UA75867C2 - A method of determining the presence of catalytic factor viii allo-antibodies capable of degrading factor viii in a mammal, amino acid sequence inhibiting any site in factor viii molecule being sensible to cleavage by allo-antibodies in factor viii (variants), use of inhibitor of cleavage of factor viii to neutralize a catalytic activity of allo-antibodies to factor viii and pharmaceutical composition containing allo-antibodies being capable of degrading factor viii - Google Patents
A method of determining the presence of catalytic factor viii allo-antibodies capable of degrading factor viii in a mammal, amino acid sequence inhibiting any site in factor viii molecule being sensible to cleavage by allo-antibodies in factor viii (variants), use of inhibitor of cleavage of factor viii to neutralize a catalytic activity of allo-antibodies to factor viii and pharmaceutical composition containing allo-antibodies being capable of degrading factor viii Download PDFInfo
- Publication number
- UA75867C2 UA75867C2 UA2002010487A UA2002010487A UA75867C2 UA 75867 C2 UA75867 C2 UA 75867C2 UA 2002010487 A UA2002010487 A UA 2002010487A UA 2002010487 A UA2002010487 A UA 2002010487A UA 75867 C2 UA75867 C2 UA 75867C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- factor
- antibodies
- allo
- factor viii
- cleavage
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 title claims abstract description 46
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 title claims abstract description 44
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 44
- 230000007017 scission Effects 0.000 title claims abstract description 44
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 title claims abstract description 13
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 title claims 10
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 title abstract 23
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 title abstract 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title description 3
- MYLBTCQBKAKUTJ-UHFFFAOYSA-N 7-methyl-6,8-bis(methylsulfanyl)pyrrolo[1,2-a]pyrazine Chemical compound C1=CN=CC2=C(SC)C(C)=C(SC)N21 MYLBTCQBKAKUTJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 claims description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 11
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 claims description 10
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 claims description 10
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 claims description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims description 8
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 claims description 7
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 6
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 claims description 5
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 claims description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 5
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims description 4
- JGOSWYKAUGNTMU-UHFFFAOYSA-N Cl.NCCC1=CC=C(CS(F)(=O)=O)C=C1 Chemical compound Cl.NCCC1=CC=C(CS(F)(=O)=O)C=C1 JGOSWYKAUGNTMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 claims description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 claims description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 claims description 2
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 claims 1
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 claims 1
- 230000009852 coagulant defect Effects 0.000 claims 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 abstract description 5
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 abstract description 5
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 abstract 8
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 abstract 8
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 27
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 27
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 11
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 11
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 230000002947 procoagulating effect Effects 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 3
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 3
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 3
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N Digoxin Natural products O([C@H]1[C@H](C)O[C@H](O[C@@H]2C[C@@H]3[C@@](C)([C@@H]4[C@H]([C@]5(O)[C@](C)([C@H](O)C4)[C@H](C4=CC(=O)OC4)CC5)CC3)CC2)C[C@@H]1O)[C@H]1O[C@H](C)[C@@H](O[C@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)C2)[C@@H](O)C1 LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 2
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 229940122055 Serine protease inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 101710102218 Serine protease inhibitor Proteins 0.000 description 2
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N digoxin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@@H]3C[C@@H]4[C@]([C@@H]5[C@H]([C@]6(CC[C@@H]([C@@]6(C)[C@H](O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)C[C@@H]2O)C)C[C@@H]1O LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N 0.000 description 2
- 229960005156 digoxin Drugs 0.000 description 2
- LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N digoxine Natural products C1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(C)OC(OC2C(OC(OC3CC4C(C5C(C6(CCC(C6(C)C(O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)CC2O)C)CC1O LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 2
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 2
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 2
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 1
- KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-n-[4-(4-methoxyphenyl)-1,3-thiazol-2-yl]-n-(3-methoxypropyl)acetamide Chemical compound S1C(N(C(=O)CCl)CCCOC)=NC(C=2C=CC(OC)=CC=2)=C1 KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VANHQTOUHVZHHF-IBGZPJMESA-N 5-[[5-[[(2s)-3-carboxy-1-[5-(2,6-dichlorophenyl)-1,3-oxazol-2-yl]-1-oxopropan-2-yl]carbamoyl]pyridin-2-yl]methylsulfamoyl]-2-hydroxybenzoic acid Chemical compound N([C@@H](CC(=O)O)C(=O)C=1OC(=CN=1)C=1C(=CC=CC=1Cl)Cl)C(=O)C(C=N1)=CC=C1CNS(=O)(=O)C1=CC=C(O)C(C(O)=O)=C1 VANHQTOUHVZHHF-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108010048049 Factor IXa Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001024566 Homo sapiens Ecto-ADP-ribosyltransferase 4 Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108010003205 Vasoactive Intestinal Peptide Proteins 0.000 description 1
- 102400000015 Vasoactive intestinal peptide Human genes 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003221 ear drop Substances 0.000 description 1
- 229940047652 ear drops Drugs 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 102000054886 human ART4 Human genes 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- VBUWHHLIZKOSMS-RIWXPGAOSA-N invicorp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 VBUWHHLIZKOSMS-RIWXPGAOSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 229950000964 pepstatin Drugs 0.000 description 1
- 108010091212 pepstatin Proteins 0.000 description 1
- FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N pepstatin A Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CC(C)C FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 239000003805 procoagulant Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Description
Опис винаходу
Даний винахід відноситься до способу визначення наявності у ссавця каталітичних ало-антивіл до фактору 2 ММ, які спроможні розщеплювати фактор МІ, та отримання характеристик сайтів розщеплення молекули зазначеного фактору МІІї зазначеними каталітичними антитілами до фактору МІ.
Даний винахід відноситься також до інгібітору розщеплення (деградації) фактору МІ, каталізує ало-антитіла до фактору М.
Далі даний винахід відноситься до фармацевтичного складу, що містить зазначені каталітичні ало-антитіла 70 до фактору МІ, що здатні розщеплювати фактор МІ! і які отримані в процесі здійснення зазначеного способу визначення, і до фармацевтичної композиції, що містить вказаний інгібітор розщеплення фактору МІ, каталізує ало-антитіла до фактору М.
Нарешті, даний винахід відноситься до терапевтичного застосування вказаного інгібітору розщеплення фактору МІ, каталізує ало-антитіла до фактору МІЇЇ, фармацевтичної композиції, що містить зазначені 72 каталітичні ало-антитіла до фактору МІ, що здатні розщеплювати фактор МІ і які отримані в процесі здійснення зазначеного способу визначення, і фармацевтичної композиції, що містить вказаний інгібітор розщеплення фактору МІ, каталізує ало-антитіла до фактору М.
Гемофілія А - це пов'язане з Х-хромосомою рецесивне порушення, що призводить до дефектності або дефіциту молекул фактору МІ, що у гострій формі є небезпечним для життя і геморагічним захворюванням, що позбавляє працездатності.
Вливання пацієнтам із гострою гемофілією А гомологічного фактору МІЇЇ у 2595 випадків призводить до появи ало-антитіл до фактору МІ (Енгепіопій 5., Кгец: МУ., Зспагтег Ї., Іпаде К., ГцпкК М., Сипдог Т., КгасКпагає В апа Когппирег В. "Іпсідепсе ої демеюортепі ої Тасіог МИ апа Тасіог ЇХ іппірйоге іп Паеторпійасв". //
І. апсеї. 1992. Т. 339. С.594-598), що інгібують про-коагулянтну активність фактору МІЇ, створюючи стеричні с перешкоди взаємодії фактору МІ із молекулами, що стабілізують, (Заєпко Е.Ї., Зпіта М., Каіаіакейті К. У... (У апа ЗсападеМйа ОО. "А гоїе їог (Ше С2 дотаїп ої Тасіог МІ іп Біпайпуд о моп УМШергапа Тасіог". // 9. Віо).
Спет. 1994, Т. 269.С. 11601-11605; і бБаепко Е. Ї, Зпіта М., Сіреп б. Е. апа ЗсапаейПйа Ю. "Біожшей геІеазе ої
Іпготбіп-сіеамей Тасіог МІ! йот моп УМШергапа Тасіог ру а топосіопаї апа а Ппитап апібоду із а помеї теспапізт ог Тасіог МИ! іппірйіоп". // 9. Віої. Спет. 1996. Т. 271.0. 27424-27431), із необхідними для - його активності молекулами (Агаі М., ЗсапаеМйа О. апа Ноуег Г. МУ. "МоїІесціаг разів ої Тасіог МІ іппібйоп о «о ру Ппитап апііродіев: Апііродіез (паї бБіпа о (Пе тТасіог МІ дн спаійп ргемепі їШе іпіегасіоп ої Тасіог
МІ мий о рпозрпоїїрідв". // 9. Сп. Іпмеві. 1989. Т. 83.0. 1978-1984; і 2попд О., ЗаепКко Е. Ї., 5піта М., со
Ееісп М. апа Зсапаейна 0. "Зоте питап іппіріог апіірбодієз іпіепеге м/йй Тасіог МІ ріпаїпд (о Тасіог ІХЯ. // Віоса. юю 1998. Т. 92.0. 136-142) або з молекулами, що активують, (І ирайп В С., МУаге 9У., ЗФапйога О. МУ. апа Кеїізег Н.
М. "Ідепійісайоп ої а ЕМП еріоре гесодпілгеа ру а Ппитап Петорпійїс іппірйог". // Віоса. 1989. Т. 73.6. - 497-499; і Мецепзспулапдег Р. ЕР. апа Оевіу 9. "Тиготбіп-асіїмаїей апа Тасіог Ха-асіїмаїе(й питап Тасіог МІ: дітегепсез іп соїгасіог асіїміу апа десау гаїе". // Агсп. Віоспет. Віорпуз. 1992. Т. 296.0. 426-434).
Заявниками було зроблене відкриття, що не випливало з попереднього досвіду, про розщеплення фактору « дю МІ ало-антитілами двох пацієнтів із високою імунною відповіддю, що мають гостру гемофілію А, що виявило -о с невідомий досі механізм, за яким інгібітори фактору МІЇ можуть перешкоджати про-коагулянтній функції фактору
М. :з» Відкриття заявниками каталітичних ало-антитіл до фактору МІ є, наскільки відомо, першим описом появи каталітичних антитіл, що індукуються при введенні пацієнтам фактору МІ. Тому вважалось несподіваним, навіть абсурдним або неймовірним, що в присутності фактору МІ! утворюються антитіла, що дійсно роблять молекулу -1 395 фактору МІ неактивною шляхом каталітичного гідролізу ("протеолізу"). Проте відомі дотепер каталітичні антитіла всі є ауто-антитілами, що виявляються в процесі захворювання або при фізіологічних умовах. Тому всі 1 антитіла, що індукуються названі АЛО-антитілами, походження котрих явно відрізняється від походження со АУТоО-антитіл у будь-якому аутоїмунному захворюванні.
Розраховані значення середньої Кт і що здається Мтах для реакції антитіл до фактору МІ одного з , , й й й й й й й (о) пацієнтів складали відповідно 9,46-5,62мкМ і 85-60 фемтомоль хв.7. Кінетичні параметри гідролізу фактору «м МІ змушують припустити наявність функціональної ролі каталітичної імунної відповіді в інактивації фактору
МІМ іп мімо.
Тому отримання характеристики ало-антитіл до фактору МІ як сайт-специфічних протеаз забезпечує нові підходи до лікування захворювань у пацієнтів, що мають ало-антитіла до фактору МІ.
Таким чином, відповідно до першого аспекту, даний винахід передбачає спосіб визначення наявності у (Ф) ссавця каталітичних ало-антитіл до фактору МІ, які здатні розщеплювати фактор МІЇЇ, який відрізняється тим, г що він включає: ї) виділення плазми зі зразка крові, взятого в зазначеного ссавця; во її) виділення із зазначеної плазми ало-антитіл до фактору МІ; її) приведення зазначених ало-антитіл до фактору МІ у контакт із фактором МІ на період часу, що достатній для забезпечення розщеплення зазначеного фактору МІІЇ зазначеними ало-антитілами до фактору МП; і їм) визначення, після зазначеного періоду часу, чи ефективно зазначені ало-антитіла до фактору МІ ве розщепили зазначений фактор МІ.
Відповідно до варіанта здійснення етапу (її) способу за даним винаходом, ало-антитіла до фактору МІ виділяють із плазми, об'єднуючи їх із фактором МІ, причому зазначений фактор МІ переважно пов'язаний із носієм (матриксом). Зручно, щоб на етапі (ії) ало-антитіла до фактору МІ! були виділені за допомогою афінної хроматографії. Переважно, щоб на етапі (ії) зазначена афінна хроматографія включала використання в якості носія сефарози, переважно активованої ціаноген-бромідом.
Відповідно до варіанта здійснення етапу (ії) способу за даним винаходом, зазначений фактор МІЇЇ позначений мітячим агентом, що переважно радіактивно-мітячим агентом - таким, зокрема, як 729І. Переважно, щоб на етапі (ії) зазначений фактор МІЇЇ був приведений у контакт з ало-антитілами до фактору МІ! на період часу від приблизно 0,5 години до приблизно ЗО годин, переважно близько 10 годин, при температурі від 70 приблизно 1522 до приблизно 402С, переважно 3820.
Відповідно до варіанта здійснення етапу (ім) способу за даним винаходом, визначення того, чи ефективно зазначений фактор МІЇЇ був розщеплений зазначеними ало-антитілами до фактору МІ, проводиться способом визначення, що включає метод розділення - такий, як електрофорез у гелі, як, зокрема, електрофорез у поліакриламідному гелі в присутності додецилсульфату натрію (ЗО5-РАСЕ), або гель-фільтраційна 75 хроматографія - така, як, зокрема, швидка рідинна гель-фільтраційна хроматографія білків, та техніку візуалізації - таку, як, зокрема, авторадіографію.
У відповідності з таким варіантом здійснення способу за даним винаходом, для цього способу характерно те, що він додатково включає:
М) одержання характеристик сайта (сайтів) молекули зазначеного фактору МІ, у котрому (який) відбувається розщеплення зазначеними ало-антитілами до зазначеного фактору МІ.
Відповідно до варіанта здійснення етапу (М) способу за даним винаходом, вказане одержання характеристик здійснюють, приводячи зазначений фактор МІ у контакт із зазначеними ало-антитілами до фактору МІЇЇ, які спроможні розщеплювати фактор МІ, розділяючи та потім секвенуючи отримані внаслідок такої процедури фрагменти фактору МІІІ. Зручно здійснювати таке розподілення, використовуючи таку техніку, якелектрофорезу «С гелі - такий, як, зокрема, 5О5-РАСЕ, або гель-фільтрацію. Зазначене секвенування зручно здійснювати, о використовуючи таку техніку, як М-кінцеве секвенування, зокрема, із використанням автоматичного білкового мікросеквенатора. З використанням зазначеного секвенування локалізовані такі спроможні до розщеплення зв'язку: АгаЗ"2-Зег313, що знаходиться між доменами АТ і А2, Туг!980-Авр7681, що знаходиться на М-кінці домену
АЗ, і біш!794-Авр1795, Що знаходиться всередині домену АЗ молекули фактору МІП. в.
Таким чином, відповідно до другого аспекту, даний винахід пропонує амінокислотну послідовність: Зег Маї со
Аа | уз І уз Нів Рго; амінокислотну послідовність:
Азр Си Авр Сім Авп біп Зег; і со амінокислотну послідовність: ю
Азр біп Агу біп Су Аа Сім.
Зо Даний винахід поширюється також на варіанти або аналоги такої або будь-якої іншої послідовності фактору в.
МІ, що спроможні інгібувати будь-який сайт у молекулі фактору МІ, що чутливий до лізису ало-антитілом до фактору МІ. У контексті даного винаходу таким варіантом може бути, наприклад, пептидний або непептидний аналог амінокислотної послідовності, яка описана вище, що інгібує будь-який сайт у молекулі фактору МІ, « який чутливий до лізису ало-антитілом до фактору МІ. Таким варіантом може бути, наприклад, варіант послідовності, що коротше на декілька амінокислот, наприклад, на М-кінці, на С-кінці або на обох кінцях, або о, с довше на декілька амінокислот (такі варіанти можна одержати хімічним синтезом або ферментативним "» розщепленням існуючої в природі молекули), за умови, що цей варіант інгібує будь-який сайт у молекулі фактору " МІ, чутливий до лізису ало-антитілами до фактору МІП.
Тому, відповідно до третього аспекту, даний винахід передбачає інгібітор розщеплення фактору МІ, який каталізується ало-антитілами до фактору МІЇЇ. Переважно цей інгібітор відрізняється тим, що він містить у - собі інгібітор протеази. Прикладами інгібіторів протеази, що можуть бути використані в контексті даного с винаходу як інгібітори розщеплення фактору МІЇ, що каталізується ало-антитілами до фактору МІ, але не обмежуючись ними, є інгібітори типу фторидів - такі, як, наприклад, РМ5Е (фенілметилсульфоніл-фторид) або бо АЕВЗЕ (4-(2-аміноетил)бензилсульфонілфторид гідрохлорид (що особливо продається фірмою Коспе б 20 Ріадповіїсв бтр, Маппіеїт, Сегтапу, під товарним знаком Регаріост). Більш конкретно, для цього інгібітору характерно, що зазначений інгібітор інгібує (пригнічує) розщеплення чутливих до розщеплення зв'язків:
Що. АгдЗ"?-бегтЗ що знаходиться між доменами АТ і А?2, Туг'б80 ДАвр/!б581, що знаходиться на М-кінці домену АЗ, і
СіІнт794 Двр/!795. що знаходиться всередині домену АЗ молекули фактору МІІІ. Ще більш переважно, для цього інгібітору характерно те, що він являє собою пептидний або непептидний аналог амінокислотної послідовності:
Зег Маї Аа Г уз Гуз Нів Рго;
ГФ) пептидний або непептидний аналог амінокислотної послідовності: 7 Авр Сім Авр Сі Авп іп бег; або пептидний або непептидний аналог амінокислотної послідовності:
Азр біп Агу біп Су Аа Сім. 60 Інгібітори розщеплення фактору МІ, як вони були визначені вище, так само як і їхні солі заміщення, особливо їхні фармацевтично прийнятні солі заміщення, мають цінні фармакологічні показники, тому що вони виявляють нейтралізуючу активність стосовно ало-антитіл до фактору МІП.
Ці властивості обгрунтовують їхнє застосування в терапії, та даний винахід додатково відноситься до зазначених вище інгібіторів розщеплення фактору МІЇІЇ, а також до їхніх солей заміщення, особливо до їхніх бо фармацевтично прийнятних солей заміщення, у якості ліків.
Таким чином, вони особливо показані для лікування захворювань, зокрема, гемофілічного походження, більш конкретно - захворювань, які пов'язані із дефектами згортання крові внаслідок недостатності фактору МІ.
Можна згадати як приклад застосування зазначених речовин для лікування, з одного боку, пацієнтів із
Високою імунною відповіддю, що мають такі захворювання, як, наприклад, слабка або гостра гемофілія А (у випадках, коли в цих пацієнтів виявлені каталітичні антитіла), і/або з іншого боку, пацієнтів, що страждають, наприклад, аутоїмунними захворюваннями (у випадках, коли в цих пацієнтів виявлені каталітичні антитіла).
Таким чином, відповідно до четвертого принципового аспекту, даний винахід забезпечує рішення проблеми створення фармацевтичної композиції, яка існувала тривалий час, що відрізняється тим, що вона містить 7/0 фФармацевтично ефективну кількість щонайменше одного типу ало-антитіл до фактору МІ, які спроможні розщеплювати фактор МІ, як визначено вище, особливо таких, які можна одержати в процесі описаного вище способу, або однієї з їхніх фармацевтично прийнятних солей, які включені у фармацевтично прийнятний наповнювач, розчинник або носій.
Далі, відповідно до п'ятого принципового аспекту, даний винахід передбачає фармацевтичну композицію, яка 7/5 Відрізняється тим, що вона містить фармацевтично ефективну кількість щонайменше одного |інгібітору розщеплення фактору МІЇЇ, як він визначений вище, або однієї з його фармацевтично прийнятних солей заміщення, яка включена у фармацевтично прийнятний наповнювач, розчинник або носій.
Ці фармацевтичні композиції можуть вводитись, наприклад, трансбукальним, ректальним, парентеральним, трансдермальним, окулярним, назальним або вушним шляхом.
Ці фармацевтичні композиції можуть бути твердою речовиною або рідиною і можуть бути подані у фармацевтичних формах, що використовуються звичайно в медицині людини, - таких, як, наприклад, прості таблетки або таблетки з покриттям, желатинові капсули, гранули, свічки, препарати для ін'єкції, трансдермальні системи (для введення через шкіру), краплі для очей, аерозолі та розчини, які розпорошуються, а також вушні краплі. їх готують звичайним шляхом. Активний початок, що складається з фармацевтично с ов ефективної кількості щонайменше одного з інгібіторів розщеплення фактору МІЇЇ, як вони визначені вище, або однієї з його фармацевтично прийнятних солей заміщення, може бути включений сюди разом із наповнювачами, і) які використовуються звичайно у фармацевтичних композиціях - такими, як тальк, гуміарабік, лактоза, крохмаль, стеарат магнію, полівідон, похідні целюлози, кокосова олія, напівсинтетичні гліцериди, водні або неводні носії, жири тварини або рослинного походження, гліколі, різноманітні зволожуючі агенти, диспергатори або М зо емульгатори, силіконові гелі, деякі полімери або співполімери, консерванти, ароматизатори та барвники.
Кращою фармацевтичною формою є форма для ін'єкції. ісе)
Даний винахід поширюється також на фармацевтичну композицію з активністю, що нейтралізує, що може со використовуватися головним чином як прийнятні ліки для лікування таких захворювань, як гемофілія А з продукцією ало-антитіл до фактору МІЇІї; аутоїммунні захворювання з ало-антитілами до фактору МІЇ! (у випадку, о
Зв КОЛИ В ЦИХ пацієнтів виявлені каталітичні антитіла), причому для зазначеної фармацевтичної композиції ї- характерно, що вона містить фармацевтично ефективну кількість щонайменше одного зазначеного вище інгібітору розщеплення фактору МІ! або однієї з його фармацевтично прийнятних солей заміщення, які включені у фармацевтично прийнятний наповнювач, розчинник або носій.
Винахід поширюється також на спосіб терапевтичного впливу на ссавця, що страждає патологією, яка є « результатом рівня утримання в його крові фактору МІП, що відрізняється тим, що зазначеному ссавцю вводиться з с терапевтично ефективна кількість щонайменше одного інгібітору розщеплення фактору МІЇЇ, як він визначений
Й вище, або однієї з його фармацевтично прийнятних солей заміщення. и?» Цей спосіб забезпечує головним чином успішне лікування захворювань гемофілічної природи, особливо патологій, які викликані нестачею фактору МІЇЇ у крові хворого.
Винахід поширюється також на фармацевтичну композицію з протитромбозною активністю, що може бути -І використана головним чином як корисні ліки при таких захворюваннях як, особливо, тромбоз, причому для зазначеної фармацевтичної композиції характерно, що вона містить фармацевтично ефективну кількість о щонайменше одного типу ало-антитіл до фактору МІП, які здатні розщеплювати фактор МІЇЇ, особливо такий, який о може бути отриманий у процесі описаного вище способу, або однієї з його фармацевтично прийнятних солей заміщення, яка включена у фармацевтично прийнятний наповнювач, розчинник або носій.
Ме. Винахід поширюється також на спосіб терапевтичного впливу на ссавців, для яких характерно те, що
І зазначеному ссавцю вводять терапевтично ефективну кількість щонайменше одного типу ало-антитіл. до фактору МІ, як вони визначені вище, або однієї з його фармацевтично прийнятних солей заміщення.
Цей спосіб забезпечує головним чином успішне лікування захворювань тромбозної природи, особливо патологій, які викликані наявністю надлишку фактору МІ! у крові хворого.
У терапії людини і тварин ало-антитіла до фактору МІ або інгібітори розщеплення фактору МІ, як вони
Ф) визначені вище, можуть вводитись самі по собі або у сполученні з фізіологічно активним наповнювачем, у ка будь-якій формі, зокрема, орально у формі желатинових капсул або таблеток або парентерально у формі розчинів для ін'єкцій. Можна розглядати інші форми введення - такі, як препарати у вигляді свічок, мазей, бо кремів, гелів або аерозолів.
У контексті даного винаходу використані такі терміни: "каталітичні ало-антитіла до фактору МІ", що розуміється як такий, що позначає антитіла, які націлені на фактор МІ, наділені каталітичною активністю, які індукуються у пацієнтів з гемофілією А при трансфузії терапевтичних препаратів фактору М; 65 "фактор МІ", що розуміється як такий, що позначає кофермент фактору ІХ у ферментативному розщепленні фактору Х у процесі згортання крові;
"розщеплення фактору МІ", що розуміється як такий, що позначає створення фрагментів фактору МІП, які не з'являються внаслідок спонтанного гідролізу або гідролізу ферментами, що фізіологічно розщеплюють - наприклад, тромбіном, який активований фактором ІХ, активований фактором Х і активованою білком С; "Інгібітор розщеплення фактору МІ, каталізує ало-антитілами до фактору МІ", що розуміється як будь-який пептид, що позначає, що належить або не належить до амінокислотної послідовності фактору МІ, або інгібітор протеази, що здатний специфічно нейтралізувати гідролізуючу активність каталітичних антитіл до фактору МІП.
У рекомбінантний фактор МІЇЇ людини була введена радіоактивна мітка 722І. Ало-антитіла до фактору МІ 70 були виділені й очищені з плазми трьох пацієнтів із гемофілією та інгібуванням за допомогою афінної хроматографії на сефарозі (Зерпагозе), до матриксу якої був пришитий очищений імунологічним методом фактор МІ людини. Афінно очищені антитіла до фактору МІ пацієнтів Вог, Спе і Ума! інгібували про-коагулянтну активність фактору МІ до рівня відповідно 57,0, 64,0 і 43,0 ВО/мг (одиниць Веїйпезаа на мг) до.
Спільна інкубація міченого фактору МІ з ало-антитілами до фактору МІ! призводила, у двох пацієнтів з 75 трьох, до протеолізу молекули. Була продемонстрована специфічність гідролізу в сайтах об'єднання антитіл для ало-антитіл ізотипу ДО до фактору МІІІ. Спільна інкубація |22І|-фактору МІ з афінно очищеним ІдсС до фактору
МІП пацієнтів Вог і МуУанІ в присутності інгібіторів протеази апротиніну (0,15мкМ), Е-64 (28мкМ), ЕОТА (1,3мкМ), лейпептину (1О0мкМ) і пепстатину (1О0мкМ) не призводила до інгібування протеолітичної активності.
Заявники охарактеризували головні сайти розщеплення каталітичним дО в молекулі фактору МІЇ! як такі:
Агзт2 бегЗі3 що знаходиться між доменами АТ і А? фактору МІ, Туг 580. Двр/б81, що знаходиться на М-кінці домену АЗ, і Сіц!7924-Авр1795. що знаходиться всередині домену АЗ.
Була продемонстрована залежність гідролізу фактору МІ ало-анитілами до фактору МІ! від часу і дози.
Зокрема, гідроліз спостерігався в умовах, коли Ід до фактору МІ і фактор МІ інкубували спільно при молярних співвідношеннях, що були в 80-9500 разів нижче, ніж ті, що очікувалися в плазмі пацієнтів, що с призводить до припущення, що гідроліз є механізмом інактивації фактору МІІЇ ало-антитілами пацієнтів іп мімо. ге)
Далі заявники досліджували кінетику опосередкованого антитілами гідролізу фактору МІ, інкубуючи ІДС до фактору МІ пацієнта УМаІ із зростаючими концентраціями неміченого фактору МИ при фіксованій концентрації (125/)-фактору МИ. Криві залежності розміру, зворотної швидкості, від розміру, зворотної концентрації субстрату, були лінійними (гї-0,99), що дозволяє припустити, що реакція має просту кінетику -
Міхаеліса-Ментен, як вже спостерігалося для поліклональних каталітичних антитіл. Для пацієнта Уу/аІ були (Се) розраховані каталітична ефективність, що здається, М дах і швидкість гідролізу ало-антитілами до фактору
МІ. На підставі розрахованих кінетичних параметрів гідролізу іп мйго було зроблене припущення, що со механізмом інактивації фактору МІ ало-антитілами пацієнтів іп мімо може бути протеоліз. юю
Асоціація фактору МІ із фактором фон Вілебранда (УМГ) підвищує каталітичну швидкість тромбіну стосовно фактору МІ, оскільки він захищає фактор МІ від гідролізу активованим білком С (АРС). Додавання УМГ до - фактору МІ! призводило до часткового інгібування (тобто на 36,995) гідролізу фактору МІ! імуноглобуліном о (95) до фактору МІ, якщо очищений УМУЕ і фактор МІ! змішували у ваговому співвідношенні, що близьке до їхнього співвідношення в нормальній плазмі, тобто ЗОмкг/мл УМУЕ і ЗООнг/мл фактору МІП. « дю Ідентифікація ало-антитіл до фактору МІ як каталітичних антитіл, на додаток до описаних раніше антитіл, -о що гідролізують, до вазоактивного кишкового пептиду (МІР) у пацієнтів з астмою, антитіл, що гідролізують ДНК с у пацієнтів із системним червоним вовчком та тироглобулін-специфічних каталітичних антитіл у пацієнтів з :з» аутоїмунним тиреоідітом, розширює спектр каталітичних імунних відповідей. Наскільки відомо заявникам, це перше свідчення індукції в людини каталітичних антитіл у відповідь на екзогенне введення білкового антигену.
Кінетичні параметри гідролізу фактору МІ, що проявляють каталітичні властивості (ДО до фактору МІ і -1 395 оцінка кількостей цих антитіл у плазмі дозволяють припустити наявність у каталітичної імунної відповіді функціональної ролі в інактивації фактору МІ іп мімо. У поліклональній суміші ало-антитіл до фактору МІ, (9) що різняться за їхніми функціональними властивостями, каталітичні антитіла можуть інгібувати про-косагулянтну со активність фактору МІ із більшою швидкістю, ніж ті антитіла до фактору МІ, що не каталізують. Таким чином, ідентифікація пептидних епітопів, що є мішенями для протеолітичних антитіл до фактору МІ, може бути (о) 50 вирішальною для розуміння патофізіології відповіді з наявністю інгібітору фактору МІ. Крім того, одержання «мч характеристик інгібіторів фактору МІ як сайт-специфічних протеаз забезпечує нові підходи до лікування пацієнтів, що мають ало-антитіла до фактору М.
Для кращого розуміння даного винаходу та більш ясного уявлення про його цілі, характерні риси та переваги наведено нижчевикладений пояснювальний опис із посиланнями на додані фігури, які подані винятково як 59 приклади, що не обмежують, а ілюструють специфічність розщеплення фактору МІ ало-антитілами до фактору
ГФ) М. г Фіг: Гідроліз І"791|-фактору МІЇЇ афінно очищеними антитілами ДО до Фактору МІ! пацієнтів із гемофілією
А с інгібітором 60 Фіг.1 (А): Мічений 725) фактор МІ інкубували з афінно очищеним ДО до фактору МІ! пацієнтів Вог (смуга
Вог), Спе (смуга Спе) і Ма! (смуга Уа) або тільки з буфером (смуга 1) протягом 1Огод. при 389С, потім проводили ЗОЗ-РАСЕ та авторадіографію. Для двох з трьох пацієнтів (Вог і УМаї) інкубація фактору МІ! з афінно очищеним дО до фактору МІІЇ призводила до гідролізу молекули фактору МІІІЇ. Навпаки, профіль міграції в гелі фактору МІ не змінювався, якщо мічений 729| фактор МІІІ інкубували з ДО до фактору МІЇЇ, який був очищеним 65 із плазми пацієнта Спе (смуга Спе). Профіль міграції фактору МІ не змінювався також і при інкубації з моноклональним дО МОб61 людини до дигоксину (птАбБ) або з нормальним нефракціонованим поліклональним
Ід8о людини (Запдодіобиїйп, Мід), що не виявляє інгібуючої активності стосовно фактору МІЇ
Фіг.1 (В):
Фракції протоку через афінні колонки не містили антитіл до фактору МіЇ, що визначаються методом твердофазного імуноферментного аналізу ЕГ І5А, та не гідролізували мічений 125) фактор МІ.
Фіг.1 (С):
Видалення |до з кислотних елюатів, що містять афінно очищені антитіла до фактору МІ! від пацієнтів Умаї і
Вог, хроматографією на білку С призводило до втрати їхньої гідролітичної активності стосовно фактору МІП.
Фіг.2: Гель-проникаюча хроматографія каталітичної активності антитіл до Фактору МІЇЇ
Фіг.2 (А):
Щоб додатково виключити можливість того, що протеолітична активність антитіл обумовлена примісними протеазами, афінно очищені антитіла до фактору МІ! пацієнта Ууаі опрацьовували 8М сечовиною та піддавали гель-проникаючій хроматографії. Основний пік утримувався у фракції 25, що відповідає дО за тестом ЕГІ5А.
Активність, що гідролізує, елюювалася у фракції ІдС, і така активність не виявлялася у фракціях, у яких був 75 Відсутній до (наприклад, фракція 35).
Фіг.2 (В):
Основний пік, що був виділений у Фракції 25, відповідав ІдС, як свідчить ЗО5-РАСЕ, що несе радіоактивну мітку вмісту фракції.
Фіг.3: Залежність протеолізу | 22І|-фактору МІ афінно очищеними антитілами до фактору МІ! пацієнтів із гемофілією А з інгібітором від дози і від часу
Кінетика гідролізу фактору МІ ало-антитілами до фактору МІ! пацієнтів Вог і МУаІ. Швидкість гідролізу міченого 725| фактору МІ імуноглобуліном С до фактору МІ! пацієнта Уа! була вище, ніж швидкість гідролізу, що виявляється імуноглобуліном з до фактору МІ пацієнта Вог; це дозволяє припустити, що каталітичні антитіла пацієнтів мають різноманітні кінетичні властивості, або, альтернативно, що частка каталітичних СМ антитіл серед антитіл до фактору МІ у пацієнтів різниться. о
Фіг.4: Гідроліз І 22І|-фактору МІ антитілами до Фактору МІ в присутності зростаючих кількостей неопрацьованого (неміченого) Фактору МІП.
Кінетика опосередкованого антитілами гідролізу фактору МІ при інкубуванні дсС до фактору МІ у пацієнта УУа! із зростанням концентрації неміченого фактору МІ в присутності фіксованої концентрації -
Г5Ц-фактору МІ. Додавання зростаючих концентрацій кількостей неміченого фактору МІ призводило до (Те) залежного від дози інгібування гідролізу | 291-фактору МІ! імуноглобуліном С (19) до фактору МІ. Насичення гідролізу фактору МІ не було досягнуто при максимальній концентрації, що була використана (тобто при со 1,7мкМ). Графік залежності величини, що зворотна до швидкості, від величини, що зворотна до концентрації щ3 субстрату, був лінійним (г-0,99), що свідчить про те, що реакція має просту кінетику Міхаеліса-Ментен, як уже спостерігалося для поліклональних каталітичних антитіл. ге
Фіг.5: Інгібування каталітичної активності Ід до фактору МІ! пацієнта У/аї
Протеоліз фактору МІ, що несе радіоактивну мітку, ало-антитілами до фактору МІ пацієнта УУаї пригнічувався до приблизно 6295, якщо антитіла та фактор МІ спільно інкубували в присутності Регаріося « дю (продукт фірми Коспе Оіадповіїсв (зтЬ, Мапппеїт, Сегтапу); це вказує на активність певного інгібітору протеази з в нейтралізації каталітичної активності деяких із каталітичних антитіл. с ПРИКЛАДИ :з» Приклад 1: Афінне очищення антитіл до фактору МІЇЇ
Антитіла виділяли з плазми осадженням сульфату амонію. Потім антитіла, що реагують із фактором МІ, очищали афінною хроматографією на матриці активованої СМВг сефарози 4В, до якої був пришитий фактор МІ, -1 15 що промислово випускається та який очищений імунологічним методом, отримуваний із плазми людини (25000од./Зг гелю). Збирали фракції протоку через колонку. Після ретельного промивання фосфатно-буферним 1 сольовим розчином (РВ5) ріН7,4 антитіла до фактору МІ елюювали розчином 0,2М гліцину рНа2,8, діалізували бо проти РВ5 та концентрували за допомогою Сепігірер. Відбирали проби з фракцій протоку та елюатів і берегли їх до використання при -202С. Фрагменти К(аб)» антитіл до фактору МІІЇ одержували, як описано раніше. (о) Вміст до до фактору МІ у 10мг Ід, що нанесений на колонку, для пацієнтів Вог, Спе і Уа! дорівнювало «м відповідно 130, 20 та 28Омкг (тобто 143-13Омкг/мл нефракціонованої плазми), що узгоджується з попередніми спостереженнями.
Приклад 2: Нейтралізуюча активність по відношенню до фактору МІ
Активність, що нейтралізує, по відношенню до фактору МІ антитіл до фактору МІЇЇ визначали методом
Кагзрег та ін. та виражали в одиницях Веїпезаа (В) (посилання). ВО визначали як величину, що зворотна до (Ф) концентрації ДС, що дає 5095 інгібування про-коагулянтної активності фактору МІІ. Залишкову активність
ГІ фактору МІ вимірювали в одноступінчатому аналізі шляхом вимірювання часу активованого часткового тромбопластину, використовуючи в якості субстрату людську плазму, яка не містить фактору МІМ (Венгіпо), а в бр якості активатора - раїйготріїп 95 плаценти людини (Вейгіпд). Випробувані прогріту плазму або імунологічно очищений Ідс до фактору МІ інкубували з об'єднаної, обробленої цитратом людської плазми протягом 2год. при 372С. Час згортання для чотирьох послідовних розведень референсного зразка плазми (Іттипо АС, УмМіеп) порівнювали з часом згортання трьох розведень кожного випробуваного зразка. Розведення робили в буфері
Омугеп-КоїІег (Оіадповіїда 5іадо). Розбіжності між повторами складали від 1 до 2,595. 65 Афінно очищені антитіла до фактору МІ пацієнтів Вог, Спе і У/аІ інгібували прокоагулянтну активність фактору МІ відповідно до 57,0, 64,0 і 43,0 ВО/мг ІдО.
Приклад 3: Оцінка гідролізу фактору МИ
Рекомбінантний фактор МІЇЇ людини, що випускається в промисловості, мітили 125) іодогенним методом до питомої активності 11,б6нКюрі/мкг. (29П-фактор МІ! (від 1,5 до 15Онг) інкубували в ХОмкл буфера 5Ом трис-НСІ рНІО,7, 100ММ гліцин, 0,025905 твін-20 та 0,0295 МаМ»а без або з додаванням від 17 до 1667нНМ імунологічно очищеного ДС до фактору МІ протягом від бхв. до 1Огод. при 382С. Моноклональний ДО МОб61 людини до дигоксину (тАБ) та нормальний нефракціонований людський поліклональний Ідс (Мід, Запаодіобиїп) використовували в якості негативних контролів. Проби змішували у відношенні 1:1 із буфером Лемлі без меркаптоетанолу та після нанесення в осередки 20мкл кожної проби піддавали їх без кип'ятіння електрофорезу 70 при 505. Електрофорез проводили паралельно в 7,595 і 1595 гелях із ЗОЗ при умовах, що не відновлюють.
Електрофорез проводили при кімнатній температурі за допомогою системи тіпі-РКОТЕАМ ІІ при 25мА/гель до досягнення фронтом барвника низу гелю. Потім гелі сушили та зони білка виявляли за допомогою Х-ОМАТ АК.
Після авторадіографії сканували зони фактору МІ із молекулярною вагою 200 і ЗООкДа, що завжди гідролізуються дО до фактору МІ, щоб мати можливість розрахувати швидкість гідролізу міченого фактору МІ.
Приклад 4: Швидка гель-фільтраційна рідинна хроматографія білка
Аліквоту 10Омкл ІдсС до фактору МІ пацієнта УУа! (74О0мкг), що оброблена 8М сечовиною, піддавали гель-фільтрації на колонці із суперозою-12, яка урівноважена РВЗ із 0,0195 азиду, при швидкості протоку 0,2мл/хв. Збирали фракції об'ємом 50Омкл та після 10-кратного розведення аналізували їх на наявність ДО методом ЕГІЗА-сендвіч і на протеолітичну активність стосовно фактору МІ. Білки у фракції 25 мітили 72» і піддавали БО5-РАСЕ при умовах, що не відновлюють, паралельно з нормальним поліклональним ІДС людини.
Гель забарвлювали барвником кумасі блакитним, а також авторадіографували; потім обидва зображення сполучали. Основний пік, виділений у фракції 25, відповідав дос, відповідно до ЕГІЗА і 50О5-РАСЕ міченого вмісту фракції. Активність, що гідролізує, елюювалася разом із фракцією ІдсС і не виявлялася у фракціях, у яких був відсутнім до (наприклад, фракція 35). с
Приклад 5: Аналіз послідовностей МН»ео-кінця Го)
Сахарозний склад із неміченим рекомбінантним фактором МІ (ГОМА-ВНК) (З0Омкг, осіосод аа, Вауег
Согрогайоп, Вегкеіеу, СА, США) опрацьовували до до фактору МІ! пацієнта Ума! (74мкг) у 1500мкл буфера 50м тріс-НСІ рН7,7, 100ММ гліцин, 0,025905 твін-20 і 0,0295 МаМаз протягом 24год. при 3820. Отримані фрагменти фактору МІ піддавали ЗОЗ-РАСЕ у 1095 гелі при 5ОмМА в умовах, що не відновлюють, та переносили протягом - 2год. при 1Т00мМА на мембрану Нуропа-г РМОЕ (Атегезпат, ГіШе Спакнопі, Англія) у ТММ САРЗ та 10965 етанолі (Се) при рНІ11,0. Після фарбування кумасі блакитним видимі зони вирізали та проводили М-кінцеве секвенування за допомогою автоматичного білкового мікросеквенатора Ргозіге 492 сі С (РЕ-Арріїеа Віозувіетв, Ровіег Сйу, СА, со
БА). Кількість секвенованого білку, в залежності від фрагмента, варіювала від 0,5 до 2 пікомолей. юю зе Основними доступними для розщеплення зв'язками були такі: Ага 372-Зег?"З (3725373), що знаходиться між м доменами Аї7 і А? фактору МІ, Туг'б80-Двр'б81 (у1680. Г)16815, що знаходиться на М-кінці домену АЗ, і
СіІнт794 Двр 1795 (р 1794.317953, Що знаходиться всередині домену АЗ. Декілька сайтів розщеплення фактору МІ антитілами до фактору МІ можуть мати походження від індивідуальних антитіл із поліспецифічною каталітичною активністю або ж поліклональних популяцій антитіл, кожний тип із яких має унікальну специфічність у змісті « сайта розщеплення. 8 с ! 7 - й (8372-5313) й - (Е 1 194 Ду 1 195)
Азр Сім Авр Сім Авп Сіп Зег (ОЕОЕМО)| Туг1680 дер 1681 с пи Й
Приклад 6: Дослідження інгібування проведено за допомогою Реїаріос - загального інгібітору серинових
Фо протеаз «м Гідроліз (7291|-фактору МІ афінно очищеними антитілами ДдС до фактору МІ! пацієнтів із гемофілією А з інгібітором в присутності Регаріос?, |(25І|-фактор МІ (15Онг) інкубували окремо, при БОмкг/мл імунологічно очищеного ДС до фактору МІ пацієнта У/аІ або в присутності і (дО до фактору МІП, та інгібітору серинових протеаз Ретабіос? (Военпгіпдег) протягом 5год. при 382С. Потім фактор МІІЇ аналізували за допомогою ЗО5-РАСЕ у 7,595 гелі за умов, що не відновлюють. Після авторадіографії зони фактору МІ із молекулярною вагою 200 і
ІФ) ЗООкДа, незмінно гідролізує Я до фактору МІ, сканували, щоб обчислити відсоток гідролізу міченого фактору іме) М.
Протеоліз радіактивно міченого фактору МІ ало-антитілами до фактору МІ пацієнта Ума! був інгібований 60 до рівня приблизно 6295 у тому випадку, коли антитіла та фактор МІІІ інкубували спільно при Реїаріос?, що вказувало на спроможність деякого інгібітору серинових протеаз нейтралізувати каталітичну активність деяких каталітичних антитіл.
Подальші спостереження
При скринінгу очищених до від десяти таких, що мають високу імунну відповідь, пацієнтів із гемофілією А, 65 при використанні в якості молекули-мішені міченого 729| фактору МІ, для шести пацієнтів спостерігали зміни в профілі міграції фактору МІ. Ці результати підкріплюють попередні спостереження заявників і вказують на те, що каталітичні антитіла до фактору МІ! є приблизно в 6095 пацієнтів.
Claims (36)
1. Спосіб визначення наявності у ссавця ало-антитіл до фактора МІЇ, що спроможні розщеплювати фактор МІ, який відрізняється тим, що включає: ї) виділення плазми із зразка крові, взятого в зазначеного ссавця; 70 ії) виділення зі вказаної плазми ало-антитіл до фактора МІ; її) приведення зазначених ало-антитіл до фактора МІ у контакт з фактором МІ на період часу, достатній для забезпечення розщеплення вказаного фактора МІІІ зазначеними ало-антитілами до фактора МІ; і їм) визначення, після вказаного періоду часу, чи ефективно зазначені ало-антитіла до фактора МІ розщепили вказаний фактор МІ.
2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що на етапі (ії) зазначені ало-антитіла до фактора МІ! виділяють із вказаної плазми, об'єднуючи їх із зазначеним фактором МІ, причому зазначений фактор МІІЇ переважно пов'язаний із матриксом.
З. Спосіб за п. 1 або 2, який відрізняється тим, що на етапі (ії) зазначені ало-антитіла до фактора МІЇ виділяють за допомогою афінної хроматографії.
4. Спосіб за п. З, який відрізняється тим, що на етапі (її) зазначена афінна хроматографія включає застосування фактора МІЇ, який ковалентно пов'язаний з матриксом сефарози, що переважно активований ціаноген-бромідом.
5. Спосіб за будь-яким з пп. 1-4, який відрізняється тим, що на етапі (ії) вказаний фактор МІЇЇ мітять міткою, переважно радіактивною міткою, зокрема, такою як 125, с
6. Спосіб за будь-яким з пп. 1-5, який відрізняється тим, що на етапі (ії) зазначений фактор МІ! приводять до контакту з ало-антитілами до фактора МІ! на період часу від приблизно 0,5 години до приблизно 30 годин, і) переважно близько 10 годин, при температурі від приблизно 152 до приблизно 402С, переважно 3820.
7. Спосіб за будь-яким з пп. 1-6, який відрізняється тим, що етап (ім) проводять шляхом визначення, що включає метод поділу, такий як електрофорез у гелі, зокрема електрофорез у поліакриламідному гелі у - присутності додецилсульфату натрію (ЗО5-РАСЕ), або гель-фільтрацію, зокрема, таку як швидка рідинна гель-фільтраційна хроматографія білків, та техніку візуалізації, зокрема, таку як авторадіографія. ее,
8. Спосіб за будь-яким з пп. 1-7, який відрізняється тим, що додатково включає: с м) одержання характеристик сайту (сайтів) молекули зазначеного фактора МІ, у якому (яких) відбувається розщеплення зазначеними ало-антитілами до фактора МІ. о
9. Спосіб за п. 8, який відрізняється тим, що зазначене одержання характеристик здійснюють, приводячи ча вказаний фактор МІ у контакт із зазначеними ало-антитілами до фактора МІ, які спроможні розщеплювати фактор МІ, розділяючи та потім секвенуючи отримані внаслідок такої процедури фрагменти фактора МІ.
10. Спосіб за п. 8 або 9, який відрізняється тим, що зазначений поділ проводять, використовуючи таку техніку, як електрофорез у гелі, зокрема, таку як ХОБ-РАСЕ. «
11. Спосіб за будь-яким з пп. 8-10, який відрізняється тим, що зазначене секвенування здійснюють, шщ с використовуючи таку техніку, як М-кінцеве секвенування, зокрема, із використанням автоматичного білкового й мікросеквенатора. и"?
12. Спосіб за будь-яким з пп. 8-11, який відрізняється тим, що зазначене секвенування в такий спосіб локалізує спроможні до розщеплення зв'язки: Агд 3/2-бег3"З, що знаходиться між доменами АТ і А2, Тутбво дер1581, що знаходиться на М-кінці домену АЗ, і Сі !792-Авр/795. що знаходиться всередині домену АЗ - молекули фактора МІ. сл
13. Амінокислотна послідовність: Зег Маї Аа Г уз Гуз Нів Рго, со що інгібує будь-який сайт у молекулі фактора МІ, що чутливий до розщеплення ало-антитілами до фактора б 250. М.
14. Амінокислотна послідовність: "м Авр Си Авр Сім Авп Сіп Зег, що інгібує будь-який сайт у молекулі фактора МІ, що чутливий до розщеплення ало-антитілами до фактора МІ: 52
15. Амінокислотна послідовність: о Авр Сп Аг Сп Су Айа Сім, що інгібує будь-який сайт у молекулі фактора МІ, що чутливий до розщеплення ало-антитілами до фактора о МІЙ.
16. Застосування інгібітору розщеплення фактора МІ для нейтралізування каталітичної активності 60 ало-антитіл до фактора МІ.
17. Застосування за п. 16, яке відрізняється тим, що інгібітор являє собою інгібітор протеаз, зокрема, такий як 4-(2-аміноетил)бензил-сульфонілфторид-гідрохлорид.
18. Застосування за п. 16 або 17, яке відрізняється тим, що згаданий інгібітор інгібує розщеплення спроможних до розщеплення зв'язків: Агу 272-Зег373, що знаходиться між доменами А1 і А2, Туг'б80-ДАвр/б81.. Що бо знаходиться на М-кінці домену АЗ, і Сіи!794-Авр/795, що знаходиться всередині домену АЗ молекули фактора МІ.
19. Інгібітор розщеплення фактора Мі, що каталізується ало-антитілами до фактора МІЇ, який відрізняється тим, що включає амінокислотну послідовність: Зег Маї Аа Г уз Гуз Нів Рго.
20. Інгібітор розщеплення фактора МІ, що каталізується ало-антитілами до фактора МІ, який відрізняється тим, що включає амінокислотну послідовність: Авр Сім Авр Си Авп Сп Зег.
21. Інгібітор розщеплення фактора МІ, що каталізується ало-антитілами до фактора МІ, який відрізняється тим, що включає амінокислотну послідовність: 70 Авр Сп Аг Сп Су Айа Сім.
22. Фармацевтична композиція, яка відрізняється тим, що містить фармацевтично ефективну кількість ало-антитіл до фактора МІ, що спроможні розщеплювати фактор МІ, особливо таких, які можливо ідентифікувати згідно із будь-яким із пп. 1-6.
23. Фармацевтична композиція за п. 22, яка відрізняється тим, що містить фармацевтично ефективну 7/5 Кількість ало-антитіл до фактора МІЇ, що спроможні розщеплювати фактор МІ, яку використовують для лікування ссавця, який страждає на патологію, що є результатом аномального рівня вмісту фактора МІ у його крові.
24. Фармацевтична композиція за п. 23, яка відрізняється тим, що її застосовують, коли вказана патологія є результатом наявності надлишку фактора МІЇЇ у його крові.
25. Фармацевтична композиція за п. 23 або 24, яка відрізняється тим, що її застосовують, коли вказана патологія має тромбозну природу, зокрема являє собою тромбоз.
26. Застосування фармацевтично ефективної кількості інгібітору розщеплення фактора МІ за п. 16 для створення фармацевтичної композиції для нейтралізування каталітичної активності ало-антитіл до фактора МІ.
27. Застосування за п. 26, яке відрізняється тим, що згадана композиція містить інгібітор розщеплення сч ов фактора МІ і її використовують, зокрема, для лікування ссавця, який страждає на патологію, що є результатом субфізіологічного рівня вмісту фактора МІ! у його крові. і)
28. Застосування за будь-яким з пп. 26 або 27, яке відрізняється тим, що згаданий інгібітор являє собою інгібітор протеаз, зокрема, такий як 4-(2-аміноетил)бензил-сульфонілфторид-гідрохлорид.
29. Застосування за будь-яким з пп. 26-28, яке відрізняється тим, що згаданий інгібітор інгібує розщеплення М зо спроможних до розщеплення зв'язків: Агу 272-Зег3"З, що знаходиться між доменами Ат і А2, Туг'б80-ДАвр/б81,. що знаходиться на М-кінці домену АЗ, і СІи!794-Авр1795, що знаходиться всередині домену АЗ молекули фактора МІП. ї-о
30. Застосування за будь-яким з пп. 26-29, яке відрізняється тим, що згаданий інгібітор включає с амінокислотну послідовність: Зег Маї Аа Г уз Гуз Нів Рго. й
31. Застосування за будь-яким з пп. 26-29, яке відрізняється тим, що згаданий інгібітор включає її амінокислотну послідовність: Авр Сім Авр Си Авп Сп Зег.
32. Застосування за будь-яким з пп. 26-29, яке відрізняється тим, що згаданий інгібітор включає « амінокислотну послідовність: Авр Сіп Агу Сіп Су Аа Сім. - с
33. Застосування за будь-яким з пп. 26-32, яке відрізняється тим, що вказана патологія має гемофілічну а природу, зокрема являє собою захворювання, що включає коагуляційні порушення, що виникають через "» недостатність фактора МІ, таке як гемофілія А.
34. Застосування за п. 26, яке відрізняється тим, що містить фармацевтично ефективну кількість інгібітору розщеплення фактора МІІїЇ, що каталізується ало-антитілами до фактора МІ. -і
35. Ало-антитіло до фактора МІЇ, що спроможне розщеплювати фактор МІЇЇ та яке можливо ідентифікувати сл згідно зі способом за пп. 1-12.
36. Ало-антитіло до фактора МІ за п. 35, яке відрізняється тим, що розщеплює наступні спроможні до со розщеплення зв'язки в молекулі фактора МІ: Агу 3/2-бег3"З, що знаходиться між доменами Ат і А2, Фу 2000 ТУпбво дврб81, що знаходиться на М-кінці домену АЗ, і Сі 1794-Авр"795, що знаходиться всередині домену АЗ молекули фактора МІП. що Ф) іме) 60 б5
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP99401841A EP1074842A1 (en) | 1999-07-21 | 1999-07-21 | Catalytic anti-factor VIII allo-antibodies |
| PCT/EP2000/006870 WO2001007918A1 (en) | 1999-07-21 | 2000-07-18 | Catalytic anti-factor viii allo-antibodies |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA75867C2 true UA75867C2 (en) | 2006-06-15 |
Family
ID=8242069
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2002010487A UA75867C2 (en) | 1999-07-21 | 2000-07-18 | A method of determining the presence of catalytic factor viii allo-antibodies capable of degrading factor viii in a mammal, amino acid sequence inhibiting any site in factor viii molecule being sensible to cleavage by allo-antibodies in factor viii (variants), use of inhibitor of cleavage of factor viii to neutralize a catalytic activity of allo-antibodies to factor viii and pharmaceutical composition containing allo-antibodies being capable of degrading factor viii |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7507540B1 (uk) |
| EP (2) | EP1074842A1 (uk) |
| JP (2) | JP2003505434A (uk) |
| KR (1) | KR100788435B1 (uk) |
| CN (1) | CN1229646C (uk) |
| AU (1) | AU777615B2 (uk) |
| BR (1) | BR0012613A (uk) |
| CA (1) | CA2379818A1 (uk) |
| CZ (1) | CZ2002248A3 (uk) |
| EE (1) | EE200200034A (uk) |
| HK (1) | HK1044372A1 (uk) |
| HU (1) | HUP0201941A3 (uk) |
| IL (1) | IL147700A0 (uk) |
| IS (1) | IS6238A (uk) |
| MX (1) | MXPA02000752A (uk) |
| NO (1) | NO20020253L (uk) |
| NZ (1) | NZ516702A (uk) |
| PL (1) | PL353739A1 (uk) |
| RU (1) | RU2258935C2 (uk) |
| SK (1) | SK862002A3 (uk) |
| TR (1) | TR200200340T2 (uk) |
| UA (1) | UA75867C2 (uk) |
| WO (1) | WO2001007918A1 (uk) |
| ZA (1) | ZA200200351B (uk) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MY166429A (en) | 2010-11-17 | 2018-06-26 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Multi-specific antigen-binding molecule having alternative function to function of blood coagulation factor viii |
| FR2969761A1 (fr) * | 2010-12-22 | 2012-06-29 | Lfb Biotechnologies | Procede de dosage d'anticorps diriges contre le facteur viii |
| TWI700300B (zh) | 2014-09-26 | 2020-08-01 | 日商中外製藥股份有限公司 | 中和具有第ｖｉｉｉ凝血因子（ｆｖｉｉｉ）機能替代活性的物質之抗體 |
| TWI701435B (zh) | 2014-09-26 | 2020-08-11 | 日商中外製藥股份有限公司 | 測定ｆｖｉｉｉ的反應性之方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5744446A (en) * | 1992-04-07 | 1998-04-28 | Emory University | Hybrid human/animal factor VIII |
| WO1994011013A1 (en) * | 1992-11-13 | 1994-05-26 | Duke University | Chimeric blood coagulation proteins |
| US5910481A (en) * | 1995-11-13 | 1999-06-08 | Immuno Ag | Hybrid proteins with modified activity |
| US5744326A (en) * | 1996-03-11 | 1998-04-28 | The Immune Response Corporation | Use of viral CIS-acting post-transcriptional regulatory sequences to increase expression of intronless genes containing near-consensus splice sites |
-
1999
- 1999-07-21 EP EP99401841A patent/EP1074842A1/en not_active Withdrawn
-
2000
- 2000-07-18 CA CA002379818A patent/CA2379818A1/en not_active Abandoned
- 2000-07-18 TR TR2002/00340T patent/TR200200340T2/xx unknown
- 2000-07-18 HU HU0201941A patent/HUP0201941A3/hu unknown
- 2000-07-18 AU AU68245/00A patent/AU777615B2/en not_active Ceased
- 2000-07-18 PL PL00353739A patent/PL353739A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2000-07-18 MX MXPA02000752A patent/MXPA02000752A/es unknown
- 2000-07-18 BR BR0012613-6A patent/BR0012613A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-07-18 CZ CZ2002248A patent/CZ2002248A3/cs unknown
- 2000-07-18 UA UA2002010487A patent/UA75867C2/uk unknown
- 2000-07-18 EP EP00956204A patent/EP1196782A1/en not_active Withdrawn
- 2000-07-18 US US10/031,938 patent/US7507540B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-07-18 SK SK86-2002A patent/SK862002A3/sk unknown
- 2000-07-18 NZ NZ516702A patent/NZ516702A/en unknown
- 2000-07-18 WO PCT/EP2000/006870 patent/WO2001007918A1/en active IP Right Grant
- 2000-07-18 RU RU2002101123/15A patent/RU2258935C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-07-18 EE EEP200200034A patent/EE200200034A/xx unknown
- 2000-07-18 KR KR1020027000657A patent/KR100788435B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-07-18 CN CNB008106339A patent/CN1229646C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-07-18 IL IL14770000A patent/IL147700A0/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-07-18 JP JP2001512295A patent/JP2003505434A/ja active Pending
-
2002
- 2002-01-15 ZA ZA200200351A patent/ZA200200351B/en unknown
- 2002-01-16 IS IS6238A patent/IS6238A/is unknown
- 2002-01-17 NO NO20020253A patent/NO20020253L/no not_active Application Discontinuation
- 2002-07-24 HK HK02105463.5A patent/HK1044372A1/zh unknown
-
2009
- 2009-01-16 US US12/320,077 patent/US20090208512A1/en not_active Abandoned
- 2009-07-27 JP JP2009174550A patent/JP2009292823A/ja not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR100788435B1 (ko) | 2007-12-24 |
| EP1074842A1 (en) | 2001-02-07 |
| RU2258935C2 (ru) | 2005-08-20 |
| EP1196782A1 (en) | 2002-04-17 |
| US20090208512A1 (en) | 2009-08-20 |
| CN1361865A (zh) | 2002-07-31 |
| KR20020042618A (ko) | 2002-06-05 |
| HUP0201941A2 (en) | 2002-10-28 |
| CN1229646C (zh) | 2005-11-30 |
| MXPA02000752A (es) | 2003-07-14 |
| JP2003505434A (ja) | 2003-02-12 |
| TR200200340T2 (tr) | 2003-01-21 |
| AU6824500A (en) | 2001-02-13 |
| SK862002A3 (en) | 2002-06-04 |
| WO2001007918A1 (en) | 2001-02-01 |
| NZ516702A (en) | 2003-10-31 |
| JP2009292823A (ja) | 2009-12-17 |
| PL353739A1 (en) | 2003-12-01 |
| US7507540B1 (en) | 2009-03-24 |
| IL147700A0 (en) | 2002-08-14 |
| BR0012613A (pt) | 2002-04-09 |
| HUP0201941A3 (en) | 2005-01-28 |
| NO20020253L (no) | 2002-03-13 |
| CA2379818A1 (en) | 2001-02-01 |
| NO20020253D0 (no) | 2002-01-17 |
| CZ2002248A3 (cs) | 2002-07-17 |
| IS6238A (is) | 2002-01-16 |
| AU777615B2 (en) | 2004-10-21 |
| HK1044372A1 (zh) | 2002-10-18 |
| EE200200034A (et) | 2003-06-16 |
| ZA200200351B (en) | 2003-03-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105008397B (zh) | 作为治疗试剂的Gla结构域 | |
| BRPI0816837A2 (pt) | antídotos para inibidores do fator xa e métodos para sua utilização | |
| US7695923B2 (en) | CFTR polypeptides methods to overcome biosynthetic misprocessing | |
| Hasan et al. | Mechanisms of Arg-Pro-Pro-Gly-Phe inhibition of thrombin | |
| US4980279A (en) | Cellular fibronectin: polypeptides, anti-polypeptide antibodies and assay methods | |
| US20080118933A1 (en) | Methods of screening for inhibitors of antiplasmin cleaving enzyme | |
| TWI774717B (zh) | 老年性黃斑部變性症治療用肽及其製造方法 | |
| JPH08506181A (ja) | 新規抗凝固性補助因子活性 | |
| CA1335800C (en) | Synovial phospholipases | |
| UA75867C2 (en) | A method of determining the presence of catalytic factor viii allo-antibodies capable of degrading factor viii in a mammal, amino acid sequence inhibiting any site in factor viii molecule being sensible to cleavage by allo-antibodies in factor viii (variants), use of inhibitor of cleavage of factor viii to neutralize a catalytic activity of allo-antibodies to factor viii and pharmaceutical composition containing allo-antibodies being capable of degrading factor viii | |
| Citarella et al. | Control of human coagulation by recombinant serine proteases: Blood clotting is activated by recombinant factor XII deleted of five regulatory domains | |
| JP4767869B2 (ja) | Ｃｄ３８スプライスバリアント及びその使用 | |
| US20100212030A1 (en) | Use of n-terminal and c-terminal proteomics technology to enhance protein therapeutics and diagnostics | |
| WO1991004276A1 (fr) | Polypetpides de thrombomoduline humaine physiologiquement actifs et isoles | |
| MX2008015649A (es) | Sustratos e inhibidores de enzima de escision de antiplasma y metodos de uso. | |
| US6232089B1 (en) | CD23 processing enzyme preparation | |
| US8071348B2 (en) | Protein tyrosine phosphatase substrate-trapping double mutant and uses thereof | |
| US20080057491A1 (en) | Substrates and inhibitors of antiplasmin cleaving enzyme and methods of use | |
| RU2002101123A (ru) | Каталитические алло-антитела к фактору VIII | |
| JP2006180813A (ja) | アミノペプチダーゼｏおよびその利用 | |
| US7666981B1 (en) | Inhibitors of prostasin | |
| CN114981661A (zh) | 用于诊断与嗜中性粒细胞胞外陷阱相关的纤溶功能不全的方法 | |
| BECHERER et al. | Molecular Aspects of C3 Interactions and Structural/Functional Analysis of C3 |