JPH06116292A - 蛋白質及び抗体並びに毛髪改質剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 ダメージヘアの診断に有用な抗体及び、毛髪
の損傷を保護あるいは改善し、くし通り、しなやかさ、
風合い等を良好にする毛髪改質剤を提供するにある。 【構成】 人毛髪中に存在するマトリックス蛋白質に対
して免疫活性を有する抗体の抗原となる蛋白質であっ
て、下記物理特性を有する蛋白質、及び該蛋白質を抗原
とする抗体、並びに該抗体を含有する毛髪改質剤。 記 １．分子量；１２０００〜１４０００ ２．アミノ酸組成；Cys 4.2 〜8.7 ，Asx 5.4 〜8.5 ，
Thr 6.8 〜12.1，Ser 7.0 〜11.5，Glx 7.1 〜10.4，Pr
o 9.4 〜15.9，Gly 9.2 〜13.2，Ala 1.1 〜7.4，Val
2.7 〜6.4 ，Met ０〜3.0 ，Ile 1.5 〜6.2 ，Leu 7.8
〜12.6，Tyr ０〜3.5 ，Phe 0.8 〜4.0 ，Lys ０〜2.5
，His ０〜2.5 , Arg 0.3 〜4.2

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規な蛋白質，抗体，
及び毛髪改質剤に関し、更に詳しくは、毛髪の損傷を保
護あるいは改善し、くし通り、しなやかさ、風合い等を
良好にする特性を備える毛髪改質剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】毛髪はシャンプー、ブラッシング、ヘア
ードライアー、パーマ、ヘアーカラー等の物理的・化学
的原因により損傷し、毛髪の表面構造が破壊される。こ
の破壊により、枝毛、裂毛を生じるとともに、毛髪の構
成成分である蛋白質が破壊部分から溶出して行き毛髪か
ら少しずつ消失して行く。このように、蛋白質が溶出す
ると毛髪は痩せ衰えて脆弱化する。ところが、毛髪は一
度損傷すると自分の力で元に戻ることができず、放置し
ておくと毛髪の損傷が進行して枝毛裂毛になり易くな
る。

【０００３】従って、美しく健康な毛髪を保持するため
には、損傷を防ぐとともに、損傷した場合は毛髪を修復
することが必要である。

【０００４】従来この目的のために、リンスやトリート
メント等の毛髪化粧料には、毛髪の保護成分として、従
来天然物由来の各種蛋白質加水分解物及びその誘導体が
用いられてきた。しかしこれら物質は安全性が高いもの
の、毛髪への吸着力は極めて小さく、水溶性であるため
洗い流されてしまい、充分な効果が得られなかった。

【０００５】一方、ＵＳ３９８７１６１（１９７６年）
において毛髪粒子そのものを抗原として得られた抗血清
を用いて、ボディ感を与えたり、セット保持力を改善し
たりする方法が開示されている。しかし、この方法によ
っても損傷した毛髪を修復することはできない。加えて
くし通りを悪くする等の問題がある。

【０００６】ところで毛髪は、外側から毛髪繊維を包ん
で、保護しているキューティクル、毛髪繊維であるコル
テックスそして中心のメデュラ（毛髄質）の３タイプの
細胞から構成されている。そして、キューティクル、コ
ルテックスの主たる構成成分としては、繊維性の「ケラ
チン型中間径フィラメント構成蛋白質（またはα−ケラ
チン繊維蛋白質）」、非繊維性の「マトリックス蛋白
質」、及び「細胞膜周辺蛋白質」の３つが挙げられる。

【０００７】マトリックス蛋白質には、アミノ酸組成と
してシスチンが３０％以上と著しく高い超高含硫蛋白
質、２０％前後の高含硫蛋白質、比較的グリシン及びチ
ロシン含量が高い高チロシン蛋白質、の３つがあり、そ
の多くは分子量数千から３万程度の大きさであることが
知られている。

【０００８】このマトリックス蛋白質は、通常水には不
溶であるが、還元剤や尿素またはＳＤＳ等の変性剤、あ
るいは化学修飾によって可溶化される蛋白質で、爪、羽
毛等にも存在することが知られている。

【０００９】また、このマトリックス蛋白質はパーマ等
により毛髪が損傷を受けると、その結果として毛髪内部
から溶出することが指摘されている。

【００１０】マトリックス蛋白質の調製法としては、原
料中のマトリックス蛋白質のジスルフィド結合を還元あ
るいは酸化処理により開裂し、可溶化させ、その後スル
フヒドリル基にヨード酢酸を付加せしめ、水可溶性にし
たものを等電点沈殿等の処理によりα−ケラチンを除去
する方法が知られている。

【００１１】Ｓａｉｄ等は、これら可溶化したマトリッ
クス蛋白質をＣ4 逆相クロマトグラフィーで分離した
〔Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．，３２４巻（１９８
５），６５ページ〕。

【００１２】また、Ｋａｔｕｕｍｉ等〔Ａｒｃｈ．Ｄｅ
ｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．，２８１巻（１９８９），４９
５ページ〕は毛髪蛋白質をＳ−カルバモイルメチル化後
可溶化し、２次元電気泳動によりマトリックス蛋白質の
分離を行なった。

【００１３】しかし、分離した蛋白質はいずれも修飾蛋
白質となっており、天然の蛋白質そのものではなかっ
た。そのため、これらの蛋白質を抗原とする抗体は、蛋
白質の修飾部分を認識するものがほとんどであり、毛髪
への結合性が低いという欠点を有している。

【００１４】マトリックス蛋白質を抗原として得られた
抗体に関する報告がＦｒａｔｅｒによってなされている
〔Ａｕｓｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．，２９巻（１９７
６），４５３ページ〕が、この報告では角質化の不完全
な毛包部及び毛根部での抗体の反応性が論じられてお
り、完全に角質化した部分にはむしろ抗体は結合しない
とされている。

【００１５】また、Ｌｙｎｃｈ等はマトリックス蛋白質
に対するモノクローナル抗体の調製を行なったが、分子
量１００００〜２５０００の広範囲の蛋白質を認識する
ものであり、特異性が低かった。

【００１６】抗体を用いた毛髪改質剤としては、毛髪粒
子に対するもの〔ＵＳＰ３９８７１６１〕やケラチンに
対するもの〔特開平４−２９９１２，特開平４−４１４
１３〕等があるが、マトリックス抗体でないため、マト
リックス蛋白質に対する特異性が弱い。

【００１７】毛髪のダメージ化の程度を示す指標は現在
のところ存在しない。しかし、ダメージの早期に溶出さ
れる個々のマトリックス蛋白質に対する抗体を用いれ
ば、ダメージ度の指標となし得る。

【００１８】

【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的と
するところは、カルボキシメチレーション等蛋白質の修
飾による可溶化を行なわずに精製したマトリックス蛋白
質，及び該蛋白質を抗原とする抗体並びに該抗体を含有
する毛髪改質剤を提供するにある。

【００１９】

【課題を解決するための手段】上述の目的は、人毛髪中
に存在するマトリックス蛋白質に対して免疫活性を有す
る抗体の抗原となる蛋白質であって、下記物理特性を有
する蛋白質，及び該蛋白質を抗原とする抗体，並びに該
抗体を含有する毛髪改質剤によって達成される。

【００２０】記 １．分子量；１２０００〜１４０００（１２〜１４ｋ） ２．アミノ酸組成；Cys 4.2 〜8.7 ，Asx 5.4 〜8.5 ，
Thr 6.8 〜12.1，Ser 7.0 〜11.5，Glx 7.1 〜10.4，Pr
o 9.4 〜15.9，Gly 9.2 〜13.2，Ala 1.1 〜7.4，Val
2.7 〜6.4 ，Met ０〜3.0 ，Ile 1.5 〜6.2 ，Leu 7.8
〜12.6，Tyr ０〜3.5 ，Phe 0.8 〜4.0 ，Lys ０〜2.5
，His ０〜2.5 , Arg 0.3 〜4.2

【００２１】本発明においてマトリックス蛋白質の原料
としては、人間の体毛及び毛髪、羊毛、羽毛あるいは爪
等が挙げられるが、種差を考慮して人間の体毛及び毛髪
が好ましく、特に毛髪が最も好ましい。

【００２２】これらの原料からマトリックス蛋白質を精
製するには、公知の方法を用いればよく、原料中のマト
リックス蛋白質のジスルフィド結合を還元あるいは酸化
処理により開裂し、可溶化させ抽出する方法が一般的で
ある。還元処理の場合、予めアルカリ条件化で可溶化助
剤として種々の変性剤、例えば尿素、塩酸グアニジン等
を加えて可溶化させる。これらから濾過または遠心操作
により不溶物質を取り除き、更に得られた上清からゲル
濾過あるいは限外濾過法等により、α−ケラチンを除い
た画分を集めることによってマトリックス蛋白質画分を
得ることができる。

【００２３】得られた画分を更にイオン交換樹脂等を用
い等電点の違いにより分離し、目的とする蛋白質を精製
することができる。より好ましくは、ＳＤＳ−ポリアク
リルアミド精密分子量分画法を用い、目的とする蛋白質
をゲルから溶出する方法等により精製回収することがで
きる。

【００２４】本発明の蛋白質の分子量を、例えばＳＤＳ
−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ）によって測定した値は、１２０００〜１４０００で
ある。

【００２５】本発明の蛋白質のアミノ酸組成は、例えば
酸加水分解後、ｏ−フタルアルデヒドを蛍光発色団とし
て用いるポストカラム法により分析することができる。

【００２６】精製した蛋白質は抗原として用いることが
できる。その際、透析操作等により変性剤をはじめとす
る低分子不純物を適宜減量あるいは除去する操作を行う
のが好ましい。また、この蛋白質を不溶化させて凝集物
としたものを抗原としても良い。

【００２７】更に上記蛋白質をトリプシン等の蛋白質分
解酵素で断片化し、抗原とすることもできる。その結果
として、抗原が低分子化され抗原性が低下した場合に
は、抗原をハプテンとして、公知の方法、例えば牛血清
アルブミン等にカルボジイミド等の架橋剤を介して結合
させる方法等を用いて抗原とすればよい。また、この場
合も透析操作等により、低分子不純物を除去して抗原と
するのが好ましい。

【００２８】次に、得られた抗原を用いて、公知の方法
により哺乳動物や鳥類等を免疫することによって抗体を
製造する。

【００２９】抗体の製造に供せられる動物としては、
牛、馬、羊、山羊、ウサギ、マウス、鶏等適当な家畜を
選ぶことができる。

【００３０】免疫方法としては、皮下注射、腹腔内注
射、筋肉注射、静脈注射等により通常の方法や点鼻、点
眼、経口投与等の方法によって行なうことができる。抗
原である蛋白質の投与量及び期間は、所望の力価が得ら
れ、かつ動物に対して悪影響を与えない量及び期間を適
宜選択すれば良い。必要に応じてフロイント完全アジュ
バント（ＦＣＡ）、フロイント不完全アジュバント（Ｆ
ＩＡ）等のアジュバントを抗原と併用しても良い。

【００３１】抗体は、これら動物の常乳あるいは初乳ま
たは血清もしくは卵黄より公知の手法を用いて得ること
ができる。

【００３２】本発明の抗体は、細胞融合技術によって得
られるハイブリドーマの産生するモノクローナル抗体で
あっても良い。また、該ハイブリドーマからクローニン
グされた免疫グロブリン遺伝子を導入した微生物あるい
は培養細胞の産物であっても良い。

【００３３】以上の様にして得られた抗体は、パパイン
あるいはペプシン等の酵素で処理し、免疫グロブリンの
Ｆｃ部分を除去した抗体断片としても良い。また、免疫
した動物の脾臓細胞あるいはリンパ球からクローニング
された免疫グロブリン遺伝子の断片を導入した微生物あ
るいは培養細胞の産物であっても良い。

【００３４】尚、本発明の抗体としては、精製したもの
が好ましいが、他の成分を含有する未精製品（例えば血
清、初乳等）であっても良い。

【００３５】以上の様にして得られる抗体あるいはその
断片は、水溶液もしくは凍結乾燥、噴霧乾燥等の操作に
より得た乾燥品として供される。

【００３６】このような抗体からなる毛髪改質剤は、毛
髪への付与形態に応じて種々の形の頭髪用組成物に調製
することができる。すなわち、本発明の毛髪改質剤の効
果を損なわない範囲で通常使用される成分を配合するこ
とができ、その頭髪用組成物の形態としては、シャンプ
ー、リンス、スタイリングフォーム、ヘアーコンディシ
ョナー、ヘアートリートメント、ヘアーパック、ヘアー
リキッド、ヘアートニック、パーマネントウエーブ用剤
等が挙げられる。

【００３７】本発明の蛋白質またはそれより調製した抗
体の、頭髪用組成物への配合量は、その投与形態に応じ
て適宜選択すればよく、例えば、０．１重量％濃度当り
１００以上の抗体価を有するものを、組成物全体を１０
０として０．００００１〜１０重量％程度とすることが
できる。

【００３８】

【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
するが、それに先立ち用いた種々の分析方法について述
べる。

【００３９】（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳
動）ＳＤＳ−ＰＡＧＥはレムリー（Ｌａｅｍｍｌｉ）等
の方法により行なう。すなわち、後述の粗精製標品また
は精製標品（０．２〜３５μｇ）を個々に２％ＳＤＳ、
５％２メルカプトエタノール及び２０％グリセロールを
含む６２．５ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ６．８）中
で１００℃、３分間処理する。

【００４０】電気泳動は、０．１％のＳＤＳを含む７．
５％の分離ゲルと、４％の濃縮ゲル中、室温下、１０ｍ
Ａ、２時間の条件で行なう。なお、分子量マーカーとし
ては、フォスフォリラーゼ（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｓ
ｅ，分子量９７４００；９７Ｋ）、牛血清アルブミン
（ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ，分子量
６６０００；６６Ｋ）、オブアルブミン（ｏｖａｌｂｕ
ｍｉｎ，分子量４５０００；４５Ｋ）、カルボニックア
ンヒドラーセ（ｃａｒｂｏｎｉｃ ａｎｈｙｄｒａｓ
ｅ，分子量２９０００；２９Ｋ）、大豆由来トリプシン
インヒビター（ｓｏｙ ｂｅａｎ ｔｒｙｐｓｉｎ ｉ
ｎｈｉｂｉｔｏｒ，分子量２０１００；２０Ｋ）、α−
ラクトアルブミン（α−ｌａｃｔａｌｂｕｍｉｎ，分子
量１４２００；１４Ｋ）（いずれもファルマシア社製）
を用い、バンドの検出はクマシーブリリアントブルー
（ＣＢＢ）による染色によって行なうことができる。

【００４１】（２次元電気泳動）基本的に勝海の方法に
より行なう。すなわち、後述の粗精製標品または精製標
品（１０〜２００μｇ）を８Ｍ尿素、５％２メルカプト
エタノール、２％ノニデットＰ−４０及び２％バイオラ
イト（ｐＨ３〜１０）を含む水溶液に溶解する。１次元
目の非平衡等電点電気泳動は、ディスクゲルにて３００
Ｖで５時間行う。その後、ゲルを２次元目のＳＤＳ電気
泳動ゲルにセットし、１０ｍＡで２時間泳動を行う。２
次元に蛋白質が展開されたゲルは、クマシーブリリアン
トブルーＲ−２５０染料により染色する。

【００４２】（逆相クロマトグラフィー）逆相クロマト
グラフィーは、Ｓａｉｄ等の方法により行う。即ち、蛋
白質をヨード酢酸によりカルボキシメチル化し、Ｈｉ−
Ｐｏｒｅ ＲＰ−３０４カラム（バイオラッド社製）を
用いたＣ4 高速逆相クロマトグラフィーを行う。クロマ
トグラフィーに用いる溶離液は、０．１％トリフルオロ
酢酸及び９０％アセトニトリルを含む０．１％トリフル
オロ酢酸を用いリニアーグラジエントにより蛋白質の溶
出を行う。

【００４３】（ウエスタンブロッティング）ウエスタン
ブロッティングは、Ｔｏｗｂｉｎ等の方法により行う。
即ち、蛋白質を１８％ポリアクリルアミドゲル電気泳動
法にて展開し、ニトロセルロース膜（Ａｔｔｏ社製）に
転写した。１次抗体として用いる抗血清は、１０6 倍希
釈したものを用いた。検出はブロッティング検出キット
（アマシャム社製、ＲＰＮ２３ ストレプトアビジン・
ビオチン化アルカリフォスファターゼ複合体を用いたウ
サギＩｇＧ検出キット）を用い、キットに明記のプロト
コールに従い行った。

【００４４】実施例１ （１）蛋白質精製 人正常毛髪４００ｍｇを２％ポリオキシエチレンラウリ
ル硫酸ナトリウム（３Ｅ．Ｏ．）水溶液にて洗浄後、８
Ｍ尿素、０．２Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ９．５）５０
ｍｌに加え、窒素ガスを通しながら５０℃で１時間撹拌
した。これをテフロンホモジナイザーを用いてすり潰
し、更に１時間の抽出操作を行なった。２０，０００
Ｘ ｇで３０分間遠心した後上清を回収し、５μｍのフ
ィルターに通しマトリックス蛋白質を含有する抽出物を
得た。

【００４５】これを限外濾過膜にて濃縮し、窒素ガスを
通した８Ｍ尿素、０．２Ｍ−２メルカプトエタノール含
有５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ９．５）で平衡化し
た２ｍのセファクリルＳ−２００カラムに供した。主ピ
ークのα−ケラチン画分以降に溶出してくる低分子画分
（分子量数千〜４００００）をすべて回収した。本操作
を繰り返すことによって、α−ケラチンを完全に除き、
マトリックス蛋白質画分を得た。

【００４６】得られたマトリックス蛋白質画分を８Ｍ尿
素、０．２Ｍ２メルカプトエタノール含有２０ｍＭ酢酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．３）で透析し、窒素ガスを
通した８Ｍ尿素、０．２Ｍ２メルカプトエタノール含有
２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．３）で平衡化
した。１０ｃｍのＣＭセファロースファーストフローカ
ラムに供した。カラムにかけた素通し画分をすべて回収
した。この操作により粗蛋白質を得た。

【００４７】この粗蛋白質を分子量３，０００カットの
限外濾過膜で濃縮しＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気
泳動により分離した。分離したゲルを０．２５Ｍ塩化カ
リウム水溶液中で浸漬し、ＳＤＳの析出により白濁した
１２〜１４ｋ（分子量１２０００〜１４０００）のバン
ドを切り出し、ガラスホモジナイザーを用いてすり潰
し、窒素ガスを通した８Ｍ尿素、０．２Ｍ２メルカプト
エタノール含有５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ９．
５）にて一昼夜抽出した。この操作により本発明の蛋白
質を得た。

【００４８】これを再度限外濾過膜にて濃縮し、更に
７．４Ｍ尿素、０．１Ｍ２メルカプトエタノールを含有
する生理リン酸緩衝液（ＰＢＳ）に対して透析し、蛋白
質抗原とした。

【００４９】（２）ＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動 本発明の蛋白質のＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動図
を図１に示した。同時に泳動した分子量マーカーより、
本発明の蛋白質の分子量は１２０００〜１４０００であ
ることが分かる。

【００５０】（３）アミノ酸分析 本発明の蛋白質のアミノ酸分析の結果を表１に示した。
本発明の蛋白質は、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、
Ｌｅｕを多く含む蛋白質であった。

【００５１】

【表１】

【００５２】（４）２次元電気泳動 本発明の蛋白質の２次元電気泳動の結果を図２に示し
た。

【００５３】（５）逆相クロマトグラフィー 本発明の蛋白質を逆相クロマトグラフィーにかけた結果
を図３に示した。本発明の蛋白質は、溶出時間１７〜２
０分に単一ピークとして認められた。

【００５４】実施例２ （１）抗血清の調製 実施例１で精製された本発明の蛋白質を抗原として、そ
れを７．４Ｍ尿素、０．１Ｍ２メルカプトエタノール含
有ＰＢＳ中に２ｍｇ／ｍｌとなる様に懸濁しＦＣＡと
１：１の比で混合して油中水型（以下Ｗ／Ｏ型と略記す
る）のエマルジョンとした。これを２羽のウサギの背中
に１羽当り１ｍｌ皮下投与した。２週間後にアジュバン
トをＦＩＡに変えて同様に投与した。抗体価の上昇をＥ
ＬＩＳＡ法にて確認後、最終投与２週間経過後（８週
目）心臓から採血し、遠心分離して血清を採取した（以
下これを抗毛髪マトリックス蛋白質抗血清とする。）。
また、免疫していないウサギからも、同様に血清を採取
し対照抗血清とした。尚、常法に従って硫安分画法によ
り血清から抗体画分を得た。

【００５５】（２）ウエスタンブロッティング 抗血清によるウエスタンブロッティングの結果を図４に
示した。これより本発明の蛋白質より調製した抗血清
は、１２０００〜１４０００の蛋白質と特異的に反応し
ていることが観察された。

【００５６】比較例１ （１）抗原の調製 ２８才男性の正常毛髪を２％ポリオキシエチレンラウリ
ル硫酸ナトリウム（３Ｅ．Ｏ．）水溶液で洗浄後、風乾
した。これを電気カミソリで細断し、１５０μｍのメッ
シュを通して微小な毛髪粉を得た。

【００５７】上記毛髪粉を生理食塩水中に５０ｍｇ／ｍ
ｌの濃度に懸濁し、ＦＣＡと１：１の比で混合してＷ／
Ｏ型のエマルジョンとした。これを２羽のウサギに１羽
当り４ｍｌを臀部筋肉内に投与し、更に１週間後及び２
週間後に同様に投与した。最終投与２週間経過後（４週
目）、心臓から採血し、遠心分離して血清を採取した。
これによりＵＳＰ３９８７１６１様の毛髪粉に対する抗
血清（以下抗毛髪粒子抗血清と略記する。）を調製し
た。尚この手法では、本発明の蛋白質に対して所望の抗
体価を持つ抗血清を得ることが出来なかった。

【００５８】試験例１ （抗体の毛髪結合性）本発明の抗体が、完全に角質化し
た毛髪（毛幹部）に結合することを間接蛍光抗体法によ
り証明した。

【００５９】女性の正常毛髪を適当な長さに切り、凍結
した。凍結ブロックからクリオスタットにより６μｍ厚
の切片を切り出し、無蛍光スライドグラスに固定した。

【００６０】これに、実施例２で得られた発明の蛋白質
の抗血清あるいは免疫を行わなかったウサギより得られ
た対照抗血清を、１０％ヤギ血清含有ＰＢＳで４０倍に
希釈したものを反応させた後、ＰＢＳで１０分間３回洗
浄した。

【００６１】２次抗体としてローダミン標識ヤギ抗ウサ
ギＩｇＧ抗体を反応させ、検鏡した。

【００６２】発明の蛋白質抗血清を反応させた標本の
み、毛髪全域に亘り蛍光が観察された（図５）。これ
は、該抗体が角質化した毛髪に結合することを示すもの
である。

【００６３】試験例２ （毛髪の破断強度増強効果）本発明の蛋白質より調製し
た抗体が、毛髪の破断強度を増強させるかどうかを、以
下の方法に従って試験した。

【００６４】常法に従ってパーマ処理を２回繰り返し施
術した毛髪を、ＰＢＳまたは０．５％抗血清溶液中に３
０℃、１時間浸漬し、１０分間の水洗の後、４５℃、１
２時間乾燥させた。その毛髪を２５℃、湿度６５％の環
境下ヘアーテスター（Ｌ．Ｂ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ社製）
を用い破断強度を測定した。その結果を図６に示した。
本発明の蛋白質より調製した抗血清では明らかにコント
ロール群（ＰＢＳ、非免疫血清）と比べて、有意に毛髪
の破断強度を増強させた。

【００６５】試験例３ （ダメージヘアーの診断）女性の毛髪を束ね（１８ｃ
ｍ，５ｇ）、常法に従ってパーマ処理を３回繰り返し、
パーマ処理毛髪を作成した。

【００６６】次に、毛束から０．５ｇを切り取り、０．
０７Ｍりん酸緩衝液（ｐＨ９．０）１０ｍｌに入れ、４
５℃にて１、２、５、２４時間放置し、毛髪中の蛋白質
を溶出させた。尚比較のため、健常毛を用い、その他は
上記方法と同様に処理した。

【００６７】各毛髪より時間ごとに溶出した蛋白質を、
実施例２の抗体を用い、上述したＥＬＩＳＡ法により定
量した。その結果を図７に示した。健常毛に比べ、パー
マ毛では、発明の蛋白質の溶出が多いことがわかり、こ
の抗体を用いたダメージヘアー診断法が、高感度で有効
であることを示す。

【００６８】試験例４ （毛髪の官能面での改善効果）女性の毛髪を束ね（１８
ｃｍ、５ｇ）、常法に従ってパーマ処理を３回繰り返
し、パーマ処理毛髪を作成した。次に実施例２の抗血清
の０．３％ＰＢＳ溶液５０ｍｌにパーマ処理毛髪を１時
間浸漬後、流水中で１０分間水洗して、２４時間風乾し
た。

【００６９】得られた抗血清処理毛髪のくし通り、しな
やかさ、風合いについて、処理前の毛髪とどちらが良い
か官能評価を行った結果、本発明の蛋白質より調製した
抗血清は、毛髪のくし通り、しなやかさ、風合いを良好
にする効果を持ち、上述の抗毛髪粒子抗体、対照抗体、
コラーゲン加水分解物、ＰＢＳ溶液には見られない優れ
た特性を有していた。

【００７０】応用例１（シャンプー） 実施例２で得られた抗体画分を用いてシャンプーを調製
した。組成を表２に示す。表中の値は、重量％を示す。

【００７１】

【表２】

【００７２】このシャンプーは、実施例２の抗体を配合
しない他は表２と同組成のシャンプーに比べて、パサつ
きがなく、くし通りも良く、なめらかさ、手触り等に関
して良好な仕上がりを示した。

【００７３】応用例２（ヘアートリートメント） 実施例２の抗体を用いてヘアートリートメントを調製し
た。組成を表３に示す。表中の値は、重量％を示す。

【００７４】

【表３】

【００７５】市販のシャンプーで洗浄後、上記のヘアー
トリートメントで処理した場合は、該抗体画分を配合し
ない他は表３と同組成のヘアートリートメントで処理し
た場合に比べて、毛髪のくし通りも良く、しっとり感が
あり、特に損傷毛に対してその損傷修復や改善に効果が
あった。

【００７６】

【発明の効果】本発明により、完全に角質化した毛髪に
対して、強い親和性をもって且つ特異的に結合し、その
結果毛髪の破断強度を強め、くし通り、しなやかさ、風
合い等を有用に改質し、毛髪の損傷を保護あるいは改善
出来る毛髪改質剤が提供された。また、本発明の抗体
は、ダメージヘアの診断にも有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１の蛋白質のＳＤＳポリアクリルアミド
電気泳動図である。尚、レーン１は分子量マーカー，レ
ーン２は１２〜１４Ｋ蛋白質を表す。

【図２】実施例１の蛋白質の２次元電気泳動図である。

【図３】実施例１の蛋白質の逆相クロマトグラフィーの
図である。

【図４】実施例２の抗血清によるウエスタンブロッティ
ングを表す図である。尚、(a)は色素染色，(b) は抗体
染色の結果を表し、またレーン１は１３Ｋ蛋白質，レー
ン２は毛髪ケラチンを表す。

【図５】実施例２の抗血清（ａ）及び対照血清（ｂ）の
毛髪結合性試験の結果を表す図である。

【図６】実施例２の抗血清の、毛髪破断強度を調べた図
である（Ａ；ＰＢＳ，Ｂ；非免疫血清，Ｃ；本発明の抗
血清）。

【図７】実施例２の抗体を用いて、健康毛及びパーマ毛
の蛋白質溶出量を調べた図である。

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【手続補正書】

【提出日】平成５年８月２３日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】図５

【補正方法】変更

【補正内容】

【図５】実施例２の抗血清（ａ）及び対照血清（ｂ）の
毛髪結合性試験の結果を表す蛍光写真（図面代用写真）
である。

【手続補正２】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図５

【補正方法】変更

【補正内容】

【図５】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 15/14 8517−4Ｈ

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 人毛髪中に存在するマトリックス蛋白質
   に対して免疫活性を有する抗体の抗原となる蛋白質であ
   って、下記物理特性を有する蛋白質。 記 １．分子量；１２０００〜１４０００ ２．アミノ酸組成；Cys 4.2 〜8.7 ，Asx 5.4 〜8.5 ，
   Thr 6.8 〜12.1，Ser 7.0 〜11.5，Glx 7.1 〜10.4，Pr
   o 9.4 〜15.9，Gly 9.2 〜13.2，Ala 1.1 〜7.4，Val
   2.7 〜6.4 ，Met ０〜3.0 ，Ile 1.5 〜6.2 ，Leu 7.8
   〜12.6，Tyr ０〜3.5 ，Phe 0.8 〜4.0 ，Lys ０〜2.5
   ，His ０〜2.5 , Arg 0.3 〜4.2
2. 【請求項２】 下記物理特性をもつ蛋白質を抗原とす
   る、人毛髪中に存在するマトリックス蛋白質に対して免
   疫活性を有する抗体。 記 １．分子量；１２０００〜１４０００ ２．アミノ酸組成；Cys 4.2 〜8.7 ，Asx 5.4 〜8.5 ，
   Thr 6.8 〜12.1，Ser 7.0 〜11.5，Glx 7.1 〜10.4，Pr
   o 9.4 〜15.9，Gly 9.2 〜13.2，Ala 1.1 〜7.4，Val
   2.7 〜6.4 ，Met ０〜3.0 ，Ile 1.5 〜6.2 ，Leu 7.8
   〜12.6，Tyr ０〜3.5 ，Phe 0.8 〜4.0 ，Lys ０〜2.5
   ，His ０〜2.5 , Arg 0.3 〜4.2
3. 【請求項３】 下記物理特性をもつ蛋白質を抗原とす
   る、人毛髪中に存在するマトリックス蛋白質に対して免
   疫活性を有する抗体を含有することを特徴とする毛髪改
   質剤。 記 １．分子量；１２０００〜１４０００ ２．アミノ酸組成；Cys 4.2 〜8.7 ，Asx 5.4 〜8.5 ，
   Thr 6.8 〜12.1，Ser 7.0 〜11.5，Glx 7.1 〜10.4，Pr
   o 9.4 〜15.9，Gly 9.2 〜13.2，Ala 1.1 〜7.4，Val
   2.7 〜6.4 ，Met ０〜3.0 ，Ile 1.5 〜6.2 ，Leu 7.8
   〜12.6，Tyr ０〜3.5 ，Phe 0.8 〜4.0 ，Lys ０〜2.5
   ，His ０〜2.5 , Arg 0.3 〜4.2