Tyr Thr Ser Ala Leu Thr Tyr Asp Ala Val 290 295 300
Gin Val Met Thr Glu Ala Phe Arg Asn Leu Arg Lys Gin Arg Ile Glu 305 310 315 320
Ile Ser Arg Arg Gly Asn Ala Gly Asp Cys Leu Ala Asn Pro Ala Val 325 330 335
Pro Trp Gly Gin Gly Val Glu Ile Glu Arg Ala Leu Lys Gin Val Gin 340 345 350
Val Glu Gly Leu Ser Gly Asn Ile Lys Phe Asp Gin Asn Gly Lys Arg 355 360 365
Ile Asn Tyr Thr Ile Asn Ile Met Glu Leu Lys Thr Asn Gly Pro Arg 370 375 380 Lys Ile Gly Tyr Trp Ser Glu Val Asp Lys Met Val Val Thr Leu Thr 385 390 395 400
Glu Leu Pro Ser Gly Asn Asp Thr Ser Gly Leu Glu Asn Lys Thr Val 405 410 415
Val Val Thr Thr Ile Leu Glu Ser Pro Tyr Val Met Met Lys Lys Asn 420 425 430
His Glu Met Leu Glu Gly Asn Glu Arg Tyr Glu Gly Tyr Cys Val Asp 435 440 445
Leu Ala Ala Glu Ile Ala Lys His Cys Gly Phe Lys Tyr Lys Leu Thr 450 455 460
Ile Val Gly Asp Gly Lys Tyr Gly Ala Arg Asp Ala Asp Thr Lys Ile 465 470 475 480
Trp Asn Gly Met Val Gly Glu Leu Val Tyr Gly Lys Ala Asp Ile Ala 485 490 495
Ile Ala Pro Leu Thr Ile Thr Leu Val Arg Glu Glu Val Ile Asp Phe 500 505 510
Ser Lys Pro Phe Met Ser Leu Gly Ile Ser Ile Met Ile Lys Lys Pro 515 520 525
Gin Lys Ser Lys Pro Gly Val Phe Ser Phe Leu Asp Pro Leu Ala Tyr 530 535 540
Glu Ile Trp Met Cys Ile Val Phe Ala Tyr Ile Gly Val Ser Val Val 545 550 555 560
Leu Phe Leu Val Ser Arg Phe Ser Pro Tyr Glu Trp His Thr Glu Glu 565 570 575
Phe Glu Asp Gly Arg Glu Thr Gin Ser Ser Glu Ser Thr Asn Glu Phe 580 585 590
Gly Ile Phe Asn Ser Leu Trp Phe Ser Leu Gly Ala Phe Met Arg Gin 595 600 605
Gly Cys Asp Ile Ser Pro Arg Ser Leu Ser Gly Arg Ile Val Gly Gly 610 615 620
Val Trp Trp Phe Phe Thr Leu Ile Ile Ile Ser Ser Tyr Thr Ala Asn 625 630 635 640
Leu Ala Ala Phe Leu Thr Val Glu Arg Met Val Ser Pro Ile Glu Ser 645 650 655
Ala Glu Asp Leu Ser Lys Gin Thr Glu Ile Ala Tyr Gly Thr Leu Asp 660 665 670
Ser Gly Ser Thr Lys Glu Phe Phe Arg Arg Ser Lys Ile Ala Val Phe 675 680 685 Asp Lys Met Trp Thr Tyr Met Arg Ser Ala Glu Pro Ser Val Phe Val 690 695 700
Arg Thr Thr Ala Glu Gly Val Ala Arg Val Arg Lys Ser Lys Gly Lys 705 710 715 720
Tyr Ala Tyr Leu Leu Glu Ser Thr Met Asn Glu Tyr Ile Glu Gin Arg 725 730 735
Lys Pro Cys Asp Thr Met Lys Val Gly Gly Asn Leu Asp Ser Lys Gly 740 745 750
Tyr Gly Ile Ala Thr Pro Lys Gly Ser Ser Leu Arg Asn Ala Val Asn 755 760 765
Leu Ala Val Leu Lys Leu Asn Glu Gin Gly Leu Leu Asp Lys Leu Lys 770 775 780
Asn Lys Trp Trp Tyr Asp Lys Gly Glu Cys Gly Ser Gly Gly Gly Asp 785 790 795 800
Ser Lys Glu Lys Thr Ser Ala Leu Ser Leu Ser Asn Val Ala Gly Val 805 810 815
Phe Tyr Ile Leu Val Gly Gly Leu Gly Leu Ala Met Leu Val Ala Leu 820 825 830
Ile Glu Phe Cys Tyr Lys Ser Arg Ala Glu Ala Lys Arg Met Lys Val 835 840 845
Ala Lys Asn Ala Gin Asn Ile Asn Pro Ser Ser Ser Gin Asn Ser Gin 850 855 860
Asn Phe Ala Thr Tyr Lys Glu Gly Tyr Asn Val Tyr Gly Ile Glu Ser 865 870 875 880
Val Lys Ile
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 9:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 2989 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: cDNS zu mRNS
(vi) URSPRÜNGLICHE HERKUNFT:
(A) ORGANISMUS: Homo sapiens (D) ENTWICKLUNGSSTADIUM: adult (F) GEWEBETYP: Gehirn ( ix) MERKMALE :
(A) NAME/SCHLÜSSEL: CDS
(B) LAGE: 73..2736
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 9:
CTGACGACTC CTGAGTTGCG CCCATGCTCT TGTCAGCTTC GTTTTAGGCG TAGCATGGCC 60
AGGCAGAAGA AA ATG GGG CAA AGC GTG CTC CGG GCG GTC TTC TTT TTA 108
Met Gly Gin Ser Val Leu Arg Ala Val Phe Phe Leu 1 5 10
GTC CTG GGG CTT TTG GGT CAT TCT CAC GGA GGA TTC CCC AAC ACC ATC 156 Val Leu Gly Leu Leu Gly His Ser His Gly Gly Phe Pro Asn Thr Ile 15 20 25
AGC ATA GGT GGA CTT TTC ATG AGA AAC ACA GTG CAG GAG CAC AGC GCT 204 Ser Ile Gly Gly Leu Phe Met Arg Asn Thr Val Gin Glu His Ser Ala 30 35 40
TTC CGC TTT GCC GTG CAG TTA TAC AAC ACC AAC CAG AAC ACC ACC GAG 252 Phe Arg Phe Ala Val Gin Leu Tyr Asn Thr Asn Gin Asn Thr Thr Glu 45 50 55 60
AAG CCC TTC CAT TTG AAT TAC CAC GTA GAT CAC TTG GAT TCC TCC AAT 300 Lys Pro Phe His Leu Asn Tyr His Val Asp His Leu Asp Ser Ser Asn 65 70 75
AGT TTT TCC GTG ACA AAT GCT TTC TGC TCC CAG TTC TCG AGA GGG GTG 348 Ser Phe Ser Val Thr Asn Ala Phe Cys Ser Gin Phe Ser Arg Gly Val 80 85 90
TAT GCC ATC TTT GGA TTC TAT GAC CAG ATG TCA ATG AAC ACC CTG ACC 396 Tyr Ala Ile Phe Gly Phe Tyr Asp Gin Met Ser Met Asn Thr Leu Thr 95 100 105
TCC TTC TGT GGG GCC CTG CAC ACA TCC TTT GTT ACG CCT AGC TTC CCC 444 Ser Phe Cys Gly Ala Leu His Thr Ser Phe Val Thr Pro Ser Phe Pro 110 115 120
ACT GAC GCA GAT GTG CAG TTT GTC ATC CAG ATG CGC CCA GCC TTG AAG 492 Thr Asp Ala Asp Val Gin Phe Val Ile Gin Met Arg Pro Ala Leu Lys 125 130 135 140
GGC GCT ATT CTG AGT CTT CTG GGT CAT TAC AAG TGG GAG AAG TTT GTG 540 Gly Ala Ile Leu Ser Leu Leu Gly His Tyr Lys Trp Glu Lys Phe Val 145 150 155
TAC CTC TAT GAC ACA GAA CGA GGA TTT TCC ATC CTC CAA GCG ATT ATG 588 Tyr Leu Tyr Asp Thr Glu Arg Gly Phe Ser Ile Leu Gin Ala Ile Met 160 165 170
GAA GCA GCA GTG CAA AAC AAC TGG CAA GTA ACA GCA AGG TCT GTG GGA 636 Glu Ala Ala Val Gin Asn Asn Trp Gin Val Thr Ala Arg Ser Val Gly 175 180 185 AAC ATA AAG GAC GTC CAA GAA TTC AGG CGC ATC ATT GAA GAA ATG GAC 684
Asn Ile Lys Asp Val Gin Glu Phe Arg Arg Ile Ile Glu Glu Met Asp 190 195 200
AGG AGG CAG GAA AAG CGA TAC TTG ATT GAC TGC GAA GTC GAA AGG ATT 732 Arg Arg Gin Glu Lys Arg Tyr Leu Ile Asp Cys Glu Val Glu Arg Ile 205 210 215 220
AAC ACA ATT TTG GAA CAG GTT GTG ATC CTA GGG AAA CAC TCA AGA GGT 780 Asn Thr Ile Leu Glu Gin Val Val Ile Leu Gly Lys His Ser Arg Gly 225 230 235
TAT CAC TAC ATG CTC GCT AAC CTG GGT TTT ACT GAT ATT TTA CTG GAA 828 Tyr His Tyr Met Leu Ala Asn Leu Gly Phe Thr Asp Ile Leu Leu Glu 240 245 250
AGA GTC ATG CAT GGG GGA GCC AAC ATT ACA GGT TTC CAG ATT GTC AAC 876 Arg Val Met His Gly Gly Ala Asn Ile Thr Gly Phe Gin Ile Val Asn 255 260 265
AAT GAA AAC CCT ATG GTT CAG CAG TTC ATA CAG CGC TGG GTG AGG CTG 924 Asn Glu Asn Pro Met Val Gin Gin Phe Ile Gin Arg Trp Val Arg Leu 270 275 280
GAT GAA AGG GAA TTC CCT GAA .GCC AAG AAT GCA CCA CTA AAG TAT ACA 972 Asp Glu Arg Glu Phe Pro Glu Ala Lys Asn Ala Pro Leu Lys Tyr Thr 285 290 295 300
TCT GCA TTG ACA CAC GAC GCA ATA CTG GTC ATA GCA GAA GCT TTC CGC 1020 Ser Ala Leu Thr His Asp Ala Ile Leu Val Ile Ala Glu Ala Phe Arg 305 310 315
TAC CTG AGG AGG CAG CGA GTA GAT GTG TCC CGG AGA GGA AGT GCT GGA 1068 Tyr Leu Arg Arg Gin Arg Val Asp Val Ser Arg Arg Gly Ser Ala Gly 320 325 330
GAC TGC TTA GCA AAT CCT GCT GTG CCC TGG AGT CAA GGA ATT GAT ATT 1116 Asp Cys Leu Ala Asn Pro Ala Val Pro Trp Ser Gin Gly Ile Asp Ile 335 340 345
GAG AGA GCT CTG AAA ATG GTG CAA GTA CAA GGA ATG ACT GGA AAT ATT 1164 Glu Arg Ala Leu Lys Met Val Gin Val Gin Gly Met Thr Gly Asn Ile 350 355 360
CAA TTT GAC ACT TAT GGA CGT AGG ACA AAT TAT ACC ATC GAT GTG TAT 1212 Gin Phe Asp Thr Tyr Gly Arg Arg Thr Asn Tyr Thr Ile Asp Val Tyr 365 370 375 380
GAA ATG AAA GTC AGT GGC TCT CGA AAA GCT GGC TAC TGG AAC GAG TAT 1260 Glu Met Lys Val Ser Gly Ser Arg Lys Ala Gly Tyr Trp Asn Glu Tyr 385 390 395 GAA AGG TTT GTG CCT TTC TCA GAT CAG CAA ATC AGC AAT GAC AGT GCA 1308 Glu Arg Phe Val Pro Phe Ser Asp Gin Gin Ile Ser Asn Asp Ser Ala 400 405 410
TCC TCA GAG AAT CGG ACC ATA GTA GTG ACT ACC ATT CTG GAA TCA CCA 1356 Ser Ser Glu Asn Arg Thr Ile Val Val Thr Thr Ile Leu Glu Ser Pro 415 420 425
TAT GTA ATG TAC AAG AAG AAC CAT GAG CAA CTG GAA GGA AAT GAA CGA 1404 Tyr Val Met Tyr Lys Lys Asn His Glu Gin Leu Glu Gly Asn Glu Arg 430 435 440
TAT GAA GGC TAT TGT GTA GAC CTA GCC TAT GAA ATA GCC AAA CAT GTA 1452 Tyr Glu Gly Tyr Cys Val Asp Leu Ala Tyr Glu Ile Ala Lys His Val 445 450 455 460
AGG ATC AAA TAC AAA TTG TCC ATC GTT GGT GAC GGG AAA TAT GGT GCA 1500 Arg Ile Lys Tyr Lys Leu Ser Ile Val Gly Asp Gly Lys Tyr Gly Ala 465 470 475
AGG GAT CCA GAG ACT AAA ATA TGG AAC GGC ATG GTT GGG GAA CTT GTC 1548 Arg Asp Pro Glu Thr Lys Ile Trp Asn Gly Met Val Gly Glu Leu Val 480 485 490
TAT GGG AGA GCT GAT ATA GCT GTT GCT CCA CTC ACT ATA ACA TTG GTC 1596 Tyr Gly Arg Ala Asp Ile Ala Val Ala Pro Leu Thr Ile Thr Leu Val 495 500 505
CGT GAA GAA GTC ATA GAT TTT TCA AAG CCA TTC ATG AGC CTG GGC ATC 1644 Arg Glu Glu Val Ile Asp Phe Ser Lys Pro Phe Met Ser Leu Gly Ile 510 515 520
TCC ATC ATG ATA AAG AAG CCT CAG AAA TCA AAA CCA GGC GTA TTC TCA 1692 Ser Ile Met Ile Lys Lys Pro Gin Lys Ser Lys Pro Gly Val Phe Ser 525 530 535 540
TTT CTG GAT CCC CTG GCT TAT GAA ATC TGG ATG TGC ATT GTC TTT GCT 1740 Phe Leu Asp Pro Leu Ala Tyr Glu Ile Trp Met Cys Ile Val Phe Ala 545 550 555
TAC ATT GGA GTC AGC GTA GTT CTT TTC CTA GTC AGC AGG TTC AGT CCT 1788 Tyr Ile Gly Val Ser Val Val Leu Phe Leu Val Ser Arg Phe Ser Pro 560 565 570
TAT GAA TGG CAC TTG GAA GAC AAC AAT GAA GAA CCT CGT GAC CCA CAA 1836 Tyr Glu Trp His Leu Glu Asp Asn Asn Glu Glu Pro Arg Asp Pro Gin 575 580 585
AGT CCT CCT GAT CCT CCA AAT GAA TTT GGA ATA TTT AAC AGT CTT TGG 1884 Ser Pro Pro Asp Pro Pro Asn Glu Phe Gly Ile Phe Asn Ser Leu Trp 590 595 600 TTT TCC TTG GGT GCC TTT ATG CAG CAA GGA TGT GAT ATT TCT CCA AGA 1932 Phe Ser Leu Gly Ala Phe Met Gin Gin Gly Cys Asp Ile Ser Pro Arg 605 610 615 620
TCA CTC TCC GGG CGC ATT GTT GGA GGG GTT TGG TGG TTC TTC ACC CTG 1980 Ser Leu Ser Gly Arg Ile Val Gly Gly Val Trp Trp Phe Phe Thr Leu 625 630 635
ATC ATA ATT TCT TCC TAT ACT GCC AAT CTC GCT GCT TTC CTG ACT GTG 2028 Ile Ile Ile Ser Ser Tyr Thr Ala Asn Leu Ala Ala Phe Leu Thr Val 640 645 650
GAG AGG ATG GTT TCT CCC ATA GAG AGT GCT GAA GAC TTA GCT AAA CAG 2076 Glu Arg Met Val Ser Pro Ile Glu Ser Ala Glu Asp Leu Ala Lys Gin 655 660 665
ACT GAA ATT GCA TAT GGG ACC CTG GAC TCC GGT TCA ACA AAA GAA TTT 2124 Thr Glu Ile Ala Tyr Gly Thr Leu Asp Ser Gly Ser Thr Lys Glu Phe 670 675 680
TTC AGA AGA TCC AAA ATT GCT GTG TAC GAG AAA ATG TGG TCT TAC ATG 2172 Phe Arg Arg Ser Lys Ile Ala Val Tyr Glu Lys Met Trp Ser Tyr Met 685 690 695 700
AAA TCA GCG GAG CCA TCT GTG TTT ACC AAA ACA ACA GCA GAC GGA GTG 2220 Lys Ser Ala Glu Pro Ser Val Phe Thr Lys Thr Thr Ala Asp Gly Val 705 710 715
GCC CGA GTG CGA AAG TCC AAG GGA AAG TTC GCC TTC CTG CTG GAG TCA 2268 Ala Arg Val Arg Lys Ser Lys Gly Lys Phe Ala Phe Leu Leu Glu Ser 720 725 730
ACC ATG AAT GAG TAC ATT GAG CAG AGA AAA CCA TGT GAT ACG ATG AAA 2316 Thr Met Asn Glu Tyr Ile Glu Gin Arg Lys Pro Cys Asp Thr Met Lys 735 740 745
GTT GGT GGA AAT CTG GAT TCC AAA GGC TAT GGT GTG GCA ACC CCT AAA 2364 Val Gly Gly Asn Leu Asp Ser Lys Gly Tyr Gly Val Ala Thr Pro Lys 750 755 760
GGC TCA GCA TTA GGA ACG CCT GTA AAC CTT GCA GTA TTG AAA CTC AGT 2412 Gly Ser Ala Leu Gly Thr Pro Val Asn Leu Ala Val Leu Lys Leu Ser 765 770 775 780
GAA CAA GGC ATC TTA GAC AAG CTG AAA AAC AAA TGG TGG TAC GAT AAG 2460 Glu Gin Gly Ile Leu Asp Lys Leu Lys Asn Lys Trp Trp Tyr Asp Lys 785 790 795
GGG GAA TGT GGA GCC AAG GAC TCC GGG AGT AAG GAC AAG ACC AGC GCT 2508 Gly Glu Cys Gly Ala Lys Asp Ser Gly Ser Lys Asp Lys Thr Ser Ala 800 805 810 CTG AGC CTG AGC AAT GTG GCA GGC GTT TTC TAT ATA CTT GTC GGA GGT 2556 Leu Ser Leu Ser Asn Val Ala Gly Val Phe Tyr Ile Leu Val Gly Gly 815 820 825
CTG GGG CTG GCC ATG ATG GTG GCT TTG ATA GAA TTC TGT TAC AAA TCA 2604 Leu Gly Leu Ala Met Met Val Ala Leu Ile Glu Phe Cys Tyr Lys Ser 830 835 840
CGG GCA GAG TCC AAA CGC ATG AAA CTC ACA AAG AAC ACC CAA AAC TTT 2652 Arg Ala Glu Ser Lys Arg Met Lys Leu Thr Lys Asn Thr Gin Asn Phe 845 850 855 860
AAG CCT GCT CCT GCC ACC AAC ACT CAG AAT TAT GCT ACA TAC AGA GAA 2700 Lys Pro Ala Pro Ala Thr Asn Thr Gin Asn Tyr Ala Thr Tyr Arg Glu 865 870 875
GGC TAC AAC GTG TAT GGA ACA GAG AGT GTT AAG ATC TAGGGATCCC 2746
Gly Tyr Asn Val Tyr Gly Thr Glu Ser Val Lys Ile 880 885
TTCCCACTGG AGGCATGTGA TGAGAGGAAA TCACCGAAAA CGTGGCTGCT TCAAGGATCC 2806
TGAGCCAGAT TTCACTCTCC TTGGTGTCGG GCATGACACG AATATTGCTG ATGGTGCAAT 2866
GACCTTTCAA TAGGAAAAAC TGGTTTTTTT TTCCTTCAGT GCCTTATGGA ACACTCTGAG 2926
ACTCGCGACA ATGCAAACCA TCATTGAAAT CTTTTTGCTT TGCTTGAAAA AAAAAAAAAA 2986
AAA 2989
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 10:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 888 Aminosäuren
(B) ART: Aminosäure (D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: Protein
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 10:
Met Gly Gin Ser Val Leu Arg Ala Val Phe Phe Leu Val Leu Gly Leu 1 5 10 15
Leu Gly His Ser His Gly Gly Phe Pro Asn Thr Ile Ser Ile Gly Gly 20 25 30
Leu Phe Met Arg Asn Thr Val Gin Glu His Ser Ala Phe Arg Phe Ala 35 40 45
Val Gin Leu Tyr Asn Thr Asn Gin Asn Thr Thr Glu Lys Pro Phe His 50 55 60
Leu Asn Tyr His Val Asp His Leu Asp Ser Ser Asn Ser Phe Ser Val 65 70 75 80 Thr Asn Ala Phe Cys Ser Gin Phe Ser Arg Gly Val Tyr Ala Ile Phe 85 90 95
Gly Phe Tyr Asp Gin Met Ser Met Asn Thr Leu Thr Ser Phe Cys Gly 100 105 110
Ala Leu His Thr Ser Phe Val Thr Pro Ser Phe Pro Thr Asp Ala Asp 115 120 125
Val Gin Phe Val Ile Gin Met Arg Pro Ala Leu Lys Gly Ala Ile Leu 130 135 140
Ser Leu Leu Gly His Tyr Lys Trp Glu Lys Phe Val Tyr Leu Tyr Asp 145 150 155 160
Thr Glu Arg Gly Phe Ser Ile Leu Gin Ala Ile Met Glu Ala Ala Val 165 170 175
Gin Asn Asn Trp Gin Val Thr Ala Arg Ser Val Gly Asn Ile Lys Asp 180 185 190
Val Gin Glu Phe Arg Arg Ile Ile Glu Glu Met Asp Arg Arg Gin Glu 195 200 205
Lys Arg Tyr Leu Ile Asp Cys Glu Val Glu Arg Ile Asn Thr Ile Leu 210 215 220
Glu Gin Val Val Ile Leu Gly Lys His Ser Arg Gly Tyr His Tyr Met 225 230 235 240
Leu Ala Asn Leu Gly Phe Thr Asp Ile Leu Leu Glu Arg Val Met His 245 250 255
Gly Gly Ala Asn Ile Thr Gly Phe Gin Ile Val Asn Asn Glu Asn Pro 260 265 270
Met Val Gin Gin Phe Ile Gin Arg Trp Val Arg Leu Asp Glu Arg Glu 275 280 285
Phe Pro Glu Ala Lys Asn Ala Pro Leu Lys Tyr Thr Ser Ala Leu Thr 290 295 300
His Asp Ala Ile Leu Val Ile Ala Glu Ala Phe Arg Tyr Leu Arg Arg 305 310 315 320
Gin Arg Val Asp Val Ser Arg Arg Gly Ser Ala Gly Asp Cys Leu Ala 325 330 335
Asn Pro Ala Val Pro Trp Ser Gin Gly Ile Asp Ile Glu Arg Ala Leu 340 345 350
Lys Met Val Gin Val Gin Gly Met Thr Gly Asn Ile Gin Phe Asp Thr 355 360 365
Tyr Gly Arg Arg Thr Asn Tyr Thr Ile Asp Val Tyr Glu Met Lys Val 370 375 380 Ser Gly Ser Arg Lys Ala Gly Tyr Trp Asn Glu Tyr Glu Arg Phe Val 385 390 395 400
Pro Phe Ser Asp Gin Gin Ile Ser Asn Asp Ser Ala Ser Ser Glu Asn 405 410 415
Arg Thr Ile Val Val Thr Thr Ile Leu Glu Ser Pro Tyr Val Met Tyr 420 425 430
Lys Lys Asn His Glu Gin Leu Glu Gly Asn Glu Arg Tyr Glu Gly Tyr 435 440 445
Cys Val Asp Leu Ala Tyr Glu Ile Ala Lys His Val Arg Ile Lys Tyr 450 455 460
Lys Leu Ser Ile Val Gly Asp Gly Lys Tyr Gly Ala Arg Asp Pro Glu 465 470 475 480
Thr Lys Ile Trp Asn Gly Met Val Gly Glu Leu Val Tyr Gly Arg Ala 485 490 495
Asp Ile Ala Val Ala Pro Leu Thr Ile Thr Leu Val Arg Glu Glu Val 500 505 510
Ile Asp Phe Ser Lys Pro Phe Met Ser Leu Gly Ile Ser Ile Met Ile 515 520 525
Lys Lys Pro Gin Lys Ser Lys Pro Gly Val Phe Ser Phe Leu Asp Pro 530 535 540
Leu Ala Tyr Glu Ile Trp Met Cys Ile Val Phe Ala Tyr Ile Gly Val 545 550 555 560
Ser Val Val Leu Phe Leu Val Ser Arg Phe Ser Pro Tyr Glu Trp His 565 570 575
Leu Glu Asp Asn Asn Glu Glu Pro Arg Asp Pro Gin Ser Pro Pro Asp 580 585 590
Pro Pro Asn Glu Phe Gly Ile Phe Asn Ser Leu Trp Phe Ser Leu Gly 595 600 605
Ala Phe Met Gin Gin Gly Cys Asp Ile Ser Pro Arg Ser Leu Ser Gly 610 615 620
Arg Ile Val Gly Gly Val Trp Trp Phe Phe Thr Leu Ile Ile Ile Ser 625 630 635 640
Ser Tyr Thr Ala Asn Leu Ala Ala Phe Leu Thr Val Glu Arg Met Val 645 650 655
Ser Pro Ile Glu Ser Ala Glu Asp Leu Ala Lys Gin Thr Glu Ile Ala 660 665 670
Tyr Gly Thr Leu Asp Ser Gly Ser Thr Lys Glu Phe Phe Arg Arg Ser 675 680 685 Lys Ile Ala Val Tyr Glu Lys Met Trp Ser Tyr Met Lys Ser Ala Glu 690 695 700
Pro Ser Val Phe Thr Lys Thr Thr Ala Asp Gly Val Ala Arg Val Arg 705 710 715 720
Lys Ser Lys Gly Lys Phe Ala Phe Leu Leu Glu Ser Thr Met Asn Glu 725 730 735
Tyr Ile Glu Gin Arg Lys Pro Cys Asp Thr Met Lys Val Gly Gly Asn 740 745 750
Leu Asp Ser Lys Gly Tyr Gly Val Ala Thr Pro Lys Gly Ser Ala Leu 755 760 765
Gly Thr Pro Val Asn Leu Ala Val Leu Lys Leu Ser Glu Gin Gly Ile 770 775 780
Leu Asp Lys Leu Lys Asn Lys Trp Trp Tyr Asp Lys Gly Glu Cys Gly 785 790 795 800
Ala Lys Asp Ser Gly Ser Lys Asp Lys Thr Ser Ala Leu Ser Leu Ser 805 810 815
Asn Val Ala Gly Val Phe Tyr Ile Leu Val Gly Gly Leu Gly Leu Ala 820 825 830
Met Met Val Ala Leu Ile Glu Phe Cys Tyr Lys Ser Arg Ala Glu Ser 835 840 845
Lys Arg Met Lys Leu Thr Lys Asn Thr Gin Asn Phe Lys Pro Ala Pro 850 855 860
Ala Thr Asn Thr Gin Asn Tyr Ala Thr Tyr Arg Glu Gly Tyr Asn Val 865 870 875 880
Tyr Gly Thr Glu Ser Val Lys Ile 885
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 11:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 2989 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: cDNS zu mRNS
(vi) URSPRÜNGLICHE HERKUNFT:
(A) ORGANISMUS: Homo sapiens (D) ENTWICKLUNGSSTADIUM: adult (F) GEWEBETYP: Gehirn ( ix ) MERKMALE :
(A) NAME/SCHLÜSSEL: CDS
(B) LAGE: 73..2736
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 11:
CTGACGACTC CTGAGTTGCG CCCATGCTCT TGTCAGCTTC GTTTTAGGCG TAGCATGGCC 60
AGGCAGAAGA AA ATG GGG CAA AGC GTG CTC CGG GCG GTC TTC TTT TTA 108
Met Gly Gin Ser Val Leu Arg Ala Val Phe Phe Leu 1 5 10
GTC CTG GGG CTT TTG GGT CAT TCT CAC GGA GGA TTC CCC AAC ACC ATC 156 Val Leu Gly Leu Leu Gly His Ser His Gly Gly Phe Pro Asn Thr Ile 15 20 25
AGC ATA GGT GGA CTT TTC ATG AGA AAC ACA GTG CAG GAG CAC AGC GCT 204 Ser Ile Gly Gly Leu Phe Met Arg Asn Thr Val Gin Glu His Ser Ala 30 35 40
TTC CGC TTT GCC GTG CAG TTA TAC AAC ACC AAC CAG AAC ACC ACC GAG 252 Phe Arg Phe Ala Val Gin Leu Tyr Asn Thr Asn Gin Asn Thr Thr Glu 45 50 55 60
AAG CCC TTC CAT TTG AAT TAC CAC GTA GAT CAC TTG GAT TCC TCC AAT 300 Lys Pro Phe His Leu Asn Tyr His Val Asp His Leu Asp Ser Ser Asn 65 70 75
AGT TTT TCC GTG ACA AAT GCT TTC TGC TCC CAG TTC TCG AGA GGG GTG 348 Ser Phe Ser Val Thr Asn Ala Phe Cys Ser Gin Phe Ser Arg Gly Val 80 85 90
TAT GCC ATC TTT GGA TTC TAT GAC CAG ATG TCA ATG AAC ACC CTG ACC 396 Tyr Ala Ile Phe Gly Phe Tyr Asp Gin Met Ser Met Asn Thr Leu Thr 95 100 105
TCC TTC TGT GGG GCC CTG CAC ACA TCC TTT GTT ACG CCT AGC TTC CCC 444 Ser Phe Cys Gly Ala Leu His Thr Ser Phe Val Thr Pro Ser Phe Pro 110 115 120
ACT GAC GCA GAT GTG CAG TTT GTC ATC CAG ATG CGC CCA GCC TTG AAG 492 Thr Asp Ala Asp Val Gin Phe Val Ile Gin Met Arg Pro Ala Leu Lys 125 130 135 140
GGC GCT ATT CTG AGT CTT CTG GGT CAT TAC AAG TGG GAG AAG TTT GTG 540 Gly Ala Ile Leu Ser Leu Leu Gly His Tyr Lys Trp Glu Lys Phe Val 145 150 155
TAC CTC TAT GAC ACA GAA CGA GGA TTT TCC ATC CTC CAA GCG ATT ATG 588 Tyr Leu Tyr Asp Thr Glu Arg Gly Phe Ser Ile Leu Gin Ala Ile Met 160 165 170
GAA GCA GCA GTG CAA AAC AAC TGG CAA GTA ACA GCA AGG TCT GTG GGA 636 Glu Ala Ala Val Gin Asn Asn Trp Gin Val Thr Ala Arg Ser Val Gly 175 180 185 AAC ATA AAG GAC GTC CAA GAA TTC AGG CGC ATC ATT GAA GAA ATG GAC 684 Asn Ile Lys Asp Val Gin Glu Phe Arg Arg Ile Ile Glu Glu Met Asp
190 195 200
AGG AGG CAG GAA AAG CGA TAC TTG ATT GAC TGC GAA GTC GAA AGG ATT 732 Arg Arg Gin Glu Lys Arg Tyr Leu Ile Asp Cys Glu Val Glu Arg Ile
205 210 215 220
AAC ACA ATT TTG GAA CAG GTT GTG ATC CTA GGG AAA CAC TCA AGA GGT 780
Asn Thr Ile Leu Glu Gin Val Val Ile Leu Gly Lys His Ser Arg Gly
225 230 235
TAT CAC TAC ATG CTC GCT AAC CTG GGT TTT ACT GAT ATT TTA CTG GAA 828
Tyr His Tyr Met Leu Ala Asn Leu Gly Phe Thr Asp Ile Leu Leu Glu
240 245 250
AGA GTC ATG CAT GGG GGA GCC AAC ATT ACA GGT TTC CAG ATT GTC AAC 876
Arg Val Met His Gly Gly Ala Asn Ile Thr Gly Phe Gin Ile Val Asn
255 260 265
AAT GAA AAC CCT ATG GTT CAG CAG TTC ATA CAG CGC TGG GTG AGG CTG 924
Asn Glu Asn Pro Met Val Gin Gin Phe Ile Gin Arg Trp Val Arg Leu
270 275 280
GAT GAA AGG GAA TTC CCT GAA GCC AAG AAT GCA CCA CTA AAG TAT ACA 972
Asp Glu Arg Glu Phe Pro Glu Ala Lys Asn Ala Pro Leu Lys Tyr Thr
285 290 295 300
TCT GCA TTG ACA CAC GAC GCA ATA CTG GTC ATA GCA GAA GCT TTC CGC 1020
Ser Ala Leu Thr His Asp Ala Ile Leu Val Ile Ala Glu Ala Phe Arg
305 310 315
TAC CTG AGG AGG CAG CGA GTA GAT GTG TCC CGG AGA GGA AGT GCT GGA 1068
Tyr Leu Arg Arg Gin Arg Val Asp Val Ser Arg Arg Gly Ser Ala Gly
320 325 330
GAC TGC TTA GCA AAT CCT GCT GTG CCC TGG AGT CAA GGA ATT GAT ATT 1116
Asp Cys Leu Ala Asn Pro Ala Val Pro Trp Ser Gin Gly Ile Asp Ile
335 340 345
GAG AGA GCT CTG AAA ATG GTG CAA GTA CAA GGA ATG ACT GGA AAT ATT 1164
Glu Arg Ala Leu Lys Met Val Gin Val Gin Gly Met Thr Gly Asn Ile
350 355 360
CAA TTT GAC ACT TAT GGA CGT AGG ACA AAT TAT ACC ATC GAT GTG TAT 1212
Gin Phe Asp Thr Tyr Gly Arg Arg Thr Asn Tyr Thr Ile Asp Val Tyr
365 370 375 380
GAA ATG AAA GTC AGT GGC TCT CGA AAA GCT GGC TAC TGG AAC GAG TAT 1260
Glu Met Lys Val Ser Gly Ser Arg Lys Ala Gly Tyr Trp Asn Glu Tyr
385 390 395 GAA AGG TTT GTG CCT TTC TCA GAT CAG CAA ATC AGC AAT GAC AGT GCA 1308 Glu Arg Phe Val Pro Phe Ser Asp Gin Gin Ile Ser Asn Asp Ser Ala 400 405 410
TCC TCA GAG AAT CGG ACC ATA GTA GTG ACT ACC ATT CTG GAA TCA CCA 1356 Ser Ser Glu Asn Arg Thr Ile Val Val Thr Thr Ile Leu Glu Ser Pro 415 420 425
TAT GTA ATG TAC AAG AAG AAC CAT GAG CAA CTG GAA GGA AAT GAA CGA 1404 Tyr Val Met Tyr Lys Lys Asn His Glu Gin Leu Glu Gly Asn Glu Arg 430 435 440
TAT GAA GGC TAT TGT GTA GAC CTA GCC TAT GAA ATA GCC AAA CAT GTA 1452 Tyr Glu Gly Tyr Cys Val Asp Leu Ala Tyr Glu Ile Ala Lys His Val 445 450 455 460
AGG ATC AAA TAC AAA TTG TCC ATC GTT GGT GAC GGG AAA TAT GGT GCA 1500 Arg Ile Lys Tyr Lys Leu Ser Ile Val Gly Asp Gly Lys Tyr Gly Ala 465 470 475
AGG GAT CCA GAG ACT AAA ATA TGG AAC GGC ATG GTT GGG GAA CTT GTC 1548 Arg Asp Pro Glu Thr Lys Ile Trp Asn Gly Met Val Gly Glu Leu Val 480 485 490
TAT GGG AGA GCT GAT ATA GCT GTT GCT CCA CTC ACT ATA ACA TTG GTC 1596 Tyr Gly Arg Ala Asp Ile Ala Val Ala Pro Leu Thr Ile Thr Leu Val 495 500 505
CGT GAA GAA GTC ATA GAT TTT TCA AAG CCA TTC ATG AGC CTG GGC ATC 1644 Arg Glu Glu Val Ile Asp Phe Ser Lys Pro Phe Met Ser Leu Gly Ile 510 515 520
TCC ATC ATG ATA AAG AAG CCT CAG AAA TCA AAA CCA GGC GTA TTC TCA 1692 Ser Ile Met Ile Lys Lys Pro Gin Lys Ser Lys Pro Gly Val Phe Ser 525 530 535 540
TTT CTG GAT CCC CTG GCT TAT GAA ATC TGG ATG TGC ATT GTC TTT GCT 1740 Phe Leu Asp Pro Leu Ala Tyr Glu Ile Trp Met Cys Ile Val Phe Ala 545 550 555
TAC ATT GGA GTC AGC GTA GTT CTT TTC CTA GTC AGC AGG TTC AGT CCT 1788 Tyr Ile Gly Val Ser Val Val Leu Phe Leu Val Ser Arg Phe Ser Pro 560 565 570
TAT GAA TGG CAC TTG GAA GAC AAC AAT GAA GAA CCT CGT GAC CCA CAA 1836 Tyr Glu Trp His Leu Glu Asp Asn Asn Glu Glu Pro Arg Asp Pro Gin 575 580 585
AGT CCT CCT GAT CCT CCA AAT GAA TTT GGA ATA TTT AAC AGT CTT TGG 1884 Ser Pro Pro Asp Pro Pro Asn Glu Phe Gly Ile Phe Asn Ser Leu Trp 590 595 600 TTT TCC TTG GGT GCC TTT ATG CAG CAA GGA TGT GAT ATT TCT CCA AGA 1932 Phe Ser Leu Gly Ala Phe Met Gin Gin Gly Cys Asp Ile Ser Pro Arg 605 610 615 620
TCA CTC TCC GGG CGC ATT GTT GGA GGG GTT TGG TGG TTC TTC ACC CTG 1980 Ser Leu Ser Gly Arg Ile Val Gly Gly Val Trp Trp Phe Phe Thr Leu 625 630 635
ATC ATA ATT TCT TCC TAT ACT GCC AAT CTC GCT GCT TTC CTG ACT GTG 2028 Ile Ile Ile Ser Ser Tyr Thr Ala Asn Leu Ala Ala Phe Leu Thr Val 640 645 650
GAG AGG ATG GTT TCT CCC ATA GAG AGT GCT GAA GAC TTA GCT AAA CAG 2076 Glu Arg Met Val Ser Pro Ile Glu Ser Ala Glu Asp Leu Ala Lys Gin 655 660 665
ACT GAA ATT GCA TAT GGG ACC CTG GAC TCC GGT TCA ACA AAA GAA TTT 2124 Thr Glu Ile Ala Tyr Gly Thr Leu Asp Ser Gly Ser Thr Lys Glu Phe 670 675 680
TTC AGA AGA TCC AAA ATT GCT GTG TAC GAG AAA ATG TGG TCT TAC ATG 2172 Phe Arg Arg Ser Lys Ile Ala Val Tyr Glu Lys Met Trp Ser Tyr Met 685 690 695 700
AAA TCA GCG GAG CCA TCT GTG TTT ACC AAA ACA ACA GCA GAC GGA GTG 2220 Lys Ser Ala Glu Pro Ser Val Phe Thr Lys Thr Thr Ala Asp Gly Val 705 710 715
GCC CGA GTG CGA AAG TCC AAG GGA AAG TTC GCC TTC CTG CTG GAG TCA 2268 Ala Arg Val Arg Lys Ser Lys Gly Lys Phe Ala Phe Leu Leu Glu Ser 720 725 730
ACC ATG AAT GAG TAC ATT GAG CAG AGA AAA CCA TGT GAT ACG ATG AAA 2316 Thr Met Asn Glu Tyr Ile Glu Gin Arg Lys Pro Cys Asp Thr Met Lys 735 740 745
GTT GGT GGA AAT CTG GAT TCC AAA GGC TAT GGT GTG GCA ACC CCT AAA 2364 Val Gly Gly Asn Leu Asp Ser Lys Gly Tyr Gly Val Ala Thr Pro Lys 750 755 760
GGC TCA GCA TTA GGA AAT GCT GTT AAC CTG GCA GTA TTA AAA CTG AAT 2412 Gly Ser Ala Leu Gly Asn Ala Val Asn Leu Ala Val Leu Lys Leu Asn 765 770 775 780
GAG CAA GGC CTC TTG GAC AAA TTG AAA AAC AAA TGG TGG TAC GAC AAA 2460 Glu Gin Gly Leu Leu Asp Lys Leu Lys Asn Lys Trp Trp Tyr Asp Lys 785 790 795
GGA GAG TGC GGC AGC GGG GGC GGT GAC TCC AAG GAC AAG ACC AGC GCT 2508 Gly Glu Cys Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ser Lys Asp Lys Thr Ser Ala 800 805 810 CTG AGC CTG AGC AAT GTG GCA GGC GTT TTC TAT ATA CTT GTC GGA GGT 2556
Leu Ser Leu Ser Asn Val Ala Gly Val Phe Tyr Ile Leu Val Gly Gly 815 820 825
CTG GGG CTG GCC ATG ATG GTG GCT TTG ATA GAA TTC TGT TAC AAA TCA 2604 Leu Gly Leu Ala Met Met Val Ala Leu Ile Glu Phe Cys Tyr Lys Ser 830 835 840
CGG GCA GAG TCC AAA CGC ATG AAA CTC ACA AAG AAC ACC CAA AAC TTT 2652 Arg Ala Glu Ser Lys Arg Met Lys Leu Thr Lys Asn Thr Gin Asn Phe 845 850 855 860
AAG CCT GCT CCT GCC ACC AAC ACT CAG AAT TAT GCT ACA TAC AGA GAA 2700 Lys Pro Ala Pro Ala Thr Asn Thr Gin Asn Tyr Ala Thr Tyr Arg Glu 865 870 875
GGC TAC AAC GTG TAT GGA ACA GAG AGT GTT AAG ATC TAGGGATCCC 2746
Gly Tyr Asn Val Tyr Gly Thr Glu Ser Val Lys Ile 880 885
TTCCCACTGG AGGCATGTGA TGAGAGGAAA TCACCGAAAA CGTGGCTGCT TCAAGGATCC 2806
TGAGCCAGAT TTCACTCTCC TTGGTGTCGG GCATGACACG AATATTGCTG ATGGTGCAAT 2866
GACCTTTCAA TAGGAAAAAC TGGTTTTTTT TTCCTTCAGT GCCTTATGGA ACACTCTGAG 2926
ACTCGCGACA ATGCAAACCA TCATTGAAAT CTTTTTGCTT TGCTTGAAAA AAAAAAAAAA 2986
AAA 2989
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 12:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 888 Aminosäuren
(B) ART: Aminosäure (D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: Protein
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 12:
Met Gly Gin Ser Val Leu Arg Ala Val Phe Phe Leu Val Leu Gly Leu 1 5 10 15
Leu Gly His Ser His Gly Gly Phe Pro Asn Thr Ile Ser Ile Gly Gly 20 25 30
Leu Phe Met Arg Asn Thr Val Gin Glu His Ser Ala Phe Arg Phe Ala 35 40 45
Val Gin Leu Tyr Asn Thr Asn Gin Asn Thr Thr Glu Lys Pro Phe His 50 55 60
Leu Asn Tyr His Val Asp His Leu Asp Ser Ser Asn Ser Phe Ser Val 65 70 75 80 Thr Asn Ala Phe Cys Ser Gin Phe Ser Arg Gly Val Tyr Ala Ile Phe 85 90 95
Gly Phe Tyr Asp Gin Met Ser Met Asn Thr Leu Thr Ser Phe Cys Gly 100 105 110
Ala Leu His Thr Ser Phe Val Thr Pro Ser Phe Pro Thr Asp Ala Asp 115 120 125
Val Gin Phe Val Ile Gin Met Arg Pro Ala Leu Lys Gly Ala Ile Leu 130 135 140
Ser Leu Leu Gly His Tyr Lys Trp Glu Lys Phe Val Tyr Leu Tyr Asp 145 150 155 160
Thr Glu Arg Gly Phe Ser Ile Leu Gin Ala Ile Met Glu Ala Ala Val 165 170 175
Gin Asn Asn Trp Gin Val Thr Ala Arg Ser Val Gly Asn Ile Lys Asp 180 185 190
Val Gin Glu Phe Arg Arg Ile Ile Glu Glu Met Asp Arg Arg Gin Glu 195 200 205
Lys Arg Tyr Leu Ile Asp Cys Glu Val Glu Arg Ile Asn Thr Ile Leu 210 215 220
Glu Gin Val Val Ile Leu Gly Lys His Ser Arg Gly Tyr His Tyr Met 225 230 235 240
Leu Ala Asn Leu Gly Phe Thr Asp Ile Leu Leu Glu Arg Val Met His 245 250 255
Gly Gly Ala Asn Ile Thr Gly Phe Gin Ile Val Asn Asn Glu Asn Pro 260 265 270
Met Val Gin Gin Phe Ile Gin Arg Trp Val Arg Leu Asp Glu Arg Glu 275 280 285
Phe Pro Glu Ala Lys Asn Ala Pro Leu Lys Tyr Thr Ser Ala Leu Thr 290 295 300
His Asp Ala Ile Leu Val Ile Ala Glu Ala Phe Arg Tyr Leu Arg Arg 305 310 315 320
Gin Arg Val Asp Val Ser Arg Arg Gly Ser Ala Gly Asp Cys Leu Ala 325 330 335
Asn Pro Ala Val Pro Trp Ser Gin Gly Ile Asp Ile Glu Arg Ala Leu 340 345 350
Lys Met Val Gin Val Gin Gly Met Thr Gly Asn Ile Gin Phe Asp Thr 355 360 365
Tyr Gly Arg Arg Thr Asn Tyr Thr Ile Asp Val Tyr Glu Met Lys Val 370 375 380 Ser Gly Ser Arg Lys Ala Gly Tyr Trp Asn Glu Tyr Glu Arg Phe Val 385 390 395 400
Pro Phe Ser Asp Gin Gin Ile Ser Asn Asp Ser Ala Ser Ser Glu Asn 405 410 415
Arg Thr Ile Val Val Thr Thr Ile Leu Glu Ser Pro Tyr Val Met Tyr 420 425 430
Lys Lys Asn His Glu Gin Leu Glu Gly Asn Glu Arg Tyr Glu Gly Tyr 435 440 445
Cys Val Asp Leu Ala Tyr Glu Ile Ala Lys His Val Arg Ile Lys Tyr 450 455 460
Lys Leu Ser Ile Val Gly Asp Gly Lys Tyr Gly Ala Arg Asp Pro Glu 465 470 475 480
Thr Lys Ile Trp Asn Gly Met Val Gly Glu Leu Val Tyr Gly Arg Ala 485 490 495
Asp Ile Ala Val Ala Pro Leu Thr Ile Thr Leu Val Arg Glu Glu Val 500 505 510
Ile Asp Phe Ser Lys Pro Phe Met Ser Leu Gly Ile Ser Ile Met Ile 515 520 525
Lys Lys Pro Gin Lys Ser Lys Pro Gly Val Phe Ser Phe Leu Asp Pro 530 535 540
Leu Ala Tyr Glu Ile Trp Met Cys Ile Val Phe Ala Tyr Ile Gly Val 545 550 555 560
Ser Val Val Leu Phe Leu Val Ser Arg Phe Ser Pro Tyr Glu Trp His 565 570 575
Leu Glu Asp Asn Asn Glu Glu Pro Arg Asp Pro Gin Ser Pro Pro Asp 580 585 590
Pro Pro Asn Glu Phe Gly Ile Phe Asn Ser Leu Trp Phe Ser Leu Gly 595 600 605
Ala Phe Met Gin Gin Gly Cys Asp Ile Ser Pro Arg Ser Leu Ser Gly 610 615 620
Arg Ile Val Gly Gly Val Trp Trp Phe Phe Thr Leu Ile Ile Ile Ser 625 630 635 640
Ser Tyr Thr Ala Asn Leu Ala Ala Phe Leu Thr Val Glu Arg Met Val 645 650 655
Ser Pro Ile Glu Ser Ala Glu Asp Leu Ala Lys Gin Thr Glu Ile Ala 660 665 670
Tyr Gly Thr Leu Asp Ser Gly Ser Thr Lys Glu Phe Phe Arg Arg Ser 675 680 685 Lys Ile Ala Val Tyr Glu Lys Met Trp Ser Tyr Met Lys Ser Ala Glu 690 695 700
Pro Ser Val Phe Thr Lys Thr Thr Ala Asp Gly Val Ala Arg Val Arg 705 710 715 720
Lys Ser Lys Gly Lys Phe Ala Phe Leu Leu Glu Ser Thr Met Asn Glu 725 730 735
Tyr Ile Glu Gin Arg Lys Pro Cys Asp Thr Met Lys Val Gly Gly Asn 740 745 750
Leu Asp Ser Lys Gly Tyr Gly Val Ala Thr Pro Lys Gly Ser Ala Leu 755 760 , 765
Gly Asn Ala Val Asn Leu Ala Val Leu Lys Leu Asn Glu Gin Gly Leu 770 775 780
Leu Asp Lys Leu Lys Asn Lys Trp Trp Tyr Asp Lys Gly Glu Cys Gly 785 790 795 800
Ser Gly Gly Gly Asp Ser Lys Asp Lys Thr Ser Ala Leu Ser Leu Ser 805 810 815
Asn Val Ala Gly Val Phe Tyr Ile Leu Val Gly Gly Leu Gly Leu Ala 820 825 830
Met Met Val Ala Leu Ile Glu Phe Cys Tyr Lys Ser Arg Ala Glu Ser 835 840 845
Lys Arg Met Lys Leu Thr Lys Asn Thr Gin Asn Phe Lys Pro Ala Pro 850 855 860
Ala Thr Asn Thr Gin Asn Tyr Ala Thr Tyr Arg Glu Gly Tyr Asn Val 865 870 875 880
Tyr Gly Thr Glu Ser Val Lys Ile 885
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 13:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 1191 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: cDNS zu mRNS
(vi) URSPRÜNGLICHE HERKUNFT:
(A) ORGANISMUS: Homo sapiens (D) ENTWICKLUNGSSTADIUM: adult (F) GEWEBETYP: Gehirn ( ix ) MERKMALE :
(A) NAME/SCHLÜSSEL: CDS
(B) LAGE: 317..1191
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 13:
CGGGTCCTGA CAGCCCCTTG GCCTCCCAGC ATGGGGAAGC GTGAGGAGTT GCCCAGCAGT 60
GAGCAGCCCC CCTCACTCCT GGCCCCATGA GCCGCAGCCA CAGGCAGCAG AGGAGGGCTA 120
AGGAGAACTA GTCATAATCT TAAACCACCG AAACCTCTTT CCTTTTTTTT CTTTCTTTTC 180
TTTCTTTTCT TTTTTTTTTT TTTTTTTTGG TTGATTTTAA TTTTAGCGCC ATCGTCTTCA 240
ATGCTTCTCT GAACAGCCTT TAGGAAGAGT GCGAGAGAAA GAGAGAGAGC GCGCGCCAGG 300
GAGAGGAGAA AAGAAG ATG AGG ATT ATT TCC AGA CAG ATT GTC TTG TTA 349
Met Arg Ile Ile Ser Arg Gin Ile Val Leu Leu 1 5 10
TTT TCT GGA TTT TGG GGA CTC GCC ATG GGA GCC TTT CCG AGC AGC GTG 397 Phe Ser Gly Phe Trp Gly Leu Ala Met Gly Ala Phe Pro Ser Ser Val 15 20 25
CAA ATA GGT GGT CTC TTC ATC CGA AAC ACA GAT CAG GAA TAC ACT GCT 445 Gin Ile Gly Gly Leu Phe Ile Arg Asn Thr Asp Gin Glu Tyr Thr Ala 30 35 40
TTT CGA TTA GCA ATT TTT CTT CAT AAC ACC AGC CCC AAT GCG TCG GAA 493 Phe Arg Leu Ala Ile Phe Leu His Asn Thr Ser Pro Asn Ala Ser Glu 45 50 55
GCT CCT TTT AAT TTG GTA CCT CAT GTG GAC AAC ATT GAG ACA GCC AAC 541 Ala Pro Phe Asn Leu Val Pro His Val Asp Asn Ile Glu Thr Ala Asn 60 65 70 75
AGT TTT GCT GTA ACA AAC GCC TTC TGT TCC CAG TAT TCT AGA GGA GTA 589 Ser Phe Ala Val Thr Asn Ala Phe Cys Ser Gin Tyr Ser Arg Gly Val 80 85 90
TTT GCC ATT TTT GGA CTC TAT GAT AAG AGG TCG GTA CAT ACC TTG ACC 637 Phe Ala Ile Phe Gly Leu Tyr Asp Lys Arg Ser Val His Thr Leu Thr 95 100 105
TCA TTC TGC AGC GCC TTA CAT ATC TCC CTC ATC ACA CCA AGT TTC CCT 685 Ser Phe Cys Ser Ala Leu His Ile Ser Leu Ile Thr Pro Ser Phe Pro 110 115 120
ACT GAG GGG GAG AGC CAG TTT GTG CTG CAA CTA AGA CCT TCG TTA CGA 733 Thr Glu Gly Glu Ser Gin Phe Val Leu Gin Leu Arg Pro Ser Leu Arg 125 130 135
GGA GCA CTC TTG AGT TTG CTG GAT CAC TAC GAA TGG AAC TGT TTT GTC 781 Gly Ala Leu Leu Ser Leu Leu Asp His Tyr Glu Trp Asn Cys Phe Val 140 145 150 155 TTC CTG TAT GAC ACA GAC AGG GGA TAC TCG ATA CTC CAA GCT ATT TTG 829
Phe Leu Tyr Asp Thr Asp Arg Gly Tyr Ser Ile Leu Gin Ala Ile Leu 160 165 170
GAA AAA GCA GGA CAA AAT GGT TGG CAT GTC AGC GCT ATA TGT GTG GAA 877 Glu Lys Ala Gly Gin Asn Gly Trp His Val Ser Ala Ile Cys Val Glu 175 180 185
AAT TTT AAT GAT GTC AGC TAT AGG CAA CTT CTA GAA GAA CTT GAC AGA 925 Asn Phe Asn Asp Val Ser Tyr Arg Gin Leu Leu Glu Glu Leu Asp Arg 190 195 200
AGA CAA GAG AAG AAG TTT GTA ATA GAC TGT GAG ATA GAG AGA CTT CAA 973 Arg Gin Glu Lys Lys Phe Val Ile Asp Cys Glu Ile Glu Arg Leu Gin 205 210 215
AAC ATA TTA GAA CAG ATT GTA AGT GTT GGA AAG CAT GTT AAA GGC TAC 1021 Asn Ile Leu Glu Gin Ile Val Ser Val Gly Lys His Val Lys Gly Tyr 220 225 230 235
CAT TAT ATC ATT GCA AAC TTG GGA TTC AAG GAT ATT TCT CTT GAG AGG 1069 His Tyr Ile Ile Ala Asn Leu Gly Phe Lys Asp Ile Ser Leu Glu Arg 240 245 250
TTT ATA CAT GGT GGA GCC AAT GTT ACT GGA TTC CAG TTG GTG GAT TTT 1117 Phe Ile His Gly Gly Ala Asn Val Thr Gly Phe Gin Leu Val Asp Phe 255 260 265
AAT ACA CCT ATG GTA ATC AAA CTA ATG GAT CGC TGG AAG AAA CTA GAT 1165 Asn Thr Pro Met Val Ile Lys Leu Met Asp Arg Trp Lys Lys Leu Asp 270 275 280
CAG AGA GAG TAT CCA GGA TCT GAG CC 1191
Gin Arg Glu Tyr Pro Gly Ser Glu 285 290
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 14:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 291 Aminosäuren
(B) ART: Aminosäure (D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: Protein
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 14:
Met Arg Ile Ile Ser Arg Gin Ile Val Leu Leu Phe Ser Gly Phe Trp 1 5 10 15
Gly Leu Ala Met Gly Ala Phe Pro Ser Ser Val Gin Ile Gly Gly Leu 20 25 30
Phe Ile Arg Asn Thr Asp Gin Glu Tyr Thr Ala Phe Arg Leu Ala Ile 35 40 45 Phe Leu His Asn Thr Ser Pro Asn Ala Ser Glu Ala Pro Phe Asn Leu 50 55 60
Val Pro His Val Asp Asn Ile Glu Thr Ala Asn Ser Phe Ala Val Thr 65 70 75 80
Asn Ala Phe Cys Ser Gin Tyr Ser Arg Gly Val Phe Ala Ile Phe Gly 85 90 95
Leu Tyr Asp Lys Arg Ser Val His Thr Leu Thr Ser Phe Cys Ser Ala 100 105 110
Leu His Ile Ser Leu Ile Thr Pro Ser Phe Pro Thr Glu Gly Glu Ser 115 120 125
Gin Phe Val Leu Gin Leu Arg Pro Ser Leu Arg Gly Ala Leu Leu Ser 130 135 140
Leu Leu Asp His Tyr Glu Trp Asn Cys Phe Val Phe Leu Tyr Asp Thr 145 150 155 160
Asp Arg Gly Tyr Ser Ile Leu Gin Ala Ile Leu Glu Lys Ala Gly Gin 165 170 175
Asn Gly Trp His Val Ser Ala Ile Cys Val Glu Asn Phe Asn Asp Val 180 185 190
Ser Tyr Arg Gin Leu Leu Glu Glu Leu Asp Arg Arg Gin Glu Lys Lys 195 200 205
Phe Val Ile Asp Cys Glu Ile Glu Arg Leu Gin Asn Ile Leu Glu Gin 210 215 220
Ile Val Ser Val Gly Lys His Val Lys Gly Tyr His Tyr Ile Ile Ala 225 230 235 240
Asn Leu Gly Phe Lys Asp Ile Ser Leu Glu Arg Phe Ile His Gly Gly 245 250 255
Ala Asn Val Thr Gly Phe Gin Leu Val Asp Phe Asn Thr Pro Met Val 260 265 270
Ile Lys Leu Met Asp Arg Trp Lys Lys Leu Asp Gin Arg Glu Tyr Pro 275 280 285
Gly Ser Glu 290
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 15:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 1191 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear (ii) ART. DES MOLEKÜLS: cDNS zu mRNS
(vi) URSPRÜNGLICHE HERKUNFT:
(A) ORGANISMUS: Homo sapiens (D) ENTWICKLUNGSSTADIUM: adult (F) GEWEBETYP: Gehirn
(ix) MERKMALE:
(A) NAME/SCHLÜSSEL: CDS
(B) LAGE: 317..1191
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 15:
CGGGTCCTGA CAGCCCCTTG GCCTCCCAGC ATGGGGAAGC GTGAGGAGTT GCCCAGCAGT 60
GAGCAGCCCC CCTCACTCCT GGCCCCATGA GCCGCAGCCA CAGGCAGCAG AGGAGGGCTA 120
AGGAGAACTA GTCATAATCT TAAACCACCG AAACCTCTTT CCTTTTTTTT CTTTCTTTTC 180
TTTCTTTTCT TTTTTTTTTT TTTTTTTTGG TTGATTTTAA TTTTAGCGCC ATCGTCTTCA 240
ATGCTTCTCT GAACAGCCTT TAGGAAGAGT GCGAGAGAAA GAGAGAGAGC GCGCGCCAGG 300
GAGAGGAGAA AAGAAG ATG AGG ATT ATT TCC AGA CAG ATT GTC TTG TTA 349
Met Arg Ile Ile Ser Arg Gin Ile Val Leu Leu 1 5 10
TTT TCT GGA TTT TGG GGA CTC GCC ATG GGA GCC TTT CCG AGC AGC GTG 397 Phe Ser Gly Phe Trp Gly Leu Ala Met Gly Ala Phe Pro Ser Ser Val 15 20 25
CAA ATA GGT GGT CTC TTC ATC CGA AAC ACA GAT CAG GAA TAC ACT GCT 445 Gin Ile Gly Gly Leu Phe Ile Arg Asn Thr Asp Gin Glu Tyr Thr Ala 30 35 40
TTT CGA TTA GCA ATT TTT CTT CAT AAC ACC AGC CCC AAT GCG TCG GAA 493 Phe Arg Leu Ala Ile Phe Leu His Asn Thr Ser Pro Asn Ala Ser Glu 45 50 55
GCT CCT TTT AAT TTG GTA CCT CAT GTG GAC AAC ATT GAG ACA GCC AAC 541 Ala Pro Phe Asn Leu Val Pro His Val Asp Asn Ile Glu Thr Ala Asn 60 65 70 75
AGT TTT GCT GTA ACA AAC GCC TTC TGT TCC CAG TAT TCT AGA GGA GTA 589 Ser Phe Ala Val Thr Asn Ala Phe Cys Ser Gin Tyr Ser Arg Gly Val 80 85 90
TTT GCC ATT TTT GGA CTC TAT GAT AAG AGG TCG GTA CAT ACC TTG ACC 637 Phe Ala Ile Phe Gly Leu Tyr Asp Lys Arg Ser Val His Thr Leu Thr 95 100 105
TCA TTC TGC AGC GCC TTA CAT ATC TCC CTC ATC ACA CCA AGT TTC CCT 685 Ser Phe Cys Ser Ala Leu His Ile Ser Leu Ile Thr Pro Ser Phe Pro 110 115 120 ACT GAG GGG GAG AGC CAG TTT GTG CTG CAA CTA AGA CCT TCG TTA CGA 733 Thr Glu Gly Glu Ser Gin Phe Val Leu Gin Leu Arg Pro Ser Leu Arg 125 130 135
GGA GCA CTC TTG AGT TTG CTG GAT CAC TAC GAA TGG AAC TGT TTT GTC 781 Gly Ala Leu Leu Ser Leu Leu Asp His Tyr Glu Trp Asn Cys Phe Val 140 145 150 155
TTC CTG TAT GAC ACA GAC AGG GGA TAC TCG ATA CTC CAA GCT ATT TTG 829 Phe Leu Tyr Asp Thr Asp Arg Gly Tyr Ser Ile Leu Gin Ala Ile Leu 160 165 170
GAA AAA GCA GGA CAA AAT GGT TGG CAT GTC AGC GCT ATA TGT GTG GAA 877 Glu Lys Ala Gly Gin Asn Gly Trp His Val Ser Ala Ile Cys Val Glu 175 180 185
AAT TTT AAT GAT GTC AGC TAT AGG CAA CTT CTA GAA GAA CTT GAC AGA 925 Asn Phe Asn Asp Val Ser Tyr Arg Gin Leu Leu Glu Glu Leu Asp Arg 190 195 200
AGA CAA GAG AAG AAG TTT GTA ATA GAC TGT GAG ATA GAG AGA CTT CAA 973 Arg Gin Glu Lys Lys Phe Val Ile Asp Cys Glu Ile Glu Arg Leu Gin 205 210 215
AAC ATA TTA GAA CAG ATT GTA AGT GTT GGA AAG CAT GTT AAA GGC TAC 1021 Asn Ile Leu Glu Gin Ile Val Ser Val Gly Lys His Val Lys Gly Tyr 220 225 230 235
CAT TAT ATC ATT GCA AAC TTG GGA TTC AAG GAT ATT TCT CTT GAG AGG 1069 His Tyr Ile Ile Ala Asn Leu Gly Phe Lys Asp Ile Ser Leu Glu Arg 240 245 250
TTT ATA CAT GGT GGA GCC AAT GTT ACT GGA TTC CAG TTG GTG GAT TTT 1117 Phe Ile His Gly Gly Ala Asn Val Thr Gly Phe Gin Leu Val Asp Phe 255 260 265
AAT ACA CCT ATG GTA ATC AAA CTA ATG GAT CGC TGG AAG AAA CTA GAT 1165 Asn Thr Pro Met Val Ile Lys Leu Met Asp Arg Trp Lys Lys Leu Asp 270 275 280
CAG AGA GAG TAT CCA GGA TCT GAG CC 1191
Gin Arg Glu Tyr Pro Gly Ser Glu 285 290
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 16:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 291 Aminosäuren
(B) ART: Aminosäure (D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: Protein
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 16: Met Arg Ile Ile Ser Arg Gin Ile Val Leu Leu Phe Ser Gly Phe Trp 1 5 10 15
Gly Leu Ala Met Gly Ala Phe Pro Ser Ser Val Gin Ile Gly Gly Leu 20 25 30
Phe Ile Arg Asn Thr Asp Gin Glu Tyr Thr Ala Phe Arg Leu Ala Ile 35 40 45
Phe Leu His Asn Thr Ser Pro Asn Ala Ser Glu Ala Pro Phe Asn Leu 50 55 60
Val Pro His Val Asp Asn Ile Glu Thr Ala Asn Ser Phe Ala Val Thr 65 70 75 80
Asn Ala Phe Cys Ser Gin Tyr Ser Arg Gly Val Phe Ala Ile Phe Gly 85 90 95
Leu Tyr Asp Lys Arg Ser Val His Thr Leu Thr Ser Phe Cys Ser Ala 100 105 110
Leu His Ile Ser Leu Ile Thr Pro Ser Phe Pro Thr Glu Gly Glu Ser 115 120 125
Gin Phe Val Leu Gin Leu Arg Pro Ser Leu Arg Gly Ala Leu Leu Ser 130 135 140
Leu Leu Asp His Tyr Glu Trp Asn Cys Phe Val Phe Leu Tyr Asp Thr 145 150 155 160
Asp Arg Gly Tyr Ser Ile Leu Gin Ala Ile Leu Glu Lys Ala Gly Gin 165 170 175
Asn Gly Trp His Val Ser Ala Ile Cys Val Glu Asn Phe Asn Asp Val 180 185 190
Ser Tyr Arg Gin Leu Leu Glu Glu Leu Asp Arg Arg Gin Glu Lys Lys 195 200 205
Phe Val Ile Asp Cys Glu Ile Glu Arg Leu Gin Asn Ile Leu Glu Gin 210 215 220
Ile Val Ser Val Gly Lys His Val Lys Gly Tyr His Tyr Ile Ile Ala 225 230 235 240
Asn Leu Gly Phe Lys Asp Ile Ser Leu Glu Arg Phe Ile His Gly Gly 245 250 255
Ala Asn Val Thr Gly Phe Gin Leu Val Asp Phe Asn Thr Pro Met Val 260 265 270
Ile Lys Leu Met Asp Arg Trp Lys Lys Leu Asp Gin Arg Glu Tyr Pro 275 280 285
Gly Ser Glu 290 (2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 17:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 20 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear
■ (ii) ART DES MOLEKÜLS: DNS (genomisch) (xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 17: ATCTATGATT GGACCTGGGC 20
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 18:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 24 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: DNS (genomisch) (xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 18: ACATCTGCTC TTCCATAGAC CAGC 24
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 19:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 39 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: DNS (genomisch)
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 19: TGCGATAAGC TTATGCAGCA CATTTTTGCC TTCTTCTGC 39
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 20:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 24 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii ) ART DES MOLEKÜLS : DNS (genomisch) (xi ) SEQUENZBESCHREIBUNG : SEQ ID NO : 20 : ATGCCATTCC AGGCCTTCGT GTCA 24 (2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 21:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 21 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: DNS (genomisch) (xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 21: GATGGAAAAT ACGGAGCCCG A 21
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 22:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 21 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: DNS (genomisch)
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 22: GCTGGGGAGC CGAGCCTGCT C 21
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 23:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 24 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: DNS (genomisch)
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 23: TGACACGAAG GCCTGGAATG GCAT 24
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 24:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 39 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: DNS (genomisch) (xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 24: TGCGATGAAT TCTTACAATC CCGTGGCTCC CAAGGGCAT 39 (2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 25:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 22 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: DNS (genomisch)
(xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 25: TACTTGGGTC TCTTCCAGTC CA 22
(2) INFORMATION ZU SEQ ID NO: 26:
(i) SEQUENZ CHARAKTERISTIKA:
(A) LÄNGE: 24 Basenpaare
(B) ART: Nukleinsäure
(C) STRANGFORM: Einzel
(D) TOPOLOGIE: linear
(ii) ART DES MOLEKÜLS: DNS (genomisch) (xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ ID NO: 26: TGTGTGGTCT CGAGCATCAC TATT 24

Claims

Patentansprüche
1. DNA-Sequenzen, die für Varianten von Glutamatrezeptor-Unter- einheiten codieren und die aus der Gruppe, die von
a) DNA-Sequenzen der in SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 oder 15 beschriebenen Struktur,
b) DNA-Sequenzen, die für Proteine mit der in SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 oder 16 beschriebenen Struktur codieren, und
c) DNA-Sequenzen, die unter Standardbedingungen mit DNA- Sequenzen a) oder b) hybridisieren, gebildet wird,
ausgewählt sind.
2. Verfahren zur gentechnischen Herstellung von Glutamat- rezeptor-Untereinheiten unter Verwendung von DNA-Sequenzen gemäß Anspruch 1.
Verwendung von DNA-Sequenzen gemäß Anspruch 1 zur Identifi¬ zierung funktionaler Liganden für Glutamatrezeptoren.
4. Verfahren zur Identifizierung funktionaler Liganden für Glutamatrezeptoren, dadurch gekennzeichnet, daß man mit einer für einen Glutamatrezeptor codierenden DNA-Sequenz gemäß Anspruch 1 Zellen transfiziert, die Membranen dieser Zellen isoliert und mit diesen Membranen übliche Rezeptorbindungs¬ experimente durchführt.
5. Verfahren zur Identifizierung funktionaler Liganden für Glutamatrezeptoren, dadurch gekennzeichnet, daß man mit einer oder mehreren für einen Glutamatrezeptor codierenden DNA-Se¬ quenz gemäß Anspruch 1 Zellen transfiziert und die in diesen Zellen durch Bindung der Liganden an den Rezeptor verursachte Beeinflussung des Signaltransduktionswegs durch ein Reporter¬ system detektiert.
Verwendung von Oligonukleotiden, die von der in SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 oder 15 beschriebenen Struktur abgeleitet sind, als antisense Moleküle zur gezielten Ausschaltung von Genen.
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