WO1993010749A1

WO1993010749A1 - Hair modifier and hair care product, both containing antikeratinous antibody, and production of antikeratinous antibody

Info

Publication number: WO1993010749A1
Application number: PCT/JP1991/001691
Authority: WO
Inventors: Hideyo Uchiwa; Makoto Hirano; Umeji Murakami; Kenichi Sugimoto; Hiromi Minamino; Toshio Horikoshi; Minoru Ohta; Takusaburou Ebina
Original assignee: Kanebo, Ltd.
Priority date: 1990-06-04
Filing date: 1991-12-04
Publication date: 1993-06-10
Also published as: EP0570583A1; EP0570583A4; JP2879947B2; DE69126039D1; EP0570583B1; US5425937A; JPH0441413A; DE69126039T2; AU658158B2; AU9049891A

Description

明細書

抗ケラチン抗体からなる毛髪改質剤、毛髪化粧料及び抗ケラチン抗体の製造方法

技術分野

本発明は、人毛髪特有のケラチン型中間径フィラメント構成蛋白質に対して免疫活性を有する抗体からなる毛髮改質剤又は毛髪損傷保護剤に関する。

また、本発明は毛髪化粧料に関し、更に詳しくは人毛髮のケラチン型中間柽フィラメント構成蛋白質に対して免疫活性を有する抗体を配合した毛髮化粧料に関する。

更に、本発明は前記毛髮改質剤又は毛髮損傷保護剤として有用な毛髪ケラチン型中間径フィラメント構成蛋白質に対して免疫活性を有する抗毛髪ケ-ラチン抗体の製造方法に関する。

背景技術

一般に毛髪は.、洗髪、ブラッシング、ドライヤーによる熱、パーマやヘアカラー等による美容処理を繰り返して施術することにより、著しく損傷劣化し、毛髮表面の構造が破壊される。その結果、乾燥してばさついたり、技毛や切れ毛を生じたり、強度低下を引き起こすと共に、毛髪の構成成分である蛋白質がシャンプー、パーマ、ヘアカラー等の処理により溶出し、毛髮から少しずつ消失してゆく。このように、蛋白質が溶出すると毛髪ばやせ衰えてますます損傷が進行する。毛髪は一度損傷すると自分の力で元に戻ることは不可能であり、このことから、美しく健康な毛髪を保持するためには、損傷を防ぐと共に、損傷した場合には毛髪を修復することが必要である。

従来 'この目的のために、シャンプー、リンスやトリ一トメント剤等の毛髪化粧料には、毛髮の保護成分として天然物由来の各種蛋白質加水分解物やそれらの誘導体が甩いられている。しかし、これらの物質は毛髪への吸着力は極めて小さく、特に水溶性であるために簡単に水で洗い流されてしまうなど欠点を有し、十分な効果が得られなかった。

一方、米国特許第 3 , 987 , 161 号明細書には、毛髪粒子そのものを抗原として得られた-杭血清を用いて、毛髪にボディ感を与えたりセット保持力を改善したりする方法が開示されている。しかしながら、この方法によつて得られる抗血清は毛髪蛋白への吸着力が非常.に弱く、毛髪からの蛋白質の溶出を防いだり、損傷した毛髪を修復する等の効果の点で未だ満足できるものには至っていない。

ところで、毛髪は、外側から毛髪鏃維を包み保護しているキユーティクル、毛髮鏃維であるコルテックス、そして中心のメデユラ（毛髄質）の 3 タイプの細胞から構成されている。

そのうちのコルテックスの主たる構成成分としては、織維性の「ケラチン型中間径フィラメント構成蛋白質（または α—ケラチン繊維蛋白）」、非繊維性の「マトリックス蛋白質」、及び細胞膜周辺蛋白質の 3つが挙げられる。

ケラチン型中間径フィラメント構成蛋白質は、水には不溶であるが尿素あるいは SDS 等の変性剤や還元剤の存在、あるいは化学修飾等によって可溶化される蛋白質で、表皮、爪、羽毛等にも存在することが知られている。毛髪由来のものは、システィンとプロリンを多く舍み、ダリシンをほとんど舍まないが、表皮由来のものはグリシンとセリンを多く含んでいる。

本発明においては、前記米国特許第 3, 987, 161 号明細書に記されたような単なる毛髪粒子でなく、上記の様に毛髮（および爪等）を過酷な条件で処理し、可溶化させて得られるケラチン型中間径フィラメント構成蛋白質を用いるものである。

このケラチン型中間径フィラメント構成蛋白質に対する抗体がゥサギ、マウス、モルモット等の動物の血清中あるいは該動物由来の睥臓細胞培養液中で発生することは公知である（Baden ： J. Invest. Dermatol . , 75, 311 , 1980 ； Cotton ： Br . J . Derma to 1 , 3 , 63, 1984 ；田沢敏男：日皮会誌 95, 157, 1985 ； Held ： Differentiation, 32, 101, 1986 等）。しかしこれらのマウスあるいはモルモット由来の抗体は表皮由来のサイトケラチンとも反応して組織学的に表皮由来細胞組織を染めることが示されており、できた抗体は頭皮等の他の部位にも反応することが予想される。兎由来の抗体については、皮膚には反応しにくく、毛髮に結合することが示されているが、この場合の毛髮というのは毛包部および毛根部といつた角質化が不完全の柔らかい組織のことであり、本発明の目的とする完全に角質化した毛幹部への該抗体の結合性について論じているものではない。むしろモノクローナル抗体を扱つた田沢氏および French ( J. Ce 11. Bi oi . , 102,1412, 1986) らが論じているように角質化した部位には抗体が結合しないという考えが一般的であった。

また、雌ゥシ科動物は注射された抗原に対し血清抗体を発生するほかに、該動物はまた血清と同一の抗体を舍有する乳を生成し、抗体製造の有効な工場であることばよく確証されている。しかし、抗原としてケラチン型中間径フイラメント構成蛋白質を用いて製造した抗体の皮 Jfや毛髪に対する結合性については全く判らなかった。発明の開示

本発明の目的とするところば、皮膚には吸着せず、毛髪に特異的に結合し、その結合は水等では洗い落ちることなく毛髪に吸着して、毛髪の損傷を防止したり（蛋白質の溶出を防ぐ等）損傷毛を回復させる作用といつた損傷保護作用や、毛髮になめらかさや柔軟性を与え、毛髪の櫛通り、ツヤを改善するという毛髮改質剤を提供することにある。

また、毛髪の櫛通り、ツヤやしなやかさを改善する効果を持ち、そして損傷毛に対してその損傷の修復や改善に効果のある毛髪化粧料を提供することにある。

更に、抗毛髪ケラチン抗体を効率よくかつ多量に生産する方法を提供することにある。

本発明者等は上述の目的を達成するために鋭意研究した結果ケラチン型中間径フィラメント構成蛋白質に対する抗体が、水等では洗い落ちることがない程強固にしかも特異的に毛髪に吸着して、毛髪からの構成蛋白質の溶出を防ぎ、損傷毛髪を回復させる効果を持ち、毛髪-の櫛通り、ツヤやしなやかさを改善する等の有用顕著な効果を持つこと見出し、毛髪改質剤又は毛髪損傷保護剤の本発明を完成するに至った。

また、毛髪改.質剤又は毛髮損傷保護剤を配合した毛髮化粧料においても、毛髪の櫛通り、ツヤやしなやかさを改善する等の有用顕著な効果を持ち、特に損傷毛に対してその損傷の修復や改善に効果のあることを見い出し、本発明を完成した。更に、毛髪に強い親和性をもって、かつ特異的に結合し、毛髪を有効に改質する抗毛髮ケラチン抗体を、効率よくかつ多量に製造する方法を見いだし、本発明を完成した。

以下、本発明の構成について詳説する。

本発明の抗原として用いるケラチン型中間径フイラメント構成蛋白質（以下、単にケラチンと称することがある。）の原料としては、ヒト体毛および毛髪、羊毛、羽毛、爪などが挙げられるが、種差を考慮するとヒト体毛および毛髪が好ましく、特に毛髪が最も好ましい。これらの原料からケランを分画するには、公知の方法に従えばよく、原料中のケラチンのジスルフィド結合を還元あるいは酸化処理により開裂し、可溶化させ抽出する方法が一般的である。還元処理の場合、予めアルカリ条件下で可溶化助剤として種々の変性剤、例えば尿素、塩酸グァ二ジン等を加えて可溶化させる。これらから濾過または遠心操作により不溶物質を取り餘くことにより、ケラチンを主成分とする抗原となりえる。より好ましくは透折操作などにより、変性剤を始めとする低分子不純物を適宜滅量あるいば除く操作を行い抗原とするこのときケラチンを不溶化させ凝集物とした抗原としてもよい。また、上記ケラチンのスルフヒドリル基にョード齚酸を付加せしめ、カルボキシメチル化反応などを行うことにより、水可溶性のケラチンを主成分とする抗原となり得る。この場合もより好ましくは透折操作などにより低分子不純物を除く操作を行い抗原とする。またこの様にして得られた抗原から更にケラチンをゲル濾過法あるいは等電点沈澱法あるいはまた亜鉛塩添加等により分画精製を行い抗原としてもよい。本発明の抗体は、毛髪や羽毛、爪等に舍まれるケラチン型中間径フィラメント構成蛋白質（ケラチン）を抗原とし、動物を免疫化することによって、あるいは、細胞融合、遺伝子操作等を駆使して得られるものであって、人毛髮のケラチン型中間径フィラメント構成蛋白質に対して免疫活性を有するものである (以下、この抗体を抗毛髪ケラチン抗体と称す）。

前記抗原を用いて、公知の方法により哺乳動物や鳥類等を免疫化することによって該抗毛髪ケラチン抗体を得ることができる。

抗体の製造に供せられる動物としては、ゥシ科動物、馬、兎、鶏等適当な家畜を選ぶこ-とができる。ゥシ科の動物としては、乳を分泌するあらゆるゥシ属の動物（牛、羊、山羊）が好ましく、特に雌ゥシが最も好ましい。

免疫方法としては、皮下注射、腹腔内投与、筋肉注射、静脈注射等による通常の方法や、乳腺内あるいは乳房リンパ節への力二ユレーシヨンあるいは注射による投与や、点募、点眼等の方法によって行うことが出来る。特に皮下、筋肉内、乳腺内あるいは乳房リンパ節およびその近傍への投与がより好ましい。抗原であるケラチンの投与量ば、所望の抗体価が得られ、かつ動物に対して悪影響を与えない量を適宜選択して用いれば良い。

必要に応じてフロイント完全アジュバント（ FCA)、フロイント不完全アジュバント（F I A) などのアジュバントを抗原と併用してもよい。またリボソーム等でマイクロカプセル化してもよい。

抗体は、これらの動物の常乳あるいは初乳、又は血清、または卵黄より得ることが出来る。

抗体産生培養細胞より抗体を得る方法としてば、公知の方法によって得ることができる。即ち、ケラチンを抗原として免疫化した哺乳動物や鳥類の脾細胞と、対応したミエローマ細胞株とを細胞融合し、ハイプリドーマを得る。この中から適したクローンを 1株あるいは複数株を選抜し、その細胞の培養上清より抗体を得ることができる。あるいはまた、公知の方法によつて、大腸菌等の微生物に抗毛髪ケラチン抗体あるいはその一部の遺伝子を導入発現させ、その培養により抗体あるいは抗体断片（ケラチンと特異的結合性を示すぺプチド断片）を得ることが出来る。

尚、抗体の力価（抗体価）は酵素免疫吸着法（EL ISA)、ラジオイムノアツセィ等を用いて測定することができる。また、必要に応じて、抗体価の推移をこれにて追跡し、追加免疫の時期或いは抗体の採取時期の目安とすることが出来る。

本発明の抗毛髮ケラチン抗体は上記のようにして得られた抗体あるいは抗体産生細胞の培養上清から更に免疫グロプリンを抽出、分画、分離することによって濃縮することが出来る。

乳から免疫グロブリンを取得する方法としては、公知の方法に従い実施できる。例えば、乳汁'を酸性の緩衝液で透折し、析出してくるカゼィン及び脂質を主成分とする不純物を遠心分離で除去し、透明性の上清を分取し粗精製免疫グロプリンを得る。更に必要に応じて陰イオン交換体（例えば DEAE—セルロース、 DEAE—セフアデックス、 QAE —セフアデックス）を用いたィォン交換クロマトグラフィ一を行って、免疫グロプリン画分を回収する。必要あれば、同じクロマトグラフィーを繰り返すか、ゲル濾過又はァフィニティ一によつて更に精製することもできるし Archives of Biochemistry and Biopysics, 108, 230, (1968) ； The Journal of Immunology, 103,334, (1969) ； B i och i m i ca Et Biophysics Acta, 181, 381 , (1969) ； Journal of Dairy Science 55, No2,151, (1972)および Journal of Immunology, 181, No 2 , 461, (1977) 〕。

哺乳動物の血清又は血漿から免疫グロプリンを分取する方法も既に多くの報告がある。例えば、〔 Transfusion, 6 , 146, C1966) ,-Journal of Biological Chemistry, 234, 2645，（1959) ； Biochemist Biophysica Acta, 214, 107, (1970) 〕等がありこれらに従って実施出来る。

工業的に適した方法としては、哺乳動物の血清又は血槳を生理食塩水で 2〜 3倍に希釈し段階的硫安分面法で粗椿製免疫グロブリンを得、更に必要に応じてこれらから次にィォン交換体 (例えば D E A E—セルロース、 DEAE—セフアデックスの様な陰ィォン交換体又は CM—セルロース及び CM—セフアデックスの様な陽イオン交換体）による分画によって精製する。更に必要に応じてゲル濾過によつて分画を行うことも出来る。

卵黄から免疫グロプリンを分取する方法も既に多くの報告がある。例えば、 Proc.Soc.Exptl.Bioし Med. , 126, 312, (1967) ； Immunol. Com瞧， 9 , 495, (1980) 等があり、これらに従つて実施できる。例えば、 -卵から分離した卵黄とこれと同容量の PBS (生理りん酸緩衝液、 ΡΗ7.4 ) にて希釈し、更に 2倍量のクロ口ホルムを加え、脂質を抽出除去する。得られた水層から硫安分面法により粗精製免疫グロプリンを得る。更に必要に応じてこれらからィォン交換体（例えば DEA セファロース、 DEAE 一セルロースの様な陰ィォン交換体又は CM—セファロース、 CM —セルロースの様な陽ィォン交換体）による分面によつて精製する。更に必要に応じてゲル濾過又はァフィ二ティーによって分画を行うことも出来る。

更に必要に応じてパパイン或いはペプシン処理等の酵素処理を行い、免疫グロプリンの Fc部分を除去してもよい。

本発明の抗毛髮ケラチン抗体としては精製されたものが好ましいが、他の成分を舍有した未精製品でもよい。

以上の様にして得られる抗体は、水溶液或いは凍結乾燥、噴霧乾燥等の操作により得た乾燥品として供される。

抗毛髪ケラチン抗体の毛髮化粧料への配合量は、その投与形態に応じた投与量に従って適宜選択すれば良く、例えば蛋白質 0. 1 %濃度にあたり 10²以上の抗体価を有する抗体画分を 0 . 00001 〜80重量％程度とすることが出来る。

本発明の毛髪改質剤又は毛髮損傷保護剤とは、抗毛髪ケラチン抗体を有効成分として舍むものである。

本発明の毛髮改質剤又-は毛髪損傷保護剤は、毛髮への付与形態に応じて種々の組成物に調製される。例えば、本発明の毛髪改質剤又は毛髪損傷保護剤として有用な抗毛髮ケラチン抗体の効果を損なわない範囲で通常使用される成分を配合でき、その組成物の形態としては、シャンプー、リンス、ヘアートリートメント、ヘア一トニック、ヘアーリキッド、ヘアークリーム、セットローション、ヘアーフォーム、ポマード、ヘアーブロー、パーマネントゥヱーブ用剤、ヘア力ラー剤等が挙げられる。本発明の毛髪化粧料には、抗毛髪ケラチン抗体の安定性を高める目的として糖、糖アルコール、タンパク、ペプチド、アミノ酸、無機塩、有機酸等の安定化剤を加えても良い。これら安定剤は本抗体に対して優れた安定化効果を有する。また通常の成分、例えば、油性成分、界面活性剤、保湿剤、アルコール、増粘剤、防腐剤、紫外線吸収剤、色剤、酸化染料、香料、精製水等が含まれてもよい。図面の簡単な説明

図 1 は、出産後 3 日目に再度抗原を追加免疫した牛の乳中抗体量の推移を示す。

図 2 は、間接蛍光抗体染色法の結果を示す。（a) は本発明抗体で反応させた毛髪切片。（b) は免疫していない牛より精製した対照抗体で反応させた-毛髪切片。（c) は溶媒の PBS で反応させた毛髪切片。

図 3 (a) は、膜に転写した毛髮ケラチンまたは表皮ケラチンについて、 CBB 色素染色の結果を示す。 (b) は、同様の処理をした毛髪ケラチンまたは表皮ケラチンと本発明抗体との反応性試験結果を示す。発明を実施するための最良の形態

以下実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれにより何ら制限されるものではない。

製造例は抗毛髪ケラチン抗体の製造例であり、抗体価の測定は ELISA 法によって行った。 96穴プレートに精製毛髪ケラチン抗原を 3.9 ng/穴コートし， 2次抗体として、ゥサギ由来抗体を測定の場合は、ペルォキシダ一ゼ標識したャギ抗ゥサギ IgG 抗体（ザィメット社、 65— 6120 ) 、牛の場合は、ペルォキシダーゼ標識したャギ抗ゥシ IgG · F(ab' ) ₂ 抗体（ E · Yラボラトリーズ社製 HAF— 413 ) を用いたサンドィツチ法にて行った。凍結品の場合の抗体価としても 0.1 %重量当たりとしてこれを用いた。更に試料の IgG 濃度を SRIDキット（バインディングサイト社製）を用いて定量し、 0.1 %濃度の抗体価を比活性として表した。また、試験例は毛髪からの蛋白質溶出試験，損傷毛髪修復試験及び官能面での性能評価試験であり、毛髮に対する作用の一般的な試験法である。配合量は重量％である。製造例 1

(抗原の調製）

30才男性の正常毛髪 500 mgを 2 %ポリオキシエチレンラウリル硫酸ナトリウム ( 3 E.O.) 水溶液にて洗浄後、 6 M尿素、 0.2 M 2—メルカプトエタノ一ル舍有 0.2 M トリス塩酸緩衝液（PH 9.2)125 mlに加え、 50てで 1時間攪拌し、これをテフロンホモゲナイザ一を用いてすりつぶした。更にこの抽出操作を操り返し、 20,000X g , 25分間遠心して上清 120 mlを得、ケラチン面分とした。このうち 24 ml をとり 0.85%塩化ナトリウム， 10mM 2 —メルカプトェタノ一ル舍有 20mMトリス塩酸緩衝液（PH9.2) に対して透折を行い低分子不純物を除去し、ケラチン抗原（以下、抗原 Aと略記）溶液を得た（蛋白質として 65mg) 。

残りのケラチン画分抽出液 96 ml に、 12 gのョード齚酸を加え（NaOHにて pH 8 に調整） 1.5 時間室温遮光下攙拌反応させた。これを生理食塩水に対して透折を行い低分子不純物を除去し、水可溶性のケラチン抗原（以下、抗原 Bと略記）を得た（蛋白質として 270 rag) 。更にこの抗原 B溶液（蛋白質として nOmg) 4部に 0.5 M齚酸ナトリゥム緩街液（pH 4.2) 1部を添加し（pH 4.2 になる様に酢酸で調整）、 1時間室温下攆拌しケラチンを等電点沈殿させた。これを 10,000 Xg, 15 分間遠心し上清部を除き、沈殺部を集めた。生理リン酸緩衝液（以下、 PBS と略記）にて溶解させ、.精製したケラチン抗原（以下、抗原 Cと略記）を得た（蛋白質として 134 mg) 。

(兎の免疫化）

次に、各抗原液（抗原 A, B , C ) を PBS にて蛋白質濃度 2 mg/ml に調整し、その溶液と FCA を 1 ： 1 の容量比で混合して油中水系型（以下、 W/0 型と略記）のェマルジヨンとし、 3匹の兎の背中数箇所に 1匹あたり 2 ml皮下投与し 2週間後、 4週間後更に同量を皮下投与した。 6週間目に更に同量の抗原液を耳静脈より静かにゆつくり 30分間かけて投与し免疫化した。

(抗血清の採取）

最終投与 1週間経過後（ 7週目）試験動物から採血し、遠心分離後、血清（以下、抗血清 A, B , Cと略記）を採取した。

(抗体の精製）

次に、得られた抗血清各々 60 ml に PBS 60mlを加え、これに飽和硫酸アンモニゥム溶液（pH7.0)80mlを攪拌しながら徐々に添加し、氷冷下 1 時間攪拌放置した。遠心分離（ΙΟ,ΟΟΟΧ g , 10分）後、沈澱物を集め、 60tnl PBSにて溶解し上記硫安塩折分画をくり返した。得られた沈殺物を約 120 mlの PBS にて溶解した液を 1/100 濃度 PBS に-対して透析し、生じた沈殺物を遠心にて除き、上清を凍結乾燥の操作を行い抗毛髮ケラチン抗体（以下、抗体 A, B , Cと以下略記）を得た。抗体価の測定は ELISA 法を用いて行い、それらの結果を表 1 に示す。表 1 製造例 1 製造例 2 血清抗血清 A 抗血清 B 抗血清 C 抗血清 D 凍結乾燥重量 610mg 750mg 510mg 540mg 免疫グロブリン量 470mg o40mg 430mg 440mg

0.1 %濃度の 12 X 10³ 25 X 10³ 28 XlO³ 1 X lO³ 抗体価以下略号抗体 A 抗体 B 抗体。抗体 D

製造例 2 (参考例） (抗原の調製）

正常毛髮を 2 %ポリオキシエチレンラウリル硫酸ナトリウム ( 3 B.O.) 水溶液にて洗浄後、風乾し、これを電気力ミソリにて細断し、 150 u m 以下のサイズの毛髪粉とした。 (兎の免疫化）つぎに生理食塩水を用-いて 50mg/mlの濃度にて懸濁し、等量の FCA と混合し W/0型ェマルジヨンとした。得られたェマルジヨンを各群 3匹の兎の臀部 2箇所に 1匹当たり 4 ml筋注投与し、 1週間後及び 2.週間後に更に同量を筋注投与した。 (抗血清の採取）最終投与 2週間後試験動物から採血し、遠心分離後、血清 (米国特許第 3, 987, 161号様の毛髪粉に対する抗血清、以下、抗血清 Dと略す。）を採取した。その抗血清 D に以下製造例 1 と同様な操作を行い、毛髪粒子抗体の凍結乾燥品（以下、抗体 Dと略記）を得た。この抗体の抗体価を ELISA 法によって測定した結果、 1 X 10³ 以下であった。製造例 3

(抗原の調製）

男性の正常毛髪 5 g と女性の正常毛髪 5 g とを混合し、 2 % ポリオキシエチレンラウリル硫酸ナトリウム（ 3 E.0. ) 水溶液にて洗浄後、 8 M尿素、 0.2 M 2 —メルカプトエタノール舍有 0.2 M トリス塩酸緩衝液（PH 9.2 ) 2.5 リットルに加え、 50て窒素バブリング下 1 時間攪拌し、これをテフロンホモジナイザ一を用いて磨り潰した。更にこの操作を繰り返し、 10, 000 X g、 30分間遠心して不溶物を除き毛髪ケラチン抗原を抽出した。これに 200 gのョ一ド酢酸- (予め 400gのトリスを溶かした溶液 760 mlに溶かす）溶液を加え、室温遮光下で 1 時間攪拌反応させた。

7 mlの 2—メルカプトエタノールを加えて反応を止め、充分な水に対して透折し 5 // m のフィルターを通し、不溶物を除去し毛髪ケラチン抗原溶液を得た（ 6 リットル）。更にこの液 4部に 0.5 M酢酸ナトリウム緩衝液（PH4.2) 1部を添加し（pH 4.2 になるように酢酸で調整）、毛髮ケラチンを等電点沈殺させた。 1000 X g. 10分間遠心し、上清部を除き、沈殺部を集めた。生理食塩水にて溶解させ、 0,2 m のフィルターを通して除菌し, 更に限外濾過膜にて濃縮して精製毛髪ケラチン抗原を得た（蛋白質として 2.6 g ) 。

(牛の免疫化）

この精製毛髪ケラチン抗原溶液を生理食塩水にて蛋白質濃度 20mgZmlに調整し、その溶液と FCA を 1 ： 1 の容量割合で混合して W/0型のェマルジヨンとした。得られたェマルジョンを、出産 2か月前の妊娠ホルスタイン牛 2頭の首に皮下投与した

(牛番号 1には 1 ml ：抗原量 lOmgZ頭、牛番号 2には 5 ml ：抗原量 50mgZ頭）。その後 10日間隔で、 FIA で作成したそれぞれ前回と同量の抗原を含んだェマルジョンを皮下あるいは筋注にて投与し免疫化した（ 1 〜 3回目：皮下投与、 4 〜 5面目：筋注）。

(抗体の採取）

出産直後より 3 日間初乳を補集した。クリームセパレーターにて脂肪層を除き、抗体（以下、抗体 E— 1 と略記）を得た。

これを用いて.該実験の脱脂乳の分折を行った結果を表 2 に示す。表 2から判る通り、抗原投与量の異なる処理牛においても、充分量の抗体を製造することができた。 (抗体の精製）

更にこの 2頭の脱脂乳を混合し、以下のように分画精製を行つた。脱脂乳に 0.1 N塩酸を添加して pH 4.5にしカゼィンを沈澱させ、濾布にて荒く沈澱を除き、 2500 X g の連続遠心操作にて上清を得た。中和した後 33%飽和になるように硫酸アンモニゥムを加え、抗体を塩折させた。 2500 X g の連続遠心操作にて沈殺部を集め、 PBS にて溶解し、この硫安塩折操作を繰り返した。 10mMリン酸緩衝液（ PH7.5)にて透折し、同緩衝液にて平衡化した 2 リットルの DEAEセルロースカラムに 5 回に分けてアブライした。 50mM塩化ナトリウム舍有同緩衝液にて抗体を溶出させ、この画分を集めた（抗体として 200 g ) 。この抗体画分の 20 g蛋白質分を硫安塩析にて濃縮し、 5 回に分けて PBS にて平衡化したセファアクリル S — 300 カラム（ 5 X 90cm) にァプラィし、主ピークを集め精製抗体（以下、抗体 E— 2 と略記）を得た（抗体として 15 g回-収）。 SDS ポリアクリルアミド電気泳動で 1 本のバンドとして確認した。更に残りの DE AEセルロース精製抗体画分を 3 回に分け、精製毛髮ケラチンを結合させた担体（ァフィゲル 15, 400cc) を用いたァフィ二ティークロマトグラフィ一に供した。 0.2 Mグリシン一塩酸緩衝液（pH 2.5) にて溶出するものを集め、特異的な抗体のみからなる高純度抗体 (以下、抗体 E— 3 と略記）を得た（3.2 g ) 。ここで得た精製抗体および高純度抗体を以下の試験例および応用例に供した。なお免疫化しないゥシの初乳からも本手法と同様に抗体を精製し、対照抗体として以下の試験例に供した。製造例 4

(牛の免疫化）

製造例 3で得た精製毛髪ケラチン抗原溶液を生理食塩水にて蛋白 R濃度 20ragノ m lに調整し，その溶液と FCA を 1 ： 1 の容量割合で混合して W/0型のェマルジヨンとした。得られたエマルジヨンを、出産 2か月前の妊娠ホルスタイン牛 2頭にそれぞれ 5 m lずつ筋肉内注射によって投与した。その 2週間後、で作成した同量の抗原量を含んだェマルジョンを乳房乳腺内に力二ユレーション投与し免疫化した。

(抗体の採取，精製）

出産直後より 4 日間初乳を捕集した。クリームセパレーターにて脂肪層を除き脱脂乳を得、これより抗体（以下、抗体 Fと略記）を得た。また製造例 3 と同様の精製方法で精製抗体および高純度抗体^得た。

該実験の脱脂乳の分折を行った結果を表 2に示す。表 2から判る通り、乳腺内投与免疫化牛においても充分量の抗体を製造することができた。製造例 5

(牛の免疫化）

製造例 3で得た精製毛髪ケラチン抗原溶液を生理食塩水にて蛋白質濃度 20mg / m lに調整し、その溶液と FCA を 1 ： 1 の容量割合で混合して W/0型のエマルジョンとした。得られたェマルジョンを、出産 2か月前の妊娠ホルスタイン牛 2頭にそれぞれ 5 m lずつ筋肉内注射によって投与した。その 4週間後、 F I A で作成した同量の抗原量を含んだエマルジョンを乳房リンパ節付近に注射投与し免疫化した。

(抗体の採取 · 精製）

出産直後より 4 日間初乳を補集した。クリームセパレ一ターにて脂肪層を除き脱脂乳を得、これより抗体（以下、抗体 Gと略記）を得た。また製造例 3 と同様の精製方法で精製抗体および高純度抗体を得た。

該実験の脱脂乳の分折を行った結果を表 2 に示す。表 2から判る通り、乳房リンパ節付近に注射投与し、免疫化した牛においても、充分量の抗体を製造することができた。製造例 6

製造例 3で一度免疫化した牛 1頭に、その翌年の出産 2か月前に，乳房乳腺内に力二ユレーシヨン投与しブーストした（抗原量 50mg、 FI A にて作成したェマルジョン）。出産直後より 4 日間初乳を捕集した。クリームセパレーターにて脂肪層を除き脱脂乳を得、これより抗体（以下、抗体 Hと略記）を得た。また製造例 3 と同様の精製方法で精製抗体および高純度抗体を得た。

該実験の脱脂乳の分析を行った結果を表 2に示す。表 2から判る通り、一度免疫化した牛において、適当な時期にブーストすることにより、充分量の抗体を製造することができた。

製造例 7

製造例 4で用いた牛 1頭の出産後 3 日目に乳房リンバ節付近に注射投与し、ブーストした（抗原量 50mg、 FI A にて作成したェマルジョン）。乳中の抗体価の推移を見ながら 1 力月間常乳を補集した。クリームセバレーターにて脂肪層を除き脱脂乳を得、これより抗体（以下、抗体 I と略記）を得た。また製造例 3 と同様の精製方法で精-製抗体および高純度抗体を得た。

該実験の脱脂乳の分折を行った結果を図 1および表 2に示す。

表 2 製造例牛番号補集脱脂乳量乳中抗体の分折

番号 (kg) IgG量（g) 比活性 *

3 1 21.3 200 1600

(抗体 E-1) 2 12.7 260 1800

4 3 41.0 1130 16000

(抗体 F ) 4 37.7 580 5600

5 5 43.0 1060 15000

(抗体 G) 6 41.1 1460 4200

6 2 30.4 870 7000

(抗体 H )

7 3 510 770 12000

(抗体 I )

*抗体価 Z G 量図 1、表 2から判る通り、一度免疫化した牛において、適当な時期にブーストすることにより、充分量の抗体を常乳にて製造することができた。

試験例 1 (毛髪からの蛋 S質溶出防止効果）

22才の女性のバージン毛髪を束ねて毛束（18cm、 5 g ) を作成し、常法に従ってパーマ処理を 3回繰り返し、パーマ処理毛髮を作成した。次に、製造例 1で得られた抗体 Aの 1.0 %PBS 溶液 50mlにパーマ処理毛髪を 1時間浸漬後、流水中で 10分間水洗して、 24時間風乾した（以下、抗体処理毛髮と略記）。次に、毛束から 0.5 gを切り取り、 0.07Mリン酸緩街液（pH 9.0 ) lOnrlに入れ、 45て .にて 24時間放置し、毛髪中の蛋白質を溶出させた。溶出してきた蛋白質ば口一リー法に従って定量した。これらの操作を 5回実施し、 5面の平均より蛋白質溶出量を求め、その結果を表 3 に示す。

尚、比較例として、上記抗体 Aの 1 %PBS 溶液に浸潰するかわりに、抗体を舍まない PBS 溶液、製造例 2で得られた抗体 D の 1 %PBS 溶液及びコラーゲン加水分解物〔㈱成和化成製、 '商品名：プロモイス W— 3 2 R〕に浸漬するほかは、上記方法と同様に実施した結果を合わせて表 3に示す。表 3 処理条件毛髪からの蛋白質溶出量毛髪の破断強度

( mg/ ml ) ( g / cmつ抗体 A 0.54 76.7 抗体 D 0.61 70.4 コラーゲン加水分解物 0.71 70.2 PBS ( コントロール） 0.62 70.1

表 3から明らかなように、本発明の抗毛髪ケラチン抗体は、毛髪からの蛋白質の溶出を防止する優れた特性を有し、良好な結果が得られた。これに対し、本発明の抗毛髪ケラチン抗体で処理しなかったもの、即ち、製造例 2 で得られた毛髪粒子抗体 (抗体 D ) やコラーゲン等の加水分解物は、毛髪からの蛋白質溶出防止効果が殆どなかった。試験例 2 (ダメージ毛髪の修復効果）

ダメージ毛髪の修復効果の指標となる毛髪の引張強度を測定するため、試験例 1 で作成した抗体処理毛髪の毛束より 50本の毛髪を取り出し、引張強度試験機（L.B. Chemical 社製）を用い、毛髪の太さと破断強度を測定し、単位断面積当たりの破断強度を箕出し、 50本の平均値を求めた。その結果を表 3 に示す _t また、比較例として上記抗体 Aの 1 %PBS 溶液に浸漬するかわりに、抗体を舍まない PBS 溶液、製造例 2 で得られた抗体 D の 1 %PBS 溶液及びコラーゲン加水分解物（商品名：プロモイス W— 32R ) に浸漬するほかは、上記方法と同様に実施した結果を合わせて表 3 に示す-。

表 3から明らかなように、本発明の抗毛髪ケラチン抗体は、強度の低下したダメージ毛髮の強度を修復し、切れ毛や枝毛を防止する優れた特性有し、良好な結果が得られた。これに対し、本発明の抗毛髪ケラチン抗体で処理しなかったもの、即ち抗体 Dやコラーゲンの加水分解物は、毛髪強度の修復効果が殆どなかった。試験例 3 (毛髪の官能面での改善効果一櫛通り、つや、しなやかさ、風合）

毛髪の櫛通りの改善効果を測定するため、試験例 1で作成した抗体処理毛髪の毛束より 50本の毛髪を取り出し、レーダー法摩擦測定器（日本レオロジ一社製）を用いて、その動摩擦係数を測定し、 50本の平均値を求めた。

また、毛髪のつやの改善効果を測定するため、同様に試験例 1で作成した抗体処理毛髮の毛束より 30本の毛髪を取り出し、ゴニオフォトメーター（村上色彩科学社製）を用いて測定した。つやは以下の計算式に従ってつや値を算出し、 30本の平均値を求めた。

つや値- (正反射光量一拡散反射光量） Z拡散反射光量

次に、 10名の専門検査員によって、上記抗体処理毛髪のしなやかさと風合について、抗体処理前の毛髪とどちらが良いか官能評価を行った。結果は-人数で示してある。

以上の櫛通り、ツヤ、しなやかさ及び風合の評価結果を表 4 及び表 5に示す。

また、比較例.として上記抗体 Aの 1 % PBS 溶液に浸漬するかわりに、抗体を含まない PBS 溶液、製造例 2で得られた抗体 D の 1 % PBS 溶液及びコラーゲン加水分解物（商品名：プロモイス W— 32 R ) に浸漬するほかは、上記方法と同様に実施した結果を合わせて表 4及び表 5 に示す表 4 処理条件動摩擦係数毛髪のつや値抗体 A 0.110 20.1 抗体 D 0.133 15.4 コラーゲン加水分解物 0.131 15.5

変な

PBS ( コントロール） 0.135いら

15.5

表 5 処理条件しなやかさ風良い悪い良い変ら悪いない抗体 A - 9 1 0 7 2 1 抗体 D 0 9 1 1 9 0 コラーゲン加水分解物 0 8 2 0 7 3

PBS ( コントロール

表 4及び表 5 から明らかなように、本発明の抗毛髮ケラチン抗体 Aは櫛通りとつやの改善効果に優れ、また毛髮をしなや力、に良い風合に仕上げるという顕著な効果が得られた。又、抗体 B、抗体 Cについても同程度の優れた効果が得られた。これに対し、本発明の抗毛髪ケラチン抗体で処理しなかったもの、即ち抗体 Dゃコラーゲンの加水分解物は、毛髪の改善効果が認められなかった。試験例 4 (毛髮結合試験）

本発明で製造した抗毛髪ケラチン抗体が毛髪（毛幹部）に結合することを間接蛍光抗体染色法を用いて確認した。男性（26 才）の正常毛髮を適宜な長さに切り TISSUE TEC II - OCT comp oundに 30分以上浸潰し凍結した。凍結プロックからクリオスタットにより 6 i m厚の切片を切り出し、 3 %ゼラチン（Difco 社製）でコートしておいた無蛍光スライドグラスに貼布した。充分に風乾させた後、 4 %パラホルムアルデヒドを用いて室温で 20分簡固定した。 PPBS で 10分間 3回洗浄した。

一方、製造例 3 で得られた高純度精製抗体（抗体 E— 3 ) あるいは免疫化しないゥシの初乳より精製した免疫グロプリン (以下、対照抗.体と略記）を 10%ゥサギ血清舍有 PBS (10%血清 PBS ) にて 0.5 nigZmlに希釈し、これを前記の組鎩切片と室温下 30分間反応させた。

PBS で 10分間 3回洗浄した後、 2次抗体としてフルォレセィンイソチオシァネート（ F I TC ) 標識ゥサギ抗ゥシィムノグロブリン抗体 10% (血清 PBS にて希釈したもの）を室温遮光下 30分間反応させた。 PBS で 10分間 3 回洗浄した後、封入し検鏡した。図 2 に結果を示す。

抗毛髮ケラチン抗体で反応させた標本のみ、毛髮全域にわたり蛍光発色が観察され、該抗体が毛髮に結合していることが認められた。試験例 5 (皮膚との反応性試験）

本発明で製造した抗毛髮ケラチン抗体が毛髮に特異的であるかどうかを調べるため、毛髪由来のケラチンと、皮膚由来のケラチンに対する抗体の反応性をウェスタン · プロッティング法を用いて試験した。

毛髮由来のケラチン（製造例 3 で人毛髮より抽出したケラチン型中間柽フィラメント構成蛋白質）と皮) t由来のケラチン (シグマ社製 K 0253 ) 各々 50 ng を SDS — 10%ポリアクリルアミドゲル電気泳動法にて展開し、これを Towbinらの方法に従つて蛋白質をニトロセルロース膜（ミリボア · リミテツド社製）に転写した。

この膜を 3 %ゼラチン（Difco 社製）を含む生理トリス塩酸緩衝液、 PH 7.6 (TBS と略記）にて、冷蔵庫中で一晩ブロッキングした。 0.1 %Tween 20を舍む TBS (TBSTと赂記）で 5分間 3回洗浄した後， TBS にて 0.1 mgZmlに調整した製造例 3 で精製した抗体（抗体 E— 2 ) を室温下 1時間反応させた。

TBSTで 5分間 3回洗浄した後、 2次抗体としてペルォキシダーゼ標識ャギ抗ゥシ · F(ab' )_z抗体（ E · Yラボラトリーズ社製 HAF— 413 、 TBSTにて 1200倍希釈したもの）と室温下 1 時間反応させた。

TBSTで 5分間 3回洗浄した後、 0.01%H₂0₂を含む 0.05% 4 - クロ口 _ 1一ナフト一ルを基質として発色させた。

なお、対照として示した C B B色素染色の場合の泳動展開蛋白質量は、各々 5 g とした。図 3に結果を示す。

これより、抗毛髪ケラチン抗体ば人毛髪由来のケラチン蛋白質と特異的に反応していることが観察され、抗体は皮膚との反応性は極めて弱いと判断される。

試験例 6 (毛髪からの蛋白質溶出防止効果）

女性の毛髪を束ねて毛束（18cm, 5 g ) を作成し、常法に従つてパーマ処理を 3回操り返し、パーマ処理毛髪を作成した。次に、製造例 3.で得られた精製抗体（抗体 E— 2 ) の 1,0 % PBS 溶液 50mlにパーマ処理毛髪を 1時間浸漬後、流水中で 10分間水洗して、 24時間風乾した（以下、抗体処理毛髪と略記）。次に、毛束から 0.5 gを切り取り、 0.07Mリン酸緩衝液（pH 9.0 ) 10mlに入れ、 45'Cにて 24時間放置し毛髪中の蛋白質を溶出させた。溶出してきた蛋白質はローリー法に従って定量した。これらの操作を 5 回実施し、 5回の平均より蛋白質溶出量を求めた。なお比較例として、上記抗体 1 % P B S溶液に浸漬するかわりに、抗体を舍まない PBS 溶液、対照抗体（製造例 3参照） 1 %PBS 溶液およびコラーゲン加水分解物（商品名：プロモイス W— 32 R ) 1 %PBS 溶液に浸漬するほかは上記方法と同様に実施レた結果を合わせて表 6 に示す。表 6

処理条件毛髮からの蛋 S質溶出量

、 mg/ m 1 )

抗体 E-2 0.53

対照抗体 0.68

コラーゲン加水分解物 0.92

PBS (コントロール） 0.66 表 6から明らかなように、本発明の抗毛髮ケラチン抗体は毛髪からの蛋白質の溶出を防止する優れた特性を有し、良好な結果が得られた。これに対し、通常の特異性のない抗体ゃコラーゲン加水分解物は毛髪からの蛋白質溶出防止効果が殆どなかつた。試験例 7 (ダメージ毛髪の修復効果）

ダメージ毛髪の修復効果の指標となる毛髪の引張強度を測定するため、ブラッシング 10， 000回処理して物理的に損傷させた女性の毛髪を、製造例 3で得られた精製抗体（抗体 E— 2 ) の 0.01〜 1 %PBS 溶液にて試験例 3 と同様に処理し、その毛束より 50本の毛髪を取り出し、引張強度試験機（L.B. Chemical 社製）を用いて毛髪の破断強度を測定し、 50本の平均値を求めた。その比較例として、 PBS 溶液、対照抗体 1 %PBS 溶液処理毛髪を用いた。その結果を表 7 に示す。表 7

処理条件毛髪の破断強度

ω

抗体 Ε-2 1 % 8 &.7

0.1 % 81.0

0.01% 80.3

対照抗体 1 % 75.4

PBS (コントロール） 74,0

また該抗体の効果を既存毛髪改質剤と比較した。製造例 3 で得られた精製抗体（抗体 Ε— 2 ) とコラーゲン加水分解物およびカチオン化セルロース〔ライオン㈱製、商品名：レオガード GP〕それぞれの 0.1 %PBS 溶液にて処理し、同様に試験したその結果を表 8 に示す。表 8 処理条件毛髪の破断強度

(g) 抗体 E-2 81.3 コラーゲン加水分解物 76.0 カチオンィ匕セルロース 73.1

PBS ( コント口一ノレ） 74.9

表 7および表 8から明らかなように、本発明の抗毛髪ケラチン抗体は、毛髪に特異的に結合するため、ダメージ毛髪の強度を修復し、切れ毛や技毛を防止する優れた特性を有するという良好な結果が得られた。これに対して、既存毛髮改質剤であるコラ一ゲン加水分解物およ-び力チォン化セルロースには、毛髮強度の修復効果が殆どなかった。

試験例 8 (毛髪の官能面での改善効果一つや、櫛通り、しなやかさ、風合） .

毛髪のつやの改善効果を測定するため、女性のパーマ毛髮と、製造例 3で得られた精製抗体（抗体 E — 2 ) の 1 %PBS 溶液を用いて試験例 3 と同様に処理してつや値を算出し、 30本の平均値を求めた。

その比較例として、 PBS 溶液、対照抗体 1 % PPBS 溶液およびコラーゲン加水分解物処理毛髪を用いた。その結果を表 9に示す。表 9

処理条件毛髪のつや値抗体 E-2 21.9

対照抗体 15.3

コラーゲン加水分解物 15.9

PBS (コントロール） 15.0 毛髪の櫛通りの改善効果を測定するため、女性のブラッシング毛髪を、製造例 3で得られた精製抗体 1 %溶液にて試験例 6 と同様に処理し、その毛-束より 50本の毛髪を取り出し、レーダ一法摩擦測定器（日本レオロジ一社製）を用い、毛髪の摩擦係数を測定して 50本の平均値を求めた。

その比較例として、 PBS 溶液、対照抗体 1 %PBS 溶液およびコラーゲン加水分解物処理毛髪を用いた。その結果を表 10に示す。表 1 0 処理条件動摩擦係数抗体 E- 2 0.118 対照抗体 0.125 コラーゲン加水分解物 0.124

PBS (コントロール） 0.126

変な

いら

次に、 10名の専門検査員によって、上記抗体処理毛髮のしなやかさ、風合について、抗体処理前の毛髪とどちらが良いか官能評価を行った。結果は人数で示してある。その比較例として、 PBS 溶液、対照抗体 1 %PBS 変溶な液およびいらコラーゲン加水分解物処理毛髮を用いた。その結果を表 11に示す。表 1 1 処理条件しなやかさ風良い悪い良い悪い抗体 E-2 8 2 0 2 対照抗体 1 8 1

コラーゲン加水分解物 2 7 1

PBS ( コントローノレ） 1 表 9、表 10および表 11から明らかなように、本発明の抗毛髪ケラチン抗体は、つやと櫛通りの改善効果に優れ、また毛髪をしなやかに良い風合に仕上げるという顕著な結果が得られた。これに対し、通常の特異性のない抗体ゃコラーゲン加水分解物は毛髪の改善効果が認められなかった。実施例 1 (シャンブー）

下記の成分を常法によつて混合してシャンブーを調製した。成分重量％

ポリオキシエチレンラウリル

エーテル硫酸ナトリウム（ 2 E. 0.) 15.0

ャシ油脂肪酸ジエタノールアミド 5.0

ジステアリン酸エチレングリコール 1.5

安息香酸ナトリウム - 0.2

BDTA 0.2

塩化ナトリウム 1.0

a m

香料 mm

抗体 A 1.0

精製水残余上記実施例 1 のシャンプーで洗髪した頭髪は、抗体 Aを配合じない他は実施例 1 と同組成のシャンプーに比べて、パサつきがなく、櫛通りも良く、なめらか、ツヤ、手触りなどに関して良好な仕上がりを示した。実施例 2 (ヘアーリンス）

下記の成分を常法によって混合して、ヘア一リンスを調製し

成分重量％

塩化ステアリル

トリメチルアンモニゥム 3.0

セタノ一ル 2.0

モノステアリン酸グリセリン 1.5

1 , 3 —ブチレングリ-コ一ル 5.0

流動パラフィン 2.0

コラーゲン加水分解物 0.5

色素

香料 mm

抗体 A 0.5

精製水残余市販のシャンプ一で洗髪した後で、上記実施例 2 のへアーリンスで処理した毛髪は、抗体 Aを配合しない他は実施例 2 と同組成のへアーリンスと比較して、毛髮にしっとり感、つや、櫛通りなどに関して良好な効果を示した。実旌例 3 (ヘアートリートメント）

下記の成分を常法によって混合して、ヘアートリートメントを調製した。成分重量％

塩化ジステアリル

ジメチルアンモニゥム 1.0

セタノール 5.0

モノステアリン酸グリセリン 2.0

プロピレングリコ一クレ 6.0

キサンタンガム 0.3

色素

香料

抗体 A 5.0

精製水残余市販のシャンプーで洗髪した後で、上記実施例 3 のへアートリートメントで処理した毛髮は、抗体 Aを配合しない他は実施例 3 と同組成のヘアートリートメントに比べて、毛髪の櫛通りしっとり感、つやが良好であり、特に損傷毛に対してその損傷の修復や改善に効果があつた。実施例 4 (ヘアークリーム）

下記の成分を常法によって混合して、ヘアークリームを調製した。成分重量％

ステアリン酸 5.0

ステアリルアルコール 2.0

ポリオキシエチレン

ソルビタンモノステアレート（20 E.O.) 3.0

流動バラフィン 15.0

ミツロウ 2.0

ラノリン . 2.0

グリセリン 3.0

ポリビュルアルコール 1.0

防腐剤適量香料

抗体 B 1.0

精製水残余上記実施例 4 のへアークリームで処理した頭髪は、抗体 Bを配合しない他は実施例 4 と同組成のへアークリームと比較してうるおい、つや、しなやかさやなめらかさに優れて、またバサつき等の損傷が改善された。

実施例 5 (ヘアートニック）

下記の成分を常法によって混合して、ヘアートニックを調製した。

成分重量％

ビォゾール' 0.1

サリチル酸 0.2

L—メントール - 0.2

塩化カルプロニゥム 0.5

イノシトール 0.1

ェタノ一ル 20.0

香料

饥体 C 1.0

精製水残余上記実施例 5 のへアートニックで処理した頭髪は、抗体 Cを配合しない他は実施例 5 と同組成のへアートニックと比較してうるおい、つややマイルドな感触に優れていた。実施例 6 (ヘア一ローション）

下記の成分を常法によって混合して、ヘアーローションを調製した。

成分重量％

エタノール 10. 0

モノォレイン酸ポリオキシ 1 . 0

エチレンソルビタン（20 E . 0. )

防腐剤適

香料適直

抗血清 A 0. 5

精製水残余上記実施例 6 .のへアーロ一ションで処理し、ドライヤーで乾かしたところ、抗血清 Aを配合しない他は実施例 6 と同組成のヘア—ローションと比較して、頭髮に良好なうるおい及びはりが得られ、なめらかさ及びしなやかさも良好であった。実施例 7 ( トリートメントフォーム）

下記の成分を常法によつて混合して得られた原液 95部に、噴射ガスとして液化石油ガス（LPG) 5部を加えスプレー缶に充塡し、トリートメントフォームを調製した。成分重量％

塩化ステアリルトリメチル

アンモニゥム 0.4

流動パラフィン 1.0

シリコーン油 2.0

プロビレングリコール 3.0

ボリォキシエチレン硬化ヒマシ油 1.0

(80 B.O.)

ポリオキシェチレン硬化ヒマシ油 0.5

(10 E.O.) - クェン酸ナトリウム 0.2

エタノール 7.0

香料

抗血清 B 0.5

精製水残余上記実施例 7 のトリートメントフォームで処理した頭髮は、抗血清 Bを配合しない他は実施例 7 と同組成のトリ一トメントフォームと比較して、頭髪に良好なうるおい及びはりが得られなめらかさ及びしなやかさも良好であり、特に損傷毛に対してその損傷の修復や改善に効果があった。

実施例 8 (ブラッシングスプレー）

下記の成分を常法によって混合して得られた原液 3 0部に、噴射ガスとして液化石油ガス（LPG ) 70部を加えスプレー缶に充塡し、ブラッシングスプレーを調製した。

成分重量％

塩化べへニルトリメチルァンモニゥム 0.1

流動バラフィン 3.0

シリコーン油 - 3.0

香料

抗血清 C 0.5

エタノール 10.0

精製水残余

上記実施例 8 のブラッシングスプレーで処理した後、頭髪にブラッシングを繰り返し行ったところ、抗血清 Cを配合しない他は実施例 8 と同組成のブラッシンダスブレーと比較して、毛髮の損傷が少なく、枝毛の発生も減少した。また、つや、櫛通りやしなやかさも良好であった。実施例 9 (パーマネントウエーブ用第 1剤）

下記の成分を常法によつて混合して、パーマネントウェーブ用第 1剤を調製した。 ' 成分重量％

チォグリコール酸ァンモニゥム 12-0

(50%)

モノエタノールアミン 1.0

アンモニア水 1.0

加水分解コラーゲン液- 5.0

EDTA 0.05

香料

抗体 A 1.0

抗体 B 1.0

精製水残余常法により実施例 9 のパーマネントウユーブ用第 1剤で処理後、市販の第 2剤で処理したところ、抗体 A及び抗体 Bを含有しない他は実施例 9 と同組成のパーマネントウユーブ用第 1剤と比較して、頭髮の損傷が少なく、セット力、セット保持性も良好であり、つや、しなやかさなどの点で優れた仕上がりを示した。実施例 10 (ヘアカラー第 1剤）

下記の成分を常法によって混合して、ヘアカラ一第 1剤を調製した。成分重量％

ノヽ 'ラフエ二レンジァミン 0.3

レゾノレシン 0.2

メタアミノフユノール 0.03

パラアミノフヱノール 0.05

アンモニア水 7.5

セタノール 16.0

ラウリル硫酸ナトリウム 4.2

亜硫酸ナトリウム 0.2

加水分解ゼラチン 3.0 BDTA 適量

香料適量

抗体 A 1. 0

抗血清 C 1. 0

精製水残余上記実施例 10のヘア力ラー第 1剤と 6 %過酸化水素水溶液とを 1 : 1 の割合で混合し、常法に従ってヘアカラー処理をしたところ、抗体 Aと抗血清 Cを舍有しない他は実施例 10と同組成のヘアカラー第 1剤と比較して、頭髪の損傷が少なく、つや、しなやかさなどの点で優れた仕上がりを示した。実施例 11 (シャンプー）

製造例 3で得られた精製抗体を用いて、シャンプ一を調製した。配合組成は下記の通りである。成分重量％

ボリォキシエチレンラウリスレ

エーテル硫酸ナトリウム ( 2 B. 0 J 15. 0

ャシ油脂肪酸ジエタノールアミド 5. 0

ジステアリン酸エチレングリコール 1. 5 安息香酸ナトリウム 0.2

EDTA 0.2

色素

香料

抗体 E— 2 1.0

精製水残余上記実施例 11のシャンブ一は、該抗体を配合しない他は実施例 11と同組成のシャンプーに比べて，パサつきがなく、櫛通りも良く、なめらかさ、つや、手触りなどに関して良好な仕上がりを示した。実施例 12 (ヘアートリートメント）

製造例 3で得られた高純度精製抗体（抗体 E— 3 ) を用いてヘア一トリートメントを調製した。配合組成は下記の通りである。成分重量％

塩化ジステアリルジメチルアンモニゥム 1.0

セタノール 5.0

モノステアリン酸グリセリン 2.0 プロピレングリコ―ル 6. 0

色素適 T

香料適更

抗体 E - 3 0. 1

精製水残余市販のシャンプ一で洗浄後、上記実施例 12のヘアートリートメントで処理した毛髪は、該抗体を配合しない他は実施例 12と同組成のヘアートリートメントに比べて，毛髪の櫛通りも良くしっとり感、つやが良好で、特に損傷毛に対してその損傷の修復ゃ改善に効果があった。また手触りなどに関して良好な仕上がりを示した。産業上の利用可能性

本発明により、皮膚に-は吸着せず毛髪に対して強い親和性をもってかつ特異的に結合し、これにより蛋白溶出を防ぎ、櫛通りを改良し、つや、しなやかさ、風合等毛髪を有用に改質し、毛髪の損傷を防ぐと共に毛髪を修復することができる毛髪改質剤又ぱ毛髪損傷保護剤が提供された。

また、本発明により、毛髪に対して強い親和性をもって、かつ特異的に結合し、これにより毛髪の構成蛋白質の溶出を防ぎ，櫛通りを改善し、つや、しなやかさ、風合等毛髮を有用に改質し、毛髪の損傷を防ぐと共に毛髪を修復することのできる毛髮化粧料が提供された。

更に、本発明により、皮膚に吸着せず毛髪に対して強い親和性をもって且つ特異的に結合し、これにより毛髪の構成蛋白質の溶出を防ぎ、櫛通りを改善し、つや、しなやかさ、風合等毛髪を有用に改質し、毛髪の損傷を防ぐと共に毛髪を修復することのできる毛髮改質剤として有用な抗毛髮ケラチン抗体の効率良い製造方法が提供された。

Claims

請求の範囲

1. 人毛髮のケラチン型中間径フイラメント構成蛋白質に対して免疫活性を有する抗体を有効成分としてなる毛髮改質剤。

2. 人毛髪のケラチン型中間径フイラメント構成蛋白質に対して免疫活性を有する抗体を有効成分としてなる毛 ¾損傷保護剤。'

3. ケラチン型中間径フイラメント構成蛋白質で動物を免疫することによって得られる抗体を有効成分としてなる毛髪改質剤。

4. ケラチン型中間径フイラメント構成蛋白質で動物を免疫することによって得られる抗体を有効成分としてなる毛髪損傷保護剤。

5. 請求の範囲 1 〜 4 のいずれかに記載の毛髪改質剤又は毛髪損傷保護剤を含有してなる毛髮化粧料。

6. ゥシ科動物を免疫し、その乳より抗体を得る方法に於いて、免疫原としてケラチン型中間径フィラメント構成蛋白質を用いることを特徴とする人毛髪のケラチン型中間径フィラメント構成蛋白質に対して免疫活性を有する抗体の製造方法。

7. 前記ゥシ科動物が雌ゥシである請求の範囲 6記載の抗体の製造方法。

8. ケラチン型中間径フィラメント構成蛋白質をゥシ科動物に投与し、その乳より抗体を採取することを特徴とする毛髪改質剤の製造方法。

9. 前記のゥシ科動物が雌ゥシである請求項 8記載の毛髪改質剤の製造方法。