UA46699C2 - Циклопептиди та спосіб їх отримання - Google Patents

Abstract

Циклопептид формули (I): Цикло-(Arg-A-Asp-R1-R2), (I) де: А являє собою Gly чи Ala; R1 являє собою 2-карбокси-8-аміно-4-тіапіперолідин-9-он (Btd), о-амінометил-о'-карбоксібіфеніл (Biph), 2-амінометил-5-карбокси-метилтіофен (Act), залишок 6-аміногексанової кислоти (Aha) чи 2-(1,7-діазаспіро[4,4]-нонан-7-ил)-метилпентанової кислоти ((S,S)спіpo-Pro-Leu) чи 2-(3-аміно-1-піролід-2-оніл)-4-міти-пентанової кислоти ((S)Gly[ANC-2]-Leu або (R)Gly[ANC-2]-Leu), причому залишки зв'язані з попередньою та наступною амінокислотою пептидними зв'язками, а R2 відсутнє чи являє собою Val, що є інгібіторами рецептору інтегрину, а також спосіб їх одержання, який полягає в тому, що їх виділяють у вільному вигляді з однієї з їх функціональних похідних шляхом обробки сольволізуючим чи гідрогенолізуючим засобом.

Description

Опис винаходу

Настоящее изобретение описьівает циклопептид формульі І:

Цикло-(Ага-А-Азр-К 1-К2) і где:

А представляєт собой Су или Аа; в" представляет собой 2-карбокси-8-амино-4-тиапиперолидин-9-он- (Від), о-аминометил-о-карбоксибифенил-(Вірй), 2-аминометил-5-карбоксиметилтиофен-(Асі), остаток 70 б-аминогексановой окислотьі (Айа) или /2-(1,7-диазаспиро|4,4|-нонан-7-ил)-метилплентановой // кислоть (5,5)спиро-Рго-Гец) или 2-(3-амино-1-пирролид-2-онил)-4-метил-пентановой кислоть! (З)СІ.АМО-2|-Їеи или (ЮСІГАМС-21-Г ем, причем остаток, если желательно, может бьіть связан пептидньіми связями; а

В2 отсутствует или представляет собой Маї, а также их физиологически переносимье соли, являющийся ингибитором рецептора итегрина.

Соединения похожего строения описань! в Ріагтар?іє, т.40(8), с.532 - 535 (1985). По патенту БО Мо892871А кл. С07С103/32, Аб1К37/02 известно изобретение, которое относится к синтезу соединения- циклическому аналогу брадикинина, обладающему пролонгированньм гипотензивньм действием, которое находит применение в биологии и медицине. По патенту ЗО Мо1048702А кл. СО7К7/12, 7/64, Аб1КЗ37/02 известно изобретение, относящееся к новому биологически активному соединению - циклическому аналогу знкефалина, обладающему пролонгированной анальгетической активностью и которое может найти применение в медицине.

Однако, воздействие указанньїх вьіше соединений на живой организм ограничено и кратковременно.

В основе настоящего изобретения лежит задача обнаружения новьїх соединений, обладающих ценньіми свойствами, особенно соединений, которье могут бьіть использовань! для изготовления лекарственньїх средств.

Бьіло обнаружено, что соединения формульї! І и их соли обладают очень ценньіми свойствами. Во-первьх, с рб ОНИ действуют как ингибиторь! интегрина, причем особенно они препятствуют взаймодействиям Дз-и рв - рецепторов интегрина с лигандами. Особенно зффективнь! даннье соединения в случаеє о интегринов оу/В1, ом/В3, омуВБ, ому и оду. Зффективность действия может бьть определена, например, по методу, описанному 9). МУ. Зтйй в у). Віої. Спет., т.265, с.12267 - 12271 (1990). (см. приложение)

Кроме того, они оказьівают противовоспалительное действие. Все зти видьі воздействия могут бьть Ге») подтверждень! при помощи описанньїх в литературе методов.

Зти соединения могут использоваться в качестве активньїх соединений лекарственньїх средств при лечений Ф людей или в ветеринарии, особенно для профилактики и при лечении заболеваний кровообращения, (Се) тромбозах, инфаркте миокарда, артериосклерозе, воспалениях, кровоизлияниях, стенокардии, опухолях, остеолитических заболеваниях, в частности остеопорозе, для развития кровеносньїх сосудов и рестеноза после ї-о пластических операций на сосудах. Кроме того, даннье соединения могут бьіть использованьі для улучшения чу состояния и заживления ран.

Кроме того, соединения обладают антимикробньм и антивирусньм действием, препятствуют распространению инфекций, которье передаются, например, при помощи бактерий, грибков, дрожжевьх « грибков, вирусов. Кроме того, зти соединения могут использоваться, например, в качестве вспомогательньх антимикробньїх средств при проведений вмешательств, связанньх со введением в организм чужеродньмх - с материалов, например биоматериалов, имплантантов, катетера, стимулятора сердечной деятельности и т.п. ц При зтом они оказьіввают также антисептическое действие. "» Мспользованнье ранее и ниже в тексте описания сокращеннье обозначения аминокислотньїх остатков имеют следующие значения:

Асі - 2-аминометилтиофен-5-уксусная кислота; с» АпНа - б-аминогексановая кислота; б» Аїа - аланин;

Авп - аспарагин;

Ге») Авр - аспарагиновая кислота; со 50 Азр(ОК) -р-зфир аспарагиновой кислоть;

Ага - аргинин; іЧе) Віри - о-аминометилбифенил-о'-карбоновая кислота;

Віа - в-амино-4-тиапиперолидин-9-он-2-карбоновая кислота;

Сув - цистеин;

Сіп - глутамин; о Сім - г'лутаминовая кислота;

Су - глицин; іме) СІЯДАМС-21-Геи-2-(3-амино-1-пирролид-2-онил)-4-метилпентановая кислота;

Нів - гистидин; бо Пе - изолейцин;

Ї еи - лейцин;

Гув - лизин;

Меї - метионин;

Міе - норлейцин; 65 Опт - орнитин;

Рпе - фенилаланин;

Роо - про лин; зріго-Рго-І еи - 2(1,7-диазаспиро|4,4|-нонан-7-ил)-4-метил-пентановая кислота;

Зег - серии;

Тиг - треонин;

Тер - триптофан;

Туг - тирозин;

Уаї - валин.

В дальнейшем использованьі! следующие сокращения: 70 ВОС - трет-бутоксикарбонил;

СВІ - бензилоксикарбонил;

ОСС - дициклогексилкарбодиимид;

ОМЕ - диметилформамид;

ЕБСІ - М-зтил-М'З-диметиламинопропил)-карбодиимид, хлористо-водородная соль;

ЕК - зтил;

ЕМОС - 9-флуоренилметоксикарбонил;

НОВІ - 1-гидроксибензотриазол;

Ме - метил;

Міг - 4-метокси-2,3,6-триметилфенилсульфонил;

ОВиї - трет-бутокси-;

ОМе - метокси-;

ОК - зтокси-;

РОА - феноксиацетил; твти - 2-(1нН-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурониум-тетрафторборат; сч

ТРА - трифторуксусная кислота.

Поскольку перечисленнье вьіше аминокислоть! могут встречаться в нескольких знантиомерньїх формах, то і) указаннье вьіше и далее в тексте описания аминокислотьї, например, в качестве составньїх частей соединения формуль! І включают все зти формьі), а также их смеси (например, ОІ-формь)). Кроме того, аминокислоть,, например, входящие в состав соединения формуль! І, могут содержать соответствующие известнье защитнье (33 зо Группв!.

Кроме того, предметом изобретения является способ получения соединения формуль! І по Примеру 1 или б» его соли, отличающийся тем, что указанное соединение переводят в свободное состояние путем обработки его (од функционального производного сольволизирующим или гидрогенолизирующим агентом; или обрабатьвают пептид формульі ЇЇ ісе) «

Н-2-ОН ЦІ) где 7 представляєт собой -Агд-А-Авзр-В 1-252-, -А-Авр-В'В2Аго-, -Авр-ВВ2-Аго-А-, -В1-82-Аго-А-Авр- или -82-Агд-А-Авр-В 1-, « или реакционноспособное производноє такого пептида циклизирующим агентом; и/или обрабатьшвают ств) с соединение формуль! І, представляющее собой основание или кислоту, кислотой или основанием с целью

Й перевода его в форму соли данного соединения. и"? В тексте настоящего описания радикаль А, Кк 1,82 и 7 имеют значения, определеннье для формул іі и ЇЇ, если не оговорено иначе.

Радикал(5,5)спиро-Рго-Іеш обозначаєт остаток 2-(1,7-диазаспирої|4,41-6-оксононан-7-ил)-4-метилпентановой «» кислотьі и имеет следующую структуру: (22) -т-і

Ф ; , ,

Фо щ -- (5,5)зріго-Рго-1 ву, іЧе) М З Н о а радикал (5)СІГАМС-21-Г еи или (ЮСІГАМС-21- еи обозначает остаток З(5)- или

З(К)-2-(3-амино-1-пирролид-2-онил)-4-метилпентановой кислоть!: ; -( іме) во Щ я и СІАМС-2|-І еи у ло бе Вірй представляет собой остаток о-аминометилбифенил-о'-карбоновой кислоть, а Вірп1 и Вірн2 обозначают его возможнье поворотнье изомерь.

Для радикалов В! и Б? все указаннье вьіше значения являются одинаково предпочтительньми. Настоящеє изобретение охватьівает также циклические пента- и тетрапептидь!.

А является, например, Су, но может обозначать также Аа, предпочтительно ОА|їа.

Соединения формуль І, а также исходнье материальй для их получения могут бьіть синтезировань! по обьічньм методикам, описанньм в литературе (например, в таком справочном пособии, как Ноцибреп-У"еуї,

Меїйодеп дег огдапізспеп Спетіє, Сеого-Тпіете-Мепад, Біда), причем условия проведения реакций являются обьічно используемьіми для проведения реакций такого рода. При зтом возможно использование известньїх, в данном описаний подробно не описанньїх вариантов. 70 Структурное звено пептида СІУАМСОС-2|-Їеи в (К)- или (5)-форме синтезировалось по методике К. М.

ЕгеіїдіпдегН др., описанной в у. Огд. СПпет., т.47, с.104 (1982). Структурное звено спиро-Рго-Їеи может, например, бьіть синтезировано по методике, аналогичной описанной Р. Умага и др. в 3). Мед. Спет., т.33, с.1848 (1990), а синтез Від можно провести по методике М. Мадаї и др., Теігапеадгоп, т.49, с.3577 - 3592 (1993).

МИсходнье материальй для синтеза пептида могут, при желаний, бьіть получень іп 8зйи и сразу, без 75 Ммзолирования их от реакционной смеси, использованьі для получения соединения формульі І.

Соединения формуль і! могут бьть полученьї из своих функциональньїх производньїх переводом их в свободное состояние путем сольволиза, особенно гидролиза или гидрогенолиза.

Предпочтительньми исходньми соединениями для проведения сольволиза или гидрогенолиза являются соединения, которне на месте одной или нескольких свободньїх амино- и/или гидроксильньїх групп содержат соответственно защищеннье амино- и/или гидроксильнье группьї, например, такие, которне вместо атомов Н, связанньїх с атомом М, содержат защитную группу, например, такие, которье соответствуют формуле І, но вместо МН»о-группьї содержат МНК группу (где К' обозначает защитную группу, например, ВОС или СВІ).

Кроме того, предпочтительньіми являются исходнье соединения, которне вместо атомов водорода или гидроксильной группьі содержат защитную группу, например, такие соединения, которье соответствуют с Формуле І, но вместо оксифенильной группь! содержат К"О-фенильную группу (где К" обозначает защитную группу). о

В молекуле исходного соединения может также находиться несколько - одинаковьїх или различньх - защищенньх амино- и/или гидроксильньїх групп. Если имеющиеся защитньсе группь! отличаются друг от друга, то во многих случаях может бьіть проведено селективное отщепление. Ге»!

Вьіражение "защитная группа для аминогруппьі" является общеупотребительньм и обозначает группу, пригодную для того, чтобьї защитить (заблокировать) аминогруппу от химических превращений, но которая б легко может бьть удалена после проведения требуемой химической реакции в другой части молекуль!. Ге)

Типичньіми примерами таких групп являются, в частности, незамещеннье или замещеннье ацильньє, арильнье, аралкоксиметильнье или аралкильнье группьі. Поскольку защитнье группьї удаляются проведения і-й требуемой реакции (или последовательности реакций), их вид и размер не имеют особого значения; однако «І предпочтительно они содержат от 1 до 20, особенно предпочтительно - 1 - 8 атомов С. Вьіражение "ацильная группа" в данном описаний понимается в самом широком смьсле. Он охватьваєт ацильнье группь, являющиеся производньми алифатических, аралифатических, ароматических или гетероциклических « карбоновьїх кислот или сульфокислот, особенно алкоксикарбонильнье, арилоксикарбонильнье и особенно аралкоксикарбонильньсе группьі. Примерами такого типа алкильньїх групп являются алканоильнье группь!, такие й с как ацетильная, пропионильная, бутирильная группьї; аралканоильнье группьі, такие как фенилацетильная й группа; ароильньсе группьї, такие как бензоильная или толуильная группьї; арилоксиалканоильньсе группь, такие "» как РОА; алкоксикарбонильнье группь), такие как метоксикарбонильная, зтоксикарбонильная, 2,2,2-трихлорзтокси-карбонильная, ВОС, 2-йиодзтоксикарбонильная группьї; аралкилоксикарбонильньсе группьї, 5 такие как СВ ("карбобензокси"), 4-метоксибензилоксикарбонильная, ЕМОС; арилсульфонильньсе группь!, такие «г» как Міг. Предпочтительньмми защитньіми группами для защитьі аминогрупп являются ВОС и Міг, а также СВ,

ЕМОС, бензильная и ацетильная группньі. б Вьражение "защитная группа для гидроксильной группьі" также является общеупотребительнь!м и б обозначает группу, пригодную для того, чтобьї защитить гидроксильную группу от химических превращений, но Которая легко может бьіть удалена после проведения требуемой химической реакции в другой части молекуль. ї-о Типичньіми примерами таких групп являются вьиішеперечисленнье незамещеннье или замещеннье арильньє, (Че) аралкильньсе или ацильньсе группь, а также алкильньсе группь.

Вид и размер защитньх групп не имеют особого значения, поскольку после проведения требуемой реакции (или последовательности реакций) защитнье группьї! удаляются; предпочтительньми являются группь!, которье содержат от 1 до 20, особенно предпочтительно - 1 - 10 атомов С. Примерами защитньїх групп для защить гидроксильньїх групп являются, например, бензильная, п-нитробензильная, п-толуолсульфонильная, о трет-бутильная и ацетильная группьії, особенно предпочтительньіми являются бензильная и трет-бутильная ко группьі. СООН-группь! аспарагиновой и глутаминовой кислот защищаются предпочтительно в форме своих трет-бутильньїх зфиров (например, Азр(ОВий). во Используемьсе в качестве исходньїх материалов функциональнье производнье соединений формульї І могут бьть полученьй по обьчньм методам синтеза аминокислот и опептидов, как, например, описано в вьішеупомянутом справочном пособии и заявках на патентьї, а также, например, по методу твердофазного синтеза Мегтійеіа (В. Р.Сувіп и К. В.Мегтійеі4, У. Ат. Спет. Зос., т.94, с.3102 (1972)). Особенно вьІгодньім является синтез по методу ЕМОС в проточном реакторе, описанньй А. удопсгукК и у). Мейіеппоїег, Реріідез, Ргос. 65 8 Ат. Рері. Ззутр., с.73 - 77 (1983), (Еав. М. 9. Нгибу 8 0. Н. Кісі), Ріегсе Со., Коскіога.

Для получения в свободной форме соединений формульй і! из их функциональньїх производньх используются - в зависимости от вида используемьх защитньх групп - например, сильнье кислоть, целесообразно ТРА или перхлорная кислота, а также другие сильнье неорганические кислотьІ, такие как соляная кислота или серная кислота, сильнье органические карбоновье кислотьі, такие как трихлоруксусная

Кислота, или сульфокислота, такие как бензолсульфокислота или п-толуолсульфо-кислота. Возможно присутствие дополнительно инертного растворителя, однако зто не обязательно. В качестве инертного растворителя предпочтительно используются органические растворители, например, кислотьї, такие как уксусная кислота, простье зфирь, такие как тетрагидрофуран или диоксан, амидь), такие как ОМЕ, галогенированньюе углеводородьі, такие как дихлорметан, а также спирть), такие как метанол, зтанол, или 7/0 Мзопропанол, а таюке вода. Кроме того, могут использоваться смеси вьішеперечисленньїх растворителей. ТЕА предпочтительно берется с избьітком и используется без растворителей, перхлорная кислота используется в виде смеси уксусной кислотьі и 7095-ной перхлорной кислоть! в соотношений 9 : 1. Температура проведения реакции отщепления составляет целесообразно от 0 до 50"С, предпочтительно от 15 до З0"С (комнатная температура).

Отщепление групп ВОС, ОВшШї и Міг можно провести, например, предпочтительно при помощи ТЕА в дихлорметане или З - 5н. НСІ в диоксане при 15 - З0"С, а отщепление ЕМОС производится при помощи 5 - 5ОФо-ного раствора вторичного амина, такого как диметиламин, дизтиламин или пиперидин, в ОМЕ при 15 - 307С.

Гидрогенолитически удаляемье защитньсе группь! (например, СВ или бензильная группа) могут, например, бьіть отщепленьі! путем обработки водородом в присутствии катализатора (например, катализатора на основе благородньїх металлов, таких как палладий, целесообразно на носителе, таком как углеродньій носитель). В качестве растворителей при зтом пригоднь! перечисленнье вьіше растворители, особенно, например, спирть, такие как метанол или зтанол, или амидь, такие как ОМЕ. Реакция гидрогенолиза проводится, как правило, при температуре от примерно 0 до 100"С и давлений от примерно 1 до 200бар, предпочтительно при температуре 20 - З0"С и давлении 1 - 10 бар. Гидрогенолиз СВ2-группьї хорошо проходит, например, на катализаторе Ра-С с сч 2г5 содержанием палладия 5 - 1095 в метаноле или при обработке муравьинокисльім аммонием (вместо водорода) на палладиево-углеродном катализаторе в смеси метанол/юМЕ при температуре 20 - 30"С. і)

Соединения формуль І! могут также бьть полученьї по реакций циклизации соединений формуль! ІІ в условиях осуществления реакции синтеза пептида. При зтом целесообразно использовать обьічнье методики синтеза пептидов, например, как описано в Ношреп-УМеуї, Т.15/ЛІ, с.1 - 806 (1974). Ге! зо Реакция проводится предпочтительно в присутствиий дегидратирующих агентов, например, карбодиимидов, таких как ОСС1 или ЕОСІ, а такке ангидрида пропанфосфорной кислоть (ср. Апдем/. Спет., т.92, с.129 (1980)), Ме дифенилфосфорилазида или 2-зтокси-М-зтоксикарбонил-1,2-дигидрохинолина, в инертном растворителе, Ге например, галогенированном углеводороде, таком как дихлорметан, простом зфире, таком как тетрагидрофуран или диоксан, амиде, таком как ОМЕ или диметилацетамид, нитриле, таком как ацетонитрил, или в смеси зтих ісе) растворителей, при температуре примерно от - 10 до 40"С, предпочтительно от 0 до 30"С. Для того, чтобь «Е внутримолекулярная циклизация протекала до образования межмолекулярньїх пептидньїх связей, целесообразно проводить реакцию в разбавленньїхх растворах (принцип разбавления).

Вместо соединений формуль || могут бьть использованьії реакционноспособнье производнье зтих соединений, например, такие, в которьіїх реакционноспособнье группьії временно заблокированьі защитньми « группами. Производнье аминокислот формуль! ІЇ могут, например, использоваться в форме активированньх 7-3) с сложньїх зфиров, которье целесообразно получать іп зйиш, например, путем присоединения НОВІ или

М-оксисукцинимида. ;» Исходнье соединения формульї ІЇ, как правило, являются новьіми соединениями. Они могут бьіть получень известньми методами, например, описанньми вьіше способами синтеза пептидов и отщепления защитньх групп. їх Как правило, сначала синтезируют защищенньій сложньій зфир пентапептида формуль! К'-2-К", например,

В8ВОС-2-ОМе или ВОС-2-ОБЇ а затем проводят его омьіление до кислотьії формуль! К-2-ОН, например,

Ме, ВОС-2-ОН; после зтого проводят отщепление защитной группьі К, получая в результате свободньій пептид

Ге» формуль Н-2-ОН (І).

Основания формуль | при помощи кислоть! могут бьіть переведеньі в соответствующие аддитивнье соли. і, Для проведения такой реакции используются, в частности, кислотьї, образующие физиологически переносимье

Ге соли. Так, могут бьіть использовань! неорганические кислотьї, например, серная кислота, азотная кислота, галогеноводороднья кислоть, такие как хлористоводородная кислота или бромистоводородная кислота, фосфорнье кислотьі, такие как ортофосфорная кислота, сульфаминовая кислота, а также органические дв КИСлОТЬ, в частности, алифатические, алициклические, аралифатические ароматические или гетероциклические одно- или многоосновнье карбоновье, сульфо- или серньіе кислотьі, например, муравьиная (Ф, кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, пивалиновая кислота, дизтилуксусная кислота, малоновая ка кислота, янтарная кислота, пимелиновая кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, молочная кислота, винная кислота, яблочная кислота, бензойная кислота, салициловая кислота, 2- или З-фенилпропионовая бор Кислота, лимонная кислота, глюконовая кислота, аскорбиновая кислота, никотиновая кислота, изоникотиновая кислота, метан- или зтансульфокислота, зтандисульфокислота, 2-оксизтансульфокислота, бензолсульфокислота, п-толуолсульфокислота, нафталин-моно-и -ди-сульфокислота, лауринсерная кислота.

Соли физиологически непереносимьїх кислот, например, пикрать!, могут бьіть использованьі для вьіделения и/или очистки соединений формуль! І. 65 С другой стороньі, кислотьї формуль! І путем проведения реакции обмена с основанием могут бьть превращень! в физиологически переносимье соли металлов или аммония. В качестве таких солей найбольшее значение имеют натриевье, калиевье, магниевье, кальциевье и аммониевье соли, а также замещеннье аммониевне соли, например, диметил-, дизтил- или диизопропиламмониевне соли, монозтанол-, дизтанол- или тризтаноламмониевье соли, циклогексил- и дициклогексиламмониевье соли, дибензилотилендиаммониевье сболи, а таюке, например, соли М-метил-О-глюкамина или соли аргинина или лизина.

Новье соединения формуль і! и их физиологически переносимье соли могут бьїть использовань! для получения фармацевтических препаратов, в которьїх они смеете с по крайней мере одним наполнителем или вспомогательньм компонентом и, если желательно, с одним или несколькими другими активньми соединениями, готовятся в виде пригодньїх дозированньїх форм. Приготовленньіе таким образом композиции 7/0 Могут использоваться в качестве лекарственньїх средств для лечения людей или в ветеринарии. В качестве наполнителей могут использоваться органические или неорганические материаль, пригоднье для знтерального (например, перорального или ректального), парентерального (например, внутривеннье »иньекции) или локального (например, топикального, дермального, офтальмического или назального) применения или для применения в форме разбрьззгиваемьх азрозолей для ингаляциий и не взаймодействующие с новьми /5 Ссоединениями, например, вода или изотонический солевой раствор, низшие спирть), растительнье масла, бензиловьїй спирт, полизтиленгликоль, глицеринтриацатат и другие глицеридь! жирньх кислот, желатин, соевьй лецитин, углеводь, такие как лактоза или крахмаль), стеарат магния, тальк, целлюлоза, вазелин. Для перорального приема найболее пригодньіми формами являются таблетки, драже, капсульі, сиропь! или капли; определенньій интерес представляют специальнье таблетки с оболочкой или капсульі, с материалом оболочки 2ор мли капсуль, устойчивьм к действию желудочного сока. Для ректального применения пригоднь! суппозитории; для парентерального применения - растворьі), например, маслянье или воднье растворьї, а также суспензии, змульсий или имплантать. Для топикального применения пригодньі, например, растворьі, которье могут применяться в форме глазньїх капель, а также суспензии, змульсии, кремьі, мази компримать!. Для применения в качестве разбрьізгиваемьїх азрозолей пригодньі! азрозольнье препаратьії, содержащие активное соединение в с г виде раствора или суспензии в газе-носителе или смеси газов-носителей (например, СО» или фторированнье и хлорированнье углеводородь). Активное соединение при о зтом целесообразно использовать в і) микронизированной форме, причем дополнительно может присутствовать также один или несколько физиологически переносимьїх растворителей, например, зтанол. Растворь! для распьіляемьїх азрозолей могут использоваться при помощи обьічньїх ингаляторов. Новьіе соединения могут также бьіть лиофилизировань, и б зо полученнье лиофилизатьй могут бьть использовань, например, для приготовления препаратов для распьіляемьїх азрозолей. Иньекции могут производиться в форме болюса или в форме непрерьівной инфузии б» (например, внутривенной, внутрибрюшинной, внутримьішечной, подкожной или внутриоболочечной). Указаннье (д препаратьії могут подвергаться стерилизациийи и/или содержать вспомогательнье компонентьІ, такие как консерванть, стабилизаторьі! и/или смачивающие агенть!, змульгаторьі, соли для регулирования осмотического ісе) з5 давления, буферьі, красители и/или ароматизаторь. Если желательно, они могут таюке содержать одно или «г несколько других активньїх соединений, например, один или несколько витаминов.

Соединения по настоящему изобретению могут применяться, как правило, аналогично другим известнь!м промьшленно вьіпускаемьм пептидам, особенно аналогично соединениям, описанньм в патенте США

МА4472305, например, дозами примерно от 0,05 до 500Омг, особенно от 0,5 до 100мг на дозировочную единицу. « Суточная доза препарата составляет, например, примерно от 0,01 до 2мг на їкг веса тела. Конкретнье з с дозировки для определенньїх пациентов зависят от различньїх факторов, например, от зффективности данного конкретного соединения, от возраста, веса, общего состояния здоровья, пола, питания пациента, времени и ;» способа приема, скорости секреции, комбинации лекарственньїх средств и тяжести заболевания, лечение которого проводится. Предпочтительнь!м является парентеральньй способ применения.

Кроме зтого, нове соединения формуль |! могут использоваться в качестве лигандов интегрина при ї5» изготовлении хроматографических колонок для очистки интегринов методом аффинной хроматографии.

При зтом лиганд, т. е. производное пептида формуль І, закрепляется на полимерном носителе при помощи

Ме. анкерньїх функциональньх групп, образующих ковалентнье связи с носителем. б В качестве полимерного носителя могут использоваться известньіе в химии пептидов твердье полимернье фазьі, предпочтительно с гидрофильньми свойствами, например, сшитье полисахара, такие как целлюлоза, ік сефароза или ЗерпадехФ), акриламид, полимерьї на основе полизтиленгликоля или ТепіаКеІроїутегеФф).

Ге Для использования в качестве анкерньїх функциональньх групп, образующих связи с полимерньм носителем, пригодньї предпочтительно линейнье алкиленовье цепочки, содержащие 2 - 12 атомов С, одним концом связаннье непосредственно с полимером, на втором конце которьїх находится функциональная группа,

Б Которая может образовать связь с функциональной боковой группой данного пептида, например, гидроксильная, аминогруппа, меркаптогруппа, малеинимидогруппа или -СООН-группа. (Ф, При зтом пептид непосредственно или с помощью второй анкерной функциональной группь! может бьть ка связан с анкерной группой полимера.

Кроме того, боковніе цепи определенньїх аминокислотньїх остатков, входящих в состав пептида формуль! І, бо могут бьіть модифицировань! таким образом, чтобь они содержали группь, которьіе могут образовать связи с анкерньіми группами полимера, например, МН», ЗН-, ОН- или СООН-группь!.

Примерами аминокислотньїх остатков, боковьіе цепочки которьїх могут непосредственно вьіступать в роли анкерньїхх групп, являются, например, Агу или Азр.

Примерами анкерньїх групп, которье могут образовьівать связи со свободньіми КН2-группами, являются б5 такие группь,, как, например, -СО-СаНоп-МН», -«СО-СаНоп-ОН, -СО-СуНап-ЗН или -СО-СЯНоп-СООН группь, где п - 2 - 12, причем длина алкиленового радикала не имеет особого значения и, в данном случае, он может бьть заменен соответствующим арильнь!м или алкиларильньїм радикалом.

Концевьми анкерньіми группировками, которніе может образовьвать связи со свободной кислотной группой, являются, например, -СО-С 0 Ноп-ЗН, -СО-Су.Но ОН, -СО-С.Нод-МНо, -СО-С.Но-СОоОНн, -МН-СуНод-ЗН, 500 ТМН-СаНоп-ОН, -МН-СОНод-МНо или -МН-СеНои-СООН, где п и алкиленовая цепочка имеют значения, определеннье в предьідущем абзаце.

Материаль! для очистки интегринов методом аффинной хроматографии могут успешно бьїть полученьі при проведений процесса в условиях, известньїх специалистам и обьічно используемьїх для проведения реакции конденсации аминокислот, и указанньїх вьіше при описаний синтеза соединений формуль! І. 70 В случае тиолсодержащих анкерньїх групп могут использоваться реакции присоединения, такие как присоединение по Міснаеє! или реакция образования дисульфидного мостика с полимерньім тиолом.

Вьіше и далее в тексте настоящего описания все температурь! указань! в "С. В нижеследующих примерах термин "обьічная доработка" обозначает следующее: при необходимости, к реакционной смеси добавляют воду, нейтрализуют, зкстрагируют зфиром или дихлорметаном, разделяют фазь), осушают органическую фазу /5 сульфатом натрия, фильтруют, упаривают и подвергают очистке методом хроматографии на силикагеле и/или перекристаллизации. КТ - время задержки (минут) при жидкостной хроматографии вьісокого давления (НРІ С) составляло для системь А: І іспгозогЬ 9 КР взеїесі В (250 х 4; 5мкм) или системьі В: І іспгозогре КР 18 (250 х 4; 5мкм); растворитель (система А): 0,395 ТРА в воде; градиент концентрации изопропанола 0 - 8095 об.; 5Омин. при скорости подачи Тмл/мин. Детектирование осуществляли на длине волньі 215нм. Растворитель (система В): го злюент А - 0,190 ТРА вводе; злюент В - 0,195 ТЕА в смеси ацетонитрил / вода (9 : 1); градиент 20 - 9095 В;

БОмин. при скорости подачи імл/мин. М" - молекулярньй пик в масс-спектре, полученньй по методу "бомбардировки бьістриіми атомами" (РГАВ), причем приведеннье значения молекулярного веса на единицу молекулярной массь! превьішают расчетнье значения.

Пример 1 Га

Раствор 0,4г Н-Аго(Міг)-СіІу-ВІ4-ОМа |например, полученньій из ЕМОС-Агу(Міг)-сІу-Азр-ВІЯ-О-УУапо, где -О-Мапад обозначает полученньй по модифицированной методике Меїтійеїа остаток і9) 4-оксиметил-феноксиметил-полистирольной смольі, путем проведения реакции отщепления группьї ЕМОС пиперидином в ОМЕ и отщепления смоль в ТРА / СНьЬСІі» (1 : 1)) в ї5мл ОМЕ разбавляют 85мл дихлорметана и прибавляют 5Омг МанНсо 3. После охлаждения на смеси сухого льда с ацетоном прибавляют 40Омкл Ге»! дифенилфосфорилазида. Вьідерживают в течение 16 часов при комнатной температуре раствор концентрируют. Концентрат фильтруют (колонки Зерпадех 010 в смеси изопропанол / вода 8 : 2) и подвергают о очистке по обьічной ометодике жидкостной хроматографии вьсокого давления. Получают Ге) цикло-(Ага(Міг)-СІу-Авр-ВІа).

По аналогичной методике проведения реакции циклизации получают соответствующие линейнье пептидь!: і-й цикло-(Ага(Міг)-СіІу-Авзр-(5)СІЦАМСО-21-Г ем); «Її цикло-(Ага(Міг)-СІу-Авзр-(К)СІуАМС-21-І ец); цикло-(Ага(Міг)-СІу-Авр-(5,5)спНро-Рго-і ец); цикло-(Ага(Міг)-Сіу-Авр-Вірйи1); « цикло-(Ага(Міг)-СіІу-Авзр-Вірнг); цикло-(Ага(Міг)-СІу-Азр-Ас)у; - с цикло-(Ага(Міг)-СіІу-Азр-ВІа-Маї); ц цикло-(Ага(Міг)-ОАїІа-Авзр-ВІа-Маї); "» цикло-(Ага(Міг)-су-Авр-Апа); цикло-(Ага(Міг)-ОАПІа-Авр-ВІа); цикло-(Ага(Міг)-ОАПІа-Авр-(5)І.АМС-21-І ец); «г» цикло-(Аід(Міг)-бАїа-Азр-(«КЮ)СІГАМС-21-Гем); цикло-(Ага(Міг)-бАїа-Авр-(5,5)спиро-Рго-і еиц); б цикло-(Ага(Міг)-ОАїПІа-Агр-Вірп1);

Ге») цикло-(Ага(Міг)-бАїПа-Авр-Вірнг); цикло-(Ага(Міг)-О АІа-Азр-Ас|). іш Пример 2 (Че) Раствор 0,28г цикло-(Ага(Міг)-сІу-Азр-ВІа) |полученньйй по реакции циклизации в соответствии с Примером 11) в 84мл ТЕА, 1,7мл дихлорметана и 0. Омл тиофенола вьідерживают в течение 4 часов при комнатной температуре, после чего концентрируют и после разбавления водой подвергают сушке вьімораживанием. После гель-фильтрации с использованием Зерпадех 10 (уксусная кислота / вода 1 : 1) и последующей очистки методом препаративной жидкостной хроматографии вьісокого давления по описанной методике получают о цикло-(Агд-Сгу-Авр-Віа); КТ - 13,2: М7527. іме) Аналогично получают: изцикло-(Ага(Міг)-сІу-Азр-(5)СІУАМС-21-Ї еш)-цикло-(Агд-С1у-Авзр-(5)СІУАМС-21-Гец); ВТ - 4,8; М"525; 6о из цикло-(Аго(Міг)-СіІу-Азр-«Ю)СІУАМС-21-І ем)-цикло-(Ага-сІу-Авр-(К)СІУАМС-21-І еш); КТ - 6,3; М"525; из цикло-(Ага(Міг)-сІу-Авр-(5,5)спиро-Рго-І ец)-цикло-(Аго-сіІу-Авр-(5,5)спиро-Рго-І еш); КТ - 14,6; М" 565; из цикло-(Аго(Міг)-СІу-Авзр-Вірп1)-цикло-(Агд-СІу-Азр-ВірнІ); КТ - 20,7; М"538; из цикло-(Аго(Міг)-СІу-Азр-Вірн2)-цикло-(Агд-СІу-Азр-Вірн2); ЕТ - 20,8; М"538; 65 из цикло-(Аго(Міг)-СіІу-Азр-Асі)-цикло-(Ага-сІу-Азр-Ас); КТ - 14,3; М" 547; из цикло-(Ага(Міг)-сІу-Авзр-Віа-Маї)-цикло-(Ага-СІу-Азр-ВІа-Маї); из цикло-(Ага(Міг)-ОАїІа-Авзр-ВІа-Маї)-цикло-(Ага-САїЇІа-Азр-Віа-Маї); из цикло-(Аго(Міг)-с1Іу-Авр-Апа)-цикло-(Агд-сгу-Авр-Апа).

Пример З 8Омг цикло-(Аго-Сіу-Авр-Віа) пять-шесть раз растворяют в 0,1М растворе НСЇ, после каждого растворения подвергая сушке вьімораживанием. После заключительной очистки методом жидкостной хроматографий вьісокого давления получают цикло-(Агд-С1у-Авр-ВІЯ) х НОЇ.

По аналогичной методике получают: из цикло-(Агд-СІу-Азр-Апа)-цикло-(Агд-СіІу-Азр-АпНа) х НОЇ; 70 из цикло-(Агд-СіІу-Авзр-ВІа-Маї!)-цикло-(Ага-с1Іу-Авзр-ВІа-Маї) х НОСІ; из цикло-(Ага-ОСАІа-Авзр-ВІа-Маї)-цикло-(Ага-ВАїІа-Азр-ВІа-Маї) х НОЇ; из цикло-(Ага-ЮАІа-Азр-ВІа-Ма!) путем обработки уксусной кислотой - цикло-(Ага-ЮАІа-Азр-Ві4-Маї) х

Нзс-СООН; из цикло-(Ага-СІу-Азр-АнНа) путем обработки 0,01Н раствором азотной кислоть! - цикло-(Агд-сІу-Азр-Ана) х 75. НМО».

Пример 4

Для приготовления аффинной фазь! суспендируют 0,9г СІ-СН 5)53-СО-МН-(СН»)з--Полимер |(получают путем проведения реакции конденсации СІ-«СН»)3-СООН с МНо-(СНо)з--Полимером)| в 1Омл 0,1М буферного раствора на сонове фосфата знатрия с рнН7/ и оприбавляют к нему при температуре 4"С 1 зквивалент цикло-(Аго(Міг)-Сіу-Азр(ОМа)-Ві4). Перемешивают в течение 4 часов при равномерном нагреве реакционной смеси до комнатной температурьі, отделяют на фильтре твердую фазу и дваждьі! промьшвают примерно 1О0мл буферного раствора со рнН7/, после чего три раза промьшают бОмл водь. Получают цикло-(Агоа(Міг)-сСіІу-Азр(д(СН2)3-СО-МН-(СН2)З-Полимер)-ВІ9).

Пример 5 с

По аналогий с о Примером 2 путем проведения реакции отщепления Міг-группь! из цикло-(Ага(Міг)-сіІу-Азр(О(СН»)з-СО-МН-(СН»)з-Полимер)-ВіІа) получают о цикло-(Ага-сіу-Азр(О(СН»)з-СО-МН-(СН»)з-Полимер)-ВІЯ).

Пример 6

Аналогично методике, оописанной в Примере 4, путем проведения реакции конденсации Ф Полимер-ФО(СН».)з3-МНо (вьіпускается промьшленно) и цикло-(Ага-сіІу-Азр-Вірп!ї) получают следующую полимерную фазу: (Ага-сІу-Азр-«(МН-(СН»)з-О-Полимер)-Вірнт). іа

Аналогично путем проведения реакции конденсации цикло-(Аго-сгу-Азр-Віа-МаІЇ) и Полимер-ФО(СН 2)3-МН» («о получают (Ага-СІу-Авр-«МН-(СН»)3-О-Полимер)-Віа-Маї).

Приведеннье ниже Примерь! описьівают фармацевтичские коомпозиции. ее,

Пример А: Стекляннье ампуль! для иньекций «І

Раствор 100г одного из циклопептидов формуль і! и бг вторичного кислого фосфата натрия в Зл бидистиллированной водьі доводят до рНб,5 2Н-раствором соляной кислотьі, фильтруют в стерильньх условиях, разливают в стекляннье ампуль! для иньекций, в стерильньїх условиях лиофилизируют и запаивают ампуль. Каждая стеклянная ампула для иньекций содержит 5мг активного соединения. «

Пример В; Суппозиторий шщ с Растапливают смесь 20г активного соединения формуль! | со 100г соевого лецитина и 1400г масла какао, й разливают в формьї и дают остьіть. Каждьїй суппозиторий содержит 20мг активного соединения. «» Пример С; Раствор

Готовят раствор 1г активного соединения формульї! І, 9,38г Ман РО, х 2Н20, 28,48г Ма»НРО, х 12Н50, и 45. г бензалкониумхлорида в 940г бидистиллированной водьі. Устанавливают рнб,8, доводят обьем раствора до ї» 1л и стерилизуют раствор облучением. Полученньй раствор может бьіть использован в форме глазньх капель.

Пример 0: Мазь

Фо Смешивают 500мг активного соединения формульї І с 99,5г вазелина в антисептических условиях. б Пример Е: Таблетки

Смесь 100г циклопептида формуль! І, їкг лактозьї, ббОг микронизированной целлюлозьі, б00г кукурузного о крахмала, 100г поливинилпирролидона, 80г талька и 10г стеарата магния по обьічной методике прессуют в (Че) таблетки таким образом, чтобь! каждая таблетка содержала 1Омг активного соединения.

Пример Е: Драже

Прессуют таблетки, как описано в Примере Е, после чего покрьівают их по обьічной методике оболочкой из сахарозь, кукурузного крахмала, талька, траганта и красителя.

Пример 0: Капсуль! іФ) По обьічной методике заполняют твердье желатиновье капсульі активньмм соединением формуль! І! так, ко чтобьї каждая капсула содержала 5мг активного соединения.

Пример Н: Разбрьізгиваемье композиции для ингаляции во Растворяют 14г активного соединения формульї І в 10л изотонического раствора Масі и разливают раствор в обьічнье устройства для мелкокапельного разбрьзгивания, снабженнье насосом. Раствор может впрьіскиваться в рот или в нос. Одно качание (примерно 0О,1мл) соответствует дозе примерно 0,14мг.

Связьівание витронектина (УМ) с рецептором определяли согласно методу, описанному Смитом и сотр. в 4).

Вісі. Спет., 265, 1267 - 71 (1990). 65 ІСвв-значение (концентрация нмоль/л), соответствующая 50906-ному ингибированию связьівания витронектина с рецептором), характеризует активность соединений формульїі 1.

Цикло-(Агд-А-Авр-В 1-22) (1) у вуеуАМСЯ ву ва 300400 о (вемАМС ву ви 300200 ву вій 300200 ву 7777ллоу ле ява)

СІУ.ЇАМС-2|-Геш-2-(3-амино-1-пирролид-2-онил)-4-метилпентановая кислота,

Віа - в-амино-4-тиапиперолидин-9-он-2-карбоксикислота,

Вірй - о-амино-метилбифенил-о-карбоксикислота,

Асі - 2-аминометилтиофен-5-уксусная кислота.

Claims (4)

Формула винаходу

1. Циклопептидьі формульі (І): Цикло-(Ага-А-Азр-К 1-К2), (І) сч где: А представляєт собой Су или Аа; о В! представляет собой 2-карбокси-8-амино-4-тиапиперолидин-9-он (Від), о-аминометил-о-карбоксибифенил (Вірп), 2-аминометил-5-карбокси-метилтиофен (Асі), оостаток б-аминогексановой кислотьі (Айа) или 2-(1,7-диазаспиро|4,4|-нонан-7-ил)-метилпентановой кКИСлОТтЬ (5,5)спиро-Рго-ї ец) или Фу 2-(З-амино-1-пирролид-2-онил)-4-метил-пентановой кислоть ((5)СІГАМС-21-Геи или (Ю)СІГАМС-21-Гец), причем о остатки связаньі с предьідущей и последующей аминокислотой пептидньіми связями, а Б 2 отсутствуєт или представляет собой Маї, Ге) а также их физиологически приемлемьсе соли, являющиеся ингибиторами рецептора интегрина.

2. Циклопептидь! формульі (І) по п.1, представляющие собой: ї-оі (а) Цикло-(Аго-с1Іу-Авр-(5)СІ.АМС-21-І ец); чЕ (в) Цикло-(Ага-сСІу-Азр-(КЮ)СІГАМС-21-І еш); (с) Цикло-(Агд-СіІу-Авр-(5,5)спиро-Рго-і ец); (а) Цикло-(Агд-сІу-Азр-Асі); « (е) Цикло-(Агод-СіІу-Азвр-ВІ); (9 Цикло-(Ага-Сіу-Авр-Апа); - с (9) Цикло-(Агд-СІу-Азр-ВІа-Маї); хз (п) Цикло-(Ага-ЮАїа-Азр-ВІа-Маї);

я 3. Знантиомерь! или диастереомерь! соединений формульі (І) по п.1.

4. Способ получения соединения формульі (І) согласно п.1 или одной из его солей, отличающийся тем, что их Ввіделяют в свободном виде из одного из их функциональньх производньїх путем обработки с» сольволизирующим или гидрогенолизирующим средством. Ф Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних Ге») мікросхем", 2002, М 6, 15.06.2002. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України. с 50 У р іЧе) Ф) ко бо б5