UA71608C2 - A method for producing the cyclic pentapeptide - Google Patents

Description

Опис винаходу

Винахід стосується нового способу одержання циклічного пентапептиду цикло(Ага-СІу-Азр-ОРпе-ММемаї). 2 Циклічні пентапептиди, у тому числі цикло(Ага-сІу-Азр-ЮОРпе-ММемаї) і його фізіологічно прийнятні солі, описані в ЕР 0770622. Даний винахід варто розглядати в комбінації з заявкою ЕР 0770622.

Звичайно циклічні пептиди одержують шляхом циклізації лінійної молекули-попередника при звичайних для пептидного синтезу умовах.

Щоб забезпечити вибірковість при утворенні зв'язків між двома амінокислотами чи двома сегментами, що 70 складаються з декількох амінокислот, що необхідно для циклізації лінійного пептиду, певні функціональні групи амінокислот, які не повинні брати участі у реакції, варто блокувати придатними захисними групами. У зв'язку з цим, були розроблені різні типи захисних груп для функціональних аміногруп і карбоксильних, гідроксильних, тіолових або карбоксамідних функціональних груп, а також для гуанідинової функціональної групи або імідазолу азоту; комбінування цих захисних груп відкриває широкі можливості оптимізації вищезгаданих реакцій. Синтез 12 лінійних молекул-попередників - лінійних пептидів - можна робити двома способами: шляхом твердофазного пептидного синтезу або в розчині. У цьому випадку можна здійснювати поетапне зв'язування амінокислот або сегментів конденсування фрагментів амінокислот. Відповідні етапи зв'язування можна, у свою чергу, здійснювати або за допомогою різних реагентів, що конденсують, наприклад - карбодиїімідів, карбодиімідазолу, реагентів уронового типу, зокрема - ТВТИ (ТБТУ), або застосовуючи методи змішаних ангідридів або методи активних складних ефірів.

Предмет винаходу полягає в розробці нового, поліпшеного щодо прототипу, способу одержання цикло (Агао-СІу-Азр-ОРпе-ММемаї).

Було виявлено, що при синтезі циклопептиду цикло (Ага-сІу-Азр-ОРпе-ММемаї) шляхом циклізації лінійної молекули-попередника, комбінація захисних груп 2,2,4,6,7-пентаметилдигідробензофуран-5-сульфонилу с (РЕКПбф)) для гуанідинової групи в боковому ланцюзі аргініну і бензилу (В2! (Взл) ) для карбоксильної групи Ге) в боковому ланцюзі аспарагінової кислоти, дозволяє оптимізувати процес відносно виходу готового продукту.

Таким чином, винахід стосується способу одержання циклічного пентапептиду /цикло (Ага-СІу-Азр-ОРпе-ММемаї) шляхом циклізації лінійного пентапептиду, вибраного з групи, що складається з:

Н-Ага(РБО-СІу-Азр(ОВ821)-ОЄпе-ММема!-онН, со

Н-СІу-Азр(ОВ21)-ОРне-ММема!-Аго(РЬВ-ОН, о

Н-Азр(ОВ2)-ОРпе-ММемаїІ-Ага(РЬО-СІу-ОН,

Н-ОРпе-ММема!І-Ага(РЬД)-СІу-Азр(О82)-ОН або ее,

Н-ММемаї!-Ага(РБ)-СІу-Азр(ОВ21)-ОРНе-ОН, «-- наступного видалення захисної групи і, при необхідності, подальшого перетворення в його фізіологічно 3о прийнятні солі. в

Крім того, винахід стосується способу одержання циклічного пентапептиду цикло(Ага-СІу-Азр-ЮОРпе-ММемаї) як описано вище, що відрізняється тим, що циклізують лінійний пентапептид Н-Азр(ОВ2І)-ОРпе-ММемМаїІ-Ага(РЬО-СІу-ОН. «

Для цієї реакції циклізації лінійні пептиди вибирають із групи, що складається з З 50 Н-Ага(РЬЯУ-СІу-Азр(ОВ21)-ОРпе-Мтема!-ОН, с Н-сІу-Азр(ОВ821)-ОРпе-ММемаї!-Ага (РЬО-ОН, з» Н-Азр(ОВ2)-ОРпе-ММемаїІ-Ага(РЬО-СІу-ОН,

Н-ОРпе-ММема!І-Ага(РЬБІ-СІу-Азр(ОВ21І)-ОН або

Н-ММемаї!-Ага(РБМ)-СІу-Азр(ОВ21)-ОРНпе-ОН.

Умови проведення цієї реакції стосовно вибору дегідратуючого агента, інертного розчинника і температури і реакції, а також наступної реакції перетворення продукту у фізіологічно прийнятні солі вже розкриті в ЕР - 0770622.

Залишок бензильної захисної групи в боковому ланцюзі аспарагінової кислоти можна видалити за відомими

Ме методиками (див.: Т.М/.ОСгеепе, Р.О.М.МУуців, Ргоїесіїме Сгоимрзв іп Огдапіс Спетівігу, 2-ге вид., Уміеу, Нью-Йорк, ав! 20 1991 чи Р.).Косіепекі, Ргоїесііпд ОСгоирз, 1-ше вид., Сеогде Тпіете Мегіад, Штуттгарт-Нью-Йорк, 1994, Н.Кип?,

Н.М/аідтапп у Сотргепепвзіме Огдапіс бупіпевіз, том.б (ред. В.М.Ттові, І.Ріетіпо, Е.М/іпФепеі4О, Регдатоп, со Оксфорд. 1991, стор.631-701), наприклад, шляхом обробки воднем у присутності каталізатора (наприклад, каталізатора з благородного металу, зокрема паладію на вугіллі). Придатними розчинниками є спирти, наприклад метанол або етанол, а також аміди, зокрема - ОМЕ, або їх суміші з іншими інертними розчинниками, 29 наприклад - з водою. Як правило, гідрогеноліз проводять при температурах в інтервалі приблизно від О до 1007С

ГФ) і тисках в інтервалі приблизно від 1 до 200 бар, переважно при 20-30" і 1-10 бар.

Захисну групу РБЇ (Пбф), введену в пептидну хімію І.А.Сагріпо та інш. Теї. Гей. 1993, 34, 7829-7832, о видаляють, наприклад, шляхом обробки 9595 трифтороцтовою кислотою (ТРА(ТФО)). Захисна група РЕКПбф) у цьому випадку виявляє велику нестійкість стосовно ТРА(ТФО), ніж захисні групи, що мають аналогічну структуру, 60 4-метокси-2,3,6--риметилфенілсульфоніл. (МЕ(МТр)) і 2,2,5,7,8-пентаметилхроман-б-сульфоніл. (Ртс(Пмух)), які теж можна застосовувати як захисні групи для бокового ланцюга при синтезі цикло(Ага-СІу-Азр-ОРпе-ММемаї).

ТРА(ТФО) переважно застосовують у надлишку, без додавання іншого розчинника. ТРА(ТФО) можна також використовувати в суміші з інертним розчинником, наприклад, можна використовувати комбінацію

ТРА(ТФО)/дихлорметан у співвідношенні 6:4. Крім того, ТРА(ТФО) можна застосовувати з додаванням -1090 бо води, переважно - 295. Реакцію розкладання доцільно проводити при температурі в інтервалі приблизно від 0 до

50"С, переважно - від 15 до З0"С (кімнатна температура).

Абревіатури, які використовуються в даному описі, стосуються радикалів наступних амінокислот:

Азвр Аспарагінова кислота

Ага Аргінін

Су Гліцин

Рпе Фенілаланін

Уа! Валін

Крім того, вище і далі наступні скорочення мають такі значення: 70 Вос Бік трет-Бутоксикарбоніл

ВІ Бзл Бензил

СНА ЦГА Циклогексиламін

Ор о Характеристика ЮО-амінокислоти рес ДЦКІ Дициклогексилкарбодиімід

ОМАР ДМАП Диметиламінопіридин

ОМЕ ДМФ Диметилформамід

ЕОСІ ЕДКІ М-етил-М'(Здиметиламінопропіл) карбодиімиду карбохлорид

ЕСЕт Етил

Етос Фмок 9-фторетилметоксикарбоніл

НОВІ ГОБт 1-Гідроксибензотриазол

Ме Ме Метил

МТВЕ МТБЕ Метил трет-бутиловий ефір

Міг Мтр 4-метокси-2,3,6--риметилфенілсульфоніл

Мте Мму М-метильована А-аміногрупа сч

ММР ММП М-метилпіролідон

ОїВи ОТБу Трет-бутиловий ефір і)

Оте ОМе Метиловий ефір

Оєї Оеєт Етиловий ефір

РЬГ Пбф 2,2,4,6,7-пентаметилдигідробензофуран-5-сульфоніл со зо Ртс Пмх 2,2,5,7,8-пентаметилхроман-б-сульфоніл

РОА ФОА Феноксиацетил о

Рг Пр Пропіл Ге зи Су Сукцинімід

ТВТ ТБТУ тетрафтороборат 2-(1Н-бензотріазол-1-іл)-1,1,3,3-тетраметилуронію --

ТЕА ТФО Трифтороцтова кислота ї- 7 7 Бензилоксикарбоніл

Крім того, було виявлено, що конкретний вибір саме захисної групи РБГ (Пбф) для бокового ланцюга Ага і

ВІ(Бзл) для Агзр навіть при синтезі лінійних пептидів, що як згадано раніше, є проміжними продуктами при синтезі цикло(Ага-СІу-Азр-ОРпе-ММемаї), забезпечує підвищення виходу готового продукту на відповідних « стадіях синтезу. У результаті, вихід цикло(Аго-Сіу-Авр-ОРпе-ММемМаї) у цілому зростає, що приводить до з с відповідного зниження вартості синтезу.

Й Підвищення виходу досягається в цьому випадку як при твердофазному пептидному синтезі, так і при синтезі и? в розчині лінійних пептидів

Н-Ага(РБД)-СІу-Азр(ОВ21)-ОРпе-ММема!-ОН,

Н-сІу-Азр(ОВ821)-ОРпе-ММема!-Ага(РЬО-ОН, -І Н-Азр(ОВ2)-ОРпе-ММемаїІ-Ага(РЬО-СІу-ОН,

Н-ОРпе-ММема!І-Ага(РЬБІ-СІу-Азр(ОВ21І)-ОН або - нН-ММема!І-Ага(РЬБИ-с1у-Азр(ОВ2І)-ОРпе-ОН, зокрема б Н-Азр(О8В21)-ОРпе-ММемаіІ-Ага(РЬО-СІу-ОН.

Захищені амінокислоти або амінокислотні фрагменти, що застосовуються в цих двох методах синтезу, о звичайно одержують шляхом амінокислотного і пептидного синтезу, описаного в класичних роботах Ргіпсіріев ої с Рерііде Зупіпезів, ред. М.ВодапеКу, Зргіпдег Мепіад Берлін 1984; Ноцреп Уу/еуЇ, Меїйодеп дег огдапізспеп Спетіє

ІМеїйодв ої Огдапіс Спетівігу)|), Ге, Тот 15/11, 1974, сторінки 1-806, Сеогд Тпіете Мегіад Штуттгарт/

СаіІріоепет/Момаріоснет Саїйаіодце апа Зупіпевзіз Напароок 1999;

Зупіпезів Моїез ог Рерііїде Зупіпевзів Ргоїосоїв, ред. М.М/У.Реппіпдіоп апа В.М.ОСцпп у Меїйподз іп Моїіесшаг

Віоїсду, Том.35, Нитапа Ргезз Тоїомжа М.), 1994. У цих і інших, не згаданих тут, роботах, зазначені умови (Ф, проведення реакцій, необхідних для здійснення синтезу. ка Основні принципи твердофазного пептидного синтезу були закладені В.Р.Сувзіп і К.В.Мегїтійеїй (9.Ат. Спет.

Зос. 1972, 94, 3102 і далі). Твердофазний синтез лінійних пептидів, описаний раніше, їхнє видалення і бо очищення можна проводити за методиками, приведеними у роботах А.допсгук і ).Меіеппогег у Реріідев, Ргос. вій

Ат. Рері. Зутр., ред. М.Нгибу і О.Н.Кіси, Ріегсе Сотр.Ш, стор.73-77, 1983. і Апдем. Спет. 1992, 104, 375-391.

Особливо краще проводити синтез одного з зазначених вище лінійних пептидів конвергентно, шляхом конденсації фрагментів.

Крім того, винахід стосується способу одержання циклічного пентапептиду цикло(Ага-СІу-Азр-ОРпе-ММемаї), 65 який відрізняється тим, що синтез лінійного пептиду Н-Азр(ОВ2І)-ОРпе-ММемаІ-Ага(РЬО-СІУ-ОН проводять конвергентно шляхом конденсації фрагментів трипептиду. Н-Азр(ОВ2І)-ОРпе-ММемаІ-ОН, де Во! є захисною групою аміногрупи, з дипептидом Н-Ага(РЬД-СІу-К?, де В? є захисною групою карбоксильної групи, і захисні групи В ії 22 згодом видаляють.

В", як описано вище, є захисною групою аміногрупи. Вираз "захисна група аміногрупи" широко відомий і стосується груп, що підходять для захисту (чи блокування) аміногрупи від хімічних реакцій. Типовими групами цього типу є, зокрема, незаміщені або заміщені ацильна, арильна, аралкоксиметильна чи аралкільна групи. Так само після проведення цільової реакції (чи послідовності реакцій) захисні групи аміногрупи видаляють, їхня природа і розмір не мають істотного значення, проте, кращими є захисні групи, що містять 1-20 атомів С. У контексті даного винаходу, вираз "ацильна група" варто інтерпретувати в широкому значенні. Воно включає 70 ацильні групи, які є похідними аліфатичних, араліфатичних, аліциклічних, ароматичних або гетероциклічних кислот, або сульфонових кислот, а також алкоксикарбонільну,алкенілоксикарбонільну, арилоксикарбонільну і, особливо, аралкоксикарбонільну групи. Прикладами ацильних груп цього типу є формілові або алканоїлові групи, наприклад - ацетил, пропіоніл, бутритил; аралканоїл, зокрема - фенілацетил; ароїл, наприклад, бензоїл або толуїл; аралоксиалканоїл, зокрема - феноксиацетил; алкоксикарбоніл, наприклад, метоксикарбоніл, 75 етоксикарбоніл, 2,2,2-трихлоретоксикарбоніл, Вос(Бік), 2-ідоетоксикарбоніл; алкенілоксикарбоніл, такий як арилоксикарбоніл (АІос(Алок)); аралкілоксикарбоніл, наприклад,-СВА (синонім 7), 4-метоксибензилоксикарбоніл (МО2), 4-нітробензилоксикарбоніл або 9-фторенілметоксикарбоніл (ЕГтос(Фмок)); 2-(фенілсульфоніл)етоксикарбоніл; триметилсилілетоксикарбоніл (Теос(Теок))або арилсульфоніл, такий як 4-метокси-2,3,6-триметилфенілсульфоніл (МІ(Мтр)). Тритіл (ТИ(Трт)) також відомий як захисна група аміногрупи. Кращими захисними групами аміногрупи є Вос(Бік), Етос(Фмок) і АІос(Алок), крім того, 7, бензил і ацетил. Вос(Бік) є особливо кращим. 22, як зазначено вище, є захисною групою карбоксильної групи. Вираз "захисна група карбоксильної групи" теж широко відомий і стосується груп, що придатні для захисту від хімічних реакцій гідроксильної групи карбонової кислоти. Типовими групами цього типу є вищезгадані незаміщена або заміщена арильна, аралкільна, ЄМ ароїльна або ацильна групи, а також алкільні групи, алкільна, арильна або аралкілсилільна групи. Природа і г) розмір захисних груп карбоксильної групи і синонімічних їм захисних груп гідроксильної групи несуттєві, тому що їх видаляють після проведення цільової хімічної реакції або послідовності реакцій; проте, кращими є групи, що містять 1-20, особливо 1-10 атомів С. Прикладами захисних груп гідроксильної групи є, зокрема, аралкільні групи, такі як бензил, 4-метоксибензил або 2,4-диметоксибензил, ароїльні групи, такі як бензоїл або со р-нітробензоїл, ацильні групи, такі як ацетил або півалоїл, р-толуолсульфоніл, алкільні групи, такі як метил о або трет-бутил, а також алільні і алкілсульфонільні групи, такі як триметилсиліл (ТМе(ТМО)), триіїзопропілсиліл ТІРЕ(ТМПО), трет-бутилдиметилсиліл ТВ(ТБС)) або триетилсиліл, триметилсилілетильні або ісе) аралкілсілільні групи, такі як трет-бутилдифенілсиліл. (ТВОРБ(ТБДФС)). Кращими захисними групами «- гідроксильних груп є метил, бензил, ацетил, трет-бутил або ТВ5(ТВС). Особливо кращі метил і трет-бутил.

Зо Загалом, кращими захисними групами карбоксильної групи бокового ланцюга аспарагінової кислоти є лінійні ї- або розгалужені алкільні групи, такі як метил, етил або трет-бутил або арилалкільні групи, такі як бензил; у способі по винаходу - бензил.

Загалом, кращими захисними групами для гуанідинової групи бокового ланцюга аргініну є 7, Вос(Бію, «

МІ(МтТр) чи Рта(Пмух); у способі по винаходу - Рте(Пмух).

Способи виділення захисних груп, використовуваних у кожному випадку, описані в (напр. Т.МУ/.Огеепе, З с Р.С.М.МУців, Ргоїесіме ОСгоцрз іп Огдапіс СПпетівігу, 2-ге вид., УМіеу, Нью-Йорк 1991 чи Р.).Косіеп»екі, "» Ргоїесіїпд Сгоцрв, 1-ше вид., беогд Тпіете Мегіад, Штуттгарт-Нью-Йорк,1994).Можна застосовувати також і інші " відомі в галузі методики.

Винахід стосується процесу, що, як описано вище, відрізняється тим, що трипептид

В 1-Азр(ОВ21)-Орпе-ММема!-ОН, де В! є захисною групою аміногрупи, одержують шляхом лінійного синтезу в і реакції 2-ОРпе-ОН з Н-ММеМа!І-ОМе для одержання Н-ОРпе-ММемМа!І-ОМе, потім проводять реакцію отриманого - проміжного продукту з активованим похідним В -Азр(Оба21)-ОН і відщеплюють метиловий ефір. б Кращим похідним К'-Азр(ОВ2І)-ОН є сукцинімід БК /-Авр(ОбБа2І)-ОЗи. Інші активні ефіри, які можна 5р Застосовувати з цією метою, описані в класичній літературі по пептидному синтезу. о Крім того, винахід стосується процесу, що, як зазначено вище, відрізняється тим, що дипептид с Н-Ага(РЬВ-СІу-В. 2, де 2 є захисною групою карбоксильної групи, одержують шляхом лінійного синтезу за участю реагенту 2-Ага(РБО-ОН, після чого видаляють захисну групу 7.

Таким чином, винахід стосується лінійних пентапептидів,які обираються із групи, що складається з: 5Б Н-Ага(РБД)-СІу-Азр(ОВ21)-ОРпе-ММема!-ОН,

Н-сІу-Азр(ОВ821)-ОРпе-ММема!-Ага(РЬО-ОН, (Ф, Н-Азр(ОВ2)-ОРпе-ММемаїІ-Ага(РЬО-СІу-ОН, ка Н-ОРпе-ММема!І-Ага(РЬБІ-СІу-Азр(ОВ21І)-ОН або

Н-ММемаї!-Ага(РБ)-СІу-Азр(ОВ21)-ОРНе-ОН, во які є проміжними продуктами синтезу цикло(Ага-сІу-Азр-ОРпе-ММемаї).

Винахід стосується способу одержання циклічного пентапептиду цикло(Ага-сІу-Азр-ОРпе-ММемаї) шляхом а) проведення реакції дипептиду Н-Ага(РЬХ-СіІу-К 2, одержуваного шляхом лінійного синтезу в реакції 2-Ага(РЬВО-ОН з Н-СІу-В2 і наступного видалення захисної групи 7, з

Б) трипептидом К'Азр(ОВ2І)-ОРне-ММемаІ-ОН, який одержують шляхом лінійного синтезу в реакції б5 2Х-ОРпе-ОН з Н-ММемаї!-ОМе і наступним видаленням захисної групи 2 з метою одержання Н-ОРпе-ММеМаІ-Оте і потім - зв'язування цього пептиду з активним ефіром ЕЕ "-Азр(ОБ2І)-ОН з наступним видаленням метилового ефіру, конвергентно, для одержання лінійного пентапептиду В -Азр(ОВа21І)-ОРпе-ММема!-Аго(РЬВ-СІу-В. 2, с) видалення захисних груп В! В, 4) циклізації виділеного пентапептиду Н-Авзр(ОВ2І)-ОРпе-ММемМаїІ-Ага(РЬО-СІУ-ОН з метою одержання цикло(Ага(РБО)-СІу-Азр(ОВ82І)-ОР пе-ММемаї), е) видалення захисної групи бензильної групи,

Ї) видалення захисної групи РЕКПбф) за допомогою ТЕА(ТОО) і можливого перетворення трифторацетата цикло(Ага-СІу-Авр-ОРпе-ММемаї), отриманого на стадіях а)-ї),в інші фізіологічно прийнятні солі. 70 Іншими фізіологічно прийнятними солями є, наприклад, солі неорганічних кислот, таких як сірчана кислота, сірчиста кислота, дитіонова кислота, азотна кислота, гідрогалогенові кислоти, а також як соляна кислота або бромисто-воднева кислота, фосфорні кислоти, такі як, наприклад, ортофосфорна кислота, сульфамінова кислота, а також органічні кислоти, зокрема аліфатичні, аліциклічні, араліфатичні, ароматичні чи гетероцикличні моно- чи поліосновні карбонові, сульфонові чи сірчані кислоти, наприклад, мурашина кислота, 75 оцтова кислота, пропіонова кислота, гексанова кислота, октанова кислота, деканова кислота, гексадеканова кислота, октадеканова кислота, півалінова кислота, діетилоцтова кислота, малонова кислота, бурштинова кислота, пімелинова кислота, фумарова кислота, малеїнова кислота, молочна кислота, винна кислота, яблучна кислота, лимонна кислота, глюконова кислота, аскорбінова кислота, нікотинова кислота, изонікотинова кислота, метан- або етансульфонова кислота, бензолсульфонова кислота, триметоксибензойна кислота, адамантанкарбонова кислота, р-толуолсульфонова кислота, гліколева кислота, ембонова кислота, хлорофеноксиоцтова кислота, аспарагінова кислота, глутаминова кислота, пролін, гліоксилова кислота, пальмітинова кислота, парахлорофеноксиізомасляна кислота, циклогексанкарбонова кислота,глюкоза-1-фосфат, нафталінмоно- і нафталіндисульфонова кислота або лаурилсульфонова кислота.

Особливо кращими фізіологічно прийнятними солями є гідрохлорид або власні солі цикло с (Ага-Сіу-Азр-ОРпе-ММемаїЇ). о

Якщо В! є Вос(Бію), а БК? є трет-бутилом, ці кінцеві трет-бутилоподібні захисні групи можна відщепити за допомогою мурашиної кислоти, при цьому захисні групи бокових ланцюгів - РЬЩ(КПбф) і В2І(Бзл) впливу не піддаються.

Наступні приклади описують конкретні здійснення окремих стадій синтезу. (2,0)

В описі даного винаходу, температура скрізь зазначена в "С. о

Приклад 1:

Синтез Вос-Азр(ОВ82І)-ОРпе-ММемаІ-ОН (Се) 1. 25,3мл триметилхлорсилану крапельно вводять у розчин 26,5г 2-ММема!І-ОН у 200мл метанолу, і суміш «- перемішують протягом ночі. Потім видаляють розчинник, а осад розчиняють у метилтрет-бутиловому ефірі (МТВЕ(МТЕЕ)) і промивають 595 Ма»СоОз»з і водою. Після видалення розчинника, осад розчиняють у метанолі і 1Н і -

НОЇ, змішують зі зволоженим водою Ра/сС (10905) і гідрогенізують у слабкому струмі Н». Після завершення реакції каталізатор відфільтровують, з фільтрату видаляють розчинник і осад перекристалізовують з етилацетату. Вихід гідрохлориду Н-МтемМаІ-ОМе складає 75905. « 2. Розчин 16,1г 2-ОРпе-ОН, 10г гідрохлориду Н-ММеМаІ-ОМе і 10,1мл диізопропілетиламіну в 1ООмл дихлорметану охолоджують до 0-57 і додають 11,35г ЕОСІ(ЕДКІ). Суміш спочатку перемішують протягом т с години при 0-57С, потім протягом ночі продовжують перемішування при кімнатній температурі. Розчинник ч видаляють, а осад розчиняють у МТВЕ(МТБЕ) і промивають Ма 2СО»з (590), 1НСІ і водою, потім сушать. Після -» видалення розчинника вихід 2-ОРпе-ММемМма!І-ОМе складає 84,5905. 3. 12г 7-СРпе-ММемМа!-ОМе розчиняють у 8Омл ТНЕ і 20мл води, змішують з 1Омг тимолфталеїна і по краплях додають 10М МаонН до одержання блакитного забарвлювання індикатора. При знебарвленні індикатора, до - суміші повторно додають по краплях 10М Маон. Коли знебарвлення індикатора припиняється, значення рн - доводять до 2 10906-ним розчином КНБО у, метанол видаляють, а продукт екстрагують МТВЕ(МТБЕ). Після сушіння в присутності Ма»5О), сіль СНА(ЦГА) осаджують з фільтрату шляхом додавання 2,9умл СНА(ЦГА). Вихід (о) 27-ОРпе-ММемМаІ-ОНХСНА складає 90965. о 20 4. 16,4г 7-ОРпе-ММемаІ-ОНХСНА (солі циклогексиламонію) додають при перемішуванні до 250мл МТВЕ (МТЕЕ) і 100мл НзРО, (1095)/перемішування проводять до повного розчинення. Після видалення водяної фази, со органічну фазу промивають водою і насиченим розчином Масі, потім сушать. Розчинник видаляють, а осад розчиняють у 15,2мл 2Н Маон їі 150мл ТНЕ(ТГК), і, після додавання зволоженого каталізатора (1г Ра/С (1096)), гідрогенізують у слабкому струмі Но. Каталізатор відфільтровують і до прозорого розчину додають 12,1г Віс-Азр(ОВлІ)-ОЗи і 4,5мл триєетиламіну і перемішують протягом ночі при кімнатній температурі. Після видалення

Ф! розчинника, осад розчиняють у МТВЕ(МТЕЕ) і промивають Н ЗРО, (1095), водою і насиченим розчином Масі.

Органічну фазу обробляють З3ЗЗмл СНА(ЦГА)Отриману сіль Вое-Азр(ОВ2І)-ОРпе-ММемаІ-ОН хСснНА о відфільтровують і сушать у вакуумі. Вихід складає 9395.

Приклад 2: 60 Синтез Вос-Азр(ОВа2І)-ОРпе-ММемаІ-ОнхСнНА 1. 33,0г 2-Ага(РЬО-ОНХСНА додають при перемішуванні до ЗООмл оцтової кислоти і ЗООмл НзРоО,, і далі перемішують до повного розчинення. Після видалення водяної фази, органічну фазу промивають водою і насиченим розчином Масі, потім сушать. Після видалення розчинника, осад розчиняють у 250мл дихлорметану з 8,38г Н-СІу-ОЇВихХНСЇ і охолоджують до 0"С. Потім додають 17,12мл диізопропілетиламіну і 16,057 ТВТЦ(ТБТУ), і б5 суміш перемішують протягом бОхв. при 0"С, потім перемішують протягом ночі при кімнатній температурі.

Розчинник видаляють, і заміняють його на 250мл етилацетату. Після промивання 595 розчином Ма 2СОз3, водою і насиченим розчином Масі, розчинник видаляють. Вихід 2-Ага(РБИ)-СІу-ОЇВи складає 86905. 2. Розчин З0г 2-Ага(РЬ)-СІуУ-ОЇВи у З5Омл ТНЕ(ТГК) змішують з Зг зволоженого водою Ра/сС (10905), групу 7 видаляють гідрогенізуванням у слабкому струмі Н ». Каталізатор потім відфільтровують і розчинник видаляють.

Осад розчиняють у етилацетаті і далі обробляють за способом, зазначеним в Прикладі 2.1 Вихід

Н-Ага(РЬГ)-С1у-ОЇВи складає 86905.

Приклад 3:

Синтез. Н-Азр(О082)-ОРпе-ММема!І-Ага(РБО)-СІу-ОН 70 1. 1,23г Вос-Азр(ОВ2І)-ОРпе-ММемаІ-ОНХСНА перетворюють у вільну кислоту звичайним способом, після чого цю кислоту розчиняють у 12,5мл дихлорметану з 0,81г Вос-Азр(ОВ2І)-ОРпе-ММемМмаІ-ОН хСНА і 0,22г

ОМАР(ДМАП). Розчин охолоджують до 0-57С і вводять у нього 0,345г ЕОСІ(ЕДКІ). Розчин перемішують при 0-57 протягом 2 годин, потім, протягом ночі, при кімнатній температурі. Розчинник видаляють, осад розчиняють у

МТВЕ(МТЕЕ) і далі обробляють як у Прикладі 2.1. Вихід Вос-Азр(ОВ2І)-ОРпе-ММемМаІ-Ага(РЬО-С1Іу-ОїВи складає 82905. 2. 2,3г. Вос-Азр(ОВ2І)-ОРпе-ММемМаїІ-Ага(РЬИ-Сіу-СЇВи розчиняють у 2З3мл 9595 мурашиної кислоти для видалення кінцевих захисних груп, і, по після ЗОхв., концентрують у вакуумі. Отриманий продукт розтирають з ефіром, відфільтровують і сушать у вакуумі.

Вихід. Н-Азр(ОВ82)-ОРпе-ММемаї!-Ага(РЬО-СІУ-ОНХНОСООН складає 9590,

Приклад 4:

Синтез цикло(Ага(РБИ)-СІу-Азр(О82І)-ОРпе-ММемаї)

Розчин 11,9г Н-Азр(ОВ2І)-ОРпе-ММемМаІ-Ага(РБО-сСІу-ОНХНОСООН у бомл ММР(ММП) додають по краплях при перемішуванні до розчину 7,25г ТВТЦ(ТБТУ) і 7,45мл М-метилморфоліну в 180мл М-метилпіролідону. Реакційний розчин перемішують протягом 20 годин, а потім додають по краплях до розчину 47,5г МанСО»з у 1800мл води. є

Осад відфільтровують і сушать у вакуумі. Вихід цикло(Ага(РЬ)-СІу-Азр(ОВ21І)-ОРпе-МтемаїЇ) складає 73,490. о

Приклад 5:

Синтез цикло(Ага-СІу-Азр-ОРпе-ММемаї) 1 Розчин 2г цикло (Ага(РЬО-СІуУ-Азр(ОВ2І)-ОРпе-ММемаї) у 2бмл ТНЕ(ТГК) змішують з О,5г Ра/с (1090).

Протягом 2 годин через нього пропускають водень, після чого суміш відокремлюють від каталізатора і (ее) видаляють розчинник у вакуумі. Продукт кристалізують шляхом додавання 3З2мл ацетону, отриманий осад о відфільтровують і сушать. Вихід цикло(Ага(РБИ)-Сіу-Азр-ОРпе-ММемаї) складає 8395. 2. 1,5г цикло (Ага (РБО)-СІу-Азр-ОРпе-ММемаї) розчиняють у 15мл 9595 ТЕРА(ТФО). Через 1 годину розчинпо ( краплях додають до 150мл ізопропілового ефіру, потім тверду фазу відфільтровують і сушать. Висушений - продукт розчиняють у ЗОмл суміші ізопропанолу/води 1:2, потім обробляють іонообмінником І (ацетатною формою; Мегск КоОад). Відфільтрований розчин концентрують і піддають сублімаційному сушінню. Вихід їх» цикло(Агд-сІу-Азр-ОР пе-ММемаї) у вигляді його солі складає 9690.

Claims (6)

1. Формула винаходу « -

   с 1. Спосіб одержання циклічного пентапептиду цикло(Ага-сСІу-Азр-ЮОРпе-ММемаї) шляхом циклізації лінійного ц пентапептиду, вибраного з групи: "» Н-Ага(РБД)-СІу-Азр(ОВ21)-ОРпе-ММема!-ОН, Н-сІу-Азр(ОВ821)-ОРпе-ММема!-Ага(РЬО-ОН, Н-Азр(ОВ2)-ОРпе-ММемаїІ-Ага(РЬО-СІу-ОН, - І Н-ОРпе-ММема!І-Ага(РЬБІ-СІу-Азр(ОВ21І)-ОН або -з Н-ММемаї!-Ага(РБЬ)-СІу-Азр(ОВ821)-ОРпе-ОН наступного вилучення захисної групи та, при необхідності, подальшого перетворення продукту у фізіологічно Ге) прийнятну сіль.
2. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що циклізують лінійний пентапептид о Н-Азр(О8В21)-ОРпе-ММемаіІ-Ага(РЬО-СІу-ОН. со З.
3. Спосіб за пп. 71 або 2, який відрізняється тим, що синтез лінійного пептиду Н-Азр(ОВ82І)-ОРпе-ММемМа!І-Ага(РБО-СІУ-ОН проводять конвергентно шляхом фрагментної конденсації трипептиду В1-Азр(ОВ21)-ОРпе-ММема!-ОН, де В! є захисною групою аміногрупи, з дипептидом Н-Ага(РЬО-СІу-К2, де В? є захисною групою карбоксильної групи, та захисні групи В і В2 потім вилучають. (ФІ
4. 4. Спосіб за будь-яким з пп. 1-3, який відрізняється тим, що трипептид 21-Азр(ОВ2)-ОРне-ММема!-ОН, дев! юю є захисною групою аміногрупи, одержують шляхом лінійного синтезу в реакції 2-ОРпе-ОН з Н-ММема!-ОМе, за якою одержують Н-ЮОРПпе-ММемМаІ-ОМе, потім проводять реакцію цієї сполуки з активованою похідною В-Азр(ОВ21)-ОН і відщеплюють метиловий ефір. бо
5. 5. Спосіб за будь-яким з пп. 1-3, який відрізняється тим, що дипептид Н-Ага(РЬД-СІу-82, де В? є захисною групою карбоксильної групи, одержують шляхом лінійного синтезу в реакції 7-Агу(РЬО-ОН з Н-СІУ-В 2 з наступним вилученням захисної групи 7.
6. 6. Лінійні пентапептиди, вибрані з групи: в5 Н-Ага(РБД)-СІу-Азр(ОВ21)-ОРпе-ММема!-ОН, Н-сІу-Азр(ОВ821)-ОРпе-ММема!-Ага(РЬО-ОН,

   Н-Азр(ОВ2)-ОРпе-ММемаїІ-Ага(РЬО-СІу-ОН, Н-ОРпе-ММема!І-Ага(РЬБІ-СІу-Азр(ОВ21І)-ОН або Н-Мтема!І-Ага(РБО)-СІу-Азр(О821)-ОРпе-ОН як проміжні продукти для синтезу цикло(Агд-сІу-Азр-ОРпе-ММемаї). Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2004, М 12, 15.12.2004. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України. с о с о (Се) «-

   м. « - с ;» -І - (22) о 50 ІЧ е) Ф) іме) 60 б5